EA016653B1 - Способы и композиции для ингибирования ангиогенеза - Google Patents

Способы и композиции для ингибирования ангиогенеза Download PDF

Info

Publication number
EA016653B1
EA016653B1 EA200970175A EA200970175A EA016653B1 EA 016653 B1 EA016653 B1 EA 016653B1 EA 200970175 A EA200970175 A EA 200970175A EA 200970175 A EA200970175 A EA 200970175A EA 016653 B1 EA016653 B1 EA 016653B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
saponin
linked
steroidal saponin
saccharide
angiogenesis
Prior art date
Application number
EA200970175A
Other languages
English (en)
Other versions
EA200970175A1 (ru
Inventor
Майкл Джон Стори
Кеннет Майкл Уэйт
Original Assignee
Онколоджи Рисерч Интернешнл Лимитед
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority claimed from AU2006904195A external-priority patent/AU2006904195A0/en
Application filed by Онколоджи Рисерч Интернешнл Лимитед filed Critical Онколоджи Рисерч Интернешнл Лимитед
Publication of EA200970175A1 publication Critical patent/EA200970175A1/ru
Publication of EA016653B1 publication Critical patent/EA016653B1/ru

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7042—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings
    • A61K31/7048—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having oxygen as a ring hetero atom, e.g. leucoglucosan, hesperidin, erythromycin, nystatin, digitoxin or digoxin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/56—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids
    • A61K31/565—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids not substituted in position 17 beta by a carbon atom, e.g. estrane, estradiol
    • A61K31/568—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids not substituted in position 17 beta by a carbon atom, e.g. estrane, estradiol substituted in positions 10 and 13 by a chain having at least one carbon atom, e.g. androstanes, e.g. testosterone
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/56—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids
    • A61K31/58—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids containing heterocyclic rings, e.g. danazol, stanozolol, pancuronium or digitogenin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7028—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages
    • A61K31/7034—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages attached to a carbocyclic compound, e.g. phloridzin
    • A61K31/704—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages attached to a carbocyclic compound, e.g. phloridzin attached to a condensed carbocyclic ring system, e.g. sennosides, thiocolchicosides, escin, daunorubicin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/06—Antiasthmatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/02—Drugs for dermatological disorders for treating wounds, ulcers, burns, scars, keloids, or the like
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/04—Antipruritics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/06—Antipsoriatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/04—Drugs for skeletal disorders for non-specific disorders of the connective tissue
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/02—Ophthalmic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/04—Antineoplastic agents specific for metastasis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/14—Vasoprotectives; Antihaemorrhoidals; Drugs for varicose therapy; Capillary stabilisers

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Vascular Medicine (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Emergency Medicine (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Ophthalmology & Optometry (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Steroid Compounds (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Abstract

Настоящее изобретение относится к способу ингибирования ангиогенеза в биологической системе. Способ включает в себя применение к биологической системе эффективного количества стероидного сапонина.

Description

Настоящая заявка заявляет приоритет на основании Австралийской предварительной патентной заявки № 2006904195, поданной 3 августа 2006 г., содержание которой следует рассматривать как включенное в настоящее описание в виде ссылки.
Область техники, к которой относится изобретение
Настоящее изобретение относится к способам и композициям для ингибирования ангиогенеза.
Настоящее изобретение также относится к способам и композициям для ингибирования пролиферации и/или миграции эндотелиальных клеток.
Уровень техники настоящего изобретения
Ангиогенез представляет собой процесс образования новых кровеносных сосудов из уже существующих кровеносных сосудов посредством роста и миграции эндотелиальных клеток в процессе, называемом прорастание.
Рост эндотелиальных клеток является важнейшим этапом в ангиогенном процессе. Органы имеют четко очерченные границы, обозначенные окружающими неклеточными структурами, называемыми базальными мембранами, которые составлены из ткани белков внеклеточного матрикса (ВКМ), преимущественно ламининов, коллагена IV типа и протогликанов. Ангиогенез начинается с разрушения окружающих базальную мембрану эндотелиальных клеток, которые выстилают изнутри просвет кровеносных сосудов. Разрушение базальной мембраны запускается ферментами, выделяемыми эндотелиальными клетками и лейкоцитами.
Эндотелиальные клетки мигрируют сквозь разрушенную базальную мембрану тогда, когда индуцируются ангиогенными стимуляторами. Мигрирующие клетки образуют отросток за пределы родительского кровеносного сосуда. Мигрирующие эндотелиальные клетки пролиферируют, и отростки объединяются, образуя каппилярные петли, таким образом образуя новый кровеносный сосуд.
Контроль ангиогенеза представляет собой в высокой степени регулируемый процесс, включающий действие ряда ангиогенных стимуляторов и ингибиторов. Полагают, что как контролируемый, так и неконтролируемый ангиогенез происходит схожим образом.
В нормальных физиологических условиях люди и животные подвергаются ангиогенезу только в очень специальных ограниченных ситуациях. Например, ангиогенез обычно наблюдается только при заживлении ран, зародышевом и эмбриональном развитии и образовании желтого тела, эндометрия и плаценты.
Однако со многими заболеваниями и состояниями связан неконтролируемый или нежелательный ангиогенез. Индуцирование ангиогенеза является отличительным признаком рака, характеризуемого распространением опухолевых клеток по всему телу. Процесс, посредством которого опухолевые клетки мигрируют от первичной локализации к вторичной локализации, называется метастазирование, и он представляет собой основное различие между доброкачественным и злокачественным ростом и является наибольшей клинической проблемой рака. К сожалению, свыше 50% солидных опухолей метастазируют на момент диагностики.
Существует большое количество данных в пользу роли ангиогенеза в опухолевом росте, и обычно считают, что рост любой солидной опухоли во многом зависит от данного процесса. Ангиогенез играет решающую роль в двух стадиях развития опухоли. Во-первых, ангиогенез необходим для разрастания опухолевой массы до размеров, больших нескольких миллиметров. Без образования новой сосудистой системы клетки в опухолевой массе не получат достаточного кровоснабжения для развития до размеров, больших столь малого размера. Однако когда начинается васкуляризация опухоли, тогда опухолевая масса может увеличиваться.
Васкуляризация опухоли играет также значительную роль в развитии вторичных опухолей. Васкуляризация опухоли позволяет опухолевым клеткам входить в кровоток и циркулировать по всему телу. После того как опухолевые клетки покидают первичную локализацию и располагаются во вторичной (метастатической) локализации, последующий ангиогенез позволяет вторичной опухолевой массе расти и увеличиваться. Таким образом, предотвращение ангиогенеза может приводить не только к уменьшению роста опухоли в ее первичной локализации, но предотвращение ангиогенеза может также ингибировать или уменьшать миграцию опухолевых клеток из первичной локализации в другие части организма (метастазирование).
Помимо образования опухолей существуют также различные заболевания и состояния, вызываемые ангиогенезом или связанные с неконтролируемым или нежелательным ангиогенезом. Сюда входят диабетическая ретинопатия, ретролентальная фиброплазия, неоваскулярная глаукома, псориаз, ангиофиброма, иммунное и неиммунное воспаление (включая ревматический артрит), распространение капиллярных сосудов в атеросклеротических бляшках, ангиома и саркома Капоши. Ангиогенез может также иметь место в ревматоидном суставе, ускоряя разрушение сустава путем создания притока лейкоцитов с последующим высвобождением воспалительных медиаторов.
Ангиогенез также играет важную роль в роговице и сетчатке пациентов с определенными нарушениями зрения, например глазной неоваскулярной болезнью. Данное заболевание характеризуется инвазией новых кровеносных сосудов в структуры глаза, такие как сетчатка или роговица. Оно является наиболее частой причиной слепоты и связано с большим количеством заболеваний глаза. При возрастной
- 1 016653 макулярной дегенерации связанные нарушения зрения вызываются врастанием хориоидальных капилляров через дефекты в оболочке Бруха с пролиферацией сосудисто-волокнистой ткани под ретинальным пигментным эпителием.
Хроническое воспаление также может вызывать патологический ангиогенез. Болезненные состояния, такие как язвенный колит и болезнь Крона, демонстрируют гистологические изменения с врастанием новых кровеносных сосудов в воспаленные ткани. Другая патологическая роль ангиогенеза обнаружена при атеросклерозе. Было показано, что бляшки, образуемые в просвете кровеносных сосудов, обладают ангиогенным стимулирующим действием.
Ангиогенез также принимает участие в репродукции и заживлении ран. В репродукции ангиогенез является важной стадией овуляции и имплантации бластулы после оплодотворения. Предотвращение ангиогенеза может применяться для индуцирования аменореи, для блокирования овуляции или для предотвращения имплантации бластулы. При заживлении ран вредным побочным эффектом оперативного вмешательства могут быть избыточное восстановление или фиброплазия, и они могут быть вызваны или усилены ангиогенезом. Частым осложнением оперативного вмешательства является спайкообразование, приводящее к таким нарушениям, как непроходимость тонкой кишки.
Принятый в настоящее время способ лечения заболеваний, вызывающих неконтролируемый или нежелательный ангиогенез, является неадекватным. Соответственно существует необходимость в новых способах и композициях, которые бы ингибировали неконтролируемый или нежелательный ангиогенез.
Настоящее изобретение является результатом определения того, что стероидные сапонины обладают антиангиогенной способностью, и относится к способам и композициям для ингибирования ангиогенеза.
В настоящем описании ссылку на патентный документ или другой объект, которая дана в качестве предшествующего уровня техники, не следует рассматривать как допущение, что документ или объект был известен, или что информация, содержащаяся в нем, была частью общедоступных сведений на дату приоритета любого из пунктов формулы изобретения.
Сущность изобретения
Настоящее изобретение вытекает из исследований способности стероидных сапонинов ингибировать ангиогенез. В частности, было обнаружено, что стероидные сапонины обладают способностью ингибировать ангиогенез в ряде ίη νίνο и ех νίνο модельных систем. Данное открытие показывает, что стероидные сапонины обладают значительной антиангиогенной способностью.
Соответственно настоящее изобретение предлагает способ ингибирования ангиогенеза в биологической системе, причем указанный способ включает введение в биологическую систему эффективного количества стероидного сапонина.
Настоящее изобретение предлагает также композицию, применяемую для ингибирования ангиогенеза в биологической системе, причем указанная композиция содержит эффективное количество стероидного сапонина.
Настоящее изобретение предлагает также применение стероидного сапонина для получения лекарственного средства для ингибирования ангиогенеза в биологической системе.
Настоящее изобретение предлагает также композицию, включающую стероидный сапонин и антиангиогенное средство.
Настоящее изобретение предлагает также способ уменьшения количества антиангиогенного средства, введенного в биологическую систему для достижения желаемого уровня ингибирования ангиогенеза, причем указанный способ включает введение в биологическую систему эффективного количества стероидного сапонина.
Настоящее изобретение предлагает также способ ингибирования пролиферации и/или миграции эндотелиальных клеток в биологической системе, причем указанный способ включает введение в биологическую систему эффективного количества стероидного сапонина.
Настоящее изобретение предлагает также композицию, применяемую для ингибирования пролиферации и/или миграции эндотелиальных клеток в биологической системе, причем указанная композиция включает эффективное количество стероидного сапонина.
Настоящее изобретение предлагает также применение стероидного сапонина для получения лекарственного средства для ингибирования пролиферации и/или миграции эндотелиальных клеток в биологической системе.
Настоящее изобретение предлагает также способ уменьшения количества антиангиогенного средства, введенного в биологическую систему для достижения желаемого уровня ингибирования пролиферации и/или миграции эндотелиальных клеток, причем указанный способ включает введение в биологическую систему эффективного количества стероидного сапонина.
Настоящее изобретение предлагает также комбинированный продукт, включающий стероидный сапонин и антиангиогенное средство, где стероидный сапонин и антиангиогенное средство предлагаются в форме для совместного введения субъекту или в форме для раздельного введения субъекту.
- 2 016653
Настоящее изобретение предлагает также фармацевтическую композицию, содержащую дельтонин.
Настоящее изобретение предлагает также применение дельтонина для получения лекарственного средства.
Настоящее изобретение предлагает также фармацевтическую композицию, содержащую просапогенин А.
Настоящее изобретение предлагает также применение просапогенина А для получения лекарственного средства.
Настоящее изобретение предлагает также фармацевтическую композицию, содержащую аспирин.
Настоящее изобретение предлагает также применение аспирина для получения лекарственного средства.
Различные термины, которые применяются в данном описании, имеют значения, которые хорошо понятны средним специалистам. Однако для упрощения поиска некоторые из этих терминов будут определены далее.
Термин гликозид, как он применяется в данной спецификации, следует понимать в значении соединения, которое содержит сахаридный (сахарный) участок (моносахарид, дисахарид или полисахарид), связанный с агликоновым (несахаридным) компонентом - тритерпеном, или стероидом, или стероидным алкалоидом. В большинстве случаев сахаридный (сахарный) участок связан с С-3 положением агликона, хотя объем настоящего изобретения предусматривает и другие соединения. Например, фуростанольные гликозиды, которые содержат сахарид, присоединенный в С-26 положении, и спиростанольные гликозиды представляют собой подклассы стероидных сапонинов.
Термин сапонин, как он применяется в данной спецификации, следует понимать в значении гликозида, содержащего сахарид (сахар), присоединенный к агликону, как правило, в С-3 положении агликона.
Термин стероидный сапонин, как он применяется в данной спецификации, следует понимать в значении гликозида, содержащего одну или несколько сахаридных единиц (включая одну или несколько моносахаридных, дисахаридных или полисахаридных единиц), присоединенных к агликону, который не содержит атом азота.
При этом следует понимать, что объем термина стероидный сапонин включает в себя любые соли или любые другие производные соединений, которые функционально эквивалентны с точки зрения их способности усиливать активность противораковой терапии.
Стероидный агликон также называют генином или сапогенином, и данные термины можно применять взаимозаменяемо в данном описании, и следует понимать, что они обозначают несахаридную часть молекулы сапонина.
Термин сахарид А-(1^и)-сахарид В, как он применяется в данной спецификации, следует понимать в том смысле, что сахарид А связан через С-1 с С-η сахарида В, причем η представляет собой целое число.
Например, полисахарид с обычным названием хакотриоза представляет собой α-Ьрамнопиранозил-(Ш2)-[а-Ь-рамнопиранозил-(Ш4)]-в-О-глюкопиранозид. Сокращенной формой обозначения в соответствии с рекомендациями ГОРАС, применяемой в настоящем описании, является Кба 2, [Кба 4], О1е.
Термин субъект, как он применяется в данной спецификации, следует понимать в значении любого человеческого или животного субъекта. В этой связи следует понимать, что настоящее изобретение включает в свой объем ветеринарные применения. Например, животный субъект может представлять собой млекопитающее, примата, домашний скот (например, лошадь, корову, овцу, свинью или козу), домашнее животное (например, собаку, кошку), лабораторное животное (например, мышь, крысу, морскую свинку, птицу), животное ветеринарного значения или животное экономического значения.
Термин лечение и его варианты, как он применяется в данной спецификации, следует понимать в значении терапевтического воздействия эффективного количества стероидного сапонина. Например, указанный термин включает в свой объем терапевтическое воздействие для получения одного или нескольких из следующих результатов: (ί) ингибирование или предупреждение роста первичной опухоли у субъекта, включая уменьшение роста первичной опухоли после резекции; (ίί) ингибирование или предупреждение роста и образования одной или нескольких вторичных опухолей у субъекта; (ш) ингибирование или предупреждение ангиогенеза у субъекта; (ίν) ингибирование пролиферации и/или миграции эндотелиальных клеток у субъекта; (ν) увеличение предполагаемой продолжительности жизни субъекта по сравнению с состоянием до лечения и (νί) улучшение качества жизни субъекта по сравнению с состоянием до лечения.
Термин ингибирование, как он применяется в данной спецификации, следует понимать в значении ослабления развития процесса, включая один или несколько моментов из начала, скорости, возможности, продолжения или окончания процесса.
Термин ангиогенез, как он применяется в данной спецификации, следует понимать в значении образования новых кровеносных сосудов (неоваскуляризации), например, в ткани или органе.
- 3 016653
Термин биологическая система, как он применяется в данной спецификации, следует понимать в значении любой многоклеточной системы, и он включает в себя от изолированных групп клеток до целых организмов. Например, биологическая система может представлять собой клетки в тканевой культуре, ткань или орган, или всего человека, такого как человек, страдающий от результатов нежелательного или неконтролируемого ангиогенеза, или заболевания, или состояния, связанного с неконтролируемым или нежелательным ангиогенезом.
Термин антиангиогенное средство, как он применяется в данной спецификации, следует понимать в значении средства, которое обладает способностью ингибировать ангиогенез в биологической системе.
Краткое описание чертежей
Фиг. 1 демонстрирует эффект от повышения концентрации дельтонина на рост сосудов из эксплантатов аорты;
фиг. 2 - типичный пример воздействия только ДМСО на эксплантаты аорты с помощью световой микроскопии или окрашивания лектином Рйс-В8-1;
фиг. 3 - типичный пример воздействия 10 мкМ дельтонина на эксплантаты аорты с помощью световой микроскопии или окрашивания лектином Рйс-В8-1;
фиг. 4 - воздействие диосцина, дельтонина, триллина, просапогенина А и сорафениба на СЭ31 окрашивание кровеносных сосудов в анализах Аидю8роиде™, как показатель воздействия данных соединений на среднее количество индуцированных кровеносных сосудов;
фиг. 5 - воздействие диосцина, дельтонина, триллина, просапогенина А и сорафениба на относительную индукцию ангиогенеза при помощи ЬРОР в анализах Аидю8роиде™;
фиг. 6 - воздействие диосцина, дельтонина, триллина, просапогенина А и сорафениба на объем крови в анализах Аидю8роиде™;
фиг. 7 - воздействие диосцина, дельтонина, триллина, просапогенина А и сорафениба на индукцию ангиогенеза при помощи ЬРОР в анализах Аидю8роиде™.
Общее описание настоящего изобретения
Как указано выше, в одном варианте осуществления настоящее изобретение предлагает способ ингибирования ангиогенеза в биологической системе, причем указанный способ включает в себя стадию введения в биологическую систему эффективного количества стероидного сапонина.
Биологическая система в различных вариантах осуществления настоящего изобретения представляет собой любую многоклеточную систему и включает в себя от изолированных групп клеток до целых организмов. Например, биологическая система может представлять собой клетки в тканевой культуре, ткань или орган, или всего человека, страдающего от результатов нежелательного или неконтролируемого ангиогенеза, или заболевания, или состояния, связанного с неконтролируемым или нежелательным ангиогенезом.
В этой связи следует понимать, что биологическая система представляет собой любую биологическую систему, в которой ангиогенез происходит, или в которой ангиогенез может происходить.
В одном варианте осуществления биологическая система представляет собой человека или животное. В одном конкретном варианте осуществления биологическая система представляет собой человека или животное, в котором ангиогенез связан с заболеванием или состоянием, которое вызвано нежелательным или неконтролируемым ангиогенезом.
Например, биологическая система может представлять собой человека или животное, страдающих от или склонных к ангиогенезу, связанному с образованием или увеличением солидных опухолей, ангиофибромой, роговичной неоваскуляризацией, сетчаточной/хориоидальной неоваскуляризацией, диабетической ретинопатией, возрастной макулярной дегенерацией, артериовенозными мальформациями, артритом, ревматоидным артритом, остеоартритом, псориатическим артритом, волчанкой, заболеваниями соединительной ткани, синдромом Ослера-Вебера, атеросклеротическими бляшками, псориазом, пиогенной гранулемой, ретролентальными фиброплазиями, склеродермией, грануляциями, гемангиомой, трахомой, гемофилическими суставами, сосудистыми спайками, гипертрофическими рубцами, заболеваниями или состояниями, связанными с острым или хроническим воспалением, заболеваниями или состояниями, связанными с хроническим воспалением легкого, включая астму, саркоидозом, воспалительными заболеваниями кишечника, болезнью Крона или язвенным колитом.
В одном варианте осуществления настоящее изобретение можно применять для профилактики и/или лечения рака у субъекта.
В другом варианте осуществления настоящее изобретение можно применять для предупреждения роста первичной и/или вторичной опухоли и ингибирования и/или предупреждения метастазирования.
Примеры рака включают карциному, рак мочевого пузыря, рак кости, опухоли мозга, рак молочной железы, рак шейки матки, колоректальный рак, включая рак толстой кишки, прямой кишки, ануса и аппендикса, рак пищевода, болезнь Ходжкина, рак почек, рак гортани, лейкемию, рак печени, рак легкого, лимфому, меланому, заносы и диспластические невусы, многочисленные миеломы, рак мышцы, неходжкинскую лимфому, рак ротовой полости, рак яичников, рак поджелудочной железы, рак простаты, саркому, рак кожи, рак желудка, рак семенников, тератому, рак щитовидной железы и рак матки.
- 4 016653
Субъект в различных вариантах осуществления настоящего изобретения может представлять собой человека или животное. Например, животный субъект может представлять собой млекопитающее, примата, домашний скот (например, лошадь, корову, овцу, свинью или козу), домашнее животное (например, собаку, кошку), лабораторное животное (например, мышь, крысу, морскую свинку, птицу), животное ветеринарного значения или животное экономического значения.
В одном варианте осуществления субъект представляет собой человека.
Сапонины обычно подразделяют на три главных класса: (1) тритерпеновые гликозиды; (ίί) стероидные гликозиды и (ΐϊϊ) гликозиды стероидных алкалоидов. Всех их объединяет присоединение одного или нескольких сахарных единиц к агликону, как правило, в положении С-3. Стероидные сапонины в основных чертах описаны в Но81ейтапи К. аий Мат81ои А. (2005) Сйетщйу & рйаттасо1оду о! иа1ита1 ртобисй: 8ароши5. СатЬййде Ишуегайу Рге§8.
Как обсуждалось выше в настоящем описании, стероидные сапонины не содержат атом азота в агликоновом участке.
Следует понимать, что стероидные сапонины в различных вариантах осуществления настоящего изобретения включают встречающиеся в природе стероидные сапонины и не встречающиеся в природе стероидные сапонины (т.е. химически синтезированные стероидные сапонины). Кроме того, следует также понимать, что стероидный сапонин в различных вариантах осуществления настоящего изобретения также включает в себя пролекарства стероидных сапонинов, производные стероидных сапонинов, включая, например, любые сложные эфиры, кетоны, карбоновые кислоты, соли, замещенные формы, галоидированные формы или другие содержащие гетероатом формы, ненасыщенные формы или любое другое функциональное производное.
Сахаридная часть стероидных сапонинов в различных вариантах осуществления настоящего изобретения может содержать одну или несколько сахаридных единиц, таких как моносахаридная, дисахаридная единицы или полисахаридная единица.
Следует также понимать, что стероидный сапонин в различных вариантах осуществления настоящего изобретения может также содержать агликон с сахаридом, присоединенным в одном или нескольких положениях агликонового участка.
В одном варианте осуществления стероидный сапонин включает в себя сахарид, присоединенный в одном положении сапогенинового компонента стероидного сапонина.
Как обсуждалось выше, сахаридная единица может представлять собой моносахарид, дисахарид или полисахарид. Сахарид может состоять из подходящего моносахарида, такого как Ό-глюкоза (С1е), Ьрамноза (КЪа), Ό-галактоза (Са1), Ό-глюкуроновая кислота (С1еА), Ό-ксилоза (Ху1), Ь-арабиноза (Ага), Όфукоза (Рис), Ό-галактуроновая кислота (Са1А). Сахаридная единица может также представлять собой замещенный сахар, такой как аминосахар, сульфатированный сахар, ацилированный сахар, Νацилированный сахар и функциональные производные любого из вышеупомянутых моносахаридов.
Подобным образом, дисахарид может представлять собой любую комбинацию двух моносахаридов, как описано выше.
Полисахариды в различных вариантах осуществления настоящего изобретения могут быть линейными или разветвленными и включают любую комбинацию двух или нескольких моносахаридов, включая моносахарид, описанный ранее в настоящем описании.
В одном варианте осуществления полисахарид состоит из от 1 до 6 моносахаридных единиц.
В этой связи и как описано ранее в настоящем описании, полисахариды, как правило, описывают в контексте расположения составляющих моносахаридов.
В одном варианте осуществления сахарид стероидного сапонина состоит из 1 моносахаридной единицы. Примером моносахарида является глюкоза с химическим наименованием β-Ό-глюкопиранозид, которая, когда присоединена к агликону диосгенину в положении С-3, имеет обычное название триллин.
В другом варианте осуществления сахарид стероидного сапонина состоит из 2 моносахаридных единиц, т.е. дисахарида. Примером дисахарида является Кйа 2, С1с с химическим наименованием α-Ьрамнопиранозил-(1^2)-в-О-глюкопиранозид, который, когда присоединен к агликону диосгенину в положении С-3, имеет обычное название просапогенин А.
В другом варианте осуществления полисахарид состоит из 3 сахаридных единиц, т.е. трисахарида. Хакотриозид представляет собой распространенный пример трисахаридной единицы, в которой гликозильная группа трех сахаридов включает в себя две рамнозные единицы, соединенные с глюкозной единицей, которая в свою очередь соединена гликозидной связью с положением С-3 сапогенина. Хакотриоза представляет собой а-Ь-рамнопиранозил-(1^2)-[а-Ь-рамнопиранозил-(1^4)]-в-О-глюкопиранозид. Сокращенной формой обозначения в соответствии с рекомендациями ЮТАС, применяемой в настоящем описании, является Р11а 2, [Кйа 4], С1с.
Подобным образом солатриозид представляет собой гликозильную группу из трех сахаридов, содержащую одну рамнозную единицу и нерамнозную сахаридную единицу, каждая из которых связана с третьей сахаридной единицей, которая в свою очередь соединена гликозидной связью с положением С-3
- 5 016653 сапогенина.
Примером тетрасахарида является [Кйа 4, Кка 4], Кйа 2, С1с с химическим наименованием [ос-Ьрамнопиранозил-(1 ^4)-а-Ь-рамнопнранозил-(1 ^4)]-а-Ь-рамнопиранозил-(1 ^4)-в-О-глюкопиранозид, который, когда присоединен к агликону диосгенину в положении С-3, имеет обычное название аспирин.
Другим примером тетрасахарида является С1с 4, [Ху1 3], Кйа 2, Ага с химическим наименованием βО-глюкопиранозил-( 1 ^4)-[в-Э-ксилопиранозил-( 1 ^3)]-о-Ь-рамнопиранозил-( 1 ^2)-о-Ь-арабинозид.
Как обсуждалось выше, стероидные сапонины не содержат атом азота в агликоновом участке.
В одном варианте осуществления стероидный сапонин в различных вариантах осуществления настоящего изобретения основан на сапогенине с химической формулой I или II, а именно
где Κι, К2, К4, Кб, К7, Иц, Κ!2, К14, Κι5 и Κι7 независимо представляют собой Н, ОН, =0, фармакологически приемлемые сложноэфирные группы или фармакологически приемлемые эфирные группы;
К5 представляет собой Н, когда С-5,С-6 представляет собой одинарную связь, и отсутствует, когда С-5,С-6 представляет собой двойную связь;
А представляет собой или О одновременно с тем, что В представляет собой СН2, или В представляет собой О одновременно с тем, что А представляет собой СН2;
К27А представляет собой Н одновременно с тем, что К27В представляет собой СН3, или К27А представляет собой СН3 одновременно с тем, что К27В представляет собой Н;
К3 содержит гликозильную группу, соединенную через атом кислорода со стероидным сапогенином в С-3; или фармацевтически приемлемую соль, или их производное.
где Κι, К2, К4, К6, К7, Иц, Κ!2, К14, Κ!5 и К,- независимо представляют собой Н, ОН, =0, фармакологически приемлемые сложноэфирные группы или фармакологически приемлемые эфирные группы;
К5 представляет собой Н, когда С-5,С-6 представляет собой одинарную связь, и отсутствует, когда С-5,С-6 представляет собой двойную связь;
К22 представляет собой или гидроксильную, или алкоксильную группу, когда С-20,С-22 представляет собой одинарную связь, или отсутствует, когда С-20,С-22 представляет собой двойную связь;
К27А представляет собой Н одновременно с тем, что К27В представляет собой СН3, или К27А представляет собой СН3 одновременно с тем, что К27В представляет собой Н;
К28 представляет собой Н или сахарид; или фармацевтически приемлемую соль, или их производное;
К3 содержит гликозильную группу, соединенную через атом кислорода со стероидным сапогенином в С-3; или фармацевтически приемлемую соль, или их производное.
Примеры стероидных сапогенинов включают спиростанольные агликоны, такие как диосгенин, ямогенин (неодиосгенин), юккагенин, сарсасапогенин, тигогенин, смилагенин, гекогенин, гитогенин, конвалламарогенин, неорускогенин и солагенин; и фуростанольные агликоны, такие как протодиосгенин, псевдопротодиосгенин, метилпротодиосгенин, протоямогенин и метилпротоямогенин.
В одном варианте осуществления стероидный сапонин представляет собой хакотриозидстероидный сапонин. В другом варианте осуществления стероидный сапонин представляет собой солатриозид-стероидный сапонин.
Примеры хакотриозид-стероидных сапонинов включают диосцин, который состоит из сапогенина
- 6 016653 диосгенина, связанного через положение С-3 с хакотриозой, диосгенин, связанный через положение С3 с другим хакотриозидом, тигогенин, связанный через положение С-3 с хакотриозидом, сарсасапогенин, связанный через положение С-3 с хакотриозидом, смилагенин, связанный через положение С-3 с хакотриозидом, юккагенин, связанный через положение С-3 с хакотриозидом, и ямогенин, связанный через положение с хакотриозидом.
Примеры солатриозидных стероидных сапонинов включают грациллин, который представляет собой диосгенин, связанный через положение С-3 с солатриозидом (ККа 2, [С1с 3], С1с); дельтонин (диосгенин, связанный через положение С-3 с солатриозидом ККа 2, [С1с 4], С1с); диосгенин, связанный через положение С-3 с солатриозой (ККа 2, [С1с 3], Са1) [в этом контексте диосгенин, связанный с (ККа 2, [С1с 3], Са1), называется диосгенинсолатриоза]; диосгенин, связанный через положение С-3 с другим солатриозидом; тигогенин, связанный через положение С-3 с солатриозидом; сарсасапогенин, связанный через положение С-3 с солатриозидом; смилагенин, связанный через положение С-3 с солатриозидом; юккагенин, связанный через положение С-3 с солатриозидом, и ямогенин, связанный через положение С-3 с солатриозидом.
Простые моносахаридные стероидные сапонины широко распространены в царстве растений. Как правило, моносахарид связан с агликоном через положение С-3, и примеры включают триллин, который представляет собой диосгенин, связанный через положение С-3 с глюкозой. Другие сапогенины, связанные с глюкозой через положение С-3, включают сарсасапогенин, родеасапогенин и ямогенин. Некоторые сапогенины связаны через положение С-3 с другим моносахаридом, таким как арабиноза, например ионогенин и конваллагенин, или связаны через положение С-3 с галактозой и т.д.
Примеры дисахаридных стероидных сапонинов включают сарсасапогенин, связанный через положение С-3, например, с (Ху1 2, Са1 3); (С1с 2, С1с 3); (С1с 3, С1с 3); смилагенин, связанный через положение С-3 с (С1с 2, С1с 3); (С1с 2, Са1 3); самогенин, тигогенин, гитогенин, аллиогенин, рускогенин, пенногенин, цепагенин и диосгенин, связанные через положение С-3 с (ККа 2, С1с 3).
Диосгениновые гликозиды из вида Эюхсогса имеют большое коммерческое значение в качестве исходного сырья для стероидных гормонов. Гликозиды диосгенина и его С-25 изомера ямогенина входят в число наиболее часто описанных спиростанольных сапонинов.
Примеры встречающихся в природе стероидных спиростанольных сапогенинов с двойной связью С-5, С-6 в кольце В приведены в табл. 1
Таблица 1
- 7 016653
Таблица 2
Примеры встречающихся в природе стероидных фуростанольных сапогенинов ряда протоспиростана с двойной связью С-5,С-6 в кольце В и одинарной связью С-20,С-22 в кольце Е приведены в табл. 3
Примером встречающихся в природе стероидных фуростанольных сапогенинов ряда протоспиростана с одинарной связью С-5,С-6 в кольце В и одинарной связью С-20,С-22 в кольце Е является прото тигогенин.
Примером встречающихся в природе стероидных фуростанольных сапогенинов ряда псевдоспиростана с двойной связью С-5,С-6 в кольце В и двойной связью С-20,С-22 в кольце Е является псевдодиосгенин.
Примером встречающихся в природе стероидных фуростанольных сапогенинов ряда псевдопротоспиростана с двойной связью С-5,С-6 в кольце В и двойной связью С-20,С-22 в кольце Е является псевдопротодиосгенин.
В одном варианте осуществления стероидный сапонин представляет собой сапогенин диосгенин, связанный через положение С-3 с сахаридом.
В другом варианте осуществления стероидный сапонин представляет собой диосцин или грациллин, где диосцин представляет собой сапогенин диосгенин, связанный через положение С-3 с хакотриозой (КЕа 2, [Кйа 4], С1с), и грациллин представляет собой диосгенин, связанный в положении С-3 с солатриозидомом (КЕа 2, [С1с 3], С1с).
В другом варианте осуществления стероидный сапонин представляет собой дельтонин, где дельтонин представляет собой сапогенин диосгенин, связанный через положение С-3 с К11а 2, [С1с 4], С1с.
В другом варианте осуществления стероидный сапонин представляет собой сапогенин диосгенин, связанный через положение С-3 с солатриозой (КЕа 2, [С1с 3], Са1). В этом контексте диосгенин, связанный с (КЕа 2, [С1с 3], Са1), называется диосгенинсолатриоза.
В другом варианте осуществления стероидный сапонин представляет собой сапогенин диосгенин, связанный через положение С-3 с сахаридом.
В другом варианте осуществления стероидный сапонин представляет собой сапогенин тигогенин, связанный через положение С-3 с сахаридом.
В другом варианте осуществления стероидный сапонин представляет собой сапогенин сарсасапогенин, связанный через положение С-3 с сахаридом.
В другом варианте осуществления стероидный сапонин представляет собой сапогенин смилагенин, связанный через положение С-3 с сахаридом.
В другом варианте осуществления стероидный сапонин представляет собой сапогенин юккагенин, связанный через положение С-3 с сахаридом.
В другом варианте осуществления стероидный сапонин представляет собой сапогенин ямогенин,
- 8 016653 связанный через положение С-3 с сахаридом.
В другом варианте осуществления стероидный сапонин представляет собой основанный на фуростаноле стероидный сапонин, за исключением конвалламарозида.
В одном конкретном варианте осуществления стероидный сапонин выбирают из группы, состоящей из дельтонина (диосгенин Кйа2, [О1с4], С1с), диосцина (диосгенин Кйа2, [Кйа4], С1с), просапогенина А (диосгенин В11а2. С1с) и аспирина (диосгенин [Кйа 4, Кйа 4], Кйа 2, С1с).
В случае дельтонина, просапогенина А и аспирина любой из этих стероидных сапонинов можно использовать в фармацевтической композиции.
Соответственно такие стероидные сапонины можно применять для получения лекарственного средства.
Такое лекарственное средство можно применять, например, для достижения одной или нескольких целей из ингибирования роста раковой клетки; ингибирования образования и/или роста первичной и/или вторичной опухоли; профилактики и/или лечения рака, ингибирования ангиогенеза, ингибирования пролиферации и/или миграции эндотелиальных клеток, ингибирования и/или предупреждения метастазирования и уменьшения количества антиангиогенного средства, введенного в биологическую систему для достижения желаемого уровня ингибирования ангиогенеза.
Как обсуждалось выше в настоящем описании, стероидный сапонин в различных вариантах осуществления настоящего изобретения может быть получен из естественных источников, произведен в способах синтеза или с помощью частичного синтеза или модификации, примененных к встречающимся в природе соединениям или промежуточным продуктам.
Экстракция, выделение и идентификация стероидного сапонина в различных вариантах осуществления настоящего изобретения могут быть произведены при помощи способов, известных в данной области техники.
Например, некоторые стероидные сапонины производят из растительных источников. Другие источники стероидных сапонинов могут легко быть найдены в литературе, например как описано в НоисИтапп К. апб Матйоп А. (2005). Сйетщйу & рйаттасо1оду о! па1ига1 ртобиск: 8арошп5. СатЬпбдс Ишуегайу Ргекк, главы 1-3 и 6. Обычные названия стероидных сапонинов использованы в соответствии с текстом выше и Окбопату о! №11ига1 РгобисК Сйартап апб На11, СЯС (2004).
Количество стероидного сапонина, введенного в биологическую систему в различных вариантах осуществления настоящего изобретения, не ограничено специальным образом и, как правило, лежит в таком диапазоне, что мишень подвергается воздействию концентрации от 0,1 до 20 мкМ стероидного сапонина.
Стероидный сапонин может применяться в форме и в концентрации, подходящих для того, чтобы позволить средству достигнуть желаемого места приложения действия и иметь желаемый эффект, такой как ингибирование ангиогенеза.
Введение стероидного сапонина может осуществляться в течение любого времени, подходящего для того, чтобы получить желаемый эффект. Человеку или животному стероидный сапонин может вводиться, например, орально, парентерально, топически или любым другим подходящим образом, и поэтому следует принимать во внимание время транзита средства.
Например, введение стероидного сапонина субъекту в различных вариантах осуществления настоящего изобретения может осуществляться в один или несколько моментов времени от заблаговременного до начала ангиогенеза и/или одновременно с возникшим ангиогенезом. Например, в случае ингибирования ангиогенеза, связанного с солидным раком, введение стероидного сапонина может производиться до и/или во время роста опухоли (первичные и/или вторичные опухоли), и/или до или после резекции опухоли (первичные и/или вторичные опухоли).
Стероидный сапонин в различных вариантах осуществления настоящего изобретения может быть введен субъекту в подходящей форме.
В одном варианте осуществления стероидный сапонин имеет форму композиции, подходящей для применения для ингибирования ангиогенеза.
Соответственно в другом варианте осуществления настоящее изобретение предлагает композицию, применяемую для ингибирования ангиогенеза в биологической системе, причем указанная композиция содержит эффективное количество стероидного сапонина.
Эффективное количество стероидного сапонина, вводимого в биологическую систему (например, субъекту), не ограничено специальным образом при условии, что оно находится в границах такого количества и в такой форме, что, как правило, демонстрирует полезный или терапевтический эффект. Термин терапевтически эффективное количество обозначает количество, которое, когда вводится субъекту при необходимости лечения, улучшает прогноз и/или состояние субъекта. Количество, которое вводится субъекту, зависит от конкретных особенностей ингибируемого ангиогенеза, рака, подвергаемого лечению, способа введения и особенностей субъекта, таких как общее состояние здоровья, другие заболевания, возраст, пол, генотип и вес тела. Специалист в данной области техники способен определить подходящую дозировку в зависимости от указанных и других факторов.
Соответственно в другом варианте осуществления настоящее изобретение предлагает применение
- 9 016653 стероидного сапонина для получения лекарственного средства для ингибирования ангиогенеза в биологической системе.
Как обсуждалось выше в настоящем описании, введение и доставка стероидного сапонина могут осуществляться, например, внутривенным, интраперитонеальным, подкожным, внутримышечным, оральным или топическим способом или посредством прямой инъекции в нужное место действия. Способ и путь введения в большинстве случаев зависит от типа заболевания или состояния, подвергаемого лечению.
Дозировка, частота и количество приемов зависят от способа и пути введения. Обычно инъецируемую композицию вводят в количестве между 5 и 500 мг/м2, как правило между 10 и 200 мг/м2. Обычно вводимую орально композицию вводят в количестве между 5 мг и 5 г, предпочтительно между 50 мг и 1 г.
Например, эффективное количество стероидного сапонина обычно лежит в диапазоне между приблизительно 0,1 мг/кг веса тела в день и приблизительно 1000 мг/кг веса тела в день, и в одной форме между 1 и 100 мг/кг веса тела в день.
Как описано выше, введение композиций стероидного сапонина может также включать в себя применение одного или нескольких фармацевтически приемлемых вспомогательных веществ, включая фармацевтически приемлемые соли, аминокислоты, полипептиды, полимеры, растворители, буферы, эксципиенты, консерванты и наполнители, с учетом конкретных физических, микробиологических и химических свойств вводимого стероидного сапонина.
Например, стероидный сапонин можно использовать в различных фармацевтических приемлемых композициях в форме, например, водного раствора, масляного препарата, жировой эмульсии, эмульсии, лиофилизированного порошка для разведения и т.д. и можно вводить в виде стерильной и апирогенной внутримышечной или подкожной инъекции или в виде инъекции в орган, или в виде залитого препарата, или в виде трансмукозального препарата через носовую полость, прямую кишку, матку, вагину, легкое, и т.д. Композицию можно вводить в виде оральных препаратов (например, твердых препаратов, таких как таблетки, каплеты, капсулы, гранулы или порошки; жидких препаратов, таких как сироп, эмульсии, дисперсии или суспензии).
Композиции, содержащие стероидный сапонин, могут также содержать один или более фармацевтически приемлемый консервант, буферное вещество, разбавитель, стабилизатор, хелатирующий агент, средство, увеличивающее вязкость, диспергирующее средство, регулятор рН, регулятор растворимости или изотоническое средство. Указанные эксципиенты хорошо известны специалистам в данной области техники.
Примерами подходящих консервантов являются сложные эфиры бензойной кислоты с парагидроксибензойной кислотой, фенолы, фенилэтиловый спирт или бензиловый спирт. Примерами подходящих буферных веществ являются соли фосфата натрия, лимонная кислота, винная кислота и тому подобное. Примерами подходящих стабилизаторов являются антиоксиданты, такие как альфа-токоферола ацетат, альфа-тиоглицерин, метабисульфит натрия, аскорбиновая кислота, ацетилцистеин, 8-гидроксихинолин и хелатирующие агенты, такие как динатрийэдетат. Примерами подходящих средств, увеличивающих вязкость, суспендирующих, растворяющих или диспергирующих средств являются замещенные простые эфиры целлюлозы, замещенные сложные эфиры целлюлозы, поливиниловый спирт, поливинилпирролидон, полиэтиленгликоли, карбомер, полиоксипропиленгликоли, сорбитанмоноолеат, сорбитансесквиолеат, полиоксиэтилированное гидрированное касторовое масло 60.
Примеры подходящих регуляторов рН включают соляную кислоту, гидроксид натрия, буферы и тому подобное. Примерами подходящих изотонических средств являются глюкоза, Ό-сорбитол или Όманнитол, хлорид натрия.
Введение стероидного сапонина может также осуществляться в форме композиции, содержащей фармацевтически приемлемый носитель, разбавитель, эксципиент, суспендирующее средство, скользящее вещество, адъювант, основу, систему доставки, эмульгатор, разрыхлитель, абсорбент, консервант, поверхностно-активное вещество, краситель, глидант, антиадгезив, связующее вещество, отдушку или подсластитель, с учетом конкретных физических, микробиологических и химических свойств вводимого стероидного сапонина.
Для указанных целей композицию можно вводить орально, парентерально, с помощью аэрозоля для ингаляции, адсорбции, абсорбции, топически, ректально, назально, буккально, вагинально, интравентрикулярно, посредством имплантируемого резервуара с дозируемыми составами, содержащими обычные нетоксичные фармацевтически приемлемые носители, или посредством любой другой подходящей дозированной формы. Термин парентеральный, как он применяется в настоящем описании, включает в себя способ подкожной, внутривенной, внутримышечной, интраперитонеальной, интратекальной, интравентрикулярной, надчревной и интракраниальной инъекции или инфузии.
При введении парентерально композиция, как правило, находится в единичной, стерильной, апирогенной инъецируемой дозированной форме (растворе, суспензии или эмульсии, которые могут быть разбавлены перед применением), которая обычно изотонична крови реципиента, с фармацевтически приемлемым носителем. Примерами таких стерильных инъецируемых форм являются стерильные инъецируе
- 10 016653 мые водные или масляные суспензии. Данные суспензии можно составлять в соответствии со способами, известными в данной области техники, с использованием подходящих основ, диспергирующих или увлажняющих средств, комплексообразующих веществ, полимеров, добавок для повышения растворимости и суспендирующих средств. Стерильные инъецируемые формы могут также представлять собой стерильные инъецируемые растворы или суспензии в нетоксичных парентерально приемлемых разбавителях или растворителях, например в виде растворов в 1,3-бутандиоле. К фармацевтически приемлемым основам и растворителям, которые можно применять, относятся вода, этанол, глицерин, солевой раствор, диметилсульфоксид, Ν-метилпирролидон, диметилацетамид, раствор Рингера, раствор декстрозы, изотонический раствор хлорида натрия и раствор Хэнкса. Кроме того, стерильные, жирные масла обычно применяют в качестве растворителей или питательных взвесей. Для этой цели можно применять любое мягкое жирное масло, включая синтетические моно- или диглицериды, кукурузное, хлопковое, арахисовое и кунжутное масло. Жирные кислоты, такие как этилолеат, изопропилмиристат и олеиновая кислота и ее глицериновые производные, включая оливковое масло и касторовое масло, особенно в их полиоксиэтилированных вариантах, пригодны для получения инъецируемых форм. Указанные масляные растворы или суспензии могут также содержать разбавители или дисперсанты на основе длинноцепочечного спирта.
Носитель может содержать вспомогательные вещества, такие как вещества, которые улучшают растворимость, изотоничность и химическую стабильность, например антиоксиданты, буферные вещества и консерванты.
Кроме того, композиция, содержащая стероидный сапонин, может быть в форме, которую необходимо разводить перед введением. Примеры включают лиофилизацию, сушку распылением и тому подобное, что дает подходящую твердую форму для разведения фармацевтически приемлемым растворителем перед введением.
Композиции могут включать одно или несколько буферных веществ, наполнителей, изотонических средств и криопротекторов и лиопротекторов. Примеры эксципиентов включают фосфатные соли, лимонную кислоту, невосстанавливающие сахара, такие как сахароза или трегалоза, полигидроксиспирты, аминокислоты, метиламины и лиотропные соли предпочтительны перед восстанавливающими сахарами, такими как мальтоза или лактоза.
При оральном введении стероидный сапонин обычно формируют в стандартные лекарственные формы, такие как таблетки, каплеты, крахмальные капсулы, порошок, гранулы, шарики, жевательные пастилки, капсулы, жидкости, водные суспензии или растворы или похожие лекарственные формы, используя обычное оборудование и способы, известные в данной области техники. Такие композиции обычно включают твердый, полутвердый или жидкий носитель. Примеры носителей включают эксципиенты, такие как лактоза, декстроза, сахароза, сорбитол, маннитол, крахмалы, гуммиарабик, фосфат кальция, минеральное масло, масло какао, масло теобромы, альгинаты, трагакант, желатин, сироп, замещенные сложные эфиры целлюлозы, полиоксиэтиленсорбитанмонолаурат, метилгидроксибензоат, пропилгидроксибензоат, тальк, стеарат магния и т. п.
Таблетка может быть изготовлена путем прессования или формовки стероидного сапонина необязательно с одним или несколькими вспомогательными ингредиентами. Прессованные таблетки могут быть получены путем прессования в подходящей машине активного ингредиента в форме, обладающей свободной текучестью, такой как порошок или гранулы, необязательно смешанного со связующим веществом, скользящим веществом, инертным разбавителем, поверхностно-активным или диспергирующим средством. Формованные таблетки могут быть изготовлены путем формования в подходящей машине смеси порошкообразного активного ингредиента и подходящего носителя, смоченного инертным жидким разбавителем.
Можно также вводить стероидный сапонин, используя способ контролируемого высвобождения.
Для топического введения композиция может быть в форме раствора, аэрозоля, лосьона, крема (например, неионного крема), геля, пасты или мази. Иначе композиция может доставляться посредством носителя липосом, наносом, рибосом или пиМ-бйТикет (липосомы с медленным высвобождением питательного содержимого).
Как обсуждалось выше в настоящем описании, эффективное количество вводимого стероидного сапонина не ограничено специальным образом при условии, что оно находится в границах такого количества и в такой форме, что, как правило, демонстрирует фармакологически полезный или терапевтический эффект.
Введение стероидного сапонина может, кроме того, включать в себя введение антиангиогенного средства, включая антитела против УЕСТ, включая гуманизированные и химерные антитела, анти-УЕСЕ аптамеры и антисмысловые олигонуклеотиды, ангиостатин, эндостатин, интерфероны, интерлейкин 1, интерлейкин 12, ретиноевую кислоту и тканевые ингибиторы металлопротеиназы-2 и -9.
Способ введения, дозировка и схемы приема антиангиогенных средств могут быть определены специалистом в данной области техники. Антиангиогенные средства и их применение в основных чертах описаны в ВюШетару: А сошргейепкгуе ОуеМете (2001) 8есопб Εάίίίοη, еб. Ву Раи1а Ттайап Ктедет, 1опе§ апб ВагПеП РиЫЦйега 1п1егпа1юпа1.
- 11 016653
Ингибирование ангиогенеза в биологической системе может быть определено подходящим способом, известным в данной области техники, таким как позднее появление неоваскулярных структур, замедленное развитие неоваскулярных структур, пониженное распространение неоваскулярных структур, сниженная или уменьшенная тяжесть ангиогенез-зависимых последствий заболевания, задержанный ангиогенный рост или регрессия предшествующего ангиогенного роста.
Определение способности стероидного сапонина ингибировать ангиогенез может быть произведено любым подходящим способом измерения ангиогенеза, который хорошо известен в данной области техники. Например, можно применять модель эксплантата аорты на мыши.
Или же можно применять анализ хорионаллантоисной мембраны (САМ) цыпленка или модель роговичной неоваскуляризации. Способность стероидного сапонина ингибировать ангиогенез можно определить по величине ингибирования ангиогенеза у куриного эмбриона или величине ингибирования ангиогенеза в модели роговичной неоваскуляризации.
Например, способность стероидного сапонина ингибировать ангиогенез в анализе хорионаллантоисной мембраны цыпленка можно проверить путем приведения в контакт хорионаллантоисной мембраны со стероидным сапонином, нанесенным на метилцеллюлозный диск. Для модели роговичной неоваскуляризации стероидный сапонин может быть нанесен в виде топической композиции, содержащей стероидный сапонин, на роговицу, причем роговицу царапают и туда вносят средство для индуцирования неоваскуляризации.
Другим способом изучения ангиогенеза является подкожная имплантация различных искусственных губчатых веществ (т.е. поливинилового спирта, желатина) животным. Исследуемый стероидный сапонин может быть инъецирован непосредственно в губчатые вещества, которые расположены в животном.
Неоваскуляризацию губчатых веществ определяют или гистологически, морфометрически (плотность сосудов), биохимически (содержание гемоглобина), или путем измерения скорости потока крови в сосудистой системе губчатого вещества с помощью радиоактивной метки.
Также были разработаны многочисленные модели опухоли на животных для определения антиангиогенной активности тестируемых соединений. Во многих случаях опухолевые клетки вживляют подкожно, и определяли размер опухоли через равные промежутки времени. Часто применяемые опухолевые клетки включают глиому С6 крысы, меланому В1бВЬб, ЬЬС и карциному ^Ма1ксг 256.
Также предполагается, что стероидный сапонин настоящего изобретения подойдет для применения для уменьшения количества антиангиогенного средства, введенного в биологическую систему.
Соответственно в другом варианте осуществления настоящее изобретение предлагает также способ уменьшения количества антиангиогенного средства, введенного в биологическую систему для достижения желаемого уровня ингибирования ангиогенеза, причем указанный способ включает в себя стадию введения в биологическую систему эффективного количества стероидного сапонина.
Эффективное количество вводимого стероидного сапонина не ограничено специальным образом при условии, что оно находится в границах такого количества, что, как правило, демонстрирует фармакологически полезный эффект уменьшения количества средства, необходимого для достижения желаемого уровня ингибирования ангиогенеза в биологической системе.
Введение стероидного сапонина может осуществляться в течение любого времени, подходящего для того, чтобы получить желаемый эффект уменьшения количества средства, вводимого в биологическую систему, необходимого для достижения желаемого уровня ингибирования ангиогенеза в биологической системе. Как обсуждалось выше в настоящем описании, человеку или животному стероидный сапонин может вводиться, например, орально, парентерально, топически или любым другим подходящим образом, и поэтому следует принимать во внимание время доставки средства.
Как описано ранее в настоящем описании, примеры антиангиогенных средств включают антитела против УЕСР, включая гуманизированные и химерные антитела, анти-УЕСЕ аптамеры и антисмысловые олигонуклеотиды, ангиостатин, эндостатин, интерфероны, интерлейкин 1, интерлейкин 12, ретиноевую кислоту и тканевые ингибиторы металлопротеиназы-2 и -9.
В этой связи, количество антиангиогенного средства, необходимое для достижения желаемого ингибирования ангиогенеза, определяют экспериментально при помощи способа, известного в данной области техники, и как таковое оно зависит от желаемого уровня ингибируемого ангиогенеза, возраста и веса тела субъекта и частоты введения.
Введение антиангиогенного средства осуществляют в подходящей форме и в течение подходящего времени для достижения желаемого эффекта ингибирования ангиогенеза до желаемого уровня. Способы составления и введения антиангиогенных средств известны в данной области техники.
Введение стероидного сапонина может происходить в то же время и тем же способом, как и введение антиангиогенного средства. Или же введение стероидного сапонина может осуществляться независимо от введения антиангиогенного средства и происходить в фармакологически подходящий момент времени до или после введения средства.
Настоящее изобретение предлагает также комбинированный продукт для раздельного или совместного введения стероидного сапонина и антиангиогенного средства субъекту для ингибирования ангиоге
- 12 016653 неза. В данном случае комбинированный продукт включает в себя стероидный сапонин для раздельного введения субъекту в подходящей форме или, напротив, для совместного введения субъекту в подходящей форме.
Соответственно в другом варианте осуществления настоящее изобретение предлагает комбинированный продукт, включающий стероидный сапонин и антиангиогенное средство, причем стероидный сапонин и антиангиогенное средство предлагаются в форме для совместного введения субъекту или в форме для раздельного введения субъекту.
Компоненты комбинированного продукта могут быть упакованы по отдельности или вместе в подходящих стерильных емкостях, таких как ампулы, бутыли или флаконы, в форме или многих доз, или одной дозы. Емкости, как правило, герметически запечатывают. Способы упаковывания компонентов известны в данной области техники.
Как обсуждалось выше в настоящем описании, совместное введение может быть последовательным или одновременным и обычно означает, что средства присутствуют в субъекте в течение определенного промежутка времени. Как правило, если второе средство вводят в течение периода полужизни первого средства, два средства считают введенными совместно.
Настоящее изобретение может применяться для ингибирования пролиферации и/или миграции эндотелиальных клеток.
Соответственно в другом варианте осуществления настоящее изобретение предлагает способ ингибирования пролиферации и/или миграции эндотелиальных клеток в биологической системе, причем указанный способ включает в себя стадию введения в биологическую систему эффективного количества стероидного сапонина.
В этой связи следует понимать, что биологическая система представляет собой любую биологическую систему, в которой пролиферация и/или миграция эндотелиальных клеток происходит или в которой может происходить ангиогенез.
В одном варианте осуществления биологическая система представляет собой человека или животное.
В другом варианте осуществления биологическая система представляет собой человека или животное, в котором пролиферация и/или миграция эндотелиальных клеток связана с заболеванием или состоянием, которое вызвано нежелательной или неконтролируемой пролиферацией и/или миграцией эндотелиальных клеток.
Например, биологическая система может представлять собой человека или животное, страдающих от или склонных к пролиферации и/или миграции эндотелиальных клеток, связанных с образованием или увеличением солидных опухолей, ангиофибромой, роговичной неоваскуляризацией, сетчаточной/хориоидальной неоваскуляризацией, диабетической ретинопатией, возрастной макулярной дегенерацией, артериовенозными мальформациями, артритом, ревматоидным артритом, остеоартритом, псориатическим артритом, волчанкой, заболеваниями соединительной ткани, синдромом Ослера-Вебера, атеросклеротическими бляшками, псориазом, пиогенной гранулемой, ретролентальными фиброплазиями, склеродермией, грануляциями, гемангиомой; трахомой, гемофилическими суставами, сосудистыми спайками, гипертрофическими рубцами, заболеваниями или состояниями, связанными с острым или хроническим воспалением, заболеваниями или состояниями, связанными с хроническим воспалением легкого, включая астму, саркоидозом, воспалительными заболеваниями кишечника, болезнью Крона или язвенным колитом.
Эндотелиальная клетка представляет собой любую эндотелиальную клетку, которая подвергается пролиферации и/или миграции, включая эндотелиальную клетку, подвергающуюся пролиферации в ответ на один или несколько ангиогенных стимулов в биологической системе, или эндотелиальные клетки, которые обладают способностью подвергаться пролиферации в ответ на один или несколько ангиогенных стимулов. В одном варианте осуществления пролиферация и/или миграция эндотелиальных клеток связана с неконтролируемым или нежелательным ангиогенезом в биологической системе.
В одном варианте осуществления настоящее изобретение можно применять для профилактики и/или лечения рака у субъекта путем ингибирования пролиферации и/или миграции эндотелиальных клеток.
Примеры рака включают карциному, рак мочевого пузыря, рак кости, опухоли мозга, рак молочной железы, рак шейки матки, колоректальный рак, включая рак толстой кишки, прямой кишки, ануса и аппендикса, рак пищевода, болезнь Ходжкина, рак почек, рак гортани, лейкемию, рак печени, рак легкого, лимфому, меланому, заносы и диспластические невусы, многочисленные миеломы, рак мышцы, неходжкинскую лимфому, рак ротовой полости, рак яичников, рак поджелудочной железы, рак простаты, саркому, рак кожи, рак желудка, рак семенников, тератому, рак щитовидной железы и рак матки.
Количество стероидного сапонина, введенного в биологическую систему, не ограничено специальным образом и, как правило, лежит в таком диапазоне, что целевые эндотелиальные клетки подвергаются воздействию концентрации от 0,1 до 20 мкМ стероидного сапонина.
Стероидный сапонин может применяться в форме и в концентрации, подходящих для того, чтобы позволить средствам достигнуть желаемого места приложения действия и иметь желаемый эффект инги
- 13 016653 бирования пролиферации и/или миграции эндотелиальных клеток.
Введение стероидного сапонина может осуществляться в течение любого времени, подходящего для того, чтобы получить желаемый эффект ингибирования пролиферации и/или миграции эндотелиальных клеток. Человеку или животному стероидный сапонин может вводиться, например, орально, парентерально, топически или любым другим подходящим образом, и поэтому следует принимать во внимание время транзита средства.
Например, введение стероидного сапонина субъекту в различных вариантах осуществления настоящего изобретения может осуществляться в один или несколько моментов времени от заблаговременного до начала пролиферации и/или миграции эндотелиальных клеток и/или одновременно с возникшей пролиферацией и/или миграцией эндотелиальных клеток.
Как обсуждалось выше в настоящем описании, стероидный сапонин может быть приготовлен и введен субъекту в подходящей форме и подходящим образом.
В одном варианте осуществления стероидный сапонин имеет форму композиции, подходящей для применения для ингибирования ангиогенеза.
Соответственно в другом варианте осуществления настоящее изобретение предлагает композицию, применяемую для ингибирования пролиферации и/или миграции эндотелиальных клеток в биологической системе, причем указанная композиция содержит эффективное количество стероидного сапонина.
Эффективное количество стероидного сапонина, вводимого в биологическую систему (например, субъекту), не ограничено специальным образом при условии, что оно находится в границах такого количества и в такой форме, что, как правило, демонстрирует полезный или терапевтический эффект. Термин терапевтически эффективное количество обозначает количество, которое, когда вводится субъекту при необходимости лечения, улучшает прогноз и/или состояние субъекта. Количество, которое вводится субъекту, зависит от конкретных особенностей ингибируемых пролиферации и/или миграции эндотелиальных клеток, способа введения и особенностей субъекта, таких как общее состояние здоровья, другие заболевания, возраст, пол, генотип и вес тела. Специалист в данной области техники способен определить подходящую дозировку в зависимости от указанных и других факторов.
Соответственно в другом варианте осуществления настоящее изобретение предлагает применение стероидного сапонина для получения лекарственного средства для ингибирования пролиферации и/или миграции эндотелиальных клеток в биологической системе.
Как обсуждалось выше в настоящем описании, введение и доставка стероидного сапонина могут осуществляться, например, внутривенным, интраперитонеальным, подкожным, внутримышечным, оральным или топическим способом, или посредством прямой инъекции в нужное место приложения действия. Способ и путь введения в большинстве случаев зависит от типа заболевания или состояния, подвергаемого лечению, как обсуждалось выше в настоящем описании.
Лекарственная форма, частота и количество приемов зависят от способа и пути введения. Обычно инъецируемую композицию вводят в количестве между 5 и 500 мг/м2, предпочтительно между 10 и 200 мг/м2. Обычно вводимую орально композицию вводят в количестве между 5 мг и 5 г, предпочтительно между 50 мг и 1 г.
Например, эффективное количество стероидного сапонина обычно лежит в диапазоне между приблизительно 0,1 мг/кг веса тела в день и приблизительно 1000 мг/кг веса тела в день и в одной форме между 1 и 100 мг/кг веса тела в день.
Как описано ранее в настоящем описании, введение композиций стероидного сапонина может также включать в себя применение одного или нескольких фармацевтически приемлемых вспомогательных веществ, включая фармацевтически приемлемые соли, аминокислоты, полипептиды, полимеры, растворители, буферы, эксципиенты, консерванты и наполнители, с учетом конкретных физических, микробиологических и химических свойств вводимого стероидного сапонина.
Как описано ранее в настоящем описании, композиции, содержащие стероидный сапонин, могут также содержать один или более фармацевтически приемлемый консервант, буферное вещество, разбавитель, стабилизатор, хелатирующий агент, средство, увеличивающее вязкость, диспергирующее средство, регулятор рН, или изотоническое средство. Указанные эксципиенты хорошо известны специалистам в данной области техники.
Введение стероидного сапонина может, кроме того, включать в себя введение антиангиогенного средства, включая антитела против УЕСР, включая гуманизированные и химерные антитела, анти-УЕСР аптамеры и антисмысловые олигонуклеотиды, ангиостатин, эндостатин, интерфероны, интерлейкин 1, интерлейкин 12, ретиноевую кислоту и тканевые ингибиторы металлопротеиназы-2 и -9.
Ингибирование пролиферации и/или миграции эндотелиальных клеток в биологической системе может быть определено подходящим способом, известным в данной области техники.
Например, в случае пролиферации клеток способы, такие как подсчет клеток, внедрение 3[Н] тимидина, иммуногистохимическое окрашивание для пролиферации клеток, позднее появление неоваскулярных структур, замедленное развитие неоваскулярных структур, пониженное распространение неоваскулярных структур, сниженная или уменьшенная тяжесть ангиогенез-зависимых последствий заболевания, задержанный ангиогенный рост или регрессия предшествующего ангиогенного роста.
- 14 016653
Определение способности стероидного сапонина ингибировать пролиферацию эндотелиальных клеток может быть произведено с помощью любого подходящего анализа, известного в данной области техники, которому подвергаются клетки и в котором измеряют пролиферацию эндотелиальных клеток. Например, можно культивировать человеческие умбиликальные эндотелиальные клетки сосудов ίη νίΐτο в соответствующей среде и можно измерять пролиферацию эндотелиальных клеток, например, по захвату меченного тритием тимидина. Способность средства ингибировать пролиферацию в таком анализе можно затем проверить посредством приведения в контакт эндотелиальных клеток со средством и определения величины ингибирования пролиферации, которая происходит при какой-то определенной концентрации.
В случае миграции эндотелиальных клеток подходящим анализом является ΒΌ Βίοί'οηΙ™ Άη§ίοдспс515 ЗуЧсш: Εηάο11κ1ί;·ι1 Се11 ΜφηΙίοη.
Также предполагается, что стероидный сапонин настоящего изобретения подойдет для применения для уменьшения количества антиангиогенного средства, введенного в биологическую систему.
Соответственно в другом варианте осуществления настоящее изобретение предлагает способ уменьшения количества антиангиогенного средства, введенного в биологическую систему для достижения желаемого уровня ингибирования пролиферации и/или миграции эндотелиальных клеток, причем указанный способ включает в себя стадию введения в биологическую систему эффективного количества стероидного сапонина.
Эффективное количество вводимого стероидного сапонина не ограничено специальным образом при условии, что оно находится в границах такого количества, что, как правило, демонстрирует фармакологически полезный эффект уменьшения количества средства, необходимого для достижения желаемого уровня ингибирования пролиферации и/или миграции эндотелиальных клеток в биологической системе.
Введение стероидного сапонина может осуществляться в течение любого времени, подходящего для того, чтобы получить желаемый эффект уменьшения количества средства, вводимого в биологическую систему, необходимого для достижения желаемого уровня ингибирования пролиферации и/или миграции эндотелиальных клеток в биологической системе. Как обсуждалось выше в настоящем описании, человеку или животному стероидный сапонин может вводиться, например, орально, парентерально, топически или любым другим подходящим образом, и поэтому следует принимать во внимание время транзита средства.
Как описано ранее в настоящем описании, примеры антиангиогенных средств включают антитела против νΕΟΡ, включая гуманизированные и химерные антитела, анти-νΕΟΕ аптамеры и антисмысловые олигонуклеотиды, ангиостатин, эндостатин, интерфероны, интерлейкин 1, интерлейкин 12, ретиноевую кислоту и тканевые ингибиторы металлопротеиназы-2 и -9.
В этой связи количество антиангиогенного средства, необходимое для достижения желаемого ингибирования пролиферации и/или миграции эндотелиальных клеток, определяют экспериментально при помощи способа, известного в данной области техники, и как таковое оно зависит от желаемого уровня ингибирования, возраста и веса тела субъекта и частоты введения.
Введение антиангиогенного средства осуществляют в подходящей форме и в течение подходящего времени для достижения желаемого эффекта ингибирования ангиогенеза до желаемого уровня. Способы составления и введения антиангиогенных средств известны в данной области техники.
Введение стероидного сапонина может происходить в то же время и тем же способом, как и введение антиангиогенного средства. Или же введение стероидного сапонина может осуществляться независимо от введения антиангиогенного средства и происходить в фармакологически подходящий момент времени до или после введения средства.
Настоящее изобретение предлагает также комбинированный продукт для раздельного или совместного введения стероидного сапонина и антиангиогенного средства субъекту для ингибирования пролиферации и/или миграции эндотелиальных клеток. В данном случае комбинированный продукт включает в себя стероидный сапонин для раздельного введения субъекту в подходящей форме или, напротив, для совместного введения субъекту в подходящей форме.
Соответственно в другом варианте осуществления настоящее изобретение предлагает комбинированный продукт, включающий стероидный сапонин и антиангиогенное средство, причем стероидный сапонин и антиангиогенное средство предлагаются в форме для совместного введения субъекту или в форме для раздельного введения субъекту.
Компоненты комбинированного продукта могут быть упакованы по отдельности или вместе в подходящих стерильных емкостях, таких как ампулы, бутыли или флаконы, в форме или многих доз, или одной дозы. Емкости, как правило, герметически запечатывают. Способы упаковывания компонентов известны в данной области техники.
Как обсуждалось выше в настоящем описании, совместное введение может быть последовательным или одновременным и обычно означает, что средства присутствуют в субъекте в течение определенного промежутка времени. Как правило, если второе средство вводят в течение периода полужизни первого средства, два средства считают введенными совместно.
- 15 016653
Способы получения фармацевтических композиций известны в данной области техники, например, как описано в Кетшд1оп'8 Ркаттасеи11са1 8с1епсек, 18(Н еб., 1990, Маск РиЬкккшд Со., Еак!оп, Ра.; И.8. Ркагтасоре1а: Ыа11опа1 Еогти1агу, 1984, Маск РиЬкккшд Сотрапу, Еак!оп, Ра. и М.Е. Аикоп, РкагтасеиПсз, Тке 8с1епсе ок Оокаде Еогт Оеыдп, 2пб еб., СкигскШ ЬМпдкФпе, ЕбшЬигдк, 2002.
Терапевтическая доставка биомолекул в основных чертах описана в В1абоп, С. (2002) РкаттасеиНса1 Скет1к1ту: Ткетареибс Акрес!к ок Вюто1еси1ек 1окп \УПеу & 8опк Ь1б.
Описание конкретных вариантов осуществления
Далее будет следовать ссылка на эксперименты, которые воплощают вышеупомянутые общие принципы настоящего изобретения. Однако следует понимать, что нижеследующее описание не ограничивает применимость вышеприведенного описания.
Пример 1. Материалы.
Диосгенин, диосцин (диосгенин Кка2, [Вка4], С1с), дельтонин (диосгенин Вка2, [С1с4], 01с) и триллин (диосгенин-О1с) получены коммерчески от МпдЬо Напркагт Вю1еск Со Ь1б., грациллин от СкготаОех и триллин от Лкбп Скетка1к. Просапогенин А: диосгенин Вка2, 01с был синтезирован в соответствии со способом, описанным Ь1 е! а1. СагЬокубг. Век., (2001) 331, 1-7. Диосцин и просапогенин А также выделяли из Рапк ро1урку11а. Сорафениб получили коммерчески.
Пример 2. Определение воздействия дельтонина на рост сосудов в эксплантатах аорты.
Трех самцов мыши С57ВЬ6/1 (возраст 9 недель) забивают путем асфиксии СО2 и кровь собирают путем пункции сердца при помощи иглы размера 29. Затем аорту разрезают (от дуги аорты до плевральной/перитонеальной поверхности) и помещают в охлажденный до 0°С ΌΜΕΜ, дополненный 10 мМ Нерек и пенициллином/стрептомицином.
Волокнистые и жировые ткани, окружающие аорту, удаляют посредством микроскопического расслоения и аорту промывают от крови с помощью охлажденного до 0°С ΌΜΕΜ. Затем аорту продольно разделяют пополам и нарезают на квадраты приблизительно по 1 мм. Отдельные кусочки аорты заливают каплей (20 мкл) раствора коллагена на дне лунки 24-луночного планшета для тканевой культуры. Затем планшеты помещают в 37°С/5% СО2 на 10 мин, для того чтобы коллаген полимеризовался в гель. Затем в каждую лунку добавляют чистую среду (0,3 мл), содержащую ДМСО или дельтонин в ДМСО, чтобы образовать канавку вокруг коллагенового геля.
Только 8 центральных лунок каждого 24-луночного планшета используют для культур эксплантата, чтобы избежать неравномерных газового обмена и скорости испарения между лунками с образцами эксплантата. Внешние лунки наполняют ФСБ.
Исследуют девять групп по 8 параллелей в каждой.
1. Чистая среда (ЕВМ-2, дополненная 10 мМ Нерек и 2% нормальной мышиной сывороткой (I)).
2. Среда с 1 мкл/мл ДМСО (контроль разбавителя для дельтонина) (Н).
3. Среда с 1 мкл/мл ДМСО, 10 нМ дельтонина (О).
4. Среда с 1 мкл/мл ДМСО, 30 нМ дельтонина (Е).
5. Среда с 1 мкл/мл ДМСО, 100 нМ дельтонина (Е).
6. Среда с 1 мкл/мл ДМСО, 300 нМ дельтонина (Ό).
7. Среда с 1 мкл/мл ДМСО, 1 мкМ дельтонина (С).
8. Среда с 1 мкл/мл ДМСО, 3 мкМ дельтонина (В).
9. Среда с 1 мкл/мл ДМСО, 10 мкМ дельтонина (А).
Затем эксплантаты культивируют при 37°С/5% СО2 во влажном инкубаторе в течение 6 дней. Эксплантаты фиксируют при комнатной температуре в течение 20 мин посредством добавления равного объема (0,3 мл) 4% параформальдегида в ФСБ в каждую лунку. После троекратного промывания буферным раствором Нерек (НВ8, 150 мМ ЫаС1, 10 мМ Нерек) эксплантаты окрашивают 10 мкг/мл лектиновым конъюгатом Е1ТС-В8-1 (лектин В8-1 специфически связывает мышиные эндотелиальные клетки) в НВ8 в течение ночи при 4°С. На следующий день эксплантаты трижды промывают НВ8. Сосудистые разрастания из эксплантатов визуализируют при помощи флуоресцентной микроскопии и фотографий, сделанных для анализа данных. Делают многочисленные флуоресцентные изображения с различной глубиной фокусировки для каждого эксплантата и обрабатывают фотографии при помощи программного обеспечения, осуществляющего деконволюцию, так что можно определить общее сосудистое разрастание для каждого эксплантата. Общий клеточный рост, связанный с каждым эксплантатом, также визуализируют при помощи световой микроскопии, применяя препаровальную лупу, и документируют при помощи фотографии. Для облегчения визуализации и анализа изготовляют составное инвертированное черно-белое изображение из многочисленных флуоресцентных изображений сосудистых разрастаний для каждого эксплантата. Затем подсчитывают количество сосудистых отростков и количество сосудистых ветвей для каждого эксплантата, причем подсчитывающий не имеет представления об особенностях каждого образца. Результаты обобщены в табл. 4 и показаны графически на фиг. 1.
- 16 016653
Таблица 4
Концентрация дельтонина (мкМ) Отростки Ветви
Среднее. со Среднее со
Вез ДМСО 28 10 43 17
0 17 5 26 9
0,01 11 7 . 16 10
0; 03 18 6 26 9
од 18 6 24 9
0,3 16 4 20 5
1 13 5 16 7
3 0 0 0 0
10 0 0 0 0
Примечание: сосудистые отростки и ответвления в эксплантатах, выращиваемых с 0,01 мкМ дельтонина, статистически не отличаются от контрольных культур эксплантата, обработанных ДМСО, несмотря на заметное понижение на графике.
Наблюдается значительный ингибирующий эффект чистого ДМСО, носителя для дельтонина, на ангиогенный отклик, как видно из значительного уменьшения прорастания и ветвления сосудов в эксплантатах аорты, обработанных ДМСО, по сравнению с эксплантатами аорты, выращенными в отсутствие ДМСО.
Однако же высокие концентрации дельтонина значительно ингибируют сосудистые отростки (при 10 и 3 мкМ) и сосудистые ветви (при 10, 3 и 1 мкМ) из эксплантатов аорты по сравнению с контрольными культурами эксплантата, обработанными ДМСО.
Типичные примеры образцов показаны на фиг. 2 и 3.
Пример 3. Определение ингибирования пролиферации и миграции эндотелиальных клеток стероидными сапонинами при помощи анализа Аидю8роиде™.
Анализ Аидю8роиде™ делает возможным медленное высвобождение поглощенного агарозой фактора роста, который стимулирует пролиферацию и миграцию эндотелиальных клеток и обеспечивает тканеподобный матрикс для неоваскуляризации. Следовательно, данный анализ может применяться для измерения эффективности методов обработки, разработанных для ингибирования ангиогенеза, определяемого путем подсчета кровеносных сосудов после ΟΌ31 иммуногистохимического окрашивания эндотелиальных клеток (МсСайу е1 а1., 1и1егиабоиа1 1оигиа1 оГ Оисо1оду, 21:5-10, 2002).
Пористое вещество Се1Гоат (РНагтааа & ир)оЬи) нарезают на кусочки по приблизительно 7x7x7 мм в стерильных условиях и замачивают всю ночь в стерильном фосфатно-солевом буфере. Затем поглотившее жидкость пористое вещество Ое1Гоат частично высушивают. Фактор роста (ЬЕСЕ) разводят до начальной концентрации 2 мкг/мл в теплой (37°С) 0,4% агарозе. Частично высушенные образцы помещают в раствор фактора роста или в теплую 0,4% агарозу без фактора роста и затем переносят в чашку Петри, содержащую теплую 0,4% агарозу (разведение 1:1, конечная концентрация фактора роста 1 мкг/мл) для полимеризации и отвердения.
самок мышей С3Н/Не_) микрочипируют, взвешивают и случайным образом распределяют на основании веса тела на 7 групп по 10 мышей в группе. Для имплантации мышей анестезируют ингаляцией галотана. Маленький канал проделывают иглой для троакара между 3-й и 4-й молочной железой, губчатое вещество вставляют на полную глубину канала и закрывают надрез зажимом для ран.
Составляют смесь компонентов в смеси Ν-метилпирролидон (ЫМР):РЕ6300:вода (1:9:10, об./об.). Дозировку определяют на основании ш νίΙΐΌ значения 1С50 и предварительных исследований токсичности. Соединения вводят ежедневно посредством интраперитонеальной инъекции с объемом дозы 1.0 мл/кг однажды в день в течение периода исследования, как показано в табл. 5.
Таблица 5
Обработка Ежедневная дозировка
Носитель ΝΜΡ:РЕС300:вода (1:9:10, об./об.)
Носитель+6ГСГ ΝΜΡ:РЕС300:вода {1:9:10, об./об.)
Диосиин+ЬЕСГ 10 мг/кг
Дельтонин+ЬЕСЕ 10 мг/кг
Триллин+ЬЕСГ 60 мг/кг
Просапогенин ДтЬЕСЕ 20 мг/кг
Сорафениб+ЬГСГ 60 мг/кг
- 17 016653
Обработку начинают, когда все животные полностью оправляются от анестезии, и продолжают в течение 10 дней. На 11-й день имплантированное губчатое вещество удаляют и мгновенно замораживают в жидком азоте с ОСТ для СЭ31 окрашивания замороженных срезов.
СИ31/РЕСАМ-1 является антигеном, специфически присутствующим на эндотелиальных клетках, и поэтому может применяться в качестве маркера для кровеносных сосудов. Из замороженных образцов губчатого вещества делают криосрезы (12 мкм), монтируют их на положительно заряженных предметных стеклах Р1и5 (Е18Йег 8с1еи1Шс) и сушат воздухом в течение 30 мин. Замороженные срезы последовательно фиксируют в холодном ацетоне, ацетоне/хлороформе (1:1, об./об.) и ацетоне по 5 мин в каждом и затем промывают ФСБ (фосфатно-солевом буфере). После блокирования ФСБ, содержащим 5% нормальной лошадиной сыворотки и 1% нормальной козьей сыворотки, срезы инкубируют с РЕСАМ-1 моноклональным крысиным антителом к СЭ31 мыши (1:5000 в блокирующем растворе, РйагМшдеп, 8аи Ичедо, СА) в течение 4 ч при комнатной температуре. Зачем срезы промывают ФСБ трижды и инкубируют с подходящим вторичным антикрысиным антителом. Положительные реакции визуализируют посредством инкубирования стекол в стабильном 3,3'-диаминобензидине в течение 5-10 мин. Срезы ополаскивают дистиллированной водой, контр-окрашивают гематоксилином по Гиллу в течение 1 мин и заливают Ишуег8а1 Моии! (Кекеагсй СепеОсЦ. Контрольные образцы, которые подвергаются воздействию только вторичного антитела, демонстрируют отсутствие специфического окрашивания. В качестве положительного контроля используют плаценту мыши. Для количественного анализа выбирают 3 независимых поля зрения и подсчитывают положительно окрашенные пятна или сосуды с просветами.
Результаты сопоставляют в виде среднего количества кровеносных сосудов (подсчет СИ31), и они приведены в табл. 6.
Таблица 6
Обработка Среднее количество кровеносных сосудов Относительная индукция
Носитель 0 0
Носитель+ЬГСГ 72 100
Диосцин+ЬГСЕ· 35 49
Дельтонин+ЬГСГ 44 61
Триллин+ЬГСГ 41 57
Просапогенин А+ЬГСГ 21 29
Сорафениб+ЬГСЕ1 2 3
Относительная индукция для обработки представляет собой разницу в подсчете СИ31 между обработкой (+ЬЕОЕ) и только основой (без ЬЕОЕ), деленную на разницу в подсчете СИ31 между носителем с ЬЕОЕ и только носителем (без ЬЕОЕ), выраженную в процентах.
Количество кровеносных сосудов и относительную индукцию откладывают на графике по отношению к обработкам на фиг. 4 и 5. Результаты демонстрируют, что стероидные сапонины вызывают уменьшение ангиогенеза в модельной системе Апдю8ропде™.
Пример 3. Определение ингибирования пролиферации и миграции эндотелиальных клеток стероидными сапонинами при помощи анализа АпдюСйатЬег™.
Анализ АпдюСйатЬег™ использует нормальный физиологический процесс заживления ран, который вызывает образование фиброзных капсул вокруг имплантированной камеры (Аооб е1 а1., (2000) Сапсег Кекеагсй, 60 (8):2178-89). Включение ЬЕОЕ в камеру индуцирует развитие кровеносных сосудов в фиброзной капсуле. Таким образом, анализ определяет эффективность обработок путем контроля за их воздействием как на образование фиброзной капсулы, измеряемое по полной массе капсулы в конце исследования, так и по определению подачи крови сосудами в камеру посредством определения содержания гемоглобина. Содержание гемоглобина в фиброзной капсуле является мерой неоваскуляризации, которую определяют при помощи метода Драбкина.
АпдюСйатЬег™ представляют собой пористые тканевые камеры, сделанные из перфторалкокситефлона и заполненные 0,8% агаром, содержащим 20 МЕ/мл гепарина с или без 1 мкг/мл человеческого ЬЕОЕ. Оба конца камеры закрывают снимающимися крышками из одинакового материала. Камеры заполняют в стерильных условиях 0,8% агаром, содержащим 20 МЕ/мл гепарина с или без 1 мкг/мл человеческого ЬЕОЕ. Раствор агарозы выдерживают при 37°С перед заполнением камер.
самок мышей ЕуВ микрочипируют, взвешивают и случайным образом распределяют на основании веса тела на 7 групп по 10 мышей в группе. Для имплантации мышей анестезируют ингаляцией галотана. Приблизительно 150 мкл стерильного фильтрованного воздуха инъецируют подкожно в спину каждой мыши между лопаток, что приводит к образованию воздушного мешка, в котором делают небольшой надрез и вставляют камеру. Рану закрывают двумя 1,4-мм зажимами для ран.
Обработки, которые все составляют в смеси ИМР:РЕО300:вода (1:9:10 об./об.) и вводят ежедневно
- 18 016653 посредством интраперитонеальной инъекции, приведены в табл. 7.
Таблица 7
Обработка Ежедневная дозировка
Носитель ΝΜΡ:РЕЙЗОО:вода (1:9:10, об./об.)
Носитель+ЬЕСЕ ΝΜΡ:РЕСЗОО:вода (1:9:10, об./об.)
Диосцин+ЬЕСЕ 10 мг/кг
Дельтонин+ЬЕСГ 10 мг/кг
Триллин+ЬГСГ 60 мг/кг
Просапогенин А+ЬЕСЕ 20 мг/кг
Сорафениб+ьг<зг 60 мг/кг
Обработку начинают, когда все животные полностью оправляются от анестезии, и продолжают в течение 5 дней. На 6-й день васкуляризированные фиброзные камеры удаляют и записывают полную массу каждого имплантата. Камеру из каждой мыши затем мгновенно замораживают в жидком азоте и хранят при -20°С до определения содержания гемоглобина.
Образцы фиброзных капсул размораживают и держат во льду во время процедуры. Добавляют стерильную воду в каждый размороженный образец и образец гомогенизируют с помощью ЫйаТоигах на высокой скорости. Чтобы избежать перекрестной контаминации, ЦЦгаТоигах промывают в течение 30 с 5 мл дистиллированной воды после гомогенизации каждого образца. Гомогенат переносят в 2 мл пробирки Эппендорфа и хранят во льду. Пробирки Эппендорфа центрифугируют при 4°С и высокой скорости (относительная центробежная сила (КСР) 14000) в течение 60 мин. Затем 1,0-1,5 мл промежуточного водного раствора (гомогената) между осадком и жировым слоем переносят в неиспользованные маркированные 1,5 мл пробирки Эппендорфа и хранят во льду. 50 мкл каждого гомогената переносят в отдельные лунки 96-луночного планшета. 50 мкл воды переносят в 2 лунки в качестве контроля. Затем добавляют 50 мкл реагента Драбкина в каждую лунку и перемешивают. После 15 мин инкубации при комнатной температуре измеряют оптическую плотность каждого образца на 540 нм и вычисляют объем крови для каждого образца по стандартной кривой.
Результаты сопоставляют в виде среднего веса камеры, среднего содержания крови (из содержания гемоглобина) и относительной индукции, и они приведены в табл. 8.
Таблица 8
Обработка Средний вес камеры (г) Среднее содержание крови (мкл) Относительная индукция
Носитель 0, 066 0, 44 0
Носитель+ЬЕСГ 0, 375 2,21 1С0
Диосцин+ЬЕОЕ 0, 131 1, 24 45
Дельтонин+ЬГОГ 0, 126 0, 79 20
Триллин+ЬГСЕ 0, 421 1,46 58
Просапогенин А+ЬЕСЕ 0, 389 1, 92 84
Сорафениб+ЬЕСГ 0, 322 • 0, 92 27
Относительная индукция для обработки представляет собой разницу в содержании крови между обработкой (+ЬРОР) и только основой (без ЬРОР), деленную на разницу в содержании крови между основой с ЬРОР и только основой (без ЬРОР), выраженную в процентах.
Среднее содержание крови в камерах АидюСйатЬег™ и относительную индукцию откладывают на графике по отношению к обработкам на фиг. 6 и 7. Результаты демонстрируют, что стероидные сапонины вызывают уменьшение ангиогенеза в модельной системе Аидю8роиде™.
Наконец, следует понимать, что различные модификации и вариации способов и композиций настоящего изобретения, описанные в настоящем описании, понятны для специалиста в данной области техники без выхода за пределы объема и сущности настоящего изобретения. Хотя настоящее изобретение описано вместе с определенными вариантами осуществления, следует понимать, что настоящее изобретение, как оно заявлено, не должно быть неправильно ограничено такими определенными вариантами осуществления. Фактически предполагается, что различные модификации описанных способов осуществления настоящего изобретения, которые понятны для специалиста в данной области техники, находятся в пределах объема настоящего изобретения.

Claims (16)

  1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
    1. Способ ингибирования ангиогенеза в биологической системе, где указанный способ включает введение в биологическую систему эффективного количества стероидного сапонина.
  2. 2. Способ по п.1, где стероидный сапонин включает в себя сахарид, присоединенный в одном положении сапогенинового компонента стероидного сапонина.
  3. 3. Способ по п.2, где сахарид присоединен в положении С-3 сапогенина.
  4. 4. Способ по п.2 или 3, где сахарид включает в себя одну или несколько моносахаридных единиц, выбранных из Ό-глюкозы (С1с), Ь-рамнозы (Кба), Ό-галактозы (Са1), Ό-глюкуроновой кислоты (С1сА). Ό-ксилозы (Ху1), Ь-арабинозы (Ага), Ό-фукозы (Бис), Ό-галактуроновой кислоты (6а1А).
  5. 5. Способ по любому из пп.1-4, где сапогениновый компонент стероидного сапонина основан на сапогенине, выбранном из группы, состоящей из спиростанола, включая диосгенин, ямогенин (неодиосгенин), юккагенин, сарсасапогенин, тигогенин, смилагенин, гекогенин, гитогенин, конвалламарогенин, неорускогенин и солагенин; фуростанола, включая протодиосгенин, псевдопротодиосгенин, метилпротодиосгенин, протоямогенин и метилпротоямогенин.
  6. 6. Способ по любому из пп.1-5, где стероидный сапонин представляет собой хакотриозидстероидный сапонин или солатриозид-стероидный сапонин.
  7. 7. Способ по п.6, где хакотриозид-стероидный сапонин выбирают из группы, состоящей из диосгенина, связанного через положение С-3 с хакотриозой; диосгенина, связанного через положение С-3 с другим хакотриозидом; тигогенина, связанного через положение С-3 с хакотриозидом; сарсасапогенина, связанного через положение С-3 с хакотриозидом; смилагенина, связанного через положение С-3 с хакотриозидом; юккагенина, связанного через положение С-3 с хакотриозидом; и ямогенина, связанного через положение С-3 с хакотриозидом; и где солатриозид-стероидный сапонин выбирают из группы, состоящей из грациллина; дельтонина; диосгенинсолатриозы; диосгенина, связанного через положение С-3 с другим солатриозидом; тигогенина, связанного через положение С-3 с солатриозидом; сарсасапогенина, связанного через положение С-3 с солатриозидом; смилагенина, связанного через положение С-3 с солатриозидом; юккагенина, связанного через положение С-3 с солатриозидом; и ямогенина, связанного через положение С-3 с солатриозидом.
  8. 8. Способ по любому из пп.1-4, где стероидный сапонин имеет химическую формулу где К1, К2, К4, К6, К7, Кп, К!2, К14, К15 и К1- независимо представляют собой Н, ОН, =О, фармакологически приемлемые сложноэфирные группы или фармакологически приемлемые эфирные группы;
    К5 представляет собой Н, когда С-5,С-6 представляет собой одинарную связь, и отсутствует, когда С-5,С-6 представляет собой двойную связь;
    А представляет собой или О одновременно с тем, что В представляет собой СН2, или В представляет собой О одновременно с тем, что А представляет собой СН2;
    К27А представляет собой Н одновременно с тем, что К27В представляет собой СН3, или К27А представляет собой СН3 одновременно с тем, что К27В представляет собой Н;
    К3 содержит гликозильную группу, соединенную через атом кислорода со стероидным сапогенином в С-3; или фармацевтически приемлемую соль, или их производное.
  9. 9. Способ по любому из пп.1-4, где стероидный сапонин имеет химическую формулу где К1, К2, К4, К6, К7, Кп, К!2, К14, К15 и К1- независимо представляют собой Н, ОН, =0, фармакологически приемлемые сложноэфирные группы или фармакологически приемлемые эфирные группы;
    К5 представляет собой Н, когда С-5,С-6 представляет собой одинарную связь, и отсутствует, когда
    - 20 016653
    С-5,С-6 представляет собой двойную связь;
    К22 представляет собой или гидроксильную, или алкоксильную группу, когда С-20,С-22 представляет собой одинарную связь, или отсутствует, когда С-20,С-22 представляет собой двойную связь;
    К27А представляет собой Н одновременно с тем, что К27В представляет собой СН3, или К27а представляет собой СН3 одновременно с тем, что К27В представляет собой Н;
    К28 представляет собой Н или сахарид; или фармацевтически приемлемую соль, или их производ ное;
    К3 содержит гликозильную группу, соединенную через атом кислорода со стероидным сапогенином в С-3; или фармацевтически приемлемую соль, или их производное.
  10. 10. Способ по п.1, где стероидный сапонин выбран из группы, состоящей из диосгенина, связанного через положение С-3 с сахаридом, тигогенина, связанного через положение С-3 с сахаридом, сарсасапогенина, связанного через положение С-3 с сахаридом, смилагенина, связанного через положение С-3 с сахаридом, юккагенина, связанного через положение С-3 с сахаридом, и ямогенина, связанного через положение С-3 с сахаридом.
  11. 11. Способ по п.1, где стероидный сапонин выбирают из группы, состоящей из дельтонина (диосгенин КЪа2, [61с4], 61с), диосцина (диосгенин КЪа2, [КЪа4], 61с), просапогенина А (диосгенин КЪа2, 61с) и аспирина (диосгенин [Кйа 4, ККа 4], ККа 2, 61с).
  12. 12. Способ по любому из пп.1-11, где указанный способ дополнительно включает в себя введение антиангиогенного средства в биологическую систему.
  13. 13. Способ по п.12, где антиангиогенное средство представляет собой одно или несколько средств, выбранных из группы, состоящей из антитела против УЕ6Е, включая гуманизированное и/или химерное антитело, анти-УЕ6Е аптамера, антисмыслового олигонуклеотида УЕ6Е, ангиостатина, эндостатина, интерферона, интерлейкина 1, интерлейкина 12, ретиноевой кислоты и тканевого ингибитора металлопротеиназы-2 и -9.
  14. 14. Способ по любому из пп.1-13, где ангиогенез в биологической системе представляет собой ангиогенез, связанный с образованием или увеличением солидных опухолей, ангиофибромой, роговичной неоваскуляризацией, сетчаточной/хориоидальной неоваскуляризацией, диабетической ретинопатией, возрастной макулярной дегенерацией, артериовенозными мальформациями, артритом, ревматоидным артритом, остеоартритом, псориатическим артритом, волчанкой, заболеваниями соединительной ткани, синдромом Ослера-Вебера, атеросклеротическими бляшками, псориазом, пиогенной гранулемой, ретролентальными фиброплазиями, склеродермией, грануляциями, гемангиомой, трахомой, гемофилическими суставами, сосудистыми спайками, гипертрофическими рубцами, заболеваниями или состояниями, связанными с острым или хроническим воспалением, заболеваниями или состояниями, связанными с хроническим воспалением легкого, включая астму, саркоидозом, воспалительными заболеваниями кишечника, болезнью Крона или язвенным колитом.
  15. 15. Фармацевтическая композиция для ингибирования пролиферации и/или миграции эндотелиальных клеток в биологической системе, включающая эффективное количество стероидного сапонина и антиангиогенного средства и одну или несколько фармацевтически приемлемых добавок.
  16. 16. Комбинированный продукт, включающий стероидный сапонин и антиангиогенное средство, где стероидный сапонин и антиангиогенное средство предлагаются в форме для совместного введения субъекту или в форме для раздельного введения субъекту.
EA200970175A 2006-08-03 2007-08-03 Способы и композиции для ингибирования ангиогенеза EA016653B1 (ru)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
AU2006904195A AU2006904195A0 (en) 2006-08-03 Methods and compositions for inhibiting angiogenesis
PCT/AU2007/001092 WO2008014564A1 (en) 2006-08-03 2007-08-03 Methods and compositions for inhibiting angiogenesis

Publications (2)

Publication Number Publication Date
EA200970175A1 EA200970175A1 (ru) 2009-08-28
EA016653B1 true EA016653B1 (ru) 2012-06-29

Family

ID=38996792

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA200970175A EA016653B1 (ru) 2006-08-03 2007-08-03 Способы и композиции для ингибирования ангиогенеза

Country Status (12)

Country Link
US (2) US20090263349A1 (ru)
EP (1) EP2049122B1 (ru)
JP (2) JP5714816B2 (ru)
CN (1) CN101511369B (ru)
AU (1) AU2007281038B2 (ru)
BR (1) BRPI0715073A8 (ru)
CA (1) CA2659542C (ru)
EA (1) EA016653B1 (ru)
ES (1) ES2523463T3 (ru)
MX (1) MX2009001167A (ru)
TW (1) TWI421083B (ru)
WO (1) WO2008014564A1 (ru)

Families Citing this family (19)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
MX2009001163A (es) * 2006-08-03 2009-03-31 Oncology Res Int Ltd Metodos y composiciones para promover la actividad de terapias anticancer.
WO2011050311A1 (en) 2009-10-22 2011-04-28 University Of Pittsburgh-Of The Commonwealth System Of Higher Education Use of endostatin peptides for the treatment of fibrosis
JP2013528737A (ja) 2010-04-30 2013-07-11 クリーン カーレント リミテッド パートナーシップ 強化されたダクト、ブレード及び発電機を有する一方向ハイドロタービン
US20120058088A1 (en) * 2010-06-28 2012-03-08 Resveratrol Partners, Llc Resveratrol-Containing Compositions And Methods Of Use
CN102631616B (zh) * 2012-04-02 2013-05-08 吕明忠 一种治疗风寒型结肠炎的中药制备方法
CN102786594A (zh) * 2012-05-09 2012-11-21 中国药科大学 一种菝葜皂苷元单克隆抗体及其应用
CN104324038B (zh) * 2013-07-24 2018-11-06 四川京华创生物科技有限公司 一种薯蓣皂苷元-3-位衍生物的用途
US20160324884A1 (en) * 2013-11-28 2016-11-10 Xueyong WANG Treatment of diabetes with pentacyclic triterpenoid saponin compounds from szechuan melandium root
CN105640969A (zh) * 2014-11-10 2016-06-08 江苏省中国科学院植物研究所 毛冬青次皂苷的抗菌用途
CN106727611A (zh) * 2015-11-25 2017-05-31 成都易目博科技有限公司 用于预防和治疗血管性疾病的化合物及其制剂
WO2018145162A1 (en) 2017-02-10 2018-08-16 Oncology Research International Limited Steroid saponins with anti-cancer activity
BR102017016550A2 (pt) * 2017-08-01 2019-03-19 Lisis Rojo Gomes Uso de glicosídeos esteroidais, formulações farmacêuticas, uso de extratos da planta furcraea foetida, processo de obtenção de extratos da planta furcraea foetida e método de tratamento de distúrbios da pele
CN109575102A (zh) * 2018-09-08 2019-04-05 江西中医药大学 延龄草甾体总皂苷及其中甾体皂苷类化合物在制备治疗溃疡性结肠炎药物中的应用
CN110420181A (zh) * 2019-07-24 2019-11-08 西北农林科技大学 一种含有维生素a的纳米乳药物及其制备方法
CN110327354B (zh) * 2019-08-12 2023-08-22 北京市中医研究所 薯蓣皂苷元在银屑病治疗和预防中的应用
CN112194704B (zh) * 2020-10-21 2021-06-01 中国人民解放军空军军医大学 一种甾体皂苷类化合物及其制备方法和应用
CN113181192B (zh) * 2021-04-16 2023-11-07 陕西中医药大学 偏诺皂苷类化合物的应用
WO2024024395A1 (ja) * 2022-07-29 2024-02-01 国立大学法人富山大学 視神経障害の予防または治療のための医薬または飲食品組成物
CN115569144A (zh) * 2022-10-12 2023-01-06 浙江百越生物技术有限公司 纤细薯蓣皂苷在制备预防炎症性肠病药物中的应用

Citations (14)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5919770A (en) * 1996-02-22 1999-07-06 Il Hwa Co., Ltd. Metabolites of ginseng saponins by human intestinal bacteria and its preparation for an anticancer
US5985330A (en) * 1996-08-05 1999-11-16 Coastside Bio Resources Inhibition of angiogenesis by sea cucumber fractions
CN1237583A (zh) * 1998-06-01 1999-12-08 沈阳药科大学 一种治疗癌症的甾体皂甙类化合物及其制备方法
US6168795B1 (en) * 1998-06-09 2001-01-02 Sant{acute over (e)} International Inc. Method for anticancer therapy using an herbal extract composition
US20020045202A1 (en) * 2000-02-29 2002-04-18 Bozena Korczak Novel core 2 beta-1,6-N-acetylglycosaminyltransferase gene
US6395279B1 (en) * 1996-03-13 2002-05-28 Archer Daniels Midland Company Method of preparing and using isoflavones for the treatment of cancer
US6444233B1 (en) * 1998-05-19 2002-09-03 Research Development Foundation Triterpene compositions and methods for use thereof
WO2003035092A1 (en) * 2001-10-26 2003-05-01 Angiolab Inc. Composition containing horse chestnut extract for anti-angiogenic and matrix metalloproteinase inhibitory activity
US20030203856A1 (en) * 2002-04-19 2003-10-30 Rosazza John P. N. Isoflavone and triterpene glycosides from soybeans
WO2005060977A1 (en) * 2003-12-22 2005-07-07 Btg International Limited Core 2 glcnac-t inhibitors
WO2005116042A1 (en) * 2004-05-29 2005-12-08 Myung Hwan Park Treatment and prevention of cancer with new ginsenoside derivatives
US20050288239A1 (en) * 2004-01-27 2005-12-29 Northwestern University Anticancer glycoside compounds
WO2006053184A2 (en) * 2004-11-10 2006-05-18 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Methods for treating or preventing a vascular disease
WO2007003957A2 (en) * 2005-07-06 2007-01-11 Btg International Limited Steroidal glycoside compounds as core 2 glcnac- t inhibitors

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP3123745B2 (ja) * 1990-03-16 2001-01-15 三和生薬株式会社 制癌剤
JPH0840914A (ja) * 1994-07-29 1996-02-13 Toray Ind Inc 腫瘍細胞増殖阻害剤
US20030040463A1 (en) * 1996-04-05 2003-02-27 Wiegand Stanley J. TIE-2 ligands, methods of making and uses thereof
US20050143463A1 (en) * 2002-05-03 2005-06-30 The Queen Elizabeth Hospital Research Foundation Inc. Method of inhibiting angiogenesis

Patent Citations (14)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5919770A (en) * 1996-02-22 1999-07-06 Il Hwa Co., Ltd. Metabolites of ginseng saponins by human intestinal bacteria and its preparation for an anticancer
US6395279B1 (en) * 1996-03-13 2002-05-28 Archer Daniels Midland Company Method of preparing and using isoflavones for the treatment of cancer
US5985330A (en) * 1996-08-05 1999-11-16 Coastside Bio Resources Inhibition of angiogenesis by sea cucumber fractions
US6444233B1 (en) * 1998-05-19 2002-09-03 Research Development Foundation Triterpene compositions and methods for use thereof
CN1237583A (zh) * 1998-06-01 1999-12-08 沈阳药科大学 一种治疗癌症的甾体皂甙类化合物及其制备方法
US6168795B1 (en) * 1998-06-09 2001-01-02 Sant{acute over (e)} International Inc. Method for anticancer therapy using an herbal extract composition
US20020045202A1 (en) * 2000-02-29 2002-04-18 Bozena Korczak Novel core 2 beta-1,6-N-acetylglycosaminyltransferase gene
WO2003035092A1 (en) * 2001-10-26 2003-05-01 Angiolab Inc. Composition containing horse chestnut extract for anti-angiogenic and matrix metalloproteinase inhibitory activity
US20030203856A1 (en) * 2002-04-19 2003-10-30 Rosazza John P. N. Isoflavone and triterpene glycosides from soybeans
WO2005060977A1 (en) * 2003-12-22 2005-07-07 Btg International Limited Core 2 glcnac-t inhibitors
US20050288239A1 (en) * 2004-01-27 2005-12-29 Northwestern University Anticancer glycoside compounds
WO2005116042A1 (en) * 2004-05-29 2005-12-08 Myung Hwan Park Treatment and prevention of cancer with new ginsenoside derivatives
WO2006053184A2 (en) * 2004-11-10 2006-05-18 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Methods for treating or preventing a vascular disease
WO2007003957A2 (en) * 2005-07-06 2007-01-11 Btg International Limited Steroidal glycoside compounds as core 2 glcnac- t inhibitors

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Barthomeuf, S. et al. "Inhibition of HUVEC Tubulogenesis by Hederacolchiside-A1 is Associated with Plasma Membrane Cholesterol Sequestration and Activation of the Ha-Ras/MEK/ERK Cascade", Cancer Chemotherapy and Pharmacology (2004), 54:432-440, whole document *
Tong, Y. et al. "Philinopside A, A Novel Marine-Derived Compound Possessing Dual Anti-Angiogenic and Anti-Tumor Effects", International Journal of Cancer, (2005) 114:843-853, whole document *

Also Published As

Publication number Publication date
ES2523463T3 (es) 2014-11-26
CA2659542A1 (en) 2008-02-07
TW200932245A (en) 2009-08-01
AU2007281038B2 (en) 2012-11-15
AU2007281038A1 (en) 2008-02-07
BRPI0715073A2 (pt) 2013-05-28
JP5714816B2 (ja) 2015-05-07
US20150079029A1 (en) 2015-03-19
JP2010500287A (ja) 2010-01-07
CN101511369A (zh) 2009-08-19
WO2008014564A1 (en) 2008-02-07
JP2013241427A (ja) 2013-12-05
TWI421083B (zh) 2014-01-01
BRPI0715073A8 (pt) 2018-04-10
EP2049122A1 (en) 2009-04-22
US20090263349A1 (en) 2009-10-22
MX2009001167A (es) 2009-03-20
CN101511369B (zh) 2012-06-06
EA200970175A1 (ru) 2009-08-28
EP2049122A4 (en) 2011-05-18
CA2659542C (en) 2015-04-07
EP2049122B1 (en) 2014-10-08

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EA016653B1 (ru) Способы и композиции для ингибирования ангиогенеза
EP0910382B1 (en) Squalamine in combination with other anti-cancer agents for treating tumors
US20140328828A1 (en) Use of therapeutic compositions comprising hyaluronan and therapeutic antibodies
ES2266512T3 (es) Composiciones para inhibir angiogenesis.
EA032326B1 (ru) Монотерапия gla для применения в лечении рака
ES2743493T3 (es) Composición para el tratamiento de células madre cancerosas
US9358247B2 (en) Methods and compositions for promoting activity of anti-cancer therapies
US20170071976A1 (en) Pharmaceutical solution having anti-tumor effect-enhancing and toxicity-reducing effect, and pharmaceutical composition comprising same
US11364286B2 (en) Compositions and methods for the treatment of diseases involving mucin
WO2023185681A1 (zh) 重组水蛭素在制备用于治疗肝癌的药物中的应用
EP4410302A1 (en) Drug for treating fatty liver and non-alcoholic steatohepatitis
EP4382134A1 (en) Pharmaceutical composition for preventing or treating triple-negative breast cancer, comprising oligonucleotide as active ingredient
JP6992984B2 (ja) 腫瘍内静脈形成促進剤
JP2024502336A (ja) がんを治療するための医薬組成物、その製造方法及び使用

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s)

Designated state(s): AM AZ BY KZ KG MD TJ TM RU