EA011233B1 - Применение модифицированного вируса осповакцины анкара для вакцинации новорожденных - Google Patents

Применение модифицированного вируса осповакцины анкара для вакцинации новорожденных Download PDF

Info

Publication number
EA011233B1
EA011233B1 EA200401405A EA200401405A EA011233B1 EA 011233 B1 EA011233 B1 EA 011233B1 EA 200401405 A EA200401405 A EA 200401405A EA 200401405 A EA200401405 A EA 200401405A EA 011233 B1 EA011233 B1 EA 011233B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
virus
cells
mua
vaccination
use according
Prior art date
Application number
EA200401405A
Other languages
English (en)
Other versions
EA200401405A1 (ru
Inventor
Пол Чаплин
Марк Сутер
Матиас Акерманн
Марко Франкини
Сабине Волльстедт
Ханс Петер Хефти
Original Assignee
Бавариан Нордик А/С
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=29225556&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=EA011233(B1) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Бавариан Нордик А/С filed Critical Бавариан Нордик А/С
Publication of EA200401405A1 publication Critical patent/EA200401405A1/ru
Publication of EA011233B1 publication Critical patent/EA011233B1/ru

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12—Viral antigens
    • A61K39/275—Poxviridae, e.g. avipoxvirus
    • A61K39/285—Vaccinia virus or variola virus
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
    • A61K35/76—Viruses; Subviral particles; Bacteriophages
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12—Viral antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12—Viral antigens
    • A61K39/245—Herpetoviridae, e.g. herpes simplex virus
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/10—Antimycotics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
    • A61P31/22—Antivirals for DNA viruses for herpes viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/04—Immunostimulants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
    • A61K2039/525—Virus
    • A61K2039/5254—Virus avirulent or attenuated
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/55—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the host/recipient, e.g. newborn with maternal antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/58—Medicinal preparations containing antigens or antibodies raising an immune response against a target which is not the antigen used for immunisation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
    • C12N2710/00011—Details
    • C12N2710/16011—Herpesviridae
    • C12N2710/16611—Simplexvirus, e.g. human herpesvirus 1, 2
    • C12N2710/16634—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
    • C12N2710/00011—Details
    • C12N2710/24011—Poxviridae
    • C12N2710/24111—Orthopoxvirus, e.g. vaccinia virus, variola
    • C12N2710/24134—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
    • C12N2710/00011—Details
    • C12N2710/24011—Poxviridae
    • C12N2710/24111—Orthopoxvirus, e.g. vaccinia virus, variola
    • C12N2710/24141—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
    • C12N2710/24143—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector viral genome or elements thereof as genetic vector
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
    • C12N2710/00011—Details
    • C12N2710/24011—Poxviridae
    • C12N2710/24111—Orthopoxvirus, e.g. vaccinia virus, variola
    • C12N2710/24151—Methods of production or purification of viral material
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
    • C12N2710/00011—Details
    • C12N2710/24011—Poxviridae
    • C12N2710/24111—Orthopoxvirus, e.g. vaccinia virus, variola
    • C12N2710/24161—Methods of inactivation or attenuation
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • AIDS & HIV (AREA)
  • Transplantation (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Abstract

Изобретение относится к применению вируса для получения лекарственного препарата для вакцинации или лечения животного, включая человека, в неонатальном или пренатальном периоде, где вирус способен инфицировать клетки животного, включая человека, в неонатальном или пренатальном периоде, но не способен реплицироваться в инфекционное потомство вируса у животного, включая человека, в неонатальном или пренатальном периоде. Вирус предпочтительно представляет собой модифицированный осповакцинный вирус Анкара. В частности, изобретение относится к вакцинации новорожденных против инфекций, вызываемых вирусами, относящимися к той же группе вирусов, что и вирус, используемый для вакцинации. Кроме того, изобретение относится к вакцинации новорожденных против антигенов, выбранных из чужеродных антигенов и опухолевых антигенов, где опухолевый антиген и/или чужеродный антиген отличаются от антигенов, связанных с вирусом. Изобретение дополнительно относится к применению вирусов, определенных выше, для увеличения концентрации факторов, которые активируют дендритные клетки или их клетки-предшественники, и/или увеличения количества дендритных клеток или их клеток-предшественников, и/или повышения продукции и/или клеточного содержания интерферона (IFN) или IL-12.

Description

Изобретение относится к применению вируса для получения лекарственного препарата для вакцинации или лечения животного, включая человека, в неонатальном или пренатальном периоде, где вирус способен инфицировать клетки животного, включая человека, в неонатальном или пренатальном периоде, но не способен к репликации в инфекционное потомство вируса у животного, включая человека, в неонатальном или пренатальном периоде.
Предпочтительно вирус представляет собой модифицированный осповакцинный вирус Анкара.
В частности, изобретение относится к вакцинации новорожденных против инфекций, вызываемых вирусами, относящимися к той же самой группе вирусов, что и вирус, используемый для вакцинации. Кроме того, изобретение относится к вакцинации новорожденных против антигенов, выбранных из чужеродных антигенов и опухолевых антигенов, где опухолевый антиген и/или чужеродный антиген отличаются от антигенов, связанных с вирусом. Дополнительно изобретение относится к применению вирусов, указанных выше, для повышения концентрации факторов, которые активируют дендритные клетки или их клетки-предшественники, и/или повышения количества дендритных клеток или их клетокпредшественников, и/или повышения продукции и/или клеточного содержания интерферона (ΙΡΝ) или ГО-12.
Предпосылки изобретения
В природном окружении животных и людей находится большое количество различных инфекционных агентов, таких как вирусы, бактерии или грибы. Многие из этих инфекционных агентов могут вызывать заболевания у инфицированных хозяев. В нормальных условиях инфицированный хозяин выздоравливает от заболевания, вызванного инфекционным агентом, после определенного периода времени. Данное выздоровление происходит в результате функционирования иммунной системы животного или человека.
Иммунная система является частью организма человека или животного, которая ответственна за элиминацию инфекционного агента. Иммунный ответ подразделяется на специфическую и неспецифическую (врожденную) реакцию, хотя обе тесно взаимодействуют. Неспецифическая иммунная реакция представляет собой опосредованную защиту против широкого ряда различных чужеродных веществ и инфекционных агентов. Во врожденной иммунной реакции, направленной против вирусов, интерферон (ΙΡΝ)-α и ΙΡΝ-β являются абсолютно необходимыми для контроля первоначальной репликации вирусов и активации природных киллерных клеток (ΝΚ) для непосредственного уничтожения зараженных клеток. Внутриклеточные бактериальные или паразитарные патогены вызывают выработку ГБ-12, который повышает продукцию ΙΡΝ-γ в ΝΚ-клетках и/или некоторых субпопуляциях Т-клеток. Затем ΝΚ-клетки, активированные ΙΡΝ-γ, могут уничтожать внутриклеточные патогены. Кроме того, ΙΡΝ-γ также активирует макрофаги и способствует уничтожению ими внедрившихся патогенов.
Безусловно, наиболее богатым источником ΙΡΝ-α/β на клетку являются дендритные клетки (ОС). специализированная клеточная популяция, стратегически распределенная в организме.
Плазматические ОС или СО11с+ СО8+ ОС представляют наиболее эффективные продуценты ΙΡΝα/β. СО8+ ОС, зараженные внутриклеточными патогенами, не относящимися к вирусам, представляют собой ключевые клетки, способные секретировать ΙΒ-12, необходимый на ранних стадиях иммунной защиты.
Специфический иммунный ответ может быть индуцирован против определенного чужеродного вещества (антигена) после лаг-фазы, когда организм заражается данным веществом впервые. Инициация специфического иммунного ответа также координируется ОС. Имеет место постоянное движение данных клеток от периферии к вторичным лимфоидным органам, лимфатическим узлам или селезенке, где рециркулируют наивные Т- и В-клетки. Антиген, который переносится ОС к данным органам, способствует активации наивных Т- или В-клеток с их превращением в эффекторные Т- или В-клетки. Для этого ОС не только переносят антиген, но пластичность распознавания антигена позволяет активироваться различным генам в ОС, и таким образом происходит примирование Т-клеток.
Специфический иммунный ответ является высокоэффективным и ответственен за то, что индивидуум, выздоровевший от специфической инфекции, становится защищенным против специфической инфекции. Таким образом, в результате вторичной инфекции, вызванной тем же или очень близким инфекционным агентом, возникают значительно более слабые симптомы или они отсутствуют вовсе, поскольку уже имеется предсуществующий специфический иммунитет к данному агенту. Подобный иммунитет и иммунологическая память соответственно сохраняются в течение длительного периода времени, в некоторых случаях в течение всей жизни. Следовательно, индукцию иммунологической памяти можно использовать для вакцинации, т.е. защиты индивидуума против инфекции, вызываемой специфическим патогеном.
Для вакцинации иммунную систему стимулируют вакциной, которая сама по себе является менее опасной, чем патогенный агент, против которого индуцируется иммунный ответ. Вакцина включает или экспрессирует эпитопы, которые обнаруживаются или экспрессируются агентом, против которого проводят вакцинацию. Таким образом, организм иммунизируют против агента, содержащего эпитоп, который является частью вакцины.
- 1 011233
Типичные вакцины представляют собой аттенуированные или инактивированные вирусы (например, вакцины против полиомиелита или натуральной оспы), рекомбинантные белки (например, рекомбинантный 8-белок вируса гепатита В), инактивированные тепловой обработкой бактериальные токсины (токсин С1ок1пбшш 1с1ап1) или полисахариды капсиды бактерий (81гер1ососсик риеитошае).
Поскольку инфекционные заболевания могут приводить к очень тяжелым критическим состояниям, у новорожденных и грудных детей существует потребность в как можно более ранней вакцинации детей или новорожденных животных. Примерами состояний, против которых желательна вакцинация, являются инфекции, вызываемые поксвирусами, включая натуральную оспу. Однако попытки эффективной вакцинации новорожденных сдерживаются тем, что иммунная система новорожденных млекопитающих является незрелой. Полагают, что иммунная система новорожденных детей и животных-млекопитающих созревает постепенно в течение определенного периода времени. У людей созревание происходит в течение первого года жизни. Данное обстоятельство является причиной того, что новорожденные остаются подверженными различным инфекциям в течение первого года жизни (Оаик е! а1., 1. Ат. Меб. Аккос. (1998) 280, 527-532). Конкретнее, у новорожденных имеется пониженная функция В-клеток, недостаточность в первичном представлении антигена дендритными клетками и ограниченная пролиферация Тклеток (Оаик е! а1., 1. Ат. Меб. Аккос. (1998) 280, 527-532). Сразу же после рождения количество Тклеток в селезенке в 1000 раз ниже, чем у взрослых. Для достижения, по меньшей мере, слабой иммунизации было предложено использовать либо реплицирующиеся вирусы, либо композиции, содержащие адъювант для иммунизации. Однако при использовании реплицирующихся вирусов всегда имеется риск того, что незрелая иммунная система может подавляться под действием вирусной инфекции или живых вирусных вакцин, поскольку для элиминации вирусов необходимы Т-клетки (Наккей е! а1., 1. У1го1. (1997) 71, 7881-7888). Поскольку у новорожденных имеется пониженная продукция цитокинов Тй-1 хелперными Т-клетками, ответ у новорожденных в основном осуществляют Тй-2. Следовательно, цитотоксические Т-клетки не обновляются, и не достигается элиминация вирусов.
Ситуация у животных-млекопитающих очень схожа с ситуацией у людей, т.е. иммунная система после рождения является незрелой. У новорожденных мышей число ΕΌ4+ Т-клеток в селезенке составляет 80000, и количество СЭ8+ Т-клеток в 1000 раз ниже, чем в селезенке взрослых особей. Кроме того, у данных мышей имеется незрелая система продукции интерферона (ΙΡΝ). Следовательно, новорожденные мыши неспособны эффективно контролировать распространение внутриклеточных патогенов с помощью ΙΡΝ в месте инфекции. Кроме того, низкое количество и, возможно, неадекватная активация иммунных клеток также ограничены для того, чтобы быстро справиться с быстро распространяющимися патогенами или реплицирующимися вирусами, использованными для вакцинации.
За счет риска, связанного с применением живых вирусных вакцин, не рекомендуется вакцинировать новорожденных животных, включая людей, реплицирующимися вирусами. Например, не рекомендуется вакцинировать новорожденных против натуральной оспы вакцинными штаммами вируса, которые применялись до ликвидации оспы, такими как штаммы Е1к!ее, Сореийадеи и Ν^ΒΗ. Согласно последним рекомендациям в США детей младше 12 месяцев не вакцинируют промышленно доступными вакцинами против натуральной оспы.
Вакцинация новорожденных композициями, содержащими адъювант, имеет тот недостаток, что при этом в организм поступают многочисленные вредные вещества. Таким образом, вакцинацию детей проводят только в неотложных случаях, например в случае гепатита В.
В заключение необходимо отметить, что иммунная система является незрелой при рождении. Поскольку вакцинация реплицирующимися компетентными вирусами или композициями, содержащими адъювант, имеет существенные недостатки, новорожденных не вакцинируют до 2-месячного возраста в Германии (ЕшрСеЫцид бег 81аиб1деи 1тр1котт1ккюи 8Т1СО, 2001) или 6-недельного возраста в США (АС1Р Ресоттеибеб Сййбйооб [ттит/абои 8сйеби1е, Иийеб 81а1ек).
Замедленное развитие иммунной системы частично компенсируется переносом материнских антител от матери к плоду во время беременности или новорожденным во время кормления грудью. Однако по различным причинам не все новорожденные находятся на грудном вскармливании. Таким образом, имеет место очень критический период примерно 6-8 недель у детей, во время которого новорожденный, имеющий незрелую и таким образом не полностью функциональную иммунную систему, не получает материнские антитела, и во время которого вакцинация, как правило, не является эффективной или очень опасной.
Ситуация очень схожа с животными-млекопитающими, в частности экономически важными животными, такими как коровы, или домашними животными, такими как кошки и собаки. Для снижения затрат количество молока, которое получает теленок от матери, часто является очень низким. Вместо этого теленок получает смесь порошкового молока, стартера и особого концентрированного корма, иногда, уже в первую неделю после рождения. В результате теленок не получает необходимого количества материнских антител, и в итоге незрелая иммунная система является очень чувствительной к инфекциям. Кроме того, фермеры, которые разводят телят, и те, кто затем выращивают для производства мяса, часто являются разными лицами. В возрасте 4-6 недель телят из различных ферм, занимающихся разведением, объединяют и переправляют на другие фермы для продукции мяса. В этот период уровень материнских
- 2 011233 антител является низким, и иммунная система еще полностью не сформировалась, а животные подвергаются воздействию новых инфекционных агентов в стрессовых условиях. Все это повышает риск для инфекций, которые можно профилактировать вакцинацией. Аналогичную ситуацию можно найти при разведении котят или щенят, где имеется высокое давление инфекции.
Цель изобретения
Целью настоящего изобретения является обеспечение средств вакцинации новорожденных детей и животных соответственно против чужеродных антигенов и антигенов, связанных с заболеваниями у людей и животных соответственно. Конкретнее, целью настоящего изобретения является обеспечение средств для ускоренного созревания иммунной системы у новорожденных животных и детей. Дополнительной целью настоящего изобретения является обеспечение средств вакцинации новорожденных животных, включая людей, против инфекций, вызываемых поксвирусами, в частности, против натуральной оспы.
Подробное описание изобретения
По настоящему изобретению неожиданно было установлено, что возможно безопасно и эффективно вакцинировать и/или лечить животных в неонатальном или пренатальном периоде, включая людей, вирусами, которые способны инфицировать клетки животного в неонатальном или пренатальном периоде, включая человека, но не могут реплицироваться в указанных клетках в инфекционное потомство вируса. В частности, было показано, что вирусы, используемые по настоящему изобретению, такие как МУА, в частности, МУА-ΒΝ и его производные (см. ниже), можно вводить новорожденным без проявления негативного действия. Вакцинация животного вирусом приводит к развитию специфического иммунного ответа против вируса, используемого для вакцинации и/или общей вакцинации против чужеродных антигенов и опухолевых антигенов, как поясняется подробно ниже. Кроме того, вирусы, используемые по настоящему изобретению, приводят к индукции и/или усилению созревания иммунной системы, что связано с увеличением количества дендритных клеток и факторов, таких как интерфероны. Вакцинация вирусами, используемыми по настоящему изобретению, возможна даже, если композиция, которую вводят животному, не содержит адъювант.
В заключение, вирусы, которые используются по настоящему изобретению, (1) вызывают высокий иммунный ответ у новорожденных, (и) их можно вводить без необходимости в адъюванте, и (ш) они не несут риск подавления организма.
По настоящему изобретению защитное действие проявляется по меньшей мере в течение 5 суток, предпочтительно по меньшей мере в течение 7, 14 и 28 суток после первой вакцинации.
Вирусы, которые способны инфицировать клетки, представляют собой вирусы, имеющие на поверхности вируса структуры, способные взаимодействовать с клетками хозяина в такой степени, что вирус или, по меньшей мере, вирусный геном включается в клетку-хозяин. Несмотря на то, что вирусы, используемые по настоящему изобретению, способны инфицировать клетку-хозяин, они не способны реплицироваться в инфекционное потомство вирусов в зараженных клетках. В контексте настоящего изобретения термин вирус, не способный к репликации в инфекционное потомство вируса в указанных клетках, относится к вирусам, геном которых, по меньшей мере, частично транскрибируется и транслируется в вирусные белки и даже реплицируется, однако не упаковывается в инфекционные вирусные частицы. Таким образом, вирусы, используемые по настоящему изобретению, представляют вирусы, приводящие к прерывающимся инфекциям у хозяина. Прерывающиеся инфекции могут иметь место по двум причинам: по первой альтернативе клетка может быть восприимчивой к инфекции, но она не может быть приемлемой для размножения вируса, например, в результате того, что в указанной клетке экспрессируются и/или имеются в вирусном геноме не все необходимые вирусные гены для размножения вируса. Примером данного типа вируса по настоящему изобретению в человеческих клетках является модифицированный осповакцинный вирус Анкара (МУА), который подробно описывается ниже. Согласно второй альтернативе прерывающаяся инфекция может быть результатом инфицирования клеток дефектными вирусами, у которых отсутствует полный комплект вирусных генов. Примером подобного вируса по настоящему изобретению для человеческих клеток является П18С-Н8У1 (дефектный, с одним циклом деления герпесвирус), т.е. герпесвирус, который ограничен одним циклом инфекции (Όίΐΐοο с1 а1., Βίοοά 1997, 89: 119-127). У данного вируса отсутствует ген незаменимого гликопротеина Н (дН), но он может расти с высоким титром в комплементарной клеточной линии, экспрессирующей дН. В комплементарных клеточных линиях, подходящих для роста герпесвируса, его рост сведен к одному циклу репликации, приводя к высвобождению неинфекционного вируса. Термин неспособный к репликации предпочтительно относится к вирусам, которые совсем не реплицируются в клетках вакцинированного животного. Однако в объеме настоящего изобретения находятся такие вирусы, которые проявляют незначительную остаточную активность репликации, которая контролируется незрелой иммунной системой новорожденного.
Вирус по настоящему изобретению может быть любым вирусом, который способен инфицировать клетки животного, но не способен реплицироваться в инфекционное потомство вируса в указанных клетках. Очевидно понятно, что вирус, который способен инфицировать клетки у первого вида животных, но не способен к репликации в инфекционное потомство вируса в указанных клетках, может вести себя
- 3 011233 иначе у другого вида животных. Например, для людей ΜνΑ-ΒΝ и его производные (см. ниже) представляют вирусы, которые способны инфицировать клетки человека, но не способны к репликации в инфекционное потомство вируса в клетках человека. Те же вирусы могут реплицироваться у кур, т.е. у кур ΜνΑ-ΒΝ может не представлять собой вирус, который не способен реплицироваться в инфекционное потомство вируса в клетках кур. Специалистам в данной области известно, какой вирус следует выбрать для конкретного вида животных. Тест, с помощью которого можно определить, насколько вирус способен или не способен реплицироваться у животного в неонатальном или пренатальном периоде, раскрывается в заявке νθ 02/42480, и для его постановки используется штамм мышей ΑΟΚ.129. Данные, полученные на этой модели мышей, применимы для людей. Таким образом, термин не способный к репликации в инфекционное потомство вируса в том смысле, в котором он используется в настоящей заявке, относится к термину отсутствие репликации в условиях ίη νίνο, использованному для мышей в заявке νθ 02/42480. Более детально данный тест представлен ниже. Вирусы по настоящему изобретению предпочтительно способны к репликации по меньшей мере в одном типе клеток по меньшей мере у одного вида животных. Таким образом, возможно амплифицировать вирус перед введением животному, которое подвергается вакцинации и/или лечению. В качестве примера можно привести ΜνΑ-ΒΝ, который можно амплифицировать в клетках СЕР, но он представляет вирус, который не способен к репликации в инфекционное потомство вируса у человека в неонатальном или пренатальном периоде. В данном контексте следует отметить, что химически или физически инактивированные вирусы не обладают всеми свойствами данного предпочтительного воплощения, поскольку инактивированные вирусы способны инфицировать клетки животного, включая человека, в неонатальном или пренатальном периоде и не способны реплицироваться в инфекционное потомство вирусов у животного, включая человека, в неонатальном или пренатальном периоде, но данные вирусы не способны реплицироваться по меньшей мере в одном типе клеток по меньшей мере у одного вида животных.
Предпочтительно вирус представляет собой ДНК-содержащий вирус. Более предпочтительно для клеток млекопитающих, в частности, человеческих клеток, когда ДНК-содержащий вирус выбран из вирусов О18С-Нсрс5 и модифицированного осповакцинного вируса Анкара (ΜνΑ).
Модифицированный осповакцинный вирус Анкара (ΜνΑ) относится к вакцинному вирусу, члену рода Οπίιοροχνίπΐδ семейства Ροχνίπάαο. ΜνΑ был получен в результате 516 последовательных пассажей на фибробластах куриных эмбрионов штамма Анкара осповакцинного вируса (ΟνΑ) (см. обзор Μ;·ι\τ Α. е! а1., 1п£ес!юп 3, 6-14 [1975]). В результате данных длительных пассажей полученный вирус ΜνΑ представляет продукт делеции размером 31 т.п.о. из его геномной последовательности и, следовательно, описан как ограниченный птичьими клетками в качестве клеток-хозяев (Μουογ Н. е! а1., 1. Сеп. νίτοί. 72, 1031-1038 [1991]). Было показано на различных моделях на животных, что полученный ΜνΑ является в высокой степени авирулентным (ΜανΓ Α. & Эаппег К. [1978] Ое\'. Βίο1. 8!апб. 41:225-34). Кроме того, данный штамм ΜνΑ тестировали в клинических испытаниях в качестве вакцины для иммунизации против натуральной оспы человека (ΜανΓ е! а1., ΖΜ. Вак!. Нуд. I, ЛЫ. Огд. В 167, 375-390 [1987], 8Иск1 е! а1., Эйск теб. \У5с11г. 99, 2386-2392 [1974]). В данных исследованиях участвовало более 120000 людей, включая пациентов группы риска, и было доказано, что по сравнению с базовыми вакцинами, ΜνΑ обладал пониженной вирулентностью или инфекционностью и в то же время сохранял высокую иммуногенность.
Предпочтительными штаммами по настоящему изобретению являются ΜνΑ 575, находящийся в Европейской коллекции культивируемых клеток животных (ЕСАСС) под депозитным номером ν00120707, и ΜνΑ-ΒΝ, находящийся в той же организации под депозитным номером ν000083008, и их производные. Если предполагается вакцинировать/лечить людей, то ΜνΑ-ΒΝ и его производные являются особенно предпочтительными.
Свойства особенно предпочтительных штаммов ΜνΑ, предпочтительно наиболее предпочтительных штаммов для людей, таких как ΜνΑ-ΒΝ и его производных, можно обобщить следующим образом:
(ί) способность к репродуктивной репликации в фибробластах куриных эмбрионов (СЕР) и в клетках линии ВНК, но отсутствие способности к репродуктивной репликации в человеческой клеточной линии НаСа!, (ίί) отсутствие репликации ίη νίνο, (ίίί) индукция более высокой иммуногенности по сравнению с известным штаммом ΜνΑ 575 (ЕСАСС ν00120707) на модели летального инфицирования и/или (ίν) индукция, по меньшей мере, такого же иммунитета в схемах примирования вакцинным вирусом/бустинга вакцинным вирусом по сравнению со схемами ДНК-примирования/бустинга вакцинным вирусом.
Предпочтительные штаммы ΜνΑ по настоящему изобретению обладают свойством (ίί) отсутствия репликации в организме, который подвергается вакцинации или лечению, и/или в соответствующей тестсистеме, как поясняется ниже, и предпочтительно одним дополнительным из вышеуказанных свойств, более предпочтительно двумя дополнительными из вышеуказанных свойств. Наиболее предпочтительными являются штаммы Μν7Α, обладающие всеми вышеуказанными свойствами. Примером штамма ΜνΑ, обладающего всеми вышеуказанными свойствами у людей, является ΜνΑ-ΒΝ. Предпочтительные
- 4 011233 производные ΜνΑ-ΒΝ являются производными, обладающими в дополнение к признаку (ίί) по меньшей мере одним из вышеуказанных свойств, более предпочтительно по меньшей мере двумя из вышеуказанных свойств. Наиболее предпочтительными являются производные ΜνΑ-ΒΝ, обладающие всеми вышеуказанными свойствами.
Подробная информация, касающаяся тестов, использованных для определения того, обладает ли штамм ΜνΑ одним или более из вышеуказанных признаков (ί)-(ίν), имеется в заявке νθ 02/42480. В данной публикации также раскрывается, как можно получить вирусы, имеющие желаемые свойства. В частности, в заявке νθ 02/42480 приводится подробное определение признаков ΜνΑ-ΒΝ и производного ΜνΑ-ΒΝ и подробно раскрываются биологические тесты, которые используются для определения того, насколько штамм ΜνΑ является ΜνΑ-ΒΝ или его производным. Другими словами, в заявке νθ 02/42480 раскрываются признаки ΜνΑ-ΒΝ, описание биологических тестов, позволяющих оценить, насколько штамм ΜνΑ является ΜνΑ-ΒΝ или его производным, и способы, позволяющие получить ΜνΑΒΝ или его производные. Ниже кратко приводится, как специалист в данной области может получить штаммы ΜνΑ, обладающие одним или более из вышеуказанных признаков, и как он может тестировать, обладает ли данный штамм ΜνΑ одним или более из вышеуказанных свойств и является, таким образом, наиболее предпочтительным вирусом по настоящему изобретению. Последующее краткое описание не следует понимать, как ограничение релевантности заявки νθ 02/42480 для настоящей заявки к последующей информации. Вместо этого заявка νθ 02/42480 включена здесь полностью для сведения.
Термин не способный к репродуктивной репликации в клеточной линии НаСа! (ΒοιιΚαιηρ е! а1., 1988, 1. Βίο1. 106 (3): 761-71) используется в настоящей заявке аналогично тому, как определено в заявке νθ 02/42480. Таким образом, вирус, который не способен к репродуктивной репликации в клеточной линии НаСа!, представляет собой вирус, который показывает индекс амплификации, равный менее 1 в человеческой клеточной линии НаСа!. Предпочтительно, чтобы индекс амплификации вируса, используемого в качестве вектора по изобретению, составлял 0,8 или менее в человеческой клеточной линии НаСа!. Индекс амплификации вируса представляет соотношение вируса, полученного из зараженных клеток (выход), к количеству, первоначально использованному для заражения клеток (вход), (индекс амплификации). Индекс, равный 1, между выходом и входом определяет состояние амплификации, когда количество вируса, полученного из зараженных клеток, является таким же, как исходное количество, использованное для заражения клеток. Термин производные вирусов, находящихся на хранении под номером ЕСАСС ν00083008, предпочтительно относится к вирусам, проявляющим в основном ту же способность к репликации, что и находящийся на хранении штамм, но имеющим различия в отношении одной или более частей его генома. Вирусы, обладающие такой же способностью к репликации, что и находящиеся на хранении вирусы, представляют собой вирусы, которые реплицируются с аналогичными индексами амплификации, что и находящийся на хранении штамм в клетках СЕЕ и клеточных линиях ВНК, НеЬа, НаСа! и 143В, и которые показывают аналогичную репликацию в условиях ίη νίνο, определенную на модели трансгенных мышей ΑΟΒ129 (см. ниже).
Термин отсутствие способности к репликации ίη νίνο используется в настоящей заявке аналогично тому, как определено в заявке νθ 02/42480. Таким образом, указанный термин относится к вирусам, которые не реплицируются у людей и на модели на мышах, как поясняется в заявке νθ 02/42480. Мыши, использованные в заявке νθ 02/42480, не способны к продукции зрелых В- и Т-клеток (мыши ΑΟΒ129). В частности, ΜνΑ-ΒΝ и его производные не приводят к гибели мышей ЛСВ129 в течение периода времени по меньшей мере 45 суток, более предпочтительно в течение по меньшей мере 60 суток, наиболее предпочтительно в течение 90 суток после заражения мышей 107 БОЕ вируса, введенного внутрибрюшинно. Предпочтительно вирусы, которые показывают отсутствие способности к репликации ίη νίνο, дополнительно характеризуются тем, что вирус невозможно выделить из органов и тканей мышей ΑΟΒ129 в течение 45 суток, предпочтительно 60 суток и наиболее предпочтительно 90 суток после заражения мышей 107 БОЕ вируса, введенного внутрибрюшинно.
Вместо мышей ΑΟΒ129 можно использовать любой другой штамм мышей, неспособный продуцировать зрелые В- и Т-клетки, и в результате для него характерен высокий иммунодефицит и высокая чувствительность к реплицирующемуся вирусу.
Подробности опыта по летальному инфицированию, использованному для определения того, обладает ли штамм ΜνΑ более высокой иммуногенностью по сравнению с известным штаммом ΜνΑ 575, поясняются в заявке νθ 02/42480. На подобной модели летального инфицирования невакцинированные мыши погибают после заражения реплицирующимися компетентными вакцинными штаммами, такими как штамм Vе8!ет Векетуе Ь929 ТК+ или 1НЭ-1. Заражение реплицирующимися компетентными вакцинными вирусами относится к инфицированию в контексте описания модели летального инфицирования. Через 4 суток после заражения мыши, как правило, погибают, и титр вируса в яичниках определяют обычными методами бляшкообразования в клетках νΕΒΟ. Титр вируса определяют для невакцинированных мышей и мышей, вакцинированных ΜνΑ-ΒΝ и его производными. Конкретнее, ΜνΑ-ΒΝ и его производные характеризуются тем, что в данном тесте после вакцинации 102 ТСГО50/мл вируса титры вируса в яичниках снижаются по меньшей мере на 70%, предпочтительно по меньшей мере на 80%, более предпочтительно по меньшей мере на 90% по сравнению с невакцинированными мышами.
- 5 011233
В предпочтительном воплощении вирусы по настоящему изобретению, такие как МУЛ, в частности, МУЛ-ΒΝ и его производные, пригодны для примирования/бустинга. Вирусы, в частности, штаммы МУА, которые наиболее предпочтительно применяются в настоящем изобретении, такие как МУА-ΒΝ и его производные, а также соответствующие рекомбинантные вирусы, содержащие гетерологичные последовательности, можно использовать для эффективного первого примирования и затем бустинга у животных, не подвергнутых ранее иммунизации, а также животных с ранее возникшим иммунитетом к поксвирусам. Таким образом, наиболее предпочтительный вирус по настоящему изобретению стимулирует, по меньшей мере, такой же иммунитет в схемах примирования вакцинным вирусом/бустинга вакцинным вирусом по сравнению со схемами ДНК-примирования/бустинга вакцинным вирусом.
Вакцинный вирус, в частности, штамм МУА, рассматривается как индуцирующий, по меньшей мере, такой же иммунитет в схемах примирования вакцинным вирусом/бустинга вакцинным вирусом по сравнению со схемами ДНК-примирования/бустинга вакцинным вирусом, если ответ СТЬ, определенный в одном из тестов 1 и тесте 2, раскрытых в заявке \СО 02/42480, предпочтительно в обоих тестах, является, по меньшей мере, в основном аналогичным при схемах примирования вакцинным вирусом/бустинга вакцинным вирусом по сравнению со схемами ДНК-примирования/бустинга вакцинным вирусом. Более предпочтительно, когда ответ СТЬ после примирования вакцинным вирусом/бустинга вакцинным вирусом выше по меньшей мере в одном из тестов по сравнению с ДНКпримированием/бустингом вакцинным вирусом. Наиболее предпочтительно, когда ответ СТЬ выше в обоих тестах.
Вирус, использованный по настоящему изобретению, может быть нерекомбинантным вирусом, таким как МУА, т. е. вирусом, который не содержит гетерологичные нуклеотидные последовательности. Примером нерекомбинантного вакцинного вируса является МУА-ΒΝ и его производные. Альтернативно, вирус может быть рекомбинантным вирусом, таким как рекомбинантный МУА, который содержит дополнительные нуклеотидные последовательности, которые являются гетерологичными для вируса.
Термин гетерологичный в том смысле, в котором он используется в настоящей заявке, относится к любой комбинации нуклеиновокислотных последовательностей, которые обычно отсутствуют у вирусов в природе, подобный вирус также называется рекомбинантным вирусом.
Гетерологичная нуклеиновокислотная последовательность предпочтительно выбрана из последовательностей, кодирующих по меньшей мере один антиген, антигенный эпитоп, полезные белки и/или терапевтическое соединение.
Термин полезные белки в том смысле, в котором он используется в настоящей заявке, относится к любым белкам, которые полезны для защиты животного против антигена, выбранного из опухолевого антигена и чужеродного антигена, где опухолевый антиген и чужеродный антиген отличаются от антигенов, связанных с вирусом. Альтернативно и конкретнее, полезные белки являются активными в увеличении концентрации факторов, которые активируют дендритные клетки и/или являются активными в увеличении числа дендритных клеток, и/или являются активными в повышении продукции и/или клеточного содержания интерферона (ΙΡΝ) или 1Ь-12. Так, примерами подобных полезных белков являются интерфероны, такие как ΙΡΝ-альфа или ΙΡΝ-бета, 1Б-12, ΡΙΐ-3-Ь и/или СМ-С8Р.
Антигенные эпитопы могут представлять любые эпитопы, против которых целесообразно стимулировать иммунный ответ.
Примерами антигенных эпитопов являются эпитопы из Р1а§тобшш 1а1с1рагиш, МуеоЬае1спа. вируса гриппа, из вирусов, выбранных из семейств флавивирусов, парамиксовирусов, вирусов гепатита, вирусов иммунодефицита человека или из вирусов, вызывающих геморрагическую лихорадку, таких как гантавирусы или филовирусы, т.е. вирус Эбола и Марбурга. Так, если, например, для вакцинации новорожденных по настоящему изобретению используется рекомбинантный МУА, экспрессирующий гетерологичные эпитопы, то результатом данного лечения является не только общая вакцинация за счет ускоренного созревания иммунной системы, но также специфическая вакцинация против гетерологичного эпитопа, экспрессированного гетерологичным МУА.
Терапевтическое соединение, кодированное гетерологичной нуклеиновой кислотой в рекомбинантном вирусе, может представлять собой, например, терапевтическую нуклеиновую кислоту, такую как антисмысловая нуклеиновая кислота или пептид, или белок с желаемой биологической активностью.
Вставку гетерологичной нуклеиновокислотной последовательности предпочтительно проводят в заменимую область генома вируса. Альтернативно, гетерологичную нуклеиновокислотную последовательность вставляют в имеющийся в естественных условиях сайт делеции в геноме вируса (для МУА раскрытый в патенте РСТ/ЕР96/02926). Способы вставки гетерологичных последовательностей в геном вируса, такого как геном поксвирусов, известны специалистам в данной области.
Настоящее изобретение также обеспечивает фармацевтическую композицию и вакцину, содержащие вирус по настоящему изобретению, такой как МУА, например, для стимуляции иммунного ответа в организме животного, включая человека.
Как правило, фармацевтическая композиция может содержать один или более фармацевтически приемлемых и/или разрешенных для применения носителей, добавок, антибиотиков, консервантов, адъювантов, разбавителей и/или стабилизаторов. Подобными вспомогательными веществами может быть
- 6 011233 вода, физиологический раствор, глицерин, этанол, увлажнители или эмульгаторы, рН-забуферивающие вещества или тому подобное. Как правило, подходящие носители являются крупными, медленно метаболизирующимися молекулами, такими как белки, полисахариды, полимолочные кислоты, полигликолевые кислоты, полимерные аминокислоты, сополимеры аминокислот, липидные агрегаты или тому подобное.
Для получения вакцин вирус или его рекомбинанты превращают в физиологически приемлемую форму. Подобные способы хорошо известны специалистам в данной области. Для МУЛ и других поксвирусов вакцину можно получить, основываясь на опыте получения вакцин на основе поксвирусов, используемых для вакцинации против натуральной оспы (как описано δΙίοΚΙ Н. с1 а1. [1974] Э15с11. теб. \У5с11г. 99, 2386-2392). Например, очищенный вирус хранят при -80°С при титре 5х108 ТСГО50/мл примерно в 10 мМ Трис-буфере, 140 мМ ΝαΟΊ. рН 7,4. Для получения доз вакцины, например, 101-108 частиц вируса, такого как МУА, лиофилизуют в 100 мл забуференного фосфатом физиологического раствора (РВ8) в присутствии 2% пептона и 1% человеческого альбумина в ампуле, предпочтительно стеклянной ампуле. Альтернативно, дозы вакцины можно получить стадийным высушиванием, замораживанием вируса в композиции. Данная композиция может содержать дополнительные добавки, такие как маннит, декстран, сахар, глицин, лактоза или поливинилпирролидон или другие добавки, такие как антиоксиданты или инертный газ, стабилизаторы или рекомбинантные белки (например, человеческий сывороточный альбумин), подходящие для введения ίη νίνο. Затем стеклянную ампулу запаивают, и ее можно хранить при температуре в пределах от 4°С до комнатной в течение нескольких месяцев. Однако ампулу предпочтительно хранят при температуре ниже -20°С, пока не возникает необходимость в ее использовании.
Для вакцинации или лечения лиофилизат можно растворить в 0,1-0,5 мл водного раствора, предпочтительно физиологического раствора или Трис-буфера и вводить либо системно, либо местно, например парентерально, внутримышечно или любым другим путем для введения, известным специалисту в данной области.
Специалистам в данной области известным образом можно оптимизировать способ введения, дозу и кратность введения.
Вирус по настоящему изобретению, в частности, МУА, можно вводить пероральным, интраназальным, внутримышечным, внутривенным, внутрибрюшинным, внутрикожным, внутриматочным и/или подкожным путем. Небольшим животным прививку для иммунизации предпочтительно проводить парентерально или интраназально, в то время как более крупным животным или людям подкожное, внутримышечное и пероральное введение является предпочтительным.
МУА предпочтительно вводят в дозе в пределах от 101 ТСШ50 (инфекционная доза для тканевой культуры) до 109 ТСГО50.
Как указывалось выше, вирус по настоящему изобретению, в частности, МУА, такой как МУА-ΒΝ и его производные, можно вводить в терапевтически эффективном количестве при первой иммунизации (примирование) и второй иммунизации (бустинг).
В контексте настоящего изобретения термин животное включает также людей. В более общем смысле животное представляет позвоночное, предпочтительно млекопитающее, включая человека. Конкретными примерами животных являются домашние животные, такие как собаки, кошки, экономически важные животные, такие как телята, крупный рогатый скот, овцы, козы, лошади, свиньи и другие животные, такие как мыши, крысы. Для данных видов животных и людей МУА и П18С-Н8У являются особенно предпочтительными вирусами. Изобретение можно также использовать для экономически важных птиц, таких как индейки, утки, гуси и куры, если используемые вирусы способны инфицировать клетки птиц, но не способны реплицироваться в инфекционное потомство вируса в указанных клетках.
Термин домашние животные в том смысле, в котором он используется в настоящем описании, предпочтительно относится к домашним животным-млекопитающим, более предпочтительно собакам, кошкам, телятам, крупному рогатому скоту, овцам, козам, свиньям, лошадям, оленям.
Согласно первой альтернативе вирусы по настоящему изобретению, в частности, МУА-ΒΝ и его производные, можно использовать в качестве специфических вакцин, т. е. для стимуляции иммунного ответа, который защищает вакцинированных новорожденных животных против заболеваний, вызываемых вирулентным вирусом, относящимся к той же группе, семейству или роду вирусов, что и вирус, который применяется для вакцинации. В качестве примера МУА, определенного выше, в частности, МУАΒΝ и его производные, можно использовать для вакцинации новорожденных детей против инфекций, вызываемых поксвирусами, в частности, натуральной оспы. МУА, в частности, МУА-ΒΝ и его производные, можно также использовать для вакцинации позвоночных животных против инфекций, вызываемых поксвирусами, имеющих ветеринарное значение. Согласно данной первой альтернативе вирус, используемый для вакцинации, может быть нерекомбинантным вирусом, таким как МУА-ΒΝ или его производные, или рекомбинантным вирусом, несущим гены в геноме вируса, которые в природе не обнаруживаются в указанном геноме. Предпочтительно рекомбинантный вирус содержит дополнительные гены, которые оказывают помощь в стимуляции иммунного ответа. Примерами данного вида генов являются гены цитокинов и гены интерферона.
Согласно второй, но связанной альтернативе, новорожденных вакцинируют рекомбинантным вирусом, содержащим гетерологичную нуклеиновокислотную последовательность, определенную выше, для
- 7 011233 стимуляции иммунного ответа против аминокислотной последовательности, экспрессированной из гетерологичной нуклеиновокислотной последовательности. В качестве примера, нуклеиновокислотная последовательность может кодировать антиген или антигенный эпитоп, определенные выше. Примерами рекомбинантного вируса по настоящему изобретению является рекомбинантный МУЛ, в частности, рекомбинантный МУЛ-ΒΝ или его производное, содержащие гетерологичную нуклеиновую кислоту, кодирующую антигены из (ί) вирусов, иных чем МУА, таких как ВИЧ-1, ВИЧ-2, Оспдисуйщ. вирус лихорадки Западного Нила, вирус японского энцефалита, вирус кори, (и) опухолевых антигенов, (ίίί) бактерий, (ίν) грибов. Если антиген, экспрессированный из рекомбинантного вируса, представляет собой, например, антиген ВИЧ, то возможно использовать рекомбинантный вирус для стимуляции иммунного ответа у вакцинированных новорожденных против ВИЧ и профилактики СПИДа. В более широком смысле рекомбинантный вирус, экспрессирующий антиген или антигенный эпитоп, используется для стимуляции иммунного ответа против агента, из которого получена гетерологичная последовательность, и/или против агента, который содержит антиген или антигенный эпитоп.
Согласно третьей альтернативе неожиданно было установлено, что вирусы, способные инфицировать клетки животного, включая человека, в неонатальном или пренатальном периоде, но не способные реплицироваться в инфекционное потомство вируса у животного, включая человека, в неонатальном или пренатальном периоде можно использовать для получения лекарственного препарата для защиты животного, в частности, новорожденного животного, включая человека, против антигена, выбранного из опухолевого антигена и чужеродного антигена, где опухолевый антиген и/или чужеродный антиген отличаются от антигенов, связанных с вирусом.
Согласно данной третьей альтернативе новорожденные, вакцинированные вирусами по настоящему изобретению, в частности, МУА, таким как МУА-ΒΝ и его производные, защищены от заражения чужеродными антигенами, такими как инфекционные агенты. Таким образом, вирусы по настоящему изобретению, в частности, МУА, являются общей вакциной для новорожденных, т.е. при вакцинации новорожденных вирусами по настоящему изобретению, в частности, МУА, иммунная система новорожденных становится более компетентной для того, чтобы справиться с чужеродными антигенами, такими как вирусы. В разделе примеров в качестве примера приводится вакцинация МУА и последующее заражение герпес-вирусом типа 1. Таким образом, если вирус по настоящему изобретению, в частности, МУА, используется для вакцинации новорожденных, то вакцинированные животные в большей степени защищены против чужеродных антигенов по сравнению с невакцинированными животными в критический период жизни до достижения функциональности и зрелости иммунной системы.
По настоящему изобретению опухолевый антиген и/или чужеродный антиген отличаются от антигенов, связанных с вирусом. Данный термин следует понимать в том смысле, что согласно данному воплощению изобретение не предназначается, главным образом, для применения вируса, такого как МУА, для индукции иммунного ответа против самого вируса. Вместо этого вирус используется для стимуляции иммунного ответа или, по меньшей мере, общей иммунной стимуляции, которая защищает хозяина от чужеродных антигенов и опухолевых антигенов соответственно, которые не связаны с вирусом. Термин антигены, связанные с вирусом относится к эпитопам и антигенам вирусной частицы и антигенам и эпитопам на поверхности клетки, зараженной вирусом, которые возникают в результате экспрессии вирусного генома.
В контексте данного воплощения термин чужеродные антигены относится к любым антигенам и эпитопам, которые в естественных условиях не являются частью или компонентом организма животного. Чужеродные антигены особенно представляют антигены и эпитопы из инфекционных агентов и токсинов. Типичными инфекционными агентами являются вирусы, такие как герпесвирусы, ретровирусы, рабиесвирусы, рабдовирусы, аденовирусы; бактерии, такие как 8а1топе11а, Муеор1а§т, Мептдюоееик, НеторЫ1и§; прионы или грибы.
Изобретение представляет интерес не только для вакцинации животных против чужеродных антигенов, но в альтернативном воплощении оно также пригодно для вакцинации против опухолевых антигенов. Опухолевые антигены представляют антигены, связанные с некоторыми опухолевыми заболеваниями. Чаще всего опухолевые антигены представляют антигены, кодированные геномом хозяина, у которого развивается опухоль. Таким образом, в строгом смысле опухолевые антигены не являются чужеродными антигенами. Однако опухолевые антигены обнаруживаются в больших количествах именно в опухолях, в то время как количество опухолевых антигенов в нормальных тканях значительно ниже, и чаще всего опухолевые антигены не обнаруживаются вовсе в нормальной ткани. Примеры опухолевых антигенов известны специалистам в данной области и включают, например, антигены МАСЕ. МУА эффективен против данных опухолевых антигенов, поскольку вакцинация животных приводит к активации и/или ускоренному созреванию иммунной системы, которая затем может привести к гибели опухолевых клеток.
Термин защита против антигена относится к развитию иммунного ответа, который направлен против чужеродного или опухолевого антигена. Если чужеродный антиген является инфекционным агентом, то хозяин защищен против указанного агента, т. е. у хозяина развивается иммунный ответ против указанного антигена. Следовательно, заражение инфекционным агентом приводит к развитию менее
- 8 011233 тяжелого заболевания, или заболевание не развивается вовсе. Термин защита не следует понимать в том смысле, что всегда будет иметь место 100% защита против чужеродного или опухолевого антигена. Вместо этого, термин защита в том смысле, в котором он используется в настоящей заявке, относится к полезному действию, которое помогает животному справиться соответственно с чужеродным антигеном и опухолевым антигеном.
По настоящему изобретению подобное защитное действие проявляется в течение по меньшей мере 5 суток, предпочтительно по меньшей мере в течение 7, 14 или 28 суток после первой вакцинации. Другими словами, вакцинированное или подвергнутое лечению животное защищено, например, против чужеродного антигена, если животное контактирует с указанным антигеном соответственно через 5, 7, 14 и 28 суток.
В контексте настоящего изобретения эффект вакцинации новорожденных вирусом по настоящему изобретению, в частности, МУЛ, можно объяснить индукцией или усилением созревания иммунной системы и/или активацией иммунной системы. В контексте настоящего изобретения термин индукция или усиление созревания иммунной системы относится, кроме того, к ускоренному увеличению количества дендритных клеток или их предшественников у вакцинированных особей по сравнению с контрольными. Термины ускорение созревания иммунной системы и усиление созревания иммунной системы используются в данном описании взаимозаменяемо.
Активация иммунной системы характеризуется экспрессией на поверхности клеток молекул и гормонов, которые облегчают взаимодействие клеток/с клетками, или передвижение, и/или секрецию указанных молекул и гормонов клетками. Специфические рецепторы воспринимают данные сигналы и реагируют на них. Маркерами активации являются, кроме того, РИ3-Ь, 1Ь-12, ΙΡΝ-альфа, МНС-11 и СЭ8. и, в частности, СЭ8альфа (см. ниже).
Ускоренное развитие/созревание иммунной системы коррелирует с увеличением концентрации факторов, активирующих или мобилизующих дендритные клетки (ОС) или их клетки-предшественники, и/или с увеличением количества дендритных клеток и их клеток-предшественников, и/или с повышением продукции и/или клеточного содержания интерферона или 1Ь-12. Примером клеток-предшественников ОС, которые индуцируются вирусом по настоящему изобретению, в частности, МУА, являются плазматические предшественники ОС, которые имеют очень большое значение для защиты против вирусных инфекций и которые, как полагают, продуцируют ΙΡΝ-α/β.
Конкретнее, усиление созревания иммунной системы предпочтительно определяется по меньшей мере 2-кратным увеличением поверхностных маркеров, обнаруживаемых на ОС, таких как МНС-ΙΙ, СЭ40 и/или СЭ80/86. Предпочтительно подобное увеличение можно определить в крови. Дополнительными маркерами, свидетельствующими об ускорении созревания иммунной системы, являются Р113-Ь, 1Ь-12, ΙΡΝ-альфа, МНС-ΙΙ и СЭ8а (см. ниже). Кроме того, ускоренное созревание иммунной системы предпочтительно коррелирует по меньшей мере с 1,5-кратным увеличением, предпочтительно по меньшей мере с 2,0-кратным увеличением числа СО11е-положительных клеток в крови и/или селезенке через 7 суток после введения МУА-ΒΝ новорожденным животным по сравнению с контрольными животными, которые не получали МУА-ΒΝ. Кроме того, усиление созревания иммунной системы может предпочтительно коррелировать по меньшей мере с 1,5-кратным увеличением, более предпочтительно по меньшей мере с 2,0-кратным увеличением концентрации Б113-Б через 2 суток после вакцинации новорожденных вирусами по настоящему изобретению по сравнению с контрольными животными аналогичного возраста.
В данном контексте следует отметить, что имеется связь между фенотипом и функцией мышиных и человеческих популяций ОС, которые можно охарактеризовать их поверхностным фенотипом (Носйтеш е! а1., 2002. Нит. Тттипок 63: 1103). ОС можно детектировать в крови с использованием проточной цитометрии при применении ряда поверхностных маркеров (МасЭопа1б е! а1., 2002. Β1οοά. 100: 4512), что также позволяет идентифицировать специфические популяции ОС, такие как плазматические ОС (Όζίопек е! а1., 2002. Ниш. Iштиηο1. 63: 1133; Όζίοικ1< е! а1., 2000. 1. Iштиηο1. 165: 6037). С использованием аналогичных методов можно детектировать ОС в других человеческих тканях (Зиттегк е! а1., 2001. Ат. 1. Ра1йо1. 159: 285).
По настоящему изобретению вирусы, определенные выше, можно также использовать для лечения животных в неонатальном или пренатальном периоде для увеличения концентрации факторов, активирующих или мобилизующих дендритные клетки (ОС) или их клетки-предшественники, и/или увеличения количества дендритных клеток и их клеток-предшественников, и/или повышения продукции и/или клеточного содержания интерферона или ΙΤ-12. Было показано, что после вакцинации МУА-ΒΝ плазматические дендритные клетки продуцируют значительно больше ΙΤ-12, и имеет место повышенная продукция ΙΡΝ-альфа и положительная регуляция синтеза МНС-ΙΙ и СЭ8а. Увеличение концентрации ΙΤ-12 после введения вирусов, используемых по настоящему изобретению, предпочтительно составляет 2 раза, более предпочтительно 100 раз, 500 раз, 1000 раз, 2500 раз или 5000 раз. Через 2 суток после вакцинации новорожденных вирусами по настоящему изобретению, наиболее предпочтительно МУА-ΒΝ или его производными, имеет место предпочтительно 1,5-кратное, более предпочтительно 2,0-кратное увеличение концентрации Б113-Б по сравнению с контрольными животными аналогичного возраста.
- 9 011233
Термин активация дендритных клеток или их предшественников относится к созреванию и превращению ОС в антиген-представляющие клетки через определяемые заболеванием клеточные стадии, регулируемые гормонами и стимулами. Промежуточные стадии ОС называются предшественниками. Данные незрелые ОС достигают периферической крови. Различные (антигенные) стимулы активируют ОС. Маркерами активации, которые положительно регулируются в активированных дендритных клетках, являются Р1!3-Ь, ΙΕ-12, ΙΡΝ-альфа, МНС-ΙΙ и СЭ8а (см. ниже).
Было отмечено, что гормоны, такие как СМ-С8Р, приводят к наличию более незрелых клеток в периферической крови. Поскольку СМ-С8Е приводит к появлению большого числа предшественников ОС в костном мозге, крови и периферических органах (и клетки должны туда передвигаться), данное явление назвали мобилизацией дендритных клеток или их предшественников. Данное определение также используется в настоящем описании.
Следовательно, вакцинация животных, включая человека, особенно пригодна, если предполагается повысить концентрацию факторов, активирующих дендритные клетки (ОС) или их клеткипредшественники и/или увеличить количество дендритных клеток или их клеток-предшественников, и/или усилить продукцию и/или клеточное содержание интерферона или ΙΕ-12.
Факторы, которые активируют дендритные клетки, кроме того, включают Е113-Б (Бутан с1 а1., Се11 1993, 75: 1157-1167) и 6М-С8Р. Типичными интерферонами по настоящему изобретению являются ΙΡΝальфа и ΙΡΝ-бета. Вирусы, используемые по настоящему изобретению, стимулируют выработку Е113-Б и полагают, что некоторые наблюдаемые положительные эффекты проявляются за счет указанной стимуляции.
В контексте настоящей заявки новорожденное животное или человек определяется как животное или человек, еще не имеющие зрелой иммунной системы. В данном описании термины новорожденное животное и животное в неонатальном периоде используют в качестве синонимов. Зрелая иммунная система характеризуется способностью полностью активировать интактную иммунную систему и тем обстоятельством, что все известные функции и продукты Т- и В-клеток находятся на месте, в частности, изотипы иммуноглобулинов, такие как Ι§Ά и ΙβΕ. Таким образом, незрелая иммунная система характеризуется низким количеством Т-клеток, В-клеток и дендритных клеток по сравнению со взрослыми, продукцией ΙΡΝ, которая является более низкой по сравнению со взрослыми особями, и тем обстоятельством, что вторичные лимфоидные органы не являются полностью зрелыми. Конкретнее, животное в неонатальном периоде или новорожденное в контексте настоящего изобретения можно определить как новорожденное животное, имеющее количество спленоцитов СЭ4+ предпочтительно по меньшей мере в 2 раза, более предпочтительно по меньшей мере в 20 раз, более предпочтительно по меньшей мере в 200 раз, более предпочтительно по меньшей мере в 2000 раз, наиболее предпочтительно по меньшей мере в 20000 раз ниже, чем среднее число спленоцитов СЭ4 + у взрослых.
У мышей иммунная система становится зрелой в возрасте 4 недель. У людей зрелость иммунной системы наступает в возрасте от 6 месяцев до 1 года. У кошек и собак иммунная система созревает, как правило, в возрасте 6 месяцев, у телят, ягнят и поросят - в возрасте 4-12 недель. Вакцинацию вирусом по настоящему изобретению, в частности, МУЛ, предпочтительно проводят перед тем, как иммунная система становится зрелой. Однако, поскольку созревание после рождения происходит почти экспоненциально, то более предпочтительно вакцинировать вирусом по настоящему изобретению, в частности, МУА, как можно раньше после рождения. Поскольку у всех относящихся к данному вопросу домашних животных и у людей иммунная система становится зрелой не ранее чем через 4 недели после рождения, то, как правило, предпочтительно проводить вакцинацию вирусом по настоящему изобретению, в частности, МУА, в течение 4 недель после рождения, более предпочтительно в течение 2 недель после рождения, еще более предпочтительно в течение 1 недели после рождения, наиболее предпочтительно в течение 3 дней после рождения. Данные общие термины применимы ко всем экономически важным домашним животным, в частности, ко всем важным домашним животным-млекопитающим, включая людей. Специалист в данной области, очевидно, понимает, что даже более старшие животные могут рассматриваться в качестве новорожденных/находящихся в неонатальном периоде в контексте настоящего изобретения и что, таким образом, вакцинацию можно успешно проводить у более взрослых животных, когда иммунная система еще не является зрелой, т.е. через 4 недели после рождения. Таким образом, у людей вакцинацию можно проводить в течение 6 месяцев после рождения, более предпочтительно в течение 3 месяцев после рождения, более предпочтительно в течение 2 месяцев после рождения, более предпочтительно в течение 4 недель после рождения, более предпочтительно в течение 2 недель после рождения, еще более предпочтительно в течение 1 недели после рождения, наиболее предпочтительно в течение 3 дней после рождения.
Поскольку наилучший эффект вируса по настоящему изобретению, в частности, МУА, в качестве общей вакцины, наблюдают, если вирус вводят особи с незрелой иммунной системой, то может быть предпочтительным вакцинировать животных, находящихся в пренатальном периоде, включая людей. Пренатальная вакцинация может быть желательной у экономически важных животных, таких как крупный рогатый скот или свиньи. Если вирус проходит через плаценту, то плод можно просто вакцинировать вакцинацией матери. Так, вакцинация матери с целью вакцинации плода является особенно обе
- 10 011233 щающей у животных, имеющих эндотелиохориальную плаценту, таких как собаки, кошки, крысы и мыши, или имеющих гемохориальную плаценту, таких как приматы, включая людей. У животных, имеющих хорионепителиальную плаценту, таких как крупный рогатый скот и овцы, или имеющих синдесмохориальную плаценту, таких как свиньи и лошади, вакцинацию плодов предпочтительно проводить внутриматочным введением. Конечно, данный способ введения можно также применить для животного, имеющего эндотелиохориальную или гемохориальную плаценту.
Поскольку вирусы по настоящему изобретению, в частности МУЛ, приводят к ускоренному созреванию иммунной системы и поскольку вирусы по настоящему изобретению, в частности МУА, пригодны в качестве общей вакцины, то вакцинированные животные защищены против различных заболеваний. Конкретнее, вирусы по настоящему изобретению, в частности МУА, можно использовать для вакцинации кошек для улучшения общего статуса и против кошачьего герпеса или инфекционного перитонита кошек. Вирусы по настоящему изобретению, в частности МУА, можно использовать для собак для улучшения общего статуса и против ассоциированных (вирусных) заболеваний дыхательного тракта. Вирусы по настоящему изобретению, в частности МУА, можно использовать у поросят для улучшения общего статуса и против инфекций, вызываемых НешорЫ1и5 или Муеор1а5ша, особенно у откормочных свиней.
Как указывалось, предпочтительным воплощением является применение вирусов по настоящему изобретению, в частности МУА, у животных в неонатальном или пренатальном периоде для защиты указанных животных против чужеродного антигена и/или опухолевого антигена, где опухолевый антиген отличается от антигенов, связанных с вирусом, используемым для вакцинации. Однако, данное воплощение не ограничивается животными в неонатальном или пренатальном периоде. Вместо альтернативного воплощения изобретение можно осуществлять для животных всех возрастов, поскольку положительное действие можно наблюдать также и у взрослых животных. Таким образом, по данному воплощению вирусы, определенные выше, в частности МУА-ΒΝ и его производные, пригодны для защиты животного, включая человека, против антигена, выбранного из опухолевого антигена и чужеродного антигена, где опухолевый антиген и/или чужеродный антиген отличаются от антигенов, связанных с вирусом. Как указывалось выше, вирусы, используемые по настоящему изобретению, способны инфицировать клетки животного, но не способны реплицироваться в инфекционное потомство вируса в указанных клетках. Вся информация, определения, включая определение продолжительности защитного действия, примеры, а также предпочтительные, более предпочтительные и наиболее предпочтительные воплощения, представленные выше для новорожденных, также применимы для настоящего воплощения, согласно которому вирус можно также вводить взрослым.
В противоположность новорожденным иммунная система взрослых животных уже находится в зрелом состоянии. Независимо от этого могут возникнуть ситуации, когда иммунная система ослабляется за счет определенных заболеваний или просто возраста животного. У людей с иммунной недостаточностью или у пожилых людей введение вирусов по настоящему изобретению, в частности МУА, может быть особенно полезным увеличением концентрации факторов, активирующих и/или мобилизующих дендритные клетки (ΌΟ) или их клетки-предшественники, и/или увеличением количества дендритных клеток или их клеток-предшественников, и/или повышением продукции и/или клеточного содержания интерферона или 1Ь-12. Таким образом, даже у взрослых животных введение вирусов по настоящему изобретению, в частности МУА, может привести к повышению компетентности иммунной системы для того, чтобы справиться с чужеродными антигенами и/или опухолевыми антигенами. Другими словами, вирусы, используемые по настоящему изобретению пригодны для активации иммунной системы в целом.
Изобретение дополнительно относится к вирусам по настоящему изобретению, в частности МУА, для получения лекарственного препарата для введения животному, включая человека, где указанный лекарственный препарат увеличивает концентрацию факторов, которые активируют дендритные клетки и/или увеличивает количество дендритных клеток, и/или повышает продукцию и/или клеточное содержание интерферона (ΙΕΝ) или 1Ь-12. Все определения, представленные выше для других воплощений, также применимы для настоящего воплощения. Согласно данному воплощению изобретение не направлено главным образом на стимуляцию защиты против чужеродных антигенов и/или опухолевых антигенов. Вместо этого, данное воплощение направлено на лечение состояний и заболеваний, характеризующихся низким уровнем факторов, которые активируют дендритные клетки, и/или недостаточным или слишком низким количеством дендритных клеток и/или низкой продукцией, и/или клеточным содержанием интерферона (ΙΕΝ) или 1Ь-12. Таким образом, по данному воплощению лечение вирусами по настоящему изобретению, в частности МУА, может защитить от аллергии или аутоиммунных заболеваний. Также данное лечение является особенно обещающим, если вирусы по настоящему изобретению, в частности МУА, вводят новорожденным животным.
Кроме того, по дополнительному воплощению вирус по настоящему изобретению, такой как МУА, в частности МУА-ΒΝ и его производные, особенно полезны для стимуляции иммунных ответов у животных с иммунной недостаточностью, например обезьян (СЭ4 <400/мкл крови), зараженных 81У, или у людей с иммунной недостаточностью. Термин иммунная недостаточность определяет статус иммунной системы индивидуума, при котором имеются только неполные иммунные ответы, или у него имеется
- 11 011233 пониженная эффективность в защите от инфекционных агентов.
Изобретение дополнительно касается способа защиты животного, включая человека, против антигена, выбранного из опухолевого антигена и чужеродного антигена, введением вируса по настоящему изобретению, в частности модифицированного осповакцинного вируса Анкара (МУА), где опухолевый антиген и/или чужеродный антиген отличаются от антигенов, связанных с вирусом.
В дополнительном воплощении изобретение относится к способу лечения животного, включая человека, для увеличения концентрации факторов, которые активируют дендритные клетки, и/или увеличения количества дендритных клеток, и/или повышения продукции и/или клеточного содержания интерферона (ΙΕΝ) или 1Ь-12, включающему введение модифицированного осповакцинного вируса Анкара (МУА).
Краткое описание изобретения
Применение вируса для получения лекарственного препарата для вакцинации или лечения животного в неонатальном или пренатальном периоде, включая человека, где вирус способен инфицировать клетки животного в неонатальном или пренатальном периоде, включая человека, но не способен к репликации в инфекционное потомство вируса у животного в неонатальном или пренатальном периоде, включая человека.
Способ лечения или вакцинации животного в неонатальном или пренатальном периоде, включая человека, включающий введение вируса, где вирус способен инфицировать клетки животного в неонатальном или пренатальном периоде, включая человека, но не способен к репликации в инфекционное потомство вируса у животного в неонатальном или пренатальном периоде, включая человека.
Вирус для вакцинации или лечения животного в неонатальном или пренатальном периоде, включая человека, где вирус способен инфицировать клетки животного в неонатальном или пренатальном периоде, включая человека, но не способен к репликации в инфекционное потомство вируса у животного в неонатальном или пренатальном периоде, включая человека.
Применение, способ или вирус, указанные выше, где вирус является ДНК-содержащим вирусом.
Применение, способ или вирус, указанные выше, где вирус выбран из герпесвирусов И18С и модифицированного осповакцинного вируса Анкара (МУА).
Применение, способ или вирус, указанные выше, где штамм МУА представляет МУА-ΒΝ, находящийся на хранении в Европейской коллекции культивируемых клеток животных (ЕСАСС) под депозитным номером У00083008, и его производные.
Применение, способ или вирус, указанные выше, где МУА вводят пероральным, интраназальным, внутримышечным, внутривенным, внутрибрюшинным, внутрикожным, внутриматочным и/или подкожным путем.
Применение, способ или вирус, указанные выше, где МУА вводят в терапевтически эффективном количестве при первой прививке (примирование) и при второй прививке (бустинг).
Применение, способ или вирус, указанные выше, где МУА вводят животному, включая человека, в количестве по меньшей мере 101 ТСШ50 (инфекционная доза для тканевой культуры).
Применение, способ или вирус, указанные выше, где вакцинация направлена против инфекции, вызываемой поксвирусами.
Применение, способ или вирус, указанные выше, где инфекция, вызываемая поксвирусами, является натуральной оспой.
Применение, способ или вирус, указанные выше, где вирусный геном включает по меньшей мере одну гетерологичную нуклеиновую кислоту.
Применение, способ или вирус, указанные выше, где гетерологичная нуклеиновая кислота выбрана из последовательности, кодирующей по меньшей мере один антиген, антигенный эпитоп и/или терапевтическое соединение.
Применение, способ или вирус, указанные выше, где вакцинация направлена против агента, из которого получена гетерологичная последовательность, или против агента, включающего по меньшей мере один антиген или антигенный эпитоп.
Применение, способ или вирус, указанные выше, где вакцинация направлена на защиту животного, включая человека, против антигена, выбранного из опухолевого антигена и чужеродного антигена, где опухолевый антиген и/или чужеродный антиген отличаются от антигенов, связанных с вирусом.
Применение, способ или вирус, указанные выше, где чужеродный антиген выбран из инфекционных агентов и токсинов.
Применение, способ или вирус, указанные выше, где инфекционный агент выбран из вирусов, бактерий, прионов и грибов.
Применение, способ или вирус, указанные выше, где вакцинацию или лечение используют для индукции или усиления созревания и/или активации иммунной системы.
Применение, способ или вирус, указанные выше, где лечение используют 1) для увеличения концентрации факторов, которые активируют и/или мобилизуют дендритные клетки или их клеткипредшественники, и) для увеличения количества дендритных клеток или их клеток-предшественников или ϊϊΐ) повышения продукции и/или клеточного содержания интерферона (ΙΕΝ) или 1Ь-12.
- 12 011233
Применение, способ или вирус, указанные выше, где фактором, активирующим дендритные клетки, является Б113-Б и/или СМ-С8Б.
Применение, способ или вирус, указанные выше, где интерферон представляет ΙΕΝ-α и/или ΙΕΝ-β.
Фармацевтическая композиция, содержащая вирус, указанный выше.
Вакцина, содержащая вирус, определенный выше.
Краткое описание фигур
Фиг. 1А: новорожденным мышам в течение 24-48 ч после рождения вводили 106 БОЕ МУА или ΟΙ80 Н8У-1 или физиологический раствор (№101) в качестве контроля. В возрасте 7 суток СЭ11с. универсальный маркер Ό0, использовали для определения данных клеток в периферической крови проточной цитометрией. Представлены средние значения и стандартные отклонения по 3-5 опытам.
Фиг. 1В: опыт, представленный на фиг. 1А. Однако клетки СЭИс определяли в селезенке проточной цитометрией.
Фиг. 1С: опыт, представленный на фиг. 1А. Однако клетки СЭИс определяли в перитонеальной жидкости проточной цитометрией.
Фиг. 2: мышей вакцинировали МУА-ΒΝ, как указано в левой колонке. Через две недели процент единичных СЭНс'- и двойных СО11с'/СО8-положительных клеток в селезенке и крови определяли проточной цитометрией.
Фиг. 3: новорожденным мышам вводили МУА или №1С1 в качестве контроля в возрасте 1 и 5 суток. На 8 сутки в сыворотке данных мышей определяли ЕЫ8А мышиные Б113-Б и значения выражали в пкг/мл.
Фиг. 4: новорожденным мышам вводили однократно в течение 24-48 ч после рождения 106 БОЕ МУА или обрабатывали №1С1 в качестве контроля. В возрасте 7 суток всех мышей заражали 100хЬО50 Н8У-1 штамма Б. В течение 21 суток регистрировали число выживших животных.
Фиг. 5: мышей обрабатывали, как указано для фиг. 4. Все данные представляют результаты 9 различных опытов по заражению 100 ΕΟ50 Н8У-1. Ни одно контрольное животное не выжило после заражения.
Фиг. 6: выживание взрослых мышей, вакцинированных на первые сутки жизни МУА-ΒΝ после летального заражения вакциной. Три помета из 6 однодневных мышей (18 мышей) вакцинировали МУАΒΝ (2,5х107 ТСШ50) и через 4 недели (взрослых мышей) заражали летальной дозой вакцины. Было четко показано, что вакцинация МУА-ΒΝ стимулировала выработку защитного иммунитета у новорожденных мышей, который продолжался до взрослого состояния.
Примеры
Настоящее изобретение будет дополнительно проиллюстрировано последующими примерами. Специалисту в данной области, очевидно, понятно, что приведенные примеры ни коем образом не следует рассматривать в качестве сведения применимости технологии, обеспеченной в настоящем изобретении, к данным примерам.
Пример 1.
(ΐ) МУА-ΒΝ и Э18С-Н8У индуцируют ОС фенотипа СЭ11с' и СЭ8' у новорожденных животных
Первая серия опытов: новорожденные мыши от природы имеют иммунодефицит, поскольку система ШЫ является незрелой. Количество и состояние активации ОС, наилучших известных продуцентов 1Б№ не анализировали. ОС можно индуцировать ίη νίίτο, а также ίη νίνο различными стимулами. В данных опытах оценивалось, насколько контролируемая репликация МУА-ΒΝ может индуцировать ОС, и анализировали их фенотип. Группам мышей вводили 106 бляшкообразующих единиц (БОЕ) МУА-ΒΝ или физиологический раствор в течение 1-2 суток после рождения и в некоторых случаях в течение 5 суток после рождения. Клетки крови и селезенки отдельных мышей обеих групп анализировали БАС8 и данные сравнивали.
Данные, полученные от 7-8 отдельных мышей, указывали, что в результате обработки МУА-ΒΝ число клеток СЭИс' возрастало в 2-3 раза с одновременным повышением экспрессии МНС II и повышенным присутствием Т-клеток типа ί'.Ό4 или СЭ8. Интересно, что уровень СЭ19/54, маркера зрелых Вклеток, снижался, указывая на то, что данные клетки мигрировали в другие органы, а не селезенку, или что предшественники В-клеток развивались в другие популяции, а именно ОС плазматического фенотипа, которые несут ранние маркеры В-клеток (В220).
Данные трех различных опытов были воспроизводимыми и статистически достоверными. В опытах с П18С-Н8У-1, другой вирусной вакциной с контролируемой репликацией вируса, были обнаружены аналогичные количества клеток СЭИс' после примирования новорожденных.
Результаты обобщены в фиг. 1А-С.
Для последующего исследования субпопуляций ОС в крови и селезенке и анализа длительного действия обработки МУА-ΒΝ клетки крови и селезенки анализировали у животных в возрасте 2 недель. В данный период времени у обработанных животных число клеток СЭИс' в селезенке было в два раза выше, чем в возрасте 1 недели, но однократная обработка вирусом при рождении приводила к 3кратному повышенному количеству данных клеток в селезенке через 2 недели (фиг. 2). Аналогичные
- 13 011233 эффекты наблюдали в крови, за исключением того, что число клеток СО11с'/СО8а' было в 4 раза выше. Однократная обработка МУА-ΒΝ через 7 суток после рождения приводила к увеличению клеток СО11с'/СО8а' в 13-40 раз с менее выраженным эффектом в отношении клеток СЭ11с'. Как и предполагалось, две вакцинации при рождении и на 7 сутки оказывали достоверное действие на клетки СЭ11с'. Различные эффекты представлены на фиг. 2.
Вторая серия опытов: у мышей в возрасте одной недели, которых вакцинировали при рождении 2,5х107 ТСГО50 МУА-ΒΝ, обнаруживали иной состав популяций иммунологически компетентных клеток в селезенке и крови по сравнению с контрольными мышами (табл. 1). В крови отмечали увеличение популяции СЭ8-положительных лимфоцитов, а также возрастание числа киллерных клеток. Число СЭ11сположительных клеток было примерно в 3 раза выше по сравнению с контролем, и процент В-клеток (В220 и двойных СЭ19-положительных клеток) был достоверно ниже. В селезенке общее число клеток не различалось у иммунизированных и контрольных животных. В противоположность данным по крови в селезенке вакцинированных животных было больше СО4-положительных Т-лимфоцитов по сравнению с контролем, а число киллерных клеток не увеличивалось. Аналогично данным по крови относительное количество СЭ8-положительных лимфоцитов было выше, а число В-клеток - ниже. Процент СИ 11сположительных клеток было примерно в 3 раза выше по сравнению с контролем. Заявители впервые установили различие в проценте дендритных клеток на 5 сутки после вакцинации МУА-ΒΝ, когда число СО11с-положительных клеток в селезенке 4 необработанных контрольных мышей составляло 3,6% по сравнению с 4,8% у 4 вакцинированных МУА-ΒΝ мышей. Та же доза инактивированного УФ МУА-ΒΝ не вызывала какого-либо достоверного изменения клеточных популяций после вакцинации новорожденных мышей по сравнению с контрольными (данные не представлены). Первоначальная доза вакцинации была выбрана произвольно. После титрования инокулята заявители выбирали стандартную для вакцинации дозу, равную 2,5х106 ТСГО50 (в 10 раз меньше, чем в первоначальном опыте). При данной дозе было индуцировано максимальное количество ОС (табл. 2).
Таблица 1. Изменения клеток крови и селезенки у новорожденных мышей через 1 неделю после иммунизации 2,5х107 ТСГО50 МУА-ΒΝ
Параметр % Кровь Селезенка
ИаС1 МУА-ΒΝ ИаС1 МУА-ΒΝ Р*
Общее число клеток х106 17,9+1,9 24,1±2,6 0,105
%СП11с 5,4±1,3 18,6±1,5 0,001 2,8±0,1 7,9+0,8 0,001
%С011с/С08сс 0,5±0,1 2,7+0,3 0,001 υ±ο,ι 4,6+0,7 0,002
%С04/СОЗ 16,9±1,1 16,1±1,5 0,999 4,8+0,3 8,1±1,5 0,004
%СО8а/С’ВЗ 6,0+0,9 10,3±0,9 0,002 4,7+0,3 8,4+1,1 0,002
%ΝΚ1.1/0X5 16,4±1,2 24,4±3,3 0,032 2,5±0,3 2,4±0,2 0,862
%СО19/В220 22,3±0,5 8,4±0,8 0,001 16,2±1,3 8,6±0,9 0,004
*и-тест Манн-Витни
Таблица 2. Индукция СИИс-положительных клеток в селезенке однодневных мышей и мышей с разрывами генов в течение 7 суток после обработки МУА
Мышиный штамм Доза МУА (ТСЮ50) Контроль %СО11с МУА-ΒΝ %СО11с Соотношение
2,5х107 2,8 7,9 2,9
ντί 2,5х106 2,1 11,9 5,6
2,5х105 2, 5 6, б 2,6
КАСЬ 2,5х107 4,2 5,4 1,3
АС129с 2,5х103 2,6 2,7 1,0
а V = мыши С57Β1/6 или 1298ν/Εν ь Мыши КАО, полученные делецией, в рекомбинантном активирующем гене (т.е. без функциональных Т- и В-клеток) с Мыши АС129. полученные ген-направленным разрывом ΙΡΝ-рецептора типа I (ΙΡΝ-α и -β) и типа II (ΙΡΝ-γ) (ίί) МУА-ΒΝ индуцирует предпочтительно плазматические дендритные клетки (рИС)
- 14 011233
Согласно данным других авторов СО11с-положительные клетки, которые также экспрессировали ί.Ό45ΡΑ или СЭ45Р. рассматривались как рЭС (Л55с1т-Ра1игс1 с! а1., 2001, №11. 1ттипо1., 12: 1144). Возникает вопрос, насколько ΜVΑ-ΒN может вызывать увеличение количества рЭС. Проводили дополнительное исследование, в котором также анализировали СО45К.А или СО45К. в СО11с-положительных клетках. Процент двойных СЭ11с- и СО45К.-положительных клеток был достоверно выше у обработанных ΜνΑ-ΒΝ мышей (5,6±0,7%) по сравнению с обеими контрольными группами (необработанные 3,0±0,3%, р=0,01; инактивированный УФ ΜνΑ-ΒΝ 3,0±0,2%, р=0,006. И-тест Манн-Витни).
(ΐϊϊ) Новорожденные мыши, обработанные ΜνΑ-ΒΝ, имеют повышенные концентрации сывороточного Р113-Ь
Р113-Ь представляет собой гемопоэтический фактор, который приводит к повышенным количествам ОС у взрослых животных. У человека и, возможно, мышей наиболее богатым источником данного фактора являются активированные Т-клетки. Для исследования того, насколько повышенные количества ОС могут быть результатом индукции Р113-Ь, сыворотку от обработанных ΜνΑ-ΒΝ мышей сравнивали с контрольными мышами на присутствие данного фактора. У животных, обработанных на 2 и 5 сутки, концентрация Р113-Ь в сыворотке была в 2 раза выше по сравнению с сывороткой контрольных животных. Следовательно, Р113-Ь является одним из факторов, который может быть ответственен за повышенные уровни ОС (фиг. 3).
Продолжительность индукции Р113-Ь у новорожденных мышей оценивали после введения ΜνΑΒΝ. У новорожденных вакцинация ΜνΑ-ΒΝ индуцировала повышение концентрации Р113-Ь в течение 24
ч. Индукция достигала максимума через 48 ч и по-прежнему сохранялась на 7 сутки, период времени, когда обычно анализировали клетки селезенки и устойчивость к Н8У-1 (см. ниже). У вакцинированных мышей концентрация Р113-Ь в сыворотке была в 2 раза выше через 24 ч и 48 ч после вакцинации по сравнению с контрольными животными аналогичного возраста.
Пример 2.
(ί) Обработанные ΜνΑ-ΒΝ новорожденные мыши выдерживают заражение 100-500 ЬИ50 Н8У-1
Группы мышей обрабатывали стандартной дозой ΜνΑ-ΒΝ на 1 или 2 сутки после рождения и заражали в возрасте 7-8 суток 100-500 ЬП50 герпесвируса (фиг. 4). Обработанные ΜνΑ-ΒΝ мыши выживали после заражения Η§ν-1, в то время как контрольные мыши погибали в течение 5-6 суток после введения вируса для заражения.
Для дополнительного подтверждения данных результатов проводили 9 опытов по заражению 40 обработанных ΜνΑ-ΒΝ мышей и 45 контрольных мышей. После заражения более 80% обработанных вирусом мышей выживало, в то время как все контрольные мыши пали (фиг. 5).
В отдельной серии опытов мышей при рождении обрабатывали ΜνΑ-ΒΝ (2,5х106 ТСГО50/мышь). На 8 сутки проводили заражение либо 103 (1 ЬП50) или 105 (100 ЬП50) БОЕ Η8Υ-1. После вакцинации ΜνΑ-ΒΝ 65% мышей выживало после заражения дозой вируса, которая приводила к гибели 100% контрольных мышей (100 ΕΌ50), и 90% выживало после заражения дозой, которая приводила к гибели 45,5% контрольных животных (1 ГС. ). В дополнительных опытах группу из 7 мышей, вакцинированных инактивированным УФ ΜνΑ-ΒΝ, заражали Η§ν-1. Пять из них пало в течение 7 суток. У оставшихся 2 животных прекращался рост, и они пали на 22 и 29 сутки. Следовательно, у мышей, обработанных ΜνΑΒΝ, развивалась повышенная резистентность к Η§ν-1, которая была связана с живым ΜνΑ-ΒΝ, но не с инактивированным ΜνΑ-ΒΝ.
В контрольных опытах, проведенных на мышах, не имеющих функциональных Т-клеток, было установлено, что защита против Н8У-1 после вакцинации ΜνΑ-ΒΝ возникала не за счет перекрестного взаимодействия цитотоксических Т-лимфоцитов, индуцированных ΜνΑ-ΒΝ.
Было исследовано, насколько клетки ΌΟ ответственны за развитие защиты у мышей против Н8У-1 после вакцинации ΜνΑ-ΒΝ. В данном случае новорожденных 8-дневных мышей заражали 5х104 БОЕ Η§ν-1 через 4 ч после переноса клеток от обработанных ΜνΑ мышей. В первом опыте спленоциты от 8дневных мышей, обработанных в 1 сутки жизни ΜνΑ-ΒΝ, разделяли на богатую ИС (низкая плотность) и бедную ИС (высокая плотность) фракции. Мыши, получившие 5х106 клеток из богатой ΌΟ фракции, выживали после заражения на 50%, в то время как мыши, получившие суспензию, в 10 раз менее богатую ИС, или необработанные мыши, погибали в течение 5 суток. Во втором опыте проводили перенос положительно выделенных СО11с-положительных клеток от 8-дневных мышей, обработанных в 1 сутки жизни ΜνΑ-ΒΝ, контрольным мышам того же возраста. Суспензия из 2х106 спленоцитов, содержащая более чем 80% СЭ11с-положительных клеток от обработанных ΜνΑ-ΒΝ мышей, защищала интактных мышей от заражения Η§ν-1. В противоположность 4 необработанных помета, а также 8 дополнительных животных пали после заражения. Кроме того, у мышей, получивших то же самое количество спленоцитов, или у мышей, получивших эквивалентное количество спленоцитов (50х106 клеток) из отрицательной фракции, не было отмечено повышенной устойчивости против Η§ν-1. Таким образом, СО 11сположительные клетки способны защищать мышей от Η§ν-1.
В данной области предшествующего уровня описаны кратковременные защитные эффекты после введения ΜνΑ в течение примерно 24 ч (УП5тс1СГ В., Есг1. Μιιικίι. Т1сгагх11. ХУ^сйг. 112 (1999), 329-333).
- 15 011233
Несмотря на то, что вирусы, использованные в указанной публикации, не являются вирусами, которые не способны к репликации в инфекционное потомство вируса у используемых животных в неонатальном или пренатальном периоде, исследовали, насколько механизм действия, раскрытый УЙ8те1ет, аналогичен механизму действия, описанному в настоящей заявке. Конкретнее, У11кте1ег раскрывает, что МУЛ, в частности инактивированный МУА, индуцирует параиммунитет в течение примерно 24 ч. Для проверки того, насколько параиммунитет ответственен также за защитные эффекты, раскрытые в настоящей заявке, мышей через 24 ч после рождения вакцинировали либо МУА-ΒΝ, либо инактивированным МУА-ΒΝ. В возрасте 7 суток мышей заражали летальной дозой Н8У-1 (105 БОЕ Н8У-1Г). Невакцинированные контрольные мыши погибали через 6 суток после заражения. Также мыши, вакцинированные инактивированным МУА-ΒΝ, не были защищены против заражения Н8У-1. Число клеток ИС у данных мышей не было высоким. В противоположность мыши, вакцинированные неинактивированным МУА-ΒΝ, были в значительной мере защищены против заражения Н8У-1. Через 30 суток после заражения более чем 80% мышей оставалось живыми. Через 2 суток после вакцинации в сыворотке крови обнаруживали повышенную концентрацию Е113-Б. Высокие уровни ИС обнаруживали в селезенке. Повышенная концентрация Е113-Б была связана с повышенным числом ИС. Данное обстоятельство подтверждает, что эффект параиммунитета не является ответственным за наблюдаемую защиту.
(й) МУА-ΒΝ индуцирует специфический иммунитет у новорожденных, который продолжается до взрослого состояния мышей С57В1/6 в возрасте 1 суток (группа из 18 животных) вакцинировали (внутрибрюшинно) МУА-ΒΝ (2,5х107 ТСГО50). Через 4 недели после вакцинации, когда мыши уже считались взрослыми, их заражали летальной дозой (1х104 ТСГО50) вакцины ХУеЧегп Векетуе (УУ-νΚ.). За исключением одного животного все другие вакцинированные МУА-ΒΝ животные выживали. В противоположность все вакцинированные плацебо животные погибали в течение 7 суток, и у них развивались тяжелые клинические симптомы, такие как взъерошенный шерстный покров, потеря массы и сниженная активность. Это является прямым доказательством того, что вакцинация МУА-ΒΝ является безопасной не только у новорожденных животных, но также способна индуцировать защитную иммунную реакцию против летальной дозы вакцины (на основе вируса, близкого к МУА-ΒΝ).

Claims (30)

1. Применение модифицированного вируса осповакцины Анкара (МУА) для получения лекарственного препарата для индукции или усиления созревания иммунной системы у животного, включая человека, в неонатальном периоде.
2. Применение по п.1, где МУА представляет собой штамм МУА-ΒΝ, депонированный в ЕСАСС под номером У00083008, и его производные, которые характеризуются (ί) способностью к репродуктивной репликации в фибробластах куриных эмбрионов (СЕЕ) или в клетках линии ΒΗΚ, но отсутствием способности к репродуктивной репликации в линии клеток человека НаСа! и (ίί) отсутствием репликации у мышей, не способных продуцировать зрелые В- и Т-клетки и в результате имеющих высокий иммунодефицит и высокую чувствительность к реплицирующемуся вирусу.
3. Применение по любому из пп.1, 2, где усиление созревания иммунной системы связано с увеличением количества дендритных клеток и их клеток-предшественников.
4. Применение по п.3, где клетки-предшественники дендритных клеток представляют собой плазмацитоидные предшественники дендритных клеток.
5. Применение по любому из пп.1-4, где усиление созревания иммунной системы связано по меньшей мере с 1,5-кратным увеличением концентрации Е113-Б через двое суток после введения МУА.
6. Применение по любому из пп.1-5, где лекарственный препарат вводят пероральным, интраназальным, внутримышечным, внутривенным, внутрибрюшинным, внутрикожным, внутриматочным и/или подкожным путем.
7. Применение по любому из пп.1-6, где лекарственный препарат, содержащий терапевтически эффективное количество модифицированного осповакцинного вируса Анкара (МУА), вводят при первичной иммунизации (примирование) и при повторной иммунизации (бустинг).
8. Применение по любому из пп.1-7, где лекарственный препарат вводят в количестве по меньшей мере 101 ТСГО50 (инфекционная доза для тканевой культуры) МУА.
9. Применение по любому из пп.1-8, где вирусный геном содержит по меньшей мере одну гетерологичную последовательность нуклеиновой кислоты.
10. Применение по п.9, где гетерологичная последовательность нуклеиновой кислоты выбрана из последовательности, кодирующей по меньшей мере один антиген, антигенный эпитоп, и/или последовательности, кодирующей терапевтически активное соединение.
11. Применение по п.9, где гетерологичная последовательность нуклеиновой кислоты кодирует белок, выбранный из интерферона, 1Б-12, Е113-Ь и ОМ-С8Е.
12. Применение штамма МУА-ΒΝ модифицированного вируса осповакцины Анкара (МУА), депонированного в ЕСАСС под номером У00083008, и его производных для получения лекарственного препарата для вакцинации или лечения животного, включая человека, в неонатальном периоде против чуже
- 16 011233 родных антигенов или антигенов, которые связаны с заболеваниями у людей или животных, которые характеризуются (ί) способностью к репродуктивной репликации в фибробластах куриных эмбрионов (СЕЕ) или в клетках линии ВНК, но отсутствием способности к репродуктивной репликации в линии клеток человека НаСа! и (и) отсутствием репликации у мышей, не способных продуцировать зрелые В- и Т-клетки и в результате имеющих высокий иммунодефицит и высокую чувствительность к реплицирующемуся вирусу.
13. Применение по п.12, где лекарственный препарат вводят пероральным, интраназальным, внутримышечным, внутривенным, внутрибрюшинным, внутрикожным, внутриматочным и/или подкожным путем.
14. Применение по любому из пп.12, 13, где лекарственный препарат, содержащий терапевтически эффективное количество модифицированного осповакцинного вируса Анкара (МУ А), вводят при первичной иммунизации (примирование) и при повторной иммунизации (бустинг).
15. Применение по любому из пп.12-14, где лекарственный препарат вводят в количестве по меньшей мере 101 ТСШ50 (инфекционная доза для тканевой культуры) МУА.
16. Применение по любому из пп.12-15, где вирусный геном содержит по меньшей мере одну гетерологичную последовательность нуклеиновой кислоты.
17. Применение по п.16, где гетерологичная последовательность нуклеиновой кислоты выбрана из последовательности, кодирующей по меньшей мере один антиген, антигенный эпитоп, и/или последовательности, кодирующей терапевтически активное соединение.
18. Применение по п.16, где гетерологичная последовательность нуклеиновой кислоты кодирует белок, выбранный из интерферона, 1Б-12, Е113-Б и СМ-С8Е.
19. Применение по любому из пп.12-18, где лечение или вакцинация осуществляется для защиты от антигена, выбранного из опухолевого антигена и чужеродного антигена, где антиген отличается от эпитопов и антигенов вирусной частицы МУА-ΒΝ и антигенов и эпитопов на поверхности клетки животного, инфицированной вирусом, которые экспрессированы вирусным геномом.
20. Применение по п.19, где чужеродный антиген выбран из антигенов инфекционных агентов или токсинов.
21. Применение по п.20, где инфекционный агент выбран из вирусов, бактерий, прионов и грибов.
22. Применение по п.21, где вирус выбран из герпесвируса, ретровируса, рабдовируса, в том числе вируса бешенства, и аденовируса.
23. Применение по любому из пп.19-22, где защитное действие проявляется по меньшей мере в течение 14 суток.
24. Применение по любому из пп.12-18, где лечение или вакцинацию осуществляют для индукции специфического иммунного ответа против вируса, используемого для вакцинации.
25. Применение по п.24, где лечение или вакцинацию проводят против инфекции, вызываемой поксвирусами.
26. Применение по п.25, где инфекция, вызываемая поксвирусом, является натуральной оспой.
27. Применение по любому из пп.16, 17, где вакцинацию осуществляют для индукции иммунного ответа против агента, из которого получена гетерологичная последовательность нуклеиновой кислоты, или против агента, который содержит по меньшей мере один антиген или антигенный эпитоп.
28. Применение по п.27, где гетерологичная нуклеиновая кислота кодирует антигены опухолей, бактерий, грибов или вирусов, отличных от МУА.
29. Применение по любому из пп.17, 21 и 27, 28, где вирус, из которого происходит гетерологичная нуклеиновая кислота, выбран из ВИЧ-1, ВИЧ-2, вируса тропической лихорадки, вируса лихорадки Западного Нила, вируса японского энцефалита и вируса кори.
30. Применение по п.29, где гетерологичная нуклеиновая кислота кодирует ВИЧ-антиген и где лекарственный препарат, охарактеризованный в п.12, предназначен для индукции иммунного ответа против ВИЧ.
EA200401405A 2002-04-19 2003-04-16 Применение модифицированного вируса осповакцины анкара для вакцинации новорожденных EA011233B1 (ru)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DKPA200200590 2002-04-19
PCT/EP2003/003994 WO2003088994A2 (en) 2002-04-19 2003-04-16 Modified vaccinia virus ankara for the vaccination of neonates

Publications (2)

Publication Number Publication Date
EA200401405A1 EA200401405A1 (ru) 2005-04-28
EA011233B1 true EA011233B1 (ru) 2009-02-27

Family

ID=29225556

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA200401405A EA011233B1 (ru) 2002-04-19 2003-04-16 Применение модифицированного вируса осповакцины анкара для вакцинации новорожденных

Country Status (24)

Country Link
US (3) US7897156B2 (ru)
EP (4) EP1420822B2 (ru)
JP (4) JP4801880B2 (ru)
KR (2) KR101028937B1 (ru)
CN (1) CN100540051C (ru)
AT (1) ATE366586T2 (ru)
AU (1) AU2003239805B2 (ru)
BR (1) BR0309339A (ru)
CA (1) CA2478009C (ru)
CY (1) CY1106848T1 (ru)
DE (1) DE60314823T3 (ru)
DK (1) DK1420822T4 (ru)
EA (1) EA011233B1 (ru)
ES (1) ES2288609T5 (ru)
HK (1) HK1078777A1 (ru)
IL (1) IL163701A0 (ru)
MX (1) MXPA04010353A (ru)
NO (1) NO336348B1 (ru)
NZ (2) NZ547776A (ru)
PL (1) PL220781B1 (ru)
PT (1) PT1420822E (ru)
SG (1) SG173216A1 (ru)
UA (1) UA85371C2 (ru)
WO (1) WO2003088994A2 (ru)

Families Citing this family (32)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP2204452A1 (en) * 2000-11-23 2010-07-07 Bavarian Nordic A/S Modified Vaccinia Ankara Virus variant
US7628980B2 (en) * 2000-11-23 2009-12-08 Bavarian Nordic A/S Modified vaccinia virus ankara for the vaccination of neonates
NZ547776A (en) * 2002-04-19 2009-08-28 Bavarian Nordic As Modified vaccinia virus ankara for protecting an animal against an antigen or self-protein
WO2004043490A1 (en) * 2002-11-07 2004-05-27 Government Of The United States Of America As Represented By The Sercretary Of The Department Of Health And Human Services National Institutes Of Health Smallpox vaccine regimen
LT1855720T (lt) * 2005-02-23 2017-01-10 Bavarian Nordic A/S Modifikuoto raupų viruso panaudojimas greitam imuniteto sužadinimui prieš raupų virusą arba kitus infekcinius agentus
EP1835031A1 (en) 2006-03-14 2007-09-19 Paul-Ehrlich-Institut Bundesamt für Sera und Impfstoffe Use of a recombinant modified vaccinia virus Ankara (MVA) for the treatment of type I hypersensitivity in a living animal including humans
US8268327B2 (en) 2007-04-27 2012-09-18 Bavarian Nordic A/S Immediate protection against pathogens via MVA
EP2303322A1 (en) * 2008-06-20 2011-04-06 Bavarian Nordic A/S Recombinant modified vaccinia virus measles vaccine
AU2011325459B2 (en) * 2010-11-05 2016-11-10 Bavarian Nordic A/S Modulation of immune responses by the poxviral K4 protein
JP6309274B2 (ja) * 2011-03-11 2018-04-11 ターンストーン・リミテッド・パートナーシップ ヒストンデアセチラーゼ阻害剤を含むワクチン接種法
EP2892549A1 (en) * 2012-09-04 2015-07-15 Bavarian Nordic A/S Methods and compositions for enhancing vaccine immune responses
KR102269491B1 (ko) 2013-03-15 2021-06-25 버베리안 노딕 에이/에스 단회 고용량의 mva가 신생아 및 영아에서 보호 면역 반응을 유도
WO2015077717A1 (en) 2013-11-25 2015-05-28 The Broad Institute Inc. Compositions and methods for diagnosing, evaluating and treating cancer by means of the dna methylation status
WO2015085147A1 (en) 2013-12-05 2015-06-11 The Broad Institute Inc. Polymorphic gene typing and somatic change detection using sequencing data
WO2015095811A2 (en) 2013-12-20 2015-06-25 The Board Institute Inc. Combination therapy with neoantigen vaccine
US10993997B2 (en) 2014-12-19 2021-05-04 The Broad Institute, Inc. Methods for profiling the t cell repertoire
US10975442B2 (en) 2014-12-19 2021-04-13 Massachusetts Institute Of Technology Molecular biomarkers for cancer immunotherapy
UA113442C2 (xx) 2015-01-27 2017-01-25 Ентеросорбент
BR112017024797A2 (pt) 2015-05-20 2018-08-07 The Broad Institute Inc. neoantígenos partilhados
TWI750122B (zh) 2015-06-09 2021-12-21 美商博德研究所有限公司 用於贅瘤疫苗之調配物及其製備方法
FR3042121A1 (fr) 2015-10-08 2017-04-14 Jean-Marc Limacher Composition anti-tumorale
MX2018010204A (es) 2016-02-25 2019-05-06 Memorial Sloan Kettering Cancer Center Virus de la vaccinia atenuada competentes para replicacion con la supresion de timidina quinasa con y sin la expresion del flt3l o gm-csf humanos para inmunoterapia del cancer.
BR112018016948A2 (pt) * 2016-02-25 2019-01-08 Memorial Sloan Kettering Cancer Center mva recombinante ou mva¿e3l que expressa flt3l humano e uso do mesmo como agente imunoterapêutico contra tumores sólidos
WO2017184590A1 (en) 2016-04-18 2017-10-26 The Broad Institute Inc. Improved hla epitope prediction
WO2018140391A1 (en) 2017-01-24 2018-08-02 The Broad Institute, Inc. Compositions and methods for detecting a mutant variant of a polynucleotide
WO2018209315A1 (en) 2017-05-12 2018-11-15 Memorial Sloan Kettering Cancer Center Vaccinia virus mutants useful for cancer immunotherapy
US20210382068A1 (en) 2018-10-02 2021-12-09 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Hla single allele lines
WO2020131586A2 (en) 2018-12-17 2020-06-25 The Broad Institute, Inc. Methods for identifying neoantigens
CA3126462A1 (en) 2019-01-10 2020-07-16 Janssen Biotech, Inc. Prostate neoantigens and their uses
JOP20220116A1 (ar) 2019-11-18 2023-01-30 Janssen Biotech Inc اللقاحات المستندة إلى الطافر calr وjak2 واستخداماتها
WO2023118508A1 (en) * 2021-12-23 2023-06-29 Bavarian Nordic A/S Recombinant mva viruses for intraperitoneal administration for treating cancer
WO2024015892A1 (en) 2022-07-13 2024-01-18 The Broad Institute, Inc. Hla-ii immunopeptidome methods and systems for antigen discovery

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3914408A (en) * 1973-10-12 1975-10-21 Univ Nebraska Vaccine for neonatal calf diarrhea
WO1998017283A1 (en) * 1996-10-25 1998-04-30 The Wistar Institute Of Anatomy & Biology Method of vaccinating infants against infections
WO2002042480A2 (en) * 2000-11-23 2002-05-30 Bavarian Nordic A/S Modified vaccinia ankara virus variant

Family Cites Families (39)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE2714665A1 (de) * 1977-04-01 1978-10-05 Mayr Anton Praeparat zur behandlung von herpes zoster und anderen herpes-infektionen, sowie verfahren zu seiner herstellung
US5338683A (en) * 1981-12-24 1994-08-16 Health Research Incorporated Vaccinia virus containing DNA sequences encoding herpesvirus glycoproteins
JPS6035647A (ja) † 1983-08-09 1985-02-23 Nippon Denso Co Ltd アンチスキツド制御装置
US6248333B1 (en) * 1990-04-04 2001-06-19 Health Research Inc. Isolated nucleic acid sequence of equine herpesvirus type 1 glycoprotein D (EHV-1 gD)
US5843456A (en) * 1991-03-07 1998-12-01 Virogenetics Corporation Alvac poxvirus-rabies compositions and combination compositions and uses
US5403582A (en) * 1993-01-21 1995-04-04 Nippon Zeon Co., Ltd. Vaccine comprising fowlpox virus recombinants expressing the envelope glycoprotein of an avian reticuloendotheliosis retrovirus
US5405772A (en) * 1993-06-18 1995-04-11 Amgen Inc. Medium for long-term proliferation and development of cells
US6190655B1 (en) * 1993-12-03 2001-02-20 Immunex Corporation Methods of using Flt-3 ligand for exogenous gene transfer
DE4405841C1 (de) * 1994-02-23 1995-01-05 Mayr Anton Prof Dr Med Vet Dr Multipotente Paramunitätsinducer auf der Basis von Kombinationen von Pockenviruskomponenten, Verfahren zu ihrer Herstellung und ihre Verwendung als Arzneimittel
WO1995030018A2 (en) * 1994-04-29 1995-11-09 Immuno Aktiengesellschaft Recombinant poxviruses with foreign polynucleotides in essential regions
US5756341A (en) * 1994-11-10 1998-05-26 Immuno Ag Method for controlling the infectivity of viruses
US5753489A (en) * 1994-11-10 1998-05-19 Immuno Ag Method for producing viruses and vaccines in serum-free culture
UA68327C2 (en) † 1995-07-04 2004-08-16 Gsf Forschungszentrum Fur Unwe A recombinant mva virus, an isolated eukaryotic cell, infected with recombinant mva virus, a method for production in vitro of polypeptides with use of said cell, a method for production in vitro of virus parts (variants), vaccine containing the recombinant mva virus, a method for immunization of animals
EA002020B1 (ru) 1996-02-21 2001-12-24 Джулианна Лисцивич Способ генерации противовирусного иммунного ответа у человека или животного
WO1998013500A2 (en) * 1996-09-24 1998-04-02 Bavarian Nordic Research Institute A/S Recombinant mva virus expressing dengue virus antigens, and the use thereof in vaccines
US6204250B1 (en) * 1996-11-22 2001-03-20 The Mount Sinai Medical Center Of The City Of New York Immunization of infants
GB9711957D0 (en) * 1997-06-09 1997-08-06 Isis Innovation Methods and reagents for vaccination
GB0023203D0 (en) * 2000-09-21 2000-11-01 Isis Innovation Vaccination method
WO1999007869A1 (en) 1997-08-05 1999-02-18 University Of Florida Live recombinant vaccine comprising inefficiently or non-replicating virus
GB2347932B (en) 1998-11-18 2003-05-07 Oxford Biomedica Ltd Vectors for the delivery of 5T4 antigen
GB2370572B (en) 1998-11-18 2003-05-07 Oxford Biomedica Ltd Use of a professional antigen presenting cell
IL150736A0 (en) * 2000-03-14 2003-02-12 Mayr Anton Altered strain of the modified vaccinia virus ankara (mva)
CA2409874A1 (en) 2000-05-24 2001-11-29 Merial Porcine reproductive and respiratory syndrome virus (prrsv) recombinant avipoxvirus vaccine
AU6845201A (en) * 2000-06-15 2001-12-24 Us Gov Health & Human Serv A recombinant non-replicating virus expressing GM-CSF and uses thereof to enhance immune responses
MXPA03000279A (es) * 2000-07-11 2004-04-05 Bayer Ag Uso de cepas del parapoxvirus ovis para la fabricacion de medicamentos antivirales y medicamentos contra el cancer.
DE10042598A1 (de) * 2000-08-30 2002-03-28 Gsf Forschungszentrum Umwelt Rekombinantes MVA mit der Fähigkeit zur Expression des HER-2/Neu-GENS
US7097842B2 (en) * 2000-11-23 2006-08-29 Bavarian Nordic A/S Modified vaccinia virus ankara for the vaccination of neonates
US7628980B2 (en) * 2000-11-23 2009-12-08 Bavarian Nordic A/S Modified vaccinia virus ankara for the vaccination of neonates
US7445924B2 (en) * 2000-11-23 2008-11-04 Bavarian Nordic A/S Modified Vaccinia Ankara virus variant and cultivation method
US20040091995A1 (en) * 2001-06-15 2004-05-13 Jeffrey Schlom Recombinant non-replicating virus expressing gm-csf and uses thereof to enhance immune responses
CN101397574A (zh) * 2001-12-04 2009-04-01 巴法里安诺迪克有限公司 黄病毒ns1亚单位疫苗
NZ547776A (en) * 2002-04-19 2009-08-28 Bavarian Nordic As Modified vaccinia virus ankara for protecting an animal against an antigen or self-protein
ES2256776T3 (es) * 2002-05-16 2006-07-16 Bavarian Nordic A/S Regiones intergenicas como sitios de insercion en el genoma del virus vaccinia ankara modificado (mva).
EP1664661A4 (en) * 2003-09-10 2008-02-13 Ra Brands Llc METHOD OF PRINTING COMPOSITE VENTILATED BAND
ES2476990T3 (es) * 2003-11-12 2014-07-15 The Government Of The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Sistema para tratar y prevenir cáncer de mama
US7618980B2 (en) * 2004-07-14 2009-11-17 Bristol-Myers Squibb Company Pyrrolo(oxo)quinolines as 5HT ligands
EP1835031A1 (en) 2006-03-14 2007-09-19 Paul-Ehrlich-Institut Bundesamt für Sera und Impfstoffe Use of a recombinant modified vaccinia virus Ankara (MVA) for the treatment of type I hypersensitivity in a living animal including humans
EP1925318A1 (en) 2006-11-20 2008-05-28 Paul-Ehrlich-Institut Recombinant modified vaccinia virus Ankara (MVA)-based vaccine for the avian flu
US8613936B2 (en) * 2009-03-13 2013-12-24 Bavarian Nordic A/S Replication deficient recombinant viruses expressing antigens regulated by transcriptional control elements comprising multiple elements

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3914408A (en) * 1973-10-12 1975-10-21 Univ Nebraska Vaccine for neonatal calf diarrhea
WO1998017283A1 (en) * 1996-10-25 1998-04-30 The Wistar Institute Of Anatomy & Biology Method of vaccinating infants against infections
WO2002042480A2 (en) * 2000-11-23 2002-05-30 Bavarian Nordic A/S Modified vaccinia ankara virus variant

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
DADAGLIO GILLES ET AL.: "Efficient in vivo priming of specific cytotoxic T cell responses by neonatal dendritic cells", JOURNAL OF IMMUNOLOGY, vol. 168, no. 5, 1 March 2002 (2002-03-01), pages 2219-2224, XP002254153, March 1, 2002, ISSN: 0022-1767, the whole document *
KOVARIK JIRI ET AL.: "Induction of adult-like antibody, Th1, and CTL responses to measles hemagglutinin by early life murine immunization with an attenuated vaccinia-derived NYVAC(K1L) viral vector", VIROLOGY, vol. 285, no. 1, 20 June 2001 (2001-06-20), pages 12-20, XP002254152, ISSN: 0042-6822, the whole document *
RIDGE JOHN PAUL ET AL.: "Neonatal tolerance revisited: Turning on newborn T cells with dendritic cells". SCIENCE (WASHINGTON D C), vol. 271, no. 5256, 1996, pages 1723-1726, XP000929609, ISSN: 0036-8075, the whole document *
ZHU Y.-D. ET AL.: "Evaluation of Recombinant Vaccinia Virus-Measles Vaccines in Infant Rhesus Macaques with Preexisting Measles Antibody", VIROLOGY, ACADEMIC PRESS, ORLANDO, US, vol. 276, no. 1, 10 October 2000 (2000-10-10), pages 202-213, XP004436221, ISSN: 0042-6822, page 211 - page 212; figure 4; table 3 *

Also Published As

Publication number Publication date
WO2003088994A3 (en) 2004-02-19
JP2005523318A (ja) 2005-08-04
UA85371C2 (ru) 2009-01-26
HK1078777A1 (en) 2006-03-24
JP4801880B2 (ja) 2011-10-26
JP2010120955A (ja) 2010-06-03
EP2204180A2 (en) 2010-07-07
NZ536592A (en) 2007-01-26
EP2204180A3 (en) 2010-12-22
US8163293B2 (en) 2012-04-24
CA2478009A1 (en) 2003-10-30
EP2204179A2 (en) 2010-07-07
AU2003239805B2 (en) 2009-09-10
ES2288609T5 (es) 2017-11-13
DK1420822T3 (da) 2007-10-08
DE60314823T3 (de) 2017-11-16
EA200401405A1 (ru) 2005-04-28
US20110135683A1 (en) 2011-06-09
EP1420822B1 (en) 2007-07-11
US7897156B2 (en) 2011-03-01
EP1420822A2 (en) 2004-05-26
EP1839672A3 (en) 2007-11-21
SG173216A1 (en) 2011-08-29
MXPA04010353A (es) 2005-03-07
IL163701A0 (en) 2005-12-18
KR20110017904A (ko) 2011-02-22
ATE366586T2 (de) 2007-08-15
PL371594A1 (en) 2005-06-27
EP2204179A3 (en) 2010-12-22
NO336348B1 (no) 2015-08-03
KR101028937B1 (ko) 2011-04-12
EP1420822B2 (en) 2017-07-05
AU2003239805A1 (en) 2003-11-03
CN100540051C (zh) 2009-09-16
EP1839672A2 (en) 2007-10-03
DE60314823T2 (de) 2008-03-13
NO20044941L (no) 2004-11-12
PL220781B1 (pl) 2016-01-29
JP2015061876A (ja) 2015-04-02
BR0309339A (pt) 2005-03-08
ES2288609T3 (es) 2008-01-16
CY1106848T1 (el) 2012-05-23
US20090104224A1 (en) 2009-04-23
CN1646158A (zh) 2005-07-27
US20120183574A1 (en) 2012-07-19
JP2011157400A (ja) 2011-08-18
DK1420822T4 (en) 2017-10-09
JP5690214B2 (ja) 2015-03-25
CA2478009C (en) 2019-03-26
KR20040111467A (ko) 2004-12-31
NZ547776A (en) 2009-08-28
WO2003088994A2 (en) 2003-10-30
PT1420822E (pt) 2007-09-04
DE60314823D1 (de) 2007-08-23

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP5690214B2 (ja) 新生仔予防接種用変異ワクシニアウイルスアンカラ
US7097842B2 (en) Modified vaccinia virus ankara for the vaccination of neonates
US8372622B2 (en) Modified vaccinia virus ankara for the vaccination of neonates
CN105101993A (zh) 单次高剂量的mva在新生儿和婴儿中诱导保护性免疫反应
Büttner et al. Important Zoonoses in Animals: Parapoxviruses (PPV) Local Infection and Occupational Zoonosis, Vector for Vaccinology
Gonzalez Studies of human rotavirus candidate non-replicating vaccines and innate immunity in a gnotobiotic pig model of human rotavirus disease

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s)

Designated state(s): AM AZ KZ KG MD TJ TM