EA009902B1 - Модуляторы рецепторов андрогенов - Google Patents

Abstract

Настоящее изобретение относится к новому классу 4-оксобензнитрилов, их применению в качестве модуляторов андрогенов и их применению для лечения алопеции.

Description

Область техники

Настоящее изобретение относится к новому классу бензнитрилов и к их применению в качестве модуляторов рецепторов андрогенов. Другие аспекты изобретения относятся к местному применению этих соединений для ослабления алопеции и жирной кожи.

Предшествующий уровень техники

Алопеция, или облысение, представляет собой общую проблему, которую медицинская наука все еще должна решить. Физиологический механизм, посредством которого происходит эта потеря волос, неизвестен. Тем не менее, известно, что рост волос изменяется у индивидуумов, страдающих алопецией.

Волосяные фолликулы испытывают циклы активности, включающие периоды роста, покоя и выпадения. Волосистая часть кожи головы человека обычно содержит от 100000 до 350000 волосяных волокон или стержней, метаморфоз которых осуществляется за три различные стадии:

(а) во время фазы роста (анаген) фолликул (то есть волосяной корень) проникает глубоко в дерму, при этом клетки фолликула быстро делятся и дифференцируются в процессе синтеза кератина, преобладающего компонента волос. У не лысеющих людей эта фаза роста продолжается от 1 года до 5 лет;

(б) переходная фаза (катаген) характеризуется прекращением митоза и продолжается от 2 до нескольких недель; и (в) фаза покоя (телоген), на которой волос удерживается в волосистой части кожи головы в течение до 12 недель включительно, пока он не будет заменен в результате нового фолликулярного роста из расположенной ниже области волосистой части кожи головы.

У людей этот цикл роста не синхронизирован. Индивидуум будет иметь тысячи фолликулов в каждой из этих трех фаз. Однако большинство волосяных фолликулов будут в фазе анагена. У здоровых молодых взрослых людей соотношение анагена к телогену может быть столь высоким, как 9:1. У индивидуумов с алопецией это отношение может снижаться до столь низкого значения, как 2:1.

Андрогенетическая алопеция является результатом активации наследуемой чувствительности к андрогенным гормонам. Она представляет собой наиболее общий тип алопеции. Она затрагивает как мужчин (50%), так и женщин (30%) преимущественно кавказского происхождения. Волосяной столб претерпевает постепенные изменения в диаметре и длине с течением времени и с увеличением возраста. Длинный волос постепенно превращается в короткий, тонкий, обесцвеченный пушковый волос. Как следствие, мужчины после 20 лет и женщины после 30 и 40 лет начинают замечать, что их волосы становятся тоньше и короче. У лиц мужского пола наибольшая потеря волос приходится на переднюю и теменную части головы. Лица женского пола испытывают утончение целиком по всей волосистой части головы. Как описано выше, отношение анагена к телогену значительно снижается, приводя в результате к уменьшению роста волос.

Миноксидил, открывающий калиевые каналы агент (ро1а88шш сйаппе1 орепег), способствует росту волос. Миноксидил имеется в продаже в Соединенных Штатах под товарным знаком Κ06ΑΙΝΕ®. Несмотря на то, что точный механизм действия миноксидила неизвестен, его влияние на цикл роста волос хорошо подтверждено документально. Миноксидил способствует росту волосяных фолликул и увеличивает продолжительность периода времени нахождения волосяных фолликулов в фазе анагена (т.е. увеличивает отношение анагена к телогену).

Несмотря на то, что миноксидил способствует росту волос, косметическая эффективность этого роста может изменяться в широких пределах. Например, Коешдк сообщил о результатах клинических испытаний с привлечением 83 лиц мужского пола, которые использовали раствор 3%-ного миноксидила для местного применения в течение периода времени 19 месяцев. Рост волос наблюдался у 55% субъектов. Однако только 20% субъектов посчитали, что рост был косметически релевантным (С1т. Кез., 33, № 4, 914А, 1985). Τοδΐί сообщил о косметически приемлемом повторном росте у 18,1% его пациентов (Эегта1о1ощса, 173, № 3, 136-138, 1986). Таким образом, в данной области техники существует необходимость в соединениях, обладающих способностью вызывать более высокие скорости косметически приемлемого роста волос у пациентов с алопецией.

Краткое изложение сущности изобретения

Согласно настоящему изобретению раскрыт новый класс 4-оксобензнитрилов. Эти соединения и их фармацевтически приемлемые соли, их гидраты и пролекарства могут быть представлены следующей формулой:

О—(СК¹ К²)— (АЬК ’)п— х²

I где X¹ представляет собой галоген или галогеноалкил;

X² представляет собой -СК³К⁴К⁵, -СН=СН2 или -С СН;

К¹ и К², каждый независимо представляет собой заместитель, выбранный из группы, состоящей из водорода, галогена, С_1-6алкила, галогеноалкила, гидроксиалкила, тиола и тиоалкила;

К³, К⁴ и К⁵, каждый независимо представляет собой заместитель, выбранный из группы, состоящей

- 1 009902 из водорода, галогена, С_1-6алкила, галогеноалкила, гидрокси, гидроксиалкила, тиола, тиоалкила и -ΝΚ⁶Κ⁷; η представляет собой целое число 0 или 1;

АЬК¹ представляет собой линейную С_1-8алкиленовую группу, в которой вплоть до 8 атомов водорода алкиленовой группы могут быть возможно заменены заместителем, выбранным из группы, состоящей из С_1-6алкила, галогеноалкила, галогена, гидрокси, гидроксиалкила, тиола, тиоалкила и -ΝΚ⁶Κ⁷;

Я⁶ и Я⁷, каждый независимо представляет собой водород или С_1-6алкил;

при условии, что:

1) если η равен 0, и X² представляет собой -СН=СН₂ или -С^СН, тогда по меньшей мере один из Я¹ или Я² представляет собой тиол, гидроксиалкил или тиоалкил;

2) если η равен 1 и X² представляет собой -СН=СН₂ или -С^СН, тогда, альтернативно, по меньшей мере один из Я¹ или Я² представляет собой заместитель, выбранный из группы, состоящей из тиола, гидроксиалкила и тиоалкила, или по меньшей мере 1 атом водорода в А1к' заменен заместителем, выбранным из группы, состоящей из гидрокси, тиола, гидроксиалкила и тиоалкила;

3) если η равен 0 и X² представляет собой -СЯ³Я⁴Я⁵, тогда, альтернативно, по меньшей мере один из Я¹ или Я² представляет собой заместитель, выбранный из группы, состоящей из тиола, гидроксиалкила и тиоалкила, или по меньшей мере один из Я³, Я⁴ или Я⁵ представляет собой гидрокси, гидроксиалкил, тиол или тиоалкил;

4) если η равен 1 и X² представляет собой -СЯ³Я⁴Я⁵, тогда, альтернативно: а) по меньшей мере один из Я¹ или Я² представляет собой заместитель, выбранный из группы, состоящей из тиола, гидроксиалкила и тиоалкила, б) по меньшей мере один из Я³, Я⁴ или Я⁵ представляет собой заместитель, выбранный из группы, состоящей из гидрокси, гидроксиалкила, тиола и тиоалкила, или в) по меньшей мере 1 атом водорода в А1к' заменен заместителем, выбранным из группы, состоящей из гидрокси, тиола, тиоалкила и гидроксиалкила.

Соединения формулы I являются модуляторами рецепторов андрогенов. Эти соединения обладают аффинностью к рецептору андрогенов и будут вызывать биологический эффект в результате связывания с этим рецептором. В типичном случае соединения будут действовать как антагонисты. В отдельных воплощениях они будут действовать как частичные агонисты, полные агонисты или тканеселективные агонисты. Как модуляторы рецепторов андрогенов соединения могут быть использованы для лечения или ослабления состояний, ассоциированных с несоответствующей активацией рецептора андрогенов. Примеры таких состояний для антагонистов включают акне, избыточную секрецию сальных желез, андрогенную алопецию, гормонозависимые виды рака, такие как рак предстательной железы, и гирсутизм, но не ограничены ими. Те соединения, которые являются частичными агонистами, полными агонистами или тканеселективными агонистами, могут быть использованы для лечения остеопороза, гипогонадизма, анемии или для стимулирования увеличений мышечной массы, в особенности при заболеваниях, вызывающих истощение.

Кроме того, данное изобретение относится к фармацевтическим композициям, содержащим по меньшей мере одно из соединений формулы I в количестве, эффективном для модулирования активации рецептора андрогенов. Еще в одном воплощении изобретение относится к продукту производства, содержащему соединение формулы I, упакованному для розничного распространения вместе с инструкциями для пользователя, рекомендующими, как применять данное соединение для ослабления состояния, ассоциированного с несоответствующей активацией рецептора андрогенов. Дополнительное воплощение относится к применению соединения формулы I в качестве диагностического агента для детектирования несоответствующей активации рецептора андрогенов.

Еще в одном воплощении соединения формулы I используют местно для индуцирования и/или стимулирования роста волос и/или для уменьшения выпадения волос. Соединения можно также использовать местно в лечении избыточной секреции сальных желез и/или акне.

Подробное описание изобретения

Заголовки в этом документе предназначены только для ускорения его просмотра читателем. Их не следует истолковывать как каким-либо образом ограничивающие данное изобретение или формулу изобретения. Определения и пояснение примерами

Как использовано по всей этой заявке, включая формулу изобретения, следующие далее термины имеют значения, описанные ниже, если конкретно не указано иного. Множественное число и единственное число следует трактовать как взаимозаменяемые, кроме случаев указания числа:

а) «галоген» относится к атому хлора, фтора или брома;

б) «С₁-С₆алкил^> относится к алкильной группе с разветвленной или прямой цепью, содержащей от 1 до 6 атомов углерода, такой как метил, этил, н-пропил, изопропил, н-бутил, изобутил, пентил, гексил и т.д.;

в) «галогеноалкил» относится к алкильной группе с разветвленной или прямой цепью, содержащей от 1 до 6 атомов углерода, в которой по меньшей мере 1 атом водорода заменен галогеном (т.е. С₁-С₆галогеноалкил). Примеры подходящих галогеноалкилов включают хлорметил, дифторметил, трифторметил, 1-фтор-2-хлорэтил, 5-фторгексил, 3-дифторизопропил, 3-хлоризобутил и т.д.;

г) «гидроксиалкил» относится к алкильной группе с разветвленной или прямой цепью, содержащей от 1 до 6 атомов углерода, в которой по меньшей мере 1 атом водорода заменен функциональной группой гидрокси (т.е. С₁-С₆гидроксиалкил). Примеры подходящих гидроксиалкилов включают гидроксиме

- 2 009902 тил, 1,2-дигидроксипропил, 1-гидроксипентил, 6-гидроксигексил, 2-гидроксиэтил и т.д.;

д) «тиоалкил» относится к алкильной группе с разветвленной или прямой цепью, содержащей от 1 до 6 атомов углерода, в которой по меньшей мере 1 атом водорода заменен сульфгидрильной группой (т.е. -8Н). Примеры подходящих тиоалкилов включают метилмеркаптан, 2-тиолэтил, 1,3-дитиолпропил, 6-тиолгексил, 4-тиолпентил и т.д.;

е) «линейная алкиленовая группа, содержащая от 1 до 8 атомов углерода» относится к алкильной группе, содержащей от 1 до 8 атомов углерода, служащих в качестве связывающей группы внутри молекулы (т.е. не содержит ни одной концевой функциональной группы -СН₃). Примеры таких алкильных групп включают -СН₂-, -СН2-(СН2)4-СН2-, -СН2-(СН2)б-СН2-, -СН2-СН2-СН2-, -СН₂-(СН₂)₂-СН₂- и т.д.;

ж) «сольват» представляет собой кристаллическую форму соединения или его соли, содержащую 1 или более молекул растворителя кристаллизации, т.е. соединение формулы I или его соль, содержащие растворитель, объединенные в молекулярной форме. «Гидрат» представляет собой сольват, в котором растворителем является вода;

з) «полиморф» представляет собой соединение или его соль, например соединение формулы I или его соль, которое(ая) присутствует по меньшей мере в одной кристаллической форме;

и) «андроген» относится к тестостерону и его предшественникам и метаболитам и к 5-альфа-восстановленным андрогенам, включая дигидротестостерон, но не ограничиваясь им. Андроген относится к андрогенам из семенников, надпочечников и яичников, а также ко всем формам природных, синтетических и замещенных или модифицированных андрогенов;

к) термин «фармацевтически приемлемые соли» предназначен для обозначения либо «фармацевтически приемлемых солей присоединения кислоты», либо «фармацевтически приемлемых солей присоединения основания» в зависимости от действительной структуры соединения;

л) термин «фармацевтически приемлемые соли присоединения кислоты» предназначен для применения в отношении любой нетоксичной соли присоединения органической или неорганической кислоты основных соединений, представленных формулой I, или любого из ее промежуточных соединений. Иллюстративные неорганические кислоты, которые образуют подходящие соли, включают соляную, бромисто-водородную, серную и фосфорную кислоту и кислые соли металлов, такие как натрия моногидроортофосфат и калия гидросульфат. Иллюстративные органические кислоты, которые образуют подходящие соли, включают моно-, ди- и трикарбоновые кислоты. Иллюстрациями таких кислот являются, например, уксусная, гликолевая, молочная, пировиноградная, малоновая, янтарная, глутаровая, фумаровая, яблочная, винная, лимонная, аскорбиновая, малеиновая, гидроксималеиновая, бензойная, гидроксибензойная, фенилуксусная, коричная, салициловая, 2-феноксибензойная, паратолуолсульфоновая кислота и такие сульфоновые кислоты, как метансульфоновая кислота и 2-гидроксиэтансульфоновая кислота. Такие соли могут существовать как в гидратированной, так и, по существу, в безводной форме. Как правило, соли присоединения кислоты этих соединений растворимы в воде и различных гидрофильных органических растворителях;

м) термин «фармацевтически приемлемые соли присоединения основания» предназначен для применения в отношении любой нетоксичной соли присоединения органического или неорганического основания соединений, представленных формулой I, или любого из его промежуточных соединений. Иллюстративные основания, которые образуют подходящие соли, включают гидроксиды щелочных металлов или щелочно-земельных металлов, такие как гидроксиды натрия, калия, кальция, магния или бария; аммиак и алифатические, алициклические или ароматические органические амины, такие как метиламин, диметиламин, триметиламин и пиколин;

н) «пролекарство» относится к соединениям, которые легко трансформируются ίη νίνο с получением исходного соединения приведенных выше формул, например, в результате гидролиза в крови. Подробное обсуждение предложено в Т. Н1дисЫ апй V. 81е11а, Рго-йшдк а§ Νονοί ОеНуегу 8у51сш5. Уо1. 14 о£ 1Пс А.С.8. 8ушро81ит 8епс5 и в Вюге^'сгаЫе Сатега ίη Эгид Оеадп, ей. Ей\\'агй В. Восйе, Атепсап Рйагтасеийса1 А§8ос1айоп апй Регдатоп Ргекк, 1987; оба включены в данное описание изобретения посредством ссылки;

о) «соединение формулы I», «соединения по изобретению» и «соединения» используются повсюду в данной заявке взаимозаменяемо, и их следует истолковывать как синонимы;

п) «пациент» относится к теплокровным животным, таким как, например, морские свинки, мыши, крысы, песчанки, кошки, кролики, собаки, обезьяны, шимпанзе, медвежьи макаки и люди;

р) «лечить» относится к способности соединений ослаблять, облегчать или замедлять развитие заболевания (или состояния) у пациента либо любого поражения ткани, ассоциированного с данным заболеванием.

Некоторые соединения формулы I будут существовать в виде оптических изомеров. Подразумевается, что любая ссылка в этой заявке на одно из соединений, представленных формулой I, охватывает либо конкретный оптический изомер, либо смесь оптических изомеров (если это специально не исключено). Конкретные оптические изомеры могут быть разделены и выделены с использованием известных в данной области техники методик, таких как хроматография на хиральных неподвижных фазах или разделение посредством образования хиральной соли с последующим разделением избирательной кристаллизацией. Альтернативно, использование конкретного оптического изомера в качестве исходного вещества будет приводить к получению соответствующего изомера в качестве конечного продукта.

- 3 009902

В дополнение, соединения по настоящему изобретению могут существовать в несольватированной, а также в сольватированной формах с фармацевтически приемлемыми растворителями, такими как вода, этанол и т.п. В общем случае сольватированные формы считаются эквивалентом несольватированным формам для целей настоящего изобретения. Соединение также может существовать в различных полиморфных формах, и формулу изобретения следует истолковывать как охватывающую все такие формы.

Все соединения формулы I содержат фенильное кольцо. Для дальнейшей иллюстрации изобретения ниже показана система нумерации для этого кольца и картины его замещения.

Положение 1 этого фенильного кольца всегда будет замещено группировкой циано, как изображено выше. Положение 4 будет замещено атомом кислорода, образующим группировку простого эфира. Фенильное кольцо будет дополнительно замещено, как изображено в виде заместителя X¹ в положении 2 или 3, атомом галогена или галогеноалкильной группировкой. В типичном случае этот галоген или галогеноалкильная группировка будут находиться в положении 2. В более типичном случае это будет трифторалкил, расположенный в положении 2 фенильного кольца.

Как отмечено выше, положение 4 фенильного кольца замещено группировкой простого эфира, которая всегда будет включать -(СК¹К²)-(АЬК¹)п-Х². АЬК¹, когда он присутствует, представляет собой линейную С1-С₈алкиленовую группировку, такую как метилен, этилен, пропилен, бутилен, пентилен, гексилен, гептилен или октилен. Вплоть до 8 атомов водорода этой алкиленовой группировки могут быть заменены одним из заместителей, определенных выше. Любой одиночный атом углерода в А1к¹ может быть незамещенным, монозамещенным или дизамещенным. Эти атомы углерода могут быть замещены одинаковыми или разными заместителями.

Группировка простого эфира -(СК¹К²)-(АЬК¹)_п-Х² будет замещена по меньшей мере одной группировкой гидрокси, тиола, гидроксиалкила или тиоалкила. Это может быть осуществлено одним из двух альтернативных способов замещения (в зависимости от присутствия или отсутствия А1к'). Если А1к' не присутствует в молекуле (т.е. η равен 0), то один из К³, К⁴ или К⁵ может представлять собой гидрокси, гидроксиалкил, тиол или тиоалкил либо один из К¹ или К² может представлять собой гидроксиалкил, тиол или тиоалкил. Если А1к' присутствует (т.е. η равен 1), тогда, альтернативно: а) один из К³, К⁴ или К⁵ может представлять собой гидрокси, гидроксиалкил, тиол или тиоалкил; б) один из К¹ или К² может представлять собой гидроксиалкил, тиол или тиоалкил; или в) 1 из атомов углерода в А1к' может быть замещен гидрокси, гидроксиалкилом, тиолом или тиоалкилом.

Это требование, чтобы молекула содержала функциональную группу гидрокси или тиола, не следует рассматривать как ограничивающее молекулу только одной группировкой гидрокси или тиола. Если желательно, группировка простого эфира -(СК¹К²)-(АЬК¹)_П-Х² может содержать множественные функциональные группы гидрокси, гидроксиалкила, тиоалкила и тиола согласно описанному выше способу замещения.

Еще в одном возможном воплощении данного изобретения для тех соединений, в которых Х² представляет собой СК³К⁴К⁵ и η равен 0, по меньшей мере один из К¹, К², К³, К⁴ или К⁵ представляет собой С1-С6алкил, галогеноалкил, тиоалкил или гидроксиалкил (т.е. остаток простого эфира -СК¹К²-(А1к¹)п-Х² представляет собой разветвленный алкил). В дополнительном возможном воплощении для тех соединений, в которых X² представляет собой СК³К⁴К⁵ и η равен 1, по меньшей мере один из К¹, К², К³, К⁴ или К⁵ представляет собой С1-С6алкил, галогеноалкил, тиоалкил или гидроксиалкил или, альтернативно, 1 атом водорода в А1к¹ заменен заместителем, выбранным из группы, состоящей из С1-С₆алкила, галогеноалкила, тиоалкила или гидроксиалкила (т.е. остаток простого эфира -СК^ДА^^-Х² представляет собой разветвленный алкил).

Более конкретные воплощения данного изобретения относятся к соединениям формулы I, в которых:

1) Х¹ представляет собой СГ₃ и расположен в положении 2 фенильного кольца, а Х² представляет собой СК³К⁴К³, в котором один из К³, К⁴ или К³ является гидрокси;

2) Х¹ представляет собой С1 и расположен в положении 2 фенильного кольца, а Х² представляет собой СК³К⁴К⁵, в котором один из К³, К⁴ или К⁵ является гидрокси;

3) Х¹ представляет собой СГ3 и расположен в положении 2 фенильного кольца, а К¹ представляет собой водород и К² представляет собой С1-С₆алкил, η равен 1, где А1к¹ представляет собой метилен, этилен, пропилен или бутилены; Х² представляет собой -СК³К⁴К⁵, где К³ представляет собой водород или С1-С6алкил, К⁴ представляет собой водород или С1-С₆алкил и К⁵ представляет собой гидрокси;

4) Х¹ представляет собой СГ3 и расположен в положении 2 фенильного кольца, К¹ представляет собой водород или С1-С₆алкил, К² представляет собой водород, η равен О, а Х² представляет собой СК³К⁴К⁵, где К³ представляет собой гидрокси или гидроксилалкил, К⁴ представляет собой водород или С₁-С₆алкил и К⁵ представляет собой водород; или

5) Х¹ представляет собой СГ3 или С1 и расположен в положении 2 фенильного кольца, каждый из К¹ и К² является водородом, η равен 1, где А1к¹ представляет собой метилен, этилен, пропилен или бутилен, который замещен 1-3 заместителями, независимо выбранными из гидрокси, гидроксиалкила или С1-С₆ал

- 4 009902 кила, а X² представляет собой СК³К⁴К⁵, где К³ представляет собой водород или гидрокси и каждый из К⁴ и К⁵ является водородом или С1-С₆алкилом.

Более конкретные примеры соединений, охватываемых формулой I, включают:

1) 4-(2-гидрокси-1-этилпропокси)-2-трифторметилбензнитрил;

2) 4-(2-гидрокси-1 -метилпропокси)-2-трифторметилбензнитрил;

3) 4-(3-гидрокси-1-метилбутокси)-2-трифторметилбензнитрил;

4) 4-(2-гидрокси-6-метилгептилокси)-2-трифторметилбензнитрил;

5) 4-(2-гидрокси-7-гидроксигептилокси)-2-трифторметилбензнитрил;

6) 4-(2-гидроксиоктилокси)-2-трифторметилбензнитрил;

7) 4-(2-гидрокси-8-гидрокси-8-метилоктилокси)-2-трифторметилбензнитрил;

8) 4-(2-гидрокси-окт-7-енилокси)-2-трифторметилбензнитрил;

9) 4-(2-гидрокси-окт-7-инилокси)-2-трифторметилбензнитрил;

10) 4-(2-этил-3-гидроксибутокси)-2-трифторметилбензнитрил;

11) 4-(3-гидроксибутокси)-2-трифторметилбензнитрил;

12) 4-(3-гидрокси-гекс-5-енилокси)-2-трифторметилбензнитрил;

13) 4-(3-гидрокси-гекс-5-инилокси)-2-трифторметилбензнитрил;

14) 4-(3-гидрокси-2-метилбутокси)-2-трифторметилбензнитрил;

15) 4-(3-гидрокси-2-пропилбутокси)-2-трифторметилбензнитрил;

16) 4-(3-гидрокси-2,2-диметилпропокси)-2-трифторметилбензнитрил;

17) 4-(3-гидрокси-3-метилбутокси)-2-трифторметилбензнитрил;

18) 4-(4-гидрокси-3-метилпентокси)-2-трифторметилбензнитрил;

19) 4-(3-гидрокси-2,2,4-триметилпентилокси)-2-трифторметилбензнитрил;

20) 4-(2-этил-3-гидроксигексилокси)-2-трифторметилбензнитрил;

21) 4-[2-(1-гидроксиэтил)гексилокси]-2-трифторметилбензнитрил;

22) 4-(3-гидрокси-1-метилбутокси)-2-трифторметилбензнитрил;

23) 4-(3-гидрокси-1-метил-2-этилбутокси)-2-трифторметилбензнитрил;

24) 4-(4-гидроксибутокси)-2-трифторметилбензнитрил;

25) 4-(6-гидроксигептокси)-2-трифторметилбензнитрил;

26) 4-(4-гидроксигептилокси)-2-трифторметилбензнитрил;

27) 4-(4-гидрокси-1-пропилбутокси)-2-трифторметилбензнитрил;

28) 4-(4-гидрокси-1-метилпентилокси)-2-трифторметилбензнитрил;

29) 4-(5-гидроксипентилокси)-2-трифторметилбензнитрил;

30) 4-(5-гидроксигексилокси)-2-трифторметилбензнитрил;

31) 4-(5-гидрокси-3-метилпентилокси)-2-трифторметилбензнитрил;

32) 2-хлор-4-(3-гидрокси-2,2,4-триметилпентилокси)бензнитрил;

33) 2-хлор-4-(4-гидроксибутокси)бензнитрил;

34) 2-хлор-4-(3-гидроксипропокси)бензнитрил;

35) 2-хлор-4-(1-гидроксиметилаллилокси)бензнитрил;

36) 2-хлор-4-( 1-гидроксиметилацетиленилокси)бензнитрил;

37) 2-хлор-4-(3-гидрокси-2-метилпропокси)бензнитрил;

38) 2-хлор-4-(5-гидроксипентилокси)бензнитрил;

39) 2-хлор-4-(4-гидрокси-1-метилпентилокси)бензнитрил или

40) 2-хлор-4-(5-гидрокси-3-метилпентилокси)бензнитрил.

Синтез

Соединения формулы I могут быть получены с использованием способов, аналогичных известным в данной области техники для получения простых эфиров. С целью описания таких реакций внимание читателя обращается на заявку на европейский патент № 58932, опубликованную 1 сентября 1982 года, содержание которой включено тем самым посредством ссылки. Ниже на схеме 1 представлен обзор одной такой методики.

Схема 1

- 5 009902

Как изображено выше, одним из исходных веществ является спирт, представленный структурой 1. К¹, Я², А1к' и X² должны представлять собой тот же самый заместитель, что и в желаемом конечном продукте. Такие спирты известны в данной области техники и могут быть приобретены в известных коммерческих источниках. Альтернативно, они могут быть получены, как описано в Тс1га11сбгоп: Азуттейу, 1991, Уо1. 2, раде 569.

Другим исходным веществом является 4-фторбензнитрил, представленный структурой 2. X¹ должен представлять собой тот же самый заместитель, что и в желаемом конечном продукте. Такие бензнитрилы известны в данной области техники и могут быть синтезированы, как описано в заявке на патент Японии № 01097937.

Изображенное выше нуклеофильное замещение может быть осуществлено так, как известно в данной области техники. Спирт структуры 1 приводят в контакт с небольшим избытком основания, такого как гидрид натрия, для получения алкоксид-иона. Реакцию осуществляют в апротонном растворителе, таком как тетрагидрофуран, в атмосфере инертного газа (обычно азота) при температуре приблизительно 0°С. Спирт перемешивают с основанием в течение периода времени в диапазоне 5-60 мин.

Затем в реакционную среду добавляют 1 экв. 4-фторбензнитрила структуры 2 и реагенты перемешивают в течение периода времени, достаточного для того, чтобы алкоксид-ион вытеснил фтор из бензнитрила. Для этого обычно требуется от 30 мин до 24 ч. Реакционную смесь обычно оставляют нагреваться до комнатной температуры.

Желаемый продукт формулы I может быть выделен экстракцией, упариванием или другими методиками, известными в данной области техники. Затем его можно дополнительно очистить хроматографией, перекристаллизацией, дистилляцией или применяя другие методики, известные в данной области техники.

Специалистам в данной области техники должно быть очевидно, что применение некоторых способов, полезных для получения таких соединений, как описано выше, может требовать защиты конкретной функциональной группы, например, для предупреждена вступления такой функциональной группы в реакции с другими участками внутри молекулы или для сохранения целостности такой функциональной группы. Необходимость в такой защите и тип такой защиты без труда определяются специалистом в данной области техники и будут зависеть, например, от природы функциональной группы и условий выбранного способа получения. См., например, Т.^. Стеепе, Рто!есбуе Сгоирк ίη Отдашс 8упШе815, ίοΐιη ^11еу & 8опз, №\ν Уотк, 1991.

Некоторые из соединений по этому изобретению являются кислотными, и они образуют соли с фармацевтически приемлемым катионом. Некоторые из соединений по этому изобретению являются основными, и они образуют соли с фармацевтически приемлемыми анионами. Все такие соли находятся в пределах объема этого изобретения, и они могут быть получены традиционными способами, такими как объединение кислотных и основных компонентов, обычно в стехиометрическом соотношении, в водной, неводной или частично водной среде, как целесообразно. Данные соли выделяют либо фильтрованием, либо осаждением нерастворителем с последующим фильтрованием, либо выпариванием растворителя, либо, в случае водных растворов, лиофилизацией, как целесообразно. Данные соединения получают в кристаллической форме в соответствии с методиками, известными в данной области техники, такими как растворение в соответствующем растворителе(ях), таком как этанол, гексаны или смеси вода/этанол.

Медицинское и косметическое применения

Соединения формулы I являются модуляторами рецепторов андрогенов. Они могут быть использованы для облегчения состояний, ассоциированных с несоответствующей активацией рецептора андрогенов. Соединения, действующие как антагонисты андрогенов, могут быть использованы для лечения или ослабления гормонозависимых видов рака, таких как карциномы предстательной железы, доброкачественной гиперплазии предстательной железы, акне, гирсутизма, избыточной секреции сальных желез, алопеции, гипертрихоза, преждевременного полового созревания, простамегалии, вирилизации и синдрома поликистоза яичников.

Соединения, действующие как частичные агонисты или полные агонисты, могут быть использованы для лечения или ослабления мужского гипогонадизма, мужской сексуальной дисфункции (импотенции, диссперматогенного бесплодия субъектов мужского пола), аномальной половой дифференциации (гермафродитизм субъектов мужского пола), задержки полового созревания у субъектов мужского пола, мужского бесплодия, гипопластической анемии, гемолитической анемии, серповидно-клеточной анемии, идиопатической тромбоцитопенической пурпуры, миелофиброза, почечной анемии, заболеваний, вызывающих истощение (послеоперационного состояния, индуцированных злокачественной опухолью, травмой, хроническим заболеванием почек, ожогом или СПИДом), для смягчения боли на конечной стадии развития рака гениталий особей женского пола, для лечения или ослабления неоперабельного рака молочной железы, мастопатии, эндометриоза, женской сексуальной дисфункции, остеопороза, для лечения ран и восстановления мышечной ткани.

Для того, чтобы продемонстрировать описанные выше терапевтические свойства, соединения необходимо вводить в количестве, достаточном для модулирования активации рецептора андрогенов. Это количество может изменяться в зависимости от конкретного заболевания/состояния, подвергаемого лечению, тяжести заболевания/состояния пациента, пациента, конкретного соединения, которое должно

- 6 009902 быть введено, пути введения и наличия у пациента других скрытых болезненных состояний и т.д. При системном введении соединения обычно демонстрируют свой эффект в диапазоне доз от приблизительно 0,1 до приблизительно 100 мг/кг/сутки для любого из перечисленных выше заболеваний или состояний. Повторное ежедневное введение может быть желательным и будет изменяться в соответствии с изложенными выше состояниями.

Соединения по настоящему изобретению можно вводить разнообразными путями. Они эффективны, если их вводят перорально. Кроме того, соединения можно вводить парентерально (то есть подкожно, внутривенно, внутримышечно, внутрибрюшинно или интратекально), ректально или местно.

В типичном воплощении соединения вводят местно. Местное введение особенно целесообразно для гирсутизма, алопеции, акне и избыточной секреции сальных желез. Доза будет варьировать, но в качестве общей рекомендации соединение будет представлено в дерматологически приемлемом носителе в количестве от приблизительно 0,01 до 50 мас./мас.% и в более типичном случае от приблизительно 0,1 до 10 мас./мас.%. Дерматологический препарат будут наносить на область воздействия от 1 до 4 раз в сутки. «Дерматологически приемлемый» относится к носителю, который можно наносить на кожу или волосы и который будет способствовать диффузии лекарственного средства в место действия. Более конкретно, это относится к месту, где желательно ингибирование активации рецептора андрогенов.

Еще в одном воплощении соединения используют местно для ослабления алопеции, в особенности андрогенной алопеции. Андрогены оказывают сильное влияние как на рост волос, так и на выпадение волос. В большинстве частей организма, таких как борода и кожа лобковой области, андрогены стимулируют рост волос, удлиняя фазу роста цикла роста волос (анаген) и увеличивая размер фолликулов. Для роста волос на волосистой части кожи головы андрогенов не требуется, но парадоксально, что андрогены необходимы для облысения волосистой части кожи головы у генетически предрасположенных индивидуумов (андрогенная алопеция), где имеет место постепенное уменьшение продолжительности анагена и размера волосяных фолликулов. Андрогенная алопеция также является обычной для женщин, у которых в типичном случае она представлена в виде диффузной потери волос по сравнению с типами алопеции, наблюдаемыми у мужчин.

Несмотря на то, что в наиболее типичном случае соединения будут использованы для ослабления андрогенной алопеции, данное изобретение не ограничено этим конкретным состоянием. Соединения могут быть использованы для ослабления любого типа алопеции. Примеры неандрогенной алопеции включают гнездную алопецию, алопецию, вызванную радиотерапией или химиотерапией, рубцующуюся алопецию, алопецию, обусловленную стрессом и т.д. Как использовано в данной заявке, «алопеция» относится к частичной или полной потере волос на волосистой части кожи головы.

Таким образом, соединения можно наносить местно на волосистую часть кожи головы и волосы для предупреждения или ослабления облысения. Кроме того, соединение можно наносить местно для индуцирования или стимулирования роста волос на волосистой части головы.

Еще в одном воплощении изобретения соединение формулы I наносят местно для предотвращения роста волос в областях, где такой рост волос нежелателен. Одно такое применение будет относиться к ослаблению гирсутизма. Гирсутизм представляет собой избыточный рост волос в областях, где обычно не должно быть волос (то есть на женском лице). Такой несоответствующий рост волос наиболее часто бывает у женщин и часто наблюдается в менопаузе. Местное введение соединений будет ослаблять это состояние, приводя к снижению или устранению этого несоответствующего или нежелательного роста волос.

Соединения также можно использовать местно для уменьшения продуцирования секрета сальных желез, и более конкретно для ослабления эффекта жирной кожи. Подобным же образом соединения можно использовать местно для ослабления акне.

Еще в одном воплощении эти соединения, действующие как частичные агонисты или полные агонисты, могут быть использованы для лечения или ослабления остеопороза. Остеопороз характеризуется разрежением кости, являющимся результатом дисбаланса между резорбцией кости (деструкцией) и образованием кости, который начинается на четвертом десятке и продолжается в течение жизни со скоростью приблизительно 1-4% в год (ЕайеП, Тгеа1теи1 о£ ро81тепораи8а1 ойеорогоДю №\ν Епд. 1. Меб. 338: 736, 1998). В Соединенных Штатах в настоящее время имеется приблизительно 20 млн человек с выявляемыми переломами позвоночника, обусловленными остеопорозом. В дополнение к этому происходит приблизительно 250000 переломов шейки бедра в год, обусловленных остеопорозом, с которыми связана степень летального исхода 12%-20% в течение первых 2 лет, в то время как 30% пациентов требуется домашний уход после перелома и многие никогда не становятся полностью способными ходить снова. У женщин после менопаузы недостаточность эстрогенных гормонов приводит к повышенной резорбции кости, результатом которой является разрежение костной ткани позвоночника, составляющее около 5% в год сразу после менопаузы. Таким образом, первым видом лечения/предупреждения этого состояния является ингибирование резорбции кости бисфосфонатами, эстрогенами, селективными модуляторами рецепторов эстрогенов (8ЕКМ) и кальцитонином. Однако ингибиторов резорбции кости недостаточно для восстановления костной массы пациентов, которые уже потеряли значительное количество костной массы. Увеличение позвоночной костной минеральной плотности (ВМЭ), достигаемое лечением бисфосфонатом, может достичь 11% после 7 лет лечения алендронатом. В дополнение к этому, поскольку скорость

- 7 009902 круговорота вещества кости различается от места к месту, является выше для губчатой кости позвоночника, чем для наружного покрова трубчатых костей, ингибиторы резорбции кости являются менее эффективными для увеличения ΒΜΌ шейки бедра и предупреждения перелома шейки бедра. Ввиду неудовлетворенной потребности при лечении остеопороза, в особенности у пациентов с высокой степенью риска переломов шейки бедра, будут обращаться к остеоанаболическим агентам, вызывающим увеличение кортикального/периостального образования кости и костной массы трубчатых костей.

В ряде исследований продемонстрировано, что андрогены являются остеоанаболическими агентами для женщин и мужчин. Показано, что анаболические стероиды, такие как нандролона деканоат или станозолол, увеличивают костную массу у женщин в постменопаузе. Целебные эффекты андрогенов на кости при постменопаузальном остеопорозе хорошо подтверждены документально в последних исследованиях с использованием комбинированного введения тестостерона и эстрогена (НоГЬансг. с1 а1., Апйгодеп сГГсс15 оп Ьоие те1аЬо118ш: тесеп! ртодтекк апй соШтоуегаек, Еиг. 1. Епйосипо1. 140, 271-286, 1999). Таким образом, те соединения формулы I, которые демонстрируют активность в качестве агонистов или частичных агонистов, могут быть использованы для лечения или ослабления остеопороза, включая первичный остеопороз, такой как возрастной, постменопаузальный и ювенильный остеопороз, а также вторичный остеопороз, такой как остеопороз, обусловленный гипертиреозом или синдромом Кушинга (ввиду лечения кортикостероидами), акромегалией, гипогонадизмом, дизостеогенезом и гипофосфатаземией. Другие имеющие отношения к кости симптомы, при которых показано лечение агонистами андрогенов, включают остеопорозный перелом, детское идиопатическое разрежение кости, альвеолярное разрежение кости, разрежение нижнечелюстной кости, перелом кости, остеотомию, периодонтит или врастание протеза.

Те соединения, которые действуют как агонисты или частичные агонисты, также можно использовать для стимулирования мышечной массы у пациентов, страдающих от заболеваний, вызывающих истощение, таких как СПИД, кахексия при раке, ожоги, заболевание почек и т.д. Пациенты, страдающие от травмы, пролежней, престарелые люди и т.д. также могут получить целебный эффект от анаболического воздействия андрогенов.

Совместное введение

Еще в одном воплощении данного изобретения соединения формулы I могут быть введены совместно с другими соединениями для дополнительного повышения их активности или для сведения к минимуму возможных побочных эффектов. Например, известно, что открывающие калиевые каналы агенты, такие как миноксидил, стимулируют рост волос и индуцируют анаген. Примеры других открывающих калиевые каналы агентов включают (38,4К)-3,4-дигидро-4-(2,3-дигидро-2-метил-3-оксопиридазин-6-ил) окси-3-гидрокси-6-(3-гидроксифенил)сульфонил-2,2,3-триметил-2Н-бензо [Ь]пиран, диаксозид и РО 1075, который находится в стадии разработки в Ьео РйаттасеийсаК Также известно, что тиреоидный гормон стимулирует рост волос. В дополнение к этому, было показано, что синтетические заменители тиреоидного гормона (т.е. тиреомиметики) стимулируют рост волос. Такие тиреомиметики были ранее описаны в литературе. Для обсуждения подобных соединений и их использования для ослабления алопеции внимание читателя обращается на заявку на европейский патент № 1262177, содержание которой включено тем самым посредством ссылки. Одним из конкретных соединений, представляющих особый интерес, является 2-{4-[3-(4-фторбензил)-4-гидроксифенокси]-3,5-диметилфенил}-2Н-[1,2,4]триазин-3,5-дион. Действие антиандрогенов может осуществляться посредством ряда различных механизмов. Например, некоторые соединения блокируют превращение тестостерона в 5-а-дигидротестостерон, ответственный за биологический эффект во многих тканях. Было показано, что ингибиторы 5-альфа-редуктазы, такие как финастерид, стимулируют рост волос. Финастерид от Мегск имеется в продаже под торговым названием Ртореаа®. Примеры других ингибиторов 5-а-редуктазы включают дутастерид (О1ахо 811Ш11к1те). Такие соединения можно вводить вместе с соединениями формулы I для ослабления алопеции.

Также было показано, что ингибиторы протеинкиназы С стимулируют рост волос и индуцируют анаген. Было показано, что кальфостин С, являющийся селективным ингибитором протеинкиназы С, индуцирует анаген. Также было показано, что другие селективные ингибиторы протеинкиназы С, такие как гексадецилфосфохолин, пальмитоил-ПЬ-карнитина хлорид и полимиксина В сульфат, индуцируют анаген (8кт Рйаттасо1. Арр1. 8кт Рйуыок 2000 Мау-Аид.; 13(3-4): 133-42). Любой такой ингибитор протеинкиназы С можно вводить вместе с соединением формулы I для ослабления алопеции.

Иммунофилины представляют собой семейство цитоплазматических белков. Их лиганды включают циклоспорин, БК506 и рапамицин. Они имеют происхождение из грибов и первоначально разрабатывались в связи с их сильнодействующими иммуносупрессивными свойствами. Циклоспорин связывается с белком циклофилином, в то время как БК506 и рапамицин связываются с БК-связывающим белком (БКВР). Показано, что все эти соединения стимулируют рост волос и индуцируют анаген. Любой из таких лигандов иммунофилинов можно вводить вместе с соединением формулы I для ослабления алопеции.

Как использовано в данной заявке, «совместно введенный» относится к введению соединения формулы I со вторым агентом против алопеции, обычно имеющим другой механизм действия, с использованием режима введения, способствующего росту волос у пациента. Это может относиться к одновременному введению, введению в разные моменты времени в течение 1 суток и даже к введению в разные су

- 8 009902 тки. Соединения могут быть введены по отдельности или могут быть объединены в один препарат. Методики изготовления таких препаратов описаны ниже.

Препараты

Если желательно, данные соединения можно вводить непосредственно без какого-либо носителя. Однако для облегчения введения в типичном случае они будут изготовлены в виде препарата в фармацевтических носителях. Так, в наиболее типичном случае они будут изготовлены в виде препарата в дерматологических или косметических носителях. В этой заявке термины «дерматологический носитель» и «косметический носитель» используются взаимозаменяемо. Они относятся к препаратам, разработанным для применения непосредственно на кожу или волосы.

Фармацевтические и косметические композиции могут быть изготовлены с использованием известных в данной области техники методик. В типичном случае эффективное количество соединения будет смешано с фармацевтически/косметически приемлемым носителем.

Для перорального введения соединения могут быть изготовлены в виде твердых или жидких препаратов, таких как капсулы, пилюли, таблетки, лепешки, расплавы, порошки, суспензии или эмульсии. Твердые стандартные лекарственные формы могут представлять собой обычные капсулы желатинового типа, содержащие, например, поверхностно-активные вещества, смазывающие вещества и инертные наполнители, такие как лактоза, сахароза и кукурузный крахмал, либо они могут быть препаратами непрерывного высвобождения.

В другом воплощении соединения формулы I могут быть таблетированы с традиционными таблеточными основами, такими как лактоза, сахароза и кукурузный крахмал, в комбинации со связующими, такими как аравийская камедь, кукурузный крахмал или желатин, разрыхляющими агентами, такими как картофельный крахмал или альгиновая кислота, и смазывающим веществом, таким как стеариновая кислота или стеарат магния. Жидкие препараты готовят растворением активного ингредиента в водном или неводном фармацевтически приемлемом растворителе, который, кроме того, может содержать суспендирующие агенты, подсластители, корригенты и консервирующие агенты, которые известны в данной области техники.

Для парентерального введения соединения могут быть растворены в физиологически приемлемом фармацевтическом носителе и введены либо в виде раствора, либо суспензии. Примеры подходящих фармацевтических носителей представляют собой воду, физиологический раствор, растворы декстрозы, растворы фруктозы, этанол или масла животного, растительного или синтетического происхождения. Фармацевтический носитель также может содержать консерванты, буферы и т.д., известные в данной области техники. Когда соединения предназначены для интратекального введения, они также могут быть растворены в цереброспинальной жидкости, как известно в данной области техники.

Соединения по данному изобретению в типичном случае будут введены местно. Как использовано в данном описании изобретения, «местный» относится к нанесению соединений (и возможного носителя) непосредственно на кожу и/или волосы. Композиция для местного применения по настоящему изобретению может быть представлена в форме растворов, лосьонов, целебных мазей, кремов, мазей, липосом, спреев, гелей, пенок, роликовых карандашей или любого другого препарата, обычно используемого в дерматологии.

Так, еще одно воплощение относится к косметическим или фармацевтическим композициям, в частности дерматологическим композициям, которые содержат по меньшей мере одно из соединений, соответствующих приведенной выше формуле I. Такие дерматологические композиции будут содержать от 0,001 до 10 мас./мас.% соединений в смеси с дерматологически приемлемым носителем и в более типичном случае 0,1-5 мас./мас.% соединения. Такие композиции в типичном случае будут нанесены 1-4 раза в сутки. Для рассмотрения того, как приготовить такие препараты, внимание читателя обращается на ΕοιηίπβΙοη'δ Рйаттасеийса1 8е1еисе, Εάίίίοη 17, Маск РиЫщЫид Со., ЕаЧоп. РА.

Композиции по изобретению также могут состоять из твердых препаратов, входящих в состав очищающего мыла или кусков мыла. Эти композиции готовят согласно обычным способам.

Данные соединения также можно применять для волос в форме водных, спиртовых или водно-спиртовых растворов, либо в форме кремов, гелей, эмульсий или муссов, либо альтернативно, в форме аэрозольных композиций, содержащих также пропеллент под давлением. Кроме того, композиция по изобретению может представлять собой композицию по уходу за волосами, и в частности шампунь, лосьон для укладки волос, лечебный лосьон, моделирующий крем или гель, композицию для окрашивания, лосьон или гель для предупреждения выпадения волос и т.д. Количества различных компонентов в дерматологических композициях по изобретению соответствуют количествам, традиционно используемым в рассматриваемых областях.

Медицинские и косметические препараты, содержащие соединения по изобретению, в типичном случае будут упакованы для розничного распространения (т. е. как продукт производства). Такие продукты будут маркированы и упакованы таким образом, чтобы инструктировать пациента о том, как использовать продукт. Такие инструкции будут включать указания на состояние, которое следует лечить, продолжительность лечения, схему введения и т.д.

Соединения формулы I также могут быть смешаны с любым инертным носителем и использованы в лабораторных анализах с целью определения у пациента концентрации соединений в сыворотке крови, моче и т. д., как известно в данной области техники. Кроме того, данные соединения можно использовать

- 9 009902 в качестве средства исследований.

Несмотря на то, что данное изобретение описано вместе с его конкретными воплощениями, очевидно, что возможны его дополнительные модификации, и считается, что эта заявка охватывает любые вариации, применения или приложения данного изобретения, в целом, вытекающие из принципов данного изобретения и включающие такие отклонения от настоящего описания изобретения, какие входят в известную или обычную практику применения в данной области техники, к которой относится данное изобретение. Следующие далее примеры и биологические данные представлены для дополнительной иллюстрации изобретения. Это описание не следует рассматривать как каким-либо образом ограничивающее данное изобретение.

Пример 1. (18,28)-4-(2-Гидрокси-1-метилпропокси)-2-трифторметилбензнитрил.

ΝαΗ (0,20 г; 4,14 ммоль) суспендировали в 15 мл безводного ТНР, затем добавляли (28,38)-(+)-2,3бутандиол (0,32 г; 3,45 ммоль; в 5 мл безводного ТНР). Эту смесь перемешивали при 0°С в течение 10 мин с последующим добавлением 4-фтор-2-трифторметилбензнитрила. Реакционную смесь перемешивали при 0°С в течение 1 ч в атмосфере азота. Эту смесь затем перемешивали в течение дополнительных 2 ч при комнатной температуре в вытяжном шкафу. Реакцию гасили 25 мл дистиллированной воды, экстрагировали этилацетатом (3х20 мл). Продукт очищали колоночной хроматографией, используя гексан :этилацетат в соотношении от 5:1 до 1:1 в качестве элюента, с получением чистого продукта.

М8: 260,0 (М+1 для 0₂Ηι₂Ρ₃ΝΟ₂). ЬСМ8: колонка С-18 (50%Н₂0/50%СН₃СХ), время удерживания (КТ): 1,81 мин.

Примеры 2-27.

Используя общую методику из примера 1, но заменяя на релевантные исходные вещества, получали соединения, описанные в табл. 1. Хроматографию проводили на коллекторе фракций Роху 200, используя приготовленную колонку Вю1аде 8Шсоп Се1 (в качестве элюирующего растворителя использовали смесь 50:50 вода:метилнитрил во всех примерах, за исключением 8, 16, 17, 26, где использовали смесь 25:75 вода:метилнитрил). Представленные в табл. 1 масс-спектры регистрировали, используя массспектрометр Не\\'1е11 Раскагй.

Таблица 1

При- мер	Структура	Наименование	КТ	Основной ПИК
2	г3с т—1 .'°н \__/ О' /'	(1К,2К)-4-(2- Г идрокси-1 -метилпропокси)-2трифторметилбензнитрил	1,85	М8: 260,0 (М+1 для Ο12Ηι2Ρ3ΝΟ2)
3	р3с //—\ V-	4-(2-Гидрокси-1метил-пропокси)-2трифторметилбензнитрил	1,80	М8:260,0 (М+1 ДЛЯ 012Η|2Ρ3Ν02)
4		4-(2-Г идрокси-6метил-гептилокси)2-трифторметилбензнитрил	1,95	М8: 316,2 (М+1 для ΟΙ6Η20Ρ3ΝΟ2)

- 10 009902

5		4-(2-Гидроксиоктилокси)-2трифторметилбензнитрил	1,76	М8: 316,2 (М+1 для Ο16Η20Ρ3ΝΟ2)
7	Р3С \ /// \ Χό/^'/Χ^0Η N \=/	4-(3-Гидроксибутокси)-2трифторметилбензнитрил	2,50	М8: 260,1 (М+1 ДЛЯ Οι2Ηι2Ρ3ΝΟ2)
8	Р3С / \ 1 /// \ Г\ / ' 1 АТТ Ν7 \ --/	(38)-4-(3Г идроксибутокси)-2грифторметилбензнитрил	0,91	М8: 260,1 (М+1 для Г> тт т? хтп \ ^12П12г31мо2;
9	РзС \__ ОН ΝΖ \=/ 0	4-(3-Гидроксигекс-5-енилокси)-2трифторметилбензнитрил	2,42	М8: 280,0 (М+1 для Οι4Η14Ρ3ΝΟ2)
10	ГзС \__ ОН	4-(3-Гидрокси-2метил-бутокси)-2трифторметилбензнитрил	2,12	М8: 274,0 (М+1 для Ο13Ηι4Γ3ΝΟ2)
И	РзС 7~Л А \ Ао^хх^он N /\	4-(3-Г идрокси-2,2диметилпропокси)-2трифторметилбензнитрил
12	Р3С /Л к \ Ао^^^^он N \=/	4-(3-Гидрокси-3метил-бутокси)-2трифторметилбензнитрил	2,25	М8: 274,1 (М+1 для 013Η14Ρ3Ν02)
13	РзС л-?л X х/ \ АоХ X он Ν	4-(3-Гидрокси2,2,4-1риметилпентилокси)-2грифторметилбензнитрил

- 11 009902

14	р3с	он	4-(2-Этил-3гидроксигексилокси)-2грифторметилбензнитрил	3,8	Μδ: 316,2 (М+1 ДЛЯ Ο16Η20Ρ3ΝΟ2)
15	ЕзСх / V	^он	4-[2-(1-Гидроксиэтил)-гексилокси] 2-трифторметилбензнитрил	1,6	М8: 316,2 (М+1 для Ο16Η20Ρ3ΝΟ2)
16	р3с //} \ гли N	(18,38)-4-(3- Г идрокси-1 -метилбутокси)^т-пгт Α,'Τ'/мл* /аттт тт ιρ*ιψ 1 νρίνΐν 1ПЛ· бензнитрил	1,03	М8: 274,0 (М+1 для '^И3 1х14± .^^2/
17	НС 1 1 \__/Ό’''	(1К,ЗК)-4-(3Г идрокси-1 -метилбутокси)-2грифторметилбензнитрил	1,02	М8: 274,0 (М+1 ДЛЯ Οι3Η14Ρ3ΝΟ2)
18	Ρ3\ ί 66'0'......................	4-(4-Гидроксибутокси)-2трифторметилбензнитрил		кле· Одо о ГКЛ4-1 ±ТАкД. ί-ΟΟ,υ ух ТА 1 А ДЛЯ 0ι2Ηι2Ρ3ΝΟ2)
19	р3с	4-(4-Гидроксибутокси)-2трифторметилбензнитрил	1,52	М8: 274,0 (М+1 ДЛЯ Οι3Ηι4Ρ3ΝΟ2)
20	р3с _-/Х он /Λ_λο^γΟΗ	4-(4-Гидроксигептилокси)-2трифторметилбензнитрил	3,10	М8: 302,1 (М+1 ДЛЯ Ο15Η18Ρ3ΝΟ2)

- 12 009902

21	РзС __ //—ХуХ/0Н	4-(4-Гидрокси-1пропил-бутокси)-2грифторметилбензнитрил	3,16	М8: 302,1 (М+1 ДЛЯ Οι5Η18Γ3ΝΟ2)
22	Р3у	ОН	4-(4-Гидрокси-1мегилпентилокси)-2трифторметилбензнитрил	2,27	М8: 288,1 (М+1 для СиНиГзЬКЪ)
23	Р р__Лр н У=\ \_А У	'0	(18,48)-4-(4- Г идрокси-1 -метилпентилокси)-2трифторметилбензнитрил	2,29	М8: 288,1 (М+1 для Ο14Ηι6Ρ3ΝΟ2)
24	РзС N х —7	4-(5-Гидроксипентилокси)-2трифторметилбензнитрил	1,94	М8: 274,0 (М+1 ДЛЯ 0ι3Ηι4Ρ3ΝΟ2)
25	РзС У \ /\/У'/У/^хон Ν ν=ζ	4-(5-Гидроксигексилокси)-2трифторметилбензнитрил	2,31	М8: 288,0 (М+1 ДЛЯ 014Ηι6Ρ3Ν02)
26	РзС · /УЗУс+'—У^он	4-(5-Гидрокси-3метилпентилокси)-2трифторметилбензнитрил	1,01	М8: 288,2 (М+1 ДЛЯ 0ι4Ηι6Ρ3ΝΟ2)
27	С1 \ , он / V 1		2-Хлор-4-(3гидрокси-2,2,4триметилпентилокси)бензнитрил	1,70	М8: 282,1 (М+1 для Οι5Η20Ο1ΝΟ2)
6	РзС___ он	4-(2-Г идрокси-окт7-енилокси)-2трифторметилбензнитрил	3,19	М8: 314,1 (М+1 для 016Η18Ρ3Ν02)

- 13 009902

Пример 28. 2-Хлор-4-(4-гидрокси-1-метилпентилокси)бензнитрил.

К раствору 2,5-гександиола (28 мг; 0,240 ммоль) в тетрагидрофуране добавляли избыток бутилата калия. Эту смесь недолго перемешивали и добавляли 2-хлор-4-фторбензнитрил (37 мг; 0,240 ммоль). Эту смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 72 ч. Очисткой обращенно-фазовой хроматографией высокого давления с элюированием градиентом растворителей (от 15% смеси 0,1%-ная муравьиная кислота/СН₃СЫ в смеси 0,1%-ная муравьиная кислота/вода до 100% смеси 0,1%-ная муравьиная кислота/вода) получили 28,4 мг 2-хлор-4-(4-гидрокси-1-метилпентилокси)бензнитрила.

¹Н ЯМР (СЕ>С1₃) δ 7,50 (ά, 1Н), 6,95 (т, 1Н), 6,79 (Ъг ά, 1Н), 4,43 (т, 1Н), 3,79 (т, 1Н), 1,89-1,40 (т, 4Н), 1,30 (ά, 3Н), 1,17 (ά, 3Н); М8 т/ζ 253.

Пример 29. 2-Хлор-4-(3-гидроксипропокси)бензнитрил.

К 1,3-пропандиолу (320 мг; 4,2 ммоль) добавляли натрий (21 мг; 0,92 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 10 мин и добавляли 2-хлор-4-фторбензнитрил (156 мг; 1,0 ммоль). Реакционную смесь нагревали до 105°С в течение 24 ч. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры, разбавляли водой и экстрагировали Εΐ₂Ο (3х). Органический раствор сушили (Мд8О₄), фильтровали и концентрировали. Остаток очищали обращенно-фазовой хроматографией высокого давления, элюируя градиентом растворителей (от 15% смеси 0,1%-ная муравьиная кислота/СН₃СЫ в смеси 0,1%-ная муравьиная кислота/вода до 100% смеси 0,1%-ная муравьиная кислота/вода), с получением 107 мг 2-хлор-4-(3-гидроксипропокси)бензнитрила.

¹Н ЯМР (СЕ>С1₃) δ 7,54 (ά, 1Н), 7,00 (т, 1Н), 6,85 (άά, 1Н), 4,15 (ΐ, 2Н), 3,83 (ΐ, 2Н), 2,04 (т, 2Н).

Пример 30. 2-Хлор-4-(4-гидроксибутокси)бензнитрил.

Следуя методике, описанной для примера 29, 1,4-бутандиол (1 мл, 10 ммоль) подвергали взаимодействию с 2-хлор-4-фторбензнитрилом (159 мг; 1,0 ммоль) в течение 24 ч при комнатной температуре. Очисткой обращенно-фазовой хроматографией высокого давления с элюированием градиентом растворителей (от 15% смеси 0,1%-ная муравьиная кислота/СН₃СЫ в смеси 0,1%-ная муравьиная кислота/вода до 100% смеси 0,1%-ная муравьиная кислота/вода) получили 10 мг 2-хлор-4-(4-гидроксибутокси) бензнитрила.

¹Н ЯМР (СПС1₃) δ 7,54 (ά, 1Н), 6,98 (ά, 1Н), 6,83 (άά, 1Н), 4,03 (ΐ, 2Н), 3,71 (ΐ, 2Н), 1,90 (т, 2Н), 1,72 (т, 2Н); М8 226,1 (М+1).

Пример 31. 2-Хлор-4-(1-гидроксиметилаллилокси)бензнитрил.

Стадия А. 1-(трет-Бутилдиметилсиланилокси)бут-3-ен-2-ол.

К раствору (+/-)-3-бутен-1,2-диола (500 мг; 5,67 ммоль) в СН₂С1₂ (25 мл) добавляли имидазол (444 мг;

- 14 009902

6,53 ммоль). Раствор охлаждали до 0°С и добавляли трет-бутилдиметилсилилхлорид (1,0М в ТНЕ; 6,24 мл; 6,24 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при 0°С в течение 15 мин и при комнатной температуре в течение 1 ч 30 мин. Смесь разбавляли водным ЯН₄С1 и экстрагировали СН₂С1₂ (3х). Органический раствор промывали соляным раствором, сушили (Мд80₄), фильтровали и концентрировали. Остаток очищали хроматографией при среднем давлении, элюируя градиентом растворителей (от 5%-ного Е10Лс в гексанах до 100%-ного Е10Лс), с получением 827,5 мг 1-(трет-бутилдиметилсиланилокси)бут-3-ен-2-ола.

¹Н ЯМР (СПС1₃) δ 5,81 (т, 1Н), 5,34 (б, 1Н), 5,19 (б, 1Н), 4,17 (т, 1Н), 3,66 (бб, 1Н), 3,45 (бб, 1Н), 0,90 (8, 9Н), 0,08 (8, 6Н); М8 т/ζ 202.

Стадия В. 4-[1-(трет-Бутилдиметилсиланилоксиметил)аллилокси]-2-хлорбензнитрил.

К раствору 1-(трет-бутилдиметилсиланилокси)бут-3-ен-2-ола (1,102 г; 5,45 ммоль) в ТНЕ (26 мл) при -78°С добавляли трет-бутилат калия (1,0М в ТНЕ; 5,99 мл; 5,99 ммоль). Раствор перемешивали в течение 15 мин и добавляли 2-хлор-4-фторбензнитрил (847 мг; 5,45 ммоль) при -78°С. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 24 ч, гасили водой и экстрагировали Е10Лс (3х). Органический раствор промывали водой и соляным раствором, сушили (Мд80₄), фильтровали и концентрировали с получением 1,67 г смеси 1:1 4-[1-(трет-бутилдиметилсиланилоксиметил)аллилокси]-2-хлорбензнитрила и 4-[2-(трет-бутилдиметилсиланилокси)бут-3-енилокси]-2-хлорбензнитрила.

'|| ЯМР (СПС1₃) δ 7,55 (т, 2Н), 7,02 (т, 2Н), 5,91-5,78 (т, 2Н), 5,42-5,22 (т, 4Н), 4,75 (т, 1Н), 4,51 (т, 1Н), 3,90 (т, 2Н), 3,79 (т, 2Н), 0,89 (8, 9Н), 0,87 (8, 9Н), 0,07 (8, 6Н), 0,04 (8, 6Н).

Стадия С. 2-Хлор-4-(1-гидроксиметилаллилокси)бензнитрил.

К раствору упомянутой выше смеси региоизомеров, пример 31, стадия: В (1,67 г; 4,95 ммоль), в ТНЕ (15 мл) добавляли трет-бутиламмонийфторид (1,0М в ТНЕ; 5,44 мл; 5,44 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 15 мин, разбавляли водным ХН₄С1 и экстрагировали Е10Лс (3х). Органический раствор промывали соляным раствором, сушили (Мд80₄), фильтровали и концентрировали. Остаток очищали хроматографией при среднем давлении с элюированием градиентом растворителей (от гексанов до 100%-ного Е10Лс в гексанах в течение 70 мин), получая 112 мг 2хлор-4-(1-гидроксиметилаллилокси)бензнитрила.

'|| ЯМР (СЭС1₃) δ 7,55 (б, 1Н), 7,04 (б, 1Н), 6,89 (бб, 1Н), 5,85-5,76 (т, 1Н), 5,38 (т, 2Н), 4,80 (т, 1Н), 3,80 (т, 2Н).

Пример 31 А.

Этот пример дополнительно иллюстрирует получение (18,48)-4-(4-гидрокси-1-метилпентилокси)-2трифторметилбензнитрила, продукта примера 23.

ЫаН (60%-ный в минеральном масле) суспендировали в 100 мл безводного ТНЕ, его перемешивали и охлаждали до 0°С в атмосфере Ν₂ в течение 10 мин перед добавлением (28,58)-(+)-2,5-гександиола (12 г в 120 мл безводного ТНЕ). С использованием капельной воронки по каплям в течение 30 мин добавляли диол, эту смесь перемешивали при 0°С в течение 60 мин, затем при комнатной температуре (КТ) в течение 30 мин, ее повторно охлаждали до 0°С перед добавлением 4-фтор-2-(трифторметил)бензнитрила (20 г в 80 мл безводного ТНЕ) в течение 30 мин. Реакционную смесь затем перемешивали при температуре от 0°С до КТ в атмосфере Ν₂ (от 11 до 9 ч следующего дня). За ходом реакции следили, используя ТСХ (гексан:этилацетат в соотношении 1:1) и ЬС/М8.

Очистка: неочищенный продукт растворяли в 80 мл смеси растворителей (гексан:этилацетат в соотношении 3:1), очисткой колоночной хроматографией с использованием смеси гексан:этилацетат в соотношении от 5:1 до 1:1 в качестве элюента получали 22 г чистого желаемого продукта.

Пример 32.

Соединения формулы I обладают аффинностью в отношении рецептора андрогенов. Эта аффинность была продемонстрирована для отдельных соединений с использованием рецептора человека. Ниже приведено описание того, как проводили анализ.

Анализ на конкурентное связывание проводили на экстрактах НАК (Нишап апбгодеп гсссрШг). генерированных бакуловирус/8£9 в присутствии или в отсутствие тестируемого агента в различных концентрациях и при фиксированной концентрации ³Н-дигидротестостерона (³Н-ЭНТ) в качестве изотопного индикатора. Этот метод анализа связывания представляет собой модификацию ранее описанного протокола (Ыао 8., е1 а1. 1. 81егснб Вюсйет. 20: 11-17, 1984). Вкратце, соединения в постепенно уменьшающихся концентрациях инкубируют в присутствии НАК-экстракта (СНапд е! а1. Ρ.Ν.Α.8. Уо1. 89, рр. 5546-5950, 1992), гидроксилапатита и 1 нМ ³Н-ЭНТ в течение 1 ч при 4°С. Затем реакционные смеси со связавшимся материалом трижды промывают для полного удаления избытка несвязанного ³Н-ЭНТ. Уровни связанного с НАК ³Н-ЭНТ определяют в присутствии соединений (т.е. конкурентное связывание) и сравнивают с уровнями связывания, когда никакого конкурента нет (т.е. максимальное связывание). Аффинность соединения в отношении связывания с НАК выражают как концентрацию соединения, при которой максимальное связывание ингибируется наполовину. Ниже в табл. 2 приведены результаты, которые были получены для отдельных соединений (приведенные данные представляют собой средние значения по результатам нескольких тестирований, как показано ниже).

- 15 009902

Таблица 2

№ примера	Структура	АК-связывание, 1С5о (нМ)
1	ГзС ХЪ/у»	351 (в)
2	РзС //—\ V- .X ·|0Η Д'	501 (в)
3	Р3С #\ V- /Д/°н	66 (б)
4	ОН Х	442 (а)
5	Ν он	32 (а)
6	/ДД/1''' ν	415 (а)

7	р3с N ^=7	274 (а)
8	Р,с _/А . I Д \__/ΧΟ/χΖ ’ΌΗ N \=Д	213 (а)
9	ДУл /\ л	268 (а)
10	р3с	70 (а)
. 11		706 (а)
12	р3с N \=/	27 (а)
13	р3с Д \ До^Д<он Ν <=υ / \ .	442 (а)
14	р3с \__ он	260 (б)

- 16 009902

15		210 (а)
16	ЬС Λ X/ \ ΌΗ Ν \=у	6 (а)
17	ГзС 1 1 X \__/ ^Ο1'1	107 (а)
18	р3с	74 (а)
19	РзС #-\	505 (а)
20	/Ъо-у	243 (а)
21	РзС\ ///—	808 (а)
22	р3с ///—\ V	185 (а)

23	Р Р-А \ \ У~0,' ’°	41 (в)
24	Р3С N \=/	632 (в)
25	НзС X \ N ^=7	504 (а)
26	РзС X \ Ν	777 (а)
27	С1 ζ	63 (в)
28	С1\	49 (а)
29	С1 X/ \ N х=/	. 394 (а)
30	С1 т/ ΑΧο/χχχ/	99 (а)

- 17 009902

а - среднее значение по результатам двух тестирований;

б - среднее значение по результатам трех тестирований;

в - среднее значение по результатам четырех тестирований.

Пример 33.

Способность соединений антагонизировать эффекты андрогена в отношении рецептора андрогенов определяли в анализе на целых клетках, как непосредственно описано ниже.

Экспериментальная процедура для анализа АК-антагонистов на клетках

Клеточная линия: ΜΌΑ-ΜΒ453-ΜΜΤν клон 54-19. Эта клеточная линия представляет собой стабильно трансфицированную клеточную линию с ΜΌΑ-ΜΒ453 клеточным теневым фенотипом (клеточная линия опухоли молочной железы человека, экспрессирующая рецептор андрогенов). Первоначально был клонирован ΜΜΤν-минимальный промотор, содержащий АКЕ, перед репортерным геном люциферазы светляка. Затем этот каскад был клонирован в трансфицирующий вектор ρϋνΐ20ρΗΓθ. Для трансфекции ΜΌΑ-ΜΒ-453-клеток был использован метод электропорации. Была отобрана устойчивая к пуромицину клеточная линия.

Среда для клеточной культуры и реагенты

Культуральная среда: ΌΜΕΜ (высокое содержание глюкозы, № по каталогу С1Ьсо: 11960-044), 10%-ная фетальная телячья сыворотка (ΡΒ8) и 1%-ный Ь-глутамин.

Среда для посева: ΌΜΕΜ (свободная от фенолового красного), обработанная углем 10%-ная сыворотка НуС1опе, 1%-ный Ь-глутамин.

Среда для анализа: ΌΜΕΜ (свободная от фенолового красного), обработанная углем 1%-ная сыворотка НуС1опе, 1%-ный Ь-глутамин и 1%-ный пенициллин/стрептомицин.

3-кратный буфер для люциферазы: 2%-ный бета-меркаптоэтанол, 0,6%-ный АТФ, 0,0135%-ный люциферин в буфере для лизиса клеток.

Процедура анализа

1. Клетки поддерживают в культуральной среде, расщепление клеток осуществляют, когда они достигают 80-90%-ной конфлюентности.

2. Для тестирования соединений 10000 клеток/лунка помещают в непрозрачный 96-луночный планшет для клеточных культур в среду для посева (100 мкл/лунка), культивируют в течение ночи при 37°С в инкубаторе для клеточных культур.

3. Осторожно удалить среду для посева, затем добавить по 80 мкл/лунка предварительно нагретой среды для анализа, добавить по 10 мкл/лунка тестируемого соединения (конечная концентрация 1000, 200, 40, 8, 1,6 и 0,32 нМ), инкубировать при 37°С в течение 30 мин.

4. Добавить по 10 мкл/лунка свежеприготовленного ΌΗΤ (конечная концентрация 100 пМ) в каждую лунку, инкубировать при 37°С в течение 17 ч (в течение ночи).

5. Добавить по 50 мкл/лунка 3-кратного буфера для люциферазы, инкубировать при комнатной температуре в течение 5 мин, произвести подсчет на люминометре.

Увеличение индукции в несколько раз выше уровня фона, вызываемое 100 пМ ΌΗΤ в отсутствие тестируемого соединения, принимают за 100% и результат эксперимента выражают как процент ингибирования, вызываемого тестируемыми соединениями.

Результаты представлены ниже в табл. 3. Результаты представлены в виде средних значений по данным нескольких тестирований, как описано ниже (число тестирований указано в виде сноски). Н.О. (не определяли) означает, что соединение не тестировали.

Таблица 3

№ примера	Структура	АК. клетки 1С50 (нМ)
1	РзС	Н.О.
2	?зС ' //--( У Л ..он /\=Со' γ	Н.О.

- 18 009902

3	Рзс\ ΑΖΜγ“	>1000 (а)
4		>1000 (а)
5	уЬо.'-Т™ он	509 (а)
6	Рзс\ он	662 (а)
7	Рзс\ \Ζ^ΧΟ^^^ΟΗ	>1000 (в)
8	РзС^___ \ Λ^Ο^^^'ΌΗ N \=у	>1000 (а)
9	РзС ζ	Н.О.

10	РзС \__ ОН νΑΑ^^Α	274 (а)
И	РзС / СУо-^ζ^ΟΗ	Н.О.
12	А \^Хо^^^он	269 (а)
13	РзС ъ/ \ / Ό^^ΥΤΌΗ N ^=7 / \	Н.О.
14	РзС	794 (а)
15		124 (а)
16	Рзс\ г-А А к _/ \ Ао^-^ 'ΌΗ N \=/	>1000 (а)
17	РзС Α~ν к л \ /^О1'’ ^^Άη N \=/	807 (а)

- 19 009902

18	р3с	398 (а)
	х\^ОН
N	О
19	р3с			>1000 (а)
	7—/ Л //λ, /		^.ОН
20	РзС			498 (а)
	\ /		^.ОН
21	ГзС			н.о.
	7-/Л		Ж^0Н
22	ГзС			>1000 (а)
			-Ж/0Н
23	Р Р Ар			132 (N=10)
	N >=. \ν/\	—О'.,	'Ό
24	РзС\			>1000 (а)
25	Р3С			838 (N=1)
			^^'ОН

26	Р3С N \=/	н.о. |
27	<21 ί \>___	0.04 (а)
28	С1	263 (а)
29	Ζ <21^	Н.О.
30	С1	Н.О.
31	с1\___ он Аж	Н.О.

а - среднее значение по результатам двух тестирований;

б - среднее значение по результатам трех тестирований; в - среднее значение по результатам четырех тестирований.

- 20 009902

Пример 34. Животная модель андрогенетической алопеции.

Как описано выше, алопеция представляет собой проблему, на решение которой медицинская наука затрачивает значительные ресурсы. Как и при исследовании любого процесса заболевания, были разработаны животные модели, позволяющие ученым проводить скрининг соединений на их потенциальную относительную эффективность. Те соединения, которые показывают наибольшую эффективность в этих животных моделях, рассматриваются в качестве кандидатов для будущих исследований на людях. На сегодняшний день разработаны две различные животные модели алопеции. Первая представляет собой анализ на телогенную конверсию, в котором используют самок С3Н/НеИ-мышей. Во второй модели используют медвежьих макак, которые представляют собой обезьян, страдающих андрогенетической алопецией.

При проведении анализа на телогенную конверсию измеряют способность соединения преобразовывать стадию покоя цикла роста волос («телоген») в активную стадию цикла роста волос («анаген») у мышей. Преимущество этого вида анализа заключается в том, что шерсть (т.е. волосы) С3Н/НеИ-мыши возрастом 7 недель находится в фазе телогена. Эта фаза продолжается приблизительно до 75-дневного возраста. В этом виде анализа выбранные области тела мыши выбривают, приводят в контакт с тестируемым агентом или контролем и измеряют разницу в скорости роста волос (т. е. индукцию фазы анагена). Первым признаком анагена является потемнение цвета кожи ввиду того, что меланоциты в фолликулах начинают синтезировать меланин при подготовке к продуцированию пигментированных волос. Эта модель обладает рядом преимуществ. К ним относятся легкость в приобретении самок СН3НеИ-мышей, возможность проведения быстрого скрининга большого числа соединений и простота в размещении и обращении с такими животными.

Главным недостатком этой модели является отсутствие в ней андрогенетической зависимости. Несмотря на то, что точная причина облысения людей неизвестна, хорошо доказано, что андрогены индуцируют регрессию волосяных фолликул в волосистой части кожи головы. Это постадолесцентное регрессивное изменение является фундаментальной причиной облысения по мужскому типу (т.е. «андрогенетической» алопеции). Это явление имеет место как у мужчин, так и у женщин, которые имеют наследуемую генетическую предрасположенность к алопеции, как отмечено ранее. Для более подробного обсуждения влияния андрогенов на волосистую часть кожи головы человека внимание читателя обращается к ТгиеЬ, К.М., Мо1еси1аг МесЕатктк о£ Апбгодешс А1орес1а, Ехр. Сегоп1о1оду. 2002, 27: 981-990.

Исследователи проводили поиск в отношении других животных, рост волос у которых подобен таковому у людей. Это привело исследователей к медвежьим макакам. Эта разновидность приматов также страдает от андрогенетической алопеции. По существу, все постадолесцентные макаки обоих полов демонстрируют прогрессирование облысения. Аналогично прогрессированию облысения по мужскому типу у людей, андрогены являются обязательным запускающим фактором при облысении макак. Истончение волос фронтального волосяного покрова головы начинает появляться приблизительно в том же возрасте (4 года), когда уровни тестостерона в сыворотке становятся значительно повышенными у самцов животных. Несмотря на то, что повышение тестостерона у самок составляет приблизительно 1/10 от уровня у самцов, не существует никакой разницы в частоте заболевания и возрасте, при котором начинается облысение, между самцами и самками медвежьих макак. Местное применение антиандрогенов приводило к реверсированию этого вида облысения у животных обоих полов (Рап, НД. е! а1., Еуа1иабоп о£ КИ58841 ак ап апб-апбгодеп ίπ ргок1а1е РС3 се11к апб а 1орюа1 апб-а1орес1а адеп! ш 1Ее Ьа1б кса1р о£ кбипр 1абеб тасациек. Епбосгте 1998; 9: 39-43).

Несмотря на то, что эта модель является значительно улучшенной моделью облысения у людей по сравнению с анализом на телогенную конверсию, она страдает рядом практических недостатков. Макаки являются дорогими, относительно редкими, трудоемкими при содержании и требующими длительных периодов отмывания между тестированиями. Ввиду этого, макаки не являются практичной моделью для проведения скрининга большого числа соединений.

Было установлено, что самцы С3Н/НеИ-мышей могут быть использованы в анализе на телогенную конверсию для оценки антиандрогенных тестируемых соединений. Таким образом, данная модель относится к модификации существующего анализа на телогенную конверсию. Используют самцов С3Н/НеИмышей возрастом приблизительно 7 недель. Эти животные также однородны в телогене, как и животные противоположного им пола. Однако после бритья собственные андрогены самцов этих мышей ингибируют конверсию волосяных фолликул в стадию анагена. Антиандрогены будут блокировать этот вызываемый андрогенами эффект, и фолликулы будут переходить в анаген подобно тому, как это происходит у животных противоположного пола.

Пример 34А.

Соединение, описанное в примере 23, (18,48)-4-(4-гидрокси-1-метилпентилокси)-2-трифторметилбензнитрил подвергали дополнительному тестированию, применяя описанный выше модифицированный способ анализа на телогенную конверсию. Тестирование проводили следующим образом.

В данном исследовании использовали самцов С3Н/НеИ-мышей в возрасте от 6 до 7 недель (СЕабек Ктуег ЬаЬогаШпек, Ка1е1дЕ, ИС). Перед началом исследования на дорсальной области мышей сбривали шерсть. Для проведения исследования были отобраны только мыши с розовой окраской кожи, что является наглядным признаком фазы телогена.

- 21 009902

Тестируемое соединение растворяли в растворителе, состоящем из пропиленгликоля (30%) и этанола (70%), получая концентрацию 0,2% мас./об., 0,5% мас./об., 1% мас./об. или 3% мас./об. Релевантную дозу наносили местно на выбритую дорсальную область мыши в одной группе тестирования (7-10 мышей) в объеме 20 мкл/см². Третья группа животных, служившая контролем, получала только растворитель. Обработку производили дважды в сутки в течение 4 недель.

Обрабатываемую область обследовали и ранжировали в каждый последующий день по признакам роста волос. Реакцию роста волос количественно оценивали, регистрируя для каждого животного сутки, на которые на обработанной области впервые появлялись признаки роста волос. Первым признаком анагена было потемнение цвета кожи по мере того, как меланоциты в фолликулах начинали синтезировать меланин при подготовке к продуцированию пигментированных волос. За мышами наблюдали в течение 35 суток или более. Процент мышей, демонстрирующих признаки роста волос как в группе, подвергнутой обработке, так и в контрольной группе, изображен ниже в графическом виде на фигуре. Соединение из примера 23 при тестировании в концентрации 1% вызывало значительный рост волос в результате стимулирования индуцирования анагена у тестируемых животных. Скорость роста волос в 5% случаев в тестируемой группе не превышала таковую для контрольной группы с использованием растворителя.

День

3% Пример 23 % Пример 23

0,5% Пример 23 —Ж—0,2% Пример 23

Контроль (растворитель)

Пример 34В.

Продукт из примера 27, 2-хлор-4-(3-гидрокси-2,2,4-триметилпентилокси)бензнитрил, подвергали тестированию, применяя описанный выше модифицированный метод анализа на телогенную конверсию. Тестирование проводили точно так же, как и в примере 34 А, с концентрацией тестируемого соединения 3% мас./об. Скорость роста волос в тестируемой группе не превышала таковую для контрольной группы с использованием растворителя.

Пример 35. Животная модель ингибирования секреции сальных желез.

ЬибегзсйтМ! и др. описывают животную модель для тестирования способности соединений модулировать секрецию сальных желез (АгсН. Эегт. Кез. 258, 185-191 (1977)). В этой модели используют самцов сирийских хомяков, уши которых содержат сальные железы. С использованием этой модели проводили скрининг отобранных соединений, полученных выше.

Тестирование ингибирования секреции сальных желез осуществляли следующим образом. Перед началом исследования самцов сирийских хомяков в возрасте от 9 до 10 недель помещали в лабораторную среду для акклиматизации в течение 2 недель. Каждая группа состояла из 5 животных, и ее исследовали параллельно с контрольной группой с применением растворителя и с положительной контрольной группой. Перед введением 30 мг каждого соединения растворяли в 1 мл универсального растворителя (этанол/пропиленгликоль (70/30% об./об.) для получения конечной концентрации 3 мас./об.%.

Дозу животным вводили местно дважды в сутки 5 суток в неделю в течение 4 недель. Каждая доза содержала по 25 мкл растворителя в качестве контроля или лекарственного средства. Дозу наносили на вентральные поверхности как левых, так и правых ушей. Всех животных умерщвляли приблизительно через 18-24 ч после введения конечной дозы. Правые уши каждого животного использовали для анализа секрета сальных желез.

Для проведения ВЭЖХ-анализа уши подготавливали следующим образом. Посредством пункционной биопсии отбирали биоптат дистально размером 8 мм непосредственно выше анатомической «V»метки на ухе для нормализации площади образца. Данный биоптат разрывали. Вентральную поверхность

- 22 009902 биоптата (область, на которую дозу местно наносили непосредственно на сальные железы) оставляли для тестирования, а дорсальную поверхность биоптата не использовали.

Образцы ткани продували газообразным Ν₂ и хранили при -80°С в атмосфере азота до проведения ВЭЖХ-анализа. В дополнение к образцам уха аликвоты каждого лекарственного средства и растворителя (по меньшей мере по 250 мкл) также хранили при -80°С для включения в ВЭЖХ-анализ.

ВЭЖХ-анализ проводили на экстракте образца ткани. Эти образцы приводили в контакт с 3 мл растворителя (смесь 4:1 2,2,4-триметилпентана и изопропилового спирта). Смесь встряхивали в течение 15 мин и хранили в течение ночи при комнатной температуре защищенной от света. На следующее утро к образцу добавляли 1 мл воды и встряхивали в течение 15 мин. Далее образец центрифугировали приблизительно при 1500 об./мин в течение 15 мин. 2 мл органической фазы (верхний слой) переносили в стеклянный флакон, сушили при 37°С в атмосфере азота в течение приблизительно 1 ч и затем лиофилизовали в течение приблизительно 48 ч. Образцы затем вынимали из устройства для лиофилизации и содержимое каждого флакона разводили в 600 мкл растворителя А (триметилпентан/тетрагидрофуран (99:1)). Затем флаконы с образцами повторно закрывали крышками и интенсивно встряхивали в течение 5 мин.

По 200 мкл каждого образца затем переносили в предварительно помеченный на уровне 200 мкл флакон для ВЭЖХ с 200 мкл стеклянными вставками. Флаконы для ВЭЖХ помещали на поддон автоматического пробоотборника ВЭЖХ-блока серии Ад1еп1 1100. ВЭЖХ-система ΑμίΙοηΙ 1100 состояла из термостатируемого автоматического пробоотборника, четвертного насоса, нагревателя для колонки и модуля Ά/Ό-интерфейса. Все компоненты контролировали с использованием программного обеспечения Лщ1еп1 С11е'т81айоп. Аналитическую колонку \\'а1е'гз ЗрйепзогЪ 83\\' размером 4,6x100 мм поддерживали при температуре 30°С посредством использования блока нагревателя колонки Ащ1еи1. Автоматический пробоотборник ВЭЖХ-системы был запрограммирован на поддержание температуры образца при 20°С на протяжении всего опыта.

По 10 мкл каждого образца вводили в трех повторах в колонку. Для создания градиента растворителей использовали два растворителя. Растворитель А представлял собой смесь триметилпентана и тетрагидрофурана (99:1). Растворитель В представлял собой этилацетат. Использованный градиент описан ниже в таблице.

Время (мин)	Растворитель А (%)
0	99
2	96
6	60
7	5
10	5
10,1	99

Растворитель В (%)	Поток (мл/мин)
1	2
4	2
40	2
95	2
95	2
1	2

Выпарной детектор рассеяния света (ЕуарогаЕуе I ,ίμΐιΐ Зсайеппн 1)е1ес1ог, Е1,81)) ЗеОех 75 работал при 45°С с усилением 5 и давлением Ν₂, поддерживаемым на уровне 3,1 бар (310 кПа). Аналоговый сигнал, получаемый с этого прибора, поступал на модуль А/О-интерфейса Ац|1еп1, где происходило его преобразование в цифровые выходные данные. Преобразование основывалось на контрольной точке 10000 тАи/В, и скорость передачи данных устанавливали при 10 Гц (0,03 мин). Иодуче'нные' в результате цифровые выходные' данные далее подавались в программное обеспечение Адйеп1 СйеепЗкЮоп для интегрирования площади пика.

Результаты ВЭЖХ-анализа приведены ниже в табл. 4. Результаты приводятся в виде снижения уровня продуцирования сложного эфира холестерина (СЕ) и сложного эфира воска (А'Е) в сравнении с

- 23 009902

В колонках 1 и 2 приведена структура соединения и номер примера. В колонках 3-5 показано влияние данного соединения на снижение компонентов секрета сальных желез (СЕ и \\'Е). Результаты выражены как разница от контроля с использованием растворителя. Положительное число является отражением снижения уровня измеряемых продуцируемых компонентов секрета сальных желез, то есть сложного эфира холестерина (СЕ) или сложного эфира воска (\\'Е).

В колонке 3 показана способность соединения к снижению количества сложного эфира холестерина в образце секрета сальных желез. В колонке 4 показано влияние соединения на генерацию сложного эфира воска. Сложные эфиры воска являются специфическими маркерами сальных желез и не детектируются в заметных количествах в каком-либо другом слое кожи. Сложный эфир воска является основным компонентом секрета сальных желез (приблизительно 25%). Так, снижение уровня сложного эфира воска обычно приводит к значительным снижениям секреции сальных желез. В колонке 5 суммированы результаты, приведенные в колонках 3 и 4 (и она включена для дополнительной иллюстрации относительной разницы в активности). Как показано в табл. 4, модуляторы андрогенов формулы I значительно уменьшают продуцирование как сложного эфира холестерина, так и сложного эфира воска.

Claims (14)

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

1) если п равен 0 и X² представляет собой -СН=СН₂ или -С=СН, тогда по меньшей мере один из К¹ или К² представляет собой тиол, гидроксиалкил или тиоалкил;

1. Соединение формулы гидрат указанного соединения или фармацевтически приемлемая соль указанного соединения, где

X¹ представляет собой галоген или галогеноалкил;

X² представляет собой -СК³К⁴К⁵, -СН=СН₂ или -С=СН;

К¹ и К², каждый независимо, представляет собой заместитель, выбранный из группы, состоящей из водорода, С1_-6алкила, галогена, галогеноалкила, гидроксиалкила, тиола и тиоалкила;

К³, К⁴ и К⁵, каждый независимо, представляет собой заместитель, выбранный из группы, состоящей из водорода, галогена, С1_-6алкила, галогеноалкила, гидрокси, гидроксиалкила, тиола, тиоалкила и -УК⁶К⁷;

п представляет собой целое число 0 или 1;

АЬК¹ представляет собой линейную С1_-8алкиленовую группу, в которой вплоть до 8 атомов водорода алкиленовой группы могут быть возможно заменены заместителем, выбранным из группы, состоящей из С1_-6алкила, галогеноалкила, галогена, гидрокси, гидроксиалкила, тиола, тиоалкила и -УК⁶К⁷;

К⁶ и К⁷, каждый независимо, представляет собой водород или С1_-6алкил;

при условии, что:

2-хлор-4-(5-гидрокси-3-метилпентилокси)бензнитрила.

2-хлор-4-(4-гидрокси-1-метилпентилокси)бензнитрила и

2-хлор-4-(5-гидроксипентилокси)бензнитрила;

2-хлор-4-(3-гидрокси-2-метилпропокси)бензнитрила;

2-хлор-4-(1-гидроксиметилаллилокси)бензнитрила;

2-хлор-4-(3-гидроксипропокси)бензнитрила;

2-хлор-4-(4-гидроксибутокси)бензнитрила;

2-хлор-4-(3-гидрокси-2,2,4-триметилпентилокси)бензнитрила;

2. Соединение по п.1, где п равен 0 и по меньшей мере один из К¹, К², К³, К⁴, К⁵ представляет собой С1_-6алкил, галогеноалкил, гидроксиалкил и тиоалкил.

2) если п равен 1 и X² представляет собой -СН=СН₂ или -С=СН, тогда, альтернативно, по меньшей мере один из К¹ или К² представляет собой заместитель, выбранный из группы, состоящей из тиола, гидроксиалкила и тиоалкила, или по меньшей мере один атом водорода в А1к¹ заменен заместителем, выбранным из группы, состоящей из гидрокси, тиола, гидроксиалкила и тиоалкила;

3. Соединение по п.1, где п равен 1 и по меньшей мере 1 атом водорода в АГк¹ заменен заместителем, выбранным из группы, состоящей из С1-6алкила, галогеноалкила, гидроксиалкила и тиоалкила, или один из К¹, К², К³, К⁴, К⁵ представляет собой С1-6алкил, галогеноалкил, гидроксиалкил и тиоалкил.

3) если п равен 0 и X² представляет собой -СК³К⁴К⁵, тогда, альтернативно, по меньшей мере один из К¹ или К² представляет собой заместитель, выбранный из группы, состоящей из тиола, гидроксиалкила и тиоалкила, или по меньшей мере один из К³, К⁴ или К⁵ представляет собой гидрокси, гидроксиалкил, тиол или тиоалкил;

4-(5-гидрокси-3-метилпентилокси)-2-трифторметилбензнитрила;

4-(5-гидроксигексилокси)-2-трифторметилбензнитрила;

4-(4-гидрокси-1-метилпентилокси)-2-трифторметилбензнитрила; (1К,4К)-4-(4-гидрокси-1-метилпентилокси)-2-трифторметилбензнитрила;

(18,48)-4-(4-гидрокси-1 -метилпентилокси)-2-трифторметилбензнитрила; 4-(5-гидроксипентилокси)-2-трифторметилбензнитрила;

4-(4-гидрокси-1-пропилбутокси)-2-трифторметилбензнитрила;

4-(4-гидроксигептилокси)-2-трифторметилбензнитрила;

4-(2-гидрокси-6-метилгептилокси)-2-трифторметилбензнитрила; 4-(2-гидроксиоктилокси)-2-трифторметилбензнитрила; 4-(2-гидрокси-окт-7-енилокси)-2-трифторметилбензнитрила; 4-(3-гидроксибутокси)-2-трифторметилбензнитрила; (38)-4-(3-гидроксибутокси)-2-трифторметилбензнитрила; 4-(3-гидрокси-гекс-5-енилокси)-2-трифторметилбензнитрила; 4-(3-гидрокси-2-метилбутокси)-2-трифторметилбензнитрила; 4-(3-гидрокси-2,2-диметилпропокси)-2-трифторметилбензнитрила; 4-(3-гидрокси-3-метилбутокси)-2-трифторметилбензнитрила; 4-(3-гидрокси-2,2,4-триметилпентилокси)-2-трифторметилбензнитрила; 4-(2-этил-3-гидроксигексилокси)-2-трифторметилбензнитрила; 4-[2-(1-гидроксиэтил)гексилокси]-2-трифторметилбензнитрила; (18,38)-4-(3-гидрокси-1-метилбутокси)-2-трифторметилбензнитрила; (1К,3К)-4-(3-гидрокси-1 -метилбутокси)-2-трифторметилбензнитрила; 4-(4-гидроксибутокси)-2-трифторметилбензнитрила; 4-(4-гидроксибутокси)-2-трифторметилбензнитрила;

4. Соединение по пп.1, 2 или 3, где X¹ представляет собой СБ₃ и находится в положении 2 фенильного кольца.

4) если п равен 1 и X² представляет собой -СК³К⁴К⁵, тогда, альтернативно: а) по меньшей мере один из К¹ или К² представляет собой заместитель, выбранный из группы, состоящей из тиола, гидроксиалкила и тиоалкила, б) по меньшей мере один из К³, К⁴ или К⁵ представляет собой заместитель, выбранный из группы, состоящей из гидрокси, гидроксиалкила, тиола и тиоалкила, или в) по меньшей мере 1 атом водорода в А1к¹ заменен заместителем, выбранным из группы, состоящей из гидрокси, тиола, тиоалкила и гидроксиалкила.

5. Соединение по пп.1, 2, 3 или 4, где X² представляет собой СК³К⁴К⁵, где по меньшей мере один из

- 24 009902

К³, К⁴ или К⁵ представляет собой гидрокси или гидроксиалкил.

6. Соединение по п.5, где по меньшей мере один из К³, К⁴ или К⁵ представляет собой метил.

7. Соединение по п.1, где указанное соединение выбрано из группы, состоящей из (18,28)-4-(2-гидрокси-1-метилпропокси)-2-трифторметилбензнитрила;

(1К,2К)-4-(2-гидрокси-1 -метилпропокси)-2-трифторметилбензнитрила; 4-(2-гидрокси-1-метилпропокси)-2-трифторметилбензнитрила;

8. (18,48)-4-(4-Гидрокси-1-метилпентилокси)-2-трифторметилбензнитрил или его фармацевтически приемлемая соль.

9. Применение соединения по любому из пп.1-8 в качестве лекарственного средства.

10. Применение соединения по любому из пп.1-8 в производстве лекарства для модулирования активации рецептора андрогенов.

11. Применение соединения по любому из пп.1-8 в производстве лекарства для местного применения для андрогенетической алопеции, избыточного секрета сальных желез или акне.

12. Фармацевтическая композиция, содержащая соединение по любому из пп.1-8 в смеси с одним или более чем одним фармацевтически приемлемым эксципиентом.

13. Фармацевтический препарат для местного применения, содержащий соединение по любому из пп.1-8 в смеси с одним или более чем одним фармацевтически приемлемым эксципиентом, подходящим для нанесения на кожу.

14. Упаковка, содержащая соединение по любому из пп.1-8 и инструкцию по его применению для ослабления состояния, выбранного из группы, состоящей из акне, алопеции и жирной кожи.