EA012968B1 - Препарат, содержащий пробиотические бактерии, способы его получения, продукты на его основе, их применение и ростовой субстрат - Google Patents
Препарат, содержащий пробиотические бактерии, способы его получения, продукты на его основе, их применение и ростовой субстрат Download PDFInfo
- Publication number
- EA012968B1 EA012968B1 EA200700613A EA200700613A EA012968B1 EA 012968 B1 EA012968 B1 EA 012968B1 EA 200700613 A EA200700613 A EA 200700613A EA 200700613 A EA200700613 A EA 200700613A EA 012968 B1 EA012968 B1 EA 012968B1
- Authority
- EA
- Eurasian Patent Office
- Prior art keywords
- bacteria
- range
- preparation
- growth substrate
- growth
- Prior art date
Links
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 title claims abstract description 154
- 230000012010 growth Effects 0.000 title claims abstract description 127
- 239000000758 substrate Substances 0.000 title claims abstract description 83
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 75
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 64
- 239000006041 probiotic Substances 0.000 title claims abstract description 43
- 235000018291 probiotics Nutrition 0.000 title claims abstract description 43
- 230000000529 probiotic effect Effects 0.000 title claims abstract description 35
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims abstract description 16
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 41
- 235000021310 complex sugar Nutrition 0.000 claims abstract description 17
- 235000021309 simple sugar Nutrition 0.000 claims abstract description 17
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims abstract description 10
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims abstract description 8
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 claims abstract description 8
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 claims abstract description 6
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 32
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 31
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 claims description 28
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims description 27
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 claims description 26
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 25
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 25
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 25
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 claims description 25
- 238000003860 storage Methods 0.000 claims description 24
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 claims description 23
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims description 22
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 claims description 16
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 claims description 16
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 claims description 10
- 239000003429 antifungal agent Substances 0.000 claims description 7
- 229940121375 antifungal agent Drugs 0.000 claims description 7
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 claims description 6
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 claims description 6
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 claims description 4
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 claims description 4
- 208000022559 Inflammatory bowel disease Diseases 0.000 claims description 3
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 claims description 3
- 206010009900 Colitis ulcerative Diseases 0.000 claims description 2
- 208000011231 Crohn disease Diseases 0.000 claims description 2
- 239000000969 carrier Substances 0.000 claims description 2
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 claims description 2
- 235000013305 food Nutrition 0.000 claims description 2
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims description 2
- 241000186660 Lactobacillus Species 0.000 claims 1
- 229940039696 lactobacillus Drugs 0.000 claims 1
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims 1
- 230000008569 process Effects 0.000 abstract description 8
- 201000010099 disease Diseases 0.000 abstract description 5
- 239000013589 supplement Substances 0.000 abstract description 2
- 235000013339 cereals Nutrition 0.000 description 38
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 26
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 26
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 19
- 241000894007 species Species 0.000 description 19
- 238000005360 mashing Methods 0.000 description 16
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 16
- 241000271566 Aves Species 0.000 description 13
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 12
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 11
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 11
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 10
- 235000010633 broth Nutrition 0.000 description 9
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 9
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 9
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 8
- 239000004464 cereal grain Substances 0.000 description 8
- 239000000047 product Substances 0.000 description 8
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 7
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 7
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 7
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 7
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 7
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 7
- 244000005709 gut microbiome Species 0.000 description 7
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 6
- 206010012735 Diarrhoea Diseases 0.000 description 6
- 235000013330 chicken meat Nutrition 0.000 description 6
- 230000001332 colony forming effect Effects 0.000 description 6
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 6
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 5
- 235000006708 antioxidants Nutrition 0.000 description 5
- 239000003833 bile salt Substances 0.000 description 5
- 229940093761 bile salts Drugs 0.000 description 5
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 5
- 230000035784 germination Effects 0.000 description 5
- 238000009630 liquid culture Methods 0.000 description 5
- 244000144977 poultry Species 0.000 description 5
- 235000013594 poultry meat Nutrition 0.000 description 5
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 5
- HRXKRNGNAMMEHJ-UHFFFAOYSA-K trisodium citrate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O HRXKRNGNAMMEHJ-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 5
- 229940038773 trisodium citrate Drugs 0.000 description 5
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 5
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 101100042788 Caenorhabditis elegans him-1 gene Proteins 0.000 description 4
- 206010010774 Constipation Diseases 0.000 description 4
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 4
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 4
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 4
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 4
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 4
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 4
- 150000003013 phosphoric acid derivatives Chemical class 0.000 description 4
- 230000003716 rejuvenation Effects 0.000 description 4
- OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 100676-05-9 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)O1 OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- CHHHXKFHOYLYRE-UHFFFAOYSA-M 2,4-Hexadienoic acid, potassium salt (1:1), (2E,4E)- Chemical compound [K+].CC=CC=CC([O-])=O CHHHXKFHOYLYRE-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- ZZZCUOFIHGPKAK-UHFFFAOYSA-N D-erythro-ascorbic acid Natural products OCC1OC(=O)C(O)=C1O ZZZCUOFIHGPKAK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 3
- 240000005979 Hordeum vulgare Species 0.000 description 3
- 235000007340 Hordeum vulgare Nutrition 0.000 description 3
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 description 3
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 3
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 3
- 229930003268 Vitamin C Natural products 0.000 description 3
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 3
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 3
- 239000003613 bile acid Substances 0.000 description 3
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 3
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 3
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 3
- 208000002551 irritable bowel syndrome Diseases 0.000 description 3
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000004302 potassium sorbate Substances 0.000 description 3
- 235000010241 potassium sorbate Nutrition 0.000 description 3
- 229940069338 potassium sorbate Drugs 0.000 description 3
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 3
- 230000035939 shock Effects 0.000 description 3
- 210000000813 small intestine Anatomy 0.000 description 3
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 3
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 3
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- 235000019154 vitamin C Nutrition 0.000 description 3
- 239000011718 vitamin C Substances 0.000 description 3
- 229920002498 Beta-glucan Polymers 0.000 description 2
- 239000002028 Biomass Substances 0.000 description 2
- 101100264195 Caenorhabditis elegans app-1 gene Proteins 0.000 description 2
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 2
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 2
- GXCLVBGFBYZDAG-UHFFFAOYSA-N N-[2-(1H-indol-3-yl)ethyl]-N-methylprop-2-en-1-amine Chemical compound CN(CCC1=CNC2=C1C=CC=C2)CC=C GXCLVBGFBYZDAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 2
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 2
- 239000005708 Sodium hypochlorite Substances 0.000 description 2
- 241000272534 Struthio camelus Species 0.000 description 2
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 2
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 2
- 235000010419 agar Nutrition 0.000 description 2
- 230000003698 anagen phase Effects 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000006172 buffering agent Substances 0.000 description 2
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 2
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 2
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 2
- 239000011362 coarse particle Substances 0.000 description 2
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 2
- 238000005336 cracking Methods 0.000 description 2
- 235000013365 dairy product Nutrition 0.000 description 2
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 2
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 2
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 2
- -1 flavenoidy Chemical class 0.000 description 2
- 238000013467 fragmentation Methods 0.000 description 2
- 238000006062 fragmentation reaction Methods 0.000 description 2
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 2
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 2
- 230000008821 health effect Effects 0.000 description 2
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 2
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 2
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 2
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 description 2
- 244000005706 microflora Species 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 150000002772 monosaccharides Chemical class 0.000 description 2
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000031787 nutrient reservoir activity Effects 0.000 description 2
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 2
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 2
- 239000011236 particulate material Substances 0.000 description 2
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 2
- 235000021317 phosphate Nutrition 0.000 description 2
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 2
- 150000008442 polyphenolic compounds Chemical class 0.000 description 2
- 235000013824 polyphenols Nutrition 0.000 description 2
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 2
- 238000001303 quality assessment method Methods 0.000 description 2
- 229920002477 rna polymer Polymers 0.000 description 2
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 2
- 150000004760 silicates Chemical class 0.000 description 2
- 238000002791 soaking Methods 0.000 description 2
- SUKJFIGYRHOWBL-UHFFFAOYSA-N sodium hypochlorite Chemical compound [Na+].Cl[O-] SUKJFIGYRHOWBL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 2
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 2
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 2
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 2
- 239000011573 trace mineral Substances 0.000 description 2
- 235000013619 trace mineral Nutrition 0.000 description 2
- 235000019801 trisodium phosphate Nutrition 0.000 description 2
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 2
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 2
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 2
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 2
- HSINOMROUCMIEA-FGVHQWLLSA-N (2s,4r)-4-[(3r,5s,6r,7r,8s,9s,10s,13r,14s,17r)-6-ethyl-3,7-dihydroxy-10,13-dimethyl-2,3,4,5,6,7,8,9,11,12,14,15,16,17-tetradecahydro-1h-cyclopenta[a]phenanthren-17-yl]-2-methylpentanoic acid Chemical compound C([C@@]12C)C[C@@H](O)C[C@H]1[C@@H](CC)[C@@H](O)[C@@H]1[C@@H]2CC[C@]2(C)[C@@H]([C@H](C)C[C@H](C)C(O)=O)CC[C@H]21 HSINOMROUCMIEA-FGVHQWLLSA-N 0.000 description 1
- JGLHNZQSQGEHCI-UHFFFAOYSA-N 1-methyl-5-[5-(4-methylpiperazin-1-yl)sulfonyl-2,3-dihydro-1-benzofuran-7-yl]-3-propyl-4h-pyrazolo[4,3-d]pyrimidin-7-one Chemical compound CCCC1=NN(C)C(C(N2)=O)=C1N=C2C(C=1OCCC=1C=1)=CC=1S(=O)(=O)N1CCN(C)CC1 JGLHNZQSQGEHCI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000007319 Avena orientalis Nutrition 0.000 description 1
- 244000075850 Avena orientalis Species 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 1
- 206010012742 Diarrhoea infectious Diseases 0.000 description 1
- 241000283086 Equidae Species 0.000 description 1
- 206010016952 Food poisoning Diseases 0.000 description 1
- 208000019331 Foodborne disease Diseases 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 240000007594 Oryza sativa Species 0.000 description 1
- 235000007164 Oryza sativa Nutrition 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 208000012287 Prolapse Diseases 0.000 description 1
- 241000209140 Triticum Species 0.000 description 1
- 235000021307 Triticum Nutrition 0.000 description 1
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 1
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 1
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 1
- 230000032683 aging Effects 0.000 description 1
- 102000004139 alpha-Amylases Human genes 0.000 description 1
- 108090000637 alpha-Amylases Proteins 0.000 description 1
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 235000013361 beverage Nutrition 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- OHJMTUPIZMNBFR-UHFFFAOYSA-N biuret Chemical compound NC(=O)NC(N)=O OHJMTUPIZMNBFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007844 bleaching agent Substances 0.000 description 1
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 1
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 1
- 239000012152 bradford reagent Substances 0.000 description 1
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 1
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 1
- 238000013124 brewing process Methods 0.000 description 1
- 239000001569 carbon dioxide Substances 0.000 description 1
- 229910002092 carbon dioxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 208000021735 chronic enteritis Diseases 0.000 description 1
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 1
- 238000012937 correction Methods 0.000 description 1
- 239000000645 desinfectant Substances 0.000 description 1
- 230000001066 destructive effect Effects 0.000 description 1
- 230000006866 deterioration Effects 0.000 description 1
- 230000001079 digestive effect Effects 0.000 description 1
- 210000002249 digestive system Anatomy 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 1
- 150000002016 disaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 230000006806 disease prevention Effects 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 208000001848 dysentery Diseases 0.000 description 1
- 239000003344 environmental pollutant Substances 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 1
- 230000035558 fertility Effects 0.000 description 1
- 229930003935 flavonoid Natural products 0.000 description 1
- 150000002215 flavonoids Chemical class 0.000 description 1
- 235000017173 flavonoids Nutrition 0.000 description 1
- 235000013373 food additive Nutrition 0.000 description 1
- 239000002778 food additive Substances 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 230000006870 function Effects 0.000 description 1
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 1
- 230000007160 gastrointestinal dysfunction Effects 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- 235000011868 grain product Nutrition 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 230000007407 health benefit Effects 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 230000036571 hydration Effects 0.000 description 1
- 238000006703 hydration reaction Methods 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000002519 immonomodulatory effect Effects 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 230000003871 intestinal function Effects 0.000 description 1
- 230000001788 irregular Effects 0.000 description 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 1
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 238000012543 microbiological analysis Methods 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 238000007431 microscopic evaluation Methods 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 1
- 229920001542 oligosaccharide Polymers 0.000 description 1
- 150000002482 oligosaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 230000001151 other effect Effects 0.000 description 1
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 description 1
- 238000009928 pasteurization Methods 0.000 description 1
- OQUKIQWCVTZJAF-UHFFFAOYSA-N phenol;sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O.OC1=CC=CC=C1 OQUKIQWCVTZJAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 231100000719 pollutant Toxicity 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 235000009566 rice Nutrition 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 1
- 238000000859 sublimation Methods 0.000 description 1
- 230000008022 sublimation Effects 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 238000001665 trituration Methods 0.000 description 1
- 241001148471 unidentified anaerobic bacterium Species 0.000 description 1
- 230000003442 weekly effect Effects 0.000 description 1
- 108010089746 wobe Proteins 0.000 description 1
- 235000013618 yogurt Nutrition 0.000 description 1
- 210000001325 yolk sac Anatomy 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
- A61K35/74—Bacteria
- A61K35/741—Probiotics
- A61K35/744—Lactic acid bacteria, e.g. enterococci, pediococci, lactococci, streptococci or leuconostocs
- A61K35/747—Lactobacilli, e.g. L. acidophilus or L. brevis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23K—FODDER
- A23K10/00—Animal feeding-stuffs
- A23K10/10—Animal feeding-stuffs obtained by microbiological or biochemical processes
- A23K10/16—Addition of microorganisms or extracts thereof, e.g. single-cell proteins, to feeding-stuff compositions
- A23K10/18—Addition of microorganisms or extracts thereof, e.g. single-cell proteins, to feeding-stuff compositions of live microorganisms
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
- A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
- A23L33/135—Bacteria or derivatives thereof, e.g. probiotics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/185—Acids; Anhydrides, halides or salts thereof, e.g. sulfur acids, imidic, hydrazonic or hydroximic acids
- A61K31/19—Carboxylic acids, e.g. valproic acid
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/335—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin
- A61K31/365—Lactones
- A61K31/375—Ascorbic acid, i.e. vitamin C; Salts thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
- A61K35/74—Bacteria
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
- A61K35/74—Bacteria
- A61K35/741—Probiotics
- A61K35/744—Lactic acid bacteria, e.g. enterococci, pediococci, lactococci, streptococci or leuconostocs
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
- A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
- A61P1/10—Laxatives
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
- A61P1/12—Antidiarrhoeals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
- A61P1/14—Prodigestives, e.g. acids, enzymes, appetite stimulants, antidyspeptics, tonics, antiflatulents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/04—Preserving or maintaining viable microorganisms
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2400/00—Lactic or propionic acid bacteria
- A23V2400/11—Lactobacillus
- A23V2400/169—Plantarum
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Mycology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Virology (AREA)
- Nutrition Science (AREA)
- Physiology (AREA)
- Animal Husbandry (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Pain & Pain Management (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Fodder In General (AREA)
- Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
Abstract
Изобретение относится к препарату метаболически активных пробиотических бактерий, композициям, содержащим такой препарат, например пробиотическим добавкам или кормам для животных, и к их применению, например в лечении заболеваний, нарушающих микробный баланс кишечника. Также описан ростовой субстрат для пробиотических бактерий, содержащий смесь сложных и простых сахаров, и способ изготовления препаратов метаболически активных пробиотических бактерий с использованием этого ростового субстрата.
Description
Изобретение относится к препарату метаболически активных пробиотических бактерий, композициям, содержащим такой препарат, например пробиотическим добавкам или кормам для животных, и к их применению, например в лечении заболевания. Изобретение также относится к ростовому субстрату для пробиотических бактерий, содержащему смесь сложных и простых сахаров, и к способу получения препаратов метаболически активных пробиотических бактерий с использованием этого ростового субстрата.
Предшествующий уровень техники
Микробиологические организмы часто используют в качестве пищевых добавок. Один из примеров представляет собой пробиотические бактерии, которые, как известно, обладают благоприятными эффектами в отношении кишечной микрофлоры, увеличивая устойчивость к инфекционному заболеванию, такому как диарея. Кроме того, показано, что пробиотики вовлечены в модификацию химического состава крови и в иммуномодуляцию (см. ссылки, приведенные под заголовком «Потенциальные благоприятные действия в отношении здоровья» в разделе ссылок).
Пробиотические бактерии могут быть обнаружены в молочных продуктах, таких как йогурт, и виды, которые, как известно, обладают благоприятными действиями в отношении здоровья, включают виды родов Еп1сгососси5 и Ьас1оЬасШи8. Тем не менее пробиотические молочные продукты обладают коротким сроком годности. Пробиотики также доступны для потребителя в форме порошка или таблеток. Дополнительное применение пробиотиков относится к применению в кормах для животных.
В существующих в настоящее время способах хранения бактериальных культур, как правило, применяют лиофилизацию, также названную сушкой вымораживанием. В этом способе воду удаляют из организма путем сублимации и организм может быть оживлен путем добавления воды. Тем не менее высушенные замораживанием бактерии не являются метаболически активными и хорошо известно, что высушенные замораживанием продукты, как правило, утрачивают большую часть своей упругости после нескольких недель хранения при комнатной температуре (Еопкеса с1 а1. и Мигда с1 а1.).
Кроме того, множество имеющихся в продаже пробиотиков, по-видимому, содержат не все компоненты, указанные на этикетках, и когда присутствуют бактерии, количество жизнеспособных бактерий часто является очень низким (1. НашШоп-МШег).
Авторы настоящего изобретения определили, что стабильные препараты жизнеспособных метаболически активных бактерий могут быть получены путем использования конкретного ростового субстрата, содержащего сбалансированные количества сложных и простых углеводов. В противоположность пробиотикам предшествующего уровня техники препараты, предложенные в соответствии с настоящим изобретением, содержат большие количества стабильных и активных бактерий, которые могут поддерживаться при длительном хранении.
Описание изобретения
В соответствии с первым аспектом изобретения предложен препарат, содержащий жизнеспособные метаболически активные пробиотические бактерии и ростовой субстрат, содержащий смесь сложных и простых сахаров, белков и пептидов, где бактерии в препарате демонстрируют практически равновесное состояние роста, характеризующееся тем, что популяция бактерий поддерживается на постоянном уровне при хранении приблизительно при 4°С и при рН в диапазоне от 3,8 до 4,5 в течение периода времени по меньшей мере 5 месяцев, где общее количество сахаров находится в диапазоне от 20 до 40 мг/мл и где общее количество редуцирующих сахаров находится в диапазоне от 5 до 20 мг/мл.
В этом равновесном состоянии скорость размножения бактерий поддерживается близкой к скорости гибели. В предпочтительном воплощении популяция метаболически активных бактерий в состоянии, близком к равновесному, поддерживается в диапазоне от 108 до 109 жизнеспособных клеток на миллилитр.
Ростовой субстрат содержит смесь сложных и простых углеводов (сахаров). Используемые здесь термины сложные углеводы или сложные сахара включают олигосахариды и полисахариды, тогда как термины простые углеводы или простые сахара включают моносахариды и дисахариды.
В предпочтительном воплощении концентрация общих сахаров составляет приблизительно 30 мг/мл, а концентрация редуцирующих сахаров составляет приблизительно 10 мг/мл.
Как правило, общее количество белков и пептидов, присутствующих в субстрате, находится в диапазоне от 1 до 2 мг/мл, а общее количество высокомолекулярных пептидов (молекулярная масса больше 5000 Да) находится в диапазоне от 100 до 300 мкг/мл. В конкретном воплощении концентрация белка и пептидов может составлять приблизительно 2 мг/мл, а концентрация высокомолекулярных пептидов может составлять приблизительно 250 мкг/мл.
Ростовой субстрат может содержать дополнительные компоненты, такие как, например, целлюлоза, крахмал, β-глюканы, пентозаны, полифенолы, рибонуклеиновые кислоты, липиды, фосфаты, флавеноиды, аминокислоты, витамины (Вь В2, С и Е), силикаты и микроэлементы.
В предпочтительном воплощении ростовой субстрат получают из осоложенного зерна злаков. Наиболее предпочтительно ростовой субстрат получают с использованием описанного ниже способа.
- 1 012968
Изобретение обладает преимуществом по сравнению с существующими в настоящее время пробиотическими препаратами, поскольку метаболически активные бактерии могут храниться в течение многих месяцев без повреждения или утраты активности. Используемые в настоящее время препараты высушенных замораживанием бактерий, как правило, содержат небольшое количество, если вообще содержат, метаболически активных бактерий. Кроме того, препараты высушенных замораживанием бактерий утрачивают некоторые из своих характеристик и активность при регидратации. Кроме того, реактивированные бактерии обладают коротким сроком хранения и могут храниться только в течение короткого периода времени. Высушенные замораживанием бактерии часто не регидратируют перед применением у животного хозяина. Если они регидратированы, то, как правило, должны быть использованы в тот же самый день, иначе они могут быстро утрачивать жизнеспособность и портиться из-за загрязнения организмами.
Еще одна проблема с высушенными замораживанием препаратами из предшествующего уровня техники заключается в том, что они являются гигроскопичными (поглощают влагу из воздуха) и, таким образом, пакет необходимо использовать в течение нескольких дней после открывания, иначе частичная гидратация вызывает быструю утрату жизнеспособности.
Препарат по изобретению позволяет избежать вышеперечисленных проблем, связанных с использованием высушенных замораживанием бактериальных культур. Дополнительно авторами изобретения также продемонстрировано, что бактериальные культуры, приготовленные в соответствии с изобретением, значительно более жизнеспособны по сравнению с бактериями, приготовленными с использованием способов, известных из предшествующего уровня техники, что дает возможность бактериям быстрее приживаться в животных-хозяевах и выдерживать агрессивную среду пищеварительного тракта млекопитающего (проиллюстрировано в примере 5).
Авторы изобретения преодолели проблему обычно используемых препаратов путем использования ростового субстрата со сбалансированным запасом питательных веществ в форме сложных и простых сахаров, белков и пептидов в комбинации с контролируемым рН и хранением на холоде. В этих условиях в препарате происходит непрерывный медленный рост бактерий. Комбинация температуры, рН, фазового роста и субстрата обеспечивает состояние роста, близкое к равновесному, посредством чего высокие концентрации жизнеспособных, метаболически активных бактерий могут поддерживаться в течение периодов по меньше мере 5 месяцев.
В конкретном воплощении рН препарата при хранении поддерживают приблизительно на уровне 4,0. рН препарата удобно можно контролировать путем добавления подходящего буфера или комбинации буферных агентов. Предпочтительные буферы включают, например, тринатрий-цитратный или фосфатный буфер. Применение буферов, таких как тринатрий-цитратный или фосфатный буфер, описано в стандартных способах в области техники.
В предпочтительном воплощении бактерии в препарате представляют собой молочно-кислые бактерии. Используемый здесь термин молочно-кислые бактерии (МКБ) описывает группу грамположительных каталазанегативных неподвижных анаэробных бактерий, ферментирующих углеводы в молочную кислоту. Эта группа включает роды Ьас1оЬасШи8, БасЮсоссих. Ребюсоссиз, ВШбоЬас1епит и Еп1егоСОССИ8.
В предпочтительном воплощении бактерии относятся к роду ЬасйоЬасШиз или Еп1егососси8. В наиболее предпочтительном воплощении молочно-кислые бактерии представляют собой по меньшей мере один из следующих видов: Еп1етососсиз Гаесшт, БасЮЬасШиз р1ап1атит, БасЮЬасШиз сазе! и ЬасЮЬасШиз ас1борЫ1из. В предпочтительном воплощении применяют комбинацию Ейетососсиз Гаесшт, БасЮЬасП1из р1ап1атит, Ьас1оЬасШиз сазе!
Препарат дополнительно может содержать противогрибковый агент, такой как, например, стерилизованный сорбат калия и/или антиоксидант, такой как витамин С.
Во втором аспекте изобретения также предложен ростовой субстрат для метаболически активных пробиотических бактерий препарата по изобретению, содержащий сложную смесь углеводов. Ростовой субстрат содержит смесь сложных и простых сахаров, включая мономеры, димеры, олигомеры и полимеры сахаров.
Предпочтительные признаки ростового субстрата являются, по существу, такими, как описано выше в связи с первым аспектом изобретения. Таким образом, общее количество углеводов (простые плюс сложные сахара), присутствующих в ростовом субстрате, предпочтительно находится в диапазоне от 20 до 40 мг/мл, более предпочтительно в диапазоне от 25 до 35 мг/мл и наиболее предпочтительно составляет приблизительно 30 мг/мл. Из этого общего содержания углеводов (сахаров) общее количество редуцирующих сахаров (моносахаридов) предпочтительно находится в диапазоне от 5 до 20 мг/мл, более предпочтительно от 5 до 15 мг/мл и наиболее предпочтительно составляет приблизительно 10 мг/мл.
Хотя простые и сложные углеводы представляют собой ключевой компонент ростового субстрата, понятно, что ростовой субстрат также может содержать дополнительные компоненты, такие как белки, которые обеспечивают азот для роста бактерий. Соответственно, ростовой субстрат предпочтительно содержит общее количество белка и пептидов в диапазоне от 1 до 2 мг/мл, предпочтительно приблизительно 2 мг/мл. Из этого общего содержания белка/пептидов общее количество высокомолекулярных
- 2 012968 пептидов (молекулярная масса больше 5000 Да) может находиться в диапазоне от 100 до 300 мкг/мл и обычно составляет приблизительно 250 мкг/мл. Точная идентичность (например, аминокислотная последовательность) белкового и пептидного компонентов в ростовом субстрате, как правило, не представляет собой объект изобретения.
Ростовой субстрат может содержать дополнительные компоненты, такие как, например, целлюлоза, крахмал, β-глюканы, пентозаны, полифенолы, рибонуклеиновые кислоты, липиды, фосфаты, флавеноиды, аминокислоты, витамины (В1, В2, С и Е), силикаты и микроэлементы. Точная идентичность и относительные количества этих дополнительных компонентов в субстрате не являются особенно лимитирующими. Если, как это предпочтительно, ростовой субстрат получен из природного растительного источника, например осоложенного зерна хлебных злаков, эти дополнительные компоненты обычно представляют собой биомолекулы природного происхождения.
Ростовой субстрат может содержать различные добавки, такие как буферные агенты и другие вещества, разработанные для улучшения характеристик субстрата и/или удлинения срока хранения. Такие добавки могут включать, например, противогрибковые агенты, антиоксиданты и т.д.
В предпочтительном воплощении ростовой субстрат может содержать материал в виде частиц, например частицы, не превышающие в диаметре 1 мм.
Ростовой субстрат может быть получен из осоложенного зерна злаков с использованием описанного ниже способа получения. Однако изобретение не ограничивается субстратами, полученными в соответствии с этим способом. Ростовые субстраты, демонстрирующие, по существу, схожие свойства, могут быть получены синтетически, например путем смешивания вместе требуемой смеси сложных и простых углеводов с любым из перечисленных выше дополнительных компонентов.
В соответствии с еще одним аспектом изобретения предложен способ получения ростового субстрата для пробиотических бактерий, включающий стадию затирания осоложенного зерна, на которой осоложенное зерно смешивают с водной жидкостью и помещают во временные и температурные условия, ограничивающие степень превращения сложных углеводов в простые, так что получают смесь сложных и простых углеводов, белков и пептидов, и отделение смеси сложных и простых углеводов, белков и пептидов от использованного осоложенного зернового продукта с получением ростового субстрата.
Используемые здесь термины осоложенное зерно или солод относятся к продукту процесса осоложивания, примененному к зерну злаков. Осоложивание представляет собой процесс, хорошо известный в области пивоварения.
В типичном процессе осоложивания зерно злаков проращивают для того, чтобы индуцировать мобилизацию запасных питательных веществ. Прорастающие зерна продуцируют ряд ферментов для мобилизации запасных белков и углеводов, включая α-амилазы, которые гидролизуют крахмал в мальтозу. Предпочтительное воплощение относится к применению ячменя, но в объеме изобретения могут быть использованы другие злаки, такие как рис, пшеница, кукуруза и овес или даже их смеси. Способ проращивания в общем хорошо известен. Следует понимать, что способ может быть осуществлен с осоложенным зерном или синтетическим субстратом, содержащим смесь углеводов, белков и ферментов.
Предпочтительно осоложенное зерно плющат перед дальнейшей обработкой. Растрескивание зерен в результате расплющивания облегчает доступ воды и экстракцию питательных веществ во время стадии смешивания, в то же время предотвращение раздробления зерна способствует последующему отделению ростового субстрата от использованного осоложенного зерна.
Полученный солод подвергают операции затирания, которая напоминает стадию затирания, используемую в способах пивоварения (см., например, Кипхс. ^. Тесйио1оду Вгс\\зпд аиб МаШид (1996)). Термин затирание хорошо известен в области пивоварения и относится к процессу, при котором осоложенное зерно перемешивают в присутствии воды, нагретой до определенных температур, для получения сусла. Во время стадии затирания сложные углеводы в осоложенном зерне разрушаются до мальтозы.
Способ по изобретению также включает стадию затирания, на которой осоложенное зерно злаков смешивают с водной жидкостью (как правило, водой) и эту смесь нагревают до различных определенных температур. Эта стадия затирания, однако, не соответствует типичному процессу затирания в пивоварении. Пивовары ставят задачу превратить максимально возможное количество углеводов в простые сахара для последующей их ферментации в спирт. Условия же стадии затирания в способе по изобретению, напротив, подобраны конкретно для ограничения степени превращения в простые (редуцирующие) сахара, оставляя значительные количества углеводов в более сложных олигомерных и полимерных формах.
В неограничивающих воплощениях степень превращения углевода может быть ограничена так, чтобы количество простых (редуцирующих) сахаров, присутствующих в получающемся в результате ростовом субстрате, выраженное в виде процента (мас./мас.) от общего содержания углеводов, находилось в диапазоне от 10 до 50% (мас./мас.).
Желаемое ограниченное превращение сложных сахаров в простые может быть достигнуто путем увеличения температуры на стадии затирания в течение короткого периода времени, как правило,
- 3 012968 мин, не давая смеси осоложенное зерно/вода возможности выдерживаться при промежуточных температурах. Традиционные процессы пивоварения включают выдержку при 60-65 и 70-74°С, поскольку это дает возможность ферментам продуцировать высокие концентрации простых сахаров (в основном мальтозы). Соответственно, в предпочтительном воплощении изобретения стадия затирания не включает выдержку при температурах в диапазоне от 60 до 65°С и/или при температурах в диапазоне от 70 до 74°С.
В конкретном воплощении стадия затирания включает смешивание осоложенного зерна с водой при температуре в диапазоне от 30 до 45°С, выдерживание смеси в течение промежутка времени от 1 до 2 ч, увеличение температуры до температуры в диапазоне от 75 до 85°С в течение периода времени в диапазоне от 20 до 40 мин, предпочтительно 30 мин, и затем выдерживание смеси при температуре в диапазоне от 75 до 85°С в течение периода времени в диапазоне от 60 до 90 мин. При более высокой температуре любые ферменты, присутствующие в смеси, инактивируются и питательные вещества могут быть экстрагированы. Как правило, предпочтительны более высокие температуры в диапазоне от 76 до 80°С и конкретно 78°С. Температура на этой стадии должна быть достаточно высокой в течение промежутка времени, достаточно длительного для инактивации всех ферментов, присутствующих в препарате. Следует понимать, что точная используемая температура и временные промежутки могут в некоторой степени варьировать в соответствии с типом используемого зерна.
Описанный здесь способ специфически ограничивает степень превращения сложных сахаров в простые сахара. Кроме того, исходное выдерживание при температуре в диапазоне от 30 до 45°С обеспечивает дополнительное преимущество, заключающееся в том, что оно максимизирует высвобождение аминокислот и пептидов. Как правило, предпочтительны температуры, находящиеся ближе к верхней границе этого диапазона, т.е. от 40 до 45°С или конкретно приблизительно 45°С. Задача этой стадии заключается в гидролизе запасных белков, присутствующих в зерне хлебных злаков, до доступных аминокислот и пептидов. Оптимальная комбинация времени и температуры для достижения желаемого гидролиза может в некоторой степени варьировать в зависимости от типа используемого зерна.
Присутствие высоких концентраций белков, пептидов и аминокислот желательно в ростовом субстрате, используемом для поддержания роста бактерий, поскольку обеспечивает полезный источник азота. Типичные способы затирания, используемые в традиционном пивоварении, как правило, не включают выдерживание при температуре в этом диапазоне, поскольку пивовары обычно не стремятся достичь высокого содержания белка или аминокислот в сусле, предназначенном для ферментации с получением спирта.
По завершении стадии затирания, например, когда все желаемые питательные вещества экстрагированы из уже истощенного осоложенного зерна, получающаяся в результате смесь, содержащая сложные и простые углеводы, белки и пептиды, может быть отделена от оставшегося зерна с получением ростового субстрата с использованием любых подходящих способов. Как правило, они включают грубую фильтрацию, например с использованием фильтра 1 мм, такого как имеющая форму клина проволочная клетка, с получением раствора, содержащего грубые частицы. Признак способа по изобретению заключается в том, что ростовой субстрат не осветляют, как это обычно имеет место в случае сусла, приготовленного в ходе процедуры стандартного пивоварения. В традиционном пивоварении сусло обычно осветляют для удаления всех грубых частиц, таким образом получая прозрачную жидкость.
Присутствие некоторого количества материала в виде частиц в ростовом субстрате, приготовленном в соответствии со способом по изобретению, является благоприятным с точки зрения последующего применения для поддержания роста бактерий, поскольку обеспечивает медленное высвобождение питательных веществ и поверхности частиц для адгезии бактериальных культур.
Если требуется, ростовой субстрат, приготовленный в соответствии с изобретением, может быть стерилизован перед дальнейшим использованием. Как понятно, это может быть осуществлено путем кипячения в течение приблизительно одного часа или путем автоклавирования при 120°С в течение приблизительно 20 мин.
Если необходимо, в ростовой субстрат может быть добавлен буфер или несколько буферных компонентов, например, если ростовой субстрат затем должен быть использован для приготовления бактериального препарата в соответствии с первым аспектом изобретения. Предпочтительные буферы являются такими, как перечислено в связи с первым аспектом изобретения. Если ростовой субстрат должен быть простерилизован, буфер(ы) может(гут) быть добавлен(ы) перед, во время или после стерилизации, как целесообразно.
В еще одном аспекте изобретение также относится к способу получения стабильного препарата жизнеспособных, метаболически активных пробиотических бактерий, включающему выращивание бактерий в ростовом субстрате, содержащем смесь сложных и простых сахаров, белков и пептидов, где общее количество сахаров находится в диапазоне от 20 до 40 мг/мл, а общее количество редуцирующих сахаров находится в диапазоне от 5 до 20 мг/мл, и охлаждение полученных бактерий до температуры приблизительно 4°С, при которой бактерии демонстрируют практически равновесное состояние роста, характеризующееся тем, что популяция бакте
- 4 012968 рий может поддерживаться на постоянном уровне при хранении приблизительно при 4°С и при рН в диапазоне от 3,8 до 4,5 в течение периода времени по меньшей мере 5 месяцев.
В конкретном воплощении бактерии выращивают в ростовом субстрате до достижения ими концентрации от 2х108 до 1х 109 колониеобразующих единиц в миллилитре. В этот момент культуру (или ферментационную среду) охлаждают до приблизительно 4°С, и комбинация температуры, рН, фазы роста и состава оставшегося субстрата обеспечивает равновесные условия, дающие возможность для поддержания практически равновесного состояния роста при длительном хранении. В этом практически равновесном состоянии, которое может поддерживаться в течение периода времени, составляющего по меньшей мере 5 месяцев, популяцию метаболически активных бактерий поддерживают, по существу, на постоянном уровне в диапазоне от 108 до 109 жизнеспособных клеток на миллилитр. Следует понимать, однако, что точное количество жизнеспособных клеток в этом практически равновесном состоянии может в некоторой степени варьировать в зависимости от видов используемых бактерий.
Способ в соответствии с этим аспектом изобретения включает стадию роста, на которой бактерии выращивают в ростовом субстрате до достижения ими концентрации, дающей возможность достижения при последующем хранении практически равновесного состояния. Важная особенность способа заключается в том, что используемый ростовой субстрат обеспечивает сбалансированное поступление питательных веществ, содержащих смесь сложных и простых сахаров, где высокая доля углеводного содержимого находится в форме сложных сахаров, которые могут быть использованы в качестве источника энергии бактериями. Эта смесь дает возможность для ограничения непосредственно доступной энергии во время стадии роста. Композиция и предпочтительные признаки ростового субстрата предпочтительно являются такими, как описано выше в связи с первым и вторым аспектами изобретения. Ростовой субстрат предпочтительно готовят из осоложенного зерна злаков с использованием описанного здесь способа получения. Следует понимать, тем не менее, что не является строго необходимым использовать ростовой субстрат, полученный в соответствии с этим способом. Похожие результаты могут быть достигнуты при использовании ростового субстрата, полученного синтетически путем смешивания требуемых пропорций сложных и простых углеводов, белков и пептидов.
Стадию роста следует осуществлять с осторожностью, чтобы не выращивать бактерии слишком длительное время для того, чтобы избежать получения кислых условий, которые ингибировали бы дальнейший рост, а также ограничивали период хранения получающегося в результате препарата. С другой стороны, если преждевременно прервать стадию роста, это будет ограничивать продукцию биомассы. Величину рН препарата во время выращивания бактерий можно использовать в качестве индикатора практически равновесного состояния. В типичном воплощении культуры молочно-кислых бактерий могут выращиваться до достижения рН 4,5±0,3 единицы.
Следует понимать, что рН ростового субстрата может в некоторой степени варьировать в зависимости от оптимального диапазона рН для используемой бактерии. В типичном воплощении (подходящем для молочно-кислых бактерий) величина рН во время хранения должна находиться в диапазоне от 3,8 до 4,5. Предпочтительно в ростовой субстрат для контроля рН в течение роста бактерий и последующего хранения добавляют буферы, такие как тринатрийцитрат или фосфаты.
Следует понимать, что точная длительность стадии роста бактерий до достижения практически равновесного состояния зависит от используемых видов. Выращивание бактерий может быть осуществлено в любом подходящем аппарате для культивирования. В специфических воплощениях стадия роста может быть осуществлена путем ферментации в ферментационном сосуде.
В предпочтительном воплощении используемые бактерии представляют собой молочно-кислые бактерии. Предпочтительные виды относятся к родам Еп1егососси§ и Еас1оЬасй1и8. Если такие виды должны были бы быть выращены с использованием обычных ростовых сред, состоящих в значительной степени из простых сахаров, избыточное поступление энергии привело бы к избыточной продукции кислоты молочно-кислыми бактериями, что ограничило бы продукцию биомассы и срок хранения получающейся в результате культуры. Наоборот, сложная смесь сахаров, присутствующих в ростовом субстрате, используемая в способе по изобретению, поставляет энергию для роста в исходной стадии роста и также для поддержания при хранении продукта.
В соответствии с изобретением стадия роста может быть осуществлена с использованием отдельного вида бактерии. В предпочтительном воплощении изобретения два или более чем два разных вида бактерий могут быть выращены независимо в отдельных ростовых средах и затем смешаны перед или после стадии охлаждения. Ростовые субстраты, используемые для независимого культивирования двух или более чем двух различных видов бактерий, могут иметь одинаковый или разный состав. Таким образом, можно оптимизировать условия роста культур индивидуальных видов бактерий и затем объединять культуры вместе для хранения в условиях, дающих возможность для поддержания равновесного роста для каждого из индивидуальных видов в культуре.
В других воплощениях способа два или более чем два различных вида бактерий можно выращивать вместе в единой культуре в одном и том же ростовом субстрате при условии, что их скорости роста сравнимы, так что ни один вид не будет доминировать в популяции. После стадии роста препарат может
- 5 012968 быть проанализирован с использованием стандартных способов для определения микробиологической чистоты и подсчета бактерий. Также можно выращивать две или более чем две различные комбинации бактерий вместе в отдельных ростовых субстратах и затем объединять культуры вместе в конечном продукте. Комбинированная культура аналогичным образом может быть смешана с культурой отдельного вида бактерий.
Исходные культуры для стадии роста способа включают, например, высушенные замораживанием бактерии или жидкие культуры.
Следует понимать, что препарат бактерий, приготовленный с использованием способа по изобретению, может быть использован непосредственно после стадии охлаждения, но чаще всего препарат хранят перед применением. Оптимальная температура для хранения для поддержания практически равновесного состояния роста в культуре составляет приблизительно 4°С, но специалисту в данной области техники понятно, что температура хранения может в некоторой степени варьировать. Для удобства аликвоты практически равновесной культуры, полученной данным способом, могут быть распределены в подходящую стерильную упаковку перед длительным хранением.
Ключевое преимущество способа по изобретению заключается в том, что полученные практически равновесные культуры сохраняют жизнеспособность и целостность при хранении в течение продолжительных периодов времени, как правило, в течение по меньшей мере 5 месяцев. Однако следует понимать, что для данного способа не является существенным, чтобы культуры в действительности хранились в течение по меньшей мере 5 месяцев перед использованием.
Для того чтобы избежать роста грибов или дрожжей, перед хранением может быть добавлен противогрибковый агент, такой как стерильный сорбат калия. Противогрибковые агенты главным образом предотвращают порчу дрожжами или грибами во время использования конечными пользователями после открывания контейнера с продуктом. Кроме того, может быть добавлен антиоксидант, например витамин С, для того, чтобы способствовать предотвращению порчи продукта при хранении. Следует понимать, что другие агенты, хорошо известные в области техники, также могут быть использованы в качестве противогрибковых агентов или антиоксидантов.
В еще одном аспекте изобретение также относится к альтернативному способу получения стабильного препарата жизнеспособных метаболически активных пробиотических бактерий, для которого не требуется стадия активного роста. Этот способ включает следующие стадии: добавление бактерий в ростовой субстрат, содержащий смесь сложных и простых сахаров, белков и пептидов, где общее количество сахаров находится в диапазоне от 20 до 40 мг/мл, а общее количество редуцирующих сахаров находится в диапазоне от 5 до 20 мг/мл, с получением препарата бактерий в концентрации, обеспечивающей практически равновесное состояние роста бактерий, причем популяция бактерий в препарате поддерживается на постоянном уровне при хранении приблизительно при 4°С и при рН в диапазоне от 3,8 до 4,5 в течение периода времени по меньшей мере 5 месяцев, если хранение предусмотрено.
Предпочтительные виды бактерий являются такими, как перечислено выше в связи со способом, для которого требуется стадия активного роста.
Для этого способа не требуется, чтобы бактерии выращивались в ростовом субстрате перед помещением их в условия для практически равновесного роста. Точнее, ростовой субстрат инокулируют закваской(ами) бактерий в концентрации, дающей возможность для поддержания равновесного состояния, когда получающийся в результате препарат хранят при 4°С и указанной контролируемой величине рН в течение периода времени, составляющего по меньшей мере 5 месяцев. Закваски для способа включают, например, высушенные замораживанием бактерии или жидкие культуры. Ростовой субстрат может быть инокулирован более чем одним видом бактерий. Предпочтительно концентрация жизнеспособных клеток в закваске превосходит концентрацию жизнеспособных клеток на миллилитр.
Практически равновесного состояния вновь достигают путем комбинирования питательных веществ в ростовом субстрате, температуры, рН и фазы роста. В практически равновесном состоянии, которое может поддерживаться в течение периода времени, составляющего по меньшей мере 5 месяцев, популяцию метаболически активных бактерий предпочтительно поддерживают на постоянном уровне в диапазоне от 108 до 109 жизнеспособных клеток в миллилитре. Опять же следует понимать, что точное количество жизнеспособных клеток в практически равновесном состоянии может в некоторой степени варьировать в зависимости от видов используемых бактерий. Кроме того, понятно, что точная концентрация закваски и рН ростового субстрата могут варьировать в зависимости от видов используемых бактерий.
Признаки, раскрытые в качестве предпочтительных в отношении практически равновесных культур, полученных посредством способа, требующего стадии роста, применимы при внесении необходимых изменений в отношении практически равновесных культур, получаемых посредством этого способа. Предпочтительно для поддержания рН в диапазоне от 3,8 до 4,5 при хранении используют буферы, такие как тринатрийцитрат или фосфаты.
В предпочтительном воплощении используемые бактерии представляют собой молочно-кислые бактерии. Предпочтительные виды относятся к родам Еиксгососсик и Ьас1оЬас111и8.
- 6 012968
Предпочтительные признаки ростового субстрата, используемого в этом способе, являются такими, как описано выше в связи со вторым аспектом изобретения. Вновь, предпочтительно, но не существенно, чтобы ростовой субстрат был приготовлен из осоложенного зерна хлебных злаков с использованием описанного здесь способа.
Применения препарата метаболически активных бактерий.
Благоприятные эффекты пробиотиков в отношении здоровья хорошо известны (см., например, МаДеаи, Р. аиф ВатЬаиФ, Ι-С., (1996) ТйетареиДс аррйсайоик οί ртоЬюДск ίη йитаик' ίη ЬееФк, А.В. аиф Ро\\!апФ. 1.В. (еФк.) Си1 Дота аиф ПеаПП - раз!, ргекеи! аиф ГиШге. Воуа1 8оае1у οί МеФюше Ргекк ЫиШеФ. ЬоиФои; Б1агк, В.А. аиф ^11кш8ои, (еФ§.) (1989) РтоЬюДсз. Тйеогу аиф Аррйсайоиз). Показано, что пробиотики полезны при лечении диареи и запора, синдрома раздраженного кишечника, лечении и профилактике рака и других заболеваний, нарушающих кишечную микрофлору. Бактериальные препараты, предложенные в изобретении, таким образом, обладают особенной полезностью в лечении или профилактике заболеваний, нарушающих кишечную микрофлору, и более общей полезностью при поддержании здоровой микрофлоры.
Таким образом, в еще одном аспекте изобретения предложен способ лечения или предупреждения расстройства, нарушающего кишечный баланс микроорганизмов у пациента - человека или животного, включающий введение нуждающемуся в этом пациенту эффективного количества стабильного препарата метаболически активных бактерий по изобретению.
В частности, изобретение относится к лечению или предупреждению хронического воспалительного заболевания кишечника, неспецифического язвенного колита или болезни Крона. Кроме того, бактериальные культуры в соответствии с изобретением могут быть введены пациенту, человеку или животному (например, млекопитающему или птице), для общего поддержания здоровой микрофлоры, а не для лечения конкретного заболевания.
В еще одном воплощении изобретение также относится к применению стабильного препарата метаболически активных бактерий в соответствии с изобретением для изготовления лекарственного средства для лечения заболеваний, нарушающих кишечную микрофлору.
Бактериальные препараты могут быть использованы сами по себе, например в виде пробиотических добавок, или они могут быть смешаны с дополнительными компонентами перед введением человеку или животному или даже введены вместе с дополнительными компонентами без смешивания. Для ветеринарного применения может быть удобно добавлять бактериальный препарат в обычный корм для животных. В ветеринарной практике препараты особенно полезны в лечении видов птиц, в особенности промышленной птицы (как проиллюстрировано в сопутствующих примерах), а также видов млекопитающих, например коров, овец, лошадей, кошек, собак и т.д.
Для применения у людей бактериальные препараты могут быть введены сами по себе или опять же могут быть смешаны или приготовлены с дополнительными компонентами перед введением субъектучеловеку. Таким образом, изобретение охватывает композиции, содержащие бактериальный препарат по изобретению вместе с одним или более чем одним дополнительным компонентом. В качестве примера дополнительные компоненты могут быть добавлены для улучшения вкусовых качеств композиции для потребления людьми. Если удобно, препараты в соответствии с изобретением могут быть включены в продукты питания или напитки для потребления людьми при условии, что это не повлияет на жизнеспособность бактерий в препарате.
Для применения людьми и/или ветеринарного применения может быть удобно готовить препараты по изобретению в стандартных лекарственных формах сами по себе или в комбинации с одним или более чем одним фармацевтически приемлемым разбавителем, эксципиентом или носителем. Опять же, такой препарат не должен негативно влиять на жизнеспособность бактерий в препарате.
Это изобретение дополнительно поясняется со ссылкой на следующие не ограничивающие объем изобретения экспериментальные примеры вместе с сопутствующими графическими материалами, на которых представлено следующее.
Фиг. 1а-1г демонстрируют устойчивость жидкой культуры ЬасФЬасШик р1аи!агит, приготовленной описанным здесь способом (жидкая) по сравнению с лиофилизированным препаратом бактерии (сухой). Первые две кривые роста (фиг. 1а и 1б) указывают на то, что в невраждебной среде бактерии, приготовленные в соответствии с изобретением, растут быстрее по сравнению с лиофилизированным препаратом. Кривая роста на фиг. 1в демонстрирует рост ЬасФЬасШик р1аи!агит, приготовленных описанным здесь способом (жидкая) по сравнению с лиофилизированным препаратом бактерии (сухой) в среде, обогащенной солями желчных кислот. Фиг. 1г демонстрирует рост ЬасФЬасШик р1аи!агит, приготовленной описанным здесь способом (жидкая) по сравнению с лиофилизированным препаратом бактерии (сухой) при низком рН и в присутствии солей желчных кислот, имитирующих среду, обнаруженную в пищеварительном тракте млекопитающих. Результаты демонстрируют, что бактерии, приготовленные в соответствии со способом по изобретению, более устойчивы к враждебной среде.
Фиг. 2а и 2б демонстрируют, что срок хранения бактерий, приготовленных в соответствии с изобретением, увеличивается.
Фиг. 3 демонстрирует колонизацию бактерий в тонкой кишке цыпленка.
- 7 012968
Пример 1. Получение ростового субстрата с использованием среды на основе ячменя.
(A) Проращивание (осоложивание).
День 1.
Ячмень замачивали в воде в течение 2-24 ч в зависимости от партии зерна. 0,1% (мас./об.) гипохлорита натрия (отбеливатель) может быть включено в воду для ингибирования роста биологических загрязнителей в течение фазы проращивания. Через 4 ч воду с зерна сливали и зерно оставляли при комнатной температуре при 10-30°С в течение приблизительно 1 дня.
День 2.
Зерно замачивали в чистой воде в течение еще одного 4-часового периода. В воду для этого и последующих замачиваний может быть добавлена перекись водорода (0,1% мас./об.). Перекись водорода обеспечивает кислород для прорастающего зерна и действует в качестве обеззараживающего средства. Альтернативно, может быть использован гипохлорит натрия. Через 4 ч воду с зерна сливали и зерно оставляли приблизительно на 1 день. Редкое (например, каждые 4 ч) встряхивание зерен может улучшить проращивание путем увеличения газообмена, снабжения кислородом и удаления двуокиси углерода.
День 3 и далее.
Цикл замачивания, сушки и выдерживания продолжали до тех пор, пока появляющиеся на зернах корешки не достигали длины 2-4 мм. Эта стадия роста свидетельствовала о том, что зерно продуцировало ферменты для мобилизации запасных питательных веществ. Эти ферменты являются ключевыми для последующей продукции ростовой среды во время затирания. Может быть допустимой более экстенсивная модификация зерна с сохранением фазы прорастания до тех пор, пока корешки не достигнут длины нескольких миллиметров. Однако слишком значительный рост лишь превратит питательные вещества в корни и побеги растения, которые не могут быть использованы в ферментации.
(Б) Плющение.
После того как зерно достаточно проросло, его затем перемалывают с использованием вальцовой плющилки. Плющилка отрегулирована таким образом, чтобы зерна растрескивались, но не раздроблялись или полностью не расплющивались. Растрескивание зерен дает возможность для доступа воды и экстракции питательных веществ во время затирания, в то же время предотвращение раздробления зерен облегчает стадию фильтрации.
(B) Приготовление ростового субстрата.
Пророщенные перемолотые зерна смешивали с водой в количестве, достаточном для того, чтобы покрыть их, при 45°С, и смесь выдерживали при 45°С в течение 1 ч.
Через 1 ч при 45°С температуру увеличивали до 78°С в течение 30 мин.
Смесь оставляли стоять при 78°С в течение 1 ч. После выдерживания при 78°С истощенные зерна отделяли путем фильтрования. Использовали относительно грубый фильтр (например, имеющая форму клина проволочная клетка, 1 мм) с получением раствора, содержащего значительные количества суспендированных твердых веществ. Истощенное зерно удаляли и жидкость затем подвергали температурной обработке для ее пастеризации или стерилизации. В этом конкретном эксперименте жидкость кипятили в течение 45 мин. Затем добавляли буфер (0,5% (мас./об.) тринатрийцитрат) и смесь кипятили в течение еще 15 мин с получением конечного ростового субстрата.
Пример 2. Анализ ростового субстрата.
(а) Анализы углеводов.
Общее содержание углеводов определяли путем анализа с использованием фенол-серной кислоты с глюкозой в качестве референсного стандарта (ЭиЬощ, М., СШсз. К.А., НатШоп, БК., КсЬега, Р.А. апб 8шйй, Р. (1956) Апа1у11са1 СйешШгу, νοί. 28, р. 350).
Редуцирующие сахара определяли с использованием способа Нельсона-Сомогуи (№15оп-8отоду1) опять же с глюкозой в качестве референсного стандарта (8отоду1, М. (1952) 1оита1 о! Вю1ощса1 Сйетщ1гу, νο1. 195, р. 19).
Результаты.
Общие сахара в субстрате находятся в диапазоне от 20 до 40 мг/мл.
Редуцирующие сахара находятся в диапазоне от 5 до 20 мг/мл.
(б) Белковые и пептидные анализы.
Общее содержание белка определяли с использованием двух анализов с бычьим сывороточным альбумином в качестве референсного стандарта.
(1) Биуретовый реагент (И2Йак1, В.Р & 0111, Ό.Μ. (1964) Апа1уйса1 Вюсйетщйу, Уо1. 9, р. 401-410).
(2) Метод Лоури, модифицированный Охниши и Барром (ϋΐιπίδΐιί апб Вагг) (ОйпЦЫ, 8.Т. & Вагг, БК. (1978) 1оигпа1 о! Вю1одюа1 Сйетщйу, Уо1. 193, р. 265).
Пептиды, имеющие молекулярную массу больше 5000 Да, определяли с использованием реагента Брэдфорда (ВгаЛогб, М.М. (1976) Апа1уИса1 ВюсйетНйу, Уо1. 72, р. 248-254).
Результаты.
Общее содержание белка и пептидов находятся в диапазоне от 1 до 2 мг/мл.
Высокомолекулярные пептиды (больше чем 5000 Да) находятся в диапазоне от 100 до 300 мкг/мл.
- 8 012968
Пример 3. Продукция метаболически активной бактериальной культуры.
(А) Ферментация.
Ростовой субстрат, приготовленный в соответствии с примером 1, охлаждали до 37°С и добавляли бактериальные культуры. Примеры подходящего инокулума представляют собой высушенные замораживанием бактерии или жидкие закваски (как правило, 1% (об./об.) ночной культуры в питательном бульоне).
В этом примере следующие бактерии выращивали в двух сосудах:
(1) ЕгИегососсих Гасешт. ЬасФЬасШш р1аи1агит;
(2) ЬасФЬасШш сахек
Ферментацию осуществляли в течение 16-20 ч до тех пор, пока рН не достигала 4,5±0,3 единиц. Ферментационную смесь затем охлаждали до 4°С и подвергали стандартным анализам для оценки качества (для определения микробиологической чистоты и подсчета бактерий).
В этот момент в ферментационный бульон может быть добавлен стерильный сорбат калия (конечная концентрация 0,005% мас./об.). Это осуществляют для ингибирования роста любых грибов или дрожжей, который может возникать ввиду загрязнения при манипуляции конечным пользователем. Также в качестве антиоксиданта может быть добавлен витамин С (конечная концентрация 0,01% мас./об.).
Если необходимо, после тестов для оценки качества различные партии могут быть смешаны с получением продуктов со сложными смесями бактериальных видов.
В представленном здесь примере смешивание двух партий бактерий дает конечный продукт, содержащий бактерии Етегососсих Гаесшт, ЕасФЬасШих р1ап1атит и БасЮЬасШих сахек
Пример 4. Срок годности метаболически активной бактериальной культуры.
Для оценки срока годности метаболически активной бактериальной культуры партии бактериальной культуры, содержащей виды Етегососсих Гаесшт, ЕасФЬасШих р1ап1агит и БасЮЬасШих сахек полученной в примере 2, хранили при 4°С (±1°С). Образцы отбирали с недельными интервалами и аликвоты по 100 мкл серийных разведений в 0,1%-ном (мас./об.) пептонном бульоне растирали на чашках с агаром. Чашки инкубировали в течение приблизительно 48 ч при приблизительно 37°С и бактериальные колонии подсчитывали.
Результаты.
Приведенные ниже результаты демонстрируют срок годности для бактерий, приготовленных способом по изобретению, в виде количества колониеобразующих единиц на миллилитр в неделю (также смотри фиг. 2). Партии А и Б готовили в соответствии с тем же самым способом, описанным здесь, но в другие дни.
Е.Г = Еп1егососси8 Гаесшт.
Ь.р = ЕасФЬасШих р1ап1агит.
Ь.с = ЕасФЬасШих сахек
МКБ = Молочно-кислые бактерии.
КОЕ на мл = колониеобразующие единицы на миллилитр.
- 9 012968
Партия А (8059)
Таблица 1
Неделя | Е.Г | Б-Р | 1_.с | Общие МКБ |
0 | 2.7Е+08 | 1.2Е+08 | 9.0Е+07 | 4.8Е+08 |
1 | 2.0Е+08 | 2.4Е+08 | 1.9Е+08 | 6.3Е+08 |
2 | 2.4Е+08 | 2.2Е+08 | 1.5Е+08 | 6.1Е+08 |
3 | 3.0Е+08 | 1.9Е+08 | 9.0Е+07 | 5.8Е+08 |
4 | 3.0Е+08 | 1.8Е+08 | 8.0Е+07 | 5.6Е+08 |
5 | 3.5Е+08 | 1.7Е+08 | 6.0Е+07 | 5.8Е+08 |
6 | 3.0Ε+08 | 1.9Е+08 | 5.0Е+07 | 5.4Е+08 |
7 | 3.1Е+08 | 1.5Е+08 | 3.0Е+07 | 4.9Е+08 |
8 | 2.8Е+08 | 1.7Е+08 | 3.0Е+07 | 4.8Е+08 |
9 | 2.5Е+08 | 1.7Е+08 | 3.0Е+07 | 4.5Е+08 |
10 | 2.5Е+08 | 1.6Е+08 | 2.0Е+07 | 4.3Е+08 |
11 | 2.2Е+08 | 1.5Е+08 | 3.0Е+07 | 4.0Е+08 |
12 | 2.0Е+08 | 1.4Е+08 | 3.0Ε+07 | 3.7Е+08 |
13 | 1.6Е+08 | 1.5Е+08 | 2.0Е+07 | З.ЗЕ+08 |
14 | 1.5Е+08 | 1.5Е+08 | 2.0Е+07 | 3.2Е+08 |
15 | 1.5Е+08 | 1.3Е+08 | 2.0Е+07 | 3.0Е+08 |
16 | 1.4Е+08 | 1.3Е+08 | 2.0Е+07 | 2.9Е+08 |
17 | 1.2Е+08 | 1.4Е+08 | 2.0Е+07 | 2,8Е+08 |
18 | 6.0Е+07 | 1.4Е+08 | 1.0Е+07 | 2.1Е+08 |
19 | 4.0Е+07 | 1.3Е+08 | 2.0Е+07 | 1.9Е+08 |
20 | 3.0Е+07 | 1.1Е+08 | 2.0Е+07 | 1,6Е+08 |
21 | 4.0Е+07 | 1.1Е+08 | 2.0Е+07 | 1.7Е+08 |
22 | 1.0Е+07 | 1.0Е+08 | 1.0Е+07 | 1.2Е+08 |
Таблица 2
Партия Б (8060)
Неделя | Ε.ί | Бр | Ь.С | Общие МКБ |
0 | 3.0Е+08 | 1.3Е+08 | 1.5Е+07 | 5.8Е+08 |
1 | 3.6Е+08 | 1.6Е+08 | 2.5Е+08 | 7.7Е+08 |
2 | 3.0Е+08 | 1.5Е+08 | 1.4Е+08 | 5.9Е+08 |
3 | 1.8Е+08 | 2.2Е+08 | 1.2Е+08 | 5.2Е+08 |
4 | 2.1Е+08 | 1.0Е+08 | 8.0Е+07 | 3.9Е+08 |
5 | 1.7Е+08 | 1.0Е+08 | 7.0Е+07 | 3.4Е+08 |
6 | 1.6Е+08 | 2.0Е+08 | 8.0Е+07 | 4.4Е+08 |
7 | 1.5Е+08 | 1.4Е+08 | 7.0Е+07 | 3.6Е+08 |
8 | 1.2Е+08 | 1.5Е+08 | 5.0Е+07 | 3.2Е+08 |
9 | 1,5Е+08 | 1.1Е+08 | 6.0Е+07 | 3.2Е+08 |
10 | 2.3Е+08 | 1.0Е+08 | 5.0Е+07 | 3.8Е+08 |
11 | 1.8Е+08 | 1.0Е+08 | 2.0Е+07 | 3.0Е+08 |
12 | 1.6Е+08 | 1.0Е+08 | 3.0Е+07 | 2.9Е+08 |
13 | 1,2Е+08 | 1.1Е+08 | 3.0Е+07 | 2.6Е+08 |
14 | 1.0Е+08 | 1.1Е+08 | 2.0Е+07 | 2,ЗЕ+08 |
15 | 1.0Е+08 | 1.0Е+08 | 2.0Е+07 | 2.2Е+08 |
16 | 1.0Е+08 | 1.0Е+08 | 2.0Е+07 | 2.2Е+08 |
17 | 8.00Е+07 | 9.00Е+07 | 1.00Е+07 | 1,8Е+08 |
18 | 9.00Е+07 | 9.00Е+07 | 1.00Е+07 | 1.9Е+08 |
19 | 8.00Е+07 | 8.00Е+07 | 2.00Е+07 | 1.8Е+08 |
20 | 6.00Е+07 | 8.00Е+07 | 1.00Е+07 | 1.5Е+08 |
21 | 5.00Е+07 | 7.00Е+07 | 1.00Е+07 | 1.3Е+08 |
22 | 4.00Е+07 | 8.00Е+07 | 1.00Е+07 | 1.3Е+08 |
- 10 012968
Пример 5. Оценка устойчивости метаболически активной культуры и высушенных замораживанием бактерий.
В этой серии экспериментов отдельный штамм 1ас1оЬасШи§ р1ап1агит использовали для инокуляции ростовых сред. Последующий рост приблизительно при 37°С измеряли путем контроля поглощения при 600 нм (и также проверяли путем растирания разведений на агаровых средах).
Жидкая относится к жидкой культуре бактерии (продуцируемой способом, описанным в данном патенте). Сухой относится к лиофилизированному препарату бактерии, суспендированному в бульоне МВБ (Эе Мап, Водока апб Бйагре Вго(11) непосредственно перед инкубацией в конкретные среды. Идентичные количества жидких и сухих бактерий использовали в каждой паре инкубации.
(1) Рост в обогащенной и дружественной среде.
Бактерии инокулировали в бульон МВБ и контролировали их рост (х1=инокулюм конечной концентрации 1х107 КОЕ/мл; х2=2х107 КОЕ/мл). Результаты представлены на фиг. 1а. Эта первая кривая роста указывает на то, что в невраждебной среде жидкая культура растет быстрее по сравнению с лиофилизированным препаратом. Предположительно для бактерий в лиофилизированном препарате, находящихся в состоянии покоя, требуется время для регидратации и запуска их метаболизма.
(2) Влияние кислотного шока.
1% (об./об.) жидкой культуры или суспензии лиофилизированных бактерий добавляли к бульону МВБ, который доводили до различных значений рН с использованием НС1. Бактерии инкубировали в кислых бульонах в течение 1 ч и затем образцы подсчитывали на чашках с МВБ-агаром.
рН | 6 | 5 | 4 | 3 | 2 | 1 |
Жидкая | 10® КОЕ/мл | 10® КОЕ/мл | 10® КОЕ/мл | Тб® КОЕ/мл | 6x105 КОЕ/мл | 0 |
Сухой | 10® КОЕ/мл | Ϊ0® КОЕ/мл | 10® КОЕ/мл | 2x10’ КОЕ/мл | 1x104 КОЕ/мл | 0 |
КОЕ = колониеобразующие единицы на миллилитр.
Этот результат указывает на то, что жидкие бактерии лучше способны выживать в кислой среде по сравнению с сухими бактериями. Поскольку в желудке могут достигаться уровни рН вплоть до 2, это с очевидностью имеет отношение к выживанию и приспособленности бактерий в течение последующего передвижения в желудочно-кишечном тракте.
(3) Комбинирование эффектов рН и солей желчных кислот.
Принимая во внимание уровень требований следующей стадии, рост жидких и сухих бактериальных препаратов сравнивали в следующих условиях.
(а) Только бульон МВБ (фиг. 16).
(б) Бульон МВБ, дополненный 0,5% (мас./об.) солей желчных кислот (Θχοίά Ь55) (фиг. 1в).
(в) Инкубация в МВБ при рН 3,0 в течение 1 ч с последующим ростом в бульоне МВБ с солями желчных кислот (фиг. 1г).
Объединенные результаты этих экспериментов указывают на следующие моменты.
Жидкие бактерии растут быстрее сухих бактерий. Кислотный шок оказывает более разрушительное действие на сухие бактерии, чем на жидкие.
Соли желчных кислот ингибируют оба типа, возможно с более выраженным неблагоприятным воздействием на сухие, чем на жидкие.
Объединенные последовательные эффекты кислотного шока с последующим воздействием солями желчных кислот значительно уменьшают рост жидких бактерий, но убивают сухие бактерии (о чем судят по отсутствию колоний на агаровых чашках).
Однако хотя рН и устойчивость к желчным кислотам с очевидностью представляют собой важные факторы, существует множество других воздействий, химических и микробных, с которыми должны столкнуться пробиотические бактерии. Таким образом, жизнеспособность и общее количество бактерий, которые оценивают просто по количеству колониеобразующих единиц на грамм или миллилитр, является только одним показателем способности препарата функционировать в качестве пробиотика. Если бактерии не находятся в активном состоянии при попадании в организм хозяина, существует значительная вероятность того, что они или будут уничтожены, или пройдут слишком далеко в кишечный тракт перед тем, как у них появится возможность образовывать колонии. Таким образом, пробиотики перспективны для применения в хозяине, если они находятся в метаболически активном состоянии при проникновении в организм хозяина. В соответствии с изобретением бактерии находятся в живой и метаболически активной форме, так что они способны переносить враждебную среду желудочно-кишечного (ЖК) тракта. Метаболически активная природа продукта предназначена для увеличения шансов выживания и образования колоний в организме хозяина.
Пример 6. Влияния на кишечную микрофлору цыплят домашней птицы.
Введение и способы.
Пробиотик, содержащий молочно-кислые бактерии ЕТаесшт, Ь.р1ап1агит, Б.саке! и Е.ас1борЫ1и8, готовили в соответствии с описанным здесь способом. Пробиотик тестировали в отношении его способ- 11 012968 ности изменять кишечную микрофлору цыплят домашней птицы в коммерческом птицеводческом (бройлерном) хозяйстве.
Обработка цыплят.
Цыплятам домашней птицы давали антибиотик линкоспектин с 1-го дня (прошедший день) по 3-й день.
На 4-й день птиц не обрабатывали.
На 5-й день половина помещений для бройлеров получала препарат в дозе 1 л на 5000 цыплят. Оставшиеся помещения использовали в качестве контролей.
На 6-й день из каждой группы случайным образом отбирали по шесть птиц, умерщвляли их и анализировали кишечную микрофлору. (Объединяли тканевые образцы от пар птиц в каждой группе, получая по три образца из каждой группы).
Микробиологический анализ.
Области пищеварительной системы, выбранные для анализа, представляли собой верхний отдел кишечного тракта, взятый от начала тонкой кишки до точки присоединения желточного мешка.
Кишечные ткани и их содержимое от пары птиц вымачивали в стерильной пептонной воде, разбавляли и наносили образцы на ряд полуселективных агаров. После инкубации чашек регистрировали характеристики и количество колоний вместе с микроскопическим анализом бактерий. Идентификацию видов молочно-кислых бактерий проверяли (осуществляли) путем оценки характеристик колоний, клеточной морфологии и профилей ферментации углеводов (последнее с использованием тестового набора ар1 50 СН от ВюМепеих).
Результаты.
Результаты представлены на фиг. 3.
Ь1-Ь3 = птицы, обработанные пробиотиками (пары 1-3).
С1-С3 = контрольные птицы (пары 1-3).
ТК = Тонкая кишка.
КОЕ = Колониеобразующие единицы.
Как ожидалось, в желудочно-кишечном тракте контрольных и обработанных пробиотиками птиц присутствовало множество различных микробов. В целом, у обеих групп птиц присутствовали схожие количества и типы бактерий, но со значительными различиями в распределении и количестве конкретных видов.
Молочно-кислые бактерии.
Существовало весьма отчетливое различие в содержании молочно-кислых бактерий (МКБ) между птицами, обработанными препаратом, и контрольными птицами. Хотя обе группы имели сравнимые общие количества МКБ, во флоре контрольных птиц доминировал отдельный вид, тогда как у птиц, обработанных пробиотиком, присутствовала более обширная смесь представленных видов.
Пример 7. Действие пробиотического препарата на птенцов страуса.
Проводили исследование для оценки воздействия препарата по изобретению на птенцов страуса. Исследование проводили в течение 4 недель с птенцами, страдающими от диареи с 4-го дня. Одну группу птенцов обрабатывали препаратом по изобретению, вторую - антибиотиком широкого спектра, а третью - витаминно-аминокислотной добавкой. Результаты исследования демонстрируют, что в группе, обработанной препаратом по изобретению, смертность уменьшалась на 67% по сравнению с группой, обработанной антибиотиком, и что введение препарата может уменьшать симптомы запора, диареи, кишечных стазов, девиантного поведения и пролапсов. Кроме того, в группе, обработанной пробиотическим препаратом, наблюдали увеличение массы на 27% по сравнению с контрольными группами.
Во втором исследовании, в котором 100 мл препарата по изобретению вводили племенной птице, наблюдали, что введение приводит в результате к увеличенной фертильности по сравнению с контрольной группой.
Соответственно, эти результаты демонстрируют, что введение пробиотического препарата по изобретению влияет на скорость роста, заболеваемость и смертность.
Пример 8. Благоприятные действия пробиотического препарата на млекопитающих.
В небольшом независимом исследовании оценивали действие препарата по изобретению на кошек и собак, страдающих от хронического энтерита, и обнаружили, что он полезен для восстановления нормальной флоры кишечника.
В исследовании на людях добровольцы обнаружили благоприятные эффекты препарата в острых случаях диареи и при коррекции хронической нерегулярной работы кишечника.
Эта картина благоприятных действий свидетельствует о том, что продукт, основанный на приведенном здесь способе, может оказывать значительные благоприятные воздействиями на людей, заключающиеся в контроле острой и хронической желудочно-кишечной дисфункции (включающей синдром разраженного кишечника и воспалительное заболевание кишечника, пищевое отравление, инфекционную диарею и запор). Также проводится полное клиническое исследование для поддержки ранее полученных результатов.
- 12 012968
Ссылки
Р. Ропзеса, С. Веа1, апб С. Сотеи. 1. Папу Вез. 67 (1):83-90, 2000.
М.Ь.Р. Мигда, Α.Ρ.Ό. Но1дабо, апб С.Р. бе Vа1беζ. СгуоЫо1о§у 36 (4): 315-319, 1998.
1. НашбЮп-МШег. Йапсе! 355 (9201): 413-414, 2000.
Кипхе. А. ТесНпо1оду Вгетапд апб Ма1йпд (1996).
Потенциальные благоприятные воздействия на здоровье
СоШпз, 1.К., О' 8и1йуап, С. апб 8НапаНап, Р. (1996; Си! Дога апб йеа1!й - раз!, ргезеп! апб 1и!иге, Воуа1 8ос1е!у оГ Мебюте Ргезз Ытйеб, Ьопбоп.
Ό. На11ег, С. Вобе, апб А.Р. Наттез. М1сгоЫо1. 1ттипо1. 43 (10):925-935, 1999.
С. Незз1е, Ь.А. Напзоп, апб А.Е. Ао1б. Сйп.Ехр. 1ттипо1. 116 (2):276-282, 1999.
Е. 1зо1аил, Υ. 8и!аз, Р. Капкаапраа, Н. Агуйотт1, апб 8. 8а1т1пеп. Ат. 1. Сйп. ΝηΙγ. 73 (2): 44484508, 2001.
М. М1е!!теп, 8. Майкатеп, 1. Уиорю-Уагкйа, 1. Рнйопеп, К. Уагкйа, М. Кипто!о, апб I. 1и1кипеп. 1пГес!. 1ттип. 66 (12):6058-6062, 1998.
A. Е. Ао1б апб I. Аб1егЬег!й. Абу. Ехр. Меб. Вю1. 478:77-93, 2000.
Химия крови
1.А. Апбегзоп апб 8.Е. СШйапб. 1. Ат. Со11. ΝιιΙγ. 18 (1):4 3-50, 1999.
H. Вико^зка, 1. Р|есхи1-Мг0х, М. 1аз1гхеЬзка, К. Сйе1з!о^зк1, апб М. №1гизхе\\зсх. А!йегозс1егоз1з 137 (2):437-438, 1998.
I. Йе 8те!, Р. Йе Воеуег, апб А. Уегз!гае!е. Вг. 1. ΝηΙγ. 79 (2):185-194, 1998.
Т. Епбо, М. Ыакапо, 8. 8ΗίαίζΗ, М. РикизЫта, апб 8. М1уозЫ. Вюзск Вю!есйпо1. Вюсйет. 63 (9):1569-1575, 1999.
Н. ЮкисЫ-Науаката, N. Опобега, 8. Ма!зиЬага, Е. Υазиба, Υ. 8Ытака^а, апб Р. 1зЫка^а. Вг. 1. №г. 79 (1):97-105, 1998.
H. К1кисЫ-Науакатеа, Н. 8ЫЬайага-8опе, К. Озаба, N. Опобега-Мазиока, Р. 1зЫка^а, апб М. Аа!апикк Вюзск Вю!есйпо1. Вюсйет. 64 (3):466-475, 2000.
Р.А.М. К1ауег апб В. уап бег Меег. ТНе Аззитеб Арр1. Епуноп. МюгоЬюк 59(4): 1120-1124, 1993.
B. К. М1!а1 апб 8.К. Сагд. Си!. Веу. МюгоЬю1. 21 (3):175-214, 1995.
C. В.к Тау1ог апб С.М. Аййатз. Вг. 1. №1г. 80 (4):8225-8230, 1998.
Лечение и профилактика рака
Υ. Азо, Н. Ака/а, Т. Ко!аке, Т. Тзикато!о, К. 1та1, апб 8. №1йо. Еиг. Иго1. 27:104-109, 1995.
В. Ва1апзку, В. Суозйеуа, С. Сапсйеу, Ζ. Мйсйеуа, 8. М1пкоуа, апб С. Сеогд1еу. Сапсег йен. 147 (12): 125-137, 1999.
ЙЛ. Вгабу, й.й. Сайайег, апб Р.Р. Виз!а. 1. №!г. 130 (2):4108-4148, 2000.
й.й. Сайайег апб 1. КЫ1. 1. №1г. 129 (7): 14838-14878, 1999.
B. В. Со1бт. Вг. 1. ΝηΙγ. 80 (4):8203-8207, 1998.
8.Й. СогЬасй. Ат. 1. Саз!гоеп!его1. 95 (1):82-84, 2000.
К. Нйауата апб 1. Вайег. Ап!оше Уап йееюгепНоек - 1п!ета!юпа1 1оигпа1 оГ МюгоЬю1о§у 76 (1):391394, 1999.
К. Нйауата апб 1. Вайег. М1сгоЬе. 1пйес!. 2 (6):681-686, 2000.
A. Н. йтд. ΝιιΙγ. Вез. 15 (3):439-454, 1995.
C. Н. Мс1п!озН, Р.1. Воу1е, апб М.1. Р1аупе. ΝηΙγ. Сапсег 35 (2):153-159, 1999.
I. 1. Вайег. 8сапб. 1. Саз!гоеп!его1. 30:497-502, 1995.
B. 8. Веббу. Вг. 1. ΝιιΙγ. 80 (4):8219-8223, 1998.
ВоМапб, 1.В. (1996) 'Си! тюгойога апб сапсег' ш йеебз, А.В. апб ВоМапб, 1.В. (ебз.) Си! йога апб Неа1!Н - раз!, ргезеп! апб £и!иге, Воуа1 8оае!у ой Мебюте Ргезз Ытйеб, йопбоп.
М.й. Ат!егз, Т.й. 8сййпке, А.А. 1оусе, 8.В. С1оге, апб М.М. Ниуске. Ат. 1. Саз!гоеп!его1. 93 (12):2491-2500, 1998.
Диарея и запор
Т. Агуо1а, К. йаНо, 8. Тогккей, Н. Муккапеп, 8. 8а1ттеп, й. Маипи1а, апб Е. 1зо1аип. Реб1а!псз 104 (5):Й1-Й4, 1999.
В. Веппе!, 8.Й. СогЬасН, В.В. Со1бт, Т.А. СНапд, В.Е. йаидйоп, А.В. СгеепоидН, апб 1.С. Вагйей. №1п!юп Тобау 31 (6):358-388, 1996.
A. ВотЬа, В. №тсоуа, 8. Сапсагс1коуа, В. Непсй, апб В. Каз!е1. Абу. Ехр. Меб. Вю1. 473:185-190, 1999.
КМ. Йе Вооз апб М.В. Ка!ап. Ат. 1. Сйп. №!г. 71 (2):405- 411, 2000.
Н.й. йиРоп!. 1. Реб1а!г. 134 (I): 1-2, 1999.
8.Й. СогЬасй. Ат. 1. Саз!гоеп!его1. 95 (1):82-84, 2000.
М. Неутап. 1. Ат. Со11. №1г. 19 (2): 1378-1468, 2000.
Е. кокип, М. Кайа, Н. Муккапап, А.Н. йтд, апб 8. 8а1ттеп. Й1д. Й1з. 8ск 39(12):2595-2600, 1994.
B. А. ОЬегйе1тап, Е.Н. Сйтап, Р. 8Нееп, Ό.Ν. Тау1ог, В.Е. В1аск, й. СаЬгега, А.С. йезсапо, В. Меζа, апб С. Мабюо. 1. Реб1а!г. 134 (1): 15-20, 1999.
- 13 012968
Β.Ό. ВоГе. 1. Ыий. 130 (2):3968-4028, 2000.
1. 8аауебта. Ат. 1. 6аз!гоеп!его1. 95 (1):816-818, 2000.
С. 8сатр1дпа!о апб Р. Ватра1. Сйето!йегару 41 (зирр1. 1):48-81, 1995.
А.У. 8йогшкоуа, 1.А. Сазаз, Н. Муккапеп, Е. 8а1о, апб Т. Уеыкап. Реб1а!г. 1пГес!. Όίδ. 1. 16 (12): 11031107, 1997.
кА. УапбегкооГ. Ό.Β. ХУМпеу, Б.Б. АпЮпзоп. Т.Б. Наппег, IV. Биро, апб В.к Уоипд. 1. Реб1а1г. 135 (5):564- 568, 1999.
Синдром раздраженного кишечника
Р. Впд1б1, В. νιΐπΐι, Е. 8^еппеп, 6. ВаххоссЫ, апб Ό. МаНеихх!. Вез. М1сгоЫо1. 152 (8):735-741, 2001.
К. №ебх1е1т, Н. Когбескк апб В. ВикепГе1б. Еиг. 1. 6аз!гоеп!его1. Нера1о1. 13(10): 1143-1147, 2001.
8. ИоЬаек, М.Б. 1ойапззоп, 6. Мокп, 8. Акте, апб В. 1еррззоп. Ат. 1. 6аз!гоеп!его1. 95 (5): 12311238, 2000.
Общий обзор
Мабеаи, Р. апб ВатЬаиб, 1-С., (1996) Тйегареибс аррйсабопз оГ ргоЫобсз т китапз' т Беебз, А. В. апб ВоМапб, I. В. (ебз.) 6и1 Г1ога апб йеаИй - раз!, ргезеп! апб 1и!иге, Воуа1 8ос1е!у оГ Мебюше Ргезз Б1тйеб, Бопбоп.
8!агк, В.А. апб ХУПктзоп, (ебз.) (1989) РгоЫобсз. Ткеогу апб Аррксакопз, Ска1сотЬе РиЬксакопз, Вискз, иК.21
Claims (31)
- ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ1. Препарат, содержащий жизнеспособные метаболически активные пробиотические бактерии, и ростовой субстрат, содержащий смесь сложных и простых сахаров, белков и пептидов, где бактерии в препарате демонстрируют практически равновесное состояние роста, характеризующееся тем, что популяция бактерий поддерживается на постоянном уровне при хранении приблизительно при 4°С и при рН в диапазоне от 3,8 до 4,5 в течение периода времени по меньшей мере 5 месяцев, где общее количество сахаров находится в диапазоне от 20 до 40 мг/мл и где общее количество редуцирующих сахаров находится в диапазоне от 5 до 20 мг/мл.
- 2. Препарат по п.1, где популяция бактерий поддерживается в диапазоне от 108 до 109 жизнеспособных клеток на миллилитр при хранении приблизительно при 4°С и при указанном контролируемом рН в течение периода времени по меньшей мере 5 месяцев.
- 3. Препарат по п.1 или 2, где общее количество белка и пептидов в ростовом субстрате находится в диапазоне от 1 до 2 мг/мл, причем общее количество высокомолекулярных пептидов находится в диапазоне от 100 до 300 мкг/мл.
- 4. Препарат по любому из пп.1-3, где бактерии представляют собой молочно-кислые бактерии.
- 5. Препарат по п.4, где бактерии относятся к роду Бас!оЬасШиз.
- 6. Препарат по любому из пп.1-3, где бактерии относятся к роду Еп!егососсиз.
- 7. Препарат по любому из пп.5, 6, содержащий по меньшей мере один из видов бактерий Еп!егососсиз Гаесшт, Бас!оЬасШиз р1ап!агит, Бас!оЬасШиз сазе1 или Бас!оЬасШиз ашборкйиз.
- 8. Препарат по п.7, содержащий Еп!егососсиз Гаесшт, Бас!оЬасШиз р1ап!агит и Бас!оЬасШиз сазе!
- 9. Препарат по любому из пп.1-8, дополнительно содержащий противогрибковый агент.
- 10. Препарат по любому из пп.1-5, дополнительно содержащий антиоксидант.
- 11. Ростовой субстрат для метаболически активных пробиотических бактерий препарата по любому из пп.1-10, содержащий смесь сложных и простых сахаров, белков и пептидов, где общее количество сахаров находится в диапазоне от 20 до 40 мг/мл, а общее количество редуцирующих сахаров находится в диапазоне от 5 до 20 мг/мл.
- 12. Ростовой субстрат по п.11, где общее количество редуцирующих сахаров находится в диапазоне от 5 до 15 мг/мл.
- 13. Ростовой субстрат по любому из пп.11, 12, где общее количество белков и пептидов находится в диапазоне от 1 до 2 мг/мл, причем общее количество высокомолекулярных пептидов находится в диапазоне от 100 до 300 мкг/мл.
- 14. Способ получения стабильного препарата метаболически активных пробиотических бактерий по любому из пп.1-10, включающий выращивание бактерий в ростовом субстрате, содержащем смесь сложных и простых сахаров, белков и пептидов, где общее количество сахаров находится в диапазоне от 20 до 40 мг/мл, а общее количество редуцирующих сахаров находится в диапазоне от 5 до 20 мг/мл, и охлаждение полученных бактерий до температуры приблизительно 4°С, при которой бактерии демонстрируют практически равновесное состояние роста, характеризующееся тем, что популяция бактерий может поддерживаться на постоянном уровне при хранении приблизительно при 4°С и при рН в диапазоне от 3,8 до 4,5 в течение периода времени по меньшей мере 5 месяцев.
- 15. Способ по п.14, где два вида бактерий выращивают вместе в одном ростовом субстрате.
- 16. Способ по п.14 или 15, где два или более видов бактерий выращивают в отдельных ростовых- 14 012968 субстратах и смешивают вместе перед хранением приблизительно при 4°С.
- 17. Способ получения стабильного препарата метаболически активных пробиотических бактерий по любому из пп.1-10, включающий добавление бактерий в ростовой субстрат, содержащий смесь сложных и простых сахаров, белков и пептидов, где общее количество сахаров находится в диапазоне от 20 до 40 мг/мл, а общее количество редуцирующих сахаров находится в диапазоне от 5 до 20 мг/мл, с получением препарата бактерий в концентрации, обеспечивающей практически равновесное состояние роста бактерий, причем популяция бактерий в препарате поддерживается на постоянном уровне при хранении приблизительно при 4°С и при рН в диапазоне от 3,8 до 4,5 в течение периода времени по меньшей мере 5 месяцев, если хранение предусмотрено.
- 18. Способ по п.17, где бактерии представляют собой молочно-кислые бактерии.
- 19. Способ по п.18, где бактерии относятся к роду Ьас1оЬасШи8.
- 20. Способ по п.17, где бактерии относятся к роду Еп1егососси§.
- 21. Способ по любому из пп.18-20, где концентрация бактерий в препарате находится в диапазоне от 108 до 109 жизнеспособных клеток на миллилитр.
- 22. Способ по любому из пп.14-21, где ростовой субстрат является таким, как определено в любом из пп.11-13.
- 23. Способ по любому из пп.14-22, где перед хранением препарата в него добавляют противогрибковый агент.
- 24. Корм для животных, содержащий стабильный препарат метаболически активных бактерий по любому из пп.1-10.
- 25. Пищевой продукт, пригодный для потребления человеком, содержащий стабильный препарат метаболически активных бактерий по любому из пп.1-10.
- 26. Напиток, пригодный для потребления человеком, содержащий стабильный препарат метаболически активных бактерий по любому из пп.1-10.
- 27. Фармацевтическая композиция, содержащая стабильный препарат метаболически активных бактерий по любому из пп.1-10, смешанный с одним или более фармацевтически приемлемыми разбавителями, носителями или эксципиентами.
- 28. Применение стабильного препарата метаболически активных бактерий по любому из пп.1-10 в качестве пробиотика.
- 29. Применение стабильного препарата метаболически активных бактерий по любому из пп.1-10 в изготовлении лекарственного средства для использования в лечении расстройства, нарушающего кишечный микробный баланс у млекопитающего.
- 30. Применение по п.29, где расстройство, нарушающее кишечный микробный баланс, представляет собой хроническое воспалительное заболевание кишечника, неспецифический язвенный колит или болезнь Крона.
- 31. Применение стабильного препарата метаболически активных бактерий по любому из пп.1-10 в изготовлении лекарственного средства для использования для поддержания кишечного микробного баланса у млекопитающего.
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
GB0421448A GB2418431A (en) | 2004-09-27 | 2004-09-27 | Metabolically active micro organisms and methods for their production |
PCT/GB2005/003715 WO2006035218A1 (en) | 2004-09-27 | 2005-09-27 | Metabolically active micro organisms and methods for their production |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
EA200700613A1 EA200700613A1 (ru) | 2007-10-26 |
EA012968B1 true EA012968B1 (ru) | 2010-02-26 |
Family
ID=33397330
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
EA200700613A EA012968B1 (ru) | 2004-09-27 | 2005-09-27 | Препарат, содержащий пробиотические бактерии, способы его получения, продукты на его основе, их применение и ростовой субстрат |
Country Status (15)
Country | Link |
---|---|
US (2) | US8551473B2 (ru) |
EP (2) | EP3050960B1 (ru) |
JP (1) | JP5577020B2 (ru) |
CN (2) | CN101603021B (ru) |
AU (1) | AU2005288751B2 (ru) |
CA (1) | CA2580949C (ru) |
EA (1) | EA012968B1 (ru) |
ES (2) | ES2654246T3 (ru) |
GB (1) | GB2418431A (ru) |
HK (1) | HK1134686A1 (ru) |
NO (1) | NO20072210L (ru) |
NZ (1) | NZ553858A (ru) |
PL (2) | PL1794283T3 (ru) |
WO (1) | WO2006035218A1 (ru) |
ZA (1) | ZA200702398B (ru) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2724534C2 (ru) * | 2014-12-31 | 2020-06-23 | БИОПОЛИС, Эс. Эл. | Применение пробиотиков для усиления мужской фертильности |
Families Citing this family (20)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
GB2418431A (en) * | 2004-09-27 | 2006-03-29 | Multigerm Uk Entpr Ltd | Metabolically active micro organisms and methods for their production |
SE532899C2 (sv) * | 2007-06-08 | 2010-05-04 | Probi Ab | Förfarande genom fermentering med Lactobacillus plantarum för tillhandahållande av en insulinsvarsreducerande produkt och dess användning farmaceutiskt eller i livsmedel |
MX354119B (es) * | 2008-11-21 | 2018-02-14 | Antonio Cruz Serrano Jose | Una mezcla para preparar un alimento funcional con acción simbiótica sinérgica que comprede: por lo menos una cepa probiótica, un solución prebiótica y nutrientes para consumo humano y un método para obtener la misma. |
DK3329927T3 (da) * | 2011-11-16 | 2023-12-11 | Multigerm Uk Entpr Ltd | IBS-behandling med probiotika |
GB201119774D0 (en) * | 2011-11-16 | 2011-12-28 | Multigerm Uk Entpr Ltd | IBS treatment |
GB201219873D0 (en) * | 2012-11-05 | 2012-12-19 | Multigerm Uk Entpr Ltd | Diverticulitis treatment |
DE102012110612A1 (de) * | 2012-11-06 | 2014-05-08 | Gelita Ag | Kollagenhydrolysat und dessen Verwendung |
CN105296541A (zh) * | 2014-07-30 | 2016-02-03 | 无限极(中国)有限公司 | 燕麦发酵液及其制备方法与作为化妆品原料的应用 |
GB201501938D0 (en) | 2015-02-05 | 2015-03-25 | Multigerm Uk Entpr Ltd | Probiotic preparation |
EP3723775A4 (en) | 2017-12-15 | 2022-04-13 | Solarea Bio, Inc. | MICROBIAL COMPOSITIONS AND METHODS OF TREATMENT OF TYPE 2 DIABETES, OBESITY AND METABOLIC SYNDROME |
CN108315279A (zh) * | 2018-04-09 | 2018-07-24 | 河南科技大学 | 一种植物乳杆菌液体制剂的长时间储存方法 |
BR112020025123A2 (pt) * | 2018-06-19 | 2021-03-23 | 4D Pharma Research Ltd | forma de dosagem compreendendo um produto bioterapêutico vivo |
SG11202013008UA (en) * | 2018-07-10 | 2021-02-25 | Univ Keio | Intestinal microbe having d-psicose-responsive proliferation |
US11980647B2 (en) | 2018-09-05 | 2024-05-14 | Solarea Bio, Inc. | Methods and compositions for treating musculoskeletal diseases, treating inflammation, and managing symptoms of menopause |
EP3846830A4 (en) | 2018-09-05 | 2022-07-06 | Solarea Bio, Inc. | METHODS AND COMPOSITIONS FOR THE TREATMENT OF MUSCULOSKELETAL DISEASES |
CN109486713B (zh) * | 2018-12-06 | 2021-03-09 | 福建傲农生物科技集团股份有限公司 | 一种液态复合乳酸杆菌制剂及其制备方法与应用 |
GB201915144D0 (en) * | 2019-10-18 | 2019-12-04 | Multigerm Uk Entpr Ltd | Method of promoting SCFA production by gut microbiota |
WO2021113850A2 (en) * | 2019-12-06 | 2021-06-10 | Nas Bioventures Llc | Onsite installation or manufactured product of eco-friendly bacterial compositions, methods and systems for bioremediation in a short duration in different environments |
WO2023092150A1 (en) | 2021-11-22 | 2023-05-25 | Solarea Bio, Inc. | Methods and compositions for treating musculoskeletal diseases, treating inflammation, and managing symptoms of menopause |
GB202210523D0 (en) | 2022-07-18 | 2022-08-31 | Multigerm Uk Entpr Ltd | Probiotic compositions and therapeutic uses thereof |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US6465027B1 (en) * | 1998-04-15 | 2002-10-15 | Lesaffre Et Cie | Ready-to-use long conservation baker's leaven |
US20020164399A1 (en) * | 1996-08-05 | 2002-11-07 | Mogen International Nv | Process for the production of alcoholic beverages using maltseed |
US6811786B1 (en) * | 1999-04-01 | 2004-11-02 | Ganeden Biotech, Inc. | Methods for reducing cholesterol using Bacillus coagulans spores, systems and compositions |
Family Cites Families (15)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
GB906212A (en) * | 1960-08-04 | 1962-09-19 | Lilly Co Eli | The antibiotic valacidin and its salts and methods for producing same |
US3623956A (en) * | 1970-01-21 | 1971-11-30 | Rapidase Sa Soc | Preparation of microbial alkaline protease by fermentation with bacillus subtilis, variety licheniformis |
US3846397A (en) * | 1970-04-06 | 1974-11-05 | J Ernster | Process for utilizing barley malt |
US4464402A (en) * | 1978-04-24 | 1984-08-07 | F.I.N.D. Research Corporation | Process for manufacturing a high protein food material |
US4275164A (en) * | 1979-11-05 | 1981-06-23 | Eastman Kodak Company | Process and nutrient medium for growing microorganism |
EP0189657B1 (en) * | 1984-12-12 | 1989-03-01 | WHITBREAD & COMPANY PLC | A brewing process |
JPS63273469A (ja) * | 1986-12-13 | 1988-11-10 | Kyowa Hakko Kogyo Co Ltd | 乳糖資化性を有する新規微生物 |
DK686187D0 (da) | 1987-12-23 | 1987-12-23 | Hansens Chr Bio Syst | Veterinaert praeparat |
JP2835894B2 (ja) * | 1991-07-26 | 1998-12-14 | 農林水産省食品総合研究所長 | ビフィズス菌増殖促進剤 |
JPH08259450A (ja) * | 1995-03-17 | 1996-10-08 | Nichinichi Seiyaku Kk | インターフェロン産生増強剤 |
IE960360A1 (en) * | 1996-05-23 | 1997-12-31 | Valdosa Limited | A brewing process |
US6420146B1 (en) * | 2000-03-30 | 2002-07-16 | Council Of Scientific & Industrial Research | Process for the preparation of stable yeast crystals for enhanced production of ethanol |
JP4424643B2 (ja) * | 2002-02-13 | 2010-03-03 | 株式会社バイオバンク | 抗真菌剤の製造方法 |
GB2391554B (en) * | 2002-08-06 | 2005-09-14 | Heineken Ireland Ltd | A stout manufacturing process |
GB2418431A (en) * | 2004-09-27 | 2006-03-29 | Multigerm Uk Entpr Ltd | Metabolically active micro organisms and methods for their production |
-
2004
- 2004-09-27 GB GB0421448A patent/GB2418431A/en not_active Withdrawn
-
2005
- 2005-09-27 NZ NZ553858A patent/NZ553858A/en not_active IP Right Cessation
- 2005-09-27 WO PCT/GB2005/003715 patent/WO2006035218A1/en active Application Filing
- 2005-09-27 CN CN2009101495392A patent/CN101603021B/zh active Active
- 2005-09-27 CA CA2580949A patent/CA2580949C/en active Active
- 2005-09-27 PL PL05786983.6T patent/PL1794283T3/pl unknown
- 2005-09-27 JP JP2007532974A patent/JP5577020B2/ja active Active
- 2005-09-27 ES ES16155521.4T patent/ES2654246T3/es active Active
- 2005-09-27 EP EP16155521.4A patent/EP3050960B1/en active Active
- 2005-09-27 CN CNB2005800324851A patent/CN100537740C/zh active Active
- 2005-09-27 EA EA200700613A patent/EA012968B1/ru not_active IP Right Cessation
- 2005-09-27 US US11/663,877 patent/US8551473B2/en active Active
- 2005-09-27 AU AU2005288751A patent/AU2005288751B2/en active Active
- 2005-09-27 ES ES05786983.6T patent/ES2568955T3/es active Active
- 2005-09-27 EP EP05786983.6A patent/EP1794283B1/en active Active
- 2005-09-27 PL PL16155521T patent/PL3050960T3/pl unknown
-
2007
- 2007-03-22 ZA ZA200702398A patent/ZA200702398B/xx unknown
- 2007-04-27 NO NO20072210A patent/NO20072210L/no not_active Application Discontinuation
-
2010
- 2010-03-15 HK HK10102640.8A patent/HK1134686A1/xx unknown
-
2012
- 2012-09-05 US US13/604,196 patent/US20130011368A1/en not_active Abandoned
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20020164399A1 (en) * | 1996-08-05 | 2002-11-07 | Mogen International Nv | Process for the production of alcoholic beverages using maltseed |
US6465027B1 (en) * | 1998-04-15 | 2002-10-15 | Lesaffre Et Cie | Ready-to-use long conservation baker's leaven |
US6811786B1 (en) * | 1999-04-01 | 2004-11-02 | Ganeden Biotech, Inc. | Methods for reducing cholesterol using Bacillus coagulans spores, systems and compositions |
Non-Patent Citations (3)
Title |
---|
CHARALAMPOPOULOS D. ET AL.: "Application of cereals and cereal components in functional foods: a review". INTERNATIONAL JOURNAL OF FOOD MICROBIOLOGY. 15 NOV 2002, vol. 79, no. 1-2, 15 November 2002 (2002-11-15), pages 131-141, XP002353395, ISSN: 0168-1605, the whole document * |
CHARALAMPOPOULOS D. ET AL.: "Evaluation of the effect of malt, wheat and barley extracts on the viability of potentially probiotic lactic acid bacteria under acidic conditions". INTERNATIONAL JOURNAL OF FOOD MICROBIOLOGY. 25 APR 2003, vol. 82, no. 2, 25 April 2003 (2003-04-25), pages 133-141, XP002353394, ISSN: 0168-1605, the whole document * |
CHARALAMPOPOULOS D. ET AL.: "Growth studies of potentially probiotic lactic acid bacteria in cereal-based substrates". JOURNAL OF APPLIED MICROBIOLOGY. 2002, vol. 92, no. 5, 2002, pages 851-859, XP002353396, ISSN: 1364-5072, the whole document * |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2724534C2 (ru) * | 2014-12-31 | 2020-06-23 | БИОПОЛИС, Эс. Эл. | Применение пробиотиков для усиления мужской фертильности |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CA2580949A1 (en) | 2006-04-06 |
US20130011368A1 (en) | 2013-01-10 |
US20110158949A1 (en) | 2011-06-30 |
GB2418431A (en) | 2006-03-29 |
NZ553858A (en) | 2009-01-31 |
ZA200702398B (en) | 2008-10-29 |
EA200700613A1 (ru) | 2007-10-26 |
WO2006035218A1 (en) | 2006-04-06 |
AU2005288751A1 (en) | 2006-04-06 |
PL3050960T3 (pl) | 2018-05-30 |
JP5577020B2 (ja) | 2014-08-20 |
CN101603021B (zh) | 2013-04-24 |
HK1134686A1 (en) | 2010-05-07 |
PL1794283T3 (pl) | 2016-10-31 |
GB0421448D0 (en) | 2004-10-27 |
ES2568955T3 (es) | 2016-05-05 |
NO20072210L (no) | 2007-04-27 |
CN100537740C (zh) | 2009-09-09 |
AU2005288751B2 (en) | 2010-12-23 |
EP1794283B1 (en) | 2016-04-13 |
CN101027387A (zh) | 2007-08-29 |
ES2654246T3 (es) | 2018-02-12 |
EP3050960A1 (en) | 2016-08-03 |
EP3050960B1 (en) | 2017-12-13 |
EP1794283A1 (en) | 2007-06-13 |
JP2008514582A (ja) | 2008-05-08 |
CN101603021A (zh) | 2009-12-16 |
CA2580949C (en) | 2017-07-25 |
US8551473B2 (en) | 2013-10-08 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
EA012968B1 (ru) | Препарат, содержащий пробиотические бактерии, способы его получения, продукты на его основе, их применение и ростовой субстрат | |
EP2647694B1 (en) | Dead lactobacillus biomass for antimicrobial use and a production method therefor | |
US5340577A (en) | Probiotic for control of salmonella | |
JP3028214B2 (ja) | 鳥類用生菌剤の投与方法 | |
MXPA06013253A (es) | Metodo y composicion para reducir la enfermedad de e. coli disease y mejorar el rendimiento utilizando bacilos. | |
JPH09506625A (ja) | サルモネラの調節用の共生体 | |
CN109929779A (zh) | 一种含有生物活性肽的益生菌制剂及其制备方法和应用 | |
US6746672B2 (en) | Isolated bifidobacteria that produce siderophores which inhibit growth of lactococcus lactis | |
EP3160224B1 (en) | In ovo delivery of probiotic cultures | |
WO1993002558A1 (en) | Method and formulation for reducing microbial populations | |
CN114480231A (zh) | 一种抗幽门螺杆菌感染的罗伊氏乳杆菌及其应用 | |
KR100923226B1 (ko) | 항균효과가 강화된 사료첨가용 유산균제제 와 그 제조방법 | |
US5077063A (en) | Process for preparing lactic-acid products | |
RU2257408C1 (ru) | Лечебно-профилактический биопрепарат на основе сухой биомассы бифидо- и лактобактерий, биологически активная добавка к пище на основе сухой биомассы бифидо- и лактобактерий, сухая биомасса бифидо- и лактобактерий и способ ее получения | |
RU2253672C2 (ru) | Бактериальный пробиотический препарат | |
UA65532C2 (ru) | Диетическая композиция для улучшения биологического баланса микрофлоры кишечного тракта | |
WO2022154692A1 (ru) | Консорциум бифидобактерий и штаммы, входящие в состав консорциума | |
KR20060078894A (ko) | 신규 젖산균 및 이를 이용한 발효주의 제조방법 | |
KR100489859B1 (ko) | 가금티프스 치료 및 예방용 유산균 및 이를 이용하는 가금티프스 치료방법 | |
CN117568245A (zh) | 一种高活性植物乳杆菌制剂的制备方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
MM4A | Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s) |
Designated state(s): AM AZ BY KZ KG MD TJ TM |