EA018463B1 - ПОЛУЧЕНИЕ ДИКАРБОНОВЫХ КИСЛОТ ПРИ НИЗКИХ pH - Google Patents

ПОЛУЧЕНИЕ ДИКАРБОНОВЫХ КИСЛОТ ПРИ НИЗКИХ pH Download PDF

Info

Publication number
EA018463B1
EA018463B1 EA201100156A EA201100156A EA018463B1 EA 018463 B1 EA018463 B1 EA 018463B1 EA 201100156 A EA201100156 A EA 201100156A EA 201100156 A EA201100156 A EA 201100156A EA 018463 B1 EA018463 B1 EA 018463B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
yeast
acid
dicarboxylic acid
oxygen
genetically modified
Prior art date
Application number
EA201100156A
Other languages
English (en)
Other versions
EA201100156A1 (ru
Inventor
Михель Леонардус Аугуст Янсен
Рене Вервал
Original Assignee
ДСМ АйПи АССЕТС Б.В.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by ДСМ АйПи АССЕТС Б.В. filed Critical ДСМ АйПи АССЕТС Б.В.
Publication of EA201100156A1 publication Critical patent/EA201100156A1/ru
Publication of EA018463B1 publication Critical patent/EA018463B1/ru

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
    • C12P7/40—Preparation of oxygen-containing organic compounds containing a carboxyl group including Peroxycarboxylic acids
    • C12P7/44—Polycarboxylic acids
    • C12P7/46—Dicarboxylic acids having four or less carbon atoms, e.g. fumaric acid, maleic acid
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/0004—Oxidoreductases (1.)
    • C12N9/001—Oxidoreductases (1.) acting on the CH-CH group of donors (1.3)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/88—Lyases (4.)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
    • C12P7/40—Preparation of oxygen-containing organic compounds containing a carboxyl group including Peroxycarboxylic acids
    • C12P7/44—Polycarboxylic acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y103/00—Oxidoreductases acting on the CH-CH group of donors (1.3)
    • C12Y103/01—Oxidoreductases acting on the CH-CH group of donors (1.3) with NAD+ or NADP+ as acceptor (1.3.1)
    • C12Y103/01006—Fumarate reductase (NADH) (1.3.1.6)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y103/00—Oxidoreductases acting on the CH-CH group of donors (1.3)
    • C12Y103/05—Oxidoreductases acting on the CH-CH group of donors (1.3) with a quinone or related compound as acceptor (1.3.5)
    • C12Y103/05004—Fumarate reductase (menaquinone) (1.3.5.4)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y401/00—Carbon-carbon lyases (4.1)
    • C12Y401/01—Carboxy-lyases (4.1.1)
    • C12Y401/01032—Phosphoenolpyruvate carboxykinase (GTP) (4.1.1.32)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y401/00—Carbon-carbon lyases (4.1)
    • C12Y401/01—Carboxy-lyases (4.1.1)
    • C12Y401/01038—Phosphoenolpyruvate carboxykinase (diphosphate) (4.1.1.38)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y401/00—Carbon-carbon lyases (4.1)
    • C12Y401/01—Carboxy-lyases (4.1.1)
    • C12Y401/01049—Phosphoenolpyruvate carboxykinase (ATP) (4.1.1.49)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y402/00—Carbon-oxygen lyases (4.2)
    • C12Y402/01—Hydro-lyases (4.2.1)
    • C12Y402/01002—Fumarate hydratase (4.2.1.2)

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

Изобретение относится к способу получения дикарбоновых кислот. Способ включает в себя ферментацию дрожжей в присутствии углеводсодержащих субстратов и малых количеств кислорода при значении рН, при которых по меньшей мере 50% дикарбоновой кислоты находится в кислотной форме. Способ настоящего изобретения обеспечивает высокие выходы дикарбоновой кислоты-продукта и является более экономичным по сравнению с существующими способами, в которых образуется соль, которую далее необходимо превращать в кислоту. Способ обеспечивает также более простую и более удобную обработку продукта.

Description

Область техники, к которой относится изобретение
Настоящее изобретение относится к способу получения дикарбоновых кислот. В частности, изобретение относится к получению дикарбоновых кислот с помощью ферментации дрожжей.
Предшествующий уровень техники
Дикарбоновые кислоты, такие как фумаровая кислота и янтарная кислота, являются важными соединениями, которые используют в пищевой промышленности для приготовления и сохранения пищи, в медицинской промышленности для составления лекарственных препаратов и других промышленных применений, таких как мономеры и (био)полимеры. Для удовлетворения растущей потребности в дикарбоновых кислотах разрабатываются более эффективные и более экономичные способы производства. Дикарбоновые кислоты традиционно получают ферментацией бактерий, которая может давать большие количества дикарбоновых кислот. Это описано, например, в И8 5573931, в котором описан способ получения янтарной кислоты в высоких концентрациях с использованием определенного бактериального штамма. Однако одним очень серьезным недостатком, связанным с использованием бактерий для получения дикарбоновых кислот, является образование соли дикарбоновой кислоты. В случае использования бактерий рН во время ферментации следует поддерживать в пределах 6-7, что выше значений рКа всех дикарбоновых кислот. Вследствие этого большая часть кислот будет образовываться в их солевой форме, а соли необходимо превращать в кислоту. В процессах крупномасштабного производства это практически невыгодно и неэффективно и повышает производственные расходы. Для получения органических кислот используются также и микроорганизмы, не являющиеся бактериями. В ЕР 0424384 раскрывается аэробный способ получения органических кислот с помощью гриба вида Ρΐιίζοριίδ в среде, содержащей карбонат кальция. В ЕР 1183385 для получения молочной кислоты раскрываются генетически измененные дрожжевые клетки с отрицательным фенотипом СгаЫгсс и содержащие экзогенную молекулу нуклеиновой кислоты.
Подробное описание изобретения
Настоящее изобретение относится к способу получения дикарбоновых кислот. Способ включает в себя ферментацию дрожжей в присутствии содержащего углеводы субстрата и небольших количеств кислорода при значении рН ниже рКа дикарбоновой кислоты. Способ настоящего изобретения обеспечивает высокие выходы дикарбоновой кислоты в качестве продукта, упрощает последующую обработку и является более экономичным, чем существующие способы, в которых образуется соль, которую затем необходимо превращать в кислоту. Поскольку дикарбоновые кислоты имеют более одного значения рКа, рН должно быть ниже самого низкого рКа дикарбоновой кислоты. Для большинства кислот рН должно быть в пределах от 1,0 до 5,5, преимущественно от 2,0 до 4,0. В одном из вариантов осуществления янтарную кислоту получают при значении рН 3,0. Другое преимущество состоит в том, что благодаря низкому значению рН снижается вероятность загрязнения.
Стадии производства кислоты преимущественно предшествует стадия образования биомассы, целью которой является оптимальное получение биомассы. На стадии образования биомассы рН лежит в пределах от 2 до 7, преимущественно в пределах от 3 до 6 и более предпочтительно в пределах от 4 до 5.
Способ согласно настоящему изобретению более экономичен и может давать снижение расходов до 30%. Одной из причин этого является значительное снижение затрат на титрант.
Способ может быть использован для получения любой дикарбоновой кислоты. Подходящие примеры включают адипиновую кислоту, фумаровую кислоту, итаконовую кислоту, янтарную кислоту, малеиновую кислоту, щавелевую кислоту. Предпочтительными дикарбоновыми кислотами являются янтарная, фумаровая и малеиновая кислоты.
Используемыми в способе дрожжами могут быть любые подходящие дрожжи. Подходящие примеры дрожжей включают 8аес11аготусс5. 8с1№о5асс11аготусс5. К1иуусготусс5. СапШйа. Р1сЫа и УаггоМа, такие как виды 8асс11аготусс5 ссгсгыас. 8с1№о5асс11аготусс5 ротйе, К1иуусгтосс5 1асЩ. СапШйа 5опогсп515. Р1сЫа 8Йр1й18 и УаггоМа Нро1уНса. В одном из вариантов осуществления используемым в способе микроорганизмом является 8асс11аготусс5 ссгсуыас - микроорганизм, являющийся широко применяемым и представляющим промышленный интерес микроорганизмом.
В одном из вариантов осуществления дрожжи согласно настоящему изобретению являются генетически модифицированными дрожжами. В соответствии с представлениями изобретения генетически модифицированные дрожжи в способе согласно настоящему патенту определяются как дрожжевые клетки, которые содержат нуклеотидную последовательность или полипептидную последовательность, которая не содержится естественным образом в дрожжевой клетке, либо трансформированы или генетически модифицированы этой последовательностью, либо же содержат дополнительную копию или копии последовательности эндогенной нуклеиновой кислоты. Дикий тип дрожжевой клетки определяется в изобретении как клетка-прародитель для рекомбинантной клетки.
Дрожжи в способе настоящего изобретения являются преимущественно генетически модифицированными дрожжами, содержащими нуклеотидную последовательность, кодирующую гетерологичный фермент, выбираемой из группы, состоящей из фосфоенолпируват-карбоксикиназы, фумарат-редуктазы и фумаразы. Предпочтительные варианты осуществления гетерологичных ферментов определены ниже.
Выражение гомологичный, когда оно используется для указания на родство между данной (ре
- 1 018463 комбинантной) нуклеиновой кислотой или полипептидной молекулой и данным организмом-хозяином или клеткой-хозяином, следует понимать как означающее то, что в природе нуклеиновая кислота или полипептидная молекула продуцируются клеткой-хозяином или организмами одних и тех же видов, преимущественно одной и той же разновидности или штамма.
Выражение гетерологичный, когда оно используется в отношении какой-либо нуклеиновой кислоты (ДНК или РНК) или белка, относится к нуклеиновой кислоте или белку, которые не встречаются естественным образом в качестве части организма, клетки, генома или последовательности ДНК или РНК, в которых они присутствуют, или которые находятся в какой-либо клетке или участке (участках) в геноме или последовательности ДНК или РНК, которые отличаются от структур, в которых они находятся в природе. Гетерологичные нуклеиновые кислоты или белки не являются эндогенными по отношению к клетке, в которую их вводят, но получают из какой-либо другой клетки, полученной синтетическим или рекомбинантным методом.
Генетически модифицированные дрожжи преимущественно содержат нуклеотидную последовательность, кодирующую фосфоенолпируват (РЕР)-карбоксикиназу. РЕР-карбоксикиназа (ЕС 4.1.1.49) является преимущественно гетерологичным ферментом преимущественно бактериального происхождения. Более конкретно, обладающий РЕР-карбоксикиназной активностью фермент происходит из ЕксйепсШа сой, Маппйе1Ш1а 5р., АсйпоЬасШик 5р. или АпаегоЬюкртИит 5р.. еще более конкретно из МаппНеиша кисашартобисепк или АсбпоЬасШик киссшодепек. В одном из вариантов осуществления РЕР-карбоксикиназу получают из АсбпоЬасШик киссшодепек (РСКа), где РСКа преимущественно предварительно модифицирован путем замены ЕСУ в положении 120-122 на аминокислотную последовательность ПАЕ. Дрожжевая клетка согласно настоящему изобретению предпочтительно генетически модифицирована РЕР-карбоксикиназой, последовательность которой по меньшей мере на 80, 85, 90, 95, 99 или на 100% идентична аминокислотной последовательности 8ЕЦ ΙΌ N0: 6.
В другом предпочтительном варианте осуществления генетически модифицированные дрожжи в способе согласно настоящему изобретению содержат нуклеотидную последовательность, кодирующую фумарат-редуктазу. Фумарат-редуктаза является преимущественно гетерологичным ферментом, преимущественно NΛ^(Н)-зависимой фумарат-редуктазой любого подходящего происхождения и может быть, например, получена из бактерий, грибов, простейших или растений. Дрожжи в способе согласно настоящему изобретению преимущественно содержат НАЛ/НЕ-зависимую фумарат-редуктазу, преимущественно полученную из Ттурапокота 5р., например из Ттурапокота ЬтисеЕ В одном из предпочтительных вариантов осуществления нуклеотидная последовательность, кодирующая NΛ^(Н)-зависимую фумарат-редуктазу, экспрессируется в цитозоле. В том случае, когда нуклеотидная последовательность, кодирующая NΛ^(Н)-зависимую фумарат-редуктазу, содержит пероксисомальный или митохондриальный нацеливающий сигнал, чтобы предотвратить пероксисомальное или митохондриальное нацеливание фермента, может оказаться существенным модифицировать или удалить ряд аминокислот (и соответствующих им нуклеотидных последовательностей в кодирующей нуклеотидной последовательности). Присутствие пероксисомального нацеливающего сигнала может быть определено с помощью, например, метода, раскрытого 8сЫи1ет е1 а1., №с1ею ааб Векеатсй 2007, 35, Ό815-Ό822. Предпочтительно, чтобы дрожжевая клетка согласно настоящему изобретению была генетически модифицирована ΝΛΟ(Η)зависимой фумарат-редуктазой, последовательность которой по меньшей мере на 80, 85, 90, 95, 99 или 100% идентична аминокислотной последовательности 8ЕЦ ΙΌ N0: 7.
В еще одном предпочтительном варианте осуществления генетически модифицированные дрожжи в способе согласно настоящему изобретению содержат нуклеотидную последовательность, кодирующую фумаразу, которая может быть как гетерологичным, так и гомологичным ферментом. Нуклеотидная последовательность, кодирующая гетерологичную фумаразу, может быть любого подходящего происхождения, преимущественно микробного происхождения и преимущественно может быть получена из дрожжей, в частности из Зассйатотусек сегеу!51ае или П1атеп1ои5 Гипдик, например В1ихори5 огухае. Предпочтительно, чтобы дрожжи в способе согласно настоящему изобретению сверхэкспрессировали нуклеотидную последовательность, кодирующую фумаразу, которая бы по меньшей мере на 70, преимущественно по меньшей мере на 75, 80, 85, 90, 92, 94, 95, 96, 97, 98 или 99% либо на 100% была идентична аминокислотной последовательности 8ЕЦ ΙΌ N0: 8.
В еще одном предпочтительном варианте осуществления генетически модифицированные дрожжи в способе согласно настоящему изобретению содержат дополнительно нуклеотидную последовательность, кодирующую малат-дегидрогеназу (МЛН), которая проявляет активность в цитозоле при экспрессировании нуклеотидной последовательности. У МЛН преимущественно отсутствует пероксисомальный или митохондриальный нацеливающий сигнал, чтобы локализовать фермент в цитозоле. Цитозольной МЛН может быть любая подходящая гомологичная или гетерологичная малат-дегидрогеназа. Предпочтительно, чтобы дрожжевая клетка согласно настоящему изобретению содержала нуклеотидную последовательность, кодирующую малат-дегидрогеназу, которая бы по меньшей мере на 70, преимущественно по меньшей мере на 75, 80, 85, 90, 92, 94, 95, 96, 97, 98 или 99% была идентична аминокислотной последовательности 8ЕЦ ΙΌ N0: 9.
В еще одном предпочтительном варианте осуществления генетически модифицированные дрожжи
- 2 018463 в способе согласно настоящему изобретению содержат нуклеотидную последовательность, кодирующую белок-переносчик дикарбоновой кислоты, преимущественно белок-переносчик малеиновой кислоты (МАЕ). Белок-переносчик дикарбоновой кислоты может быть гомологичным или гетерологичным белком. Преимущественно белок-переносчик дикарбоновой кислоты является гетерологичным белком. Белок-переносчик дикарбоновой кислоты может быть получен из любого подходящего организма, преимущественно из 8с1ихо5асс11аготусс5 ротЬе. Белком-переносчиком дикарбоновой кислоты преимущественно является белок-переносчик малеиновой кислоты (МАЕ), последовательность которого по меньшей мере на 80, 85, 90, 95 или 99% либо на 100% идентична последовательности 8ЕО ΙΌ N0: 10.
Используемые в способе согласно настоящему изобретению дрожжи представляют собой генетически модифицированные дрожжи, содержащие гетерологичную РЕР-карбоксикиназу, гетерологичную NΑ^(Р)Η-зависимую фумарат-редуктазу, гетерологичную фумаразу, гетерологичный белок-переносчик малеиновой кислоты и цитозольную малат-дегидрогеназу. Предпочтительные варианты осуществления этих ферментов являются такими, как описаны выше.
Идентичность последовательности определяется в изобретении как взаимоотношение между двумя или более аминокислотными (полипептидными или белковыми) последовательностями или двумя или более нуклеиново-кислотными (полинуклеотидными) последовательностями, определяемое путем сравнения этих последовательностей. Обычно идентичности последовательностей или подобия между последовательностями сравниваются по всей длине сравниваемых последовательностей. В области, к которой принадлежит изобретение, идентичность означает также, в зависимости от конкретного случая, степень связанности между аминокислотной и нуклеиново-кислотной последовательностями, которая определяется соответствием между цепочками этих последовательностей.
Предпочтительные методы определения идентичности предусматривают нахождение наибольшего соответствия между испытываемыми последовательностями. Методы определения идентичности и подобия кодифицированы в имеющихся в свободном доступе компьютерных программах. Предпочтительные методы определения идентичности и подобия между двумя последовательностями, заложенные в компьютерных программах, включают в себя ВБА8ТР и ΒΕΑ8ΤΝ, свободный доступ к которым предоставляют ΝΟΒΙ и другие источники (ВБА8Т Мапиа1, А11ксПи1. 8., е! а1., ΝΟΒΙ ΝΕΜ ΝΙΗ ВеИекба, ΜΌ 20894). Предпочтительными параметрами для сравнения аминокислотных последовательностей с использованием ВБА8ТР являются дар ореп 11.0, дар ех!епб 1, В1о§ит 62 та!пх.
Используемое в патенте выражение нуклеиновая кислота включает в себя дезоксирибонуклеотидный или рибонуклеотидный полимер, т.е. полинуклеотид, либо в одно-, либо в двуспиральной форме и, если не оговорены ограничения, охватывает известные аналоги, обладающие неотъемлемым свойством природных нуклеотидов, т.е. способные гибридизоваться с односпиральными нуклеиновыми кислотами аналогичным образом, как это происходит с природными нуклеотидами (например, с пептидонуклеиновыми кислотами). Полинуклеотид может быть полноразмерным или подпоследовательностью нативного или гетерологичного структурного или регуляторного гена. Если не оговорено иное, указанное выше выражение включает в себя как указанную последовательность, так и комплементарную ей последовательность.
В одном из предпочтительных вариантов осуществления дрожжи в способе согласно настоящему изобретению сверхэкспрессируют нуклеотидные последовательности, кодирующие какой-либо из названных выше ферментов. В относящейся к изобретению технике имеются различные средства для сверхэкспрессии нуклеотидных последовательностей, кодирующих ферменты в дрожжах в способе изобретения. В частности, нуклеотидная последовательность, кодирующая какой-либо фермент, может быть сверхэкспрессирована путем увеличения количества копий гена, кодирующего этот фермент в клетке, например, путем интегрирования дополнительных копий гена в геноме клетки, экспрессии гена из центромерного вектора, из эписомального мультикопийного вектора экспрессии или путем введения (эписомального) вектора экспрессии, который содержит множество копий гена. Сверхэкспрессия фермента согласно изобретению преимущественно достигается с помощью (сильного) конститутивного промотора.
Углеводсодержащим субстратом может быть любой углеводсодержащий субстрат, включая мелассу, сок сахарного тростника, пентозы и гексозы, такие как глюкоза, фруктоза, ксилоза, арабиноза. Предпочтительным углеводсодержащим субстратом является субстрат, содержащий глюкозу, такой как мальтоза, сахароза, глюкоза или глюкозный сироп. Содержание углевода в углеводсодержащем субстрате преимущественно больше 50 вес.%, более предпочтительно больше 55, 60, 65, 70, 75, 80 вес.% и наиболее предпочтительно больше 85, 90, 95 или 99 вес.% в расчете на сухой вес.
Способ согласно настоящему изобретению преимущественно включает в себя ферментацию дрожжей в ограниченных по углероду (С) условиях. Ограниченные по углероду условия определяются в заявке как концентрация растворенного углевода ниже 1 г/л, преимущественно ниже 0,9 г/л или ниже 0,5 г/л растворенного углевода. Было установлено, что ферментация дрожжей в ограниченных по углероду условиях дает повышенный выход янтарной кислоты по сравнению с неограниченными по углероду условиями.
Необходимый для ферментации кислород может подаваться в любой подходящей форме. В одном из вариантов осуществления кислород подается в виде воздуха. Кислород следует подавать в небольших
- 3 018463 количествах. Это отражается в скорости потребления кислорода (СПК) и/или в удельной скорости потребления кислорода (с|О2) дрожжами. СПК в настоящем изобретении ниже примерно 8,0 ммоль кислорода/л/ч, преимущественно ниже примерно 5,0, 4,0, 3,0 или 2,0 ммоль кислорода/л/ч, более предпочтительно ниже примерно 0,1 или 0,5 ммоль кислорода/л/ч и при этом предпочтительно более 0,01 ммоль кислорода/л/ч.
Удельная скорость потребления кислорода (с|О2) в способе изобретения лежит в пределах от 8 до 0,5 ммоль кислорода/г сухой биомассы/ч, преимущественно от 5, 4, 3 или 2 до примерно 0,4, 0,3 или 0,2 ммоль кислорода/г биомассы/ч.
Способ согласно настоящему изобретению может осуществляться в периодическом, пополняемом периодическом или непрерывном режиме. Эти режимы ферментации известны специалистам в данной области. В зависимости от режима ферментации концентрация биомассы во время ферментации может в большей или меньшей степени варьировать. При периодическом и пополняемом периодическом режиме концентрация биомассы обычно повышается. Вследствие этого удельная скорость потребления кислорода при периодическом и пополняемом периодическом режиме обычно падает.
Температура способа обычно составляет от 10 до 40°С, преимущественно от 20 до 35 °С и более предпочтительно от 30 до 35°С.
В одном из вариантов осуществления способа согласно настоящему изобретению наряду с углеводсодержащим субстратом присутствует дополнительный донор электрона. Дополнительным донором электрона преимущественно является органический донор электрона. Подходящие примеры органических доноров электрона включают глицерин, формиат и полиолы, такие как маннит, сорбит и ксилит.
Краткое описание чертежа
Чертеж. Влияние применяемой СПК на продукцию янтарной кислоты после 90 ч при рН 3.
Примеры
Пример 1. Получение янтарной кислоты с помощью 8ассНаготусек сетеуШае.
1.1. Конструирование дрожжевого штамма.
1.1.1. Конструирование экспрессирующих конструкций.
Экспрессирующая конструкция рСВ8414РРК-3 была создана после рестрикции вектора экспрессии рК.8414 у 8. Сетеушае (81гкокк1 К8. апб Н1е1ег Р., СепеНск, 1989, 122(1): 19-27) с помощью ВатН1/Ыо11 и последующего лигандирования в этом векторе фрагмента ВатШ/ЫоП-рестрикции, состоящего из синтетической генной конструкции для фосфоенолпируват-карбоксикиназы (происхождение: АсНпоЬасШик киссшодепек) (8ЕЦ ГО N0: 1). Полученная в результате лигандирования смесь была использована для трансформации клеток Е.соН ТОР10 (1иуйгодеи) с образованием дрожжевой экспрессирующей конструкции рСВ8414РРК-1. Далее рСВК414РРК-1 была подвергнута рестрикции с помощью Акс1 и №11. Чтобы создать рСВ8414РРК-3, фрагмент Акс1/№11-рестрикции, состоящий из синтетической генной конструкции (8ЕЦ ГО N0: 2) для гликосомальной фумарат-редуктазы (из Т. Ьгисе1 (РКЭд)), был лигандирован с образованием подвергнутого рестрикции вектора рСВ8414РРК-1. Полученная в результате лигандирования смесь была использована для трансформации клеток Е.соН ТОР10 (1пуйгодеп) с образованием дрожжевой экспрессирующей конструкции рСВ8414РРК-3.
Экспрессирующая конструкция рСВ8415РИМ-3 была создана после рестрикции вектора экспрессии рК.8415 у 8. Сетеу1к1ае (81гкокк1 К8. апб Н1е1ег Р., СепеНск, 1989, 122(1): 19-27) с помощью ВатН1/№11 и последующего лигандирования в этом векторе фрагмента ВатН1/№11-рестрикции, состоящего из синтетической генной конструкции для фумаразы (происхождение: Шпхорик огухае) (8ЕЦ ГО N0: 3). Полученная в результате лигандирования смесь была использована для трансформации клеток Е.соН ТОР10 (1пу11тодеп) с образованием дрожжевой экспрессирующей конструкции рСВ8415РИМ-1. Далее рСВК415РИМ-1 была подвергнута рестрикции с помощью Акс1 и №11. Чтобы создать рСВ8415РиМ-3 фрагмент Акс1/№11-рестрикции, состоящий из синтетической генной конструкции (8ЕЦ ГО NО: 4) для пероксисомальной малат-дегидрогеназы из 8. сетеуШае (МЭН3), был лигандирован с образованием подвергнутого рестрикции вектора рСВ8415РИМ-1. Полученная в результате лигандирования смесь была использована для трансформации клеток Е.сой ТОР10 (1пуйгодеп) с образованием дрожжевой экспрессирующей конструкции рСВ8415РИМ-3.
Экспрессирующая конструкция рСВ8416МАЕ-1 была создана после рестрикции вектора экспрессии рК.8416 у 8. Сетеу1к1ае (8Нкокк1 К8. апб Н1е1ег Р., СепеНск, 1989, 122(1): 19-27) с помощью ВатН1/№11 и последующего лигандирования в этом векторе фрагмента ВатН1/№11-рестрикции, состоящего из синтетической генной конструкции (8ЕЦ ГО NО: 5) для переносчика малеиновой кислоты из 8с1пхокасс11аго1пусек ротЬе. Полученная в результате лигандирования смесь была использована для трансформации клеток Е.соН ТОР10 (1пу11тодеп) с образованием дрожжевой экспрессирующей конструкции рСВ8416МАЕ-1.
1.1.2. Конструирование штамма 8. СетеуШае.
Плазмиды рСВ8414РРК-3, рСВ8415РИМ-3 и рСВ8416МАЕ-1 (описанные в п.1.1.) были трансформированы с помощью электропорации в штамме Р\УВ064 вида 8. сегеу1к1ае (МАТА ига3-52 1еи2-112 1гр1289 аб11::1ох аб12::1ох дрб1::Кап1ох) с целью создания штамма 8ИС-200, сверхэкспрессирующего РСКа,
- 4 018463
ΜΌΗ3, РИМЕ, РКЭд и 8рМАЕ1. Все гены были оптимизированы по кодоновым парам для экспрессии 8. еегеу181ае согласно кО 2008/000632.
1.2. 8. сегесыае. продуцирующий янтарную кислоту при низком рН и ограниченных по кислороду условиях.
Дрожжевой штамм 8ИС-200 (МАТА ига3-52 1еи2-112 кгр1-289 абй1::1ох абй2::1ох дрб1::Кап1ох, сверхэкспрессирующий РСКа, ΜΌΗ3, РИМЕ, РЕЭд и 8рМАЕ1) культивировали во встряхиваемой колбе (2x300 мл) в течение 3 суток при 30°С и 229 об/мин. В качестве базовой среды была использована Уегбиуп (Уегбиуи ек а1., 1992, Уеакк 8, 501-517), которую модифицировали источниками углерода и азота, как показано в табл. 1.
Таблица 1
Состав среды перед культивированием во встряхиваемой колбе
Соединение Концентрация (г/л)
С6Н|2Об-Н2О 20,0
(νη2)2οο 2,3
КН2РО4 3,0
М§8О4-7Н2О 0,5
I
1
Витаминный раствор
Компонент Формула Концентрация (г/кг)
Биотин (ϋ-) Сц)Н|(,П2Оз8 0,05
Са ϋ(+) панютсиат С]8Нз2СаП2О|0 1,00
Никотиновая кислота СйНзЫОз 1,00
Миоинозит СбН|2Об 25.00
Тиаминхлорид-гидро хлорид С|2Н18С12М4О8*хН2О 1,00
Пиридоксил гидрохлорид С8Н)2С1ТЮз 1,00
н-аминобензойная кислота с7н7ыо2 0,20
ь Раствор микроэлементов
Формула Концентрация (г/кг)
СюН14К2№208-2Н2О (ЕПТА) 15.00
Ζη8Ο4·7Η2Ο 4,50
МпС12-2Н2О 0,84
СоС12-6Н2О 0,30
Си8О4-5Н2О 0,30
Ν87Μο04·2Η20 0,40
СаС12‘2Н2О 4,50
Ре8О4-7Н2О 3,00
НзВОз 1,00
ΚΙ 0,10
Вслед за этим содержимое встряхиваемых колб было перенесено в 10-л ферментер (начальный вес 6 кг), в котором находилась следующая среда.
Таблица 2
Основной состав ферментационной среды
Исходный материал Формула Концентрация (г/л)
Сульфат аммония (ЫНд^ЗОд 2,5
Однозамещённый фосфат калия КН2РО4 3,0
Сульфат магния Мд8О4-7Н2О 0,5
Раствор микроэлементов 1
Витаминный раствор 1
рН контролировали на уровне 3,0 добавлением 6н. КОН. Температуру контролировали на уровне 30°С. Концентрацию глюкозы ограничивали (<1 г/л) путем регулировки добавления сырья в ферментер. При ферментации применяли разные скорости поглощения кислорода (СПК), что давало ограничение по кислороду (чертеж). Применяли общую скорость потока 0,33 об./об. среды, включая 10% СО2, которые обеспечивают достаточное количество СО2 для эффективной продукции янтарной кислоты.
Результаты с разными применяемыми СПК при производстве янтарной кислоты показаны на чертеже. Для поддержания устойчивой продукции при рН 3 был необходим минимальный объем аэрации. При СПК выше 5 ммоль/л/ч продукция янтарной кислоты была более низкой.
При культивации в течение 90 ч для типичной концентрации биомассы имел место прирост, равный
- 5 018463 г сухого веса на 1 л. Соответственным образом в процессе ферментации непрерывно снижалась удельная скорость потребления кислорода (ςθ2). В одной из ферментации применяли СПК, равную 10 ммоль/л/ч, при которой цО2 падала от 10 до 1,25 ммоль/г сухой биомассы/ч, и СПК, равную 1 ммоль/л/ч, при которой цО2 падала от 1 до 0,1 ммоль/г сухой биомассы/ч.

Claims (7)

  1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
    1. Способ получения дикарбоновых кислот, включающий ферментацию дрожжей в присутствии углеводсодержащих субстратов и малых количеств кислорода при значении рН ниже самого низкого рКа дикарбоновой кислоты, в котором кислород подается при удельной скорости поглощения кислорода от 8 до 0,2 ммоль/г сухой биомассы/ч, в котором указанная дикарбоновая кислота является фумаровой кислотой, малеиновой кислотой или янтарной кислотой.
  2. 2. Способ по п.1, в котором рН лежит в пределах от 1,0 до 5,5.
  3. 3. Способ по п.1 или 2, включающий ферментацию дрожжей в ограниченных по углероду условиях.
  4. 4. Способ по любому из пп.1-3 в присутствии дополнительного донора электрона.
  5. 5. Способ по любому из пп.1-4, в котором дрожжи относятся к виду ЗассЕагошусез сегеу181ае.
  6. 6. Способ по любому из пп.1-5, в котором дрожжами являются генетически модифицированные дрожжи.
  7. 7. Способ по п.6, в котором генетически модифицированные дрожжи содержат нуклеотидную последовательность, кодирующую гетерологичный фермент, выбираемый из группы, состоящей из фосфоенолпируват-карбоксикиназы, фумарат-редуктазы и фумаразы.
EA201100156A 2008-07-08 2009-05-20 ПОЛУЧЕНИЕ ДИКАРБОНОВЫХ КИСЛОТ ПРИ НИЗКИХ pH EA018463B1 (ru)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP08159891 2008-07-08
PCT/EP2009/056181 WO2010003728A1 (en) 2008-07-08 2009-05-20 Dicarboxylic acid production by fermentation at low ph

Publications (2)

Publication Number Publication Date
EA201100156A1 EA201100156A1 (ru) 2011-08-30
EA018463B1 true EA018463B1 (ru) 2013-08-30

Family

ID=40329358

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA201100156A EA018463B1 (ru) 2008-07-08 2009-05-20 ПОЛУЧЕНИЕ ДИКАРБОНОВЫХ КИСЛОТ ПРИ НИЗКИХ pH

Country Status (10)

Country Link
US (2) US9012187B2 (ru)
EP (2) EP3176265A1 (ru)
CN (3) CN107267561A (ru)
BR (1) BRPI0915534B1 (ru)
CA (1) CA2730595C (ru)
EA (1) EA018463B1 (ru)
ES (1) ES2623932T3 (ru)
PL (1) PL2297297T3 (ru)
UA (1) UA103033C2 (ru)
WO (1) WO2010003728A1 (ru)

Families Citing this family (38)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US9012187B2 (en) * 2008-07-08 2015-04-21 Dsm Ip Assets B.V. Dicarboxylic acid production by fermentation at low pH
EP2419518A1 (en) * 2009-04-15 2012-02-22 DSM IP Assets B.V. Dicarboxylic acid production process
CA2765849A1 (en) 2009-07-02 2011-01-06 Verdezyne, Inc. Biological methods for preparing adipic acid
MX2012002532A (es) 2009-09-01 2012-04-11 Novozymes Inc Metodos para mejorar la produccion de acido malico en hongos filamentosos.
CN102812127B (zh) * 2010-03-09 2014-12-03 三菱化学株式会社 琥珀酸的制造方法
WO2011119427A1 (en) 2010-03-26 2011-09-29 Bioamber S.A.S. Processes for producing monoammonium succinate from fermentation broths containing diammonium succinate, monoammonium succinate and/or succinic acid, and conversion of monoammonium succinate to succinic acid
US8399687B2 (en) 2010-04-01 2013-03-19 Bioamber International S.A.R.L. Processes for the production of hydrogenated products
KR20130018777A (ko) 2010-04-01 2013-02-25 바이오엠버 인터내셔널 에스.에이.알.엘. 숙신산염으로부터 테트라하이드로퓨란, 감마-부티로락톤 및/또는 부탄디올의 제조방법
US20110269993A1 (en) 2010-04-30 2011-11-03 Bioamber S.A.S. Processes for producing adipic acid from fermentation broths containing diammonium adipate
US8895779B2 (en) 2010-04-30 2014-11-25 Bioamber Inc. Processes for producing monoammonium adipate and conversion of monoammonium adipate to adipic acid
US8617859B2 (en) 2010-06-04 2013-12-31 Novozymes, Inc. C4 dicarboxylic acid production in filamentous fungi
WO2011159564A1 (en) 2010-06-16 2011-12-22 Bioamber S.A.S. Processes for producing hexamethylenediamine (hmd), adiponitrile (adn), adipamide (adm) and derivatives thereof
US8703900B2 (en) 2010-06-16 2014-04-22 Bioamber Inc. Processes for producing caprolactam and derivatives thereof from fermentation broths containing diammonium adipate, monoammonium adipate and/or adipic acid
WO2011159555A1 (en) 2010-06-16 2011-12-22 Bioamber S.A.S. Processes for producing caprolactam and derivatives thereof from fermentation broths containing diammonium adipate or monoammonium adipate
KR20130023346A (ko) 2010-06-16 2013-03-07 바이오엠버, 에스.아.에스. 헥사메틸렌디아민(ｈｍｄ), 아디포니트릴(ａｄｎ), 아디파미드(ａｄｍ) 및 이들의 유도체를 제조하는 방법
WO2011159551A1 (en) 2010-06-16 2011-12-22 Bioamber S.A.S. Processes for the production of hydrogenated products and derivatives thereof
BR112012031822A2 (pt) 2010-06-16 2015-09-22 Bioamber Sas processos para a produção de produtos hidrogenados e seus derivados.
AU2011271094B2 (en) 2010-06-21 2015-01-22 Novozymes, Inc. Aspergillus aculeatus derived polypeptides having C4-dicarboxylic acid transporter activity and polynucleotides encoding same
EP2582829B1 (en) 2010-06-21 2016-11-30 Novozymes, Inc. Methods for improved c4-dicarboxylic acid production in filamentous fungi
US20130171704A1 (en) * 2010-09-24 2013-07-04 Roquette Freres Sa Dicarboxylic acid production process
WO2012103261A2 (en) 2011-01-25 2012-08-02 Finley Kenneth R Compositions and methods for succinate production
BR112013019036A2 (pt) 2011-02-28 2017-04-04 Novozymes Inc célula hospedeira recombinante, e, método para produzir um ácido dicarboxílico.
US8728798B2 (en) 2011-05-03 2014-05-20 Verdezyne, Inc. Biological methods for preparing adipic acid
US8343752B2 (en) 2011-05-03 2013-01-01 Verdezyne, Inc. Biological methods for preparing adipic acid
WO2012170060A1 (en) 2011-06-10 2012-12-13 Bioamber S.A.S. Processes for producing hexanediol (hdo), hexamethylenediamine (hmd), and derivatives thereof
EP2744904B1 (en) 2011-08-19 2016-04-13 Novozymes, Inc. Recombinant microorganisms for production c4-dicarboxylic acids
DE102011056297A1 (de) * 2011-12-12 2013-06-13 Thyssenkrupp Uhde Gmbh Verfahren zur biotechnischen Herstellung von Dicarbonsäuren
EP2807262A4 (en) * 2012-01-25 2015-12-30 Bioamber Internat S A R L PROCESS FOR SUCCINATE MANUFACTURE
BR112015001601A2 (pt) 2012-07-25 2017-11-07 Bioamber Sas células de levedura tendo curso de tca redutor de piruvato em succinato e superexpressão de uma enzima transidrogenase nad(p)+ exógena
EP2895593B1 (en) 2012-09-14 2019-12-11 PTT Global Chemical Public Company Limited Production of organic acids by fermentation at low ph
US20150232691A1 (en) * 2012-09-17 2015-08-20 Ndsu Research Foundation Blocked bio-based carboxylic acids and their use in thermosetting materials
CN105378093A (zh) 2013-07-18 2016-03-02 帝斯曼知识产权资产管理有限公司 发酵方法
CN105814198A (zh) * 2013-12-12 2016-07-27 帝斯曼知识产权资产管理有限公司 延胡索酸还原酶
DK3365427T3 (da) 2015-10-23 2020-10-26 Metabolic Explorer Sa Mikroorganisme, der er modificeret til assimilation af levulinsyre
US10787649B2 (en) * 2016-07-13 2020-09-29 Dsm Ip Assets B.V. Malate dehyrogenases
US11034982B2 (en) 2017-06-30 2021-06-15 Ptt Global Chemical Public Company Limited Genetically modified yeast with increased succinic acid production
CN110218746A (zh) * 2018-03-01 2019-09-10 上海凯赛生物技术研发中心有限公司 发酵生产长链二元酸的方法及发酵液、发酵处理液、污水
KR102129379B1 (ko) 2018-10-10 2020-07-02 한국과학기술원 고활성의 말산 탈수소효소가 도입된 숙신산 생성용 변이 미생물 및 이를 이용한 숙신산 제조방법

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2000071738A1 (en) * 1999-05-21 2000-11-30 Cargill Dow Llc Methods and materials for the synthesis of organic products
WO2007106524A2 (en) * 2006-03-13 2007-09-20 Cargill Inc. Yeast cells having disrupted pathway from dihydroxyacetone phosphate to glycerol
WO2008144626A1 (en) * 2007-05-18 2008-11-27 Microbia Precision Engineering, Inc. Malic acid production in recombinant yeast
WO2009011974A1 (en) * 2007-05-18 2009-01-22 Microbia Precision Engineering, Inc. Organic acid production by fungal cells

Family Cites Families (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4877731A (en) 1988-06-27 1989-10-31 E. I. Du Pont De Nemours And Company Fermentation process for carboxylic acids
US5573931A (en) 1995-08-28 1996-11-12 Michigan Biotechnology Institute Method for making succinic acid, bacterial variants for use in the process, and methods for obtaining variants
US5869301A (en) 1995-11-02 1999-02-09 Lockhead Martin Energy Research Corporation Method for the production of dicarboxylic acids
US6475759B1 (en) * 1997-10-14 2002-11-05 Cargill, Inc. Low PH lactic acid fermentation
EP1513940A4 (en) * 2002-05-30 2006-10-25 Cargill Dow Llc METHOD AND MATERIALS FOR THE PRODUCTION OF MILKY ACID IN YEAST
JP4647391B2 (ja) * 2005-05-20 2011-03-09 財団法人地球環境産業技術研究機構 コリネ型細菌による高効率なジカルボン酸の製造方法
DE102005052338A1 (de) * 2005-07-19 2007-05-16 Leibniz Inst Naturstoff Forsch Verfahren zur Herstellung von methylierten Malonsäuren durch mikrobielle Fermentation
US20080090273A1 (en) 2005-11-21 2008-04-17 Aaron Adriaan Winkler Malic Acid Production in Recombinant Yeast
EA015925B1 (ru) 2006-06-29 2011-12-30 ДСМ АйПи АССЕТС Б.В. Способ получения полипептидов
BRPI0819273B8 (pt) 2007-11-20 2022-07-19 Dsm Ip Assets Bv Célula microbiana eucariótica recombinante e processo para a preparação de um ácido dicarboxílico
US9012187B2 (en) * 2008-07-08 2015-04-21 Dsm Ip Assets B.V. Dicarboxylic acid production by fermentation at low pH

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2000071738A1 (en) * 1999-05-21 2000-11-30 Cargill Dow Llc Methods and materials for the synthesis of organic products
WO2007106524A2 (en) * 2006-03-13 2007-09-20 Cargill Inc. Yeast cells having disrupted pathway from dihydroxyacetone phosphate to glycerol
WO2008144626A1 (en) * 2007-05-18 2008-11-27 Microbia Precision Engineering, Inc. Malic acid production in recombinant yeast
WO2009011974A1 (en) * 2007-05-18 2009-01-22 Microbia Precision Engineering, Inc. Organic acid production by fungal cells

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
ABBOTT DEREK A. ET AL.: "Metabolic engineering of Saccharomyces cerevisiae for production of carboxylic acids: current status and challenges". FEMS YEAST RESEARCH DEC 2009, vol. 9, no. 8, December 2009 (2009-12), pages 1123-1136, XP002557537, ISSN: 1567-1364, abstract, page 1124, column 2, paragraph 2 - page 1126, column 1, paragraph 2; figure 1, page 1128, column 1, paragraph 2 - page 1132, column 1, paragraph 3 *
ZELLE R. ET AL.: "Malic acid production by Saccharomyces cerevisiae: engineering of pyruvate carboxylation, oxaloacetate reduction, and malate export". APPLIED AND ENVIRONMENTAL MICROBIOLOGY, AMERICAN SOCIETY FOR MICROBIOLOGY, US, vol. 74, no. 9, 1 May 2008 (2008-05-01), pages 2766-2777, XP008095574, ISSN: 0099-2240, abstract; figures 2, 3, page 2771, column 2, paragraph 2 - page 2772, column l, paragraph 1 - page 2774, column 2, paragraph 6 - page 2276, column 1, paragraph 1 *

Also Published As

Publication number Publication date
BRPI0915534A2 (pt) 2020-08-18
US20150232891A1 (en) 2015-08-20
CN102089436A (zh) 2011-06-08
US20110229945A1 (en) 2011-09-22
WO2010003728A4 (en) 2010-04-08
US9012187B2 (en) 2015-04-21
EP2297297B1 (en) 2017-02-08
ES2623932T3 (es) 2017-07-12
CA2730595C (en) 2014-12-16
CA2730595A1 (en) 2010-01-14
EP2297297A1 (en) 2011-03-23
UA103033C2 (ru) 2013-09-10
EP3176265A1 (en) 2017-06-07
BRPI0915534B1 (pt) 2021-04-20
PL2297297T3 (pl) 2017-08-31
CN107267561A (zh) 2017-10-20
EA201100156A1 (ru) 2011-08-30
WO2010003728A1 (en) 2010-01-14
CN107267562A (zh) 2017-10-20
US9340805B2 (en) 2016-05-17

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EA018463B1 (ru) ПОЛУЧЕНИЕ ДИКАРБОНОВЫХ КИСЛОТ ПРИ НИЗКИХ pH
JP3967812B2 (ja) ピルビン酸カルボキシラーゼ遺伝子組み換え菌体による有機酸の製造法
KR101324369B1 (ko) 2-디옥시-실로-이노소스（ｄｏｉ） 생산 세균 및 이를 이용한 2-디옥시-실로-이노소스（ｄｏｉ） 생산 방법
US9353387B2 (en) Dicarboxylic acid production process
JP2010263911A (ja) 新規ルーメンバクテリア変異菌株及びそれを用いたコハク酸の製造方法
CN105899664A (zh) 用于精细化学品的改进生产的重组微生物
EP3336191B1 (en) Escherichia sp. microorganism having l-tryptophan productivity and method for preparing l-tryptophan by using same
CN104017784A (zh) 一种环糊精糖基转移酶及其制备方法和应用
EP3159401B1 (en) Microorganism of the genus escherichia producing l-tryptophan and method for producing l-tryptophan using the same
CN102333859B (zh) 由来自植物的原料生产乳酸的方法及生产乳酸的细菌
BR112016018193B1 (pt) Micro-organismo modificado, método de produção de ácido succínico e uso de um micro-organismo modificado
ES2702930T3 (es) Microorganismo modificado con un comportamiento de separación de biomasa mejorado
KR20050102827A (ko) 신규 루멘 박테리아 변이균주 및 이를 이용한 숙신산의제조방법
KR102481504B1 (ko) 2,3-부탄디올 생산용 메탄자화균 형질전환체
KR100556099B1 (ko) 루멘 박테리아 변이균주 및 이를 이용한 숙신산의 제조방법
KR102602060B1 (ko) 부산물 생성이 저감된 2,3-부탄다이올 생산용 재조합 미생물 및 이를 이용한 2,3-부탄다이올 생산방법
JP2007125030A (ja) ピルビン酸カルボキシラーゼ遺伝子組み換え菌体による有機酸の製造法
KR20050051149A (ko) 루멘 박테리아 변이균주 및 이를 이용한 숙신산의 제조방법
CN118006645A (zh) 一种喜盐芽孢杆菌来源的四氢嘧啶基因簇、突变体及应用
CN117384813A (zh) 依克多因合成菌株及其构建方法和应用
KR20090092438A (ko) Ｌ-트립토판을 생산하는 미생물 및 이를 이용한ｌ-트립토판 생산 방법
KR100603749B1 (ko) 신규 루멘 박테리아 변이균주 및 이를 이용한 숙신산의제조방법
KR20240017394A (ko) L-시트룰린 생산능이 향상된 코리네박테리움 글루타미쿰 변이주 및 이를 이용한 l-시트룰린의 생산 방법
JPWO2003078622A1 (ja) 酢酸菌のスクアレン−ホペンサイクラーゼ遺伝子、該遺伝子を用いて育種された酢酸菌、及び該酢酸菌を用いた食酢の製造方法
KR20200006936A (ko) 메탄자화균 또는 그의 형질전환체를 이용한 아세토인 생산방법

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s)

Designated state(s): AM AZ BY KZ KG MD TJ TM