EA010652B1 - Замещенные индолильные алкиламинопроизводные в качестве новых ингибиторов гистондеацетилазы - Google Patents

Замещенные индолильные алкиламинопроизводные в качестве новых ингибиторов гистондеацетилазы Download PDF

Info

Publication number
EA010652B1
EA010652B1 EA200700138A EA200700138A EA010652B1 EA 010652 B1 EA010652 B1 EA 010652B1 EA 200700138 A EA200700138 A EA 200700138A EA 200700138 A EA200700138 A EA 200700138A EA 010652 B1 EA010652 B1 EA 010652B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
alkyl
formula
compound
mol
compounds
Prior art date
Application number
EA200700138A
Other languages
English (en)
Other versions
EA200700138A1 (ru
Inventor
Марк Густаф Селин Вердонк
Патрик Рене Анжибо
Брюно Ру
Изабелль Ноэлль Констанс Пилатт
Петер Тен Холтэ
Янине Артс
Кристоф Ван Эмелен
Original Assignee
Янссен Фармацевтика Н.В.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=34979048&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=EA010652(B1) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Янссен Фармацевтика Н.В. filed Critical Янссен Фармацевтика Н.В.
Publication of EA200700138A1 publication Critical patent/EA200700138A1/ru
Publication of EA010652B1 publication Critical patent/EA010652B1/ru

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
    • C07D401/14—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing three or more hetero rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/44—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
    • A61K31/445—Non condensed piperidines, e.g. piperocaine
    • A61K31/4523—Non condensed piperidines, e.g. piperocaine containing further heterocyclic ring systems
    • A61K31/454—Non condensed piperidines, e.g. piperocaine containing further heterocyclic ring systems containing a five-membered ring with nitrogen as a ring hetero atom, e.g. pimozide, domperidone
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/44—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
    • A61K31/445—Non condensed piperidines, e.g. piperocaine
    • A61K31/4523—Non condensed piperidines, e.g. piperocaine containing further heterocyclic ring systems
    • A61K31/4545—Non condensed piperidines, e.g. piperocaine containing further heterocyclic ring systems containing a six-membered ring with nitrogen as a ring hetero atom, e.g. pipamperone, anabasine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
    • A61K31/506—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim not condensed and containing further heterocyclic rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/06—Antipsoriatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/04—Antineoplastic agents specific for metastasis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D405/00—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom
    • C07D405/14—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing three or more hetero rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D409/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D409/14—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms containing three or more hetero rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D491/00—Heterocyclic compounds containing in the condensed ring system both one or more rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms and one or more rings having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by groups C07D451/00 - C07D459/00, C07D463/00, C07D477/00 or C07D489/00
    • C07D491/02—Heterocyclic compounds containing in the condensed ring system both one or more rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms and one or more rings having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by groups C07D451/00 - C07D459/00, C07D463/00, C07D477/00 or C07D489/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D491/04—Ortho-condensed systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D491/00—Heterocyclic compounds containing in the condensed ring system both one or more rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms and one or more rings having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by groups C07D451/00 - C07D459/00, C07D463/00, C07D477/00 or C07D489/00
    • C07D491/02—Heterocyclic compounds containing in the condensed ring system both one or more rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms and one or more rings having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by groups C07D451/00 - C07D459/00, C07D463/00, C07D477/00 or C07D489/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D491/04—Ortho-condensed systems
    • C07D491/056—Ortho-condensed systems with two or more oxygen atoms as ring hetero atoms in the oxygen-containing ring

Abstract

Настоящее изобретение включает новые соединения формулы (I), где R, R, R, X и Y имеют определенные значения, которые должны ингибировать ферментативную активность гистондеацетилазы; их получение, композиции, содержащие их, и их использование в качестве лекарственного средства.

Description

Настоящее изобретение относится к соединениям, имеющим ферментативную активность ингибирования гистондеацетилазы (НОАС). Кроме того, оно относится к способам их получения, к композициям, содержащим их, а также к их применению как ίη νίΐτο, так и ίη νίνο для ингибирования НОАС, а также в качестве лекарственного средства, например в качестве лекарственного средства для ингибирования пролиферативных состояний, таких как рак и псориаз.
Нуклеарные гистоны известны в качестве интегральных и динамических компонентов механизма, ответственного за регуляцию транскрипции гена и другие процессы, кодируемые ДНК, такие как репликация, репарация, рекомбинация и разделение хромосом. Они являются субъектом посттрансляционных модификаций, включая ацетилирование, фосфорилирование, метилирование, убиквитинирование и АТФ-рибозилирование.
Гистондеацетилаза(ы), упоминаемые в описании как НОАС, представляют собой ферменты, которые катализируют удаление ацетильной модификации на лизиновых остатках белков, включая ядерные нуклеосомальные гистоны Н2А, Н2В, Н3 и Н4. Вместе с гистонацетилтрансферазой(ами), упоминаемой как НАТ, НОАС регулируют уровень ацетилирования гистонов. Баланс ацетилирования нуклеосомальных гистонов играет важную роль в транскрипции многих генов. Гипоацетилирование гистонов ассоциируется с конденсированной структурой хроматина, приводящей к подавлению транскрипции гена, в то время как ацетилированные гистоны ассоциируются с более открытой структурой хроматина и активированием транскрипции.
Описаны одиннадцать структурно родственных НОАС, и они попадают в два класса. Класс I НОАС состоит из НОАС 1, 2, 3, 8 и 11, в то время как класс II НОАС состоит из НОАС 4, 5, 6, 7, 9 и 10. Элементы третьего класса НОАС являются структурно несвязанными с НОАС класса I и класса II. НОАС класса Ι/ΙΙ работают посредством цинкзависимых механизмов, в то время как НОАС класса III являются ΝΑΟзависимыми.
В дополнение к гистонам, другие белки также представляют собой субстрат для ацетилирования в конкретных факторах транскрипции, таких как р53, ОАТА-1 и Е2Б; ядерных рецепторах, таких как рецептор глюкокортикоидов, тироидные рецепторы, рецепторы эстрогенов; и в белках, регулирующих клеточный цикл, таких как рРЬ. Ацетилирование белков связано со стабилизацией белка, такой как стабилизация р53, рекрутингом кофакторов и увеличением связывания ДНК. р53 представляет собой супрессор опухоли, который может индуцировать приостановку клеточного цикла или апоптоз в ответ на различные сигналы стресса, такие как повреждение ДНК. Главной мишенью для индуцированной р53 приостановки клеточного цикла, видимо, является ген р21. После его активирования посредством р53 р21 идентифицируется посредством его ассоциации с комплексами циклин/циклинзависимая киназа, приводящей к приостановке клеточного цикла в фазах как 01, так и 02, его положительной регуляции во время сенесценции и к его взаимодействию с ядерным антигеном пролиферирующих клеток.
Исследование ингибиторов НОАС показывает, что они играют важную роль в приостановке клеточного цикла, клеточной дифференциации, апоптозе и обращении трансформированных фенотипов.
Ингибитор трихостатин А (Т8А), например, вызывает приостановку клеточного цикла в фазах как 01, так и в 02, обращает трансформированный фенотип различных линий клеток и индуцирует дифференциацию клеток лейкемии Френда и других. Т8А (и субероиланилид гидроксамовой кислоты 8АНА), как сообщается, ингибируют рост клеток, индуцируют конечную дифференциацию и предотвращают образование опухолей у мышей (Είηηίη с1 а1., №1Шгс. 401: 188-193, 1999).
Трихостатин А также, как сообщается, является пригодным для лечения фиброза, например фиброза печени и цирроза печени (Оеетй с1 а1., заявка на европейский патент ЕР 0827742, опубликованная 11 марта 1998 года).
Фармакофор для ингибиторов НОАС состоит из домена связывания металла, который взаимодействует с цинксодержащим активным сайтом НОАС, домена линкера и поверхностного распознающего домена или кэпирующего участка, который взаимодействует с остатками на вспомогательном участке активного сайта.
Ингибиторы НОАС также, как сообщается, индуцируют экспрессию гена р21. Транскрипционное активирование гена р21 посредством этих ингибиторов промотируется модификацией хроматина после ацетилирования гистонов Н3 и Н4 в промоторной области р21. Это активирование р21 осуществляется способом, не зависимым от р53, и таким образом ингибиторы НОАС работают в клетках с мутировавшими генами р53, отличительным признаком многочисленных опухолей.
В дополнение к этому, ингибиторы НОАС могут иметь опосредованные активности, такие как аугментация иммунных реакций хозяина и ингибирование ангиогенеза опухолей, и таким образом могут подавлять рост первичных опухолей и блокировать метастазы (Ма1 е1 а1., Меб1сша1 Векеатсй К^1еА8, 25: 261-309).
С учетом всего изложенного выше, ингибиторы НОАС могут иметь большой потенциал при лечении пролиферативных заболеваний или состояний клеток, включая опухоли с мутировавшими генами р53.
Заявка на европейский патент ЕР1472216, опубликованная 14 августа 2003 года, описывает бициклические гидроксаматы в качестве ингибиторов гистондеацетилазы.
Заявки на европейский патент ЕР1485099, ЕР1485348, ЕР1485353, ЕР1485354, ЕР1485364,
- 1 010652
ЕР1485365, ЕР1485370, ЕР1485378, опубликованные 18 сентября 2003 года, среди прочего, описывают замещенные пиперазинилпиримидинилгидроксамовые кислоты в качестве ингибиторов гистондеацетилаз, кроме того, ЕР1485365 описывает К306465.
Заявка на европейский патент ЕР 1492534, опубликованная 9 октября 2003 года, описывает соединения карбаминовой кислоты, содержащие пиперазиновую связь, в качестве ингибиторов НЭАС.
Заявка на европейский патент ЕР 1495002, опубликованная 23 октября 2003 года, описывает замещенные пиперазинилфенилбензамидные соединения в качестве ингибиторов гистондеацетилазы.
Заявка на международный патент \УО04/009536. опубликованная 29 января 2004 года, описывает производные, содержащие алкильный линкер между арильной группой и гидроксаматом, в качестве ингибиторов гистондеацетилазы.
Заявка на европейский патент ЕР 1525199, опубликованная 12 февраля 2004 года, описывает (гетеро)арилалкенилзамещенные бициклические гидроксаматы в качестве ингибиторов гистондеацетилазы.
Заявка на международный патент ^004/063146, опубликованная 29 июля 2004 года, описывает производные Ν-гидроксибензамидных производных с противовоспалительной и противоопухолевой активностью.
Заявка на международный патент ^004/063169, опубликованная 29 июля 2004 года, описывает замещенные арилгидроксаматные производные в качестве ингибиторов гистондеацетилазы.
Заявка на международный патент ν004/072047, опубликованная 26 августа 2004 года, описывает индолы, бензимидазолы и нафтимидазолы в качестве ингибиторов гистондеацетилазы.
Заявка на международный патент ^004/082638, опубликованная 30 сентября 2004 года, описывает гидроксаматы, связанные с неароматическими гетероциклическими кольцевыми системами, в качестве ингибиторов гистондеацетилазы.
Заявка на международный патент ν004/092115, опубликованная на 28 октября 2004 года, описывает гидроксаматные производные в качестве ингибиторов гистондеацетилазы.
Заявка на международный патент ^005/028447, опубликованная 31 марта 2005 года, описывает бензимидазолы в качестве ингибиторов гистондеацетилазы.
Заявки на международный патент ^005/030704 и ^005/030705, опубликованные 7 апреля 2005 года, описывает бензамиды в качестве ингибиторов гистондеацетилазы.
Заявка на международный патент \У005/040101, опубликованная 6 мая 2005 года, описывает связанные с ацилмочевиной и связанные с сульфонилмочевиной гидроксаматы в качестве ингибиторов гистондеацетилазы.
Заявка на международный патент \У005/040161 также опубликованная 6 мая 2005 года, описывает биарилсвязанные гидроксаматы в качестве ингибиторов гистондеацетилазы.
Соединения по настоящему изобретению отличаются от соединений, известных из литературы, структурой, их фармакологической активностью и/или силой фармакологического действия.
Проблема, которая должна решаться, представляет собой создание ингибиторов гистондеацетилазы с высокой ферментативной и клеточной активностью, которые имеют повышенную биологическую доступность и/или сильное биологическое действие ίη νίνο.
Новые соединения по настоящему изобретению решают описанную выше проблему. Соединения по настоящему изобретению показывают превосходную ферментативную и клеточную активность ингибирования гистондеацетилазы. Они имеют высокую способность к активированию гена р21 как на клеточном уровне, так и на уровне ίη νίνο. Они имеют желаемый фармакокинетический профиль и низкое сродство к ферментам Р450, что понижает риск вредного взаимодействия лекарственных средств, также делая возможным более широкие пределы безопасности.
Преимущественными особенностями настоящих соединений являются метаболическая стабильность, растворимость и/или способность индуцирования р21. Более конкретно, соединения по настоящему изобретению имеют увеличенное время полураспада в гепатоцитах крыс, имеют повышенную растворимость/стабильность в водных растворах и/или имеют повышенные способности индуцирования промотора р21 ίη νίνο.
Настоящее изобретение относится к соединениям формулы (I)
к их Ν-оксидным формам, фармацевтически приемлемым аддитивным солям и их стереохимически изомерным формам, где каждый из η представляет собой целое число со значением 0, 1 или 2 и, когда η равно 0, тогда подразумевается прямая связь;
каждый из т представляет собой целое число со значением 1 или 2;
каждый из X независимо представляет собой N или СН;
- 2 010652 каждый из Υ независимо представляет собой О, 8 или ΝΚ4; где каждый из В4 представляет собой водород, С1_6алкил, С1_6алкилоксиС1_6алкил, С3_6циклоалкил, С3-6 циклоалкилметил, фенил С1_6алкил, -С(=О)-СНВ5В6 или -8(=О)2-^СН3)2; где каждый из В5 и В6 независимо представляет собой водород, амино, С1-6алкил или аминоС1-6алкил и, когда Υ представляет собой NВ4 и В2 находится в 7-положении индолила, тогда В2 и В4 вместе могут образовывать двухвалентный радикал
-(СН2)2- (а-1) или
-(СН2)з- (а-2);
В1 представляет собой водород, С1-6алкил, гидроксиС1-6алкил, С1-6алкилсульфонил, С1-6алкилкарбонил или моно- или ди(С1-6алкил)аминосульфонил;
В2 представляет собой водород, гидрокси, амино, галоген, С1-6алкил, циано, С2-6алкенил, полигалогенС1-6алкил, нитро, фенил, С1-6алкилкарбонил, гидроксикарбонил, С1-6алкилкарбониламино, С1-6алкилокси или моно- или ди(С1-6алкил)амино;
В3 представляет собой водород, С1-6алкил или С1-6алкилокси и, когда В2 и В3 представляют собой соседние атомы углерода, они могут образовывать двухвалентный радикал -О-СН2-О-.
Линии, нарисованные в бициклических кольцевых системах от заместителей, показывают, что связи могут присоединяться к любому из соответствующих кольцевых атомов бициклической кольцевой системы.
Термин ингибитор гистондеацетилазы или ингибитор деацетилазы гистона используется для идентификации соединения, которое способно взаимодействовать с деацетилазой гистона и ингибировать ее активность, более конкретно ее ферментативную активность. Ингибирование ферментативной активности гистондеацетилазы означает уменьшение способности гистондеацетилазы к удалению ацетильной группы из гистона. Предпочтительно такое ингибирование является специфичным, т.е. ингибитор гистондеацетилазы уменьшает способность гистондеацетилазы к удалению ацетильной группы с гистона при концентрации, которая ниже, чем концентрация ингибитора, которая требуется для получения какого-либо другого биологического эффекта, не связанного с данным.
Как используется в приведенных выше определениях и далее, галоген представляет собой фтор, хлор, бром и йод; С1-2алкил означает насыщенные углеводородные радикалы с прямой цепью, имеющие 1 или 2 атома углерода, такие, например, как метил или этил; С1-6алкил определяет С1-2алкил и насыщенные углеводородные радикалы с прямой и разветвленной цепью, имеющие от 3 до 6 атомов углерода, таких, например, как пропил, бутил, 1-метилэтил, 2-метилпропил, пентил, 2-метилбутил, гексил, 2-метилпентил и т.п.; и полигалогенС1-6алкил определяет С1-6алкил, содержащий три идентичных или различных галогеновых заместителя, например трифторметил; С2-6алкенил определяет углеводородные радикалы с прямой и разветвленной цепью, содержащие одну двойную связь и имеющие от 2 до 6 атомов углерода, такие, например, как этенил, 2-пропенил, 3-бутенил, 2-пентенил, 3-пентенил, 3-метил-2-бутенил и т.п.; С3-6циклоалкил включает циклические углеводородные группы, имеющие от 3 до 6 атомов углерода, такие как циклопропил, циклобутил, циклопентил, циклопентенил, циклогексил, циклогексил и т.п.
Фармацевтически приемлемые аддитивные соли охватывают фармацевтически приемлемые аддитивные соли кислот и фармацевтически приемлемые аддитивные соли оснований. Фармацевтически приемлемые аддитивные соли кислот, как рассмотрено выше, как предполагается, включают терапевтически активные нетоксичные формы аддитивных солей кислот, которые способны формировать соединения формулы (I). Соединения формулы (I), которые имеют основные свойства, могут преобразовываться в их фармацевтически приемлемые аддитивные соли кислот посредством обработки указанной основной формы соответствующей кислотой. Соответствующие кислоты включают, например, неорганические кислоты, такие как галогенводородные кислоты, например хлористо-водородная или бромистоводородная кислота; серная; азотная; фосфорная и т.п. кислоты; или органические кислоты, такие, например, как уксусная, трифторуксусная, пропановая, гидроксиуксусная, молочная, пировиноградная кислота, щавелевая, малоновая, янтарная (т.е. бутанкарбоновая кислота), малеиновая, фумаровая, яблочная, винная, лимонная, метансульфоновая, этансульфоновая, бензолсульфоновая, п-толуолсульфоновая, цикламовая, салициловая, п-аминосалициловая, памовая и т. п. кислоты.
Соединения формулы (I), которые имеют кислотные свойства, могут преобразовываться в их фармацевтически приемлемые аддитивные соли оснований посредством обработки указанной кислотной формы соответствующим органическим или неорганическим основанием. Соответствующие формы основных солей включают, например, соли аммония, соли щелочных и щелочно-земельных металлов, например соли лития, натрия, калия, магния, кальция и т.п., соли с органическими основаниями, например соли бензатина, Ν-метил-Э-глюкамина, гидрабамина, и соли с аминокислотами, такими, например, как аргинин, лизин и т. п.
Термин аддитивные соли кислот или оснований также включает гидраты и формы добавления растворителя, которые способны образовывать соединения формулы (I). Примеры таких форм представляют собой, например, гидраты, алкоголяты и т. п.
Термин стереохимические изомерные формы соединений формулы (I), как используется в описа
- 3 010652 нии, определяет все возможные соединения, состоящие из одних и тех же атомов, соединенных посредством одной и той же последовательности связей, но имеющие различные трехмерные структуры, которые не являются взаимозаменяемыми, которые могут иметь соединения формулы (I). Если только не рассматривается или не указывается иного, химическое обозначение соединения охватывает смесь всех возможных стереохимически изомерных форм, которые может иметь указанное соединение. Указанная смесь может содержать все диастереомеры и/или энантиомеры основной молекулярной структуры указанного соединения. Все стереохимические изомерные формы соединений формулы (I) как в чистой форме, так и в смеси друг с другом, как предполагается, находятся в объеме настоящего изобретения.
Ν-Оксидные формы соединений формулы (I), как предполагается, включают те соединения формулы (I), где 1 или несколько атомов азота окисляются до так называемого Ν-оксида, в частности те Ν-оксиды, где Ν-окисленными являются 1 или несколько атомов азота пиперидина, пиперазина или пиридазинила.
Некоторые из соединений формулы (I) могут также существовать в их таутомерных формах. Такие формы, хотя не указываются в явном виде в указанной выше формуле, как предполагается, являются включенными в объем настоящего изобретения.
Везде, где он используется далее, термин соединения формулы (I), как предполагается, включает также фармацевтически приемлемые аддитивные соли и все стереоизомерные формы.
Как используется в описании, термины гистондеацетилаза и НОАС, как предполагается, относятся к любому из семейства ферментов, которые удаляют ацетильные группы из ε-аминогрупп лизиновых остатков на Ν-окончании гистона. Если по контексту не указывается иного, термин гистон, как предполагается, относится к любому белку гистона, включая Н1, Н2А, Н2В, Н3, Н4 и Н5, из любых видов. Белки или генные продукты НЭЛС человека включают, но не ограничиваясь этим, НЭАС-1. НЭЛС2, НОАС-3, НОАС-4, ЮАС-5, ЮАС-6, НПАС-7, ЮАС-8, ЮАС-9, НПАС-10 и НПАС-11. Гистондеацетилаза также может быть получена из источника протозоала или грибков.
Первая группа представляющих интерес соединений состоит из тех соединений формулы (I), к которым применимо одно или несколько из следующих ограничений:
a) каждый из К4 представляет собой водород, С1-6алкил, С3-6циклоалкил, С3-6циклоалкилметил, -С(=О)-СНК5К6 или -§(=О)2-Ы(СН3)2;
b) К1 представляет собой водород, С1-6алкил, гидроксиС1-6алкил, С1-6алкилсулъфонил или моно- или ди(С1-6алкил)аминосульфонил или
c) К3 представляет собой водород.
Вторая группа представляющих интерес соединений состоит из таких соединений формулы (I), к которым применимо одно или несколько из следующих ограничений:
a) каждый из η представляет собой целое число со значением 0 или 1;
b) каждый из X независимо представляет собой Ν;
c) каждый из К4 представляет собой водород или С1-6алкил;
б) К1 представляет собой водород, С1-6алкил или гидроксиС1-6алкил или
е) К2 представляет собой водород, галоген, С1-6алкил или С1-6алкилокси.
Третья группа представляющих интерес соединений состоит из таких соединений формулы (I), к которым применимо одно или несколько из следующих ограничений:
a) каждый из η представляет собой целое число со значением 0 или 1;
b) каждый из К4 представляет собой водород, С1-6алкил, С1-6алкилоксиС1-6алкил, С3-6циклоалкил или фенилС1-6алкил;
c) К1 представляет собой водород, С1-6алкил, гидроксиС1-6алкил, С1-6алкилкарбонил или С1-6алкилсульфонил или
б) К2 представляет собой водород, галоген, С1-6алкил, циано, нитро или С1-6алкилокси.
Четвертая группа представляющих интерес соединений состоит из таких соединений формулы (I), к которым применимо одно или несколько из следующих ограничений:
a) каждый из η представляет собой целое число со значением 0 или 1;
b) каждый из т представляет собой целое число со значением 1;
c) каждый из К4 представляет собой водород, С1-6алкилоксиС1-6алкил, С3-6циклоалкил или фенилС1-6 алкил;
б) К1 представляет собой водород, гидроксиС1-6алкил, С1-6алкилкарбонил или С1-6алкилсульфонил;
е) К2 представляет собой водород, галоген, циано, нитро или С1-6алкилокси; или
1) К3 представляет собой С1-6алкилокси; или,
д) когда К2 и К3 представляют собой соседние атомы углерода, они могут образовывать двухвалентный радикал -О-СН2-О-.
Пятая группа представляющих интерес соединений состоит из таких соединений формулы (I), к которым применимо одно или несколько из следующих ограничений:
a) каждый из η представляет собой целое число со значением 1;
b) каждый из т представляет собой целое число со значением 1;
c) каждый из X независимо представляет собой Ν;
- 4 010652
ά) каждый из Υ независимо представляет собой ΝΚ4;
е) каждый из К4 представляет собой С1_6алкил;
ί) К1 представляет собой водород;
д) К2 представляет собой водород или галоген/ или
к) К3 представляет собой водород.
Группа предпочтительных соединений состоит из тех соединений формулы (I), где каждый из η представляет собой целое число со значением 0 или 1; каждый из К4 представляет собой водород, С1-6алкил, С1-6алкилоксиС1-6алкил, С3-6циклоалкил или фенилС1-6алкил; К1 представляет собой водород, С1-6алкил, гидроксиС1-6алкил, С1-6алкилкарбонил или С1-6алкилсульфонил и К2 представляет собой водород, галоген, С1-6алкил, циано, нитро, полигалогенС1-6алкил или С1-6алкилокси.
Группа более предпочтительных соединений состоит из тех соединений формулы (I), где каждый из η представляет собой целое число со значением 1; каждый из т представляет собой целое число со значением 1; каждый из X независимо представляет собой Ν; каждый из Υ независимо представляет собой ΝΒ4; каждый из К4 представляет собой С1-6алкил; К1 представляет собой водород; К2 представляет собой водород или галоген и К3 представляет собой водород.
Наиболее предпочтительные соединения представляют собой соединение № 1а, соединение № 30, соединение № 39 и соединение № 50.
«ЛАД Г
С2НГ3О2; соединение 1а С2НР3О2 (1:1); соединение 30
эМ б но^у-'Чх*
СгНГзОг (1:1); соединение 39 соединение 50
Соединения формул (I) и (II), их фармацевтически приемлемые соли и Ν-оксиды и их стереохимически изомерные формы могут быть получены обычным способом. Исходные материалы и некоторые промежуточные соединения представляют собой известные соединения и являются коммерчески доступными или могут быть получены в соответствии с обычными процедурами реакций, как, в целом, известно в данной области или как описано в заявках на европейский патент ЕР1485099, ЕР1485348, ЕР1485353, ЕР1485354, ЕР1485364, ЕР1485365, ЕР1485370 и ЕР1485378. Некоторые способы получения будут описаны далее более подробно. Другие способы получения конечных соединений формулы (I) описываются в примерах.
а) Гидроксамовые кислоты формулы (I) могут быть получены посредством взаимодействия промежуточных соединений формулы (II), где О представляет собой тетрагидропиранилоксиаминокарбонил, упоминаемых как промежуточные соединения формулы (П-а), с соответствующей кислотой, такой, например, как трифторуксусная кислота. Указанную реакцию осуществляют в соответствующем растворителе, таком, например, как метанол или дихлорметан.
Ь) Альтернативно, гидроксамовые кислоты формулы (I) могут быть получены посредством взаимодействия промежуточных соединений формулы (II), где О представляет собой С1-6алкилоксикарбонил, упоминаемых как промежуточные соединения формулы (П-с), с гидроксиламином в присутствии основания, такого, например, как гидроксид натрия. Указанную реакцию осуществляют в соответствующем растворителе, таком, например, как метанол.
- 5 010652
Соединения формулы (I) могут также преобразовываться в любое другое посредством известных в данной области реакций или преобразований, функциональных групп. Ряд таких преобразований уже описан выше. Другие примеры представляют собой гидролиз сложных эфиров карбоновых кислот до соответствующей карбоновой кислоты или спирта; гидролиз амидов до соответствующих карбоновых кислот или аминов; гидролиз нитрилов до соответствующих амидов; аминогруппы на имидазоле или фениле могут заменяться водородом посредством известных в данной области реакций диазотирования и последующей замены диазогруппы водородом; спирты могут преобразовываться в сложные эфиры и простые эфиры; первичные амины могут преобразовываться во вторичные или третичные амины; двойные связи могут гидрироваться до соответствующей одинарной связи; йодорадикал на фенильной группе может преобразовываться в сложноэфирную группу посредством включения монооксида углерода в присутствии соответствующего палладиевого катализатора.
Настоящее изобретение также относится к промежуточным соединениям формулы (II)
их Ν-оксидным формам, фармацевтически приемлемым аддитивным солям и стереохимически изомерным формам, где каждый из η представляет собой целое число со значением 0, 1 или 2 и, когда η равно 0, тогда под разумевается прямая связь;
каждый из т представляет собой целое число со значением 1 или 2;
каждый из X независимо представляет собой N или СН;
каждый из Υ независимо представляет собой О, 8 или ΝΚ4; где каждый из К4 представляет собой водород, С1-6алкил, С1-6алкилоксиС1-6алкил, С3-6циклоалкил, С36циклоалкилметил, фенилС1-6алкил, -С(=О)-СНК5К6 или -8(=Θ)2-Ν(ί.Ή3)2; где каждый из К5 и К6 независимо представляет собой водород, амино, С1-6алкил или аминоС1-6алкил и, когда Υ представляет собой ΝΚ4 и К2 находится в 7-положении индолила, тогда К2 и К4 вместе могут образовывать двухвалентный радикал
-(СН2)2- (а-1) или
-(СН2)3- (а-2);
К1 представляет собой водород, С1-6алкил, гидроксиС1-6алкил, С1-6алкилсульфонил, С1-6алкилкарбонил или моно- или ди(С1-6алкил)аминосульфонил;
К2 представляет собой водород, гидрокси, амино, галоген, С1-6алкил, циано, С2-6алкенил, полигалогенС1-6алкил, нитро, фенил, С1-6алкилкарбонил, гидроксикарбонил, С1-6алкилкарбониламино, С1-6алкилокси или моно- или ди(С1-6алкил)амино;
К3 представляет собой водород, С1-6алкил или С1-6алкилокси;
когда К2 и К3 представляют собой соседние атомы углерода, они могут образовывать двухвалентный радикал -О-СН2-О и представляет собой С1-2алкилоксикарбонил, гидроксикарбонил или тетрагидропиранилоксиаминокарбонил.
Группы представляющих интерес предпочтительных, более предпочтительных и наиболее предпочтительных соединений могут определяться для соединений формулы (II) в соответствии с группами, определенными для соединений формулы (I).
а) Промежуточные соединения формулы (П-а) могут быть получены посредством взаимодействия промежуточного соединения формулы (III) с промежуточным соединением формулы (II), где О представляет собой гидроксикарбонил, упоминаемых в описании как промежуточные соединения формулы (П-Ь), в присутствии соответствующих реагентов, таких как №-(этилкарбонимидоил)-^№диметил-1,3пропандиамин, моногидрохлорид (БОС) и 1-гидрокси-1Н-бензотриазол (НОВТ). Реакция может осуще ствляться в присутствии основания, такого как триэтиламин, в пригодном для использования растворителе, таком как смесь дихлорметана и тетрагидрофурана.
- 6 010652
Ь) Промежуточные соединения формулы (ΙΙ-а) могут также быть получены посредством взаимодействия промежуточного соединения формулы (VI) с соответствующим карбоксальдегидом формулы (V), где ΐ представляет собой целое число со значением 0 или 1 и, когда ΐ равно 0, тогда подразумевается прямая связь, в присутствии соответствующего реагента, такого как боргидрид натрия, в пригодном для использования растворителе, таком как дихлорэтан или метанол.
с) Промежуточные соединения формулы (ΙΙ-Ь) могут быть получены посредством взаимодействия промежуточных соединений формулы (ΙΙ), где О представляет собой метил- или этилоксикарбонил(С1галкил), упоминаемых в описании как промежуточные соединения формулы (ΙΙ-с), с соответствующим кислотным раствором, например хлористо-водородной кислоты, или основным раствором, например бромистого водорода или гидроксида натрия, в пригодном для использования растворителе, например спирте, таком как этанол или пропанол.
б) Промежуточные соединения формулы (ΙΙ-с) могут быть получены посредством взаимодействия сложного этилового эфира карбоновой кислоты формулы (ГУ) с соответствующим карбоксальдегидом формулы (V) в присутствии соответствующего реагента, такого как боргидрид натрия, например натрийтетрагидроборат, в пригодном для использования растворителе, таком как спирт, например метанол.
К2 3
1'
СН№—ΝΗ +
е) Идентичным способом промежуточные соединения формулы (ΙΙ-с) могут быть получены посредством взаимодействия промежуточного соединения формулы (XIV) с соответствующим промежуточным соединением формулы (XV) в присутствии соответствующего реагента, такого как боргидрид натрия, например натрийтетрагидроборат, в пригодном для использования растворителе, таком как спирт, например метанол.
- 7 010652
ί) Промежуточные соединения формулы (ΙΙ-с) могут также быть получены посредством взаимодействия промежуточного соединения формулы (X) с промежуточным соединением формулы (XI), где представляет собой соответствующую уходящую группу, такую, например, как галоген, например фтор, хлор, бром или йод, или сульфонилоксирадикал, такой как метилсульфонилокси, 4-метилфенилсульфонилокси и т.п. Реакция может осуществляться в растворителе, инертном для реакции, таком, например, как спирт, например метанол, этанол, 2-метоксиэтанол, пропанол, бутанол и т.п.; простой эфир, например 4,4-диоксан, 1,1'-оксибиспропан и т.п.; кетон, например 4-метил-2-пентанон; или Ν,Ν-диметилформамид, нитробензол, ацетонитрил и т.п. Добавление соответствующего основания, такого, например, как карбонат или бикарбонат щелочного или щелочно-земельного металла, например триэтиламина или карбоната натрия, может использоваться для захвата кислоты, которая высвобождается в ходе реакции. Малое количество соответствующего йодида металла, например йодида натрия или калия, может быть добавляться для ускорения реакции. Перемешивание может увеличить скорость реакции. Реакцию может быть удобным осуществлять при температуре, находящейся в пределах между комнатной температурой и температурой кипения с обратным холодильником реакционной смеси, и, если это желательно, реакция может осуществляться при повышенном давлении.
д) Идентичным способом промежуточные соединения формулы (ΙΙ-с) могут быть получены посредством взаимодействия промежуточного соединения формулы (XII) с промежуточным соединением формулы (XIII), где представляет собой соответствующую уходящую группу, как описано выше.
Промежуточные соединения формулы (VI) могут быть получены посредством взаимодействия промежуточного соединения формулы (VII) с пиперидином в пригодном для использования растворителе, например дихлорметане.
- 8 010652
Промежуточные соединения формулы (VII) могут быть получены посредством взаимодействия промежуточного соединения формулы (VIII) с промежуточным соединением формулы (III) в присутствии соответствующих реагентов, таких как моногидрохлорид Ы'-(этилкарбонимидоил)-Н,М-диметил-1,3пропандиамина, (ЕЭС) и 1-гидрокси-1Н-бензотриазол (НОВТ). Реакция может осуществляться в присутствии основания, такого как триэтиламин, в пригодном для использования растворителе, таком как смесь дихлорметана и тетрагидрофурана.
Промежуточные соединения формулы (VIII) могут быть получены посредством взаимодействия промежуточного соединения формулы (IX) с промежуточным соединением формулы (IV), где Я1 представляет собой водород, упоминаемых в описании как промежуточные соединения формулы (Ш-а), в присутствии гидроксида натрия, в пригодном для использования растворителе, таком как тетрагидрофуран, с последующей нейтрализацией хлористо-водородной кислотой и с добавлением карбоната натрия.
Соединения формулы (I) и некоторые из промежуточных соединений могут иметь в своей структуре по меньшей мере один стереогенный центр. Этот стереогенный центр может присутствовать в Я- или 8-конфигурациях.
Соединения формулы (I), как получают в описанных выше способах, как правило, представляют собой рацемические смеси энантиомеров, которые могут отделяться друг от друга, следуя известным в данной области процедурам разрешения. Рацемические соединения формулы (I) могут преобразовываться в соответствующие формы диастереомерных солей посредством взаимодействия с соответствующей хиральной кислотой. Указанные формы диастереомерных солей впоследствии разделяют, например, посредством селективной или фракционной кристаллизации, и энантиомеры высвобождаются из них посредством щелочи. Альтернативный способ разделения энантиомерных форм соединений формулы (I) включают жидкостную хроматографию с использованием хиральной стационарной фазы. Указанные чистые стереохимические изомерные формы могут также быть получены из соответствующих чистых стереохимических изомерных форм соответствующих исходных материалов при условии, что реакция осуществляется стереоспецифично. Предпочтительно, если желательным является конкретный стереоизомер, указанное соединение может синтезироваться посредством стереоспецифичных способов получения. Эти способы будут преимущественно использоваться энантиомерно чистые исходные материалы.
Соединения формулы (I), их фармацевтически приемлемые аддитивные соли кислот и их стереоизомерные формы имеют ценные фармакологические свойства, заключающиеся в том, что они имеют эффект ингибирования гистондеацетилазы (НОАС).
Настоящее изобретение предусматривает способ ингибирования аномального роста клеток, включая трансформированные клетки, посредством введения эффективного количества соединения по настоящему изобретению. Аномальный рост клеток относится к росту клеток, не зависимому от нормальных регуляторных механизмов (например, к потере контактного ингибирования). Это включает ингибирование роста опухоли, как непосредственно, вызывая приостановку роста, конечную дифференциацию и/или апоптоз раковых клеток, так и опосредованно, посредством ингибирования неоваскуляризации опухолей.
- 9 010652
Настоящее изобретение также предусматривает способ ингибирования роста опухоли посредством введения эффективного количества соединения по настоящему изобретению субъекту, например млекопитающему (а более конкретно, человеку), нуждающемуся в таком лечении. В частности, настоящее изобретение предусматривает способ ингибирования роста опухолей посредством введения эффективного количества соединений по настоящему изобретению. Примеры опухолей, которые могут ингибироваться, но не ограничиваясь этим, включают рак легких (например, аденокарциному, и включая немелкоклеточный рак легких), раковые заболевания поджелудочной железы (например, карциному поджелудочной железы, такую, например, как экзокринная карцинома поджелудочной железы), раковые заболевания толстой кишки (например, карциномы толстой и прямой кишки, такие, например, как аденокарцинома толстой кишки и аденома толстой кишки), рак простаты, включая запущенное заболевание, гематопоэтические опухоли лимфоидной ткани слизистой оболочки (например, острую лимфоцитную лейкемию, лимфому В-клетки, лимфому ВигкШ), миелоидные лейкемии (например, острую миелогенную лейкемию (ЛМЬ)), фолликулярный рак щитовидной железы, миелодиспластический синдром (МИ8), опухоли мезенхимального происхождения (например, фибросаркомы и рабдомиосаркомы), меланомы, тератокарциномы, нейробластомы, глиомы, злокачественные опухоли кожи (например, кератоакантомы), карциному груди (например, запущенный рак груди), карциному почек, карциному яичников, карциному мочевого пузыря и эпидермальную карциному.
Соединение в соответствии с настоящим изобретением может использоваться для других терапевтических целей, например:
a) сенсибилизации опухолей для радиационной терапии посредством введения соединения по настоящему изобретению до, во время или после облучения опухоли для лечения рака;
b) лечения артропатий и остеопатологических состояний, таких как ревматоидный артрит, остеоартрит, ювенильный артрит, подагра, полиартрит, псориатический артрит, анкилозный спондилит и системная красная волчанка;
c) ингибирования пролиферации клеток гладких мышц, включая пролиферативные расстройства сосудов, атеросклероз и рестеноз;
ά) лечения воспалительных состояний и состояний кожи, таких как язвенный колит, болезнь Крона, аллергический ринит, заболевание отторжения трансплантатов, конъюнктивит, астма, ОРДС, болезнь Бехчета, отторжение трансплантов, уртикария (аллергическая сыпь), аллергический дерматит, гнездная плешивость, склеродерма, экзантема, экзема, дерматомиозит, прыщи, диабет, системная красная волчанка, болезнь Кавасаки, множественный склероз, эмфизема, фиброз мочевого пузыря и хронический бронхит;
е) лечения эндометриоза, фиброидов матки, дисфункционального маточного кровотечения и эндометриальной гиперплазии;
ί) лечения васкуляризации глаз, включая васкулопатию, воздействующую на ретинальные и хороидальные сосуды;
д) лечения сердечной дисфункции;
к) ингибирования иммунодепрессивных состояний, такого как лечение инфекции ВИЧ;
ί) лечения почечной дисфункции;
_)) подавления эндокринных расстройств;
k) ингибирования дисфункции глюконеогенеза;
l) лечения нейропатологии, например болезни Паркинсона, или нейропатологии, которая приводит к когнитивному расстройству, например болезни Альцгеймера или нейрональным заболеваниям, связанным с полиглютамином;
т) лечения психиатрических расстройств, например шизофрении, биполярного расстройства, депрессии, беспокойства и психоза;
η) ингибирования нервномышечной патологии, например амилотропного латерального склероза;
ο) лечения спинальной мышечной атрофии;
р) лечения других патологических состояний, поддающихся лечению посредством усиления экспрессии гена;
с.|) усиления генной терапии;
г) ингибирования адипогенеза;
§) лечения паразитоза, такого как малярия.
Следовательно, настоящее изобретение описывает соединения формулы (I) для использования в качестве лекарства, а также использования этих соединений формулы (I) для производства медикамента для лечения одного или нескольких из указанных выше состояний.
Соединения формулы (I), их фармацевтически приемлемые аддитивные соли кислот и стереоизомерные формы могут иметь ценные диагностические свойства, заключающиеся в том, что они могут использоваться для детектирования или идентификации НИАС в биологическом образце, включая детектирование или измерение образования комплекса между меченым соединением и НИАС.
Способы детектирования или идентификации могут использовать соединения, которые метятся метящими агентами, такими как радиоактивные изотопы, ферменты, флуоресцентные вещества, светящиеся вещества и т.п. Примеры радиоактивных изотопов включают 125ф 'Ή, 3Н и 14С. Ферменты обычно де
- 10 010652 лаются детектируемыми посредством конъюгирования с соответствующим субстратом, который, в свою очередь, катализирует детектируемую реакцию. Их примеры включают, например, бета-галактозидазу, бета-глюкозидазу, щелочную фосфатазу, пероксидазу и малатдегидрогеназу, предпочтительно пероксидазу хрена. Светящиеся вещества включают, например, люминол, производные люминола, люциферин, аэкворин и люциферазу.
Биологические образцы могут определяться как телесные ткани или телесные жидкости. Примеры телесных жидкостей представляют себой спинно-мозговую жидкость, кровь, плазму, сыворотку, мочу, мокроту, слюну и т. п.
С учетом их полезных фармакологических свойств, рассматриваемые соединения могут приготавливаться в различных фармацевтических формах для целей введения.
Для получения фармацевтических композиций по настоящему изобретению эффективное количество конкретного соединения в форме аддитивной соли основания или кислоты в качестве активного ингредиента объединяется в тесную смесь с фармацевтически приемлемым носителем, этот носитель может принимать разнообразные формы в зависимости от формы препарата, желаемой для введения. Эти фармацевтические композиции являются желательными в виде стандартной лекарственной формы, пригодной, предпочтительно, для введения перорально, ректально, подкожно или посредством парентеральной инъекции. Например, при получении композиций в форме пероральной дозировки может использоваться любая из обычных фармацевтических сред, такая, например, как вода, гликоли, масла, спирты и т.п, в случае пероральных жидких препаратов, таких как суспензии, сиропы, эликсиры и растворы; или твердые носители, такие как крахмалы, сахара, каолин, смазывающие вещества, связующие материалы, разрыхляющие агенты и т.п, в случае порошка, пилюль, капсул и таблеток.
Благодаря простоте их введения таблетки и капсулы представляют собой наиболее преимущественную форму пероральной единичной дозировки, в этом случае, очевидно, используются твердые фармацевтические носители. Для парентеральных композиций носитель будет обычно содержать стерильную воду по меньшей мере в большей части, хотя могут включаться и другие ингредиенты, например, для увеличения растворимости. Например, могут приготавливаться растворы для инъекций, в которых носитель содержит солевой раствор, раствор глюкозы или смесь солевого раствора и раствора глюкозы. Также могут приготавливаться суспензии для инъекций, в этом случае могут использоваться соответствующие жидкие носители, суспендирующие агенты и т.п. В композициях, пригодных для подкожного введения, носитель необязательно содержит агент для увеличения проницаемости и/или соответствующий смачивающий агент, необязательно объединенный с соответствующими добавками любой природы в малых пропорциях, эти добавки не вызывают значительного отрицательного воздействия на кожу. Указанные добавки могут облегчить введение в кожу и/или могут быть полезны для получения желаемых композиций. Эти композиции могут вводиться различными путями, например как трансдермальный пластырь, как наклейка или как мазь.
Особенно преимущественным является приготовление указанных фармацевтических композиций в стандартной лекарственной форме для простоты введения и однородности дозировки. Стандартная лекарственная форма, как используется в описании и формуле изобретения, относится к физически отдельным дозированным формам, пригодным в качестве отдельных доз, каждая дозированная форма содержит заданное количество активного ингредиента, рассчитанное для оказания желаемого терапевтического воздействия, в ассоциации с требуемым фармацевтическим носителем. Примеры таких стандартных лекарственных форм представляют собой таблетки (включая разламываемые таблетки или таблетки с покрытием), капсулы, пилюли, пакетики с порошком, пластинки, растворы или суспензии для инъекций, дозы для заполнения чайной ложки, дозы для заполнения столовой ложки и т.п. и их разделенные наборы.
Специалист в данной области может легко определить эффективное количество по результатам исследований, представленных далее. Как правило, предполагается, что терапевтически эффективное количество должно составлять от 0,005 до 100 мг/кг массы тела, и в частности от 0,005 до 10 мг/кг массы тела. Может быть соответствующим введение необходимой дозы в виде 2, 3, 4 или более субдоз через соответствующие интервалы в течение дня. Указанные субдозы могут приготавливаться в виде стандартных лекарственных форм, например, содержащих от 0,5 до 500 мг, и в частности от 10 до 500 мг, активного ингредиента на стандартную лекарственную форму.
В качестве другого аспекта настоящего изобретения рассматривается сочетание ингибитора НИАС с другим противораковым агентом, в частности, для использования в качестве лекарственного средства, более конкретно, при лечении рака или связанных с ним заболеваний.
Для лечения указанных выше состояний соединения по настоящему изобретению преимущественно могут использоваться в сочетании с одним или несколькими другими лекарственными агентами, более конкретно с другими противораковыми агентами. Примеры противораковых агентов представляют собой координационные соединения платины, например цисплатин, карбоплатин или оксалиплатин; таксановые соединения, например паклитаксель или доцетаксель;
ингибиторы топоизомеразы I, такие как соединения камптотецина, например иринотекан или топотекан;
ингибиторы топоизомеразы II, такие как противоопухолевые подофиллотоксиновые производные,
- 11 010652 например этопозид или тенипозид;
противоопухолевые алкалоиды винка, например винбластин, винкристин или винорельбин;
противоопухолевые нуклеозидные производные, например 5-флуороурацил, гемцитабин или капецитабин; алкилирующие агенты, такие как азотная горчица или нитрозомочевина, например циклофосфамид, хлорамбуцил, кармустин или ломустин;
противоопухолевые антрациклиновые производные, например даунорубицин, доксорубицин, идарубицин или митоксантрон;
антитела НЕК2, например трастузумаб;
антагонисты рецепторов эстрогенов или селективные модуляторы рецепторов эстрогенов, например тамоксифен, торемифен, дролоксифен, фаслодекс или ралоксифен;
ингибиторы ароматазы, такие как эксеместан, анастрозол, летразол и ворозол;
дифференцирующие агенты, такие как ретиноиды, витамин Ό и агенты, блокирующие метаболизм ретиноевой кислоты (ΚΑΜΒΆ), например аккутан;
ингибиторы метилтрансферазы ДНК, например азацитидин;
ингибиторы киназы, например флавоперидол, иматиниб мезилат или гефитиниб;
ингибиторы фарнезилтрансферазы;
другие ингибиторы НЭАС;
ингибиторы убиквитин-протеасомного пути, например Vе1сабе; или
Уопбебк.
Термин координационное соединение платины используется в описании для обозначения любого координационного соединения платины, ингибирующего рост клеток опухоли, которое поставляет платину в форме иона.
Термин таксановые соединения указывает класс соединений, имеющих таксановую кольцевую систему, и получаемый из экстрактов от определенных видов тисовых деревьев (Тахик) или связанный с ними.
Термин ингибиторы топизомеразы используется для указания ферментов, которые способны изменять топологию ДНК в эукариотических клетках. Они являются критичными для важных клеточных функций и пролиферации клеток. Имеются два класса топоизомераз в эукариотических клетках, а именно тип Ι и тип ΙΙ. Топоизомераза Ι представляет собой мономерный фермент с молекулярной массой приблизительно 100000. Фермент связывается с ДНК и производит временный разрыв одной цепочки, развивает двойную спираль (или позволяет ей развиться), впоследствии соединяет разрыв перед диссоциацией с цепочки ДНК. Топизомераза ΙΙ имеет сходный механизм действия, который включает индуцирование разрывов цепочки ДНК или образование свободных радикалов.
Термин соединения камптотецина используется для указания соединений, которые получаются из исходного соединения камптотецина, который представляет собой водонерастворимый алкалоид, полученный из аралии китайской СатрЮФсет аеиш1па1а и фикуса №111аробу1ек Гоейба, или связаны с ним.
Термин соединения подофиллотоксина используется для указания соединений, которые связаны с или получаются из исходного подофиллотоксина, который экстрагируют из растения мандрагора (Мапбгаке).
Термин противоопухолевые алкалоиды винка используется для указания соединений, которые связаны или получаются из экстрактов растения барвинок ^шса гокеа).
Термин алкилирующие агенты охватывает группу разнообразных соединений, которые имеют общий признак - способность к введению, при физиологических условиях, алкильных групп в биологически важные макромолекулы, такие как ДНК. Вместе с большинством более важных агентов, таких как азотистый иприт и нитрозомочевины, активные алкилирующие остатки генерируются ίη νίνο после сложных деградационных реакций, некоторые из которых являются ферментативными. Наиболее важными фармакологическими действиями алкилирующих агентов являются те, которые нарушают фундаментальные механизмы, связанные с пролиферацией клеток, при конкретном синтезе ДНК и делении клеток. Способность алкилирующих агентов вмешиваться в функционирование и целостность ДНК в быстро пролиферирующих тканях обеспечивает основу для их терапевтических применений и для многих их токсических свойств.
Термин противоопухолевые производные антрациклина включает антибиотики, полученные от грибков 8йер. реибсик ν;π. Саекшк, и их производные, отличающиеся тем, что они имеют тетрациклиновую кольцевую структуру с необычным сахаром, даунозамином, присоединенным посредством гликозидной связи.
Амплификация белка рецептора 2 фактора эпидермального роста человека (НЕК2) в первичных карциномах груди, как показано, коррелирует с плохим клиническим прогнозом для определенных пациентов. Трастузумаб представляет собой каппа-антитело к очеловеченному моноклональному Ι§Ο1, полученному с помощью рекомбинантной ДНК высокой очистки, которое связывается с высоким сродством и специфичностью с внеклеточным доменом рецептора НЕК2.
Многие виды рака груди имеют рецепторы эстрогенов, и рост этих опухолей может стимулироваться эстрогенами. Термины антагонисты рецепторов эстрогенов и селективные модуляторы рецепторов эстрогенов используются для указания конкурентных ингибиторов связывания эстрадиола с рецептором эстрогенов (ЕК). Селективные модуляторы рецепторов эстрогенов, когда связываются с ЕК, вызывают изменение трехмерной формы рецептора, модулируя его связывание с эстрогенчувствительным элементом (ЕКЕ) на ДНК.
- 12 010652
У женщин после менопаузы главный источник циркулирующего эстрогена возникает из-за преобразования андрогенов надпочечников и яичников (андростендиона и тестостерона) в эндогены (эстрон и эстрадиол) посредством фермента ароматазы в периферийных тканях. Устранение влияния эстрогена посредством ингибирования или инактивирования ароматазы представляет собой эффективное и селективное лечение для некоторых пациентов после менопаузы с гормонозависимым раком груди.
Термин антиэстрогенный агент используется в описании не только для антагонистов рецепторов эстрогенов и селективных модуляторов рецепторов эстрогенов, но также и для ингибиторов ароматазы, как обсуждается выше.
Термин дифференцирующие агенты охватывает соединения, которые могут различными путями ингибировать пролиферацию клеток и индуцировать дифференциацию. Витамин Ό и ретиноиды, как известно, играют главную роль в регуляции роста и дифференциации разнообразных нормальных и злокачественных типов клеток. Агенты, блокирующие метаболизм ретиноевой кислоты (КАМВА), увеличивают уровни эндогенных ретиноевых кислот посредством ингибирования катаболизма ретиноевых кислот, опосредуемого цитохромом Р450.
Изменения метилирования ДНК находятся среди наиболее распространенных аномалий неоплазии человека.
Гиперметилирование в промоторах избранных генов обычно связывается с инактивированием рассматриваемых генов. Термин ингибиторы метилтрансферазы ДНК используется для указания соединений, которые действуют посредством фармакологического ингибирования метилтрансферазы ДНК и реактивирования экспрессии гена, подавляющего опухоль.
Термин ингибиторы киназы включает мощные ингибиторы киназ, которые вовлечены в развитие клеточного цикла и программируемую гибель клетки (апоптоз).
Термин ингибиторы фарнезилтрансферазы используются для указания соединений, которые разработаны для предотвращения фарнезилирования Как и других внутриклеточных белков. Они, как показано, имеют воздействие на пролиферацию и выживание злокачественных клеток.
Термин другие ингибиторы НИАС включает, но не ограничиваясь этим, карбоксилаты, например бутират, коричную кислоту, 4-фенилбутират или вальпроиновую кислоту;
гидроксамовые кислоты, например субероиланилид гидроксамовую кислоту (8АНА), содержащие пиперазиновые аналоги 8АНА, биарилгидроксамат А-161906 и его карбозилэфирные, тетрагидропиридиновые и тетралоновые аналоги, бициклические арил-И-гидроксикарбоксамиды, пироксамид, СО-1521, ΡΧΌ-101, сульфонамидгидроксамовую кислоту, ЬАр-824, ЬВН-589, трихостатин А (Т8А), оксамфлатин, скриптаид, родственные скриптаиду трициклические молекулы, бис-гидроксамат м-карбоксикоричной кислоты (СВНА), СВНА-подобные гидроксамовые кислоты, трапоксиновый аналог гидроксамовой кислоты, К306465 и родственные бензоил- и гетероарилгидроксамовые кислоты, аминосубераты и малонилдиамиды;
циклические тетрапептиды, например трапоксин, апидицин, депсипептид, соединения, родственные спирухостатину, КебРК-228, сульфгидрилсодержащие циклические тетрапептиды (8СОР), циклические тетрапептиды, содержащие гидроксамовые кислоты, (СНАР), ΤΛΝ-1748 и азумамиды;
бензамиды, например М8-275 или С.Ч-994; или депудецин.
Термин ингибиторы убиквитин-протеасомного пути используется для идентификации соединений, которые ингибируют целевое разрушение клеточных белков в протеасоме, включая регуляторные белки клеточного цикла.
Для лечения рака соединения в соответствии с настоящим изобретением могут вводиться пациенту, как описано выше, в сочетании с облучением. Облучение означает ионизирующее излучение, и в частности гамма-излучение, в частности испускаемое линейными ускорителями или радионуклидами, которые в настоящее время находятся в повсеместном использовании. Облучение опухоли радионуклидами может быть наружным или внутренним.
Настоящее изобретение также относится к комбинации в соответствии с настоящим изобретением из противоракового агента и ингибитора НИАС в соответствии с настоящим изобретением.
Настоящее изобретение также относится к комбинации в соответствии с настоящим изобретением для использования в лекарственной терапии, например для ингибирования роста опухолевых клеток.
Настоящее изобретение также относится к комбинациям в соответствии с настоящим изобретением для ингибирования роста опухолевых клеток.
Настоящее изобретение также относится к способу ингибирования роста опухолевых клеток у субъекта-человека, который включает введение субъекту эффективного количества комбинации в соответствии с настоящим изобретением.
Настоящее изобретение, кроме того, предусматривает способ ингибирования аномального роста клеток, включая трансформированные клетки, посредством введения эффективного количества комбинации в соответствии с настоящим изобретением.
Другой лекарственный агент и ингибитор НИАС может вводиться одновременно (например, в виде отдельных или объединенных композиций) или последовательно, в любом порядке. В последнем случае два соединения будут вводиться в пределах периода, и в количестве, и способом, которые являются дос
- 13 010652 таточными, чтобы обеспечить достижения преимущественного или синергического воздействия. Будет понятно, что предпочтительные способ, и порядок введения, и соответствующие величины и режимы дозировки для каждого компонента комбинации будут зависеть от конкретного другого лекарственного агента и ингибитора НОАС, которые вводятся, их способа введения, конкретной опухоли, которая лечится, и конкретного субъекта, которого лечат. Оптимальные способ, и порядок введения, и величины, и режим дозировки легко могут быть определены специалистом в данной области с использованием обычных способов и с учетом информации, приведенной в описании.
Координационное соединение платины преимущественно вводится при дозировке от 1 до 500 мг на квадратный метр (мг/м2) площади поверхности тела, например 50-400 мг/м2, в частности для цисплатина при дозировке примерно 75 мг/м2 и для карбоплатина примерно при 300 мг/м2 на курс лечения.
Соединение таксана преимущественно вводится при дозировке от 50 до 400 мг на квадратный метр (мг/м2) площади поверхности тела, например 75-250 мг/м2, в частности для паклитаксела при дозировке от примерно 175 до 250 мг/м2 и для доцетаксела примерно при 75-150 мг/м2 на курс лечения.
Соединение камптотецина преимущественно вводится при дозировке от 0,1 до 400 мг на квадратный метр (мг/м2) площади поверхности тела, например 1-300 мг/м2, в частности для иринотекана при дозировке от примерно 100 до 350 мг/м2 и для топотекана примерно при 1-2 мг/м2 на курс лечения.
Противоопухолевое производное подофиллотоксина преимущественно вводится при дозировке от 30 до 300 мг на квадратный метр (мг/м2) площади поверхности тела, например 50-250 мг/м2, в частности для этопозида при дозировке от примерно 35 до 100 мг/м2 и для тенипозида примерно при 50-250 мг/м2 на курс лечения.
Противоопухолевый алкалоид винка преимущественно вводится при дозировке от 2 до 30 мг на квадратный метр (мг/м2) площади поверхности тела, в частности для винбластина при дозировке от примерно 3 до 12 мг/м2, для винкристина при дозировке от примерно 1 до 2 мг/м2 и для винорельбина при дозировке от примерно 10 до 30 мг/м2 на курс лечения.
Противоопухолевое нуклеозидное производное преимущественно вводится при дозировке от 200 до 2500 мг на квадратный метр (мг/м2) площади поверхности тела, например 700-1500 мг/м2, в частности для 5-Εϋ при дозировке от 200 до 500 мг/м2, для гемцитабина при дозировке от примерно 800 до 1200 мг/м2 и для капецитабина от примерно 1000 до 2500 мг/м2 на курс лечения.
Алкилирующий агент, такой как азотная горчица или нитрозомочевина, преимущественно вводится при дозировке от 100 до 500 мг на квадратный метр (мг/м2) площади поверхности тела, например 120-200 мг/м2, в частности для циклофосфамида при дозировке от примерно 100 до 500 мг/м2, для хлорамбуцила при дозировке от примерно 0,1 до 0,2 мг/кг, для кармустина при дозировке от примерно 150 до 200 мг/м2 и для ломустина при дозировке от примерно 100 до 150 мг/м2 на курс лечения.
Противоопухолевое антрациклиновое производное преимущественно вводится при дозировке от 10 до 75 мг на квадратный метр (мг/м2) площади поверхности тела, например 15-60 мг/м2, в частности для доксорубицина при дозировке от примерно 40 до 75 мг/м2, для даунорубицина при дозировке от примерно 25 до 45 мг/м2 и для идарубицина при дозировке от примерно 10 до 15 мг/м2 на курс лечения.
Трастузумаб преимущественно вводится при дозировке от 1 до 5 мг на квадратный метр (мг/м2) площади поверхности тела, в частности от 2 до 4 мг/м2 на курс лечения.
Антиэстрогенный агент преимущественно вводится при дозировке от примерно 1 до 100 мг в день, в зависимости от конкретного агента и от состояния, которое лечится. Тамоксифен преимущественно вводится перорально при дозировке от 5 до 50 мг, предпочтительно от 10 до 20 мг дважды в день, продолжая терапию в течение времени, достаточного для достижения и поддержания терапевтического воздействия. Торемифен преимущественно вводится перорально при дозировке от примерно 60 мг 1 раз в день, продолжая терапию в течение времени, достаточного для достижения и поддержания терапевтического воздействия. Анастрозол преимущественно вводится перорально при дозировке примерно 1 мг 1 раз в день. Дролоксифен преимущественно вводится перорально при дозировке примерно 20-100 мг 1 раз в день. Ралоксифен преимущественно вводится перорально при дозировке примерно 60 мг 1 раз в день. Эксеместан преимущественно вводится перорально при дозировке от примерно 25 мг 1 раз в день.
Эти дозировки могут вводиться, например, 1, 2 или более раз на курс лечения, который может повторяться, например, каждые 7, 14, 21 или 28 дней.
С учетом их полезных фармакологических свойств, компоненты комбинаций в соответствии с настоящим изобретением, т.е. другой лекарственный агент и ингибитор НОАС, могут приготавливаться в различных фармацевтических формах, в зависимости от введения. Компоненты могут приготавливаться по отдельности в виде отдельных фармацевтических композиций или в виде объединенной фармацевтической композиции, содержащей оба компонента.
Следовательно, настоящее изобретение также относится к фармацевтической композиции, содержащей другой лекарственный агент и ингибитор НОАС вместе с одним или несколькими фармацевтическими носителями.
Настоящее изобретение также относится к комбинации в соответствии с настоящим изобретением в форме фармацевтической композиции, содержащей противораковый агент и ингибитор НОАС в соответствии с настоящим изобретением, вместе с одним или несколькими фармацевтическими носителями.
- 14 010652
Кроме того, настоящее изобретение относится к применению комбинации в соответствии с настоящим изобретением при производстве фармацевтической композиции для ингибирования роста опухолевых клеток.
Кроме того, настоящее изобретение относится к продукту, содержащему в качестве первого активного ингредиента ингибитор НЭАС в соответствии с настоящим изобретением, а в качестве второго активного ингредиента противораковый агент в качестве объединенного препарата для одновременного, раздельного или последовательного использования при лечении пациентов, страдающих от рака.
Экспериментальная часть
Следующие далее примеры приводятся для целей иллюстрации. Далее ЭСМ определяется как дихлорметан, Э[РЕ определяется как простой диизопропиловый эфир, ЭМА определяется как Ν,Ν-диметилацетамид, ΌΜ8Θ определяется как диметилсульфоксид, ЕЭС определяется как моногидрохлорид №-(этилкарбонимидоил)-^№диметил-1,3-пропандиамина, ЕЮАс определяется как этилацетат, ЕЮН определяется как этанол, НОВ! определяется как 1-гидрокси-1Н-бензотриазол, МеОН определяется как метанол, ТЕА определяется как трифторуксусная кислота и ТГФ определяется как тетрагидрофуран.
А. Получение промежуточных соединений.
Пример А1.
а) Получение промежуточного соединения 1.
Смесь сложного этилового эфира 2-[4-(аминометил)-1-пиперидинил]-5-пиримидинкарбоновой кислоты (0,0114 моль), 1-метил-1Н-индол-3-карбоксальдегида (0,017 моль) и Мд§О4 (0,5 г) в МеОН (80 мл) перемешивают и нагревают с обратным холодильником в течение 15 ч, затем охлаждают до комнатной температуры. Натрийтетрагидроборат (0,018 моль) добавляют по частям. Смесь перемешивают при комнатной температуре 5 ч, выливают в воду и экстрагируют Е!ОАс. Органический слой отделяют, сушат (Мд§О4), фильтруют и растворитель выпаривают. Остаток (6,6 г) очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (15-40 мкм) (элюент: ЭСМ/МсОН^Н4ОН 94/6/0,5). Чистые фракции собирают и растворитель выпаривают с получением 4,3 г (90%) промежуточного соединения 1.
Ь) Получение промежуточного соединения 2.
Смесь промежуточного соединения 1 (0,0037 моль) и гидроксида натрия (0,0074 моль) в Е!ОН (60 мл) перемешивают при 50°С в течение 15 ч, затем охлаждают до комнатной температуры и растворитель выпаривают досуха с получением 1,5 г (100%) промежуточного соединения 2.
с) Получение промежуточного соединения 3.
ЕЭС (0,0075 моль), затем НОВ! (0,0075 моль), затем О-(тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)гидроксиламин (0,015 моль) добавляют при комнатной температуре к смеси промежуточного соединения 2 (0,005 моль) в ЭСМ (100 мл) и ТГФ (100 мл) в потоке Ν2. Смесь перемешивают при 40°С в течение 4 ч, выливают в воду со льдом и экстрагируют ЭСМ. Органический слой отделяют, сушат (Мд§О4), фильтруют и растворитель выпаривают. Остаток (4 г) очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (15-40 мкм) (элюент: ПСМ/МеОНЫН4ОН 96/4/0,5). Чистые фракции собирают и растворитель выпаривают с получением 1 г (42%) промежуточного соединения 3. Фракцию (0,051 г) кристаллизуют из ЭГРЕ. Осадок отфильтровывают и сушат с получением 0,03 г промежуточного соединения 3, температура плавления 70°С.
Пример А2.
а) Получение промежуточного соединения 4.
- 15 010652
Смесь сложного этилового эфира 2-[4-(аминометил)-1-пиперидинил]-5-пиримидинкарбоновой кислоты (0,0072 моль) в ТГФ (40 мл) и гидроксида натрия 1н. (40 мл), перемешивают при комнатной температуре в течение ночи. Добавляют хлористо-водородную кислоту 1н. (40 мл). Смесь перемешивают в течение 10 мин. Добавляют карбонат натрия (0,0216 моль). Смесь перемешивают в течение 10 мин. 1[[(9Н-Флуорен-9-илметокси)карбонил]окси]-2,5-пирролидиндион (0,0072 моль) добавляют по частям. Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 6 ч, затем охлаждают до 0°С и подкисляют хлористо-водородной кислотой. Осадок фильтруют, промывают простым диэтиловым эфиром и сушат с получением 4,1 г (100%) промежуточного соединения 4.
Ь) Получение промежуточного соединения 5.
Триэтиламин (0,02 моль), БОС (0,0082 моль) и НОВ! (0,0082 моль) добавляют при комнатной температуре к смеси промежуточного соединения 4 (0,0068 моль) в ОСМ/ТГФ (200 мл) в потоке Ν2. Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 15 мин. Добавляют О-(тетрагидро-2Н-пиран-2-ил) гидроксиламин (0,0082 моль). Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 48 ч, выливают в воду и экстрагируют ЭСМ. Органический слой промывают №НС’О3 10%, сушат (Мд§О4), фильтруют и растворитель выпаривают. Остаток (4 г) очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (15-40 мкм) (элюент: ^СΜ/ΜеОН/NН4ОН 98/2/0,1). Чистые фракции собирают и растворитель выпаривают с получением 3,4 г (89%) промежуточного соединения 5.
с) Получение промежуточного соединения 6.
Смесь промежуточного соединения 5 (0,0355 моль) и пиперидина (0,089 моль) в Ό0Μ (400 мл) перемешивают при 35°С в течение 72 ч. Растворитель выпаривают. Остаток очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (15-40 мкм) (элюент: ОСМ/МсОН^Н4ОН 80/20/2). Чистые фракции собирают и растворитель выпаривают с получением 6,7 г (56%). Часть остатка (0,79 г) кристаллизуют из простого диэтилового эфира. Осадок отфильтровывают и сушат с получением 0,62 г промежуточного соединения 6, температура плавления 129°С.
б) Получение промежуточного соединения 7.
Смесь промежуточного соединения 6 (0,0009 моль) и 5-хлор-1Н-индол-3-карбоксальдегида (0,0012 моль) в 1,2-дихлорэтане (30 мл) перемешивают при комнатной температуре в течение ночи. Натрий трис(ацетоа-О)гидроборат (0,0013 моль) добавляют по частям. Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 4 ч, выливают в воду/№1ОН 3н. и экстрагируют Ό0Μ. Органический слой отделяют, сушат (Мд§О4), фильтруют и растворитель выпаривают. Остаток (0,5 г) очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (15-40 мкм) (элюент ОСМ/МсОН/ΝΗ-ΟΗ 93/7/0,5). Две фракции собирают и растворитель выпаривают с получением 0,07 г (16%) промежуточного соединения 7.
Пример А3.
а) Получение промежуточного соединения 8.
Раствор сложного этилового эфира 2-(метилсульфонил)-5-пиримидинкарбоновой кислоты (0,094 моль) в ацетонитриле (40 мл) добавляют при 10°С к суспензии 4-пиперидинметанола (0,086 моль) и карбоната калия (0,172 моль) в ацетонитриле (200 мл) в потоке Ν2. Смесь доводят до комнатной температуры, затем перемешивают в течение 4 ч, выливают в воду и экстрагируют ЕЮАс. Органический слой отделяют, сушат (Мд§О4), фильтруют и растворитель выпаривают. Остаток (23 г) кристаллизуют из ацетонитрила/простого диэтилового эфира. Осадок отфильтровывают и сушат с получением 7,8 г (34%) промежуточного соединения 8. Слой маточного раствора выпаривают. Остаток (17 г) очищают с помощью коло
- 16 010652 ночной хроматографии на силикагеле (20-45 мкм) (элюент: ОС’М/МсОН/ΝΗ.-ιΟΗ 97/3/0,1). Чистые фракции собирают и растворитель выпаривают с получением 4,6 г (20%) промежуточного соединения 8, температура плавления 129°С.
Ь) Получение промежуточного соединения 9.
Триэтиламин (0,038 моль), затем метансульфонилхлорид (0,025 моль) добавляют при 0°С к раствору промежуточного соединения 8 (0,0189 моль) в ЭСМ (80 мл) в потоке Ν2. Смесь перемешивают при 0°С в течение 2 ч и выливают в воду со льдом. Органический слой отделяют, сушат (Мд8О4), фильтруют и растворитель выпаривают с получением 6,5 г (100%) промежуточного соединения 9.
с) Получение промежуточного соединения 10.
Смесь промежуточного соединения 9 (0,0189 моль), №метил-1Н-индол-3-этанамина (0,0172 моль) и карбоната калия (0,0344 моль) в ацетонитриле (180 мл) перемешивают и нагревают с обратным холодильником в течение 24 ч, выливают в воду и экстрагируют Е1ОЛс. Органический слой отделяют, сушат (Мд8О4), фильтруют и растворитель выпаривают. Остаток (8,5 г) очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (70-200 мкм) (элюент: ОСМ/МсОН/ΝΗ.4ОН 98/2/0-97/3/0,1). Чистые фракции собирают и растворитель выпаривают с получением 1,25 г (20%) промежуточного соединения 10.
б) Получение промежуточного соединения 11.
Смесь промежуточного соединения 10 (0,003 моль) и гидроксида натрия (0,006 моль) в Е1ОН (80 мл) перемешивают и нагревают с обратным холодильником в течение ночи, затем охлаждают до комнатной температуры и растворитель выпаривают досуха с получением 1,3 г (100%) промежуточного соединения 11, температура плавления >260°С.
с) Получение промежуточного соединения 12.
ЕЭС (0,0045 моль), затем НОВ1 (0,0045 моль) добавляют при комнатной температуре к смеси промежуточного соединения 11 (0,003 моль) в ТГФ (100 мл) и ЭСМ (100 мл) в потоке Ν2. Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 15 мин. Добавляют О-(тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)гидроксиламин (0,012 моль). Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 72 ч, выливают в воду и экстрагируют ЭСМ. Органический слой отделяют, сушат (Мд8О4), фильтруют и растворитель выпаривают. Остаток (3 г) очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (15-40 мкм) (элюент: □СМ/МсОН/НН4ОН 94/6/0,1). Чистые фракции собирают и растворитель выпаривают. Остаток (0,82 г) извлекают в простом диэтиловом эфире. Осадок отфильтровывают и сушат с получением 0,78 г промежуточного соединения 12, температура плавления 154°С.
- 17 010652
Пример А4.
а) Получение промежуточного соединения 13.
Смесь сложного этилового эфира 2-[4-(аминометил)-1-пиперидинил]-5-пиримидинкарбоновой кислоты (0,0049 моль), метансульфоната 1Н-индол-3-этанола (сложный эфир) (0,0054 моль) и карбоната калия (0,01 моль) в ацетонитриле (20 мл) перемешивают и нагревают с обратным холодильником в течение ночи, затем охлаждают, выливают в воду со льдом и экстрагируют ЭСМ. Органический слой отделяют, сушат (Мд§О4), фильтруют и растворитель выпаривают. Остаток (2,2 г) очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (15-40 мкм) (элюент: ОСМ/МсОН/ΝΠ-ιΟΗ 96/4/0,2). Чистые фракции собирают и растворитель выпаривают с получением 0,442 г (22%) промежуточного соединения 13, температура плавления 238°С.
Ь) Получение промежуточного соединения 14.
Смесь промежуточного соединения 13 (0,0025 моль), (2-бромэтокси)(1,1-диметилэтил)диметилсилана (0,0034 моль) и №этил-№(1-метилэтил)-2-пропанамина (0,0038 моль) в ΌΜ8Ο (20 мл) перемешивают при 50°С в течение 15 ч, затем охлаждают до комнатной температуры, выливают в воду со льдом и экстрагируют ЭСМ. Органический слой отделяют, сушат (Мд§О4), фильтруют и растворитель выпаривают. Остаток (1,7 г) очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (15-40 мкм) (элюент: ОСМ/МсОН/ΝΗ4ОН 98/2/0,1). Чистые фракции собирают и растворитель выпаривают с получением 0,76 г (54%) промежуточного соединения 14.
с) Получение промежуточного соединения 15.
Смесь промежуточного соединения 14 (0,0013 моль) и гидроксида натрия (0,0027 моль) в Е(ОН (40 мл) перемешивают при 80°С в течение ночи, затем охлаждают до комнатной температуры и растворитель выпаривают с получением 0,75 г (100%) промежуточного соединения 15.
й) Получение промежуточного соединения 16.
ЕЭС (0,002 моль), затем НОВ( (0,002 моль) добавляют при комнатной температуре к смеси промежуточного соединения 15 (0,0013 моль) в ТГФ (80 мл) и ЭСМ (80 мл) в потоке Ν2. Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 15 мин. Добавляют О-(тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)гидроксиламин (0,0068 моль). Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 72 ч, выливают в воду и экстрагируют ЭСМ. Органический слой отделяют, сушат (Мд§О4), фильтруют и растворитель выпаривают. Остаток (1,3 г) очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (15-40 мкм) (элюент: ПСМ/МеОН/ЫН4ОН 95/5/0,1). Чистые фракции собирают и растворитель выпаривают с получением 0,38 г промежуточного соединения 16.
- 18 010652
е) Получение промежуточного соединения 17.
Смесь промежуточного соединения 16 (0,0011 моль) и тетрабутиламмонийфторида (0,0032 моль) в ТГФ (10 мл) перемешивают при комнатной температуре в течение 72 ч, выливают в воду и экстрагируют ЕЮАс. Органический слой промывают водой, сушат (Мд§О4), фильтруют и растворитель выпаривают с получением 0,5 г (88%) промежуточного соединения 17.
Пример А5.
а) Получение промежуточного соединения 45.
Раствор сложного метилового эфира 2-хлор-5-пиримидинкарбоновой кислоты (0,058 моль) в ЭМА (80 мл) добавляют по каплям к раствору 4-пиперидинметанамина (0,116 моль) и Ν-этилдиизопропиламина (0,145 моль) в ЭМА (150 мл) в потоке Ν2. Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 1 ч и 30 мин, выливают в воду со льдом и экстрагируют Е1ОАс, затем ЭСМ. Органический слой промывают водой, сушат (Мд§О4), фильтруют и растворитель выпаривают. Остаток кристаллизуют из ΌΙΡΕ. Осадок отфильтровывают и сушат с получением 10 г (65%) промежуточного соединения 45.
Ь) Получение промежуточного соединения 46.
Смесь промежуточного соединения 45 (0,0024 моль), 1-метил-5-нитро-1Н-индол-3-карбоксальдегида (0,0036 моль) и Мд§О4 (0,25 г) в МеОН (80 мл) перемешивают при 60°С в течение ночи, затем охлаждают до комнатной температуры. Натрийтетрагидроборат (0,0041 моль) добавляют по частям. Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 18 ч, выливают в воду и экстрагируют Е1ОАс. Органический слой отделяют, сушат (Мд§О4), фильтруют и растворитель выпаривают. Остаток (1,1 г) кристаллизуют из ацетонитрила. Осадок отфильтровывают и сушат с получением 0,9 г (86%) промежуточного соединения 46, температура плавления 150°С.
с) Получение промежуточного соединения 47.
Смесь промежуточного соединения 46 (0,002 моль) и гидроксида натрия (0,008 моль) в Е1ОН (60 мл) перемешивают при 60°С в течение ночи, затем охлаждают до комнатной температуры и выпаривают. Остаток извлекают в простом диэтиловом эфире. Осадок отфильтровывают и сушат с получением 0,6 г (67%) промежуточного соединения 47.
б) Получение промежуточного соединения 48.
- 19 010652
ЕЭС (0,0019 моль) и НОВ! (0,0019 моль) добавляют при комнатной температуре к раствору промежуточного соединения 47 (0,0013 моль) и триэтиламина (0,0039 моль) в ЭСМ/ТГФ (50/50) (100 мл) в потоке Ν2. Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 15 мин. Добавляют О-(тетрагидро2Н-пиран-2-ил)гидроксиламин (0,0026 моль). Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 72 ч, выливают в воду и экстрагируют ЭСМ. Органический слой отделяют, сушат (Мд§О4), фильтруют и растворитель выпаривают. Остаток (1 г) очищают с помощью колоночной хроматографии на кромасиле (5 мкм) (элюент: ОСМ/МсОН/ΝΗ-ιΟΗ 98/2/0,2-92/8/0,2). Чистые фракции собирают и растворитель выпаривают с получением 0,101 г (15%) промежуточного соединения 48.
Пример А6.
а) Получение промежуточного соединения 49.
Раствор сложного метилового эфира 2-хлор-5-пиримидинкарбоновой кислоты (0,033 моль) в ЭСМ (80 мл) добавляют при комнатной температуре к раствору 4-пиперидинметанола (0,066 моль) и Ν-этилдиизопропиламина (0,083 моль) в ЭСМ (100 мл) в потоке Ν2. Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 3 ч и 30 мин, выливают в воду со льдом и экстрагируют ЭСМ. Органический слой отделяют, сушат (Мд§О4), фильтруют и растворитель выпаривают. Остаток извлекают в пентане. Осадок отфильтровывают и сушат с получением 7,88 г (95%) промежуточного соединения 49.
Ь) Получение промежуточного соединения 50.
ЭМ8О (0,058 моль) добавляют по каплям при -78°С к раствору этандиоилдихлорида (0,0278 моль) в ЭСМ (50 мл) в потоке Ν2. Смесь перемешивают в течение 15 мин. Раствор промежуточного соединения 49 (0,023 моль) в ЭСМ (200 мл) добавляют по каплям. Смесь перемешивают при -78°С в течение 1 ч и 30 мин. Триэтиламин (0,118 моль) добавляют по каплям. Смесь перемешивают при -78°С в течение 1 ч, выливают в воду и экстрагируют ЭСМ. Органический слой отделяют, сушат (Мд§О4), фильтруют и растворитель выпаривают. Остаток кристаллизуют из простого диэтилового эфира. Осадок отфильтровывают и сушат с получением 3,06 г (54%) промежуточного соединения 50.
с) Получение промежуточного соединения 51.
Промежуточное соединение 50 (0,0122 моль) добавляют при 5°С к раствору 1-метил-1Н-индол-3этанамина (0,0122 моль) в МеОН (270 мл) в потоке Ν2. Смесь перемешивают несколько минут. Добавляют натрийцианоборгидрид (0,0183 моль) и уксусную кислоту (0,0183 моль). Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 48 ч, выливают в карбонат калия 10% и экстрагируют ЭСМ. Органический слой отделяют, сушат (Мд§О4), фильтруют и растворитель выпаривают. Остаток (4,9 г) очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (15-40 мкм) (элюент: ОСМ/МеОН/ХН4ОН 97/3/0,1). Чистые фракции собирают и растворитель выпаривают с получением 1,2 г (24%) промежуточного соединения 51.
б) Получение промежуточного соединения 52.
- 20 010652
Смесь промежуточного соединения 51 (0,0009 моль) и гидроксида натрия (0,0039 моль) в Е1ОН (60 мл) перемешивают и нагревают с обратным холодильником в течение 15 ч, затем выпаривают досуха с получением промежуточного соединения 52. Это промежуточное соединение используют непосредственно на следующей стадии реакции.
е) Получение промежуточного соединения 53.
ΗΘΒ1 (0,0019 моль), затем ЕЭС (0,0019 моль) добавляют при комнатной температуре к раствору промежуточного соединения 52 (0,0009 моль) и О-(тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)гидроксиламина (0,0019 моль) в ЭСМ/ТГФ (130 мл). Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 48 ч, выливают в воду и экстрагируют ЭСМ. Органический слой отделяют, сушат (Мд§О4), фильтруют и растворитель выпаривают. Остаток (0,93 г) очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (15-40 мкм) (элюент: ЭСМ/МсОНАН-ОН 97/3/0,1). Чистые фракции собирают и растворитель выпаривают с получением 0,155 г (33%) промежуточного соединения 53.
Пример А7.
а) Получение промежуточного соединения 54.
Смесь сложного этилового эфира 2-[4-(аминометил)-1-пиперидинил]-5-пиримидинкарбоновой кислоты (0,0038 моль), 1-этил-1Н-индол-3-карбоксальдегида (0,0049 моль) и Рб/С 10% (0,5 г) в МеОН (20 мл), содержащем 1 мл 10% раствор тиофена в Е1ОН, гидрируют при комнатной температуре в течение 24 ч при давлении 3 бара, затем фильтруют через целит. Растворитель выпаривают досуха. Остаток (1,8 г) очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (15-40 мкм) (элюент: ЭСМ/МсОНАН-ОН 95/5/0,2-93/7/0,5). Чистые фракции собирают и растворитель выпаривают с получением 0,7 г (44%) промежуточного соединения 54.
Ь) Получение промежуточного соединения 55.
Гидрид натрия 60% (0,009 моль) добавляют при 0°С к раствору промежуточного соединения 54 (0,0045 моль) в ТГФ (50 мл) в потоке Ν2. Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 1 ч. Раствор йодэтана (0,0062 моль) в ТГФ (10 мл) добавляют по каплям. Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение ночи, выливают в воду и экстрагируют Е1ОАе. Органический слой отделяют, сушат (Мд§О4), фильтруют и растворитель выпаривают. Остаток (0,6 г) очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (15-40 мкм) (элюент: ЭСМ/МсОНАН-ОН 95/5/0,1). Чистые фракции собирают и растворитель выпаривают с получением 0,16 г (8%) промежуточного соединения 55.
с) Получение промежуточного соединения 56.
Н<
- 21 010652
Смесь промежуточного соединения 55 (0,0003 моль) и гидроксида натрия (0,03 г) в Ε1ΟΗ (15 мл) перемешивают при 80°С в течение 6 ч, затем выпаривают досуха с получением 0,16 г (100%) промежуточного соединения 56.
ά) Получение промежуточного соединения 57.
ΕΌί’ (0,0005 моль) и ΗΟΒ1 (0,0005 моль) добавляют при комнатной температуре к смеси промежуточного соединения 56 (0,0003 моль) в Όί’Μ (20 мл) и ТГФ (20 мл) в потоке Ν2. Смесь перемешивают в течение 15 мин. Добавляют О-(тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)гидроксиламин (0,0007 моль). Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 72 ч, выливают в воду и экстрагируют ЭСМ. Органический слой отделяют, сушат (Мд§04), фильтруют и растворитель выпаривают. Остаток (0,3 г) очищают с помощью колоночной хроматографии на кромасиле (5 мкм) (элюент: ОСМ/МеОН/ΝΗ.-ιΟΗ 93/7/0,35). Чистые фракции собирают и растворитель выпаривают с получением 0,03 г (16%) промежуточного соединения 57.
Пример А8.
а) Получение промежуточного соединения 58.
Гидрид натрия (0,011 моль) добавляют при 5°С к раствору промежуточного соединения 13 (0,0037 моль) в ТГФ (30 мл) в потоке Ν2. Смесь перемешивают в течение 30 мин. Раствор йодметана (0,0081 моль) в ТГФ (10 мл) добавляют по каплям. Смесь перемешивают при 10°С в течение 2 ч, затем доводят до комнатной температуры в течение 1 ч и 30 мин, выливают в воду со льдом и экстрагируют ЭСМ. Органический слой отделяют, сушат (Мд§04), фильтруют и растворитель выпаривают. Остаток (1,7 г) очищают с помощью колоночной хроматографии на кромасиле (15-40 мкм) (элюент: ОСМ/МеОН/ЯНзОН 98/2/0,1). Две фракции собирают и растворитель выпаривают с получением 0,265 г промежуточного соединения 58 и 0,57 г (17%) промежуточного соединения 10.
Ь) Получение промежуточного соединения 59.
.Να
Смесь промежуточного соединения 58 (0,0006 моль) и гидроксида натрия (0,0012 моль) в Ε1ΟΗ (30 мл) перемешивают при 80°С в течение ночи, затем охлаждают до комнатной температуры и растворитель выпаривают с получением 0,26 г (100%) промежуточного соединения 59.
с) Получение промежуточного соединения 60.
ΕΌί’ (0,0009 моль) и ΗΟΒ1 (0,0009 моль) добавляют при комнатной температуре к раствору промежуточного соединения 59 (0,0006 моль) в ТГФ (30 мл) и ОСМ (30 мл) в потоке Ν2. Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 15 мин. Добавляют О-(тетрагидро-2Η-пиран-2-ил)гидроксиламин
- 22 010652 (0,0012 моль). Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 24 ч, выливают в воду и экстрагируют ИСМ. Органический слой отделяют, сушат (Мд§О4), фильтруют и растворитель выпаривают. Остаток (0,6 г) очищают с помощью колоночной хроматографии на кромасиле (5 мкм) (элюент: ИСМ/МеОН^Н4ОН 99/1/0,05 и 94/6/0,3). Чистые фракции собирают и растворитель выпаривают с получением 0,1 г (33%) промежуточного соединения 60.
Пример А9.
а) Получение промежуточного соединения 61.
ΌΜ8Θ (0,127 моль) добавляют при -78°С к раствору этандиоилдихлорида (0,061 моль) в ИСМ (110 мл) в потоке Ν2. Смесь перемешивают в течение 15 мин. Добавляют раствор промежуточного соединения 8 (0,051 моль) в ИСМ (200 мл). Смесь перемешивают при -78°С в течение 1 ч и 30 мин. Триэтиламин (0,26 моль) добавляют по каплям. Смесь перемешивают при -78°С в течение 15 мин, затем доводят до комнатной температуры в течение 2 ч и 30 мин. Добавляют воду. Смесь экстрагируют ИСМ. Органический слой отделяют, сушат (Мд§О4), фильтруют и растворитель выпаривают. Остаток (14 г) очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (20-45 мкм) (элюент: циклогексан/ЕЮАс 70/30). Чистые фракции собирают и растворитель выпаривают с получением 7,6 г (57%) промежуточного соединения 61.
Ь) Получение промежуточного соединения 62.
Натрийцианоборгидрид (0,049 моль) и уксусную кислоту (0,034 мл) добавляют при комнатной температуре к раствору 5-хлор-1-метил-1Н-индол-3-этанамина (0,031 моль) и промежуточного соединения 61 (0,034 моль) в МеОН (700 мл) в потоке Ν2. Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 24 ч, выливают в карбонат калия 10% и экстрагируют ИСМ. Органический слой отделяют, сушат (Мд§О4), фильтруют и растворитель выпаривают. Остаток (14,8 г) очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (20-45 мкм) (элюент: ИС’М/МсОН/ΝΗ.-ιΟΗ 95/5/0,2). Чистые фракции собирают и растворитель выпаривают с получением 4,52 г (32%) промежуточного соединения 62.
с) Получение промежуточного соединения 63.
Метансульфонилхлорид (0,0049 моль) добавляют при 5°С к раствору промежуточного соединения 62 (0,004 моль) и триэтиламина (0,008 моль) в ИСМ (150 мл) в потоке Ν2. Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 24 ч, выливают в воду со льдом и экстрагируют ИСМ. Органический слой отделяют, сушат (Мд§О4), фильтруют и растворитель выпаривают. Остаток (2,39 г) извлекают в ИГРЕ. Осадок отфильтровывают и сушат с получением 1,78 г (84%) промежуточного соединения 63, температура плавления 162°С.
к) Получение промежуточного соединения 64.
Смесь промежуточного соединения 63 (0,0032 моль) и гидроксида натрия (0,0128 моль) в ΕΐΘΗ (150 мл) перемешивают и нагревают с обратным холодильником в течение 5 ч, затем охлаждают до комнатной температуры и извлекают в простом диэтиловом эфире. Осадок отфильтровывают и сушат с получением
- 23 010652
1,57 г (99%) промежуточного соединения 64, температура плавления >260°С. е) Получение промежуточного соединения 65.
ЕЭС (0,0064 моль) и НОВ! (0,0064 моль) добавляют при комнатной температуре к раствору промежуточного соединения 64 (0,0032 моль) в ТГФ (160 мл) и ЭСМ (160 мл) в потоке Ν2. Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 30 мин. Добавляют О-(тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)гидроксиламин (0,0064 моль). Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 3 дней, выливают в воду и экстрагируют ЭСМ. Органический слой отделяют, сушат (Мд§О4), фильтруют и растворитель выпаривают. Остаток (2,77 г) очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (15-40 мкм) (элюент: ОСМ/МеОН^Н-|ОН 97/3/0,1). Чистые фракции собирают и растворитель выпаривают. Остаток (0,385 г) кристаллизуют из СН3С№простого диэтилового эфира. Осадок отфильтровывают и сушат с получением 0,084 г промежуточного соединения 65, температура плавления 179°С.
Пример А10.
а) Получение промежуточного соединения 66.
Раствор 2-(метилсульфонил)-5-пиримидинкарбоновой кислоты, сложного этилового эфира (0,094 моль) в ацетонитриле (240 мл) добавляют при комнатной температуре к раствору сложного 1,1-диметилэтилового эфира 4-пиперидинилкарбаминовой кислоты (0,078 моль) и карбоната калия (0,156 моль) в ацетонитриле (120 мл) в потоке Ν2. Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение ночи, выливают в воду со льдом и экстрагируют Е!ОАс. Органический слой промывают водой, сушат (Мд§О4), фильтруют и растворитель выпаривают. Остаток кристаллизуют из простого диэтилового эфира. Осадок отфильтровывают и сушат с получением 14,4 г (53%) промежуточного соединения 66, температура плавления 160°С.
Ь) Получение промежуточного соединения 67.
ТЕ А (20 мл) добавляют при комнатной температуре к раствору промежуточного соединения 66 (0,0225 моль) в ЭСМ (110 мл). Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 15 ч, выливают в воду и подщелачивают карбонатом калия. Смесь экстрагируют ЭСМ. Органический слой отделяют, сушат (Мд§О4), фильтруют и растворитель выпаривают с получением 5,5 г (98%) промежуточного соединения 67.
Пример А11.
а) Получение промежуточного соединения 68.
Гидрид натрия 60% в масле (0,0069 моль) добавляют при 0°С к раствору сложного этилового эфира 2-метил-1Н-индол-3-уксусной кислоты (0,0046 моль) в ТГФ (10 мл) в потоке Ν2. Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 1 ч. Добавляют йодэтан (0,006 моль). Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 18 ч и выливают в Е!ОАс и насыщенный раствор №С1. Органический слой отделяют, сушат (Мд§О4), фильтруют и растворитель выпаривают досуха. Остаток (1,1 г) очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (15-40 мкм) (элюент: циклогексан/Е!ОАс 80/20). Чистые фракции собирают и растворитель выпаривают с получением 0,73 г (65%) промежуточного соединения 68.
Ь) Получение промежуточного соединения 69.
- 24 010652
Раствор диизобутилалюминийгидрида в толуоле (0,0045 моль) добавляют по каплям при -78°С к раствору промежуточного соединения 68 (0,003 моль) в ИСМ (15 мл) и 1,2-диметоксиэтана (15 мл) (молекулярные сита: 3 А) в потоке Ν2. Смесь перемешивают при -78°С в течение 3 ч, затем гасят НС1 3н. и экстрагируют ИСМ. Органический слой промывают водой, сушат (Мд§04), фильтруют и растворитель выпаривают досуха с получением 0,7 г (>100%) промежуточного соединения 69.
с) Получение промежуточного соединения 70.
Титан(ГУ) этоксид (0,0023 моль) добавляют к смеси промежуточного соединения 67 (0,0021 моль) и промежуточного соединения 69 (0,0021 моль) в 1,2-дихлорэтане (25 мл). Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 30 мин. Трис(ацето-а-О)гидроборат натрий (0,0023 моль) добавляют по частям. Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 18 ч, затем гасят с NаΗСОз и экстрагируют ИСМ. Органический слой отделяют, сушат (Мд§04), фильтруют и растворитель выпаривают досуха. Остаток (1,2 г) очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (5 мкм) (элюент: ИСМ/Ме0Н^Н40Н 95/5/0,1). Чистые фракции собирают и растворитель выпаривают с получением 0,2 г (21%) промежуточного соединения 70.
ά) Получение промежуточного соединения 71.
Смесь промежуточного соединения 70 (0,0004 моль) и гидроксида натрия (0,0009 моль) в ЕЮН (30 мл) перемешивают при 60°С в течение ночи, затем охлаждают до комнатной температуры и выпаривают с получением 0,2 г (100%) промежуточного соединения 71.
е) Получение промежуточного соединения 72.
ЕЭС (0,0007 моль) и Н0В! (0,1 г) добавляют при комнатной температуре к раствору промежуточного соединения 71 (0,0004 моль) и триэтиламина (0,0009 моль) в ИСМ/ТТФ (40 мл) в потоке Ν2. Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 15 мин. Добавляют О-(тетрагидро-2Н-пиран-2-ил) гидроксиламин (0,0009 моль). Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 72 ч, выливают в воду и экстрагируют ИСМ. Органический слой отделяют, сушат (Мд§04), фильтруют и растворитель выпаривают. Остаток (0,4 г) очищают с помощью колоночной хроматографии на кромасиле (5 мкм) (элюент: ^СΜ/ΜеОΗ/NΗ4ОΗ 98/2/0,1-90/10/1). Чистые фракции собирают и растворитель выпаривают с получением 0,087 г (37%) промежуточного соединения 72.
Пример А12.
а) Получение промежуточного соединения 73.
- 25 010652
Промежуточное соединение 50 (0,0046 моль) добавляют при 5°С к раствору 6-метокси-1-метил-1Ниндол-3-этанамина (0,0046 моль) в МеОН (100 мл) в потоке Ν2. Смесь перемешивают в течение 30 мин. Добавляют натрийцианоборгидрид (0,0068 моль), затем уксусную кислоту (0,0046 моль) по частям. Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 48 ч, выливают в карбонат калия 10% и экстрагируют ЭСМ. Органический слой отделяют, сушат (Мд§О4), фильтруют и растворитель выпаривают. Остаток (4 г) очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (15-40 мкм) (элюент: ОСМ/МеОН/НН4ОН 96/4/0,2). Чистые фракции собирают и растворитель выпаривают. Часть (0,7 г) остатка (2,2 г) кристаллизуют из ацетонитрила. Осадок отфильтровывают и сушат с получением 0,43 г (61%) промежуточного соединения 73, температура плавления 122°С.
Ь) Получение промежуточного соединения 74.
Смесь промежуточного соединения 73 (0,0015 моль) и гидроксида натрия (0,006 моль) в Е1ОН (90 мл) перемешивают и нагревают с обратным холодильником в течение 8 ч, затем выпаривают досуха с получением промежуточного соединения 74.
с) Получение промежуточного соединения 75.
НОВ1 (0,003 моль), затем ЕЭС (0,003 моль) добавляют при комнатной температуре к раствору промежуточного соединения 74 (0,0015 моль) и О-(тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)гидроксиламина (0,003 моль) в ТГФ/ОСМ (200 мл) в потоке Ν2. Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 48 ч, выливают в воду и экстрагируют ЭСМ. Органический слой отделяют, сушат (Мд§О4), фильтруют и растворитель выпаривают. Остаток (1,1 г) очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (10 мкм) (элюент: ОСМ/МеОН/КН4ОН 95/5/0,5). Чистые фракции собирают и растворитель выпаривают. Остаток (0,24 г) очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (10 мкм) (элюент: ОСМ/МеОН/НН4ОН 95/5/0,5). Чистые фракции собирают и растворитель выпаривают с получением 0,17 г (21%) промежуточного соединения 75.
Пример А13.
а) Получение промежуточного соединения 76.
Смесь 6-метокси-1Н-индол-3-этанамина (0,053 моль) и 1,3-изобензофурандиона (0,058 моль) в то
- 26 010652 луоле (130 мл) перемешивают и нагревают с обратным холодильником в течение 48 ч, затем фильтруют. Фильтрат выпаривают с получением 5,4 г (32%) промежуточного соединения 76.
Ь) Получение промежуточного соединения 77.
Раствор промежуточного соединения 76 (0,017 моль) в ЭМЕ (19 мл) добавляют по каплям при комнатной температуре к суспензии гидрида натрия (0,034 моль) в ЭМЕ (11 мл) в потоке Ν2. Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 1 ч 30 мин. Добавляют 1-йодпропан (0,034 моль). Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 1 ч и 15 мин. Добавляют насыщенный раствор №С1. Смесь экстрагируют ЕЮЛс. Органический слой промывают водой, сушат (Мд8О4), фильтруют и растворитель выпаривают с получением 4,9 г промежуточного соединения 77. Этот продукт используют непосредственно на следующей стадии реакции.
с) Получение промежуточного соединения 78.
Смесь промежуточного соединения 77 (0,068 моль) и гидразина, моногидрата (0,068 моль) в Е1ОН (60 мл) перемешивают и нагревают с обратным холодильником в течение 1 ч, выливают в воду и экстрагируют ЭСМ. Органический слой отделяют, сушат (Мд8О4), фильтруют и растворитель выпаривают с получением 3,53 г промежуточного соединения 78. Этот продукт используют непосредственно на следующей стадии реакции.
б) Получение промежуточного соединения 79.
Натрийцианоборгидрид (0,024 моль) и уксусную кислоту (0,0167 моль) добавляют при комнатной температуре к раствору промежуточного соединения 61 (0,0167 моль) и промежуточного соединения 78 (0,015 моль) в МеОН (380 мл) в потоке Ν2. Смесь перемешивают в течение 30 мин, выливают в карбонат калия 10% и экстрагируют ЭСМ. Органический слой отделяют, сушат (Мд8О4), фильтруют и растворитель выпаривают. Остаток (8,84 г) очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (15-40 мкм) (элюент: ЭСМ/МеОН/МН4ОН 96/4/0,2). Чистые фракции собирают и растворитель выпаривают с получением 2,85 г (40%) промежуточного соединения 79.
е) Получение промежуточного соединения 80.
Смесь промежуточного соединения 79 (0,0028 моль), йодэтана (0,0056 моль) и триэтиламина (0,0085 моль) в ЭМЕ (60 мл) перемешивают при 50°С в течение 7 ч, выливают в воду со льдом и экстрагируют ЕЮЛс. Органический слой промывают водой, сушат (Мд8О4), фильтруют и растворитель выпаривают. Остаток (1,8 г) очищают с помощью колоночной хроматографии на кромасиле (5 мкм) (элюент: ЭСМ/МеОН 100/0-95/5). Чистые фракции собирают и растворитель выпаривают с получением 1,1 г (78%) промежуточного соединения 80.
ί) Получение промежуточного соединения 81.
- 27 010652
Смесь промежуточного соединения 80 (0,0022 моль) и гидроксида натрия (0,0088 моль) в Е!ОН (100 мл) перемешивают и нагревают с обратным холодильником в течение 6 ч, затем перемешивают при комнатной температуре в течение ночи и выпаривают досуха. Остаток извлекают в простом диэтиловом эфире. Осадок отфильтровывают и сушат с получением 0,965 г (88%) промежуточного соединения 81, температура плавления >260°С.
д) Получение промежуточного соединения 82.
ΕΌΟ (0,0038 моль) и НОВ! (0,0038 моль) добавляют при комнатной температуре к раствору промежуточного соединения 81 (0,0019 моль) в ТГФ (100 мл) и Ό0Μ (100 мл) в потоке Ν2. Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 30 мин. Добавляют О-(тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)гидроксиламин (0,0038 моль). Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 48 ч, выливают в воду и экстрагируют Ό0Μ. Органический слой отделяют, сушат (Мд§О4), фильтруют и растворитель выпаривают. Остаток (1,2 г) очищают с помощью колоночной хроматографии на кромасиле (5 мкм) (элюент: ОСМ/МсОН/ΝΗ.-ιΟΗ 99/1/0,05-93/7/0,35). Чистые фракции собирают и растворитель выпаривают с получением 0,114 г промежуточного соединения 82.
Пример А14.
а) Получение промежуточного соединения 83.
ΗΙ
Смесь промежуточного соединения 62 (0,0034 моль) и гидроксида натрия (0,0134 моль) в Ε!ΟΗ (150 мл) перемешивают при 80°С в течение 3 ч, затем охлаждают до комнатной температуры и выпаривают досуха. Остаток извлекают в простом диэтиловом эфире. Осадок отфильтровывают и сушат с получением 1,18 г (78%) промежуточного соединения 83, температура плавления >260°С.
Ь) Получение промежуточного соединения 84.
ЕЭС (0,0052 моль) и НОВ! (0,0052 моль) добавляют при комнатной температуре к раствору промежуточного соединения 83 (0,0026 моль) в ТГФ (120 мл) и ЭСМ (120 мл) в потоке Ν2. Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 30 мин. Добавляют О-(тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)гидроксиламин (0,0052 моль). Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 6 дней, выливают в воду со льдом и экстрагируют ΌΟΜ. Органический слой отделяют, сушат (Мд§О4), фильтруют и растворитель выпаривают. Остаток (2 г) очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (15-40 мкм) (элюент: ЭСМ/МсОН^Н.-ОН 96/4/0,5). Чистые фракции собирают и растворитель выпаривают. Остаток (0,75 г, 55%) очищают с помощью колоночной хроматографии на кромасиле (10 мкм) (элюент: ЭСМ/МсОН^Н.-ОН 96/4/0,5). Чистые фракции собирают и растворитель выпаривают с получением 0,625 г промежуточного соединения 84. Этот продукт используют непосредственно на следующей стадии реакции.
- 28 010652
Пример А15.
а) Получение промежуточного соединения 85.
4-Пиперидинметанамин (0,65 моль) и карбонат калия (96 г) перемешивают в ацетонитриле (1000 мл), а затем добавляют раствор сложного этилового эфира 2-(метилсульфонил)-5-пиримидинкарбоновой кислоты (0,37 моль) в ацетонитриле (500 мл) по каплям при комнатной температуре в течение 1 ч. Реакционную смесь перемешивают в течение ночи при комнатной температуре и растворитель выпаривают. Остаток перемешивают в воде и смесь экстрагируют ЭСМ (2x500 мл). Органический слой отделяют, промывают водой, сушат (Мд§О4), отфильтровывают и растворитель выпаривают. Остаток очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (элюент 1: Е!ОАс/гексан 1/1; элюент 2: МеОН+малое количество NН4ОН). Фракции продукта собирают, перемешивают с суспензией карбоната калия и смесь экстрагируют ЭСМ. Органический слой отделяют, сушат (Мд§О4), отфильтровывают и растворитель выпаривают с получением 31 г (32%) промежуточного соединения 85.
Пример А16.
а) Получение промежуточного соединения 86.
Гидрид натрия (0,0095 моль) добавляют при 5°С к раствору 5-хлор-1Н-индол-3-карбоксальдегида (0,0056 моль) в ТГФ (52 мл) в потоке Ν2. Смесь перемешивают при 0°С в течение 1 ч. Добавляют 1-йодпропан (0,0067 моль). Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 2 дней, выливают в воду и экстрагируют Е!ОАс. Органический слой отделяют, сушат (Мд§О4), фильтруют и растворитель выпаривают с получением 1,5 г промежуточного соединения 86. Этот продукт используют непосредственно на следующей стадии реакции.
Ь) Получение промежуточного соединения 87.
Натрийцианоборгидрид (0,0068 моль) и уксусную кислоту (0,0046 моль) добавляют при комнатной температуре к раствору промежуточного соединения 85 (0,0042 моль) и промежуточного соединения 86 (0,0051 моль) в МеОН (120 мл) в потоке Ν2. Смесь перемешивают и нагревают с обратным холодильником в течение 2 дней, затем охлаждают до комнатной температуры, выливают в карбонат калия 10% и экстрагируют ЭСМ. Органический слой отделяют, сушат (Мд§О4), фильтруют и растворитель выпаривают. Остаток (2,42 г) очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (15-40 мкм) (элюент: □СМ/МеОН^Н4ОН 95/5/0,2). Чистые фракции собирают и растворитель выпаривают с получением 1,2 г (60%) промежуточного соединения 87.
с) Получение промежуточного соединения 88.
Смесь промежуточного соединения 87 (0,0025 моль) и гидроксида натрия (0,01 моль) в Е!ОН (120 мл) перемешивают и нагревают с обратным холодильником в течение 4 ч, затем выпаривают досуха. Остаток извлекают в простом диэтиловом эфире. Осадок отфильтровывают и сушат с получением 0,845 г (72%) промежуточного соединения 88, температура плавления >260°С.
б) Получение промежуточного соединения 89.
- 29 010652
ЕЭС (0,0036 моль) и НОВ! (0,0036 моль) добавляют при комнатной температуре к раствору промежуточного соединения 88 (0,0018 моль) в ТГФ (90 мл) и ЭСМ (90 мл) в потоке Ν2. Смесь перемешивают в течение 30 мин. Добавляют О-(тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)гидроксиламин (0,0036 моль). Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 3 дней, выливают в воду со льдом и экстрагируют ЭСМ. Органический слой отделяют, сушат (Мд§О4), фильтруют и растворитель выпаривают. Остаток (1,3 г) очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (15-40 мкм) (элюент: ОСМ/МеОН/ЫН4ОН 92/8/0,5). Чистые фракции собирают и растворитель выпаривают с получением 0,54 г (56%) промежуточного соединения 89.
Пример А17.
а) Получение промежуточного соединения 90.
Метансульфонилхлорид (0,004 моль) добавляют при 10°С к раствору 1,2-диметил-1Н-индол-3-этанола (0,0026 моль) и триэтиламина (0,008 моль) в ЭСМ (10 мл) в потоке Ν2. Смесь перемешивают при 10°С в течение 4 ч. Растворитель выпаривают досуха с получением промежуточного соединения 90. Этот продукт используют непосредственно на следующей стадии реакции.
Ь) Получение промежуточного соединения 91.
Смесь промежуточного соединения 85 (0,0054 моль), промежуточного соединения 90 (0,0075 моль) и карбоната калия (0,021 моль) в ацетонитриле (150 мл) перемешивают и нагревают с обратным холодильником в течение 2 дней, затем охлаждают до комнатной температуры, выливают в воду со льдом и экстрагируют Е!ОАс. Органический слой отделяют, сушат (Мд§О4), фильтруют и растворитель выпаривают. Остаток (1,88 г) очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (15-40 мкм) (элюент: ЭСМ/МеОН/ЯЩОН 97/3/0,1). Чистые фракции собирают и растворитель выпаривают с получением 0,15 г (7%) промежуточного соединения 91.
с) Получение промежуточного соединения 92.
Смесь промежуточного соединения 91 (0,0003 моль) в гидроксиде натрия (0,0014 моль) и Е!ОН (20 мл) перемешивают и нагревают с обратным холодильником в течение 1 дня, затем охлаждают до комнатной температуры и выпаривают досуха. Остаток извлекают в простом диэтиловом эфире. Осадок отфильтровывают и сушат с получением 0,12 г (82%) промежуточного соединения 92, температура плавления >260°С.
й) Получение промежуточного соединения 93.
- 30 010652
БИС (0,0005 моль) и НОВ! (0,0005 моль) добавляют при комнатной температуре к раствору промежуточного соединения 92 (0,0002 моль) в ТГФ (15 мл) и ЭСМ (15 мл). Смесь перемешивают в течение 15 мин. Добавляют О-(тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)гидроксиламин (0,0005 моль). Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 4 дней, выливают в воду со льдом и экстрагируют ΌΟΜ. Органический слой отделяют, сушат (Мд§О4), фильтруют и растворитель выпаривают. Остаток (0,14 г) очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (10 мкм) (элюент: ОСМ/МсОН/ΝΗ,,ΟΗ 95/5/0,3). Чистые фракции собирают и растворитель выпаривают с получением 0,035 г (25%) промежуточного соединения 93.
Табл. Р-1 перечисляет промежуточные соединения, которые получают в соответствии с одним из указанных выше примеров.
Таблица Р-1 Промежуточные соединения
- 31 010652
Ύ~
Промежуточн. соед. 1; пр. [А1] Промежуточн. соед. 2; пр [А1]; т пл >260°С
αγο·0^
Промежуточн соед.3; пр [А1]; т-пл 70°С Промежуточн соед. 7; пр. [А2]
Промежуточн. соед. Ю; ПР [АЗ] ,Ыа; пром соед! 1; пр. [АЗ]; т.лл.>260°С
СиуСг уСП-00
Промежуточн. соед. 12; пр. [АЗ]; т.пл. 154°С Тромежутачн. соед 13; пр. [А4]; т.пл. 238°С
.«Х Γρ,./θ
Промежуточн. соед,14; Пр. [А4] ,Ма; промежуточн. соед. 15; пр. [Д4]
. . , Г'О .Ν&; промежуточн. соед. 16; пр. [А4] ,—^Аэ Промежуточн. соед. 17; пр. [А4]
- 32 010652
/С
Пром.соед. 18; Пр . [Д1]; т.пл. 109°С Промежугочн. соед. 19; пр. [А1]
= гс нОуА^м (ХуСг
,Νβ; пром, соед 20; пр. [ΑΙ] Пром. соед. 21; пр. [А1]; т.пл. 70°С
= X; НОуД^Ь1
Пром.соед.22; пр. [А]); т.пл. 159°С .Νβ;προΜ. соед.23; пр. [А1]
лЖФ хаДЛ н
Пром соед. 24; пр. ΙΑ1 ]; т.пл. 100°С пром. соед. 25; пр. [А1]; тпл. 120’С .
Промежуточн. соед. 26; ПР |А1] Пром. соед. 27; пр. [А1]; т.пл. 84РС
ΗΟγΟ^
Пром соед.28; пр. [А1]; т.пл. 83°С .Νή; пром соед.29; пр. [А1]
ДУЛ ..γί,ΐ -
Промежуточн. соед. 30; пр. [А1] Пром. соед. 31; пр |А1]; т пл, 85°С
ЛРгО йОуЛ^и
•Νβ;προΜ. соед32; пр [А1] Промежуточн. соед. 33; Пр. [А1]
- 33 010652
.л; '-'
.Ыа;пром соед.34; пр. [А1] Промежуточн. соед. 35; ПР [А 1]
^‘ЧъАа.
Промежуточн. соед. 36; пр. [А2]
Пром соед. 38; пр. [А2]; т.пл. 173°С Промежуточн. соед. 39; пр. [А2]
0
Пром, соед 40; пр. [А2]; т.пл.110°С Пром соед. 41; Пр [АЗ]; тпл.240°С
А^
.Ν8;προμ соед42; пр. [АЗ] Пром. соед. 43; пр. [АЗ]; т.пл. 88°С
Промежуточн. соед. 44; пр. [А1]
V Д“ ''г' Η\Α/Ν
Промежуточн. 46, пр [а5]. тпл ^0ОС ,Ма;пром.ооед47; пр [А5]
- 34 010652
7)
Промежугочн. соед 48; Пр. [А5| Промежугочн. соед. 51; пр. [Аб]
« σ ' м.
.Νδ; промежугочн соед. 52; пр. [Дб] Промежугочн. соед. 53; пр. [А6]
-''Пг'у*'·'··» Ч гС Ησ^η^Ν Ап г-
Промежугочн. соед. 55; пр. [А7] ,№; пром. соед. 56; Пр. [А7]
ΆΤΙ ι ^^φθ
Промежугочн. соед. 57; ПР [А7] Промежугочн. соед. 58; ПР [А8]
ΙΚΤγ^Ν 1ι/ι1 ί ΑφΟ ~νη:Ο
.Να; пром, соед 59; пр. [А8] Промежугочн. соед. 60; Пр. [А8]
Άηψ л
пром соед. 63; пр [А9]; т.пл. 162сС .№; пром соед. 64; пр. [А9]; т лл >260°С
- 35 010652
со~ Χλς
Цром соед б5 ; пр [А91; т.пл. 179°С Промежуточн, соед. 70; Пр. £А11]
ЧхоЛ __ЧхЭ_ ,Иа; пром.соед.71; пр. [АЦ] Промежуточн. соед 72; Пр. [А11]
ί иХХ^ ΧγΊ н X
пром. соед 73; пр. [А12]; т.пл. 122°С .На; пром. соед. 74; ПР [А 12]
' χ. X
Промежуточн. соед. 75; ПР (А 12) Промежуточн. соед. 80; пр. [А 131
ЧхуЧх
,Ка; пром. соед. 81; пр. [А13]; т.пл >260°С Промежуточн. соед. 82; пр. [А13]
Ха, Λ Чх^
Промежуточн. соед. 62; ПР- [А9] На; пром, соед 83; пр. [ΑΙ4]; т.лл. >260*’С
- 36 010652
Промежуточн. соед. 84; Пр. (Д14] Промежуточн. соед. 87; пр. [А16]
нОуА^ы ]
.Ν&; пром.соед. 88; пр. [А 16]; т.пл. >260ос Промежуточн. соед. 89; пр. (А 16]
ιΎθηΉθ ХхОуЛэ-М νο~Ή8 О
Промежуточн. соед. 91; ПР- (А 17] .Να; пром соед.92; ПР [А 17]; т пл. >260°С
Промежуточн. соед 93; пр, [А 17] Промежуточн. соед. 94; Пр. [А1]
аусуОЪр
,Иа; пром.соед 95; ПР- ]А1] Промежуточн. соед. 96; ηΡ· [А1 ]
Промежуточн. соед. 97; пр. (А1) пром.соед. 9$; пр [А1]
Н
Промежуточн. соед. 99; ПР [А1] Промежуточн. соед. 100; Пр. [А1]
- 37 010652
Г-/ _ .иСОг'^Ъ (Χγ>
.Να; пром соед.101; пр. ГА1]; тпл>260°С Промежутки, соед.102; пр. ГА11
ъх
Промежуточн. соед. 103; пр. [А1 ] .Να; пром, соед.] 04; пр. [А1]; т.пл >260°С
кх ггг λ+гг о ГгСГпР ΧχΟγΛ^*Ν
Промежуточн. соед. 105; пр. [А1]; тпл. 80°С Промежуточн. соедЮб; пр. [А1]
кЕ ^.сп7 ΗΟγΛ^Ν X
.Ыа;пром.соедЮ7; пр [А1]; т.пл >260°С Промежуточн. соед 108; пр. (А11; т.пл 80°С
г+СгХ ηο,Α^ν /
Промежуточн. соед 109; пр [А1]; т.пл °С .Να;пром, соед 110; пр [А1]; тпл 260°С
ОлгС' > хЛуУ 1
Промежуточн.соед.111; пр. [А1] Промежуточн. соед. П2; пр. [А1 ]
- 38 010652
.-г'10 СА-ϋγΜ
Промежуточн. соед. 113; пр- [А1] Промежуточн. соед. 114; пр. [А21
Промежуточн. соед.115; пр. [А2] Промежуточн соедД 16; пр. [А2]
а и - (ХмЬф
Промежуточн. соедД 17; пр. [А2] Промежуточн. соедД 18; пр. [А2)
Промежуточн. соедД 19; пр. [А2] Промежуточн. соед. 120; пр. [А2]
сАуХСПгЪ?
Промежуточн. соед. 121; пр. |А2] Промежуточн. соед 122; пр. [А2]
Промежуточн. соед. 124; пр. (А2]
Промежуточн. соед.125; пр [А2] Промежуточн. соедД2б; пр. [А2]
(ХуСг0 0^
Промежуточн. соедД 27; пр [А2] Промежуточн. соед.128 ; Пр. [А2]
- 39 010652
о^ХХ^
Промежуточн соед 129; пр. [А2] Промежуточн. соед. 130; пр. (А2]
η я ννγν ->< Χ-°Χ,
Промежуточн. соед. 131; пр. [А2] Промежуточн. соед. 132; пр. [А2]
ΟχΧ0'
Промежуточн. соед. 133; пр. [А2] Промежуточн. соед. 134; пр. [А2]
Промежуточн. соед. 135; пр. [А2] Промежуточн. соед. 136; пр. [А2]
и ’ХъХОэ
Промежуточн. соед. 137; пр. [А2] Промежуточн. соед. 138; пр. [А2]
Х<
Промежуточн. соед. 139; пр. [А2] Промежуточн. соед. 140; пр. [А2]
ο~·χ ’ΧϋγΜ
Промежуточн. соед.141; пр. [А2] Промежуточн. соед. 142; пр. [А2]
- 40 010652
Λ
Промежуточн. соед 143; пр. [Ά7] ,Иа; пром соед 144; пр, [А7]; т.пл >260°С
Промежуточн соед, 145; пр. [А71 Промежуточн. соед. 146; пр. [А7]
ΗαΑγ^Τι сА-п г
.Να; пром, соед 147; пр [А71; т.пл >260°С Промежуточн. соед. 148; пр. [А7]
Чя
Промежуточн. соед. 149; пр. [А 7] ,На;пром.соед.150; пр [А7]
' |.С
4 г - - ~ Промежуточн. соед. 151; пр. [А7] Промежуточн. соед. 152; пр. [А71
γΥΟΎΧΟ
,Ма;пром.соед.153; пр [А7] Промежуточн. соед. 154; пр. [А7]
•^0X^5 л ХСО^р
Промежуточн. соед. 155; прДА9] .Ν&; пром, соед 156; пр [А9]; т.пл.>260°С.
- 41 010652
''О)*?
Промежуточн. соед. 157; пр. [А9] Промежуточн. соед. 158; пр. £А9]
негусы оАх.
. Να; пром соед 159; пр [А9] Промежуточн. соед. 160 ; пр. [А9]
ν. нАрК ЧАн^ °γ*χ А
Промежуточн. соед 161; пр. [А9] .Νβ; пром соед 62; пр. [А9]; т.пл. >260°С
' Л '; .уСССсО ΧχΟγΛ^Ν ’
Промежуточн. соед. 163; лР [А9] Промежуточн. соед. 164; Пр. [Ά91
Ύοςιχο сиусг0^
.Ма;пром. соед 165; пр. [А91 Промежуточн, соед. 166; пр. [А9£
Ап ^Αν^| А аоА/^м πΑν''''^
Промежуточн. соед. 167; Пр. [А12] .Иа; пром. соед. 168; пр. (А 12]; т.пл. >260°С
- 42 010652
οΑν, г
Промежутки, соедин. 169; лр. [А12]; т.пл 80°С Промежуточн соедин. 170; пр. |А13]
.Νβ; промежсоедин 171; пр. [А 13] Промежутки, соедин. 172; пр. [А13]
Проиежуточн соедин Ι73;πρ [ΑΪ3]; т.пл 173°С .Νβ; промеж. соедин] 74; пр [А 13]; т.пл >260°С
Ху с
ГЦюмежуточн. соедин. 175; пр. [А13] Тромежуточн. соедин. [76; пр. [А 17]
о
.Νβ; промеж соедин! 77; пр. [А17]; тпЛ>260°С Промежуточн соедин. 178; пр. [А 17]
В. Получение конечных соединений. Пример В1.
Получение соединения 1а.
.С2НР3О2
ТЕА (2 мл) добавляют к смеси промежуточного соединения 3 (0,0006 моль) в МеОН (40 мл). Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 30 ч. Растворитель выпаривают. Остаток кристал
- 43 010652 лизуют из ЕЮАс/простого диэтилового эфира. Осадок отфильтровывают и сушат с получением 0,31 г (86%) соединения 1а, температура плавления 130°С.
Альтернативный синтез для соединения 1.
Получение соединения 1Ь.
.2НС1
Гидроксиламин (50% в воде, 7,5 мл), а затем №1ОН 1н. (15 мл), добавляют при 10°С к смеси промежуточного соединения 1 (0,0098 моль) в МеОН (10 мл). Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 24 ч. Смесь подкисляют до рН 5-6 посредством добавления раствора НС1, 1н. Осадок отфильтровывают, промывают простым диэтиловым эфиром и сушат. Остаток (4,5 г) очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле ЫСйгоргер® ΝΉ2 (25-40 мкм) (элюент: ОСМ/МеОН/Н2О 90/10/1). Чистые фракции собирают и растворитель выпаривают с получением 3,1 г (80%). Соль НС1 получают на фракции (0,5 г) в Е1ОН и осадок отфильтровывают, промывают простым диэтиловым эфиром и сушат с получением 0,43 г соединения 1Ь, температура плавления 220°С.
Пример В2. Получение соединения 2.
ТЕА (0,5 мл) добавляют к смеси промежуточного соединения 7 (0,0001 моль) в МеОН (10 мл) и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 24 ч. Растворитель выпаривают. Остаток кристаллизуют из ацетонитрила/простого диэтилового эфира. Осадок отфильтровывают и сушат с получением 0,036 г (50%) соединения 2, температура плавления 205°С.
Пример В3. Получение соединения 3.
.С2НРзО2
ТЕА (5 мл) добавляют при комнатной температуре к смеси промежуточного соединения 12 (0,0014 моль) в МеОН (100 мл). Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 48 ч. Растворитель выпаривают досуха. Остаток кристаллизуют из ЕЮАс/простого диэтилового эфира. Осадок отфильтровывают и сушат с получением 0,545 г (74%) соединения 3, температура плавления 121°С.
Пример В4. Получение соединения 4.
ТЕА (0,5 мл) добавляют к смеси промежуточного соединения 17 (0,0009 моль) в МеОН (80 мл). Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 4 дней. Растворитель выпаривают. Остаток кристаллизуют из простого диэтилового эфира. Осадок отфильтровывают и сушат с получением 0,19 г (32%) соединения 4, температура плавления 103°С.
Пример В5. Получение соединения 18.
- 44 010652
Смесь промежуточного соединения 48 (0,0002 моль) в ТРА (0,75 мл) и МеОН (15 мл) перемешивают при комнатной температуре в течение 24 ч. Растворитель выпаривают. Остаток кристаллизуют из простого диэтилового эфира. Осадок отфильтровывают и сушат с получением 0,071 г (59%) соединения 18.
Пример В6. Получение соединения 19.
Смесь промежуточного соединения 53 (0,0003 моль) в ТРА (1 мл) и МеОН (20 мл) перемешивают при комнатной температуре в течение 24 ч. Растворитель выпаривают досуха. Остаток кристаллизуют из МеОН/СН3С№простого диэтилового эфира. Осадок отфильтровывают и сушат с получением 0,133 г (80%) соединения 19, температура плавления 174°С.
Пример В7. Получение соединения 20.
Смесь промежуточного соединения 57 (0,00005 моль) в ТРА (0,25 мл) и МеОН (10 мл) перемешивают при комнатной температуре в течение 24 ч. Растворитель выпаривают. Остаток (0,04 г) кристаллизуют из СН3С№простого диэтилового эфира. Осадок отфильтровывают и сушат. Остаток (0,04 г) очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле ЫСйгоргер® ΝΉ2 (25-40 мкм) (элюент: ОСМ/МеОН/Н2О 80/20/2). Чистые фракции собирают и растворитель выпаривают с получением 0,02 г (80%) соединения 20, температура плавления 90°С.
Пример В8. Получение соединения 21.
Смесь промежуточного соединения 60 (0,0001 моль) в ТРА (0,5 мл) и МеОН (10 мл) перемешивают при комнатной температуре в течение ночи. Растворитель выпаривают. Остаток (0,15 г) очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле ЫСйгоргер® ЫН2 (25-40 мкм) (элюент: ОСМ/МеОН/Н2О 80/20/2). Чистые фракции собирают, и растворитель выпаривают с получением 0,064 г (78%) соединения 21, температура плавления 83°С.
Пример В9. Получение соединения 22.
Смесь промежуточного соединения 65 (0,002 моль) в ТРА (6 мл) и МеОН (120 мл) перемешивают при комнатной температуре в течение 24 ч. Растворитель выпаривают досуха. Остаток кристаллизуют из СН3С№МеОН/простого диэтилового эфира. Осадок отфильтровывают и сушат с получением 0,9 г (87%) соединения 22, температура плавления 183°С.
Пример В10. Получение соединения 23.
- 45 010652
Смесь промежуточного соединения 72 (0,0001 моль) в ТЕЛ (0,5 мл) и МеОН (10 мл) перемешивают при комнатной температуре в течение 48 ч. Растворитель выпаривают. Остаток кристаллизуют из простого диэтилового эфира. Осадок отфильтровывают и сушат с получением 0,059 г (59%) соединения 23, температура плавления 182°С.
Пример В11. Получение соединения 24.
Смесь промежуточного соединения 75 (0,0003 моль) в ТЕА (1 мл) и МеОН (20 мл) перемешивают при комнатной температуре в течение 24 ч. Растворитель выпаривают досуха. Остаток кристаллизуют из МеОН/СН3С№простого диэтилового эфира. Осадок отфильтровывают и сушат с получением 0,147 г (78%) соединения 24, температура плавления 160°С.
Пример В12. Получение соединения 25.
Смесь промежуточного соединения 82 (0,0009 моль) в ТЕА (2,5 мл) и МеОН (56 мл) перемешивают при комнатной температуре в течение 24 ч. Растворитель выпаривают досуха. Остаток очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (25-40 мкм) (элюент: ОСМ/МеОН/Н2О 90/10/1). Чистые фракции собирают и растворитель выпаривают. Остаток кристаллизуют из ΌΙΡΕ. Осадок отфильтровывают и сушат с получением 0,286 г (53%) соединения 25, температура плавления 80°С.
Пример В13. Получение соединения 26.
Смесь промежуточного соединения 84 (0,0012 моль) в ТЕА (3 мл) и МеОН (60 мл) перемешивают при комнатной температуре в течение 24 ч. Растворитель выпаривают досуха. Остаток кристаллизуют из ЭСМ/МеОН. Осадок отфильтровывают, промывают простым диэтиловым эфиром и сушат с получением 0,322 г (50%) соединения 26, температура плавления 188°С.
Пример В14. Получение соединения 27.
Смесь промежуточного соединения 89 (0,001 моль) в ТЕА (2,5 мл) и МеОН (50 мл) перемешивают при комнатной температуре в течение 24 ч, затем выпаривают досуха. Остаток кристаллизуют из МеОН/СН3С№простого диэтилового эфира. Осадок отфильтровывают, промывают водой и сушат с получением 0,33 г (55%) соединения 27, температура плавления 171°С.
Пример В15. Получение соединения 28.
- 46 010652
Смесь промежуточного соединения 93 (0,00007 моль) в ТЕА (0,2 мл) и МеОН (4 мл) перемешивают при комнатной температуре в течение 3 дней, затем выпаривают досуха с получением 0,041 г (100%) соединения 28, температура плавления 80°С.
Таблица Е-2 перечисляет соединения, которые получают в соответствии с одним из указанных выше примеров. В таблицах используют следующие сокращения: .С2НЕ3О2 - трифторацетат, т.пл. - температура плавления.
Таблица Е-2
Конечные соединения
г
С^НГзОз; Нвсоединения ΪΛζΠρ. [ВЦдпл 1бЗ°С .НС1; мвсоединения 1Ь;ГВЦ;тпл 220°С
/Л о >οι «-у'-'
С2НР3О2; № соединения 2: пр (В2);т пл 205°С № соединения 3; пр. [ВЗ]; т.пл 121°С
Лп к. ^уи 1« ,„,ώ}
С^НГаСЬ; № соединения 4; пр. [В4]; Т ИП ЮЗ°С С2НР3О2; Ив соединения 5; пр. ГВПхтлп 120°С
г,..хо ,т.До
< С2НГ3 О;; Ν» соединений б; рр |Ы ]; т. пл 132ЙС С^НРзОг» № соединения 7; пр. [В1]; т.пл 136°С
.ДуМ й ..АА
С2НР3О2; Не соединения 8; пр. |В1];тпл Ц0°С С2НР3О2; Νβсоединения9; гр. [В11;т.пл 217°С
СгЯРзОи; Нв соединения 10; гр. [В1];тпп 192°С С2НР3О2; № соединения 11; гр. [В1]; т пп 186°С
А.!.ОД,
С2ЛР3О2 . Н;О; Ыв соединения 12; ’Р [В2]; т.пл 192°С С2НР3О2; Ив соединении 13; пр. (В2]; т.пл 202*’С
- 47 010652
С2НГ3О2; N2 соединения 14; πρ.[Β2]; т.пл 145 °€ С2НР3О2; № соединения 15; пр. [В2]; т пл> 260°С
сг^ *
2 С2НР3О2.1/2 Η2Ο; Мг соединения 16; пр [Β2]; тпл 180°С . С4Н10О .С2НР3О2; Мг соединения 17; пр. [ВЗ]; тпл, 138°С
и ЧАу'Х
.С2НГ3О2 (1Л); Νί соединения ПР [В5] .С2НР3О2 (1:1); № соединения 19; пэ [В6]; т.пл. 174°С
г
№ соединения 20; лр[В7]; тлл90°С № соединения 21; пр. [В8]; т.пл.83°С
’^οχγ
№ соединения 22; пр [В9]; т.пп. 183”С С2НР3О2 (1'1); Мгсоединения 23; гр. [В10]; Т.пл. 182°С
Ί юЛл а
.С2НР3О2 (1:1); № соединения 24; пр [ВИ]; тпл. 160°С 1 С2НР3О2 (1:1); м»соединения 25; лр. [В12]; т.пл. 80°С
- 48 010652
νσ~ηχτ° Ησ,Μγ^*₽Ν >
С2НР3О2 (1:1); ·Νι соединения 26; пр [В 13]; тпл. 18«°С .С2НГ3О2 (1:1); № соединения 27; лр [В14]; ТПП 17ГС
и ί4/'·' исД]А*н
С2НГ3О2 (1:1); № соединения 28; пр. [В 15]; тпл 80°С .С2НГ3О2 (1:1); Νί соединения 29; пр (В1); т.пл. 173ФС
,й^СиХ0
/7 ггп л /». ι ш__________ . ... гт «к .ν2ΠΓ3^ Μ·νί Ι4Βлп, пр. Т.пл. 197°С Л ТГГ» Л /1.14. ... п. гпчч Д^2ПГЗМ2 ν;ιΛ па соединения >1; пр. [В1); тпл. 160°С
Г^СП нсЛуС «ум
.С2НЕ3О2 (1:1); №соеди»ения 32; пр [В1]; тпл 18б°С .СзНРзОг (1:1); Νί соединения 33; пр [В1]; т.пл. 196°С
Ν»Соединения 34; пр. [ВЦ; тпл. 287°С № соединения 35; лр. ГВЦ
^СГ1У?
.С2НГ3О2 (1:1); (^соединения 36; пр. [В2]; тпл >зоо°с .СгНРэОг(1:1); (^соединения 37; пр. [В2]; тпл 189°С
- 49 010652
г
.С2НГ3О2 (1:1); № соединения 38; пр. [В2]; тпл.188°С .С2НК3О2 (1:1); № соединения 39; пр [В2]; тпл. 239°С
Хим^
.СгНГзОгОЛ); № соединения 40; пр. [В2]; т.пл. 183°С •С2НГ3О2 (1:1); Νβ соединения 41; пр [В2]; т.пл. 148°С
.С2НГ3О2 (1:1); № соединения 42; пр [В2]; тпл 134°С .С2НГ3О2 (1:1); Ыасоединения 43; пр [В2]; т.пл. 143°С
.С2НР3О2 (1:1); N9 соединения 44; пр [В2] ; тпл 124°С .С2НН3О2 (1:1); [^соединения 45; пр. [В2]; т.пл. 116°С
цгпР не/γΜ О ухх
.С2НГ3О2 (1:1); № соединения 46; пр. рВ2]; тпл. 183°С .С2НР3О2 (1:1); № соединения 47; пр. [В2}; тпл 16142
>уСтпэ
С2НГ3О2 (1:1); Ν® соединения 48; пр. [В2]; тпл 181°С Ν»соединения 49; ΠΡ· [В2]; т.пл. 1О4°С
- 50 010652
. ζ../ вААн 1
Νίсоединения 50; лр. [В2]; тпл 114*0 СгИРзОгСЫ); ^соединения 51; пр. [В2]; тпл 140*С
н
С2НР3О2 (1:1); № соединения 52; пр. (В2); т.пп. 114*С С2НР3О2 (1:1); № соединения 53; лр. [В2]; тпл 178*С
Ъ χΗΥ€Γθχ/’Ν „ЛуМ '
С2НН3О2 (1:1); ж соединения 54; пр. [В2]; т.пл. 159*0- С2НР3О2(1:1); ^соединения 55; лр. [В2]; тпл. 144*С
СГ»^'
№ соединения 56; пр. [В2]; т ип. 145°С Νί соединения 57; пр. [В2]; тпл.100*С
.4а:,х
С2НГ3О2 (1:1); № соединения 58; ηρ. [В2); тпл. 130*0 Ν» соединения 59; пр. [В2]; т.пл. 122*С
ι^ ζ
Не соединения 60; пр. [В2]; т.пл 105*0 N1 соединения 61; пр. [В2],’ т.нп. 117°С
ххглс Τζη Λ1)
С2НР3О2 (1:1); Ν» соединения 62; пр. [В2]; тпл. 162*0 .С2НР3О2 (1:1); № соединения 63; пр. [В2]; т ед 110°С [
- 51 010652
^.сгХ ^Ап· р ^0X^0
С2НГ3О2СЯ); ^соединения 64; пр. (В2); т.пл. 135ФС .С2НГ3О2 (1:1); №соедннения 65; пр. [В7]; тж. 111 °С
π^Β'ΐ’Ί’
№ соединения 66; пр. [В7]; т.пл. 88°С .СгНГзОг (1:1); ^соединения 67; пр. (В7); т.пл. 1194?
.,ΓΥ-ΧΑΧ ' ’ δ Азох Ч
№ соединения 68; пр [В7]; т.пл 210°С ^соединения 69; пр.{В9]; т.пл. ИОСС
н 'ОЧ'Х °γ^
№ соединения 70; пр |В9]; т.пл. 80°С № соединения 71; пр. ГВ9] £ т.пл 1144?
,Α^ 1 г 7
№ соединения 72; пр [В91; т.пл. 219°С № соединения 73; пр (В1 Ц; т пл.984?
- 52 010652
№ соединения 74; пр. {В 12]; т.пл. 1494 .С2НР3О2 (1:1); № соединения 75; пр [В12]; т.пл 184°С
Ч-мн Я
.С2НР3О2 (1:1); ^соединения 76; пр.(В15]; тип. 1644 .С2НР3О2 (1:1.4); № соединения 77; пр [В5]; т пл. 1904
ΕΎΎ!—Г*4! χΜ 1
.С2НР3О2 (1:1.3); № соединения 78; пр. (В2); т.пл. 1144 .С2НР3О2 (1:1.27); №соеди»ения 79; ед. [В1]; т.ял. 1894
.,. Υ’
.С2НР3О2 (Г.2.24); № соединения 80; пр. [В1]; т.пл. 1704 .СзНРзСЪ(1:1.39); ^соединения 81; ед [В1]
С. Фармакологический пример.
Анализ ίη νίΐΓΟ ингибирования гистондеацетилазы (см. пример С.1) измеряет ингибирование ферментативной активности НИАС, полученное с помощью соединений формулы (I).
Клеточная активность соединений формулы (I) определяется на опухолевых клетках А2780 с использованием колориметрического анализа клеточной токсичности или выживаемости (Моктапп Т1т, 1оита1 о£ !ттипо1од1са1 МеШокк 65: 55-63, 1983) (см. пример С.2).
Растворимость соединения оценивает способность соединения находиться в растворе. В первом способе измеряется способность соединения оставаться в водном растворе при разбавлении (см. пример С.3.а). Исходные растворы ИМ8О разбавляют одним водным буферным растворителем на трех последовательных стадиях. После каждого разбавления измеряют мутность с помощью нефелометра.
Во втором способе растворимость соединения при других рН может измеряться с использованием хемилюминесцентного детектора азота (см. пример С.3.Ь).
Проницаемость лекарственного средства выражает его способность перемещаться из одной среды в другую или через другую, в частности его способность перемещаться через интестинальную мембрану в кровоток и/или из кровотока в мишень. Проницаемость (см. пример С.4) может измеряться посредством создания иммобилизованного на фильтре искусственного мембранного слоя фосфолипида. При исследовании иммобилизованной на фильтре искусственной мембраны формируют сэндвич с помощью 96-луночного планшета для микротитрования и 96-луночного фильтровального планшета, так что каждая составная лунка разделяется на две камеры, с донорным раствором в нижней части и акцепторным раство
- 53 010652 ром в верхней, разделенные 125 мкм микрофильтровальным диском (0,45 мкм поры), покрытым 2% (мас./об.) додекановым раствором диолеилфосфатидилхолина, при таких условиях, что мультиламмелярные бислои образуются внутри каналов фильтра, когда система вступает в контакт с водным буферным раствором. Проницаемость соединений через эту искусственную мембрану измеряется в см/с. Целью является посмотреть проникновение лекарственных средств через параллельную искусственную мембрану при двух различных рН: 4,0 и 7,4. Детектирование соединения осуществляется с помощью УФ-спектрометрии на оптимальных длинах волн в пределах между 250 и 500 нм.
Метаболизм лекарственных средств означает, что липидрастворимое ксенобиотическое или эндобиотическое соединение ферментативно преобразуется в полярный, водорастворимый и экскретируемый метаболит (метаболиты). Главным органом для метаболизма лекарственных средств является печень.
Метаболические продукты часто являются менее активными, чем исходное лекарственное средство, или неактивными. Однако некоторые метаболиты могут иметь повышенную активность или токсические воздействия. Таким образом, метаболизм лекарственных средств может включать процессы как детоксикации, так и интоксикации. Одна из главных систем ферментов, которая определяет способность организма иметь дело с лекарственными средствами и химикалиями, представлена монооксигеназами цитохрома Р450, которые представляют собой NΑ^ΡН-зависимые ферменты. Метаболическая стабильность соединений может определяться ίη νίίτο с использованием субклеточной ткани человека (см. пример С.5.а). Здесь метаболическая стабильность соединений выражается как % лекарственного средства, метаболизированный после 15 мин инкубирования этих соединений вместе с микросомами. Количественное определение соединений осуществляется посредством анализа ЖХ-МС. Метаболическая стабильность соединений может также определяться посредством вычисления времени полужизни соединений в клетках гепатоцитов крыс (см. пример С.5.Ь).
Показано, что множество противоопухолевых агентов активируют белок р21, включая агенты, повреждающие ДНК, и ингибиторы гистондеацетилазы. Агенты, повреждающие ДНК, активируют ген р21 через супрессор опухоли р53, в то время как ингибиторы гистондеацетилазы транскрипционно активируют ген р21 через фактор транскрипции 8р1. Таким образом, агенты, повреждающие ДНК, активируют промотор р21 посредством р53-чувствительного элемента, в то время как ингибиторы гистондеацетилазы активируют промотор р21 посредством сайтов кр1 (расположенных в области от -60 п.н. до +40 п.н. по отношению к ТАТА-боксу), оба они приводят к увеличению экспрессии белка р21. Когда промотор р21 в клетках состоит из 1300 п.н. фрагмента промотора р21, который не содержит р53-чувствительных элементов, он является, соответственно, нечувствительным к агентам, повреждающим ДНК. Способность соединений индуцировать р21 может оцениваться несколькими способами. Первый способ заключается в обработке клеток опухоли соединением, представляющим интерес, и, после лизиса клеток, в детектировании индуцирования р21 с помощью иммуносорбентного анализа с ферментом, связанным с р21 (№ΆΡ1 ЕЫ8А, Опсодепе). Анализ р21 представляет собой сэндвич-иммуноферментный анализ, использующий как моноклональные антитела мыши, так и поликлональные антитела кролика. Поликлональные антитела кролика, специфичные к белку р21 человека, иммобилизуются на поверхности пластиковых лунок, поставляемых в наборе. Любой р21, присутствующий в образце, который должен анализироваться, будет связываться с захватывающим антителом. Биотинилированное детекторное моноклональное антитело также распознает белок р21 человека и будет связываться с любым р21, который удерживается захватывающим антителом. Детекторное антитело, в свою очередь, связывается посредством стрептавидина, конъюгированного с пероксидазой хрена. Пероксидаза хрена катализирует преобразование хромогенного субстрата тетраметилбензидина из бесцветного раствора в голубой раствор (или желтый, после добавления останавливающего реагента), интенсивность окраски которого пропорциональна количеству белка р21, связанного с планшетом. Окрашенный продукт реакции количественно определяется с использованием спектрофотометра. Количественное определение достигается посредством построения стандартной кривой с использованием известных концентраций р21 (поставляемого лиофилизованным). Этот анализ может измерять индуцирование р21 как следствие повреждения ДНК или как следствие ингибирования гистондеацетилазы (см. пример С.6.а). Другой способ исследует способность соединений к индуцированию р21 как следствие ингибирования НЭАС на клеточном уровне. Клетки могут стабильно трансфицироваться вектором экспрессии, содержащим 1300 п.н. фрагмент промотора р21, который не содержит р53-чувствительных элементов, и при этом увеличение экспрессии репортерного гена по сравнению с контрольными уровнями идентифицирует соединение как имеющее способность к индуцированию р21. Репортерный ген представляет собой флуоресцентный белок, и экспрессия репортерного гена измеряется как величина испускаемого флуоресцентного света (см. пример С.6.Ь). Последний способ представляет собой способ ίπ у|уо, в котором мышей используют для скрининга фармацевтической активности соединения. Описанные выше стабильно трансформированные опухолевые клетки могут вводиться мышам в количестве, достаточном для осуществления продуцирования опухоли. После того, как опухолевые клетки получают время, достаточное для образования опухоли, потенциально активное соединение может вводиться животным, и воздействие указанного соединения на опухолевые клетки оценивается посредством измерения экспрессии репортерного гена. Инкубирование с фармацевтически активными соединениями будет приводить к увеличению экспрессии репортерного гена по сравнению с контрольными уровнями (см. пример С.6.с).
- 54 010652
Специфичные ингибиторы НЭАС не должны ингибировать другие ферменты подобно избыточным белкам СУР Р450. Белки СУР Р450 (экспрессируемые Е. сой) 3А4, 2Ό6 и 2С9 преобразуют их специфичные субстраты во флуоресцентную молекулу. Белок СУР3А4 преобразует 7-бензилокситрифторметилкумарин (ВЕС) в 7-гидрокситрифторметилкумарин. Белок СУР2Э6 преобразует 3-[2-(N,N-диэтил-Nметиламино)этил]-7-метокси-4-метилкумарин (АММС) в гидрохлорид 3-[2-(N,N-диэтиламино)этил]-7гидрокси-4-метилкумарина, и белок СУР2С9 преобразует 7-метокси-4-трифторметилкумарин (МЕС) в 7гидрокситрифторметилкумарин. Соединения, ингибирующие ферментативную реакцию, будут приводить к уменьшению сигнала флуоресценции (см. пример С.7).
Пример С.1. Анализ ίη νίΙΐΌ ингибирования гистондеацетилазы.
Пример С.1.а. Анализ ίη νίίΓΟ с [3Н]-меченным субстратом.
Ядерные экстракты НеЬа (поставщик: В1ото1) инкубируют при 60 мкг/мл с 75 мкМ субстрата. В качестве субстрата для измерения активности НЭАС используют синтетический пептид, т.е. аминокислоты 14-21 гистона Н4. Субстрат биотинилируют на МН2-концевой части спейсером из 6-аминогексановой кислоты, и защищают на СООН-концевой части с помощью амидной группы, и специфично [3Н]-ацетилируют на лизине 16. Субстрат биотин-(6-аминогексановый) С1у-А1а-([3Н]-ацетил-Еук-Агд-Н1к-Агд-ЕукУа1-МН2) добавляют в буфер, содержащий 25 мМ Нерек, 1М сахарозы, 0,1 мг/мл В8А и 0,01% Тгйон Х100, при рН 7,4. Через 30 мин реакцию деацетилирования завершают посредством добавления НС1 и уксусной кислоты (конечная концентрация 0,035 и 3,8 мМ, соответственно). После завершения реакции свободный 3Н-ацетат экстрагируют этилацетатом. После перемешивания и центрифугирования радиоактивность в аликвоте верхней (органической) фазы считают на β-счетчике.
Для каждого эксперимента контроли (содержащие ядерный экстракт НеЬа и ЭМ8О без соединения), пустое инкубирование (содержащее ПМ8О, но не ядерный экстракт НеЬа или соединение) и образцы (содержащие соединение, растворенное в ПМ8О, и ядерный экстракт НеЬа) запускают параллельно. В первом случае соединения исследуют при концентрации 10-5М. Если соединения показывают активность при 10-5М, строят кривую концентрация-реакция, при этом соединения исследуют при концентрации в пределах между 10-5 и 10-12М. При каждом исследовании пустое значение вычитают из значений как контроля, так и образца. Контрольный образец представляет собой 100% деацетилирования субстрата. Для каждого образца радиоактивность выражают как процент от среднего значения контролей. Соответствующие значения Κ'.'50 (концентрация лекарственного средства, необходимая для уменьшения количества метаболитов до 50% от контроля) вычисляются с использованием пробит-анализа для ранжированных данных. В описании воздействие исследуемых соединений выражается как ρΚ\0 (значение 1од значения Κ'.'50 со знаком минус) (см. табл. Е-3).
Пример С.1.Ь. Анализ ίη νίΙΐΌ с флуоресцентно меченным субстратом.
Используют НЭАС ЕйюгексеШ АбМ1у Аккау/Эгид О|ксоуегу Кй от Вюто1 (сай №: АК-500-0001). НЭАС ЕйюгексеШ Ас1М1у Аккау основывается на сочетании субстрата Е1иог бе Ьук (Е1иогодешс Н|к1он беАсе1у1аке Буку1) и проявителя. Субстрат Е1иог бе Ьук содержит ацетилированную боковую цепь лизина. Деацетилирование субстрата сенсибилизирует субстрат таким образом, что на второй стадии обработка Е1иог бе Ьук проявителем дает флуорофор.
Ядерные экстракты НеЬа (поставщик: Вюто1) инкубируют при 60 мкг/мл с 75 мкМ субстрата. Субстрат Е1иог бе Ьук добавляют в буфер, содержащий 25 мМ Тпк, 137 мМ №С1, 2,7 мМ КС1 и 1 мМ МдС12-6Н2О, при рН 7,4. Через 30 мин добавляют 1 объем проявителя. Флуорофор возбуждают с помощью света 355 нм и испускаемый свет (450 нм) детектируют на считывающем устройстве для флуорометрических планшетов.
Для каждого эксперимента контроли (содержащие ядерный экстракт НеЬа и буфер), пустое инкубирование (содержащее буфер, но не ядерный экстракт НеЬа) и образцы (содержащие соединение, растворенное в ЭМ^О и дополнительное разбавленное в буфере и ядерном экстракте НеЬа) запускают параллельно. В первом случае соединения исследуют при концентрации 10-5М. Когда соединения показывают активность при 10-5М, получают кривую концентрация-реакция, при этом соединения исследуют при концентрациях в пределах между 10-5 и 10-9М. Все образцы исследуют 4 раза. При каждом исследовании пустое значение вычитают из значений как контроля, так и образца. Контрольный образец представляет собой 100% деацетилирования субстрата. Для каждого образца радиоактивность выражают как процент от среднего значения контролей. Соответствующие значения Κ'.'50 (концентрация лекарственного средства, необходимая для уменьшения количества метаболитов до 50% от контроля) вычисляются с использованием пробит-анализа для ранжированных данных. В описании воздействие исследуемых соединений выражается как ρΚ\0 (значение 1од значения Κ'.'50 со знаком минус) (см. табл. Е-3).
Пример С.2. Определение антипролиферативной активности на клетках А2780.
Все исследуемые соединения растворяют в ЭМ8О и дополнительные разбавления делают в культурной среде. Конечные концентрации ЭМ8О никогда не превосходят 0,1% (об./об.) в анализах пролиферации клеток. Контроли содержат клетки А2780 и ЭМ8О без соединения, и пустые опыты содержат ПМ8О, но не клетки. МТТ растворяют в РВ8 при 5 мг/мл. Приготавливают глициновый буфер, содержащий 0,1М глицина и 0,1М №С1, с №ОН (1н.) в качестве буфера для поддержания рН 10,5 (все реагенты от Мегск).
Клетки А2780 карциномы яичников человека (любезно предоставленные Όγ. Т.С. НапиНои [Еох Сйаке
- 55 010652
Сапсег Сспкс, Рсипкукаша, И8А]) культивируют в среде КРМ1 1640, дополненной 2 мМ Ь-глутамина, 50 мкг/мл гентамицина и 10% фетальной сыворотки теленка. Клетки рутинным образом выдерживают в виде культур монослоя при 37°С в увлажненной 5% атмосфере СО2. Клетки пересаживают раз в неделю с использованием раствора трипсин/ЕЭТА при отношении разделения 1:40. Все среды и вспомогательные материалы получают от Ь1£с Тесйпо1од1С8. Клетки не содержат загрязнения микоплазмой, как определяется с использованием набора Ссп-РгоЬс Мусор1а§та Тккис СиНигс (поставщик: ВюМспсих).
Клетки высевают в 96-луночные планшеты для культивирования ΝϋΝΟ™ (поставщик: Ьйс Тсс11по1ощс5) и дают им возможность для прилипания к пластику в течение ночи. Плотности, используемые для высевания на планшеты, составляют 1500 клеток на лунку при общем объеме среды 200 мкл. После адгезии клеток на планшетах среду заменяют и добавляют лекарственные средства и/или растворители до конечного объема 200 мкл. После 4 дней инкубирования среду заменяют 200 мкл свежей среды и плотность и жизнеспособность клеток оценивают с использованием анализа на основе МТТ. В каждую лунку добавляют 25 мкл раствора МТТ и клетки дополнительно инкубируют в течение 2 ч при 37°С. Затем среду осторожно отсасывают и солюбилизируют продукт голубой МТТ-формазан посредством добавления 25 мкл глицинового буфера, а затем 100 мкл ЭМ8О. Планшеты для микроисследований встряхивают в течение 10 мин на шейкере для микропланшетов и измеряют коэффициент поглощения на 540 нм с использованием 96-луночного спектрофотометра Етах (поставщик: 8орасйст). В пределах эксперимента результаты для каждого экспериментального условия представляют собой среднее значение по 3 повторяющимся лункам. Для целей начального скрининга соединения исследуют при одной фиксированной концентрации 10-6М. Для активных соединений эксперименты повторяют для установления полных кривых концентрация-реакция. Для каждого эксперимента контроли (не содержащие лекарственного средства) и пустое инкубирование (не содержащее клеток или лекарственных средств) запускают параллельно. Пустое значение вычитают из всех значений контролей и образцов. Для каждого образца среднее значение роста клеток (в единицах коэффициента поглощения) выражается как процент от среднего значения роста клеток контроля. Когда они являются соответствующими, значения 1С50 (концентрация лекарственного средства, необходимая для уменьшения роста клеток до 50% от контроля) вычисляют с использованием пробит-анализа для ранжированных данных (Ршпсу, Ό.Ρ, РгоЬб Апа1у8с8, 2пб Еб. Сйар1сг 10, Сгабсб Кскропкск, СатЬпбдс Ипксгайу Ргскк, СатЬпбдс 1962). В описании воздействия исследуемых соединений выражаются как р1С50 (значение 1од значения 1С50 со знаком минус) (см. табл. Р-3).
Пример С.3. Растворимость/стабильность.
С.3.1. Растворимость в водных средах.
На первой стадии разбавления 10 мкл концентрированного исходного раствора активного соединения, солюбилизированного в ЭМ8О (5 мМ), добавляют к 100 мкл фосфатцитратного буфера, рН 7,4, и перемешивают. На второй стадии разбавления аликвоту (20 мкл) от первой стадии разбавления дополнительно распределяют в 100 мкл фосфатцитратного буфера, рН 7,4, и перемешивают. Наконец, на третьей стадии разбавления образец (20 мкл) от второй стадии разбавления дополнительно разбавляют в 100 мкл фосфатцитратного буфера, рН 7,4, и перемешивают. Все разбавления осуществляют в 96-луночных планшетах.
Непосредственно после последней стадии разбавления мутность на всех трех последовательных стадиях разбавления измеряют с помощью нефелометра. Разбавление делают по 3 раза для каждого соединения для исключения случайных ошибок. На основе измерений мутности осуществляют оценочное распределение на 3 класса. Соединения с высокой растворимостью получают оценку 3, и для этих соединений первое разбавление является прозрачным. Соединения со средней растворимостью получают оценку 2. Для этих соединений первое разбавление является непрозрачным, а второе разбавление является прозрачным. Соединения с низкой растворимостью получают оценку 1, и для этих соединений как первое, так и второе разбавление являются непрозрачнымы (см. табл. Р-3).
С.3.Ь. Растворимость/стабильность при различных рН.
Растворимость соединения при различных значениях рН может также измеряться с использованием хемилюминесцентного детектора азота (см. табл. Р-3).
Пример С.4. Параллельный анализ проницаемости искусственной мембраны.
Исходные образцы (аликвоты по 10 мкл исходного раствора из 5 мМ в 100% ЭМ8О) разбавляют в планшете с глубокими лунками или планшете Ргс-т1х, содержащем 2 мл системы водных буферов, рН 4 или рН 7,4 (Р8В4 8у51ст 8о1ибоп СопсспЦЩс (р1ОЦ)).
Перед добавлением образцов в эталонный планшет в лунки добавляют 150 мкл буфера и осуществляют пустое УФ-измерение. После этого буфер выливают и планшет используют в качестве эталонного планшета. Все измерения осуществляют в УФ-стойких планшетах (поставщик: Сойаг или Сгстсг).
После пустого измерения эталонного планшета 150 мкл разбавленных образцов добавляют в эталонный планшет и 200 мкл разбавленных образцов добавляют в донорный планшет 1. Акцепторный фильтровальный планшет 1 (поставщик: М1Шрогс, тип: МА1Р N45) покрывают 4 мкл раствора, образующего искусственную мембрану (1,2-диолеоил-§п-глицеро-3-фосфохолин в додекане, содержащем 0,1% 2,6-ди-трет-бутил-4-метилфенола), и помещают поверх донорного планшета 1 с образованием сэндвича. Буфер (200 мкл) распределяют в акцепторные лунки сверху. Сэндвич покрывают крышкой и хранят в течение 18 ч при комнатной температуре в темноте.
- 56 010652
Пустое измерение акцепторного планшета 2 осуществляют посредством добавления 150 мкл буфера в лунки с последующим УФ-измерением. После пустого измерения акцепторного планшета 2 буфер выливают и 150 мкл акцепторного раствора переносят из акцепторного фильтровального планшета 1 в акцепторный планшет 2. Затем акцепторный фильтровальный планшет 1 удаляют из сэндвича. После пустого измерения донорного планшета 2 (см. выше) 150 мкл донорного раствора переносят с донорного планшета 1 на донорный планшет 2. Сканируют УФ-спектры лунок донорного планшета 2, акцепторного планшета 2 и эталонного планшета (с помощью 8рес!гаМАХ 190). Все спектры обрабатывают для вычисления проницаемости с помощью Р8К4р Соттапб 8оП\уаге. Все соединения измеряются по 3 раза. Карбамазепин, гризеофульвин, ациклогуанизин, атенолол, фуросемид и хлортиазид используют в качестве стандартов в каждом эксперименте. Соединения оценивают по 3 категориям: как имеющие низкую проницаемость (среднее воздействие <0,5х10-6 см/с; оценка 1), среднюю проницаемость (1х 10-6 см/с>среднее воздействие>0,5х10-6 см/с; оценка 2) или высокую проницаемость (>1х10-6 см/с; оценка 3).
Пример С.5. Метаболическая стабильность.
Пример С.5.а.
Препараты субклеточной ткани получают в соответствии с Соггой е! а1. (ХепоЬюйса 5: 453-462, 1975) посредством разделения в центрифуге после механической гомогенизации ткани. Ткань печени промывают 0,1М ТП5-НС1 (рН 7,4) буфером со льдом для отмывки избытка крови. Затем ткань промокают досуха, взвешивают и крупно нарезают, используя хирургические ножницы. Куски ткани гомогенизируют в 3 объемах 0,1М (рН 7,4) фосфатного буфера со льдом, используя либо Ройег-8 (Вгаип, Йа1у), снабженный тефлоновой ступкой, либо гомогенизатор 8огуа11 0тп1-М1х, в течение 7х10 с. В обоих случаях емкость поддерживают в/на льду во время процесса гомогенизации.
Гомогенаты тканей центрифугируют при 9000хд в течение 20 мин при 4°С, используя центрифугу 8огуа11 или Весктап ийгасейпГиде. Полученный супернатант хранят при -80°С и обозначают '89'.
Фракция 89 может дополнительно центрифугироваться при 100000хд в течение 60 мин (4°С) с использованием ультрацентрифуги Весктап. Полученный супернатант осторожно отсасывают, аликвотируют и обозначают 'цитозоль'. Лепешку повторно суспендируют в 0,1М фосфатном буфере (рН 7,4) при конечном объеме 1 мл на 0,5 г исходной массы ткани и обозначают 'микросомы'.
Все субклеточные фракции аликвотируются, немедленно замораживаются в жидком азоте и хранятся при -80°С до использования.
Для образцов, которые должны исследоваться, инкубационная смесь содержит РВ8 (0,1М), соединение (5 мкМ), микросомы (1 мг/мл) и систему, генерирующую NА^РΗ (0,8 мМ глюкоза-6-фосфат, 0,8 мМ хлорид магния и 0,8 единицы глюкоза-6-фосфат дегидрогеназы). Контрольные образцы содержат такой же материал, но микросомы заменяются термически инактивированными (10 мин при 95°С) микросомами. Извлечение соединений в контрольных образцах везде равно 100%.
Смеси предварительно инкубируются в течение 5 мин при 37°С. Реакция начинается в момент времени ноль (1=0) посредством добавления 0,8 мМ ΝΑΌΡ, и образцы инкубируются в течение 15 мин (1=15). Реакция завершается посредством добавления 2 объемов ИМ80. Затем образцы центрифугируют в течение 10 мин при 900хд и супернатанты хранят при комнатной температуре не более 24 ч до анализа. Все инкубирования осуществляют по 2 раза. Анализ супернатантов осуществляют с помощью ЖХ-МС анализа. Элюирование образцов осуществляют на Х1егга М8 С18 (50х4,6 мм, 5 мкм, ^а!ег§, И8). Используют систему ВЭЖХ АШапсе 2790 (поставщик: ^а!ег§, И8). Элюирование осуществляют с помощью буфера А (25 мМ ацетата аммония (рН 5,2) в Н2О/ацетонитрил (95/5)), растворитель В представляет собой ацетонитрил и растворитель С - метанол при скорости потока 2,4 мл/мин. Используемый градиент представляет собой увеличение концентрации органической фазы от 0 до более 50% В и 50% С в течение 5 мин, до 100% В за 1 мин линейным образом, и концентрацию органической фазы поддерживают постоянной в течение дополнительных 1,5 мин. Общий объем инъекции образцов равен 25 мкл.
Тройной квадрупольный масс-спектрометр Циайго (поставщик: Мюготакк, МапсНеЧег ИК), соединенный с источником Е8Е используют в качестве детектора. Источник и температура десольватации устанавливаются при 120 и 350°С, соответственно, и азот используют в качестве газа для распыления и сушки. Данные получают в режиме положительного сканирования (реакция с участием одного иона). Напряжение конуса устанавливают при 10 В, и время сканирования равно 1 с.
Метаболическую стабильность выражают как % метаболизма соединения после 15 мин инкубирования в присутствии активных микросом:
_ , „„„ „Общий ионный ток (ПС) Е(ас1) при / = 15. , (Е(асе))(% ме т аболизма=100%- ((——--------------*----—*--'-Л--) х 100)
ПС Е(аа) при ι = 0
Соединения, которые имеют процент метаболизма меньший, чем 20%, определяют как метаболически высоко стабильные. Соединение, которое имеет метаболизм в пределах между 20 и 70%, определяют как промежуточно стабильные, и соединения, которые демонстрируют процент метаболизма выше чем 70, определяют как имеющие низкую метаболическую стабильность. Всегда, когда осуществляют скрининг метаболической стабильности, включаются три эталонных соединения. Верапамил включается как соединение с низкой метаболической стабильностью (% метаболизма 73%). Цизаприд включается как
- 57 010652 соединение со средней метаболической стабильностью (% метаболизма 45%), и пропанол включается как соединение с метаболической стабильностью от промежуточной до высокой (25% метаболизма). Эти эталонные соединения используются для проверки анализа метаболической стабильности.
С.5.Ь. Метаболическая стабильность для культур клеток гепатоцитов крысы.
Гепатоциты крысы выделяют у самцов крыс 8ргадие ИоМеу. Соединения растворяют в 5 мМ исходном растворе в 100% ЭМ8О и инкубируют при конечной концентрации 5 мкМ в течение 0, 15, 30, 60 и 120 мин с культурами клеток гепатоцитов крысы (0,5 млн жизнеспособных клеток/0,5 мл), используя 24-луночные планшеты.
Образцы приготавливают для ЖХ-МС посредством добавления 2 объемов ЭМ8О. Образцы тщательно встряхивают, а затем центрифугируют при 900хд в течение 10 мин (комнатная температура). Все эксперименты осуществляют по 3 раза. 50 мкл полученного супернатанта анализируют посредством ЖХ-МС.
При ЖХ-МС элюирование образцов осуществляют на колонке С18 Нурегзб ΒΌ8 (50x4,6 мм, 5 мкм, Т11еппо11урег811. иК). Система ВЭЖХ содержит систему доставки 8игуеуог (8игуеуог Шс., 8ап 1озе, И8), снабженную устройством для автоматического сбора образцов 8игуеуог. Элюирование осуществляют с помощью буфера А (10 мМ ацетата аммония (рН 6,9) в Н2О/ацетонитриле (95:5)) и растворителе В (ацетонитрил) при скорости потока 1,2 мл/мин. Используемый градиент представляет собой 0,5 мин растворителя А в качестве начального условия, с последующим увеличением концентрации органической фазы от 0% В до 95% В в течение 2 мин, линейным образом. Эту фазу поддерживают стационарно в течение дополнительных 2 мин и уменьшают опять до 0% В в течение 0,5 мин.
Общий объем инъекции образцов составляет 50 мкл. Температуру печки на колонке поддерживают при 40°С. Поток ЖХ разделяют для МС детектирования и 0,1 мл вводят в источник. Для детектирования используют тройной квадрупольный масс-спектрометр Т8О ОнапЦцп (Тйегтойпшдап, Ьа1о11а, И8А), масс-спектрометр, соединенный с источником Е8Е Источник напряжения устанавливают на 3800 В, температуру капилляра - на 300°С. Масс-спектрометр работает в режиме положительных ионов в 8!М, настроенный на массу М+Н, с шириной сканирования 1 Да, для целей количественного определения. Управление инструментом, получение и обработка данных осуществляются с использованием программного обеспечения ХсаНЬиг (ТйегтоИпшдап, 8ап 1озе, СА, и.8.А). Метаболическая стабильность соединений в гепатоцитах крысы выражается как времена полужизни ш У1!го.
В качестве эталона используют соединение К306465 (заявка на международный патент \УО03/76422) (время полужизни ш νίΙΐΌ: 8 мин). Соединение 1 и соединение 5 исследуют, и они имеют время полужизни ш У1!го 81 и 60 мин, соответственно.
Пример С.6. Способность к индуцированию р21.
Пример С.6.а. Иммуносорбентный анализ р21 со связанным ферментом.
Следующий протокол применяется для определения уровня экспрессии белка р21 в клетках А2780 карциномы яичников человека. Клетки А2780 (20000 клеток/180 мкл) высевают в 96-микролуночные планшеты в среде КРМ! 1640, дополненной 2 мМ Ь-глутамина, 50 мкг/мл гентамицина и 10% фетальной сыворотки теленка. За 24 ч перед лизисом клеток добавляют соединения при конечных концентрациях 10-5, 10-6, 10-7 и 10-8М. Все исследуемые соединения растворяют в ИМ8О и дополнительные разбавления осуществляют в культурной среде. Через 24 ч после добавления соединения супернатанты отделяют от клеток. Клетки промывают 200 мкл РВ8 со льдом. Лунки отсасывают и добавляют 30 мкл лизирующего буфера (50 мМ ТП8.НС1 (рН 7,6), 150 мМ №С1, 1 % №шбе1 р40 и 10% глицерина). Планшеты инкубируют в течение ночи при -70°С.
Соответствующие количества лунок для микротитрования удаляют из мешка из фольги и помещают в пустой держатель для лунок. Приготавливают рабочий раствор (1х) промывочного буфера (20х концентрата для промывки планшета: 100 мл 20-кратно концентрированного раствора РВ8 и поверхностно-активного вещества. Содержит 2% хлорацетамида). Стандарт из лиофилизованного р21 \УАЕ восстанавливают дистиллированной Н2О и дополнительно разбавляют разбавителем для образца (поставляется в наборе).
Образцы получают посредством их разбавления 1:4 в разбавителе для образца. Образцы (100 мкл) и стандарты р21 \УАЕ1 (100 мкл) вносят с помощью пипетки в соответствующие лунки и инкубируют при комнатной температуре в течение 2 ч. Лунки промывают 3 раза 1 х промывочным буфером, а затем в каждую лунку добавляют с помощью пипетки 100 мкл реагента для детектирования с антителами (раствор биотинилированного моноклонального антитела р21 \УАЕ1). Лунки инкубируют при комнатной температуре в течение 1 ч, а затем промывают 3 раза 1х промывочным буфером. 400х конъюгат (конъюгат пероксидазы и стрептавидина: 400-кратно концентрированный раствор) разбавляют, и 100 мкл 1х раствора добавляют в лунки. Лунки инкубируют при комнатной температуре в течение 30 мин, а затем промывают 3 раза 1х промывочным буфером и 1 раз дистиллированной Н2О. Раствор субстрата (хромогенного субстрата) (100 мкл) добавляют в лунки и лунки инкубируют в течение 30 мин в темноте при комнатной температуре. Стоп-реагент добавляют в каждую лунку в таком же порядке, как раньше добавляли раствор субстрата. Коэффициент поглощения в каждой лунке измеряют с использованием спектрофотометрического устройства для считывания планшетов на двух длинах волн 450/595 нм.
Для каждого эксперимента контроли (не содержащие лекарственного средства) и пустое инкубирование (не содержит ни клеток, ни лекарственных средств) запускают параллельно. Пустое значение вы
- 58 010652 читают из всех значений контроля и образцов. Для каждого образца значение для индуцирования р21 ^АЕ1 (в единицах коэффициента поглощения) выражают как процент от значения для р21 ^АЕ1, присутствующего в контроле. Процент индуцирования выше чем 130% определяется как значимое индуцирование. Исследуют девять соединений, и все они показывают значимое индуцирование при 10-6М.
Пример С.6.Ь. Клеточный способ.
Клетки А2780 (АТСС) культивируют в среде КРМП640, дополненной 10% ЕС8, 2 мМ Ь-глутамина и гентамицина, при 37°С в увлажненном инкубаторе с 5% СО2. Все растворы культур клеток поставляются С1Ьсо-ВКЬ (СаййегкЬигд, МО). Другие материалы поставляются Шпс.
Геномную ДНК извлекают из пролиферирующих клеток А2780 и используют в качестве шаблона для гнездового РСК-выделения промотора р21. Первую амплификацию осуществляют в течение 20 циклов при температуре отжига 55°С, используя пару олигонуклеотидов САССССССССТССТТСС и ТССССССССТСТСТСАСС, с геномной ДНК в качестве шаблона. Полученный 4,5 кЬ фрагмент, содержащий фрагмент от -4551 до +88 по отношению к ТАТА-боксу, повторно амплифицируется с помощью олигонуклеотидов ТССССТАСССАССССССССТССТТСС и АТАСТССАСТССССССССТСТСТСАСС в течение 20 циклов при отжиге при 88°С, в результате получают 4,5 кЬ фрагмент, а затем с помощью пары олигонуклеотидов ТССССТАССССТАСАТСССАССССАТАСАСАСАТС и АТАСТССАСТССССССССТСТСТСАСС в течение 20 циклов с отжигом при 88°С, в результате получают 1,3 кЬ фрагмент, содержащий фрагмент от -1300 до +88 по отношению к ТАТА-боксу. Сайты рестрикции КНо! и Крп!, присутствующие в олигонуклеотидах (подчеркнутая последовательность), используют для субклонирования.
Репортерная люцифераза удаляется из рСЬ3-Ьакю и заменяется репортерным 2кСгееп (от плазмиды р2кСгееп1-№) на сайтах рестрикции Крп[ и XЬаI. рСЬ3-Ьакю-2кСгееп-1300 конструируют посредством вставки рассмотренного выше 1,3 кЬ фрагмента промоторной области р21 человека в рСЬ3-Ьакю-2кСгееп на сайтах X1ю! и Крпк Все рестрикционные ферменты поставляются Воейппдег МапНенп (Сегтапу). Клетки А2780 высевают в 6-луночный планшет при плотности 2х105 клеток, инкубируют в течение 24 ч и трансфицируют 2 мкг рСЬ3-Ьакю-2кСгееп-1300 и 0,2 мкг вектора р8V2пео, используя Ыро£ес!ат1пе 2000 Дпуйгодеп, Вгикке1к, Ве1дшт), как описано производителем. Трансфицированные клетки выбирают в течение 10 дней с помощью С418 (С1Ьсо-ВКЬ, СаййегкЬигд, МО) и выращивают суспензии отдельных клеток. Через 3 недели получают отдельные клоны.
Выбранные клоны А2780 размножают и высевают при 10000 клеток на лунку в 96-луночные планшеты. Через 24 ч после высева клетки обрабатывают в течение дополнительных 24 ч соединениями (воздействуя на сайты 8р1 в ближней промоторной области р21). Впоследствии клетки закрепляют с помощью 4% РЕА в течение 30 мин и контрастно окрашивают красителем НоесНк!. Активирование промотора р21, приводящее к продуцированию 2кСгееп и, таким образом, к флуоресценции, отслеживают посредством Аксеп! Е1иогоккап (Тйегто ЬаЬкук!етк, Вгикке1к, Ве1дшт).
Для каждого эксперимента контроли (не содержащие лекарственных средств) и пустое инкубирование (не содержащее ни клеток, ни лекарственных средств) запускают параллельно. Пустое значение вычитают из всех значений контролей и образцов. Для каждого образца значение индуцирования р21 выражается как процент от значения для р21, присутствующего в контроле. Процент индуцирования больший, чем 130%, определяют как значимое индуцирование.
Исследуют 71 соединение, и все они показывают значимое индуцирование при 10-6М.
Пример С.6.с. Способ т у1уо.
Выбранный клон вводят как подкожную инъекцию (107 клеток/200 мкл) в бок голой мыши и измеряемую кронциркулем опухоль получают через 12 дней. Начиная с дня 12, животным дозируют, перорально или внутривенно, ежедневно в течение 6 дней растворитель и 20-40 мг/кг массы тела соединения (4-10 животных в каждом случае). Опухоли оценивают на флуоресценцию с помощью разработанной в лаборатории Аи1ота1еб \У1ю1е Вобу Ипадтд 8ук1ет (флуоресцентный стереомикроскоп типа О1утрик® 82X12, снабженный фильтром СЕР и соединенный с ССЭ камерой типа .ТА^ СММ90, контролируемый пакетом программного обеспечения на основе V^к^оп 8ой^аге от №1бопа1 ШкбитеШк®). В качестве эталона используют соединение К306465 (заявка на международный патент \УО03/76422). Соединения оценивают как инактивные (без измеряемой флуоресценции), более слабые, идентичные или лучшие, чем К.306465. Исследуют соединение 1, и оно лучше, чем К306465.
Пример С.7. Способность к ингибированию Р450.
Все исследуемые соединения растворяют в ЭМ8О (5 мМ) и осуществляют дополнительное разбавление до 5-10-4М в ацетонитриле. Дополнительные разбавления осуществляют в буфере для анализов (0,1М NаК фосфатный буфер, рН 7,4), и конечная концентрация в растворителе никогда не превышает 2%.
Анализ на белок СУР3А4 содержит на лунку 15 пкмоль Р450/мг белка (в 0,01М NаК фосфатном буфере+1,15% КС1), систему генерирования ΝΛΟΓΗ (3,3 мМ глюкоза-6-фосфата, 0,4 ед./мл глюкоза-6-фосфат дегидрогеназы, 1,3 мМ МАЭР и 3,3 мМ МдС12-6Н2О в буфер для анализа) и соединение при общем объеме анализа 100 мкл. После 5 мин предварительного инкубирования при 37°С ферментативная реакция начинается с добавления 150 мкМ субстрата флуоресцентного зонда ВЕС в буфер для анализов. После инкубирования в течение 30 мин при комнатной температуре реакцию прекращают после добавления 2 объемов ацетонитрила.
- 59 010652
Определение флуоресценции осуществляют на длине волны возбуждения 405 нм и длине волны испускания 535 нм. Кетоконазол (значение 1С50=3х10-8М) включается в этот эксперимент в качестве эталонного соединения. Анализ на белок СУР2О6 включает на лунку 6 пкмоль Р450/мг белка (в 0,01М ΝαΚ фосфатном буфере+1,15% КС1), систему генерирования ХЛЭРН (0,41 мМ глюкоза-6-фосфата, 0,4 ед./мл глюкоза-6-фосфат дегидрогеназы, 0,0082 мМ ΝΆΌΡ и 0,41 мМ МдС12-6Н2О в буфере для анализов) и соединение при общем объеме анализа 100 мкл. После 5 мин предварительного инкубирования при 37°С ферментативная реакция начинается при добавлении 3 мкМ субстрата АММС флуоресцентного зонда в буфер для анализов. После инкубирования в течение 45 мин при комнатной температуре реакцию прекращают после добавления 2 объемов ацетонитрила. Определение флуоресценции осуществляют на длине волны возбуждения 405 нм и длине волны испускания 460 нм. Хинидин (значение 1С50<5х10-8М) включают в качестве эталонного соединения в этом эксперименте.
Анализ на белок СУР2С9 содержит на лунку 15 пкмоль Р450/мг белка (в 0,01М ΝαΚ фосфатном буфере+1,15% КС1), систему генерирования ХЛЭРН (3,3 мМ глюкоза-6-фосфата, 0,4 ед./мл глюкоза-6фосфат дегидрогеназы, 1,3 мМ ΝΆΌΡ и 3,3 мМ МдС12-6Н2О в буфере для анализов) и соединение при общем объеме анализа 100 мкм. После 5 мин предварительного инкубирования при 37°С ферментативная реакция начинается при добавлении 200 мкМ субстрата МЕС флуоресцентного зонда в буфер для анализа. После инкубирования в течение 30 мин при комнатной температуре реакцию прекращают после добавления 2 объемов ацетонитрила. Определение флуоресценции осуществляют на длине волны возбуждения 405 нм и длине волны испускания 535 нм. Сульфафеназол (значение 1С50=6,8х 10-7М) включают в качестве эталонного соединения в этот эксперимент.
Для целей начального скрининга соединения исследуют при одной фиксированной концентрации 1 х10-5М. Для активных соединений эксперименты повторяют для установления полных кривых концентрация-реакция. Для каждого эксперимента контроли (не содержащие лекарственного средства) и пустое инкубирование (не содержащее ни фермента, ни лекарственных средств) запускают параллельно. Все соединения анализируют по 4 раза. Пустое значение вычитают из всех значений контроля и образцов. Для каждого образца среднее значение активности Р450 образца (в относительных единицах флуоресценции) выражают как процент от среднего значения активности Р450 контроля. Процент ингибирования выражают как 100% минус среднее значение активности Р450 образца. Соответствующие значения 1С50 (концентрация лекарственного средства, необходимая для уменьшения активности Р450 до 50% от контроля) вычисляются.
Таблица Е-3 Результаты соединений, которые исследуются в соответствии с примерами С.1.а, С.1.Ь, С.2, С.3.а и С.3.Ь
Номер соединения Ферментативная активность, р1Сго С.1.а. Ферментативная активность, р1Си> С.1.Ь Клеточная активность, р1С$о С.2 Растворимость С.З.а. Растворимость С.З.Ь, рН=2,3 (мг/мл)
5 8,6 6,5 2,0
1а е, е 9.2 8,2 3 1,4
6 8,2 6,3
7 8,5 6,1
3 8,5 6,7
4 8,7 7,0 3
17 7, 8 6,8
8 8,3 7,1 3,4
9 8,3 7,1
10 8,1 7,5 3 3,7
16 8,6 7,1 3
11 8,2 7,5 3 2,8
2 8,4 7,5 3
15 8,5 7,5
14 8,4 7,4 2,7
13 6,0 7,5 3
12 8,2 7.1 3
35 8,2 7
68 >9, 0 7,2 2, 5
63 >9, 0 7,5
67 8,3 7, 5 1,9
76 7,8 6,7
72 7,9 6,8
80 7,8 7,1
34 8,4 7,5
- 60 010652
33 30,0 7,5 1,6
32 8,0 8,4 1.5
21 8,5 7,6 1,9
49 8,7 7,5 з,з
53 10,0 8,0
20 9,5 8,1 2,7
64 8,9 7,8
62 9,5 Θ, 0
28 3.1 7,1
61 В, 9 7, 6
60 3,7 6, 9 3,1
59 9, 0 7,7
58 10,0 5,8
19 8,0 7,1
24 7,6 6,5 1,6
57 10,2 7,6 2,8
56 9,2 7.6
55 10,1 7,8 2,0
54 10,2 7,9
52 10,3 8,1
51 9,8 8,0
50 8,6 7,6 2,4
48 >9,0 8,2
66 >9,0 7,4 2.,7
73 7, 9 7, 1
47 8,8 8,0 4,0
74 8,2 7,1
46 9,0 8,0
31 8,2 7,4
75 7, 3 7,1
27 >9,0 8,0
45 9* 0 ¢,7 1,7
44 8, 2 7.4 1,8
43 8,5 7,8 2,1
29 7, 9 6,9
42 8,3 7,5
71 7,5 8.5
70 8,5 6,8
69 7,6 6,7
25 7,6 7,0
41 8,4 5,8
40 8, 5 7,5
23 8,4 7,5
22 9,1 7,2
26 >9,0 7,5
65 >9,0 7,5 1,6
39 9,0 7,5 2,0
30 9,0 7,5 2,1
38 >9,0 7, 5
37 8,6 7, 5
36 8,7 8,6 2,5
79 3,4 8,1 2,7
16 8,3 3.0
81 8,9 7,5
Ό. Пример композиции: таблетки с пленочным покрытием.
Получение сердцевины таблетки.
Смесь 100 г соединения формулы (I), 570 г лактозы и 200 г крахмала как следует перемешивают, а
- 61 010652 затем увлажняют с помощью раствора 5 г додецилсульфата натрия и 10 г поливинилпирролидона примерно в 200 мл воды. Влажную смесь порошка просеивают, сушат и опять просеивают. Затем добавляют 100 г микрокристаллической целлюлозы и 15 г гидрированного растительного масла. Все вместе как следует перемешивают и штампуют в виде таблеток с получением 10000 таблеток, каждая из них содержит 10 мг соединения формулы (Ι).
Покрытие.
К раствору 10 г метилцеллюлозы в 75 мл денатурированного этанола добавляют раствор 5 г этилцеллюлозы в 150 мл дихлорметана. Затем добавляют 75 мл дихлорметана и 2,5 мл 1,2,3-пропантриола и 10 г полиэтиленгликоля расплавляют и растворяют в 75 мл дихлорметана. Последний раствор добавляют к первому, а затем добавляют 2,5 г октадеканоата магния, 5 г поливинилпирролидона и 30 мл концентрированной окрашенной суспензии, и все вместе гомогенизируют. Сердцевины таблеток покрывают полученной таким образом смесью в устройстве для нанесения покрытий.

Claims (18)

  1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
    1. Соединение формулы (Ι) его Ν-оксидные формы, фармацевтически приемлемые аддитивные соли и их стереохимически изомерные формы, где каждый из п представляет собой целое число со значением 0, 1 или 2 и, когда п равно 0, тогда подразумевается прямая связь;
    каждый из т представляет собой целое число со значением 1 или 2;
    каждый из X независимо представляет собой N или СН;
    каждый из Υ независимо представляет собой О, 8 или ΝΚ4; где каждый из К4 представляет собой водород, С3-6алкил, С1-6алкилоксиС1-6алкил, С3-6циклоалкил, С3-6 циклоалкилметил, фенилС3-6алкил, -С(=О)-СНК5К6 или -8(=О)2-^СН3)2; где каждый из К5 и К6 независимо представляет собой водород, амино, С1-6алкил или аминоС1-6алкил и, когда Υ представляет собой ΝΕ4 и К2 находится в 7-положении индолила, тогда К2 и К4 вместе могут образовывать двухвалентный радикал
    -(СН2)2- (а-1) или
    -(СН2)3- (а-2);
    К1 представляет собой водород, С3-6алкил, гидроксиС3-6алкил, С3-6алкилсульфонил, С3-6алкилкарбонил или моно- или ди(С1-6алкил)аминосульфонил;
    К2 представляет собой водород, гидрокси, амино, галоген, С3-6алкил, циано, С2-6алкенил, полигалогенС1-6алкил, нитро, фенил, С1-6алкилкарбонил, гидроксикарбонил, С1-6алкилкарбониламино, С3-6алкилокси или моно- или ди(С1-6алкил)амино;
    К3 представляет собой водород, С3-6алкил или С3-6алкилокси и, когда К2 и К3 представляют собой соседние атомы углерода, они могут образовывать двухвалентный радикал -О-СН2-О-.
  2. 2. Соединение по п.1, в котором каждый из п представляет собой целое число со значением 0 или 1;
    каждый из К4 представляет собой водород, С3-6алкил, С1-6алкилоксиС1-6алкил, С3-6циклоалкил или фенилС1-6алкил;
    К1 представляет собой водород, С3-6алкил, гидроксиС3-6алкил, С3-6алкилкарбонил или С3-6алкилсульфонил и
    К2 представляет собой водород, галоген, С3-6алкил, циано, нитро, полигалогенС3-6алкил или С3-6алкилокси.
  3. 3. Соединение по пп.1 и 2, в котором каждый из п представляет собой целое число со значением 1;
    каждый из т представляет собой целое число со значением 1;
    каждый из X независимо представляет собой Ν;
    каждый из Υ независимо представляет собой ΝΕ4;
    каждый из К4 представляет собой С3-6алкил;
    К1 представляет собой водород;
    К2 представляет собой водород или галоген и
    К3 представляет собой водород.
  4. 4. Соединение по пп.1, 2 и 3, в котором указанное соединение представляет собой соединение № 1а, соединение № 30, соединение № 39 и соединение № 50.
    - 62 010652
  5. 5. Фармацевтическая композиция, содержащая фармацевтически приемлемые носители и, в качестве активного ингредиента, терапевтически эффективное количество соединения по пп.1-4.
  6. 6. Способ получения фармацевтической композиции по п.5, в котором фармацевтически приемлемые носители и соединение по пп.1-4 тщательно смешиваются.
  7. 7. Применение соединения по любому из пп.1-4 для производства лекарственного средства для лечения пролиферативных заболеваний.
  8. 8. Сочетание противоракового агента и соединения по любому из пп.1-4 в качестве ингибитора НОАС.
  9. 9. Способ получения соединения по п.1, включающий взаимодействие промежуточного соединения формулы (II), где О представляет собой тетрагидропиранилоксиаминокарбонил, обозначенного как промежуточное соединение формулы (П-а), с соответствующей кислотой, такой, например, как трифторуксусная кислота, с получением гидроксамовой кислоты формулы (I)
  10. 10. Способ получения соединения по п.1, включающий взаимодействие промежуточного соединения формулы (II), где О представляет собой С1-6алкилоксикарбонил, обозначенного как промежуточное соединение формулы (П-с), с гидроксиламином в присутствии основания и в соответствующем растворителе с получением гидроксамовой кислоты формулы (I)
    V г
    СИЛ,—Ν— (СН2)—7Г
  11. 11. Соединение формулы (II) его Ν-оксидные формы, фармацевтически приемлемые аддитивные соли и их стереохимически
    - 63 010652 изомерные формы, где каждый из η представляет собой целое число со значением 0, 1 или 2 и, когда η равно 0, тогда подразумевается прямая связь;
    каждый из т представляет собой целое число со значением 1 или 2;
    каждый из X независимо представляет собой Ν или СН;
    каждый из Υ независимо представляет собой О, 8 или NВ4; где каждый из В4 представляет собой водород, С1-6алкил, С1-6алкилоксиС1-6алкил, С3-6циклоалкил, С3-6 циклоалкилметил, фенилС!-6алкил, -С(=О)-СНВ5В6 или -8(=О)2-И(СН3)2; где каждый из В5 и В6 независимо представляет собой водород, амино, С1-6алкил или аминоС1-6алкил и, когда Υ представляет собой ΝΚ4 и В2 находится в 7-положении индолила, тогда В2 и В4 вместе могут образовывать двухвалентный радикал
    -(СН2)2- (а-1) или
    -(СН2)3- (а-2);
    В1 представляет собой водород, С!-6алкил, гидроксиС1-6алкил, С!-6алкилсульфонил, С!-6алкилкарбонил или моно- или ди(С1-6алкил)аминосульфонил;
    В2 представляет собой водород, гидрокси, амино, галоген, С1-6алкил, циано, С2-6алкенил, полигалогенС1-6алкил, нитро, фенил, С1-6алкилкарбонил, гидроксикарбонил, С1-6алкилкарбониламино, С1-6алкилокси или моно- или ди(С1-6алкил)амино;
    В3 представляет собой водород, С1-6алкил или С1-6алкилокси;
    когда В2 и В3 представляют собой соседние атомы углерода, они могут образовывать двухвалентный радикал -О-СН2-О- и
    0 представляет собой С1-2алкилоксикарбонил, гидроксикарбонил или тетрагидропиранилоксиаминокарбонил.
  12. 12. Способ получения соединения по п.11, включающий взаимодействие соединения формулы (II), где О представляет собой гидроксикарбонил, обозначенный как соединение формулы (П-Ь), с промежуточным соединением формулы (III) в присутствии соответствующих реагентов, таких как моногидрохлорид №-(этилкарбонимидоил)-ЫЦ-диметил-1,3-пропандиамина (ЕЭС) и 1-гидрокси-1Н-бензотриазол (НОВТ), с образованием соединения формулы (П-а)
  13. 13. Способ получения соединения по п.11, включающий взаимодействие промежуточного соединения формулы (VI) с соответствующим карбоксальдегидом формулы (V), где ΐ представляет собой целое число со значением 0 или 1 и, когда ΐ равно 0, тогда подразумевается прямая связь, в присутствии соответствующего реагента с образованием соединения формулы (П-а)
  14. 14. Способ получения соединения по п.11, включающий взаимодействие соединения формулы (II), где О представляет собой метил- или этилоксикарбонил (С1-2алкил), обозначенный как соединение формулы (П-с), с соответствующим кислотным раствором или основным раствором с образованием соединения формулы (П-Ь)
    - 64 010652
  15. 15. Способ получения соединения по п.11, включающий взаимодействие сложного этилового эфира карбоновой кислоты формулы (IV) с соответствующим карбоксальдегидом формулы (V) в присутствии соответствующего реагента с образованием соединения формулы (П-с)
  16. 16. Способ получения соединения по п.11, включающий взаимодействие промежуточного соединения формулы (XIV) с соответствующим промежуточным соединением формулы (XV) в присутствии соответствующего реагента в пригодном для использования растворителе с образованием соединения формулы (П-с)
  17. 17. Способ получения соединения по п.11, включающий взаимодействие промежуточного соединения формулы (X) с промежуточным соединением формулы (XI), где V представляет собой соответствующую уходящую группу, такую, например, как галоген, например фтор, хлор, бром или йод, или сульфонилоксирадикал, такой как метилсульфонилокси, с образованием соединения формулы (П-с)
    СНЖ—ΝΗ + V—(СНзХй—гу--η
    Скатил
  18. 18. Способ получения соединения по п.11, включающий взаимодействие промежуточного соединения формулы (XII) с промежуточным соединением формулы (XIII), где V представляет собой соответствующую уходящую группу, как описано выше, с образованием соединения формулы (П-с)
EA200700138A 2004-07-28 2005-07-25 Замещенные индолильные алкиламинопроизводные в качестве новых ингибиторов гистондеацетилазы EA010652B1 (ru)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP04077172 2004-07-28
US59218204P 2004-07-29 2004-07-29
PCT/EP2005/053612 WO2006010750A1 (en) 2004-07-28 2005-07-25 Substituted indolyl alkyl amino derivatives as novel inhibitors of histone deacetylase

Publications (2)

Publication Number Publication Date
EA200700138A1 EA200700138A1 (ru) 2007-06-29
EA010652B1 true EA010652B1 (ru) 2008-10-30

Family

ID=34979048

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA200700138A EA010652B1 (ru) 2004-07-28 2005-07-25 Замещенные индолильные алкиламинопроизводные в качестве новых ингибиторов гистондеацетилазы

Country Status (23)

Country Link
US (6) US8193205B2 (ru)
EP (1) EP1781639B1 (ru)
JP (1) JP4948403B2 (ru)
KR (1) KR101261305B1 (ru)
AP (1) AP2336A (ru)
AR (2) AR050272A1 (ru)
AU (1) AU2005266312C1 (ru)
BR (1) BRPI0512676B8 (ru)
CA (1) CA2572833C (ru)
CY (1) CY1112914T1 (ru)
EA (1) EA010652B1 (ru)
EC (1) ECSP20027480A (ru)
HK (1) HK1106234A1 (ru)
HR (1) HRP20120327T1 (ru)
IL (1) IL180960A0 (ru)
MX (1) MX2007001120A (ru)
MY (1) MY147316A (ru)
NO (1) NO338503B1 (ru)
NZ (1) NZ552865A (ru)
PL (1) PL1781639T3 (ru)
SG (1) SG156687A1 (ru)
TW (1) TWI372622B (ru)
WO (1) WO2006010750A1 (ru)

Families Citing this family (47)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
MXPA04007776A (es) 2002-03-13 2004-10-15 Janssen Pharmaceutica Nv Derivados de sulfonilamino como nuevos inhibidores de histona deacetilasa.
ES2306858T3 (es) * 2002-03-13 2008-11-16 Janssen Pharmaceutica Nv Derivados de carbonilamino como nuevos inhibidores de las histonadesacetilasas.
OA12790A (en) 2002-03-13 2006-07-10 Janssen Pharmaceutica Nv New inhibitors of histone deacetylase.
ATE398615T1 (de) 2002-03-13 2008-07-15 Janssen Pharmaceutica Nv Piperazinyl-, piperidinyl- und morpholinylderivate als neue inhibitoren von histon-deacetylase
MY147767A (en) 2004-06-16 2013-01-31 Janssen Pharmaceutica Nv Novel sulfamate and sulfamide derivatives useful for the treatment of epilepsy and related disorders
WO2006010750A1 (en) 2004-07-28 2006-02-02 Janssen Pharmaceutica N.V. Substituted indolyl alkyl amino derivatives as novel inhibitors of histone deacetylase
US8138198B2 (en) 2005-05-18 2012-03-20 Angibaud Patrick Rene Substituted aminopropenyl piperidine or morpholine derivatives as novel inhibitors of histone deacetylase
WO2006127184A1 (en) 2005-05-20 2006-11-30 Janssen Pharmaceutica N.V. Process for preparation of sulfamide derivatives
US8691867B2 (en) 2005-12-19 2014-04-08 Janssen Pharmaceutica Nv Use of benzo-fused heterocycle sulfamide derivatives for the treatment of substance abuse and addiction
US8937096B2 (en) 2005-12-19 2015-01-20 Janssen Pharmaceutica Nv Use of benzo-fused heterocyle sulfamide derivatives for the treatment of mania and bipolar disorder
US8716231B2 (en) 2005-12-19 2014-05-06 Janssen Pharmaceutica Nv Use of benzo-fused heterocycle sulfamide derivatives for the treatment of pain
US8497298B2 (en) 2005-12-19 2013-07-30 Janssen Pharmaceutica Nv Use of benzo-fused heterocycle sulfamide derivatives for lowering lipids and lowering blood glucose levels
AR058389A1 (es) 2005-12-19 2008-01-30 Janssen Pharmaceutica Nv Uso de derivados heterociclicos benzo-fusionados de sulfamida para el tratamiento de la obesidad
WO2007082874A1 (en) 2006-01-19 2007-07-26 Janssen Pharmaceutica N.V. Pyridine and pyrimidine derivatives as inhibitors of histone deacetylase
JP5137849B2 (ja) * 2006-01-19 2013-02-06 ジヤンセン・フアーマシユーチカ・ナームローゼ・フエンノートシヤツプ ヒストンデアセチラーゼのインヒビターとしての置換インドリル−アルキル−アミノ−誘導体
DK1981874T3 (da) 2006-01-19 2009-09-28 Janssen Pharmactuica N V Aminophenylderivater som nye inhibitorer af histondeacetylase
CN101370789B (zh) 2006-01-19 2012-05-30 詹森药业有限公司 作为组蛋白脱乙酰酶抑制剂的吡啶和嘧啶衍生物
AU2007253814A1 (en) 2006-05-19 2007-11-29 Janssen Pharmaceutica N.V. Co-therapy for the treatment of epilepsy
UA97249C2 (ru) * 2006-09-15 2012-01-25 Янссен Фармацевтика Нв Комбинация ингибитора гистоновых дезацетилаз с объединенной активностью относительно гистоновых дезацетилаз класса i и класса ii в с ингибитором протеасом бортезомибом для угнетения роста опухолевых клеток
EA020276B1 (ru) * 2006-09-15 2014-10-30 Янссен Фармацевтика Нв Ингибиторы гистоновых дезацетилаз с сочетанной активностью в отношении гистоновых дезацетилаз класса i и класса ii в комбинации с ингибиторами протеасом
JO2959B1 (en) * 2007-05-14 2016-03-15 جانسين فارماسوتيكا ان. في Mono-hydrochloric salts for histone dacetylase inhibitor
US8309596B2 (en) 2007-06-28 2012-11-13 Novartis Ag Kallikrein 7 modulators
CA2716932C (en) 2008-03-27 2017-07-04 Eddy Jean Edgard Freyne Aza-bicyclohexyl substituted indolyl alkyl amino derivatives as novel inhibitors of histone deacetylase
AU2009271362B2 (en) 2008-06-23 2014-03-13 Janssen Pharmaceutica Nv Crystalline form of (2s)-(-)-N-(6-chloro-2,3-dihydro-benzo[1,4]dioxin-2-ylmethyl)-sulfamide
US8124764B2 (en) 2008-07-14 2012-02-28 Gilead Sciences, Inc. Fused heterocyclyc inhibitor compounds
US8134000B2 (en) 2008-07-14 2012-03-13 Gilead Sciences, Inc. Imidazolyl pyrimidine inhibitor compounds
US8344018B2 (en) 2008-07-14 2013-01-01 Gilead Sciences, Inc. Oxindolyl inhibitor compounds
US8815939B2 (en) 2008-07-22 2014-08-26 Janssen Pharmaceutica Nv Substituted sulfamide derivatives
US8088771B2 (en) 2008-07-28 2012-01-03 Gilead Sciences, Inc. Cycloalkylidene and heterocycloalkylidene inhibitor compounds
JP5586692B2 (ja) 2009-06-08 2014-09-10 ギリアード サイエンシーズ， インコーポレイテッド アルカノイルアミノベンズアミドアニリンｈｄａｃインヒビター化合物
NZ596783A (en) 2009-06-08 2014-01-31 Gilead Sciences Inc Cycloalkylcarbamate benzamide aniline hdac inhibitor compounds
US8217079B2 (en) 2010-03-26 2012-07-10 Italfarmaco Spa Method for treating Philadelphia-negative myeloproliferative syndromes
EP2683371B1 (en) 2011-03-09 2020-10-21 Cereno Scientific AB Compounds and methods for improving impaired endogenous fibrinolysis using histone deacetylase inhibitors
WO2013021032A1 (en) 2011-08-11 2013-02-14 Janssen Pharmaceutica Nv Histone deacetylase inhibitors in combination with proteasome inhibitors and dexamethasone
US20150087687A1 (en) 2012-03-23 2015-03-26 Dennis Brown Compositions and methods to improve the therapeutic benefit of indirubin and analogs thereof, including meisoindigo
US8889730B2 (en) 2012-04-10 2014-11-18 Pfizer Inc. Indole and indazole compounds that activate AMPK
JP6064062B2 (ja) 2013-03-15 2017-01-18 ファイザー・インク Ａｍｐｋを活性化させるインダゾール化合物
KR101586045B1 (ko) 2013-07-30 2016-01-15 충북대학교 산학협력단 신규 페닐티아졸 기반 히드록삼산 및 이를 유효성분으로 포함하는 항암용 조성물
WO2015058106A1 (en) * 2013-10-18 2015-04-23 The General Hospital Corporation Imaging histone deacetylases with a radiotracer using positron emission tomography
KR20230169444A (ko) * 2015-05-28 2023-12-15 비디 키에스트라 비.브이. 식별 및 항생제 감수성 시험용 미생물 샘플을 수득 및 준비하기 위한 자동화된 방법 및 시스템
ITUB20155193A1 (it) 2015-11-03 2017-05-03 Italfarmaco Spa Sospensioni orali di Givinostat fisicamente e chimicamente stabili
WO2018054960A1 (en) 2016-09-21 2018-03-29 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods for predicting and treating resistance to chemotherapy in npm-alk(+) alcl
KR102002581B1 (ko) * 2016-10-04 2019-07-22 주식회사 종근당 혈액암 치료를 위한 hdac 저해제 및 프로테아좀 억제제 또는 면역조절성 약물을 포함하는 약학적 조합물
KR102236356B1 (ko) 2017-11-24 2021-04-05 주식회사 종근당 루푸스의 예방 또는 치료를 위한 조성물
MX2021004125A (es) * 2018-10-12 2021-06-15 Chong Kun Dang Pharmaceutical Corp Composicion farmaceutica que comprende inhibidor de histona desacetilasa y metotrexato.
KR20230155311A (ko) 2022-05-03 2023-11-10 충북대학교 산학협력단 신규한 n-히드록시프로펜아미드 화합물 및 이를 유효성분으로 포함하는 암 예방 또는 치료용 약학적 조성물
KR20230155310A (ko) 2022-05-03 2023-11-10 충북대학교 산학협력단 신규한 n-히드록시프로펜아미드 화합물 및 이를 유효성분으로 포함하는 암 예방 또는 치료용 약학적 조성물

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2003076438A1 (en) * 2002-03-13 2003-09-18 Janssen Pharmaceutica N.V. Piperazinyl-, piperidinyl- and morpholinyl-derivatives as novel inhibitors of histone deacetylase
WO2003076395A1 (en) * 2002-03-13 2003-09-18 Janssen Pharmaceutica N.V. Carbonylamino-derivatives as novel inhibitors of histone deacetylase
WO2003076422A1 (en) * 2002-03-13 2003-09-18 Janssen Pharmaceutica N.V. Sulfonyl-derivatives as novel inhibitors of histone deacetylase

Family Cites Families (94)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB901749A (en) 1957-12-06 1962-07-25 Ciba Ltd New 2-substituted pyrimidines
BE637271A (ru) * 1963-04-04 1900-01-01
US3459731A (en) * 1966-12-16 1969-08-05 Corn Products Co Cyclodextrin polyethers and their production
US4049811A (en) * 1968-07-23 1977-09-20 Boehringer Mannheim G.M.B.H. Compositions using cycloalkano-quinolone derivatives and their method of use
US3966743A (en) * 1968-07-23 1976-06-29 Boehringer Mannheim G.M.B.H. Ortho fused cycloalkano-4-quinolone-3-carboxylic acid derivatives
GB1345872A (en) 1970-09-03 1974-02-06 Wyeth John & Brother Ltd Amino-and acylamino-pyridine and hydropyridine derivatives
DE2939292A1 (de) * 1979-09-28 1981-04-09 Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim N-phenoxyalkylpiperidin-derivate, verfahrenn zu deren herstellung sowie diese verbindungen enthaltende arzneimittel
PH17194A (en) * 1980-03-06 1984-06-19 Otsuka Pharma Co Ltd Novel carbostyril derivatives,and pharmaceutical composition containing the same
CA1183847A (en) 1981-10-01 1985-03-12 Georges Van Daele N-(3-hydroxy-4-piperidinyl)benzamide derivatives
US4734418A (en) 1984-12-14 1988-03-29 Mitsui Petrochemical Industries, Ltd. Quinazoline compounds and antihypertensives
HU206337B (en) * 1988-12-29 1992-10-28 Mitsui Petrochemical Ind Process for producing pyrimidine derivatives and pharmaceutical compositions
JP2664238B2 (ja) * 1989-03-01 1997-10-15 日清製粉株式会社 ニコチン酸またはそのエステル誘導体
US5342846A (en) * 1990-12-05 1994-08-30 Synphar Laboratories, Inc. 7-substituted-6-fluoro-1,4-dihydro-4-oxo-quinoline-3-carboxylic acid compounds and 7-(substituted triazolyl pyrrolidin-1-yl) 4-oxoquinoline-3-carboxylic acid derivatives useful as antibacterial agents
DE4228792A1 (de) 1992-08-29 1994-03-03 Hoechst Ag Pyridylaminopiperidine, Verfahren zu ihrer Herstellung, sie enthaltende Mittel und deren Verwendung als Fungizide
US5338738A (en) * 1993-04-19 1994-08-16 Bristol-Myers Squibb Company Cerebral function enhancers: acyclic amide derivatives of pyrimidinylpiperidines
US5459151A (en) 1993-04-30 1995-10-17 American Home Products Corporation N-acyl substituted phenyl piperidines as bronchodilators and antiinflammatory agents
US5338736A (en) * 1993-10-07 1994-08-16 American Cyanamid Company Angiotensin II receptor blocking 2,3,6-substituted quinazolinones
FR2722788B1 (fr) * 1994-07-20 1996-10-04 Pf Medicament Nouvelles piperazides derivees d'aryl piperazine, leurs procedes de preparation, leur utilisation a titre de medicament et les compositions pharmaceutiques les comprenant
US6083903A (en) 1994-10-28 2000-07-04 Leukosite, Inc. Boronic ester and acid compounds, synthesis and uses
ES2104509B1 (es) 1995-06-13 1998-07-01 Ferrer Int Nuevos compuestos derivados de 2-(3,4-disustituido-1-piperazinil)-5-fluoropirimidina.
CZ154398A3 (cs) 1995-11-23 1998-08-12 Janssen Pharmaceutica N.V. Pevné směsi cyklodextrinů připravené vytlačováním taveniny
ZA9610745B (en) 1995-12-22 1997-06-24 Warner Lambert Co 4-Subsituted piperidine analogs and their use as subtype selective nmda receptor antagonists
US5952349A (en) * 1996-07-10 1999-09-14 Schering Corporation Muscarinic antagonists for treating memory loss
US5866702A (en) 1996-08-02 1999-02-02 Cv Therapeutics, Incorporation Purine inhibitors of cyclin dependent kinase 2
EP0827742A1 (en) 1996-09-04 1998-03-11 Vrije Universiteit Brussel Use of histone deacetylase inhibitors for treating fribosis or cirrhosis
AUPO721997A0 (en) 1997-06-06 1997-07-03 Queensland Institute Of Medical Research, The Anticancer compounds
ATE232521T1 (de) 1998-03-27 2003-02-15 Janssen Pharmaceutica Nv Hiv hemmende pyrimidin derivate
GB9823873D0 (en) 1998-10-30 1998-12-30 Pharmacia & Upjohn Spa 2-ureido-thiazole derivatives,process for their preparation,and their use as antitumour agents
BRPI9915552B8 (pt) 1998-11-10 2021-05-25 Janssen Pharmaceutica Nv pirimidinas inibidoras da reprodução do hiv
EP1140792A1 (en) 1998-12-14 2001-10-10 American Home Products Corporation 3,4-diamino-3-cyclobutene-1,2-dione derivatives which inhibit leukocyte adhesion mediated by vla-4
CZ27399A3 (cs) 1999-01-26 2000-08-16 Ústav Experimentální Botaniky Av Čr Substituované dusíkaté heterocyklické deriváty, způsob jejich přípravy, tyto deriváty pro použití jako léčiva, farmaceutická kompozice a kombinovaný farmaceutický přípravek tyto deriváty obsahující a použití těchto derivátů pro výrobu léčiv
AU763030B2 (en) 1999-03-03 2003-07-10 Samjin Pharmaceutical Co., Ltd. Piperazine derivatives and process for the preparation thereof
PT1041068E (pt) * 1999-04-01 2004-07-30 Pfizer Prod Inc Compostos para o tratamento e prevencao de complicacoes diabeticas
WO2000071515A2 (en) 1999-05-24 2000-11-30 Cor Therapeutics, Inc INHIBITORS OF FACTOR Xa
US6518283B1 (en) * 1999-05-28 2003-02-11 Celltech R&D Limited Squaric acid derivatives
GB9918035D0 (en) 1999-07-30 1999-09-29 Novartis Ag Organic compounds
AU783504C (en) 1999-11-23 2006-08-03 Methylgene Inc. Inhibitors of histone deacetylase
US20030187261A1 (en) 2000-01-07 2003-10-02 Libor Havlicek Purine derivatives, process for their preparation and use thereof
US6608052B2 (en) * 2000-02-16 2003-08-19 Boehringer Ingelheim Pharmaceuticals, Inc. Compounds useful as anti-inflammatory agents
CA2404002A1 (en) 2000-03-24 2001-09-27 Methylgene, Inc. Inhibitors of histone deacetylase
WO2002000651A2 (en) 2000-06-27 2002-01-03 Bristol-Myers Squibb Pharma Company Factor xa inhibitors
AU2001280187A1 (en) 2000-08-28 2002-03-13 Toray Industries, Inc. Cyclic amine derivatives
JO2409B1 (en) 2000-11-21 2007-06-17 شركة جانسين فارماسوتيكا ان. في Second-phenyl carboxy amides are useful as lipid-lowering agents
US6784173B2 (en) 2001-06-15 2004-08-31 Hoffmann-La Roche Inc. Aromatic dicarboxylic acid derivatives
DE10130374A1 (de) 2001-06-23 2003-01-02 Boehringer Ingelheim Pharma Substituierte N-Acyl-anilinderivate, deren Herstellung und deren Verwendung als Arzneimittel
JO3429B1 (ar) 2001-08-13 2019-10-20 Janssen Pharmaceutica Nv مشتقات برميدينات مثبطة فيروس الايدز
US6897220B2 (en) 2001-09-14 2005-05-24 Methylgene, Inc. Inhibitors of histone deacetylase
US7129034B2 (en) 2001-10-25 2006-10-31 Cedars-Sinai Medical Center Differentiation of whole bone marrow
GB0127929D0 (en) * 2001-11-21 2002-01-16 Celltech R&D Ltd Chemical compounds
GB0229931D0 (en) 2002-12-21 2003-01-29 Astrazeneca Ab Therapeutic agents
US20040091951A1 (en) 2002-02-07 2004-05-13 Axys Pharmaceuticals, Inc. Assay for measuring acetylation or deacetylation activity of an enzyme
OA12790A (en) * 2002-03-13 2006-07-10 Janssen Pharmaceutica Nv New inhibitors of histone deacetylase.
EP1485378B1 (en) 2002-03-13 2008-06-18 Janssen Pharmaceutica N.V. Piperazinyl-, piperidinyl- and morpholinyl-derivatives as novel inhibitors of histone deacetylase
MXPA04007776A (es) * 2002-03-13 2004-10-15 Janssen Pharmaceutica Nv Derivados de sulfonilamino como nuevos inhibidores de histona deacetilasa.
US6897307B2 (en) * 2002-03-28 2005-05-24 Novartis Ag Process for preparing 2,6-diaminopurine derivatives
JP4606027B2 (ja) 2002-04-03 2011-01-05 トポターゲット ユーケー リミテッド Ｈｄａｃ阻害剤としてのピペラジン結合を有するカルバミン酸化合物
TWI319387B (en) 2002-04-05 2010-01-11 Astrazeneca Ab Benzamide derivatives
GB0209715D0 (en) 2002-04-27 2002-06-05 Astrazeneca Ab Chemical compounds
DE10233412A1 (de) 2002-07-23 2004-02-12 4Sc Ag Neue Verbindungen als Histondeacetylase-Inhibitoren
JP2005539001A (ja) 2002-08-02 2005-12-22 アージェンタ・ディスカバリー・リミテッド ヒストンデアセチラーゼインヒビターとしての置換チエニルヒドロキサム酸
ITMI20030025A1 (it) 2003-01-10 2004-07-11 Italfarmaco Spa Derivati dell'acido idrossammico ad attivita' antinfiammatoria.
TW200418806A (en) 2003-01-13 2004-10-01 Fujisawa Pharmaceutical Co HDAC inhibitor
US7465719B2 (en) 2003-01-17 2008-12-16 Topotarget Uk Limited Carbamic acid compounds comprising an ester or ketone linkage as HDAC inhibitors
TW200424174A (en) 2003-02-06 2004-11-16 Hoffmann La Roche New TP diamide
AU2003900608A0 (en) 2003-02-11 2003-02-27 Fujisawa Pharmaceutical Co., Ltd. Hdac inhibitor
US7244751B2 (en) 2003-02-14 2007-07-17 Shenzhen Chipscreen Biosciences Ltd. Histone deacetylase inhibitors of novel benzamide derivatives with potent differentiation and anti-proliferation activity
WO2004082638A2 (en) 2003-03-17 2004-09-30 Syrrx, Inc. Histone deacetylase inhibitors
TW200424187A (en) 2003-04-04 2004-11-16 Hoffmann La Roche New oxime derivatives and their use as pharmaceutically active agents
SI1611088T1 (sl) 2003-04-07 2009-12-31 Pharmacyclics Inc Hidroksamati kot terapevtska sredstva
EP1652842B1 (en) 2003-07-30 2012-04-11 Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. Indazole derivatives
US7781595B2 (en) 2003-09-22 2010-08-24 S*Bio Pte Ltd. Benzimidazole derivatives: preparation and pharmaceutical applications
SI1673349T1 (sl) 2003-09-22 2010-10-29 S Bio Pte Ltd Derivati benzimidazola: priprava in farmacevtske uporabe
AU2004276337B2 (en) 2003-09-24 2009-11-12 Methylgene Inc. Inhibitors of histone deacetylase
JP2007509930A (ja) 2003-10-27 2007-04-19 エス＊バイオ プライベート リミティッド アシル尿素およびスルホニル尿素が結合したヒドロキサマート
EP1682538A4 (en) 2003-10-27 2009-05-27 S Bio Pte Ltd BIARYL-ASSOCIATED HYDROXAMATE: PREPARATION AND PHARMACEUTICAL APPLICATIONS
GB0402496D0 (en) 2004-02-04 2004-03-10 Argenta Discovery Ltd Novel compounds
US20050197336A1 (en) 2004-03-08 2005-09-08 Miikana Therapeutics Corporation Inhibitors of histone deacetylase
JP5319113B2 (ja) 2004-03-26 2013-10-16 メチルジーン インコーポレイテッド ヒストンデアセチラーゼの阻害剤
RS51189B (sr) * 2004-07-28 2010-10-31 Janssen Pharmaceutica N.V. Supstituisani derivati propenil piperazina kao novi inhibitori histonske deacetilaze
WO2006010750A1 (en) 2004-07-28 2006-02-02 Janssen Pharmaceutica N.V. Substituted indolyl alkyl amino derivatives as novel inhibitors of histone deacetylase
SI1776358T1 (sl) 2004-07-28 2009-10-31 Janssen Pharmaceutica Nv Substituirani propenil piperazinski derivati kot novi inhibitorji histon-deacetilaze
US8138198B2 (en) * 2005-05-18 2012-03-20 Angibaud Patrick Rene Substituted aminopropenyl piperidine or morpholine derivatives as novel inhibitors of histone deacetylase
CA2608929C (en) 2005-06-23 2014-01-28 Janssen Pharmaceutica N.V. Imidazolinone and hydantoine derivatives as novel inhibitors of histone deacetylase
CN101341138B (zh) * 2005-06-30 2012-11-14 詹森药业有限公司 作为gsk-3抑制剂的环状苯胺基-吡啶并三嗪类
WO2007016532A2 (en) 2005-08-02 2007-02-08 Novartis Ag Mutations and polymorphisms of hdac4
WO2007048767A1 (en) 2005-10-27 2007-05-03 Janssen Pharmaceutica N.V. Squaric acid derivatives as inhibitors of histone deacetylase
DK1981871T3 (da) 2006-01-19 2012-02-13 Janssen Pharmaceutica Nv Heterocyclylalkylderivater som hidtil ukendte inhibitorer af histondeacetylase
JP5137849B2 (ja) * 2006-01-19 2013-02-06 ジヤンセン・フアーマシユーチカ・ナームローゼ・フエンノートシヤツプ ヒストンデアセチラーゼのインヒビターとしての置換インドリル−アルキル−アミノ−誘導体
CN101370789B (zh) 2006-01-19 2012-05-30 詹森药业有限公司 作为组蛋白脱乙酰酶抑制剂的吡啶和嘧啶衍生物
WO2007082880A1 (en) 2006-01-19 2007-07-26 Janssen Pharmaceutica N.V. Pyridine and pyrimidine derivatives as inhibitors of histone deacetylase
DK1981874T3 (da) * 2006-01-19 2009-09-28 Janssen Pharmactuica N V Aminophenylderivater som nye inhibitorer af histondeacetylase
WO2007082874A1 (en) 2006-01-19 2007-07-26 Janssen Pharmaceutica N.V. Pyridine and pyrimidine derivatives as inhibitors of histone deacetylase
AU2007296259A1 (en) 2006-09-15 2008-03-20 Janssen Pharmaceutica Nv Combinations of class-I specific histone deacetylase inhibitors with proteasome inhibitors
GB0901749D0 (en) 2009-02-03 2009-03-11 Oxford Nanopore Tech Ltd Adaptor method

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2003076438A1 (en) * 2002-03-13 2003-09-18 Janssen Pharmaceutica N.V. Piperazinyl-, piperidinyl- and morpholinyl-derivatives as novel inhibitors of histone deacetylase
WO2003076395A1 (en) * 2002-03-13 2003-09-18 Janssen Pharmaceutica N.V. Carbonylamino-derivatives as novel inhibitors of histone deacetylase
WO2003076422A1 (en) * 2002-03-13 2003-09-18 Janssen Pharmaceutica N.V. Sulfonyl-derivatives as novel inhibitors of histone deacetylase

Also Published As

Publication number Publication date
AU2005266312B2 (en) 2010-11-11
AR092490A2 (es) 2015-04-22
AU2005266312A1 (en) 2006-02-02
CY1112914T1 (el) 2016-04-13
JP2008508235A (ja) 2008-03-21
US20110136841A1 (en) 2011-06-09
AP2007003898A0 (en) 2007-02-28
JP4948403B2 (ja) 2012-06-06
KR20070046118A (ko) 2007-05-02
US8193205B2 (en) 2012-06-05
NO20071125L (no) 2007-02-28
NZ552865A (en) 2009-09-25
AU2005266312C1 (en) 2011-06-16
US8524728B2 (en) 2013-09-03
PL1781639T3 (pl) 2012-07-31
US9150543B2 (en) 2015-10-06
BRPI0512676B1 (pt) 2019-06-25
US20120220615A1 (en) 2012-08-30
CA2572833A1 (en) 2006-02-02
IL180960A0 (en) 2007-07-04
US20130324568A1 (en) 2013-12-05
CA2572833C (en) 2013-04-09
EP1781639A1 (en) 2007-05-09
NO338503B1 (no) 2016-08-29
AR050272A1 (es) 2006-10-11
EA200700138A1 (ru) 2007-06-29
SG156687A1 (en) 2009-11-26
TW200612913A (en) 2006-05-01
BRPI0512676B8 (pt) 2021-05-25
AP2336A (en) 2011-12-08
KR101261305B1 (ko) 2013-05-08
US20140309248A1 (en) 2014-10-16
US9636341B2 (en) 2017-05-02
ECSP20027480A (es) 2020-06-30
EP1781639B1 (en) 2012-01-25
TWI372622B (en) 2012-09-21
US20090124646A1 (en) 2009-05-14
WO2006010750A1 (en) 2006-02-02
US8592441B2 (en) 2013-11-26
MY147316A (en) 2012-11-30
BRPI0512676A (pt) 2008-04-01
HK1106234A1 (en) 2008-03-07
HRP20120327T1 (hr) 2012-05-31
MX2007001120A (es) 2007-03-15
US20150342950A1 (en) 2015-12-03

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EA010652B1 (ru) Замещенные индолильные алкиламинопроизводные в качестве новых ингибиторов гистондеацетилазы
JP5261192B2 (ja) ヒストンデアセチラーゼのインヒビターとしてのピリジン及びピリミジン誘導体
JP5225104B2 (ja) 新しい、ヒストンデアセチラーゼのインヒビターとしてのアミノフェニル誘導体
JP5137849B2 (ja) ヒストンデアセチラーゼのインヒビターとしての置換インドリル−アルキル−アミノ−誘導体
JP5225103B2 (ja) ヒストン・デアセチラーゼの新規なインヒビターとしてのヘテロシクリルアルキル誘導体
ES2322950T3 (es) Derivados de aminocarbonilo como nuevos inhibidores de histona-desacetilasa.
EA011932B1 (ru) Производные замещенного пропенилпиперазина в качестве новых ингибиторов гистондеацетилазы
JP5055268B2 (ja) ヒストンデアセチラーゼの新規な阻害剤としての置換されたアミノプロペニルピペリジンまたはモルホリン誘導体
JP4648628B2 (ja) ヒストンデアセチラーゼの新規な阻害剤としてのカルボニルアミノ誘導体
ES2396986T3 (es) Derivados de piridina y pirimidina como inhibidores de histona desacetilasa
EA007099B1 (ru) Сульфонилпроизводные в качестве ингибиторов гистон-деацетилазы
EA006707B1 (ru) Сульфонилпроизводные в качестве новых ингибиторов гистон-деацетилазы
JP5070214B2 (ja) ヒストンデアセチラーゼの阻害剤としてのスクエア酸誘導体
PL208401B1 (pl) Pochodne piperazynylowe, piperydynylowe i morfolinylowe, sposób ich wytwarzania, kompozycja je zawierająca oraz ich zastosowanie
JP2008546737A (ja) ヒストン・デアセチラーゼの新インヒビターとしてのイミダゾリノン及びヒダントイン誘導体
JP5564033B2 (ja) ヒストンデアセチラーゼの新規インヒビターとしてのアザ−ビシクロヘキシル置換インドリルアルキルアミノ誘導体
ES2381117T3 (es) Derivados indolilalquilamínicos sustituidos como inhibidores novedosos de la histona-desacetilasa

Legal Events

Date Code Title Description
QB4A Registration of a licence in a contracting state