MX2014009075A - Inhibidor de quinasa reguladora de señal de apoptosis. - Google Patents

Inhibidor de quinasa reguladora de señal de apoptosis.

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Abstract

La presente invención se relaciona con un compuesto de fórmula (I): El compuesto tiene actividad inhibidora sobre la quinasa reguladora de la señal de apoptosis ("ASK 1"), y es por lo tanto útil en el tratamiento de enfermedades tales como enfermedad renal, nefropatía diabética y fibrosis renal.

Description

INHIBIDOR DE QUINASA REGULADORA. DE SEÑAL DE APOPTOSIS CAMPO DE LA INVENCIÓN La presente invención se relaciona con un compuesto novedoso para uso en el tratamiento de enfermedades mediadas por ASK1. La invención también se relaciona con compuestos intermedios para su preparación y con composiciones farmacéuticas que contienen dicho compuesto novedoso.
ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN La quinasa 1 reguladora de la señal de apoptosis (ASK1) es un miembro de la familia de proteínas quinasa quinasa quinasa activadas por mitógeno ("MAP3K") que activa la proteína quinasa de c-Jun en la región N-terminal ("JNK") y MAP quinasa p38 ( (Ichijo, H., Nishida, E., Irie, K. , Dijke, P. T., Saitoh, M. , Moriguchi, T., Matsumoto, K . , Miyazono, K. , y Gotoh, Y. (1997) Science, 275, 90-94) . La ASK1 es activada por una variedad de estímulos incluyendo el estrés oxidativo, especies reactivas de oxígeno (ROS) , LPS, TNF-OÍ, FasL, estrés de RE, y aumento de las concentraciones de calcio intracelular (Hattori, K., Naguro, I., Runchel, C, y Ichijo, H. (2009) Cell Comía. Signal. 7:1-10; Takeda, K. , Noguchi, T., Naguro, I., y Ichijo, H. (2007) Annu. Rev. Pharmacol. Toxicol. 48: 1-8.27; Nagai, H., Noguchi, T., Takeda, K . , y Ichijo, I. (2007) J. Biochem. Mol. Biol. 40:1-6). La fosforilación de la proteina ASKl puede conducir a apoptosis u a otras respuestas celulares dependiendo del tipo de célula. Se ha informado que la activación de ASKl y la señalización por ASKl desempeñan un papel importante en una amplia gama de enfermedades, incluyendo trastornos neurodegenerativos, cardiovasculares, inflamatorios, autoinmunes y metabólicos. Además, la ASKl ha sido implicada en la mediación del daño de órganos después de isquemia y reperfusión de corazón, cerebro, y riñon (Watanabe et al., (2005) BBRC 333, 562-567; Zhang et al., (2003) Life Sci 74-37-43; Terada et al. (2007) BBRC 364: 1043-49).
Se ha informado que las ROS están asociadas con aumentos en la producción de citoquinas inflamatorias, fibrosis, apoptosis y necrosis en el riñon. (Singh D K, Winocour P, Farrington K. Oxidative stress in early diabetic nephropathy: fueling the fire. Nat Rev Endocrinol 2011 March; 7(3):176-184; Brownlee M. Biochemistry and molecular cell biology of diabetic complications . Nature 2001 Dec. 13; 414 ( 6865 ): 813-820; Mimura I, Nangaku M. The suffocating kidney: tubulointerstitial hypoxia in end-stage renal disease. Nat Rev Nephrol 2010 November; 6 ( 11 ): 667-678 ) .
Por otra parte, el estrés oxidativo facilita la formación de productos finales de glicosilación avanzada (AGEs) que causan daño renal adicional y la producción de ROS. (Hung K Y, et al., N-acetylcysteine-mediated antioxidation prevents hyperglycemia-induced apoptosis and collagen synthesis in rat mesangial cells. Am J Nephrol 2009; 29 (3) : 192-202) .
La fibrosis túbulointersticial en el riñon es un fuerte predictor de la progresión de la falla renal en pacientes con enfermedades renales crónicas (Schainuck L I, et al., Structural-functional correlations in renal disease. Part II: The correlations. Hum Pathol 1970; 1: 631-641).
La obstrucción ureteral unilateral (OUU) en ratas es un modelo ampliamente utilizado de fibrosis túbulointersticial. La OUU causa inflamación tubulointerstital , aumenta la expresión del factor de crecimiento transformante beta (TGF-ß) , y la acumulación de miofibroblastos , que secretan proteínas de la matriz tales como colágeno y fibronectina . El modelo de OUU se puede utilizar para probar el potencial de un fármaco para tratar la enfermedad renal crónica mediante la inhibición de la fibrosis renal (Chevalier et al., Ureteral obstruction as a model of renal interstitial fibrosis and obstructive nephropathy, Kidney International (2009) 75, 1145-1152) .
Por lo tanto, los agentes terapéuticos que funcionan como inhibidores de la señalización por ASK1 tienen el potencial de remediar o mejorar la vida de los pacientes que necesitan tratamiento para enfermedades o afecciones tales como trastornos neurodegenerativos, cardiovasculares, inflamatorios, autoinmunes, y metabólicos. En particular, los inhibidores de ASK1 tienen el potencial para tratar enfermedades cardiorenales, incluyendo enfermedad renal, enfermedad renal diabética, enfermedad renal crónica, enfermedades fibróticas (incluyendo fibrosis pulmonar y renal), enfermedades respiratorias (incluyendo la enfermedad pulmonar obstructiva crónica (EPOC) y daño pulmonar agudo) , enfermedades hepáticas agudas y crónicas.
La publicación de la Patente de EE.UU. N ° 2007/0276050 describe métodos para identificar inhibidores de ASK1 útiles para la prevención y/o tratamiento de la enfermedad cardiovascular y métodos para la prevención y/o tratamiento de la enfermedad cardiovascular en un animal.
La patente O2009027283 describe compuestos de triazolopiridina, métodos para la preparación de los mismos y métodos para el tratamiento de trastornos autoinmunes, enfermedades inflamatorias, enfermedades cardiovasculares y enfermedades neurodegenerativas.
La Publicación de Patente de EE.UU. N ° 2001/00095410A1, publicada el 13 de enero de 2011, divulga compuestos útiles como inhibidores de ASK-1. La Publicación de Patente de 2001/00095410A1 se relaciona con compuestos (I) en donde : Rl es alquilo, alquenilo, alquinilo, cicloalquilo, arilo, heteroarilo, o heterociclilo, todos los cuales están opcionalmente sustituidos con 1, 2 o 3 sustituyentes seleccionados de halo, oxo, alquilo, cicloalquilo, heterociclilo, arilo, ariloxi, -N02, R6, -C(0)-R6, -0C(0)-R6-C(0)-0-R6, C (O) -N (R6) (R7) , -OC (0) -N (R6) (R7 ) , -S-R6, -S(=0)-R6, -S(=0)2R6, -S (=0) 2-N (R6) (R7 ) , -S (=0) 2-0-R6, -N(R6) (R7), -N(R6)-C(0)-R7, -N (R6) -C (0) -0-R7, - (R6) -C (0) -N (R6) (R7 ) , N (R6) -S (=0) 2-R6, -CN, y -0-R6, en donde alquilo, cicloalquilo, heterociclilo, fenilo, y fenoxi están opcionalmente sustituidos por 1, 2 o 3 sustituyentes seleccionados entre alquilo, cicloalquilo, alcoxi, hidroxilo, y halo; en donde R6 y R7 se seleccionan independientemente del grupo que consiste en hidrógeno, alquilo C1-C15, cicloalquilo, heterociclilo, arilo, y heteroarilo, todos los cuales están opcionalmente sustituidos con 1-3 sustituyentes seleccionados de halo, alquilo , mono- o dialquilamino, alquilo o arilo o heteroaril amida, -CN, alcoxi inferior, -CF3 , arilo, y heteroarilo; o R6 y R7 cuando se toman junto con el nitrógeno al que están unidos forman un heterociclo; R2 es hidrógeno, halo, ciano, alcoxi, o alquilo opcionalmente sustituido por halo; R3 es arilo, heteroarilo, o heterociclilo, todos los cuales están opcionalmente sustituidos con uno o más sustituyentes seleccionados de alquilo, alcoxi, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, arilo, arilalquilo, heteroarilo, heteroarilalquilo, heterociclilo, heterociclilalquilo, halo, oxo, -N02, haloalquilo , haloalcoxi, -CN, -0-R6, -0-C(0)-R6, -O-C(O) -N(R6) (R7) , -S-R6, -N(R6) (R7), -S (=0) -R6, -S(=0)2R6, -S (=0) 2- (R6) (R7) , -S (=0) 2-0-R6, -N ( R6 ) -C (0) -R7 , -N(R6)-C(0)-0-R7, -N (R6) -C (0) -N (R6) (R7), -C(0)-R6, -C'(0)-0-R6, -C(0)-N(R6) (R7), y -N (R6) -S (=0) 2-R7, en donde el alquilo, alcoxi, cicloalquilo, arilo, heteroarilo o heterociclilo está además opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados de halo, oxo,-N02, alquilo, haloalquilo, haloalcoxi, N(R6) (R7), -C(0)-R6, -C(0)-0-R6, -C ( 0 ) -N ( R6 ) (R7 ) , -CN, -0-R6, cicloalquilo, arilo, heteroarilo y heterociclilo ; con la condición de que el grupo funcional heteroarilo o heterociclilo incluye al menos un átomo de nitrógeno en el anillo; XI, X2, X3, X4, X5, X6, X7 y X8 son independientemente C(R4) o N , en el cual cada R4 es independientemente hidrógeno, alquilo, alcoxi, cicloalquilo, arilo, heteroarilo, heterociclilo, halo, -N02, haloalquilo, haloalcoxi-CN, -0-R6, -S-R6, -N(R6) (R7), -S(=0)-R6, -S(=0)2R6, -S (=0) 2 -N ( R6 ) ( R7 ) , -S(=0)2-0-R6, -N (R6) -C (0) -R7, -N (R6) -C (0) -0-R7 , -N(R6)-C(0)-N(R6) (R7), -C(0)-R6, -C(0)-0-R6, -C (0) -N (R6) (R7 ) , or -N(R6)-S(=0)2-R7, en donde el alquilo, cicloalquilo, arilo, heteroarilo, y heterociclilo está además opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados de halo, oxo, -N02, -CF3, -0-CF3, -N(R6) (R7), -C(0)-R6, -C(0)-0-R7, -C (0) -N (R6) (R7) , -CN, -0-R6; o X5 y X6 o X6 y X7 están unidos para proporcionar arilo fusionado opcionalmente sustituido o heteroarilo fusionado opcionalmente sustituido; y con la condición de que al menos uno de X2, X3, y X4 es C(R4); al menos dos de X5, X6, X7, y X8 son C(R4); y al menos uno de X2, X3, X4 , X5, X6, X7 y X8 es N .
No obstante las divulgaciones anteriores, hay una necesidad de compuestos que sean potentes y presenten perfiles farmacocinéticos y/o farmacodinámicos mejorados para el tratamiento de enfermedades relacionadas con la activación ASK1.
Sorprendentemente, los solicitantes han descubierto un compuesto novedoso dentro del alcance de la Publicación de Patente de EE.UU. US2011/0009410A que en suma exhibe una buena potencia, perfiles farmacocinéticos y/o farmacodinámicos mejorados en comparación con los compuestos descritos en la misma.
BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN La presente invención se relaciona con un compuesto de la fórmula : (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
En una forma de realización, la invención se relaciona con el uso de un compuesto de fórmula (I) en el tratamiento de una enfermedad en un paciente en necesidad de tratamiento con un inhibidor de ASKl .
En otra forma de realización, la invención se relaciona con una composición farmacéutica que comprende un compuesto de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y uno o más portadores farmacéuticamente aceptables.
En otra forma de realización, la invención es un método para tratar la nefropatia diabética, o complicaciones de la diabetes, que comprende administrar una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, a un paciente en necesidad del mismo.
En otra forma de realización, la invención se relaciona con un método para tratar la enfermedad renal, o enfermedad renal diabética que comprende administrar una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, a un paciente en necesidad del mismo.
En otra forma de realización, la invención se relaciona con un método para tratar la fibrosis renal, fibrosis pulmonar, o fibrosis pulmonar idiopática (FPI) que comprende administrar una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, a un paciente en necesidad del mismo.
En otra forma de realización, la invención se relaciona con un método para tratar la enfermedad renal diabética, nefropatia diabética, fibrosis renal, fibrosis hepática, o fibrosis pulmonar que comprende administrar una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto o sal de fórmula (I), a un paciente en necesidad del mismo.
En otra forma de realización, la invención se relaciona con compuestos intermedios útiles para la síntesis del compuesto de fórmula (I) .
En otra forma de realización, la invención se relaciona con el uso de un compuesto de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo para el tratamiento de la enfermedad renal crónica.
En otra forma de realización, la invención se relaciona con el uso de un compuesto de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo para el tratamiento de la enfermedad renal diabética.
En otra forma de realización, la invención se relaciona con el uso de un compuesto de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de la enfermedad renal crónica .
En aún otra forma de realización, la invención se relaciona con el compuesto de fórmula (I) para uso en terapia .
BREVE DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS La Figura 1 es un gráfico de barras que muestra los niveles de colágeno IV en la corteza renal de ratas sometidas a siete días de obstrucción ureteral unilateral y tratadas, ya sea, con vehículo o con 1, 3, 10 o 30 mg/kg b.i.d. del compuesto de fórmula (I).
La Figura 2 muestra imágenes representativas de secciones de la corteza renal teñidas con alfa-actina de músculo liso (un marcador de miofibroblastos activados) de ratas sometidas a siete días de obstrucción ureteral unilateral y tratadas con, ya sea, vehículo o con 1, 3, 10 o 30 mg/kg b.i.d del compuesto de fórmula (I) .
DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN Definiciones y Parámetros Generales Tal como se usa ??· el presente documento, las siguientes palabras y frases están destinadas a tener los significados indicados a continuación, excepto en la medida en que el contexto en que se utilizan indique lo contrario. Cuando no se mencione ninguna indicación o definición, está implícito el sentido común de la palabra o frase, el que se puede encontrar en un diccionario correspondiente, o en el uso común conocido por un experto en la técnica.
El término "enfermedad renal crónica", como se usa en el presente documento, se relaciona con la pérdida progresiva de la función renal en el tiempo, por lo general meses o incluso años. La enfermedad renal crónica (ERC) es diagnosticada por un profesional de atención de salud competente utilizando la información adecuada, y pruebas o marcadores conocidos por un experto en la técnica. La enfermedad renal crónica incluye implícitamente la enfermedad renal.
El término "enfermedad renal diabética", como se usa en el presente documento, se relaciona con la enfermedad renal causada por la diabetes, agravada por la diabetes, o que se presenta con la diabetes. Es una forma de enfermedad renal crónica que se presenta en alrededor del 30% de los pacientes con diabetes. Se define como la diabetes con presencia de albuminuria y/o insuficiencia renal, es decir, disminución de la velocidad de filtración glomerular) (Véase de B, I, et al., Temporal trends in the prevalence of diabetic kidney disease in the United States. JAMA 2011 Jun . 22; 305 (24) :2532-2539) .
El término "sal farmacéuticamente aceptable" se refiere a sales de compuestos farmacéuticos, por ejemplo, compuestos de fórmula (I) que retienen las propiedades y efectividad biológicas del compuesto de base, y que no son ni biológicamente ni de ninguna otra manera no deseables. Hay sales de adición ácidas y sales de adición básicas. Sales de adición ácidas farmacéuticamente aceptables se pueden preparar a partir de ácidos inorgánicos y orgánicos.
Los ácidos y bases útiles para hacer reaccionar con un compuesto de base para formar sales farmacéuticamente aceptables (sales de adición ácidas o adición básicas respectivamente) son conocidos por un experto en la técnica. Del mismo modo, los métodos de preparación de sales farmacéuticamente aceptables de un compuesto de base (tras la divulgación) son conocidos por un experto en la técnica y se divulgan, por ejemplo, en Berge, et al., Journal of Pharmaceutical Science, Enero 1977 vol. 66, No. 1, y en otras fuentes. Las sales derivadas de ácidos inorgánicos incluyen, pero no están limitadas a, ácido clorhídrico, ácido bromhídrico, ácido sulfúrico, ácido nítrico, ácido fosfórico, y similares. Las sales derivadas de ácidos orgánicos incluyen, pero no están limitadas a, ácido maleico, ácido fumárico, ácido tartárico, ácido p-tolueno-sulfónico, y similares. Las bases útiles para la formación de sales de adición básicas son conocidas para un experto en la técnica. Un ejemplo de una sal farmacéuticamente aceptable del compuesto de fórmula (I) es la sal de clorhidrato del compuesto de fórmula (I).
Como se usa en el presente documento, "portador farmacéuticamente aceptable" incluye excipientes o agentes tales como solventes, diluyentes, medios de dispersión, recubrimientos, agentes antibacterianos y antifúngicos , agentes retardantes de la absorción e isotónicos y similares que no son perjudiciales para el compuesto de la invención o uso del mismo. El uso de tales portadores y agentes para preparar composiciones de sustancias farmacéuticamente activas es bien conocido en la técnica (véase, por ejemplo, Remington ' s Phar aceutical Sciences, Mace Publishing Co., Philadelphia, Pa. 17a Ed. (1985); y Modern Pharmaceutics, Marcel Dekker, Inc. 3a Ed. (G. S. Banker & C. T. Rhodes, Eds. ) El término "enfermedades cardiorenal" como se usa en el presente documento, se refiere a enfermedades relacionadas con la función renal que son causadas o exacerbadas por problemas cardiovasculares como, por ejemplo, presión arterial alta o hipertensión. Se cree que la hipertensión es un importante factor que contribuye a la enfermedad renal.
El término "enfermedades respiratorias", como se usa en el presente documento, se refiere a enfermedades que incluyen la enfermedad pulmonar obstructiva crónica (EPOC) y la fibrosis pulmonar idiopática (IPF) .
El término "cantidad terapéuticamente efectiva" se refiere a una cantidad del compuesto de fórmula (I) que es suficiente para efectuar el tratamiento como se define a continuación, cuando se administra a un paciente (particularmente un ser humano) en necesidad de tal tratamiento en una o más dosis. La cantidad terapéuticamente efectiva variará, dependiendo del paciente, la enfermedad a tratar, el peso y/o la edad del paciente, la gravedad de la enfermedad, o la forma de administración, lo que podrá ser determinado por un médico o profesional de atención de salud calificado .
El término "tratamiento" o "tratar" significa administrar un compuesto o sal farmacéuticamente aceptable de la fórmula (I) con el propósito de: (i) retrasar la aparición de una enfermedad, es decir, lograr que los síntomas clínicos de la enfermedad no se desarrollen o retrasar el desarrollo de los mismos; (ii) inhibir la enfermedad, es decir, detener el desarrollo de síntomas clínicos; y/o (iii) aliviar la enfermedad, es decir, lograr la regresión de los síntomas clínicos o la gravedad de los mismos.
En una forma de realización preferida, la invención se relaciona con el uso del compuesto de fórmula (I) en el tratamiento de la enfermedad renal crónica que comprende la administración de una cantidad terapéuticamente efectiva a un paciente en necesidad del mismo.
En otra forma de realización preferida, la invención se relaciona con el uso del compuesto de fórmula (I) en el tratamiento de la enfermedad renal diabética que comprende administrar una cantidad terapéuticamente efectiva a un paciente en necesidad del mismo.
En otra forma de realización preferida, la invención se relaciona con el uso del compuesto de fórmula (I) en el tratamiento de la fibrosis pulmonar o renal que comprende administrar una cantidad terapéuticamente efectiva a un paciente en necesidad del mismo.
La concentración inhibitoria máxima media (CI50) de un agente terapéutico es la concentración de un agente terapéutico necesaria para producir el 50% de la inhibición máxima de una enzima blanco. Es un objetivo deseable el descubrir un agente terapéutico, por ejemplo un compuesto que inhiba la quinasa reguladora de la señal de apoptosis (ASK1) con una CI50 baja. De esta manera, los efectos secundarios no deseables se reducen al mínimo al tener la posibilidad de utilizar una dosis más baja del agente terapéutico para inhibir la enzima ASK1.
Del mismo modo, es un objetivo deseable el descubrir un agente terapéutico que tenga una constante de disociación baja (Kd) . Kd se utiliza para describir la afinidad entre un ligando (tal como un agente terapéutico) y la quinasa o receptor correspondiente; es decir, es una medida de cuan fuertemente un agente terapéutico se une a una quinasa en particular, por ejemplo a la quinasa requladora de la señal de apoptosis ASK1. Por lo tanto, en el desarrollo de fármacos, en qeneral, se prefiere una menor Kd.
Del mismo modo, es un objetivo deseable el descubrir un compuesto que tenga una CE50 baja. CE50 es la concentración de un fármaco que alcanza el 50% de eficacia máxima en la célula. El valor de CE50 se traduce en la concentración de un compuesto en el medio de ensayo necesaria para alcanzar 50% de la eficacia máxima. Por lo tanto, en el desarrollo de fármacos, en general, se prefiere una menor CE50. Una unidad de medida útil asociada con CE50 es la CE50 ajustada a la unión a proteina (CE50- ajUP, tal como se utiliza en el presente documento) . Este valor mide la cantidad de un fármaco, por ejemplo, un compuesto de la fórmula (I) correlacionada con la fracción del fármaco que no está unida a la proteina que proporciona un 50% de eficacia máxima. Este valor mide la eficacia del fármaco corregida por, o correlacionada con, la cantidad de fármaco que está disponible en el sitio diana de acción.
Otra propiedad deseable es tener un compuesto con una proporción baja de flujo de salida de membrana celular determinada mediante estudios de permeabilidad en células CACO. Se prefiere una proporción de flujo de salida ( (B/A) / (A/B) ) inferior a 3.0. Es de esperar que un compuesto con una proporción mayor a 3 esté sometido a un rápido flujo de salida activo de la célula y puede no durar lo suficiente en la célula como para que se alcance una eficacia máxima.
Otro objetivo deseable es descubrir un fármaco que exhiba una inhibición mínima fuera de la diana. Esto es, un fármaco que inhiba mínimamente las enzimas Cyp450 (citocromo P450) . Más particularmente, se desea un fármaco que sea un inhibidor débil de cyp3A4, la más importante de las enzimas P450. Un inhibidor débil es un compuesto que provoca un aumento en los valores AUC en plasma de al menos 1.25 veces pero de menos de 2 veces, o 20-50% de disminución en el aclaramiento (wikipedia.org/wiki/cyp3A4, visitada el 12 Noviembre de 2011). Generalmente, se considera un inhibidor débil un compuesto que exhibe un CI50 de CYP3A4 mayor a ??µ?.
Una medida útil para comparar la inhibición de cyp3A4 entre los candidatos a droga es la proporción de la inhibición de cyp3A4 y la CE50 ajustada a la unión a proteína. Este valor da una indicación del potencial relativo de inhibición de cyp corregida por la CE50 ajustada a la unión a proteína que es específica de cada fármaco. Se prefiere una proporción más alta en esta medida como indicativa de menor potencial de inhibición de cyp3A4.
Inesperadamente y de forma ventajosa, los solicitantes han descubierto un compuesto (de fórmula (I) en el presente documento) dentro del alcance genérico de la Publicación de Patente de EE.UU. N° 2001/00095410A1 que proporciona ventajas en comparación con los compuestos estructuralmente cercanos (en el presente documento designados como compuestos A y B) divulgados en Publicación de Patente de EE.UU. N° 2001/00095410A1.
Compuesto B Por lo tanto, los objetos de la presente invención incluyen, pero no están limitados a, la provisión de un compuesto de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y métodos de uso del compuesto de fórmula (I) para el tratamiento de la enfermedad renal, enfermedad renal crónica, enfermedad renal diabética, la nefropatia diabética, fibrosis renal o fibrosis pulmonar.
Terapia Combinada Los pacientes que reciben tratamiento contra enfermedades cardiorenales, tal como la enfermedad renal crónica, pueden beneficiarse de un tratamiento de combinación de fármacos. Por ejemplo, el compuesto de la presente invención se puede combinar con uno o más de inhibidores de la enzima convertidora de angiotensina (ECA) , tales como enalapril, captopril, ramipril, lisinopril, y quinapril; o bloqueadores de los receptores de angiotensina II (BRA) , tales como losartan, olmesartan, e irbesartan; o agentes antihipertensivos tales como amlodipina, nifedipina, y felodipino. El beneficio de la combinación puede ser el aumentar la eficacia y/o reducir los efectos secundarios de un componente ya que la dosis de ese componente puede ser ajustada hacia abajo para reducir sus efectos secundarios al mismo tiempo que se obtiene el beneficio de su eficacia aumentada por la eficacia del compuesto de fórmula (I) y/u otro (s) componente ( s) activo (s).
Los pacientes que presentan insuficiencia renal crónica tratable con inhibidores de la ASK1, tales como el compuesto de fórmula (I), también pueden presentar afecciones que se benefician de la coadministración (según las indicaciones de un profesional de atención de salud calificado) de un agente o agentes terapéuticos como son los antibióticos, analgésicos, antidepresivos y/o ansioliticos en combinación con el compuesto de fórmula (I) . Los tratamientos combinados se pueden administrar simultáneamente o uno después del otro dentro de intervalos que deben ser determinados de acuerdo a las indicaciones de un profesional de atención de salud calificado o a través de una presentación en dosis fijas (todos los ingredientes activos se combinan en la forma de dosificación unitaria, por ejemplo, un comprimido) de dos o más agentes activos.
Composiciones Farmacéuticas y Administración El compuesto de la presente invención se puede administrar en forma de una composición farmacéutica. Por consiguiente, la presente invención proporciona composiciones farmacéuticas que contienen, como el ingrediente activo, el compuesto de fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y uno o más excipientes y/o portadores farmacéuticamente aceptables, que incluyen diluyentes sólidos y rellenos inertes, diluyentes, incluyendo soluciones acuosas estériles y diversos solventes orgánicos, potenciadores de permeación, solubilizantes y adyuvantes. Las composiciones farmacéuticas se pueden administrar solas o en combinación con otros agentes terapéuticos. Las composiciones se pueden preparar para su suministro en forma de comprimidos sólidos, cápsulas, comprimidos oblongos, ungüentos, parches de piel, de liberación sostenida, comprimidos de desintegración rápida, preparaciones para inhalación, etc. Las composiciones farmacéuticas típicas se preparan y/o se administran usando métodos y/o procesos bien conocidos en la técnica farmacéutica (véase, por ejemplo, Remington's Pharmaceutical Sciences, Mace Publishing Co., Philadelphia, Pa. 17a Ed. (1985); y Modern Pharmaceutics, Marcel Dekker, Inc. 3a Ed. (G. S. Banker & C. T. Rhodes, Eds . ) .
Las formulaciones para tratamientos combinados que comprenden el compuesto de fórmula (I) se pueden presentar como formulaciones de dosis fija, por ejemplo, comprimidos, elixires, líquidos, pomadas, inhalantes, geles, etc., usando procedimientos conocidos por un experto en la técnica.
Las composiciones farmacéuticas del compuesto de fórmula (I) se pueden administrar en dosis únicas o múltiples dosis por vías que incluyen, por ejemplo, la vía rectal, bucal, intranasal y transdérmica; por inyección intraarterial , por vía intravenosa, por vía intraperitoneal, por vía parenteral, por vía intramuscular, por vía subcutánea, por vía oral, por vía tópica, como un inhalador o mediante un dispositivo impregnado o recubierto tal como un stent, por ejemplo, o un polímero cilindrico insertado en la arteria. Las vías de administración preferidas incluyen la administración oral, parenteral e intravenosa.
El compuesto de fórmula (I) se puede administrar en una cantidad farmacéuticamente efectiva. En el caso de la administración oral, cada unidad de dosificación contiene preferiblemente de 1 mg a 500 mg del compuesto de fórmula (I) . Una dosis más preferida es de 1 mg a 250 mg del compuesto de fórmula (I) . Se prefiere particularmente una dosis del compuesto de fórmula (I) que varia desde alrededor de 20 mg dos veces al día a alrededor de 50 mg dos veces al día. Se entenderá, sin embargo, que la cantidad de compuesto realmente administrada por lo general será determinada por un médico a la luz de las circunstancias relevantes, las que incluyen la afección a tratar, la via de administración elegida, el compuesto coadministrado, si corresponde, la edad , peso, la respuesta individual del paciente, la gravedad de los síntomas del paciente, y similares.
Nomenclatura El nombre del compuesto de la presente invención generado utilizando ChemBioDraw Ultra 11. es 5- (4-ciclopropil-lH-imidazol-l-il) -N- (6- ( 4-isopropil-4H-1,2, 4-triazol-3-il) piridin-2-il ) -2- fluoro-4-metilbenzamida, también conocido como 5- ( (4-ciclopropil-lH-imdazol-l-il) -2-fluoro-N- ( 6- ( 4- isopropil-4H-l, 2,4-triazol-3-il)piridina-2- il) -4-metilbenzamida .
Síntesis del Compuesto de Fórmula (I) El compuesto de la invención se puede preparar usando métodos divulgados en este documento o modificaciones de los mismos que serán evidentes dada la descripción del presente documento. La síntesis del compuesto de la invención puede llevarse a cabo como se describe en el siguiente ejemplo. Si están disponibles, los reactivos se pueden comprar comercialmente, por ejemplo, de Sigma Aldrich u otros proveedores de productos químicos. Alternativamente, los reactivos se pueden preparar usando esquemas de reacción y métodos conocidos por un experto en la técnica.
Parámetros de la Reacción de Síntesis Los términos "solvente", "solvente orgánico inerte" o "solvente inerte" se refieren a un solvente inerte bajo las condiciones de reacción que se describen junto con la descripción del mismo (incluyendo, por ejemplo, benceno, tolueno, acetonitrilo, tetrahidrofurano (THF) , dimetilformamida (DMF) , cloroformo, cloruro de metileno (o diclorometano) , éter dietílico, éter de petróleo (PE) , metanol, piridina, etil acetato (EA) y similares. A menos que se especifique lo contrario, los solventes utilizados en las reacciones de la presente invención son solventes orgánicos inertes, y las reacciones se llevan a cabo bajo un gas inerte, preferiblemente nitrógeno.
Un método de preparación de compuestos de fórmula (I) se muestra a continuación en los Esquemas de Reacción 1 y 2.
Esquema 1 Preparación del Compuesto A A una solución de 6-aminopicolinato de metilo (432 g, 2.84 moles) en MeOH (5 L) se añadió NH2NH2.H20 (284 g, 5.68 moles, 2.0 eq.). La mezcla de reacción se calentó a reflujo durante 3 horas y después se enfrió a temperatura ambiente. El precipitado formado en la mezcla se recolectó mediante filtración, se lavó con EA (2 L x 2) y después se secó al vacio para dar el compuesto A (405 g, rendimiento del 94%) como un sólido blanco.
Preparación del compuesto B Una mezcla del compuesto A (405 g, 2.66 moles) en dimetilformamida-dimetilacetal (DMF-DMA) (3.54 L) se calentó a reflujo durante 18 h, se enfrió a temperatura ambiente y después se concentró bajo presión reducida. El residuo se recolectó en EA (700 mL) y se calentó a 50°C durante 20 min. Después de enfriarse a temperatura ambiente, el sólido se recolectó mediante filtración y se secó al vacio para dar el compuesto B (572 g, rendimiento del 82%) como un sólido blanco .
Preparación de C A una solución del compuesto B (572 g, 2.18 moles) en una mezcla de CH3CN-AcOH (3.6 L, 4:1) se añadió propan-2-amina (646 g, 5.0 eq. ) . La mezcla resultante se calentó a reflujo durante 24 h y después se enfrió a temperatura ambiente, y el solvente se eliminó bajo presión reducida. El residuo se disolvió en agua (2.8 L) y se añadió NaOH acuoso 1 N a un pH de 8.0. El precipitado se recolectó mediante filtración y el filtrado se extrajo con EA (500 mL x 3) . Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre Na2S04 anhidro, y después se concentraron hasta un volumen de 150 mL. A esta mezcla a 0°C se añadió lentamente PE (400 mL) y la suspensión resultante se filtró. El sólido combinado se recristalizó desde el EA-PE para dar el compuesto C (253 g, rendimiento del 57%) en forma de sólido blanquecino. 1H-NMR (400 MHz, CDC13): d 8.24 (s, 1 H) ; 7.52 (m, 2 H) ; 6.51 (dd, J=1.6, 7.2 Hz, 1 H) ; 5.55 (m, 1 H) ; 4.46 (bs, 2 H) ; 1.45 (d, J=6.8 Hz, 6 H) . MS (ESI+ ) m/z: 204 (M+l)+. El compuesto C es un compuesto intermedio clave para la síntesis del compuesto de fórmula (I) . Por lo tanto, un objeto de la presente invención es también la provisión del compuesto intermedio C, sus sales o sus formas protegidas, para la preparación del compuesto de fórmula (I) . Un ejemplo de una sal del compuesto C es la sal de adición de HC1. Un ejemplo de una forma protegida del compuesto C es el compuesto carbamato tal como el que se obtiene con Cbz-Cl. Los grupos protectores, su preparación y usos se enseñan en G. M. Wuts y Theodora W. Greene, Protective Groups in Organic Chemistry, 2a edición, 1991, Wiley and Sons, Publishers.
Esquema 2 Continuación de la preparación del compuesto de fórmula (I) : Formula (I) El compuesto 6 es un compuesto intermedio clave para la síntesis del compuesto de fórmula (I). Por lo tanto un objeto de la presente invención es también la provisión de compuesto intermedio 6, 6 sus sales o sus formas protegidas, para la preparación del compuesto de fórmula (I) . Un ejemplo de una sal del compuesto 6 es la sal de adición de HC1. Un ejemplo de una forma protegida del compuesto 6 es un éster (por ejemplo, metil, etil o bencil ésteres) o el compuesto de carbamato tal como el que se obtiene con Cbz-Cl. Los grupos protectores, su preparación y usos se enseñan en Peter G. M. Wuts y Theodora W. Greene, Protective Groups in Organic Chemistry, 2a edición, 1991, Wiley and Sons, Publishers.
Paso 1 - Preparación de 5-amino-2-fluoro-4-metilbenzonitrilo - Compuesto (2) La 5-bromo-4-fluoro-2-metilanilina (1) inicial (20 g, 98 mmoles) se disolvió en 1-metilpirrolidinona anhidra (100 mL) , y se añadió cianuro de cobre (I) (17.6 g, 196 mmoles) . La reacción se calentó a 180°C durante 3 horas, se enfrió a temperatura ambiente, y se añadió agua (300 mL) e hidróxido de amonio concentrado (300 mL) . La mezcla se agitó durante 30 minutos y se extrajo con EA (3 x 200 mL) . Los extractos combinados se secaron sobre sulfato de magnesio, y el solvente se eliminó bajo presión reducida. El residuo oleoso se lavó con hexanos (2 x 100 mL) , y el sólido se disolvió en diclorometano y se cargó en una columna de gel de sílice. Se eluyó con 0 a 25% de EA en gradiente de hexano, lo que proporcionó 5-amino-2-fluoro-4-metilbenzonitrilo (10.06 g, 67.1 mmoles). LC/MS (m/z: 151 M+l).
Paso 2 - Preparación de 5- (2-ciclopropil-2-oxoetilamino) -2-fluoro-4-metilbenzonitrilo - Compuesto (3) Se disolvió 5-amino-2-fluoro-4-metilbenzonitrilo (12 g, 80 mmoles) en N, N-dimetilformamida anhidra (160 mL) bajo atmósfera de nitrógeno, y se añadió con agitación carbonato de potasio (13.27 g, 96 mmoles) y yoduro de potasio (14.61 g, 88 mmoles ) en forma de sólidos. La reacción se agitó durante 5 minutos a temperatura ambiente y después se añadió bromometil ciclopropilcetona (20.24 mi, 180 mmoles). La mezcla de reacción se calentó a 60°C durante 3 horas, y luego se eliminaron los solventes bajo presión reducida. El residuo se disolvió en EA (400 mL) y se lavó con 400 mL de agua. La capa orgánica se secó sobre sulfato de magnesio, y el solvente se eliminó bajo presión reducida. El residuo se volvió a disolver en una cantidad mínima de EA, y se añadieron hexanos para llevar la solución a una proporción de hexanos: EA de 3 : 1 en volumen. El producto precipitó desde la solución y se recolectó mediante filtración para dar 5- (2-ciclopropil-2-oxoetilamino) -2-fluoro-4-metilbenzonitrilo (14.19 g, 61.2 mmoles). LC/MS (m/z: 233, M+l) .
Paso 3 - Preparación de 5- ( 4 -ciclopropil-2-mercapto-lH-imidazol-l-il ) -2-fluoro-4-metilbenzonitrilo - Compuesto (4) Se disolvió 5- (2-ciclopropil-2-oxoetilamino) -2-fluoro-4-metilbenzonitrilo (14.19 g, 61.2 mmoles) en ácido acético glacial (300 mL) . Se añadió con agitación tiocianato de potasio (119 g, 122.4 mmoles) como un sólido. La mezcla de reacción se calentó a 110°C durante 4 horas, en cuyo momento el solvente se eliminó bajo presión reducida. El residuo se recolectó en diclorometano (200 mL) y se lavó con 200 mL de agua. El extracto acuoso se extrajo con (2 x 200 mL) diclorometano adicional, los extractos orgánicos se combinaron y se secaron sobre sulfato de magnesio. El solvente se eliminó bajo presión reducida y el residuo oleoso se volvió a disolver en EA (50 mL) y se añadió 150 mL de hexanos. Se formó una capa oscura y se añadió al matraz una barrita de agitación. La agitación vigorosa provocó que el producto precipitara en forma de un sólido de color durazno. El producto se recolectó mediante filtración, para dar 5- (4-ciclopropil-2-mercapto-lH-imidazol-l-il) -2-fluoro-4-metilbenzonitrilo, (14.26 g, 52.23 mmoles) . Anal. LC/MS (m/z: 274, M+l) .
Paso 4 - Preparación de 5- (4-ciclopropil-lH-imidazol-il) -2-fluoro-4-metilbenzonitrilo - Compuesto (5) En un matraz de fondo redondo de tres cuellos de 500 mL se colocó ácido acético (96 mL) , agua (19 mL) y peróxido de hidrógeno (30%, 7.47 mL, 65.88 mmoles). La mezcla se calentó a 45 °C con agitación bajo atmósfera de nitrógeno mientras se controlaba la temperatura interna. Después se añadió 5-(4-ciclopropil-2-mercapto-lH-imidazol-l-il ) -2-fluoro-4-metilbenzonitrilo (6.00 g, 21.96 mmoles) como sólido en pegueñas porciones durante 30 minutos mientras se mantenía la temperatura interna bajo 55°C. Cuando se completó la adición de tioimidazol la reacción se agitó durante 30 minutos a una temperatura de 45°C, y después se enfrió a temperatura ambiente, y se añadió lentamente una solución de sulfito de sodio en agua a 20% p/p (6 mL) . La mezcla se agitó durante 30 minutos y los solventes se eliminaron bajo presión reducida. El residuo se suspendió en 250 mL de agua y se añadió hidróxido de amonio acuoso 4N para llevar el pH a -10. La mezcla se extrajo con diclorometano (3 x 200 mL) , los productos orgánicos combinados, se secaron sobre sulfato de magnesio, y el solvente se eliminó bajo presión reducida. El residuo se disolvió en 20 mi de EA, y se añadió 80 mL de hexanos con agitación. Los solventes se separaron por decantación dejando un residuo oleoso. Este proceso se repitió y el producto 5- (4-ciclopropil-lH-imidazol-l-il) -2-fluoro-4-metilbenzonitrilo se obtuvo como un aceite viscoso (5.14 g, 21.33 mmoles) Anal. LC/MS (m/z: 242, M+l).
Paso 5 - Preparación de clorhidrato de ácido 5- (4-ciclopropil-lH-imidazol-l-il) -2-fluoro-4-metilbenzoico (6) Se colocó 5- (4-ciclopropil-lH-imidazol-l-il) -2-fluoro-4-metilbenzonitrilo (11.21 g, 46.50 mmoles) en un matraz de fondo redondo equipado con un condensador de reflujo, y se suspendió en ácido clorhídrico al 38% (200 mL) . La mezcla se calentó a 100°C durante 4.5 horas, y después se enfrió a temperatura ambiente. El solvente se eliminó bajo presión reducida para dar un sólido de color rosado, al que se añadió 100 mL de EA. El producto sólido se recolectó mediante filtración y se lavó con 3 x 100 mL de EA. Se añadió al producto sólido 100 mL de metanol al 10% en diclorometano, la mezcla se agitó, y el filtrado se recolectó. Esto se repitió con 2 porciones más de 100 mL de metanol al 10% en diclorometano. Los filtrados se combinaron y el solvente se eliminó bajo presión reducida, para proporcionar clorhidrato de ácido 5- ( 4-ciclopropil-lH-imidazol-l-il ) -2-fluoro-4-metilbenzoico . No se llevó a cabo ninguna purificación adicional (11.13 g, 37.54 mmoles). Anal. LC/MS (m/z: 261, M+l) .
Paso 6 - Preparación de 5- ( -ciclopropil-l H-imidazol-l-il ) -2-fluoro-N- ( 6- ( 4-isopropil-4H-l , 2 , 4-triazol-3-il ) piridin-2-il ) -4-metilbenzamida - fórmula (I) Clorhidrato de ácido 5- ( -ciclopropil-l H-imidazol-l-il ) -2-fluoro-4-metilbenzoico (1.5 g, 5.07 mmoles) se suspendió en 1 , 2-diclorometano anhidro (25 mL) a temperatura ambiente. Se añadió cloruro de oxalilo (0.575 mL, 6.59 mmoles) con agitación bajo atmósfera de nitrógeno, seguido de la adición de N, N-dimetilformamida (0.044 mL, 0.507 mmoles). La mezcla se agitó durante 4 horas a temperatura ambiente, y luego se eliminó el solvente bajo presión reducida. El residuo se disolvió en 25 mL de diclorometano anhidro. Rápidamente se añadió 6- (4-isopropil-4H-l, 2, 4-triazol-3-il ) piridin-2-amina (1.13 g, 5.58 mmoles) (compuesto C) y 4-dimetilaminopiridina (0.62 g, 5.07 mmoles) con agitación bajo atmósfera de nitrógeno. La reacción se agitó durante 2 horas a temperatura ambiente y se añadió NaHC03 acuoso saturado (15 mL) . La mezcla se agitó durante 10 minutos, y las capas se separaron, y la capa acuosa se lavó 1 x 20 mL de diclorometano. Los productos orgánicos combinados se secaron (MgS04), se filtraron y se concentraron. El residuo se disolvió en una cantidad mínima de CH3CN y se añadió agua lentamente hasta que los sólidos precipitaron desde la mezcla. El sólido se recolectó mediante filtración y se secó para dar 5- ( 4-ciclopropil-lH-imidazol-l-il ) -2-fluoro-N- (6- (4-isopropil-4H-l, 2, 4-triazol-3-il ) piridin-2-il ) -4-metilbenzamida con ~96% de pureza (1.28 g, 2.88 mmoles). Anal. LC/MS (m/z: 446, M+l) . El material se purificó adicionalmente mediante RP-HPLC (HPLC de fase inversa) para obtener una muestra analíticamente pura como la sal de HC1.
C24H24FN70-HC1, 446.2 (M+l), 1H-NMR (DMSO): d 11.12 (s, 1H) ; 9.41 (s, 1H); 9.32 (s, 1H) ; 8.20 (d, J=8.4 Hz, 1H) ; 8.07 (t, J=8.4 Hz, 1H) ; 7.95 (d, J=6.4 Hz, 1H) ; 7.92 (d, J=7.6 Hz, 1H) ; 7.79 (s, 1H) ; 7.59 (d, J=10.4 Hz, 1H) ; 5.72 (sept, J=6.8 Hz, 1H); 2.29 (s, 3H) ; 2.00-2.05 (m, 1H) ; 1.44 (d, J=6.8 Hz, 6H) ; 1.01-1.06 (m, 2H) ; 0.85-0.89 (m, 2H) .
Ensayos biológicos Ensayo de Quinasa TR-FRET (determinación bioquímica de CI50) de ASK1 (Quinasa 1 Reguladora de la Señal de Apoptosis) La capacidad de los compuestos para inhibir la actividad quinasa de la ASK1 se determinó usando un ensayo de Transferencia de Energía por Resonancia de Fluorescencia Resuelta en el Tiempo [TR- FRET] que utiliza como el sustrato de proteina la proteina básica de la mielina biotinilada [biotina-MBP] . Se utilizó un robot manipulador de líquidos Beckman Biomek FX para colocar 2 µL/pocillo de los compuestos en DMSO acuoso al 2.44% en placas de polipropileno de bajo volumen de 384 pocilios [Nunc, # 267460] para dar una concentración final de entre ???µ? y 0.5nM de compuesto en el ensayo de quinasa. Se utilizó un manipulador de líquidos Deerac Fluidics Ecuator para dispensar 3 yL/pocillo de 0.667ng/yL [Upstate Biotechnologies , #14-606, o la proteína equivalente de elaboración propia] y 0.1665 ng/mL de biotina-MBP [Upstate Biotechnologies, #13-111] en tampón (MOPS 85mM, pH 7.0, acetato de Mg 8.5 m , glicerol al 5%, NP-40 al 0.085%, DTT 1.7 mM y BSA 1.7 mg/mL) en las placas que contenían los compuestos.
La enzima se dejó pre-incubar con el compuesto durante 20 minutos antes de iniciar la reacción de la quinasa con la adición de 5 µ?/??????? de ATP 300 µ? en tampón (MOPS 50 mM, pH 7.0, acetato de Mg 5 mM, DTT 1 mM, DMSO 5%) usando el manipulador de líquidos Deerac Fluidics Ecuator. Se dejó que se desarrollaran las reacciones de quinasa durante 20 minutos a temperatura ambiente y posteriormente se detuvieron con la adición de 5 yL/pocillo de EDTA 25 mM utilizando el Deerac Fluidics Ecuator. A continuación, el Biomek FX se utilizó para transferir 1 yL/pocillo de cada reacción de quinasa completada a los pocilios de una placa de poliestireno blanco OptiPlate-1536 [ PerkinElmer, # 6004299] que contenían 5 µ?,/??^??? de reactivos de detección (anticuerpo marcado anti-fosfotreonina Eu-W1024 1.11 nM [PerkinElmer, # AD0094] y estreptavidina-aloficocianina 55.56 nM [PerkinElmer, # CR130-100] en tampón de detección LANCE lx [PerkinElmer, # CR97-100] ) . A continuación, la señal de TR-FRET se leyó en un lector de placas Perkin Elmer Envision después de incubar las placas a temperatura ambiente durante 2 horas.
Los pocilios de control de 100% de inhibición positiva se generaron mediante la conmutación del orden de adición de las soluciones de EDTA y ATP descritas anteriormente. Estos pocilios y los pocilios de 0% de inhibición que contenían DMSO al 2.44% al comienzo del ensayo se usaron en el cálculo del % de inhibición de los compuestos de ensayo.
Resultado El compuesto de fórmula (I) inhibió la ASKl con una CI50 de 3.0 nM. Estos datos sugieren que el compuesto de fórmula (I) es un potente inhibidor de ASKl en presencia del ligando competitivo ATP.
En una versión actualizada del ensayo anterior, se examinó la actividad inhibitoria del compuesto de la invención contra ASKl utilizando un ensayo TR-FRET para ASKl, el cual determinó la cantidad de fosfato transferido a un sustrato peptídico desde ATP.
Materiales y métodos Reactivos La quinasa ASKl humana recombinante desfosforilada se obtuvo de Gilead Sciences. La molécula pequeña inhibidora de quinasa estaurosporina (Catálogo # S6942) y ditiotreitol (DTT, Catálogo #43815-5G) se obtuvieron de Sigma Chemicals (St. Louis, MO) . El ATP (catálogo # 7724) se obtuvo de Affymetrix (Santa Clara, CA) y el compuesto de fórmula (I) se obtuvo de Gilead Sciences. El Kit HTRF KinEASE™-STK S3 se obtuvo de Cisbio (Bedford, Mass) . Todos los demás reactivos fueron del mayor grado comercialmente disponible.
Ensayos El ensayo mide el nivel de fosforilación de un sustrato peptidico biotinilado por la quinasa ASK1 usando detección por HTRF (6.1). Este es un inmunoensayo de Transferencia de Energía por Resonancia de Fluorescencia Resuelta en el Tiempo (TR-FRET) , realizado en base al manual de HTRF® KinEASE™-STK de Cisbio (6.1). El compuesto de prueba, sustrato peptidico STK3 ?µ?, y 4 nM de ASK1 quinasa se incubaron durante 30 minutos con tampón MOP 10 mM pH 7.0, que contiene acetato de Mg 10 mM, NP-40 0.025%, DTT 1 mM, BSA 0.05% y glicerol al 1.5%, y luego se añadió ATP 100 µ? para iniciar la reacción de quinasa y se incubó durante 3 h. El anticuerpo peptidico marcado con criptato Eu3+ lx en tampón que contiene EDTA 10 mM y estreptavidina XL665 125 nM se añadió para detener la reacción y el sustrato peptidico fosforilado se detectó usando un lector Envision 2103 Multilabeled de PerkinElmer . La fluorescencia se midió a 615 nm (criptato) y 665 nm (XL665) y se calculó para cada pocilio una proporción de 665 nm /615 nm. El nivel de TR-FRET resultante (una razón de 665 nm/615 nm) es proporcional al nivel de fosforilación. Bajo estas condiciones de ensayo, el grado de fosforilación de sustrato peptidico fue lineal con el tiempo y la concentración de la enzima. El sistema de ensayo produjo resultados consistentes con respecto a Km y las actividades especificas de la enzima. En los experimentos de inhibición (valores de CI50), las actividades se determinaron con concentraciones constantes de ATP, péptido y varias concentraciones fijas de inhibidores. Se utilizó como control positivo la estaurosporina, inhibidor no selectivo de la quinasa. Todos los datos de la actividad de la enzima se informaron como un promedio de determinaciones en cuadruplicado.
Análisis de Datos Los valores de CI50 se calcularon de acuerdo con la siguiente ecuación: y = Rango 1 / {1+ (x / CI50)S} + fondo donde x e y representan respectivamente la concentración de inhibidores y la actividad de la enzima. La actividad enzimática se expresó como la cantidad de fosfato incorporado en el péptido sustrato desde ATP. El rango es el rango máximo en y (sin inhibidor, control DMSO) y s es un factor de pendiente (6.2) .
Resultados El compuesto de fórmula (I) exhibió una CI50 de 3.2 nM bajo estas condiciones de prueba. Los datos demuestran que el compuesto de fórmula (I) es un potente inhibidor del receptor 1 de la ASK-1.
Ensayo (determinación de CE50 celular) de ASK1 (Quinasa 1 Reguladora de la Señal de Apoptosis) basado en células 293 La potencia celular de los compuestos se analizó en células que expresan establemente un constructo de AP-1: reportero de luciferasa (células 293/APl-Luc Panomics Inc., 6519 Dumbarton Circle, Fremont, CA) . Las células fueron infectadas con un adenovirus que expresaba quinasa ASK1 activa (631-1381 de ADNc de ASKlde rata), la que activará el factor de transcripción AP-1 y aumentará la expresión de la luciferasa. Los inhibidores de ASK1 disminuirán la actividad enzimática de ASK1 y por lo tanto disminuirán la actividad del factor de transcripción AP-1 y la expresión de la luciferasa . 1. MATERIALES NECESARIOS PARA ESTE PROTOCOLO 2. MATERIALES DE REFERENCIA Instructivo del producto linea celular estable 293/APl-Luc de Panomics.
Instructivo del producto del Sistema de Ensayo de Luciferasa Steady-Glo de Promega. 3. MEDIOS NECESARIOS Medio de cultivo completo, "CGM" DMEM (MediaTech) FBS al 10% PSG al 1% Higromicina B 100 ug/mL Medio de Ensayo, "AM" DMEM (Invitrogen) HEPES 25 mM Piruvato de Sodio 1 mM PSG 1% . MÉTODOS Mantenimiento : Las células 293 se mantienen en el constructo 293/APl-Luc según las instrucciones del vendedor; las células se cosecharon a una confluencia de -80% en matraces T150 de la siguiente manera: Aspirar el medio, lavar suavemente con ~12 mL de D-PBS estéril, aspirar.
Añadir 5 mi de Tripsina-EDTA, ladear suavemente el frasco para recubrir, e incubar ~5 min a 37 °C.
No golpetear el frasco; añadir 5 mi de CGM, lavar frasco 4X con suspensión celular, transferir a un vial cónico de 50 mL, centrifugar 5 min a 1.200 rpm.
Aspirar el medio desde el pellet de células, añadir de 20 a 30 mi de CGM, resuspender el pellet pipeteando 6X, pasar a través de filtro de células para dispersar los agregados (si es necesario) , y contar las células con un hemocitómetro .
Día 1 de Ensayo: Cosechar las células como se describe anteriormente, excepto que no se resuspende el pellet de células.
Contar las células y diluir hasta 1.5 x 105 células por mL; añadir adenovirus de tal manera que haya 5 unidades infecciosas formadoras por célula.
Cebar las células (20 a 30 mL) y sembrar las células en placas Greiner de 384 pocilios recubiertas con poli-D-lisina a 1.2 1 xl04 células por pocilio usando BioTek uFill (80 L por pocilio) .
Inmediatamente dosificar las placas con 0.4 L de una serie dosis del compuesto (en DMSO al 100%) incubar 24 horas en una incubadora humidificada (37 °C, 5% de C02 ) .
Día 2 de Ensayo: Procesar las placas de proceso (según las instrucciones del fabricante) de la siguiente manera: Colocar las placas en una campana de flujo laminar y exponerlas durante 30 minutos a temperatura ambiente para enfriar .
Retirar 60 i de AM de pocilios de ensayo Añadir 20 µ?, sustrato Firefly Steady-Glo por pocilio, dejar reposar durante 10-20 minutos a temperatura ambiente Cubrir el fondo de las placas de ensayo con cinta de recubrimiento blanca.
Obtener datos con un lector de fluorescencia de placas Los pocilios de control positivo de inhibición del 100% se generaron mediante la infección de células con un adenovirus que expresa ASK1 mutante catalíticamente inactiva con una mutación de lisina a arginina en el residuo 709.
Resultado El compuesto de fórmula (I) exhibe una CE50 de 2.0 nM.
Determinación de Kd Ensayos de Quinasa Se prepararon cepas del fago T7 etiquetadas con quinasa en un hospedero E. coli derivado de la cepa BL21. Las cepas de E. coli se cultivaron hasta la fase de crecimiento logarítmico y se infectaron con fago T7 y se incubaron con agitación a 32 °C hasta que se produjo la lisis. Los lisados se centrifugaron y se filtraron ' para eliminar los residuos celulares. Las restantes quinasas se produjeron en células HEK-293 y posteriormente fueron etiquetadas con ADN para la detección por qPCR. Perlas magnéticas recubiertas con estreptavidina fueron tratadas con ligandos de molécula pequeña biotinilados durante 30 minutos a temperatura ambiente para generar resinas de afinidad para los ensayos de quinasa .
Las perlas con ligandos fueron bloqueadas con un exceso de biotina y se lavaron con tampón de bloqueo (SeaBlock (Pierce) , 1% de albúmina de suero de bovino, 0.05% de Tween 20, DTT (ditiotreitol) 1 mM) para eliminar el ligando no unido y para reducir la unión no especifica. Las reacciones de unión se montaron mediante la combinación de quinasas, perlas de afinidad con ligando, y los compuestos de ensayo en tampón de unión lx (SeaBlock al 20%, PBS 0.17x , Tween 20 al 0.05%, DTT 6 mM) . Todas las reacciones se llevaron a cabo en placas de poliestireno de 96 pocilios en un volumen final de 0.135 mL. Las placas de ensayo se incubaron a temperatura ambiente con agitación durante 1 hora y las perlas de afinidad se lavaron con tampón de lavado (PBS lx, Tween 20 al 0.05%). Luego, las perlas se resuspendieron en tampón de elución (PBS lx, Tween 20 al 0.05%, ligando de afinidad no biotinilado 0.5 µ?) y se incubaron a temperatura ambiente con agitación durante 30 minutos. La concentración de quinasa en los eluatos se midió mediante qPCR.
Las constantes de unión (Kd) se calcularon con una curva de dosis-respuesta estándar usando la ecuación de Hill.
Resultado El compuesto de fórmula (I) exhibió una Kd de 0.24 nM. Estos datos sugieren que el compuesto de fórmula (I) se une potentemente al receptor de ASKl en ausencia de ATP.
Determinación del Porcentaje de Compuesto unido al Plasma Diseño Experimental: En estos experimentos se utilizaron celdas de diálisis de Teflón de 1 mL de Harvard Apparatus (Holliston, Mass, EE.UU.). Antes del estudio, la membrana de diálisis se empapó durante alrededor de una hora en tampón de fosfato 0.133 M, pH 7.4. Una concentración nominal de 2 µ? del compuesto se añadió en 1 mL de plasma o 1 mL de medio de cultivo celular. El volumen total de liquido en cada lado de la célula fue de 1 mL. Después de 3 horas de equilibrio en un baño de agua a 37 °C, las muestras de cada lado de la celda fueron alicuotadas en los viales adecuados que contenían, ya sea, 1 mL de plasma humano (medio de cultivo celular) , o tampón. Los viales de muestra se pesaron y se registraron. Una alícuota de 100 µL se retiró y se añadió a 400 µ?; de una solución de extinción (50% metanol, 25% de acetonitrilo, 25% de agua y el patrón interno) . Las muestras se agitaron con vórtex y se centrifugaron durante 15 minutos a 12,000 G. Se sacaron 200 µ?, del sobrenadante y se colocaron en una nueva placa de 96 pocilios. Se añadió un adicional de 200 µ?_ de ACN : agua 1:1. Luego, la placa se agitó en vórtex y se sometió a análisis por LC-MS. El porcentaje no unido de un analito en plasma se calculó utilizando las siguientes ecuaciones % No unido = 100 (Cf/Ct) donde Cf y Ct son , respectivamente, las concentraciones en plasma y tampón después de diálisis.
Resultados El porcentaje no unido del compuesto de fórmula (I) medido en el plasma humano fue de 11.94% Determinación de la proporción de flujo de salida en células CACO-2 Protocolo Experimental: Las células CACO-2 se mantuvieron en un medio Eagle modificado de Dulbecco (DMEM) con piruvato de sodio, Glutmax suplementado con 1 % penicilina/estreptomicina, 1% de NEAA y suero bovino fetal al 10% en una incubadora a 37°C, 90% de humedad y 5% de C02. Las células CACO-2 entre el pasaje 62 y 72 fueron sembradas a 2,100 células/pocilio y se cultivaron hasta la confluencia durante al menos 21 días en una placa PET (polietileno-tereftalato) de 24 pocilios (BD Biosciences) . El pocilio receptor contenía tampón HBSS (HEPES 10 mM, glucosa 15 mM con pH ajustado a pH 6.5) suplementado con 1% de BSA, el pH se ajustó a pH 7.4. Después de un periodo de equilibrio inicial con tampón de transporte, se leyeron los valores de TEER para comprobar la integridad de membrana. Se añadió los tampones que contenían compuestos de prueba y desde el compartimiento receptor se tomaron 100 L de la solución a las 1 y 2 horas. El tampón removido se sustituyó con tampón fresco y se aplicó una corrección a todos los cálculos para tomar en cuenta el material retirado. El protocolo experimental se llevó a cabo por duplicado. Todas las muestras fueron inmediatamente recolectadas en 400 yL de ácido acetonitrilo al 100% para precipitar la proteína y estabilizar los compuestos de prueba. Las células se dosificaron en el lado apical o basolateral para determinar la permeabilidad directa (de A a B) y reversa (de B a A) . También se determinó la permeabilidad a través de un pocilio libre de células como una medida de la permeabilidad celúlar a través de la membrana sin unión específica. Para determinar la unión no específica y la inestabilidad del compuesto se determina el porcentaje de recuperación. Las muestras se analizaron mediante LC/MS/MS.
La permeabilidad aparente, Pap, y el % de recuperación se calculó de la siguiente manera: Pap = (dR/df) X V(A X D0) Recuperación = 100 ((Vr x Rt,0) - (Vd x D t,e"))/ {Vd D0 en donde, dR/dt es la pendiente de la concentración acumulativa en el compartimento receptor versus el tiempo en µ?/s en base a las concentraciones en el compartimento receptor medidas a los 60 y 120 minutos.
Vr y Vd es, respectivamente, el volumen en el compartimento receptor y el volumen en el compartimento donante en cm3.
A es el área de la monocapa celular (0.33 cm3) .
DO y D120 es, respectivamente, la concentración en el compartimento donante medida al principio y al final del experimento .
R120 es la concentración en el compartimento receptor al final del experimento (120 minutos).
Absorción y Clasificación del Flujo de Salida Resultado Se observó que el compuesto de fórmula (I) tenia un valor de A?B para células CACO de 27; y un valor de B?A para células CACO de 35 lo que da como resultado una proporción de flujo de salida (B?A)/(A-?B) de 1.3.
Determinación de la Estabilidad Metabólica en la Fracción Microsomal Hepática: Protocolo Experimental: La estabilidad metabólica se evaluó utilizando cofactores tanto para el metabolismo oxidativo (NADPH) como para la conjugación (ácido UDP glucurónico (UDPGA) ) . Se añadieron alícuotas por duplicado del compuesto de fórmula (I) (3 de stock de DMSO 0.5 mM) o de estándares de estabilidad metabólica (buspirona) a un stock de microsomas diluido con tampón de fosfato de potasio pH 7.4, para obtener una concentración de proteína de 1.0 mg/mL que contiene alameticina como un agente permeabilizante . Las reacciones metabólicas se iniciaron mediante la adición de sistema de regeneración de NADPH y el cofactor UDPGA. La composición final de cada mezcla de reacción fue: compuesto de prueba a 3 µ?, 1 mg de proteína microsomal/mL, UDPGA 5 mM, 23.4 µg/mL de alameticina, NADP 1.25 mM, glucosa-6-fosfato 3.3 mM , 0.4 U/mL de glucosa-6-fosfato deshidrogenasa y MgC12 3.3 mM en tampón de fosfato de potasio 50 mM pH 7.4. Alícuotas de 25 yL de la mezcla de reacción se transfirieron a placas que contenían 250 \i de IS/Q (solución de extinción que contiene un patrón interno) a los 0, 2, 5, 10, 15, 30, 45 y 60 min. Después de la extinción de la reacción, las placas se centrifugaron a 3,000 x g durante 30 minutos, y alícuotas de 10 \i del sobrenadante fueron analizadas mediante LC/MS para obtener razones de área de pico de analito/patrón interno.
La estabilidad metabólica en las fracciones microsomales se determinó midiendo la velocidad de desaparición del compuesto de fórmula (I) . Los datos (% remanente del compuesto original) se graficaron en una escala semi- logarítmica y se ajustaron usando un ajuste exponencial: Ct=C0-e-K-t y 21 2= ln 2 / K en donde Ct % del compuesto original que queda en el tiempo = t CO % del compuesto original que queda en el tiempo = 0 t tiempo (h) K constante de velocidad de eliminación de primer orden (h-1) TI/2 vida media in vitro (h) El aclaramiento hepático predicho se calculó como sigue { referencia 1 } : CLint = K'V-Yp/P o CLint=ff· V· Yft/H CLh = (CLint -Qh) / ( Lint+Q ) , en donde CLh aclaramiento hepático predicho (L/h/kg de peso corporal) CLint aclaramiento hepático intrínseco (L/h/kg de peso corporal ) V volumen de incubación (L) Yp producción de proteína en los microsomas (mg de proteína/kg de peso corporal) YH producción de hepatocitos (millones de células/kg de peso corporal) P Masa de proteína en la incubación (mg) H Número de hepatocitos en la incubación (millones) Qh Flujo sanguíneo hepático (L/h/kg de peso corporal) A continuación, se calculó la extracción hepática predicha mediante la comparación del aclaramiento hepático predicho con el flujo sanguíneo hepático. Un compuesto se consideró estable si la reducción de la concentración de sustrato fue <10% durante el transcurso de la incubación (lo que corresponde a una vida media extrapolada > 395 min en fracciones microsomales y > 39.5 horas en los hepatocitos ) .
Los valores utilizados para el cálculo del aclaramiento hepático predicho se muestran en las siguientes tablas: TABLA 1. Valores usados para el Cálculo del Aclaramiento Hepático Predicho en el Análisis de Estabilidad en Microsomas Resultado : El aclaramiento hepático predicho en humanos determinado a partir de experimentos in vitro en fracciones microsomales es de 0.1 L/h/kg.
Determinación CL y Vss en rata para los compuestos de prueba Farmacocinética de los Compuestos de Prueba después de una infusión IV de 1 mg/kg y una dosis VO de 5.0 mg/kg en ratas Articulo de prueba y formulación Para la administración IV, el compuesto de prueba se formuló en PEG 400: agua en proporción 60:40 con 1 equivalente de HC1 a 0.5 mg/mL. La formulación se preparó en forma de solución.
Para la administración VO (oral), el compuesto de prueba se formuló en etanol/PG/Solutol/agua en proporción 5/75/10/10 a 2.5 mg/mL. La formulación se preparó en forma de solución. Animales utilizados Cada uno de los grupos de dosificación IV y VO estuvo compuesto de 3 ratas SD macho. Al momento de la dosificación, en general los animales pesaron entre 0.317 y 0.355 kg. Los animales se mantuvieron en ayunas durante la noche anterior a la administración de la dosis y hasta 4 horas después de la dosificación.
Dosificación En el caso del grupo de infusión IV, el compuesto de prueba se administró mediante infusión intravenosa durante 30 minutos. La velocidad de infusión se ajustó de acuerdo con el peso corporal de cada animal para suministrar una dosis de 1 mg/kg a 2 mL/kg. En el caso del grupo de dosificación oral, el articulo de prueba se administró mediante sonda oral a 2 mL/kg para una dosis de 5.0 mg/kg.
Toma de muestras Se tomaron muestras de sangre venosa en serie (alrededor de 0.4 mi cada una) en puntos específicos de tiempo después de la dosificación de cada animal. Las muestras de sangre se recolectaron en tubos Vacutainer™ (Becton-Disckinson Corp, New Jersey, USA) que contenían EDTA como anticoagulante y se colocaron inmediatamente en hielo húmedo en espera de ser centrifugadas para obtener el plasma.
Determinación de las concentraciones del Compuesto de Fórmula (I) en el plasma Se utilizó un método LC/MS/MS para medir la concentración del compuesto de prueba en plasma.
Cálculos Se realizó un análisis farmacocinético no compartimental de los datos de concentración en plasma/tiempo.
Resultados El compuesto de fórmula (I) mostró un CL de 0.09 L/h/kg; una biodisponibilidad oral del 75%; tl/2 de 5.07 horas y un Vss de 0.55 L/kg en ratas.
Ensayo de inhibición de Cyp Obj etivo Evaluar el potencial del compuesto de prueba para inhibir las principales isoformas del citocromo P450, CYP1A, CYP1A2, CYP2B6, CYP2C8, CYP2C9, CYP2C19, CYP2D6 y CYP3A4 (2 sustratos) .
Determinación de CI50 para la inhibición del citocromo P450 (8 isoformas, 9 sustratos) · Resumen del Protocolo El compuesto de prueba (0.1 µ? - 25 µ?) se incuba con microsomas hepáticos humanos y NADPH en presencia de un sustrato de sondeo especifico para una isoforma de citocromo P4b0. Para las reacciones especificas de CYP2B6, CYP2C8 , CYP2C9, CYP2C19, CYP2D6 y CYP3A4 , los metabolitos son monitoreados por espectrometría de masas. La actividad CYP1A se monitorea midiendo la formación de un metabolito fluorescente. Para calcular un valor de CI50 (concentración de compuesto de prueba que produce una inhibición del 50%) se utiliza la disminución en la formación del metabolito en comparación con el control tratado con vehículo.
Requisitos de Ensayo 500 µ?< de una solución de compuesto de prueba 10 mM en DMSO Procedimiento Experimental Inhibición de CYP1A Se incubaron seis concentraciones de compuesto de prueba (0.1; 0.25; 1; 2.5; 10; 25 µ? en DMSO, concentración final de DMSO = 0.3%) con microsomas hepáticos humanos (0.25 mg/mL) y NADPH (1 mM) en presencia del sustrato de sondeo etoxiresorufina (0.5 µ?) durante 5 min a 37°C. Como control positivo se analiza junto con los compuestos de prueba el inhibidor selectivo de CYP1A, la alfa-naftoflavona .
Inhibición de CYP2B6 Se incubaron seis concentraciones de compuesto de prueba (0.1; 0.25; 1; 2.5; 10; 25 µ? en DMSO, concentración final de DMSO = 0.3%) con microsomas hepáticos humanos (0.1 mg/mL) en presencia del sustrato de sondeo bupropión (110 µ?) durante 5 min a 37°C. Como control positivo se analiza junto con los compuestos de prueba el inhibidor selectivo de CYP2B6, la ticlopidina.
Inhibición de CYP2C8 Se incubaron seis concentraciones de compuesto de prueba (0.1; 0.25; 1; 2.5; 10; 25 µ? en DMSO, concentración final de DMSO = 0.3%) con microsomas hepáticos humanos (0.25 mg/mL) y NADPH (1 mM) en presencia del sustrato de sondeo paclitaxel (7.5 µ?) durante 30 min a 37°C. Como control positivo se analiza junto con los compuestos de prueba el inhibidor selectivo de CYP2C8, la ticlopidina.
Inhibición de CYP2C9 Se incubaron seis concentraciones de compuesto de prueba (0.1; 0.25; 1; 2.5; 10; 25 µ? en DMSO, concentración final de DMSO = 0.25%) con microsomas hepáticos humanos (1 mg/mL) y NADPH (1 mM) en presencia del sustrato de sondeo tolbutamida (120 µ?) durante 60 min a 37°C. Como control positivo se analiza junto con los compuestos de prueba el inhibidor selectivo de CYP2C9, el sulfafenazol .
Inhibición de CYP2C19 Se incubaron seis concentraciones de compuesto de prueba (0.1; 0.25; 1; 2.5; 10; 25 µ? en DMSO, concentración final de DMSO = 0.25%) con microsomas hepáticos humanos (0.5 mg/mL) y NADPH (1 mM) en presencia del sustrato de sondeo mefenitoina (25 µ?) durante 60 min a 37°C. Como control positivo se analiza junto con los compuestos de prueba el inhibidor selectivo de CYP2C19, la tranilcipromina .
Inhibición de CYP2D6 Se incubaron seis concentraciones de compuesto de prueba (0.1; 0.25; 1; 2.5; 10; 25 µ? en DMSO, concentración final de DMSO = 0.25%) con microsomas hepáticos humanos (0.5 mg/mL) y NADPH (1 mM) en presencia del sustrato de sondeo dextrometorfano (5 µ?) durante 5 min a 37 °C. Como control positivo se analiza junto con los compuestos de prueba el inhibidor selectivo de CYP2D6, la quinidina.
Inhibición de CYP3A4 (Midazolam) Se incubaron seis concentraciones de compuesto de prueba (0.1; 0.25; 1; 2.5; 10; 25 µ? en DMSO, concentración final de DMSO = 0.26%) con microsomas hepáticos humanos (0.1 mg/mL) y NADPH (1 mM) en presencia del sustrato de sondeo midazolam (2.5 µ?) durante 5 min a 37°C. Como control positivo se analiza junto con los compuestos de prueba el inhibidor selectivo de CYP3A4, el ketoconazol.
Inhibición de CYP3A4 (testosterona) Se incuban seis concentraciones de compuesto de prueba (0.1; 0.25; 1; 2.5; 10; 25 µ en DMSO, concentración final de DMSO = 0.275%) con microsomas hepáticos humanos (0.5 mg/mL) y NADPH (1 mM) en presencia del sustrato de sondeo testosterona (50 µ?) durante 5 min a 37°C. Como control positivo se analiza junto con los compuestos de prueba el inhibidor selectivo de CYP3A4, el ketoconazol.
Para las incubaciones CYP1A, las reacciones se terminaron con metanol, y la formación del metabolito, resorufina, se monitoriza mediante fluorescencia (longitud de onda de excitación = 535 nm, longitud de onda de emisión = 595 nm) . Para las incubaciones de CYP2B6, CYP2C9 , CYP2C19, CYP2D6, CYP3A4, las reacciones se terminaron con metanol. A continuación, las muestras fueron centrifugadas y se combinaron los sobrenadantes para el análisis simultáneo de 4 -hidroxitolbutamida, 4-hidroximefenitoina, dextrorfano, y 1-hidroximidazolam mediante LC-MS/MS. Hidroxibupropión, 6a-hidroxipaclitaxel y 6B-hidroxitestosterona se analizaron mediante LC-MS/MS por separado. Antes del análisis se añadió a la muestra final ácido fórmico en agua desionizada (concentración final = 0.1%), el que contenia un patrón interno. Para calcular un valor de CI50 (concentración de compuesto de prueba que produce una inhibición del 50%) se utiliza la disminución en la formación de los metabolitos en comparación con el control tratado con vehículo.
Resultados Diseño general del estudio de fibrosis renal mediante modelo de obstrucción ureteral unilateral (OUU) en ratas .
Se alimentaron ratas Sprague-Dawley macho con pienso normal, se las alojó bajo condiciones estándar, y se dejaron aclimatar durante al menos 7 días antes de la cirugía. Al comienzo del estudio, las ratas se colocaron en grupos de acuerdo a su peso, y se les administró vehículo a través de sonda oral (2 mL/kg VO b.i.d.), y uno de cuatro niveles de dosis de los compuestos (1, 3, 10 ó 30 mg/kg) . Las ratas se anestesiaron con isoflurano a través de un cono nasal, y luego se realizó una laparotomía. A las ratas se les realizó una obstrucción completa del uréter derecho (OUU) usando instrumentos esterilizados por calor y una técnica quirúrgica aséptica. A las ratas se les administró 50 \i de penicilina G (i.m.) inmediatamente después de la operación. Se dejó que las ratas se recuperaran en una jaula limpia y temperada antes de ser devueltas a las condiciones normales del terrario. A las ratas se les administró compuestos a las dosis anteriormente descritas dos veces al día (a intervalos de 12 horas) durante los 7 días posteriores. En el día 7 después de la cirugía, las ratas se anestesiaron con isoflurano y se recolectó suero, plasma, y orina. Luego, los animales fueron sacrificados, se recolectaron los ríñones y se tomaron biopsias de la corteza renal para análisis morfológicos, histológicos y bioquímicos. Todos los tejidos destinados a análisis bioquímico fueron congelados d manera instantánea en nitrógeno liquido y se almacenan a -80°C, los tejidos destinados a análisis histológico se fijaron en formalina tamponada neutra al 10%.
La fibrosis renal se evaluó midiendo la cantidad de colágeno IV en el riñon mediante un método de ELISA y mediante el estudio de la acumulación de miofibroblastos positivos para alfa-actina de músculo liso en el riñon mediante análisis inmunohistoquimico . Para realizar el primer estudio, se transfirió un pequeño pedazo de la corteza renal congelada homogenizado en RIPA buffer, luego se centrifugó a 14.000 x g durante 10 minutos a 4°C. El sobrenadante se recolectó en tubos pre-enfriados y se determinó la concentración de proteínas. Una cantidad equivalente dé proteína total se sometió a un ensayo de ELISA Col IV (de Exocell) de acuerdo con las instrucciones del fabricante.
Tejido renal fijado en formalina y embebido en parafina fue teñido con una alfa-actina de músculo liso, como se describe anteriormente (Stambe et al., The Role of p38 Mitogen-Activated Protein Kinase Activation in Renal Fibrosis J Am Soc Nephrol 15: 370-379, 2004) .
Resultados : Se encontró que el compuesto de fórmula (I) redujo significativamente la inducción de Colágeno IV en el riñon de (Figura 1) y la acumulación de miofibroblastos musculares positivos para alfa-actina de músculo liso (figura 2) a dosis de 3 a 30 mg/kg.
Datos Comparativos del Compuesto de Fórmula (I) y los Compuestos de Referencia La siguiente tabla proporciona los resultados comparativos del compuesto de fórmula (I) y los compuestos de referencia A y B divulgados en la Publicación de Patente de EE.UU. N ° 2001/00095410A1, publicada el 13 de enero de 2011. Los solicitantes hacen notar gue los experimentos cuyos resultados se comparan a continuación se realizaron en condiciones similares, pero no necesariamente de forma simultánea . () los valores entre paréntesis representan el número de veces que el compuesto de fórmula (I) muestra una. mejora sobre el compuesto indicado para el parámetro indicado.
De los datos comparativos anteriores, se puede deducir lo siguiente: El compuesto de fórmula (I) tiene una CE50 que es comparable a la del Compuesto A.
El compuesto de fórmula (I) tiene una CI50 funcional que es comparable a las CI50 de los compuestos A y B.
El compuesto de fórmula (I) tiene una CE50 ajustada en función de la unión a proteínas que es 4 veces menor que la del compuesto A y 33 veces menor que la del compuesto B.
El compuesto de fórmula (I) es un inhibidor de CYP3 A4 más débil en comparación con compuestos A y B.
El compuesto de Fórmula (I) tiene un valor de CI50 para CYP3A4/ CE50- ajUP que es 43 veces más alto que el del compuesto de fórmula A, y 92 veces mayor que el del compuesto de fórmula B.
El compuesto de fórmula (I) tiene un valor de CL de rata que es 2.7 veces menor que el del compuesto de fórmula A, y 3.6 veces menor que el del compuesto de fórmula B.
El compuesto de fórmula (I) tiene un porcentaje de biodisponibilidad en ratas que es 6.8 veces mayor que el del compuesto A y 1.5 veces mayor que el del compuesto B.
El compuesto de fórmula (I) tiene una vida media en ratas que es 8.6 veces más larga que la del compuesto A y 3.9 veces más larga que la del compuesto B.
Los datos anteriores sugieren claramente que el compuesto de fórmula (I) tiene propiedades inesperadas y ventajosas en comparación con los compuestos de fórmula A y B; y que el compuesto de fórmula (I) es un mejor candidato para ser sometido a mayor desarrollo en el tratamiento de la enfermedad crónica del riñon, fibrosis pulmonar y/o renal, y/o enfermedades cardiorenales.

Claims (12)

  1. NOVEDAD DE LA INVENCIÓN Habiendo descrito la presente invención, se considera como novedad, y por lo tanto se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes: REIVINDICACIONES Un compuesto de fórmula (I) a saber, 5- (4-ciclopropil-lH-midazol-l-il ) -N- ( 6- ( 4-isopropil-4H-l, 2,4-triazol-3-il) piridin-2-il ) -2-fluoro-4-metilbenzamida, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo .
  2. 2. El compuesto de fórmula (I) (I) a saber, 5- ( ( 4-ciclopropil-lH-imdazol-l-il ) -2-fluoro-N- (6- (4-isopropil-4H-l, 2, 4-triazol-3-il ) piridina-2-il ) -4-metilbenzamida .
  3. 3. Una composición farmacéutica que comprende una cantidad terapéuticamente efectiva del compuesto o sal de acuerdo con la reivindicación 1 y un portador farmacéuticamente aceptable
  4. 4. Una composición farmacéutica que comprende una cantidad terapéuticamente efectiva del compuesto de acuerdo con la reivindicación 2 y un portador farmacéuticamente aceptable .
  5. 5. Un método para tratar una enfermedad renal crónica que comprende la administración de una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto de acuerdo con la reivindicación 2, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, a un paciente en necesidad del mismo.
  6. 6. Un método para tratar la nefropatia diabética que comprende administrar una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto de acuerdo con la reivindicación 2 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, a un paciente en necesidad del mismo.
  7. 7. Un método para tratar fibrosis renal, fibrosis hepática o fibrosis pulmonar que comprende administrar una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto o sal de acuerdo con la reivindicación 1, a un paciente en necesidad del mismo.
  8. 8. Un método para tratar una enfermedad renal diabética, que comprende administrar una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto o sal de acuerdo con la reivindicación 1, a un paciente en necesidad del mismo.
  9. 9. Uso de un compuesto o sal de acuerdo con la reivindicación 1 para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de una enfermedad renal crónica.
  10. 10. Uso de un compuesto o sal de acuerdo con la reivindicación 1 para terapia.
  11. 11. Un compuesto intermedio de fórmula: a saber, 2-amino, 5- (4-isopropil-4H-l, 2, 4-triazol-3-il) piridina, o una sal o una forma protegida del mismo.
  12. 12. Un compuesto intermedio de fórmula: a saber, ácido 5- ( -ciclopropil-lH-imidazol-l-il ) -2-fluoro-metilbenzoico, una sal o una forma protegida del mismo.
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Families Citing this family (138)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
TWI625121B (zh) 2009-07-13 2018-06-01 基利科學股份有限公司 調節細胞凋亡信號之激酶的抑制劑
WO2012080735A1 (en) 2010-12-16 2012-06-21 Convergence Pharmaceuticals Limited Ask1 inhibiting pyrrolopyrimidine derivatives
UY34573A (es) 2012-01-27 2013-06-28 Gilead Sciences Inc Inhibidor de la quinasa que regula la señal de la apoptosis
US20150148345A1 (en) 2013-11-26 2015-05-28 Gilead Sciences, Inc. Therapies for treating myeloproliferative disorders
WO2015109286A1 (en) 2014-01-20 2015-07-23 Gilead Sciences, Inc. Therapies for treating cancers
US20150342943A1 (en) * 2014-06-03 2015-12-03 Gilead Sciences, Inc. Methods of treating liver disease
TW201618781A (zh) * 2014-08-13 2016-06-01 吉李德科學股份有限公司 治療肺高血壓之方法
KR20170049605A (ko) 2014-09-24 2017-05-10 길리애드 사이언시즈, 인코포레이티드 간 질환의 치료 방법
MA41252A (fr) * 2014-12-23 2017-10-31 Gilead Sciences Inc Formes solides d'un inhibiteur d'ask 1
ES2959007T3 (es) * 2014-12-23 2024-02-19 Gilead Sciences Inc Procedimientos para preparar inhibidores de ask1
TW201639573A (zh) 2015-02-03 2016-11-16 吉李德科學股份有限公司 有關治療癌症之合併治療
EP3097102B1 (en) 2015-03-04 2017-10-18 Gilead Sciences, Inc. Toll-like receptor modulating 4,6-diamino-pyrido[3,2-d]pyrimidine compounds
PE20180462A1 (es) 2015-07-06 2018-03-06 Gilead Sciences Inc Moduladores cot y metodos de uso de los mismos
WO2017059224A2 (en) 2015-10-01 2017-04-06 Gilead Sciences, Inc. Combination of a btk inhibitor and a checkpoint inhibitor for treating cancers
AU2016370916A1 (en) 2015-12-17 2018-06-07 Gilead Sciences, Inc. Tank-binding kinase inhibitor compounds
AU2017228371A1 (en) 2016-03-04 2018-09-13 Gilead Sciences, Inc. Compositions and combinations of autotaxin inhibitors
WO2017177179A1 (en) 2016-04-08 2017-10-12 Gilead Sciences, Inc. Compositions and methods for treating cancer, inflammatory diseases and autoimmune diseases
CN113773387B (zh) 2016-06-13 2024-06-21 天境生物科技(上海)有限公司 Pd-l1抗体及其用途
EP3493797A1 (en) 2016-08-04 2019-06-12 Gilead Sciences, Inc. Cobicistat for use in cancer treatments
EP3507276B1 (en) 2016-09-02 2021-11-03 Gilead Sciences, Inc. Toll like receptor modulator compounds
US10640499B2 (en) 2016-09-02 2020-05-05 Gilead Sciences, Inc. Toll like receptor modulator compounds
WO2018085069A1 (en) 2016-11-03 2018-05-11 Gilead Sciences, Inc. Combination of a bcl-2 inhibitor and a bromodomain inhibitor for treating cancer
US20180133203A1 (en) 2016-11-11 2018-05-17 Gilead Sciences, Inc. Methods of treating liver disease
WO2018097977A1 (en) 2016-11-22 2018-05-31 Gilead Sciences, Inc. Crystalline forms of a phosphate complex of a bet inhibitor
AR110252A1 (es) 2016-11-30 2019-03-13 Gilead Sciences Inc Compuestos heterocíclicos fusionados como inhibidores de la quinasa cam
DK3572412T3 (da) * 2017-01-22 2021-05-25 Fujian Cosunter Pharmaceutical Co Ltd Pyridinderivat som ask1-inhibitor og fremgangsmåde til fremstilling samt anvendelse deraf
JP6754505B2 (ja) * 2017-01-22 2020-09-09 福建広生堂薬業股▲ふん▼有限公司 Ａｓｋ１阻害剤、その調製方法および使用
PE20191208A1 (es) 2017-01-24 2019-09-10 I Mab Anticuerpos anti-cd73 y usos de los mismos
WO2018156901A1 (en) 2017-02-24 2018-08-30 Gilead Sciences, Inc. Inhibitors of bruton's tyrosine kinase
US10370381B2 (en) 2017-02-24 2019-08-06 Gilead Sciences, Inc. Inhibitors of bruton'S tyrosine kinase
WO2018157277A1 (en) 2017-02-28 2018-09-07 Eli Lilly And Company Isoquinolin and naphthydrin compounds
TW201833108A (zh) * 2017-03-03 2018-09-16 大陸商江蘇豪森藥業集團有限公司 醯胺類衍生物抑制劑及其製備方法和應用
JOP20180017A1 (ar) 2017-03-14 2019-01-30 Gilead Sciences Inc مثبط كيناز منظم لإشارة تلاشي خلايا
CN110475556A (zh) 2017-03-28 2019-11-19 吉利德科学公司 治疗肝疾病的方法
EP3609496A1 (en) 2017-04-12 2020-02-19 Gilead Sciences, Inc. Methods of treating liver disease
JOP20180040A1 (ar) 2017-04-20 2019-01-30 Gilead Sciences Inc مثبطات pd-1/pd-l1
IL270525B2 (en) 2017-05-12 2024-06-01 Enanta Pharm Inc Apoptosis signal-regulated kinase 1 inhibitors and methods of using them
WO2018218051A1 (en) * 2017-05-25 2018-11-29 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Apoptosis signal-regulating kinase 1 inhibitors and methods of use thereof
US10246439B2 (en) 2017-05-25 2019-04-02 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Apoptosis signal-regulating kinase 1 inhibitors and methods of use thereof
US10253018B2 (en) 2017-05-25 2019-04-09 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Apoptosis signal-regulating kinase 1 inhibitors and methods of use thereof
US10495648B2 (en) 2017-06-13 2019-12-03 Gilead Sciences, Inc. Methods of treating liver fibrosis
WO2019015559A1 (zh) * 2017-07-18 2019-01-24 南京圣和药业股份有限公司 作为ask抑制剂的杂环化合物及其应用
US10597382B2 (en) 2017-08-28 2020-03-24 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Tetrazole containing apoptosis signal-regulating kinase 1 inhibitors and methods of use thereof
CN109456308B (zh) * 2017-09-06 2022-11-29 南京圣和药业股份有限公司 作为ask抑制剂的杂环化合物及其应用
WO2019047094A1 (en) * 2017-09-07 2019-03-14 Eli Lilly And Company CYCLOBUTYL-IMIDAZOLIDINONE COMPOUNDS
US10370352B2 (en) 2017-09-07 2019-08-06 Eli Lilly And Company Cyclobutyl-imidazolidinone compounds
CN111315380A (zh) 2017-09-08 2020-06-19 弗朗塞拉美国制药有限责任公司 凋亡信号调节激酶抑制剂及其用途
WO2019047161A1 (en) 2017-09-08 2019-03-14 Eli Lilly And Company IMIDAZOLIDINE COMPOUNDS
CN111518080A (zh) * 2017-10-12 2020-08-11 深圳市塔吉瑞生物医药有限公司 一种1,2,4-三氮唑类化合物
CN107793400B (zh) * 2017-10-31 2020-01-31 武汉九州钰民医药科技有限公司 吡啶类化合物及其在制备治疗肝脏疾病的药物中的应用
WO2019094777A1 (en) 2017-11-13 2019-05-16 Gilead Sciences, Inc. Compositions and methods for identifying and treating liver diseases and monitoring treatment outcomes
US11203610B2 (en) 2017-12-20 2021-12-21 Institute Of Organic Chemistry And Biochemistry Ascr, V.V.I. 2′3′ cyclic dinucleotides with phosphonate bond activating the sting adaptor protein
JP7037667B2 (ja) 2017-12-20 2022-03-16 インスティチュート オブ オーガニック ケミストリー アンド バイオケミストリー エーエスシーアール，ヴイ．ヴイ．アイ． Ｓｔｉｎｇアダプタータンパク質を活性化するホスホン酸結合を有する３’３’環状ジヌクレオチド
US11434249B1 (en) 2018-01-02 2022-09-06 Seal Rock Therapeutics, Inc. ASK1 inhibitor compounds and uses thereof
CR20200347A (es) 2018-02-13 2020-09-23 Gilead Sciences Inc Inhibidores pd-1/pd-l1
CN110294742B (zh) * 2018-03-21 2023-01-31 山东轩竹医药科技有限公司 并环类ask1抑制剂及其应用
TW202005654A (zh) 2018-04-06 2020-02-01 捷克科學院有機化學與生物化學研究所 ２，２，─環二核苷酸
TWI818007B (zh) 2018-04-06 2023-10-11 捷克科學院有機化學與生物化學研究所 2'3'-環二核苷酸
TWI833744B (zh) 2018-04-06 2024-03-01 捷克科學院有機化學與生物化學研究所 3'3'-環二核苷酸
US10919911B2 (en) 2018-04-12 2021-02-16 Terns, Inc. Tricyclic ASK1 inhibitors
CN112041311B (zh) 2018-04-19 2023-10-03 吉利德科学公司 Pd-1/pd-l1抑制剂
CN110407806B (zh) * 2018-04-28 2021-08-17 深圳微芯生物科技股份有限公司 甲酰胺类化合物、其制备方法及其应用
KR20210005195A (ko) 2018-05-02 2021-01-13 이난타 파마슈티칼스, 인코포레이티드 아폽토시스 신호 조절 키나제 1 억제제를 포함하는 테트라졸 및 이의 사용 방법
US10683289B2 (en) 2018-05-02 2020-06-16 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Apoptosis signal-regulating kinase 1 inhibitors and methods of use thereof
WO2019211799A1 (en) 2018-05-03 2019-11-07 Institute Of Organic Chemistry And Biochemistry Ascr, V.V.I. 2'3'-cyclic dinucleotide analogue comprising a cyclopentanyl modified nucleotide
JP2021523151A (ja) 2018-05-11 2021-09-02 ホスホレックス、インコーポレイテッド 負の表面電荷を有するマイクロ粒子及びナノ粒子
CN112118845B (zh) 2018-05-14 2023-06-13 吉利德科学公司 Mcl-1抑制剂
US10654833B2 (en) 2018-06-28 2020-05-19 Hepatikos Therapeutics, Llc ASK1 isoindolin-1-one inhibitors and methods of use thereof
KR20230159715A (ko) 2018-07-13 2023-11-21 길리애드 사이언시즈, 인코포레이티드 Pd-1/pd-l1 억제제
JP7096460B2 (ja) * 2018-07-20 2022-07-06 福建▲広▼生中霖生物科技有限公司 Ａｓｋ１阻害剤としての結晶形、その製造方法及び利用
US10968199B2 (en) 2018-08-22 2021-04-06 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Cycloalkyl-containing apoptosis signal-regulating kinase 1 inhibitors and methods of use thereof
US11179397B2 (en) 2018-10-03 2021-11-23 Gilead Sciences, Inc. Imidazopyrimidine derivatives
KR102298546B1 (ko) * 2018-10-18 2021-09-08 에이치케이이노엔 주식회사 신규한 n-(이소프로필-트리아졸릴)피리디닐)-헤테로아릴-카르복사미드 유도체 및 이의 용도
AU2019366355B2 (en) 2018-10-24 2022-10-13 Gilead Sciences, Inc. PD-1/PD-L1 inhibitors
US11071730B2 (en) 2018-10-31 2021-07-27 Gilead Sciences, Inc. Substituted 6-azabenzimidazole compounds
LT3873903T (lt) 2018-10-31 2024-05-10 Gilead Sciences, Inc. Pakeistieji 6-azabenzimidazolo junginiai, kaip hpk1 inhibitoriai
CN111170995A (zh) * 2018-11-09 2020-05-19 山东轩竹医药科技有限公司 Ask1抑制剂及其应用
US11345699B2 (en) 2018-11-19 2022-05-31 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Apoptosis signal-regulating kinase 1 inhibitors and methods of use thereof
CN109608441A (zh) * 2018-12-26 2019-04-12 都创(上海)医药科技有限公司 一种ask1抑制剂的合成工艺
AU2020209564B2 (en) 2019-01-15 2022-12-01 Gilead Sciences, Inc. FXR (NR1H4) modulating compounds
CN109813915A (zh) * 2019-02-15 2019-05-28 浠思（上海）生物技术有限公司 利用htrf一步法筛选激酶抑制剂的方法
JP2022519906A (ja) 2019-02-19 2022-03-25 ギリアード サイエンシーズ， インコーポレイテッド Ｆｘｒアゴニストの固体形態
US11766447B2 (en) 2019-03-07 2023-09-26 Institute Of Organic Chemistry And Biochemistry Ascr, V.V.I. 3′3′-cyclic dinucleotide analogue comprising a cyclopentanyl modified nucleotide as sting modulator
WO2020178769A1 (en) 2019-03-07 2020-09-10 Institute Of Organic Chemistry And Biochemistry Ascr, V.V.I. 2'3'-cyclic dinucleotides and prodrugs thereof
AU2020231115A1 (en) 2019-03-07 2021-08-26 Institute Of Organic Chemistry And Biochemistry Ascr, V.V.I. 3'3'-cyclic dinucleotides and prodrugs thereof
JP2022524398A (ja) 2019-03-11 2022-05-02 ギリアード サイエンシーズ， インコーポレイテッド 化合物の製剤およびそれらの使用
WO2020198214A1 (en) 2019-03-25 2020-10-01 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Apoptosis signal-regulating kinase 1 inhibitors and methods of use thereof
TWI751516B (zh) 2019-04-17 2022-01-01 美商基利科學股份有限公司 類鐸受體調節劑之固體形式
TWI751517B (zh) 2019-04-17 2022-01-01 美商基利科學股份有限公司 類鐸受體調節劑之固體形式
EP3972695A1 (en) 2019-05-23 2022-03-30 Gilead Sciences, Inc. Substituted exo-methylene-oxindoles which are hpk1/map4k1 inhibitors
TWI770527B (zh) 2019-06-14 2022-07-11 美商基利科學股份有限公司 Cot 調節劑及其使用方法
CA3140708A1 (en) 2019-06-18 2020-12-24 Helen Horton Combination of hepatitis b virus (hbv) vaccines and pyridopyrimidine derivatives
CR20210687A (es) 2019-06-25 2022-03-03 Gilead Sciences Inc PROTEÍNAS DE FUSIÓN FLT3L-Fc Y MÉTODOS DE USO
US20220332700A1 (en) * 2019-06-26 2022-10-20 Mankind Pharma Ltd Novel apoptosis signal-regulating kinase 1 inhibitors
AR119594A1 (es) 2019-08-09 2021-12-29 Gilead Sciences Inc Derivados de tienopirimidina como inhibidores acc y usos de los mismos
TW202124450A (zh) 2019-10-18 2021-07-01 美商四十七股份有限公司 用於治療骨髓發育不良症候群及急性骨髓白血病之組合療法
JP2022552748A (ja) 2019-10-31 2022-12-19 フォーティ セブン， インコーポレイテッド 抗ｃｄ４７及び抗ｃｄ２０による血液癌の治療
TWI778443B (zh) 2019-11-12 2022-09-21 美商基利科學股份有限公司 Mcl1抑制劑
KR20220101137A (ko) 2019-11-15 2022-07-19 길리애드 사이언시즈, 인코포레이티드 Lpa 수용체 길항제로서의 트라이아졸 카르바메이트 피리딜 설폰아미드 및 이의 용도
CN111018831B (zh) * 2019-11-21 2022-05-31 中国药科大学 细胞凋亡信号调节激酶抑制剂及其应用
US20230105984A1 (en) 2019-12-23 2023-04-06 Svetlana Marukian Compositions and methods for the treatment of liver diseases and disorders
WO2021130638A1 (en) 2019-12-24 2021-07-01 Carna Biosciences, Inc. Diacylglycerol kinase modulating compounds
WO2021163064A2 (en) 2020-02-14 2021-08-19 Jounce Therapeutics, Inc. Antibodies and fusion proteins that bind to ccr8 and uses thereof
CN115397511A (zh) 2020-03-30 2022-11-25 吉利德科学公司 Cot抑制剂化合物(s)-6-(((1-(双环[1.1.1]戊-1-基)-1h-1,2,3-三唑-4-基)2-甲基-1-氧代-1,2-二氢异喹啉-5-基)甲基)))氨基8-氯-(新戊基氨基)喹啉-3-甲腈的固体形式
EP4126862A1 (en) 2020-04-02 2023-02-08 Gilead Sciences, Inc. Process for preparing a cot inhibitor compound
KR20230006891A (ko) 2020-05-01 2023-01-11 길리애드 사이언시즈, 인코포레이티드 Cd73를 억제하는 2,4-다이옥소피리미딘 화합물
CN115867556A (zh) 2020-06-03 2023-03-28 吉利德科学公司 Lpa受体拮抗剂及其用途
CN111808079A (zh) * 2020-08-05 2020-10-23 中国药科大学 吲哚类ask1小分子抑制剂及其制备方法和应用
CN114470217B (zh) * 2020-11-24 2023-06-20 深圳微芯生物科技股份有限公司 预防和治疗代谢异常或炎症引起的组织损伤的药物组合物
US20220298148A1 (en) 2021-03-11 2022-09-22 Gilead Sciences, Inc. Glp-1r modulating compounds
CA3214961A1 (en) 2021-03-29 2022-10-06 Gilead Sciences, Inc. Khk inhibitors
TW202302145A (zh) 2021-04-14 2023-01-16 美商基利科學股份有限公司 ＣＤ４７／ＳＩＲＰα結合及ＮＥＤＤ８活化酶Ｅ１調節次單元之共抑制以用於治療癌症
CN114246866B (zh) * 2021-04-28 2023-09-12 深圳微芯生物科技股份有限公司 用于治疗慢性肾病的药物及其用途
EP4337641A1 (en) 2021-05-11 2024-03-20 Gilead Sciences, Inc. Lpa receptor antagonists and uses thereof
EP4337654A1 (en) 2021-05-13 2024-03-20 Gilead Sciences, Inc. Lpa receptor antagonists and uses thereof
US20220389394A1 (en) 2021-05-18 2022-12-08 Gilead Sciences, Inc. METHODS OF USING FLT3L-Fc FUSION PROTEINS
TW202304435A (zh) 2021-06-04 2023-02-01 美商基利科學股份有限公司 治療ｎａｓｈ之方法
TW202311256A (zh) 2021-06-18 2023-03-16 美商基利科學股份有限公司 用於治療ｆｘｒ誘發之搔癢之ｉｌ－３１調節劑
CA3222439A1 (en) 2021-06-23 2022-12-29 Gilead Sciences, Inc. Diacylglyercol kinase modulating compounds
CA3222277A1 (en) 2021-06-23 2022-12-29 Gilead Sciences, Inc. Diacylglyercol kinase modulating compounds
EP4359389A1 (en) 2021-06-23 2024-05-01 Gilead Sciences, Inc. Diacylglyercol kinase modulating compounds
KR20240005901A (ko) 2021-06-23 2024-01-12 길리애드 사이언시즈, 인코포레이티드 디아실글리세롤 키나제 조절 화합물
CA3234909A1 (en) 2021-10-28 2023-05-04 Gilead Sciences, Inc. Pyridizin-3(2h)-one derivatives
WO2023077030A1 (en) 2021-10-29 2023-05-04 Gilead Sciences, Inc. Cd73 compounds
WO2023107954A1 (en) 2021-12-08 2023-06-15 Dragonfly Therapeutics, Inc. Antibodies targeting 5t4 and uses thereof
WO2023107938A1 (en) 2021-12-08 2023-06-15 Gilead Sciences, Inc. Lpa receptor antagonists and uses thereof
WO2023107956A1 (en) 2021-12-08 2023-06-15 Dragonfly Therapeutics, Inc. Proteins binding nkg2d, cd16 and 5t4
US20230242508A1 (en) 2021-12-22 2023-08-03 Gilead Sciences, Inc. Ikaros zinc finger family degraders and uses thereof
US20240124412A1 (en) 2021-12-22 2024-04-18 Gilead Sciences, Inc. Ikaros zinc finger family degraders and uses thereof
TW202340168A (zh) 2022-01-28 2023-10-16 美商基利科學股份有限公司 Ｐａｒｐ７抑制劑
US20230373950A1 (en) 2022-03-17 2023-11-23 Gilead Sciences, Inc. Ikaros zinc finger family degraders and uses thereof
WO2023183817A1 (en) 2022-03-24 2023-09-28 Gilead Sciences, Inc. Combination therapy for treating trop-2 expressing cancers
TW202345901A (zh) 2022-04-05 2023-12-01 美商基利科學股份有限公司 用於治療結腸直腸癌之組合療法
US20230374036A1 (en) 2022-04-21 2023-11-23 Gilead Sciences, Inc. Kras g12d modulating compounds
WO2024006929A1 (en) 2022-07-01 2024-01-04 Gilead Sciences, Inc. Cd73 compounds
WO2024064668A1 (en) 2022-09-21 2024-03-28 Gilead Sciences, Inc. FOCAL IONIZING RADIATION AND CD47/SIRPα DISRUPTION ANTICANCER COMBINATION THERAPY
WO2024137852A1 (en) 2022-12-22 2024-06-27 Gilead Sciences, Inc. Prmt5 inhibitors and uses thereof
CN115844887B (zh) * 2022-12-28 2023-09-08 中国人民解放军空军军医大学 Selonsertib在制备治疗癌症的药物中的用途

Family Cites Families (37)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6159731A (en) 1997-02-12 2000-12-12 Massachusetts Institute Of Technology Daxx, a Fas-binding protein that activates JNK and apoptosis
ATE402995T1 (de) 1999-03-19 2008-08-15 Aventis Pharma Inc Akt-3 nukleinsäure, polypeptide und deren verwendung
US6881555B2 (en) 1999-03-19 2005-04-19 Aventis Pharmaceuticals Inc. AKT nucleic acids, polypeptides, and uses thereof
AU2001275330A1 (en) * 2000-06-07 2001-12-17 Marc D. Andelman Fluid and electrical connected flow-through electrochemical cells, system and method
US20070237770A1 (en) 2001-11-30 2007-10-11 Albert Lai Novel compositions and methods in cancer
WO2005009470A1 (ja) 2003-07-28 2005-02-03 Osaka Industrial Promotion Organization Ａｓｋ１阻害剤を有効成分とする心不全治療薬およびそのスクリーニング方法
JP2008514635A (ja) 2004-09-27 2008-05-08 コーザン バイオサイエンシス インコーポレイテッド 特異的キナーゼ阻害剤
JP2008519850A (ja) 2004-11-10 2008-06-12 シンタ ファーマシューティカルズ コーポレーション Ｉｌ−１２調節化合物
EP1677113A1 (en) 2004-12-29 2006-07-05 Max-Delbrück-Centrum für Molekulare Medizin (MDC) Method for the identification of protein-protein interactions in disease related protein networks
US20070276050A1 (en) * 2006-02-27 2007-11-29 Gilead Sciences, Inc. Methods for identifying ASK1 inhibitors useful for preventing and/or treating cardiovascular diseases
EP2058309A4 (en) 2006-08-04 2010-12-22 Takeda Pharmaceutical CONDENSED HETEROCYCLIC COMPOUND
WO2008042867A2 (en) 2006-09-29 2008-04-10 Emiliem Inc. Modulators of multiple kinases
EP2104734A2 (en) 2006-12-08 2009-09-30 Asuragen, INC. Mir-20 regulated genes and pathways as targets for therapeutic intervention
EP1942104A1 (en) 2006-12-20 2008-07-09 sanofi-aventis Heteroarylcyclopropanecarboxamides and their use as pharmaceuticals
US8104727B2 (en) 2007-03-12 2012-01-31 Denis Joanisse Adjustable article support
US20090069288A1 (en) 2007-07-16 2009-03-12 Breinlinger Eric C Novel therapeutic compounds
CA2691448A1 (en) 2007-08-31 2009-03-05 Dominique Swinnen Triazolopyridine compounds and their use as ask inhibitors
WO2009123986A1 (en) 2008-03-31 2009-10-08 Takeda Pharmaceutical Company Limited Apoptosis signal-regulating kinase 1 inhibitors
US8178555B2 (en) 2008-06-24 2012-05-15 Takeda Pharmaceutical Company Limited Apoptosis signal-regulating kinase 1 inhibitors
WO2010045470A2 (en) 2008-10-15 2010-04-22 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Compositions, kits, and methods for identification, assessment, prevention, and therapy of hepatic disorders
US20110294693A1 (en) 2008-11-17 2011-12-01 The George Washington University Compositions and Methods for Identifying Autism Spectrum Disorders
WO2010111464A1 (en) 2009-03-27 2010-09-30 Merck Sharp & Dohme Corp. RNA INTERFERENCE MEDIATED INHIBITION OF APOPTOSIS SIGNAL-REGULATING KINASE 1 (ASK1) GENE EXPRESSION USING SHORT INTERFERING NUCLEIC ACID (siNA)
TWI625121B (zh) 2009-07-13 2018-06-01 基利科學股份有限公司 調節細胞凋亡信號之激酶的抑制劑
WO2011041293A1 (en) 2009-09-30 2011-04-07 Takeda Pharmaceutical Company Limited Pyrazolo [1, 5-a] pyrimidine derivatives as apoptosis signal-regulating kinase 1 inhibitors
SI2531501T1 (sl) 2010-02-03 2014-04-30 Takeda Pharmaceutical Company Limited Inhibitorji kinaze-1, ki regulirajo signal apoptoze
US9260417B2 (en) 2010-02-08 2016-02-16 Amitech Therapeutic Solutions, Inc. Therapeutic methods and compositions involving allosteric kinase inhibition
RU2018100142A (ru) 2010-03-24 2019-02-20 Амитек Терапетикс Солюшинс, Инк. Гетероциклические соединения, эффективные для ингибирования киназы
PL2588475T3 (pl) * 2010-07-02 2015-10-30 Gilead Sciences Inc Inhibitory kinazy regulującej sygnał apoptozy
WO2012068464A2 (en) 2010-11-18 2012-05-24 University Of Delaware Methods of treating and preventing thrombotic diseases using ask1 inhibitors
WO2012080735A1 (en) 2010-12-16 2012-06-21 Convergence Pharmaceuticals Limited Ask1 inhibiting pyrrolopyrimidine derivatives
US20140141986A1 (en) 2011-02-22 2014-05-22 David Spetzler Circulating biomarkers
AU2012267884A1 (en) 2011-06-07 2014-01-23 Caris Life Sciences Switzerland Holdings Gmbh Circulating biomarkers for cancer
TWI549944B (zh) 2011-07-01 2016-09-21 吉李德科學股份有限公司 作為離子通道調節劑之稠合雜環化合物
US8924765B2 (en) 2011-07-03 2014-12-30 Ambiq Micro, Inc. Method and apparatus for low jitter distributed clock calibration
UY34573A (es) 2012-01-27 2013-06-28 Gilead Sciences Inc Inhibidor de la quinasa que regula la señal de la apoptosis
MA41252A (fr) 2014-12-23 2017-10-31 Gilead Sciences Inc Formes solides d'un inhibiteur d'ask 1
ES2959007T3 (es) 2014-12-23 2024-02-19 Gilead Sciences Inc Procedimientos para preparar inhibidores de ask1

Also Published As

Publication number Publication date
NZ754169A (en) 2021-01-29
CA3026700C (en) 2020-12-15
KR20170018474A (ko) 2017-02-17
KR101582065B1 (ko) 2015-12-31
PE20141822A1 (es) 2014-11-27
MD20140082A2 (ro) 2015-01-31
IL233598A0 (en) 2014-08-31
KR101799739B1 (ko) 2017-11-20
CA3026738C (en) 2020-12-15
KR20190000898A (ko) 2019-01-03
US20130197037A1 (en) 2013-08-01
IL239311A0 (en) 2015-07-30
MX2019007348A (es) 2019-09-05
PL2807151T3 (pl) 2016-05-31
CR20140405A (es) 2014-11-27
PH12014501697B1 (en) 2014-10-20
BR112014018355A2 (es) 2017-06-20
BR112014018355A8 (pt) 2017-07-11
CN104080771B (zh) 2018-11-09
AU2013201586C1 (en) 2015-06-18
CA3026738A1 (en) 2013-08-01
US20160235728A1 (en) 2016-08-18
CY1117201T1 (el) 2017-04-05
UY34573A (es) 2013-06-28
AU2013201586A1 (en) 2013-08-15
US9254284B2 (en) 2016-02-09
IL233598A (en) 2015-06-30
KR20170128622A (ko) 2017-11-22
SI2807151T1 (sl) 2016-08-31
US10508100B2 (en) 2019-12-17
US8742126B2 (en) 2014-06-03
DK2807151T3 (en) 2016-02-22
US20180099950A1 (en) 2018-04-12
EP2807151B1 (en) 2015-11-18
HRP20151399T1 (hr) 2016-01-29
AR089818A1 (es) 2014-09-17
TW201441213A (zh) 2014-11-01
MA35861B1 (fr) 2014-12-01
TWI487523B (zh) 2015-06-11
CA3026700A1 (en) 2013-08-01
IL239311B (en) 2018-03-29
WO2013112741A1 (en) 2013-08-01
SG11201404348UA (en) 2014-08-28
UA112098C2 (uk) 2016-07-25
AR117113A2 (es) 2021-07-14
BR112014018355B1 (pt) 2021-10-05
IL257965A (en) 2018-05-31
ZA201405260B (en) 2016-05-25
US20190248762A1 (en) 2019-08-15
CA2862030C (en) 2019-10-29
US9750730B2 (en) 2017-09-05
CL2014001988A1 (es) 2014-11-03
SMT201600047B (it) 2016-02-25
TW201334782A (zh) 2013-09-01
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