EA017070B1 - Способ получения оптических активных хиральных аминов - Google Patents
Способ получения оптических активных хиральных аминов Download PDFInfo
- Publication number
- EA017070B1 EA017070B1 EA200870262A EA200870262A EA017070B1 EA 017070 B1 EA017070 B1 EA 017070B1 EA 200870262 A EA200870262 A EA 200870262A EA 200870262 A EA200870262 A EA 200870262A EA 017070 B1 EA017070 B1 EA 017070B1
- Authority
- EA
- Eurasian Patent Office
- Prior art keywords
- reaction
- optically active
- transaminase
- reaction mixture
- conversion
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P13/00—Preparation of nitrogen-containing organic compounds
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P17/00—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms
- C12P17/10—Nitrogen as only ring hetero atom
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/10—Transferases (2.)
- C12N9/1096—Transferases (2.) transferring nitrogenous groups (2.6)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P13/00—Preparation of nitrogen-containing organic compounds
- C12P13/001—Amines; Imines
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P13/00—Preparation of nitrogen-containing organic compounds
- C12P13/02—Amides, e.g. chloramphenicol or polyamides; Imides or polyimides; Urethanes, i.e. compounds comprising N-C=O structural element or polyurethanes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P13/00—Preparation of nitrogen-containing organic compounds
- C12P13/04—Alpha- or beta- amino acids
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P13/00—Preparation of nitrogen-containing organic compounds
- C12P13/04—Alpha- or beta- amino acids
- C12P13/06—Alanine; Leucine; Isoleucine; Serine; Homoserine
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P13/00—Preparation of nitrogen-containing organic compounds
- C12P13/04—Alpha- or beta- amino acids
- C12P13/22—Tryptophan; Tyrosine; Phenylalanine; 3,4-Dihydroxyphenylalanine
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y206/00—Transferases transferring nitrogenous groups (2.6)
- C12Y206/01—Transaminases (2.6.1)
- C12Y206/01018—Beta-alanine-pyruvate transaminase (2.6.1.18)
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
Abstract
Настоящее изобретение относится к получению оптически чистых вторичных аминов, которые могут быть использованы как промежуточные соединения в синтезе, например, фармацевтических продуктов.
Description
Настоящее изобретение относится к способу получения оптически активных хиральных аминов.
Хиральные амины играют важную роль в фармацевтической, агрохимической и химической отраслях промышленности. Их часто используют в качестве промежуточных соединений или синтонов при получении различных физиологически, например, фармацевтически активных веществ, таких как цефалоспорин или производные пирролидина. В большинстве различных областей применения хиральных аминов только одна конкретная оптически активная форма, либо (К), либо (8)-энантиомер, обладает желательной физиологической активностью. Таким образом, существует очевидная необходимость в способах получения хиральных аминов в оптически активной форме.
Указанная необходимость частично обеспечивается получением хиральных аминов путем кристаллизации диастереомерных солей при добавлении хиральных карбоновых кислот (Вгеиег е! а1., Апде^апб!е СЬепве (2204) 116, 806-843). Другие химические методы предусматривают использование энантиоселективного синтеза на основе восстановления прохиральных предшественников с С=N двойными связями.
Кроме того, известно об использовании различных ферментов, таких как протеазы, амидазы или липазы, для стереоселективного расщепления рацематов (Вогпзсйеиег апб Ка/Еизказ, Нубго1азе8 ΐη Огдашс 8уп1ке818 (2005), \\д1еу-\'С11 \\'ечп11ечт). Также известно, что специфические трансамилазы, а именно а-трансамилазы, включающие «-аминокислотные аминотрансферазы, подходят для получения оптически чистых аминокислот (Ваг!сй е! а1., Арр1. Епупопга. М1сгоЪю1, (1996) 62, 3794-3799, С1ю е! а1., Вю1есйпо1. Вюепд. (2003) 83, 226-234, патент Японии 01153084 А2 (1998), патент Японии 63304986 А2 (1988), Европейский патент 0248357 А2 и ХдеЬг е! а1., Вю!есЕпо1. Вюепд. (1987) 29, 482-487).
Однако данные известные способы имеют различные недостатки. Хотя ферментативные способы, в отличие от классических методов, обычно предусматривают использование благоприятных мягких условий и обеспечивают достижение соответствующей стереоспецифичности, в них постоянно используются ферменты, чья субстратная специфичность, энантиоселективность и/или скорости конверсии являются недостаточно высокими для проведения процессов в промышленном масштабе. Кроме того, один из наиболее выраженных недостатков использования трансаминаз для получения оптически активных аминов представлен часто наблюдаемым явлением субстратного и продуктивного ингибирования. Поэтому одной из задач настоящего изобретения является разработка усовершенствованного способа получения оптически активных хиральных аминов, в частности способа с улучшенной субстратной специфичностью, улучшенной энантиоселективностью и, в частности, обеспечивающего конверсию выделяемых вещество до 100%.
Техническая проблема, положенная в основу настоящего изобретения, решена путем разработки способа получения оптически активного хирального амина, включающего:
a) обеспечение аминоакцептора и аланина в качестве аминодонора, где аминоакцептор выбран из группы, состоящей из фенилпировиноградной кислоты, ее соли, пировиноградной кислоты, ее соли, ацетофенона, 2-кетоглутарата, 3-оксобутирата, 2-бутанона, 3-оксопирролидина (3-ОР), 3пиридилметилкетона (3-РМК), сложного этилового эфира 3-оксомасляной кислоты (3-ОВЕЕ), сложного метилового эфира 3-оксопентановой кислоты (3-ОРМЕ), №1-Ъос-3-оксопиперидинона, \-1-Ъос-3оксопирролидина (В3ОР), 3-оксопиперидина, алкил-3-оксобутаноатов, метоксиацетона, 1-оксотетралона и 4-(3-пиридил)-2-бутанона;
b) осуществление взаимодействия аминоакцептора и аминодонора с (К)- или (8)-селективной омега-трансаминазой,
c) получение желаемого оптически активного хирального амина и пирувата в качестве альфакетонного побочного продукта и с1) удаление пирувата из реакционной смеси посредством декарбоксилазы:
причем взаимодействие аминоакцептора и аминодонора с (К)- или (8)-селективной омегатрансаминазой осуществляют в реакционной смеси, имеющей рН от 5,0 до 9,5, при времени реакции 4070 мин в температурном интервале от 10 до 65°С.
Реакция настоящего изобретения протекает в основном по следующей схеме:_______ о
Аминоакцептор +
ΝΗ3
соо
Аминодонор +
Аминоакцептор
Аминодонор (З)-селективное трансаминирование
-----> <------
О
соо’
Кетонный продукт
Хиральный амин (К)-селективное трансаминирование ч------
Хиральный амин
О
СОО’
Кетонный продукт
- 1 017070
Таким образом, настоящее изобретение относится к способу асимметричного синтеза хиральных аминов путем использования по меньшей мере одной трансаминазы для трансаминирования аминогруппы аминодонора к аминоакцептору с образованием в результате желаемого продукта. В зависимости от энантиопредпочтения конкретной использованной трансаминазы образуется оптически активный хиральный амин желаемой оптической конфигурации, т.е. либо (В), либо (8)-энантиомер. Таком образом, при использовании в одном варианте осуществления настоящего изобретения (8)-селективной трансаминазы для асимметричного синтеза образуется желаемый (8)-энантиомер хирального амина, тогда как при использовании в другом варианте осуществления настоящего изобретения (В)-селективной трансаминазы образуется желаемый (В)-энантиомер. Помимо желаемого оптически активного амина реакция приводит к образованию кетона в качестве побочного продукта, в частности α-кетона как побочного продукта, из использованного аминодонора и возможно непрореагировавшего аминоакцептора и аминодонора.
В предпочтительном варианте осуществления изобретения декарбоксилазой является пируватдекарбоксилаза (ΡΌΟ). При этом ацетальдегид, образованный под действием РЭС. удаляют из реакционной смеси, например, путем проведения реакции по меньшей мере с одним ферментом. Причем ферментом является спиртовая дегидрогеназа.
Предпочтительно ацетальдегид удаляют, пропуская через реакционную смесь газообразный азот, предпочтительно прилагая к реакционной смеси пониженное давление. В другом варианте ацетальдегид удаляют химическими способами.
В предпочтительном варианте способ согласно настоящему изобретению обеспечивает получение аминов, выбранных из группы, содержащей фенилаланин, аланин, 3-аминопиперидин, алкил-3аминобутаноаты, 3-аминопирролидин (3-АР), 3-пиридил-1-этиламин (3-РЕА), Ν-1-Ьос-Заминопирролидин (В3АР), сложный этиловый эфир 3-аминомасляной кислоты (3-АВЕЕ), сложный метиловый эфир 3-аминопентановой кислоты (3-АРМЕ), а-метилбензиламин (α-МВА), 1-аминотетралин, а-метил-4-(3-пиридил)бутанамин, глутаминовую кислоту, β-аминобутират, вторбутиламин, метоксиизопропиламин и 1-№Ьос-3-аминопиперидин.
В предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения ω-трансаминаза, используемая в настоящем способе, представляет собой ω-трансаминазу, полученную из У1Ьтю Е1цу1а118, в частности из штамма 1817. В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения трансаминаза получена из Л1са1щспс5 ПепИпЕсапк, в частности из штамма У2к-2.
В предпочтительном варианте осуществления настоящего избретения оптически активный хиральный амин, полученный на стадии с) или ά), удаляют из реакционной смеси.
В предпочтительно варианте способ согласно настоящему изобретению осуществляют в реакционной смеси, имеющей рН от 6,0 до 7,0, предпочтительно от 6,0 до 6,9.
Ещё одним объектом настоящего изобретения является способ получения физиологически активного соединения, выбранного из группы, включающей производные 3-аминопирролидона, цефалоспорин, производные цефалоспорина, гетероциклические бороновые кислоты, Ь-дигидроксифенилаланин (ЬОора), а-метилдофа, Ό-фенилглицин, β-гидроксифенилглицин, фосфинотрицин, пиримидопроизводные и производные пирролидона, где используется вышеописанный способ получения оптически активного хирального амина. В контексте настоящего изобретения физиологически активным соединением является соединение, которое обладает физиологической активностью по отношению к растениям, животным, людям, дрожжам или микроорганизмам, таким как простейшие, бактерии или вирусы, т.е. участвует в метаболических реакциях организма.
Другим объектом настоящего изобретения является способ получения оптически активного 3-АР или оптически активного В3АР, включающий:
a) обеспечение 3-ОР или В3ОР в качестве аминоакцептора и аминодонора,
b) осуществление взаимодействия аминоакцептора и аминодонора с (В)- или (8)-селективной трансаминазой и
c) получение оптически активного хирального 3-АР или оптически активного хирального В3АР и альфа-кетона как побочного продукта.
Настоящее изобретение более подробно пояснено следующими примерами и прилагаемыми фигурами.
Прилагаемые фигуры иллюстрируют настоящее изобретение.
На фиг. 1 представлена тонкослойная хроматограмма, на фиг. 2 - относительная активность V. Ρΐιινίαΐίδ ω-ТА в зависимости от величины рН, на фиг. 3 - относительно снижение концентрации ВЗАР при инкубировании с различными веществами, на фиг. 4 - относительное снижение концентрации ВЗАР в присутствии пирувата и ацетальдегида, на фиг. 5 - зависимость конверсии В3ОР в В3 АР от времени при различных давлениях, на фиг. 6 - относительная конверсия В3ОР в В3 АР в присутствии различных РОС, на фиг. 7 - влияние повышенной концентрации аланина и повышенной концентрации РОС на синтез асимметричного В3АР,
- 2 017070 на фиг. 8 - конверсия ВЗОР в В3АР при повышенных концентрациях аланина, на фиг. 9 - относительная РЬР-зависимая конверсия ВЗОР в ВЗАР, на фиг. 10 - относительная конверсия ВЗОР в ВЗАР в зависимости от присутствия Ν2, на фиг. 11 - относительная конверсия ВЗОР в ВЗАР в присутствии ΆΌΗ.
Пример 1. Асимметричный синтез ВЗАР
Асимметричный синтез ВЗАР осуществляли в 1,5-мл реакционных пробирках. ВЗОР как аминоакцептор использовали в концентрации 5 мМ (7,5 мкмоль). Концентрация использованного аминодонора Ь-аланина составляла 5 мМ. Использованные реактивы и условия реакции представлены ниже в табл. 1.
ЪРН (мкл)
Таблица 1. Условия реакции для синтеза асимметрического (8)-ВЗАР при использовании (8)-ωтрансаминазы для трансаминирования аминогруппы аланина в ВЗОР
мМ (мкл)
ΤΆ7/ΤΑ8 (мкл)
РОС1 (мкл)
В качестве буфера использовали 50 мМ фосфат натрия, рН 7. ТА7 обозначает ω-трансаминазу из У1Ьгю Йиу1а118 (ТиПсП Рте СПеткак, Оегтапу). ТА8 обозначает ω-трансаминазу из АкаНдепез скпНпПсапз (1и11сП Рте СПеткак, Оегтапу). В качестве лактатдегидрогеназы использовали экстракт ЕзсПепсЫа сой. Кроме того, Nа^Η добавляли до конечной концентрации 10 мМ. Концентрацию пируватдекарбоксилазы меняли. Использовали 1,5 единицы (20 мкл) и 15 единиц (200 мкл) пируватдекарбоксилазы из 8ассйаготусез сегеу181ае (РИС1). Использовали 2 единицы (З,4 мкл) и 20 единиц (З4 мкл) пируватдекарбоксилазы из 2утотопаз тоЬШз (РИС2).
Таблица 2. Степень конверсии и степень оптической чистоты, полученные с использованием ТА8, для асимметричного синтеза ВЗАР
Расчеты основаны на ГХ-анализе (+/- 5%)____
| Опыт | Фермент | Конверсия (%) | % θθΞ ( % ) (5)-энантиомер |
| 1 | Лолько ТА7 или ТА8 | 1,3 | 99,4 |
| 2 | Избыток аланина (50кратный) | 10,1 | 99,6 |
| 3 | РБС Засскаготусез сегеугзгае | 4,6 | 99,5 |
| 4 | РБС Зутотопаз тоЬШз | 34,0 | 99,6 |
| 5 | ΡϋΟ гутотопаз тоЫНз (72 час) | 73,0 | 99,4 |
| 6 | ЬРН Езскег1сЫа соИ | 66,5 | 99,9 |
Далее, касательно представленной выше табл. 2, очевидно, что в каждом из шести проведенных опытов с использованием ω-трансаминазы ТА8 можно достичь очень высокой степени оптической чистоты для образующегося (8)-ВЗАР. Также наблюдается, что независимо от использования либо ТА7, либо ТА8, степень конверсии остается весьма умеренной, если не влиять на равновесие реакции (опыт 1). Использование аланина в 10-50-кратном избытке лишь незначительно улучшает конверсию. В опытах З, 4, 5 и 6 являющийся побочным продуктом реакции кетон, то есть пируват, в процессе реакции трансаминирования выводили из равновесной реакционной смеси. Применение ТА8 вместе с лактатдегидрогеназой из Е.сой (опыт 6) приводит к значительному улучшению степени конверсии при сохранении и даже улучшении энантиоселективности. Практически то же справедливо для энантиоселективности, обеспе чиваемой пируватдекарбоксилазой из 2утотоиа§ тоЫ118 (опыты 3-5). Однако ΡΌΟ1 только незначительно увеличивает конверсию, ΡΌΟ2 умеренно увеличивает скорость конверсии (опыт 4), если реакция протекает в течение 24 ч, тогда как при реакции, проводимой в течение 72 ч (опыт 5), конверсия значительно улучшается. Все реакции протекали в течение 24 ч, за исключением опыта 5, продолжительность которого составляла 72 ч.
На фигуре представлена тонкослойная хроматограмма реакционных смесей согласно табл. 1. А обозначает ω -трансаминазу из А1саНдсп15 беийпДсаик, а V обозначает ω -трансаминазу из У1Ьгю Диу1а118. К обозначает опыт 1 с использованием одного только ТА7 или ТА8 (опыт 1). ΡΌΟ1 обозначает опыт с 8ассйаготусе§ сегеу181ае пируватдекарбоксилазой (опыт 3). ЙЭН обозначает опыт с лактатдекарбоксилазой из ЕксйепсЫа сой (опыт 6), а ΡΌΟ2 - опыт с 2утотоиа§ тоЬ1Й8 пируватдекарбоксилазой (через 24 и 72 ч) (опыт 4 и 5). Таким образом, результаты ясно показывают, что получение (8)-Β3ΑΡ из прохирального кетона ВЗОР может быть осуществлено с очень высокой энантиоселективностью.
Использование ω-трансаминаз как единственных ферментов в процессе получения, однако, приводит к умеренной конверсии. Данную умеренную скорость конверсии можно значительно повысить удалением пирувата из равновесной реакции, в частности, при использовании лактатдегидрогеназы или пируватдекарбоксилазы. Использование пируватдекарбоксилазы имеет, среди прочего, то преимущество, что нет необходимости в кофакторе рецикла (ΝΑΏΗ). Оно дополнительно преимущественно обеспечивает ферментативное удаление пирувата с ΡΌΟ и обеспечивает тем самым дополнительное преимущество удаления или избежания ингибирования образования продукта (кетонного продукта) и смещения равновесия реакции вправо с достижением более высокой конверсии (в идеальном случае 100%).
Пример 2. Зависимость активности ω-трансаминазы от рН в реакции превращения (8)-аМВА в ацетофенон
Синтез осуществляли в кварцевой кювете, используя 50 мкл пирувата с концентрацией 100 мМ, 4 единицы/мл ω-ТА ^Ьгю Πυνίηΐίδ (далее по тексту также VII) (12 мкл) и 388 мкл натрийфосфатного буфера, 50 мМ, с увеличением величины рН от рН 6,0 до рН 7,4 с интервалом 0,2. Реакцию инициировали 50 мкл (8)-аМВА с концентрацией 100 мМ в качестве аминодонора и увеличение поглощения измеряли в диапазоне 250-260 нм. Увеличение поглощения обусловлено образованием ацетофенона. Другие субстраты лишь незначительно влияют на поглощение, так что скорость реакции можно определить измерением поглощения ацетофенона. Величину, достигаемую при рН 7,4, принимали за 100%, а относительную активность для других величин рН рассчитывали так, как показано на фиг. 2. На фиг. 2 показана относительная активность V. Диу1аЙ8 ω-ТА в зависимости от данной величины рН.
На фиг. 2 показано, что при более низких величинах рН, таких как 6,0, 6,2 или 6,4, все еще сохраняется значительная активность, например 11% при рН 6,0. Таким образом, данный результат демонстрирует, что даже при низком значении рН возможно получить значительную активность трансаминазы, обеспечивающую взаимодействие субстратов при более низком значении рН, что, в свою очередь, позволяет увеличить конверсию при использовании ΡΌΟ, которая чувствительна при более высоких значениях рН.
Пример 3. Асимметричный синтез В3АР при различных величинах рН
В данном примере показан асимметричный синтез В3АР из аланина и В3ОР в присутствии и отсутствие пируватдекарбоксилазы (ΡΌΟ).
Для каждого значения рН 6,0, 6,4 и 7,0 проводили три серии экспериментов. В опыте 1 использовали ΡΌΟ из 2утотоиа§ тоЬШк (клеточный экстракт дикорастущего вида), в опыте 2 использовали 2утоЬас1ег ра1тае (рекомбинант в Е.сой) и опыт 3 был контрольным без ΡΌΟ, в котором использовали только трансаминазу. Чтобы получить сравнимые результаты, определяли активности обеих ΡΌΟ при рН 6 в пробе со спиртовой дегидрогеназой, и то же количество по активности ΡΌΟ использовали в опытах, указанных выше.
В табл. 3 даны объемы использованного вещества в мкл.
Реакцию в каждом опыте проводили троекратно при значениях рН 6,0, 6,4 и 7,0. Значения рН регулировали буфером из раствора субстрата В3ОР. Активность ΡΌΟ составляла примерно 2,5 единиц/мл при рН 7. Концентрации субстрата и фермента также представлены ниже в табл. 3. Через 10, 30, 60 и 120 мин отбирали образец объемом 100 мкл и реакцию останавливали добавлением 100 мкл 1М ΝηΘΗ. Количественное определение концентрации В3АР проводили при использовании метода СЕ (капиллярного электрофореза).
- 4 017070
Таблица 3
Ниже в табл. 4 показаны данные по конверсии при различных значениях рН для различных РОС. Очевидно, что применение РОС приводит к увеличению конверсии. Также видно, что РОС из Ζ. ра1тае (Ζρα) вызывает несколько более высокую конверсию, чем РОС из Ζ. тоЫ118 ^то). Также видно, что при более низких значениях рН, таких как 6,0 или 6,4, наблюдается заметное увеличение конверсии в опытах с использованием РОС, что отсутствует в контрольном опыте без использования РОС. В реакциях всех опытов можно наблюдать, что через 120 мин конверсия снижается.
Таблица 4
| Конверсия | |||||||||
| Опыт 1 (Ζ1Ώθ) | Опыт 2 (Яра) | Опыт 3 (контрольный) | |||||||
| Время | рН 6 | рН | рН 7 | рН 6 | рН | рН 7 | рН 6 | рН | рН 7 |
| (мин) | 6,4 | 6,4 | 6,4 | ||||||
| 10 | 7,5 | 5,5 | 2,4 | 12,1 | 9,8 | 4,9 | 2,5 | 2,4 | 2,0 |
| 30 | 11,4 | 14,2 | 9,6 | 16,0 | 17,8 | 15,2 | 5,1 | 4,8 | 4,6 |
| 60 | 8,3 | η. ά. | 12,4 | 11,0 | и. Р. | 16,3 | 7,0 | п.Р. | п.Р. |
п.б. = не определено
Пример 4. Стабильность В3АР в присутствии различных реагентов реакции асимметрического синтеза
Чтобы показать стабильность В3АР в присутствии различных реагентов, проводили инкубирование 1 мМ В3АР в реакционной пробирке в течение 3 ч в присутствии различных веществ, перечисленных ниже в табл. 5.
Пример осуществляли при рН 6 и 7 (натрийфосфатный буфер). Сразу после взаимодействия веществ отбирали первый образец Т0, и другой образец, Т1, отбирали через 3 ч. После экстракции амина определяли концентрацию по внутреннему стандарту сравнения (аМВА) методом СЕ. По разнице полученных концентраций рассчитывали % снижения концентрации В3АР (см. фиг. 3).
- 5 017070
| Таблица 5 | |
| Опыт | 1 мМ ВЗАР и реагенты |
| 1 | 50 мМ Иа-Р-буфера |
| 2 | 5 мМ ВЗОР |
| 3 | 10 мМ 0,Ь-аланинра |
| 4 | кофакторы (0,1 мМ РЬР, ТРР, 5 мМ Мд) |
| 5 | кофакторы + ВЗОР + аланин |
| 6 | 145 мкл клеточного экстракта Ζ. тоЬШз (50% глицерина) |
| 7 | 10 мкл клеточного экстракта Е. соИ (рекомбинант гра |
| ΡΌΟ | |
| 8 | 55 мкл/11 мкл УЕ1-ТА (рН 6/7) |
| 9 | 50 мкл Абе-ТА |
| 10 | νίΙ-ΤΑ + ВЗОР + кофакторы |
| 11 | 1 мМ ацетальдегида |
| 12 | РГТ-ТА + ацетальдегид ' |
| 13 | Абе-ТА + ацетальдегид |
Из фиг. 3 очевидно, что различные реактивы существенно не влияют на концентрацию В3АР (опыты 1-9). На реакции опытов 11-13 влияет ацетальдегид. Из опыта 11 видно, что в отсутствие трансаминазы концентрация В3АР не снижается, тогда как в присутствии трансаминазы и ацетальдегида можно наблюдать сильное снижение концентрации В3АР. Ацетальдегид действует в реакции трансаминазы как аминоакцептор, такой как пируват, и, как очевидно, приводит к снижению концентрации В3АР.
Пример 5. Взаимодействие В3АР с аминоакцепторами пирувата и ацетальдегида
В данном примере показана активность трансаминазы V. Йиу1а118 и А. йепйпйсапз ω-ТА по отношению к субстратам В3АР и пирувата и по отношению к В3АР и ацетальдегиду.
Осуществляли взаимодействие 2 мМ В3АР с 2 мМ пирувата или 2 мМ ацетальдегида (36 мкл А1сайдепез йепйпйсапз (Айе) или 6 мкл νώπο Йиу1а118 (VII) -трансаминазы на 0,5 мкл реакционного объема, соответствующие 2 единица/мкл трансаминазы взаимодействовали в течение 30 мин). На фиг. 4 показаны полученные результаты. Соответственно, В3АР превращался в В3ОР под действием обоих ферментов, как с пируватом, так и ацетальдегидом, без каких-либо заметных различий.
Пример 6. Асимметричный синтез В3АР при пониженном давлении и при рН 6
В данном примере пониженное давление прилагали к реакционной смеси для реакции асимметричного синтеза с образованием ВЗАР. В качестве контрольного опыта ту же реакцию осуществляли при нормальном давлении и без РОС.
Условия реакции:
Конечный объем: 1,5 мл мМ натрийфосфатный буфер, рН 6 300 мкл νώΐ'ίίο Йиу1а118-трансаминазы мкл 2ра-РОС (соответствует 8 единиц/мл при рН 7), 5 мМ В3ОР мМ Ό,Ε-аланина
0,1 мМ ТРР, РЬР 5 мМ МдСЬ
Пониженное давление создавали при использовании ротационного испарителя (150 мбар). Измерения проводили методом СЕ.
На фиг. 5 показана конверсия В3ОР в В3АР во времени для различных давлений. Видно, что конверсия почти не зависит от прилагаемого давления. Конверсия при давлении 150 мбар, относительно максимально достигаемой конверсии, аналогична конверсии при давлении 1000 мбар.
Пример 7. Сравнение различных пируватдекарбоксилаз
В данном примере использовали три различные пируватдекарбоксилазы для асимметричного синтеза ВЗАР. Условия реакции соответствовали тем же, что и в примере 6, за исключением того, что величина рН составляла 7. Использовали РОС из Ζ. тоЫ1щ, Ζ. ра1тае и РОС от Вюса1а1уйс8 (каталожный № РОС-101). Активности РОС по ΑΌΗ-пробе были идентичными (1,6 единиц/мл).
Из фиг. 6 видно, что все три РОС по существу приводят к сравнимым степеням конверсии.
Пример 8. Влияние концентраций фермента и косубстрата на конверсию В3ОР в В3АР
В данном примере показано влияние концентрации РОС на конверсию В3ОР в В3АР при использовании аланина в качестве аминодонора. Кроме того, показано влияние концентрации аланина на конверсию В3ОР в В3АР.
- 6 017070
Условия реакции представлены в примере 6, за исключением того, что использовали величину рН 7 и за исключением того, что указано иначе. Использовали /утоЪаДег ра1тае ТА.
Как видно из фиг. 7, в реакции без РИС 5-кратное увеличение концентрации аланина с 5 мМ до 25 мМ приводит к удвоению степени конверсии (12% в отличие от 5,3% конверсии через 2 ч). В присутствии РИС конверсия возрастает при 5-кратном избытке аланина в два раза (30% по сравнению с 17% через 90 мин). В том случае, когда при обычной концентрации аланина количество РИС увеличивается от 1,6 единиц/мл до 50 единиц/мл, конверсия также возрастает, однако только меньше, чем в 2 раза (29% по сравнению с 17% через 40 мин).
В следующей серии экспериментов показано влияние объединенного избытка аланина и избытка РИС, в обоих случаях при рН 6 и 7. Реакция протекает быстрее при рН 6, хотя после достижения конверсии 49% концентрация В3АР также снижается быстрее. При рН 7 конверсия возрастет до 56%.
Пример 9. Влияние концентрации аланина на ферментативный синтез В3 АР
В четырех реакциях использовали концентрации аланина 5, 25, 110, 300 и 500 мМ. Для каждого опыта осуществляли один контрольный без РОС и одну реакцию с РОС. Величину рН доводили до рН 7,0. Образцы для испытаний отбирали каждые полчаса в течение всего времени реакции 3 ч. Времена реакции для концентраций, приведенных на фиг. 8, составляли для 5 мМ - 40 мин, для 2 5 мМ - 60 мин и для 110-500 мМ - 90 мин.
На фиг. 8 показана конверсия В3АР при асимметрическом синтезе при повышенных концентрациях аланина.
Фиг. 8 четко показывает, что конверсия может достигать 60-70%. Ясно, что увеличение концентрации с 25 до 110 мМ существенно влияет на конверсию В3ОР в В3АР и что при дальнейшем увеличении концентрации до 500 мМ конверсия меняется незначительно. Влияние РОС на конверсию снижается при увеличении концентрации аланина.
По данным контрольной реакции константу равновесия реакции синтеза В3АР рассчитывали следующим образом:
[ВЗАР] = [Руг] [гзор] = сда-[ил/>] и
\.Л1а} = сал-1ВЗАР]
Таким образом, используя измеренную концентрацию ВЗАР, константу равновесия рассчитывают следующим образом:
[РЗЛР]-[Руг]^__________[ЮЛР]2___ [ЯЗОР] · [А1а] (сОВЗОР - [ВЗАР]) · [см/в - [ВЗАР]
Таблица 6
| с0, [А1а] | {ВЗАР] | К· 10‘3 |
| 5 | 5 | 3,2 |
| 25 | 12 | 3,1 |
| 110 | 24 | 3,5 |
| 300 | 35 | 3,2 |
| 500 | 40 | 2,8 |
| Среднее значение К | 3,1 |
В табл. 6 представлены расчетные величины. Так, константа равновесия для реакции с В3АР составляет 3,1 х 10-3. Таким образом, субстрат В3АР является подходящим субстратом для асимметричного синтеза в отличие от других кетонов.
Пример 10. Влияние РЬР на асимметричный синтез В3АР
В данном примере показано влияние РЬР (пиридоксаль-5'-фосфата) на конверсию В3ОР в В3АР. Изучены следующие три реакции:
a) Опыт 1 с использованием 0,1 мМ РЬР без добавления дополнительного количества РЬР
b) В опыте' 2 РЬР добавляли в ходе реакции, как только исчезал желтый цвет, обусловленный присутствием РЬР в реакционной среде. Для этой цели добавляли 1-2 мкл насыщенного раствора РЬР, в результате чего восстанавливался яркий желтый цвет. Влияние на концентрацию амина за счет незначительного увеличения объема составляло менее 1%, чем можно пренебречь.
c) РЬР не содержался и РЬР не добавляли.
Условия реакции: 1 мл конечный объем, 37 мкл Уй-трансаминазы, 5 мМ В3ОР, фосфатный буфер рН 7,0. Концентрация Ь-аланина составляла 110 мМ. Измерения проводили методом СЕ, а в качестве внутреннего стандарта сравнения использовали а-МВА.
- 7 017070
На фиг. 9 представлена зависимость изменения концентрации во времени. Оказывается, что нет заметного влияния на максимальную конверсию при добавлении РЬР в опыте Ь) по сравнению с опытом а). Оказывается, что реакция без РЬР протекает медленнее, хотя она достигает той же конверсии, что и другие реакции. Добавление РЬР в опыте Ь) вызывает несколько большее снижение концентрации амина по сравнению с холостым опытом.
Пример 11. Асимметричный синтез В3АР с удалением ацетальдегида введением азота
Следующий пример детализирует один из путей улучшения конверсии асимметричного синтеза ВЗАР удалением ацетальдегида.
Условия реакции:
Субстраты:
мМ ВЗОР
500 мМ Ь-аланин
Ед/мл Ζρα-РЬС мкл/мл У11-трансаминазы
Натрийфосфатный буфер рН 7,0
0,1 мМ РЬР и ТРР (триаминдифосфата) мМ МдС12
Поскольку реакционный раствор содержал значительное количество белка, то наблюдалась сильная тенденция к пенообразованию. Чтобы подавить данное ценообразование, в реакционную среду добавляли 0,6 мкл концентрата пеногасителя А (81дта, силиконовый полимер). Концентрат подавлял образование пены в значительной степени, но не мог ингибировать ее образование. Чтобы исключить ингибирование ферментов названным концентратом пеногасителя, проводили контрольный опыт без добавления азота, но с добавкой пеногасителя А.
Поскольку добавление сухого азота привело к испарению воды из реакционного раствора, азот увлажняли.
На фиг. 10 показаны рассчитанные значения относительной конверсии В3АР. Контрольный опыт с пеногасителем А (^-контрольный: УН-ТА, Ζρα-РОС. пеногаситель, без Ν2) без добавления азота точно соответствует реакции в опыте без пеногасителя А (УН-ТА, Ζρα-РЬС). Таким образом, на ферменты не влияет добавление другого концентрата. Опыт с реакцией (опыт Ν2: УН-ТА, Ζρα-РОС, пеногаситель, Ν2) при использовании азота показал увеличенную конверсию через 60, 90 и 180 мин.
Пример 12. Асимметричный синтез В3АР в различных условиях
Условия реакции:
Конечный объем: 1 мл мкл УН-трансаминазы единиц/мл Ζρα-РЬС или РОС от Вюса1с11у11с8 или
3,2 единиц/мл Ζιηο-РОС 5 мМ В3ОР
500 мМ Ь-аланина
Кофакторы 0,1 мМ РЬР или ТРР, 5 мМ МдС12 рН 7, фосфат натрия
На фиг. 10 показана конверсия В3ОР в В3АР для вышеназванных реакций, сочетающих УНтрансаминазу с каждой РОС.
На фиг. 10 опыт, обозначенный Ν2, представляет собой опыт с использованием реакционной смеси, содержащей УН-трансаминазу и Ζρα-РЬС и обработанной азотом и пеногасителем А. Ν2 контрольный представляет собой образец, содержащий УН-трансаминазу, Ζρα-РЬС и пеногаситель А без обработки азотом. Очевидно, что конверсия существенно увеличивается от N2 контрольного до №-образца вследствие присутствия азота, который подавали в реакционный раствор. Таким образом, введение азота в газообразном виде в реакционную среду значительно увеличивает конверсию В3ОР в В3АР.
Пример 13. Асимметричный синтез В3АР в присутствии спиртовой дегидрогеназы (АПН)
Для удаления из реакционной смеси ацетальдегида, образовавшегося в реакции РОС, может быть использована АЭН для превращения ацетальдегида в этанол.
Условия реакции:
110 мМ Ь-аланина мМ В3ОР мкл/мл УН-трансаминазы единиц/мл Ζρα-РЬС
0,1 мМ РЬР и ТРР мМ МдС12
Натрийфосфатный буфер рН 7
Представлены следующие опыты с реакциями:
Реакционный опыт 1: реакция с РОС и трансаминазой.
Реакционный опыт 2: реакция с РОС и трансаминазой с 5 мМ этанола (конечная концентрация) с добавлением ΝΛΩΗ.
Реакционный опыт 3: реакция с РОС, АОН и №1ЬН.
- 8 017070
Использованной ΑΌΗ была ΑΌΗ из Бассйаготусек сегеущае с активностью между 50 и 100 единиц/мл. РИС-активность составляла 32 единицы/мл.
В начале реакции в реакционную смесь опыта 2 добавляли абсолютный этанол в конечной концентрации 5 мМ. В начале реакции в опытах 2 и 3 добавляли 5 мкмоль ΝΑΌΗ, соответствующие конечной концентрации 5 мМ ΝΑΌΗ. Через 10 мин в каждом случае добавляли дополнительно еще 2,4 мкмоль ΝΑΌΗ (4 мкл 0,6 М раствора ΝΑΌΗ в 50 мМ фосфатном буфере, рН 8,5). Раствор ΝΑΌΗ хранили на льду и получали непосредственно перед применением.
Результаты представлены на фиг. 11 и в табл. 5. Очевиден эффект ΑΌΗ. Конверсия увеличивается приблизительно до 90%. Реакция контрольного опыта 2 без ΑΌΗ и 5 мМ этанола лишь незначительно отклонялась от реакции контрольного опыта 1. Таким образом, добавление ΑΌΗ значительно увеличивает конверсию при асимметричном синтезе В3АР из ВЗОР.
Claims (15)
1. Способ получения оптически активного хирального амина, включающий:
a) обеспечение аминоакцептора и аланина в качестве аминодонора, где аминоакцептор выбран из группы, состоящей из фенилпировиноградной кислоты, ее соли, пировиноградной кислоты, ее соли, ацетофенона, 2-кетоглутарата, 3-оксобутирата, 2-бутанона, 3-оксопирролидина (3-ОР), 3пиридилметилкетона (3-РМК), сложного этилового эфира 3-оксомасляной кислоты (3-ОВЕЕ), сложного метилового эфира 3-оксопентановой кислоты (3-ОРМЕ), Ж1-Ьос-3-оксопиперидинона, Ж1-Ьос-3оксопирролидина (В3ОР), 3-оксопиперидина, алкил-3-оксобутаноатов, метоксиацетона, 1-оксотетралона и 4-(3-пиридил)-2-бутанона;
b) осуществление взаимодействия аминоакцептора и аминодонора с (Я)- или (Б)-селективной омега-трансаминазой;
c) получение желаемого оптически активного хирального амина и пирувата в качестве альфакетонного побочного продукта и
й) удаление пирувата из реакционной смеси посредством декарбоксилазы, причем взаимодействие аминоакцептора и аминодонора с (Я)- или (Б)-селективной омегатрансаминазой осуществляют в реакционной смеси, имеющей ρΗ от 5,0 до 9,5, при времени реакции 4070 мин в температурном интервале от 10 до 65°С.
2. Способ по п.1, где декарбоксилазой является пируватдекарбоксилаза (РИС).
3. Способ по п.2, где ацетальдегид, образованный под действием РОС, удаляют из реакционной смеси.
4. Способ по п.3, где ацетальдегид удаляют реакцией по меньшей мере с одним ферментом.
5. Способ по п.4, где ферментом является спиртовая дегидрогеназа.
6. Способ по п.3, где ацетальдегид удаляют, пропуская через реакционную смесь газообразный азот.
7. Способ по п.3, где ацетальдегид удаляют, прилагая к реакционной смеси пониженное давление.
8. Способ по п.3, где ацетальдегид удаляют химическими способами.
9. Способ по любому из предшествующих пунктов, где полученные амины выбраны из группы, содержащей фенилаланин, аланин, 3-аминопиперидин, алкил-3-аминобутаноаты, 3-аминопирролидин (3ΑР), 3-пиридил-1-этиламин (3-РЕЛ). Ж1-Ьос-3-аминопирролидин (Β3ΑΤ), сложный этиловый эфир 3аминомасляной кислоты (3-ΑΒΕΕ), сложный метиловый эфир 3-аминопентановой кислоты (3-ΑРМЕ), аметилбензиламин (α-ΜΒΑ), 1-аминотетралин, а-метил-4-(3-пиридил)бутанамин, глутаминовую кислоту, β-аминобутират, вторбутиламин, метоксиизопропиламин и 1-Ы-Ьос-3-аминопиперидин.
10. Способ по любому из предшествующих пунктов, где ω -трансаминазой является трансаминаза из У1Ьгю Πιινίαΐίδ или ΑΚαΙί^^κ йепИпйсапк.
11. Способ по любому из предшествующих пунктов, где оптически активный хиральный амин, полученный на стадии с) или й), удаляют из реакционной смеси.
12. Способ по любому из предшествующих пунктов, где способ осуществляют в реакционной смеси, имеющей ρΗ от 6,0 до 7,0.
13. Способ по п.12, где ρΗ реакционной смеси составляет от 6,0 до 6,9.
14. Способ получения физиологически активного соединения, выбранного из группы, включающей производные 3-аминопирролидона, цефалоспорин, производные цефалоспорина, гетероциклические бороновые кислоты, Ь-дигидроксифенилаланин (Ь-Оора), а-метилдофа, Ό-фенилглицин, βгидроксифенилглицин, фосфинотрицин, пиримидопроизводные и производные пирролидона, где использован способ по любому из пп.1-13.
15. Способ получения оптически активного 3-АР или оптически активного Β3ΑР, включающий:
a) обеспечение 3-ОР или В3ОР в качестве аминоакцептора и аминодонора,
b) осуществление взаимодействия аминоакцептора и аминодонора с (Я)- или (Б)-селективной трансаминазой и
c) получение оптически активного хирального 3-АР или оптически активного хирального Β3ΑР и
- 9 017070 альфа-кетона как побочного продукта.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| EP06002859A EP1818411A1 (en) | 2006-02-13 | 2006-02-13 | Process for the preparation of optically active chiral amines |
| PCT/EP2007/001222 WO2007093372A1 (en) | 2006-02-13 | 2007-02-13 | Process for the preparation of optically active chiral amines |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| EA200870262A1 EA200870262A1 (ru) | 2009-02-27 |
| EA017070B1 true EA017070B1 (ru) | 2012-09-28 |
Family
ID=36686005
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| EA200870262A EA017070B1 (ru) | 2006-02-13 | 2007-02-13 | Способ получения оптических активных хиральных аминов |
Country Status (17)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US9074228B2 (ru) |
| EP (4) | EP1818411A1 (ru) |
| JP (2) | JP5430945B2 (ru) |
| KR (1) | KR101294499B1 (ru) |
| CN (1) | CN101384723B (ru) |
| AT (1) | ATE469233T1 (ru) |
| AU (1) | AU2007214717B2 (ru) |
| BR (1) | BRPI0707454A2 (ru) |
| CA (1) | CA2637821A1 (ru) |
| DE (1) | DE602007006765D1 (ru) |
| DK (1) | DK1987152T3 (ru) |
| EA (1) | EA017070B1 (ru) |
| ES (3) | ES2767898T3 (ru) |
| IL (3) | IL192637A (ru) |
| MX (1) | MX2008010416A (ru) |
| PT (1) | PT1987152E (ru) |
| WO (1) | WO2007093372A1 (ru) |
Families Citing this family (36)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP1818411A1 (en) * | 2006-02-13 | 2007-08-15 | Lonza AG | Process for the preparation of optically active chiral amines |
| US8168412B2 (en) | 2006-05-29 | 2012-05-01 | Kaneka Corporation | Method for producing optically-active amine compound, recombinant vector, and transformant containing the vector |
| TWI433674B (zh) | 2006-12-28 | 2014-04-11 | Infinity Discovery Inc | 環杷明（ｃｙｃｌｏｐａｍｉｎｅ）類似物類 |
| DE102007042600A1 (de) | 2007-09-07 | 2009-03-12 | Evonik Degussa Gmbh | Verfahren zur Herstellung von enantiomerenangereichten Aminen |
| DE102007060705A1 (de) * | 2007-12-17 | 2009-06-18 | Evonik Degussa Gmbh | ω-Aminocarbonsäuren oder ihre Lactame, herstellende, rekombinante Zellen |
| US8716479B2 (en) | 2007-12-27 | 2014-05-06 | Infinity Pharmaceuticals, Inc. | Methods for stereoselective reduction |
| EP2385983B1 (en) | 2009-01-08 | 2017-12-20 | Codexis, Inc. | Transaminase polypeptides |
| JP5707344B2 (ja) | 2009-02-26 | 2015-04-30 | コデクシス， インコーポレイテッド | トランスアミナーゼ生体触媒 |
| KR101185603B1 (ko) * | 2009-03-23 | 2012-09-24 | 주식회사 아미노룩스 | 광학적으로 순수한 아미노산을 얻는 방법 |
| US8921079B2 (en) | 2009-06-22 | 2014-12-30 | Codexis, Inc. | Transaminase reactions |
| CN102574791A (zh) * | 2009-08-05 | 2012-07-11 | 无限药品股份有限公司 | 环杷明类似物的酶促转氨基反应 |
| ES2562458T3 (es) * | 2009-09-02 | 2016-03-04 | Lonza Ag | Proceso de identificación y preparación de una transaminasa omega específica de (R) |
| WO2011159910A2 (en) | 2010-06-17 | 2011-12-22 | Codexis, Inc. | Biocatalysts and methods for the synthesis of (s)-3-(1-aminoethyl)-phenol |
| EP2606139B1 (en) | 2010-08-16 | 2015-07-15 | Codexis, Inc. | Biocatalysts and methods for the synthesis of (1r,2r)-2-(3,4-dimethoxyphenethoxy)cyclohexanamine |
| WO2012037217A1 (en) | 2010-09-14 | 2012-03-22 | Infinity Pharmaceuticals, Inc. | Transfer hydrogenation of cyclopamine analogs |
| JP5936545B2 (ja) | 2010-09-28 | 2016-06-22 | 株式会社カネカ | グルタミン酸に高活性を示す新規アミノ基転移酵素、およびこれをコードする遺伝子、ならびにこれらの利用法 |
| US9029113B2 (en) | 2011-03-11 | 2015-05-12 | Kaneka Corporation | Modified aminotransferase, gene thereof, and method for producing optically active amino compound using same |
| KR101479718B1 (ko) * | 2012-07-06 | 2015-01-08 | 연세대학교 산학협력단 | 오메가 트랜스아미나아제의 조기질 순환을 이용한 광학 활성 아미노산의 제조방법 |
| JP2015533501A (ja) * | 2012-10-18 | 2015-11-26 | サンド・アクチエンゲゼルシヤフト | インドリン誘導体の調製方法 |
| KR101493311B1 (ko) * | 2012-12-13 | 2015-02-16 | 연세대학교 산학협력단 | 광학 활성 아민 및 호모알라닌의 제조방법 |
| US9777301B2 (en) | 2012-12-13 | 2017-10-03 | Industry-Academic Cooperation Foundation, Yonsei University | Method for producing optically active amine compounds by deracemization |
| KR101479717B1 (ko) * | 2013-02-27 | 2015-01-08 | 연세대학교 산학협력단 | 트랜스아미나제를 이용한 광학활성 알킬아민과 아릴알킬아민의 동시생산방법 |
| WO2015078267A1 (zh) * | 2013-11-26 | 2015-06-04 | 凯莱英医药集团（天津）股份有限公司 | 转氨酶及其应用 |
| CN103865964A (zh) * | 2014-03-14 | 2014-06-18 | 上海朴颐化学科技有限公司 | 转氨酶法合成(r)-3-氨基哌啶的方法 |
| AU2016271468B2 (en) | 2015-06-04 | 2020-01-02 | Sol-Gel Technologies Ltd. | Topical formulations for delivery of hedgehog inhibitor compounds and use thereof |
| CN105112468B (zh) * | 2015-10-14 | 2019-01-08 | 厦门大学 | 一种多酶耦联体系制备手性胺的方法 |
| CN105200089B (zh) * | 2015-10-15 | 2018-09-11 | 江苏暨明医药科技有限公司 | (s)-1-叔丁氧羰基-3-羟基哌啶制备方法及其装置 |
| CN116121316A (zh) | 2016-03-02 | 2023-05-16 | 巴斯夫欧洲公司 | 制造l-草胺膦的方法 |
| CN106676142B (zh) * | 2016-11-01 | 2021-01-22 | 凯莱英医药集团（天津）股份有限公司 | 一种手性氨基杂环化合物及其衍生物的制备方法 |
| WO2018207888A1 (ja) * | 2017-05-10 | 2018-11-15 | 株式会社カネカ | ラメルテオンの製造法 |
| CN107805648B (zh) * | 2017-10-10 | 2020-09-11 | 凯莱英生命科学技术(天津)有限公司 | 制备具有多个手性中心的胺化合物的方法 |
| WO2020051188A1 (en) | 2018-09-05 | 2020-03-12 | Agrimetis, Llc | Methods for improving yields of l-glufosinate |
| CN109370998B (zh) * | 2018-11-30 | 2020-08-04 | 江南大学 | 一种催化效率提高的ω-转氨酶突变体I215F |
| CN110724675B (zh) * | 2019-10-31 | 2021-02-02 | 宁波酶赛生物工程有限公司 | 转氨酶催化剂和酶法合成(r)-1-叔丁氧羰基-3-氨基哌啶的方法 |
| CN112410383B (zh) * | 2020-12-17 | 2022-07-12 | 永农生物科学有限公司 | 利用生物多酶偶联法制备l-草铵膦的方法 |
| CN112626142B (zh) * | 2020-12-17 | 2022-10-18 | 永农生物科学有限公司 | 利用生物多酶偶联法制备l-草铵膦的方法 |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5300437A (en) * | 1989-06-22 | 1994-04-05 | Celgene Corporation | Enantiomeric enrichment and stereoselective synthesis of chiral amines |
| RU2116347C1 (ru) * | 1989-06-22 | 1998-07-27 | Селджин Корпорейшн | Способ стереоселективного синтеза хиральных аминов |
| RU2213142C2 (ru) * | 1998-03-11 | 2003-09-27 | Селгро | Способ получения хирального амина |
Family Cites Families (17)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| HU193902B (en) | 1983-09-01 | 1987-12-28 | Genetics Inst | Process for preparing l-amino acids by means of transamination |
| ES2144999T3 (es) | 1986-06-04 | 2000-07-01 | Hoechst Schering Agrevo Gmbh | Procedimiento para la preparacion de l-leucina terciaria mediante transaminacion. |
| JPS63304986A (ja) | 1987-06-04 | 1988-12-13 | Daicel Chem Ind Ltd | プラスミド |
| JPH0787778B2 (ja) | 1987-12-10 | 1995-09-27 | 田辺製薬株式会社 | 新規微生物及びそれを用いるｌ−アミノ酸の製法 |
| US5424202A (en) | 1988-08-31 | 1995-06-13 | The University Of Florida | Ethanol production by recombinant hosts |
| US6197558B1 (en) | 1997-05-19 | 2001-03-06 | Nsc Technologies | Transaminase biotransformation process |
| IL125658A0 (en) * | 1997-08-18 | 1999-04-11 | Hoffmann La Roche | Ccr-3 receptor antagonists |
| DE19919848A1 (de) * | 1999-04-30 | 2000-11-02 | Aventis Cropscience Gmbh | Verfahren zur Herstellung von L-Phosphinothricin durch enzymatische Transaminierung mit Aspartat |
| CA2424890C (en) | 2000-10-06 | 2014-06-03 | Elsworth Biotechnology Limited | Ethanol production in gram-positive bacteria with a stabilized mutation in lactate dehydrogenase |
| US6576794B2 (en) * | 2000-12-28 | 2003-06-10 | Kao Corporation | Process for production of ether amine |
| TWI377253B (en) * | 2001-04-16 | 2012-11-21 | Martek Biosciences Corp | Product and process for transformation of thraustochytriales microorganisms |
| ATE404538T1 (de) | 2002-04-29 | 2008-08-15 | Merck & Co Inc | Tetrahydropyranylcyclopentyltetrahydroisochino- linmodulatoren der chemokinrezeptoraktivität |
| WO2004013097A1 (en) * | 2002-08-01 | 2004-02-12 | Basilea Pharmaceutica Ag | Process for the preparation of amino-pyrrolidine derivatives |
| WO2005106008A2 (en) | 2004-04-27 | 2005-11-10 | Archer-Daniels-Midland Company | Enzymatic decarboxylation of 2-keto-l-gulonic acid to produce xylose |
| WO2006126498A1 (ja) * | 2005-05-23 | 2006-11-30 | Kaneka Corporation | 新規アミノ基転移酵素、およびこれをコードする遺伝子、ならびにこれらの利用法 |
| EP1818411A1 (en) * | 2006-02-13 | 2007-08-15 | Lonza AG | Process for the preparation of optically active chiral amines |
| EP1897956A1 (en) * | 2006-09-06 | 2008-03-12 | Lonza AG | Process for preparation of optically active amines by optical resolution of racemic amines employing a bacterial omega-transaminase |
-
2006
- 2006-02-13 EP EP06002859A patent/EP1818411A1/en not_active Withdrawn
-
2007
- 2007-02-13 CA CA002637821A patent/CA2637821A1/en not_active Abandoned
- 2007-02-13 PT PT07711521T patent/PT1987152E/pt unknown
- 2007-02-13 BR BRPI0707454-9A patent/BRPI0707454A2/pt not_active IP Right Cessation
- 2007-02-13 AT AT07711521T patent/ATE469233T1/de not_active IP Right Cessation
- 2007-02-13 DE DE602007006765T patent/DE602007006765D1/de active Active
- 2007-02-13 ES ES10002780T patent/ES2767898T3/es active Active
- 2007-02-13 EP EP07711521A patent/EP1987152B1/en not_active Expired - Fee Related
- 2007-02-13 MX MX2008010416A patent/MX2008010416A/es active IP Right Grant
- 2007-02-13 AU AU2007214717A patent/AU2007214717B2/en not_active Ceased
- 2007-02-13 WO PCT/EP2007/001222 patent/WO2007093372A1/en active Application Filing
- 2007-02-13 KR KR1020087019720A patent/KR101294499B1/ko active IP Right Grant
- 2007-02-13 CN CN2007800052396A patent/CN101384723B/zh not_active Expired - Fee Related
- 2007-02-13 EP EP10002779.6A patent/EP2202317B1/en not_active Not-in-force
- 2007-02-13 DK DK07711521.0T patent/DK1987152T3/da active
- 2007-02-13 ES ES10002779.6T patent/ES2626645T3/es active Active
- 2007-02-13 EA EA200870262A patent/EA017070B1/ru not_active IP Right Cessation
- 2007-02-13 ES ES07711521T patent/ES2345734T3/es active Active
- 2007-02-13 EP EP10002780.4A patent/EP2202318B1/en active Active
- 2007-02-13 JP JP2008554659A patent/JP5430945B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2007-02-13 US US12/223,730 patent/US9074228B2/en not_active Expired - Fee Related
-
2008
- 2008-07-06 IL IL192637A patent/IL192637A/en not_active IP Right Cessation
-
2012
- 2012-04-15 IL IL219163A patent/IL219163A0/en unknown
- 2012-04-15 IL IL219164A patent/IL219164A0/en unknown
-
2013
- 2013-05-08 JP JP2013098609A patent/JP2013188217A/ja active Pending
-
2015
- 2015-06-16 US US14/740,646 patent/US9551018B2/en active Active
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5300437A (en) * | 1989-06-22 | 1994-04-05 | Celgene Corporation | Enantiomeric enrichment and stereoselective synthesis of chiral amines |
| RU2116347C1 (ru) * | 1989-06-22 | 1998-07-27 | Селджин Корпорейшн | Способ стереоселективного синтеза хиральных аминов |
| RU2213142C2 (ru) * | 1998-03-11 | 2003-09-27 | Селгро | Способ получения хирального амина |
Non-Patent Citations (6)
| Title |
|---|
| HWANG ET AL.: "High-throughput screening method for the identification of active and enantioselective omega-transaminases", ENZYME AND MICROBIAL TECHNOLOGY, vol. 34, 2004, pages 429-436, XP002392214 * See page 429 (right column), page 430 (Scheme 1), page 431 (3.1) and page 432 (Scheme 2) * * |
| IWASAKI ET AL.: "Microbial synthesis of (R)- and (S)-3,4-dimethoxyamphetamines through stereoselective transamination", BIOTECHNOLOGY LETTERS, vol. 25, 2003, pages 1843-1846, XP002392925, cited in the application, * See page 1844 (left column) and page 1846 * * |
| SHIN ET AL.: "Asymmetric synthesis of chiral amines with omega-transaminase", BIOTECHNOLOGY AND BIOENGINERING, vol. 65, 1999, pages 206-211, XP002392941, * See page 206 (Abstract and Introduction; V. fluvialis JS17), page 207 (left column and Table 1) and page 208 (right column) * * |
| Ya. KOL'MAN i dr. Naglyadnaya biokhimiya, Moskva, Mir, 2000, str. 150-151 * |
| YUN ET AL.: "Omega-amino acid:pyruvate transaminase from Alcaligenes denitrificans Y2k-2: a new catalyst for kinetic resolution of beta-amino acids and amines", APPLIED AND ENVIRONMENTAL MICROBIOLOGY, vol. 70, 2004, pages 2529-2534, XP009029815, * See page 2530 (left column) and page 2532 (Table 2) * * |
| YUN ET AL.: "Use of enrichment culture for directed evolution of the vibrio fluvialis JS17 omega-transaminase, which is resistant to product inhibition by aliphatic ketones", APPLIED AND ENVIRONMENTAL MICROBIOLOGY, vol. 71, 2005, pages 4220-4224, XP002430234, * See page 4220 (Introduction) * * |
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EA017070B1 (ru) | Способ получения оптических активных хиральных аминов | |
| Parmeggiani et al. | Synthetic and therapeutic applications of ammonia-lyases and aminomutases | |
| JP5102297B2 (ja) | 細菌性オメガアミノ基転移酵素を利用したラセミアミン混合物の光学的分解能による光学活性ｎ−保護３−アミノピロリジン又は光学活性ｎ−保護３−アミノピペリジン及び対応するケトンの調製方法 | |
| KR0147827B1 (ko) | 비대칭 아민의 거울상 이성질 농축 및 입체선택적 합성방법 | |
| Faraci et al. | Racemization of alanine by the alanine racemases from Salmonella typhimurium and Bacillus stearothermophilus: energetic reaction profiles | |
| JPH025885A (ja) | 光学活性なシアンヒドリンの酵素的製造方法 | |
| JPS63500983A (ja) | 結合アミノトランスフェラ−ゼを用いたアミノ酸の合成 | |
| Eliot et al. | The dual-specific active site of 7, 8-diaminopelargonic acid synthase and the effect of the R391A mutation | |
| Angelaccio | Extremophilic SHMTs: from structure to biotechnology | |
| Zhao et al. | Preparation of optically active β-hydroxy-α-amino acid by immobilized Escherichia coli cells with serine hydroxymethyl transferase activity | |
| Planas et al. | Computational study of enantioselective carboligation catalyzed by benzoylformate decarboxylase | |
| FR2536415A1 (fr) | Procede de synthese enzymatique de la l-serine | |
| Willeman et al. | Estimation of kinetic parameters by progress curve analysis for the synthesis of (R)-mandelonitrile by Prunus amygdalus hydroxynitrile lyase | |
| Matsui et al. | Creation of thermostable L-tryptophan dehydrogenase by protein engineering and its application for L-tryptophan quantification | |
| Barbolina et al. | Serine 51 residue of Citrobacter freundii tyrosine phenol-lyase assists in C-α-proton abstraction and transfer in the reaction with substrate | |
| Intaraboonrod et al. | Efficient Conversion of Threonine to Allothreonine Using Immobilized Amino Acid Racemase and Temperature Cycles | |
| Christian | Thiamin diphosphate-dependent enzymes and their carboligation activity | |
| JPH05153987A (ja) | Ｌ−セリン溶液の調製法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s) |
Designated state(s): AM AZ BY KG MD TJ TM |
|
| MM4A | Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s) |
Designated state(s): KZ |
|
| MM4A | Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s) |
Designated state(s): RU |