EA009442B1 - Композиции и способы увеличения активности теломеразы - Google Patents

Композиции и способы увеличения активности теломеразы Download PDF

Info

Publication number
EA009442B1
EA009442B1 EA200600076A EA200600076A EA009442B1 EA 009442 B1 EA009442 B1 EA 009442B1 EA 200600076 A EA200600076 A EA 200600076A EA 200600076 A EA200600076 A EA 200600076A EA 009442 B1 EA009442 B1 EA 009442B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
compound
glycoside
formula
cells
hydroxy
Prior art date
Application number
EA200600076A
Other languages
English (en)
Other versions
EA200600076A1 (ru
Inventor
Келвин Б. Харлей
Эллисон С. Чин
Тсутому Акама
Нэнси Юк-ю Ип
Юнг-ху Вонг
Дэвид М. Миллер-Мартини
Original Assignee
Герон Корпорейшн
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Герон Корпорейшн filed Critical Герон Корпорейшн
Publication of EA200600076A1 publication Critical patent/EA200600076A1/ru
Publication of EA009442B1 publication Critical patent/EA009442B1/ru

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7042—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings
    • A61K31/7048—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having oxygen as a ring hetero atom, e.g. leucoglucosan, hesperidin, erythromycin, nystatin, digitoxin or digoxin
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07J—STEROIDS
    • C07J3/00—Normal steroids containing carbon, hydrogen, halogen or oxygen, substituted in position 17 beta by one carbon atom
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/56—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/56—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids
    • A61K31/565—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids not substituted in position 17 beta by a carbon atom, e.g. estrane, estradiol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/56—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids
    • A61K31/58—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids containing heterocyclic rings, e.g. danazol, stanozolol, pancuronium or digitogenin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
    • A61K36/48—Fabaceae or Leguminosae (Pea or Legume family); Caesalpiniaceae; Mimosaceae; Papilionaceae
    • A61K36/481—Astragalus (milkvetch)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/02—Drugs for dermatological disorders for treating wounds, ulcers, burns, scars, keloids, or the like
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/02—Ophthalmic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/02—Nutrients, e.g. vitamins, minerals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/06—Antianaemics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07J—STEROIDS
    • C07J1/00—Normal steroids containing carbon, hydrogen, halogen or oxygen, not substituted in position 17 beta by a carbon atom, e.g. estrane, androstane

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Alternative & Traditional Medicine (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Medical Informatics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)

Abstract

Настоящее изобретение относится к способам и композициям для увеличения активности теломеразы в клетках. Такие композиции содержат фармацевтические, включая наносимые местно, составы и составы биологически активных добавок. Способы и композиции являются полезными для лечения заболеваний субъекта, таких как, например, ВИЧ-инфекция, различные дегенеративные заболевания и острые или хронические кожные алименты, путем повышения активности теломеразы в клетках и тканях субъекта. Они также полезны для увеличения репликативной способности в клеточной культуре при ex vivoклеточной терапии и пролиферации стволовых клеток.

Description

Настоящее изобретение относится к способам и композициям для индуцирования активности теломеразы в клетках.
Предшествующий уровень техники
Теломераза
Теломераза является рибонуклеопротеином, который катализирует присоединение теломерных повторов к концам теломеры. Теломеры - это длинные участки повторяющихся последовательностей, которые покрывают концы хромосом и, как предполагается, стабилизируют хромосому. У человека теломеры обычно имеют длину 7-10 килобаз и содержат множественные повторы последовательности -ТТАООО-. Теломераза не экспрессируется в большинстве зрелых клеток, и длина теломера уменьшается при последовательных циклах репликации. После некоторого числа циклов репликации прогрессивное укорочение теломеров приводит к тому, что клетка вступает в стадию теломерного кризиса, что, в свою очередь, ведет к старению клетки. Ряд заболеваний связан с быстрой потерей теломеров, проявляющейся преждевременным старением клеток. Экспрессия гена, кодирующего белок теломеразы человека в клетках человека, как было показано, приводит к появлению бессмертного фенотипа, предположительно, за счет избежания естественных механизмов старения клетки. Кроме того, экспрессия гена теломеразы в зрелых клетках с укороченными теломерами, как было показано, приводит к увеличению длины теломера и восстановлению фенотипа, обычно присущего более молодым клеткам.
Соматические клетки, в отличие от опухолевых клеток и ряда стволовых клеток, демонстрируют низкую активность теломеразы или ее отсутствие и прекращают делиться, когда теломеры укорачиваются, по крайней мере, в некоторых хромосомах до критического уровня, что приводит к запрограммированному клеточному старению (гибели клетки). Так как потеря теломерических повторов в соматических клетках, приводящая к старению, усиливается из-за низкой активности теломеразы, индукция активности теломеразы, которая способствует добавлению множества теломерных повторов к теломерам, тем самым наделяет смертные соматические клетки увеличенной репликативной способностью, а стареющие клетки способностью пролиферировать и выходить из клеточного цикла после восстановления поврежденной ткани.
Потенциальный терапевтический эффект от увеличения активности теломеразы в соматических клетках включает, например, лечение СПИДа, который характеризуется ранним старением цитотоксических Т-лимфоцитов (СЭ8+ клетки), которые ответственны за уничтожение зараженных СЭ4' клеток (см., например, Эадатад с1 а1., 2003); нейропротективное действие у страдающих болезнью Альцгеймера (см., например, Майкоп, 2000); заживление ран и поддержание эксплантированных клеток, таких как клетки коры надпочечников (см., например, Тйотак с1 а1., 2000) или клетки костного мозга, стромальные/мезенхимальные клетки трансплантата (см., например, 81шопкеп с1 а1., 2002).
Рассмотрены и другие характеристики теломеразы в таких работах, как
А11корр, В.С. е1 а1., «Те1отеге кйойешпд 1к аккоаа1еб тейй се11 άίνίκίοη ίη νίΐτο апб ίη νίνο», Ехр. Се11 Век. 220 (1): 194-200 (8ер. 1995);
А11корр, В.С. еΐ а1., «Те1отегаке ίκ гес.|шгеб Го к1оте 1е1отеге кйойешпд апб еxΐеηб герНсабуе НГекрап оГ Н8С бшгпд кейа1 1гапкр1ап1а11оп». В1ооб (е-риЬНсайоп), Маг. 27, 2003;
Вобпаг, А.О. еΐ а1., «ЕхГепкюп оГ 11Ге-крап Ьу шГгобисйоп оГ 1е1отегаке ш1о погта1 йитап се11к», 8с1епсе 279 (5349): 349-52 (1ап. 16, 1998);
Сесй, Т.В. е1 а1., И.8. Ρаΐеηΐ Ыо. 6093809 (1и1у 25, 2000);
Сесй, Т.В. е1 а1., И.8. Ρаΐеηΐ Ыо. 6166178 (Вес. 26, 2000);
Сесй, Т.В. еГ а1., И.8. Ρаΐеηΐ Ыо. 6261836 (1и1. 2001);
СЫи, С.Р. еΐ а1., «ВерНсаЦуе кепексепсе апб се11 1ттойа1йу: Г11е го1е оГ Ге1отегек апб 1е1отегаке» Ргос. 8ос. Ехр. Вю1. Меб. 214 (2): 99-106 (ЕеЬ. 1997);
Эадагад, М. еΐ а1., «Э|ГГегепиа1 инрайтеШ оГ 1уПс апб суГокше ГцпсГюпк т кепексегИ йитап 1ттипобейшепсу уйик ΐуρе 1-крес1Пс суГоГох Т 1утрйосуГек», 1. Уйо1. 77 (5): 3077-83 (Маг. 2003);
Еаг\уе1Г Ό.Ο. еΐ а1., «Сепейс апб ерщепеОс сйапдек ш йитап ерййейа1 се11к 1ттог1аНхеб Ьу Ге1отегаке», Атепсап 1оигпа1 оГ РаГйо1оду 156 (5): 1537-47 (Мау 2000);
ЕицтоГо, В. еΐ а1., «Ехргеккюп оГ 1е1отегаке сотропепй ш ога1 кегайпосуГек апб кдиатоик се11 сагстотак», Ога1 Опсо1оду 37 (2): 132-40 (ЕеЬ. 2001);
Еипк, \Уа1Гег Ό. еΐ а1., «Те1отегаке ехргеккюп гек1огекбегта1 йИедгЦу Го т νίΐΐΌ адеб ПЬгоЫакГк ш а гесопкШШеб ккш тобе1», ЕхрептепГа1 Се11 Векеагсй 258 (2): 270-278 (Аид. 1, 2000);
Наппоп, С.1. апб Веасй, Ό.Η., «Гпсгеактд ргоНГегаЦуе сарасйу апб ргеуепГшд герйсаГгуе кепексепсе Ьу тсгеактд 1е1отегаке асЦуЦу апб шЫЬйшд раГйтаук шЫЬйшд се11 ргоШегаГюц)), РСТ 1п1. Арр1. РиЬп. Ыо. νθ 2000/031238 (1ипе 2000);
Нагтоп, С.1. е1 а1., «ЕхГепкюп оГ се11и1аг НГекрап иктд Ге1отегаке-асГгуайпд гйегареийс адеп1к», РСТ 1пГ. Арр1. РиЬп. Ыо. νθ 99/35243 (1и1у 1999);
Наг1е-Васйог, С. е1 а1., «Те1отегаке асНуфу ш Гйе гедепегайуе Ьака1 1ауег оГ Гйе ер1бегт1к шйитап ккш апб т 1ттойа1 апб сагсшота-бепуеб ккш кегайпосуГек», Ргос. ЫаГ1. Асаб. 8сГ И8А 93 (13): 6476-81 (1ип. 25, 1996);
Наг1еу, С.В. е1 а1., «Те1отегек кйойеп бшгпд адешд оГ йитап йЬгоЬ1ак1к», ЫаГиге 345 (6274): 458-60 (Мау 31, 1990);
- 1 009442
Наг1еу, С.В. с1 а1.. «Тс1отсгакс. сс11 1штог1а1йу, апб сапссг». Со1б 8рппд НагЬ. 8утр. ОиаШ. ΒίοΙ. 59: 307-15 (1994);
Наг1су. С.В. с! а1.. «Тс1отсгек апб !с1отсгакс ίη адтд апб сапссг». Сигг. Ορίη. Сспс1. Осу. 5 (2): 249-55 (Арг. 1995);
Наг1су, С.В. с! а1.. «Тс1отсгакс апб сапссг». [пхройагх!. Α6ν. Опсо1. 57-67 (1996);
Наг1су, С.В., «Нитап адшд апб 1с1ошсгск». С1Ьа Роипб. 8утр. 211: 129-39 (1997);
Наг1су, С.В.. «Тс1отсгакс 1к по! ап опсодспс». Опсодспс 21: 494-502 (2002);
Нспбсгкоп. 8. с! а1.. «1п к би апа1укк оГ сНапдск т !с1ошсгс Р/с биппд гсрйсаЩ'с адшд апб сс11 ДапкГогтайоп». РСс11 Вю1. 134 (1): 1-12 (1и1. 1996);
Рапд. Х.И. с! а1.. РСТ РиЬп. Ыо. АО 02/91999;
Рапд. Х.И. с! а1.. «Тс1отсгакс схргсккюп т Нитап котайс сс11ь бокк по! шбисс сНапдск аккоаа!сб \νί11ι а ДапкГогтсб рНспо!урс». Ыа!игс ОспсДск 21 (1): 111-4 (1ап. 1999);
Капд. М.К. с! а1.. «Иср11са!щс кспсксспсс оГ погта1 Нитап ога1 ксгаДпосу!ск 1к аккос1а!сб \\ЙН !Нс 1оьь оГ !с1отсгакс ас!М1у \\йНои1 кНоДсшпд оГ 1с1ошсгск». Сс11 Сго\\4Н & ОйРсгспбабоп 9 (1): 85-95 (1ап. 1998);
К4т. Ы.А. с! а1.. «Тс1отсгакс ас!М1у аккаук». и.8. Ра!сп! Ыо. 5629154 (Мау 1997);
Ьсс. К.М. с! а1.. «[ттойаН/абоп \\ЙН !с1отсгакс оГ !Нс ЫскДп-рокйщс сс11к оГ !Нс Нитап рапсгсак». ВюсНст. ВюрНук. Иск. Соттип. 301 (4): 1038-44 (РсЬ. 21. 2003);
Ьибтад. А. с! а1.. «ИРо/утс с1саνадс оГ (сктсгакстВЫА кспкШхск Ьгсак! срйНс11а1 сс11к !о 1пН1Ьйогк оГ !оро1котсгакс». Сапссг Иск.. 61: 3053-3061 (2001);
Майкоп. М.Р.. «Етсгдшд псигорго!сс!щс к!га!сд1ск Гог АННстсг'к бксакс: б1с!агу гск!г1с!1оп.. !с1отсгакс ас^аДоп. апб к!ст сс11 (Нсгару». Ехр. Осгоп!о1. 35 (4): 489-502 (1и1. 2000);
Мога1ск. С.Р. с! а1.. «АЬкспсс оГ сапссг-аккос1а!сб сНапдск ш Нитап ДЬгоЬ1ак!к птиоПаНхсб \\ЙН Шотсгакс». Ыа!игс ОспсДск 21 (1): 115-8 (1ап. 1999);
ОН. Н. апб 8сНпс1бсг. М.Э.. «ТНс стсгдщд го1с оГ !с1отсгакс ш сагб1ас тикс1с сс11 дгоМН апб ктхН'аЬ. 1. Мо1. Сс11 Сагбю1. 34 (7): 717-24 (1и1. 2002);
8пиопксп. РЬ. с! а1.. «Тс1отсгакс схргсккюп сх!спбк !Нс ргоНГсгаШ'с ДРс-крап апб тат!атк !Нс ок!содсшс ро!спДа1 оГ Нитап Ьопс тагготе к!гота1 сс11к». Ыа!. Вю!ссНпо1. 20 (6): 592-6 (1ип. 2002);
ТНотак. М.. Уапд. Ь.. апб НогпкЬу. Р.1.. «РогтаДоп оГ ГипсДопа1 Дккис Ггот !гапкр1ап!сб абгспосогДса1 сс11к схргскктд !с1отсгакс гс\'сгкс !гапксг1р!акс». Ыа!. В1о!ссНпо1. 18 (1): 39-42 (1ап. 2000);
Уака. М. с! а1.. «Ыйпс ох1бс ас!ка!ск !с1отсгакс апб бс1аук спбо!Нс11а1 сс11 кспсксспсс». СДс. Иск. 87 (7): 540-542 (2000);
УШсроп!саи. В. с! а1.. и.8. Ра!сп! Ыо. 5583016 (Осс. 1996);
Аск!. М.Э. с! а1.. «Мс!Нобк оГ ксгссшпд Гог сотроипбк !На! бсгсргскк ог тсгсакс !с1отсгакс ас!М1у». и.8. Ра!сп! Ыо. 6007989 (Осс. 1999);
АНйс. М.А.. «АккстЬ1у оГ !с1отсгакс сотропсп!к апб сНарсгоптк апб тс!Нобк апб сотрокйюпк Гог шЫЬйшд ог кйти1айпд !с1отсгакс аккстЬ1у». РСТ 1п!. Арр1. РиЬп. Ыо. АО 2000/08135 (РсЬ. 2000);
Уапд. 1. с! а1. «Тсктспхсб Нитап ш^с^ονакси1а!и^с 1к ГипсДопа1 ш νί\Ό». Ыа1пгс Вю!ссНпо1оду (Ипйсб 8!а!ск) 19 (3): 219-24 (Маг. 2001);
Уапд. 1.. с! а1.. «Нитап спбо!Нс11а1 сс11 ИГс сх!спкюп Ьу !с1отсгакс схргсккюп». 1. Вю1. СНст. 274 (37): 26141-8 (8ср. 10. 1999);
УпбоН. К. с! а1.. «ИссопДйиДпд !с1отсгакс асШйу иктд !Нс Шотсгакс са!а1уйс киЬиш! ргс\'сп1к !Нс 1с1ошсгс кНогДпд апб ^сρ1^сайνс кспсксспсс т Нитап ок!соЬ1ак!к». 1. Вок1с апб Мтсга1 Иск. 16 (8): 1453-1464 (2001).
Способы увеличения активности теломеразы терапевтически были исследованы. например. Вобпаг (1997). АНйс (2000). Наппоп с! а1. (1999; 2000). Егапхскс с! а1. (2001). апб УибоН с! а1. (2001) (все приведены выше). В этих работах активность теломеразы обычно увеличивается благодаря сверхэкспрессии НТИТ. кодирования генного компонента белка человеческой теломеразы. или экспрессии белков. которые являются промежуточной сборкой теломеразы. например белки теплового шока (белые). Ргап/скс с! а1. сообщили. что сакунавир. ингибитор протеазы. предназначен для лечения ВИЧ-инфекции. наблюдалась увеличенная активность теломеразы в одноядерных клетках периферической крови; Уака с! а1. описали активацию теломеразы и получающейся задержки эндотелиального старения путем введения предшественника окиси азота (ЫО).
Астрагалозиды и гинзенозиды
Как сообщают. соединения семейств астрагалозидов и гинзенозидов имеют различные биологические действия. Исследования биологической активности астрагалозидов и гинзенозидов включают. в том числе
Всбл. Е. с! а1.. «Iшшиηοк!^ши1а!ο^у сПсс1к оГ сус1оаг!апс-!урс Ййсгрспс д1усок1бск Ггот Ак!гада1ик крсаск». Вю1. & РНагт. Ви11. 23 (7): 834-7 (2000);
Вшбсг. В. с! а1.. «Икс оГ Дйсгрспкарошпк. кисН ак по!одшкспок1бс Ш(ЫК1) апб/ог ак!гада1ок1бс (А81У) Гог ргсраппд тсбюатсп!к». и.8. Ра!сп! Ыо. 5770578 (1ипс 1998);
Са1хаба. Ь. с! а1.. «ЕГГсс! оГ !с!гасусДс !п!сгрспск (агдсп!аДпк А. В апб Ό) оп !йс скйабю1 гссср!ог оГ Ногтопс-бсрспбсп! !итогк оГ Нитап Ьгсак!». Мсбюа1 8с1спсс ИсксагсН 23 (12): 815-16 (1995);
СНсп. X. с! а1.. «Рго1сс1Ас сГГсс! оГ дшкспошбс Ид 1 оп боратт-тбиссб арор!ойк ш РС12 сс11к». Ас!а РНагтасо1. 81шса 22 (8): 673-678 (2001);
- 2 009442
НакН1то!о. К. е! а1.. «8кт !ккие гедепегайоп ргото1сг5 сотргктд дткепоыйе ВЬ 1», \¥О 200192289 (2001); ЕР1295893 А1 (2003);
Нопд. Н.-Υ. е! а1.. «8!1ти1а!огу ейеск ок д1пкепок1йе-Вд1 оп р561ск ктаке апй се11 ргоПГегаНоп т 1игка! Т се11к». Когеап 1. Сткепд. 8сй 19 (2): 117-21 (1995);
Ниапд. Υ. е! а1.. «8е1ес1ей поп-ИтЬег Гогек! ргойис!к \\ЙН тейкта1 аррБсайопк Ггот Л1т Ргоутсе ш СНта». СопГегепсе Тй1е: Богек! соттипйкк т !Не 1Ыгй тШеппшт: Ыпктд гекеагсН. Ьиктекк. апй ройсу !оуагй а кикктаЫе поп-ИтЬег Гогек! ргойис! кес!ог; Кепога. Оп1апо. Сапайа, 1-4 Ос!оЬег. 1999; Сепега1 Тескп1са1 Верой - Иог!Н Сеп1га1 ВекеагсН 81айоп, υδΌΑ Еогек! 8егу1се (Ио. ИС-217): р. 93-101 (2000);
Капеко, М. е! а1.. «Ассе1ега!ей гесоуегу Ггот сускрНокрНапийе-тйисей 1еикореша ш тке айтшккгей а 1арапеке е!Нка1 НегЬа1 йгид. НосНи-еккМо». 1ттипорНагпхасо1оду 44 (3): 223-231 (1999);
Кт)о. 1. е! а1.. «Ап!1-Негрек упик асйуйу оГ ГаЬасеоик !п!егрепо1йа1 кароптк». Вю1одка1 & РНагтасеийса1 ВиПеНп 23 (7): 887-9 (1и1. 2000);
КНикНЬак!оуа. Ζ.Α. е! а1.. «1пГ1иепсе оГ сускаЛапек Ггот р1ап!к оГ (Не депик Акйада1ик апй 1Не1г купИейс апа1одк оп (Не сопйасйуе ГипсНоп оГ !Не туосагЬшт апй !Не асйуйу оГ Иа. К-АТРаке». СНет. Иа!. Сотроипйк 30 (4): 469-473 (1994);
Ьее. Υ.Ι е! а1.. «Сткепоыйе-Вд 1. опе оГ !Не та.)ог асйуе то1еси1ек Ггот Рапах дткепд. к а ГипсНопа1 Ндапй оГд1исосоПко1й гесер!ог». Мо1. Се11 Епйосппо1. 133 (2): 135-40 (Ос!. 1997);
Ьш. Р. е! а1.. «ЕГГес! оГ дткепоыйек ВЬ 1. Вд 1. ВН1 апй Ве оп ргоНГегаНоп оГ се11к ш уйго». Т1апгаи СНапуи Υηριη Υυ КаГа 8 (4): 36-41 (1996); СА АЬк!гас! Ио. 1997: 400846;
Ойа. К. е! а1.. «Айщуап! апй Наето1уНс асйуйкк о Г 47 кароптк йепуей Ггот тейкта1 апй Гоой р1ап!к». Вю1. СНет. 381 (1): 67-74 (2000);
Рк!еШ. Ь.. е! а1.. «Ап11ткгоЫа1 апй апН1ипда1 асйуйу ок сгийе ехйаск апй ко1а!ей кароптк Ггот Акйада1ик уеггисокик». Ейо!егар1а 73 (4): 336-339 (2002);
Рппсе. В.Ь. апй Мт. X.. «Сотрокйюпк апй те!Ной Гог !геа!тд ог ргеуепйпд ок!еорогокк». РСТ РиЬп. Ио. \\'О 2001/01996;
8епдир!а. 8. е! а1.. «РНагтасеиНсаПу еГГесНме сотроипйк апй !Ней ике». РСТ РиЬп. Иок. XVО 2002/69980 апй №О 2002/07732;
Vапд. 8. е! а1.. «Рготойпд еГГес! оГ дткепоыйе Ве оп !Не ргоИГега11оп оГ типпе Ьопе тагго\у се11к». Ва1С|шеп ¥1ке 1кхие ХиеЬао 23 (2): 141-142(1997); СА АЬк!гас! Ио. 1997: 570234;
Vапд. Υ.-Р. е! а1.. «ЕГГес! оГакйадакыйе IV оп Т. В 1утрНосу!е ргоИГегакоп апй реп!опеа1 тасгорНаде ГипсНоп 1п тке». Ас!а РНагтасокдка 8шка 23 (3): 263-6 (Маг. 2002);
Хакика\уа. К. е! а1.. «8!его1 апй ййегрепе йепмаНмек Ггот р1ап!к 1иН1Ьй !Не еПеск оГ а !итог ргото!ег. апй кйок!его1 апй Ье!и11шс аай 1пН1Ьй !итог ГогтаНоп ш тоике ккт !уо-к!аде сагстодепекк». Опсо1оду 48 (1): 72-6 (1991);
Υатато!о. М. е! а1.. «ТНе кНтикПогу ейеск оГ дткепд кароптк оп ргоИГегаИоп апй ЭИА куп!Некк оГ Нитап уакси1аг епйо1НеПа1 се11к апй ккт ПЬгоЬ1ак1к ш гектоп !о су!октек ог дгоу!Н Гас!огк». Икке1 Вуот 1даки ΖаккН^ 24 (1): 12-13 (1996);
Ζ^-ιι^ V.! е! а1.. «Веди1а!юп оГ 1йе ВЬппоЩк ро!епНа1 оГ си1!игей Нитап итЬ11ка1 ует епйо!Не11а1 се11к: ак!гада1ок1йе IV йоупгеди1а!ек р1акттодеп асйуа!ог тН1Ьйог-1 апйиргеди1а!ек !ккие-1уре р1акттодеп асНуа!ог ехргеккюп». 1оигпа1 оГ Vакси1а^ ВекеагсН 34 (4): 273-80 (1и1.-Аид. 1997);
Ζί-Ри. Ь. апй Окт. С.. «Ейеск оГ акйадакыйе IV оп туосагй1а1 са1сшт Лайкрой апй сагй1ас ГипсНоп шксНетк га!к». Ас!а РНагтасо1. 8т. 23 (10): 898-904 (Ос!. 2002).
Сущность изобретения
Настоящее изобретение. в целом. относится к способам увеличения активности теломеразы в клетках и композициях для применения в таких способах. Такие способы и композиции могут быть использованы в клеточной культуре. то есть 1п уйто. или ех у1уо. или ш у1уо. такой как выращивание клеток в тканях субъекта. включая людей и нечеловекоподобных животных. в особенности нечеловекоподобных млекопитающих.
В особых воплощениях композиции содержат соединение формул I. II или III. как описано ниже. Аспекты изобретения включают составы таких соединений для использования в косметике. в качестве биологически активных добавок (БАД) и для фармацевтических применений. в особенности для применений. где повышение активности теломеразы в клетках должно присутствовать или. как ожидается. будет полезным. Способы использования соединения и его составов для таких применений также обеспечиваются. включая способы нанесения или введения таких составов после того. как была определена необходимость или польза от увеличения активности теломеразы в клетках или тканях.
Настоящее изобретение включает. в первом аспекте. способ увеличения активности теломеразы в клетке или ткани. Способ включает контактирование клетки или ткани с составом выделенного соединения формулы I. формулы II или формулы III. представленных ниже. В предпочтительных воплощениях соединения являются соединениями. имеющими формулу I или II. представленные ниже. Способ может. кроме того. включать предварительную стадию идентифицирования клетки или ткани. в которых увеличение активности теломеразы является желательным.
В соединениях формулы I
- 3 009442
каждый из X1, X2 и X3 независимо выбран из гидроксигруппы, низшего алкокси, низшего ацилокси, кето и гликозида;
ОК1 выбран из гидроксигруппы, низшего алкокси, низшего ацилокси и гликозида;
где любая из гидроксильных групп на указанном гликозиде может быть замещена дополнительным гликозидом, низшим алкилом или низшим ацилом так, что соединение включает, максимум, 3 гликозида; и
К2 представляет собой метил и — представляет собой двойную связь между 9 и 11 атомами углерода; или, в предпочтительных воплощениях, К2 образует совместно с 9 атомом углерода конденсированное циклопропильное кольцо и — представляет собой простую связь между 9 и 11 атомами углерода.
Предпочтительно соединение включает 0, 1 или 2, более предпочтительно 0 или 2 гликозида, ни один из которых не замещен дополнительным гликозидом. Предпочтительно гликозиды имеют Ό (природную) конфигурацию.
В выбранных воплощениях в соединениях формулы I каждый X1 и X2 независимо выбран из гидроксигруппы, низшего алкокси, низшего ацилокси и гликозида и X выбран из гидроксигруппы, низшего алкокси, низшего ацилокси, кето и гликозида. В дополнительных воплощениях X представляет собой ОН или гликозид, каждый из X2 и ОК1 представляет собой независимо ОН или гликозид и X3 представляет собой ОН или кето. Примеры соединений формулы I включают астрагалозид IV, циклоастрагенол, астрагенол, астрагалозид IV 16-он, циклоастрагенол 6-3-О-глюкопиранозид и циклоастрагенол 3-3-О-ксилопиранозид. В выбранных воплощениях соединение выбрано из астрагалозида IV, циклоастрагенола, астрагенола и астрагалозид IV 16-она. В одном из воплощений соединение представляет собой астрагалозид IV.
В соединениях формулы II
каждый из X4 и X5 независимо выбран из гидроксигруппы, низшего алкокси, низшего ацилокси, кето и гликозида и ОК4 выбран из гидроксигруппы, низшего алкокси, низшего ацилокси и гликозида, где любая из гидроксильных групп на указанном гликозиде может быть замещена дополнительным гликозидом, низшим алкилом или низшим ацилом так, что соединение включает, максимум, 3 гликозида.
Предпочтительно соединение включает 0, 1 или 2 гликозида, ни один из которых не замещен дополнительным гликозидом; гликозиды предпочтительно находятся в Ό конфигурации.
В выбранных воплощениях в соединениях формулы II каждый X4 и ОК3 выбран из гидроксигруппы, низшего алкокси, низшего ацилокси и гликозида и X5 выбран из гидроксигруппы, низшего алкокси, низшего ацилокси и кето (=О). В дополнительных воплощениях X4 представляет собой ОН или гликозид и каждый X5 и ОК3 представляет собой ОН. В одном из воплощений X4 представляет собой ОН.
В соединениях формулы III
каждый из X6, X7 и X8 независимо выбран из гидроксигруппы, низшего алкокси, низшего ацилокси, кето и гликозида и ОК4 выбран из гидроксигруппы, низшего алкокси, низшего ацилокси и гликозида,
- 4 009442 где любая из гидроксильных групп на указанном гликозиде может быть замещена дополнительным гликозидом, низшим алкилом или низшим ацилом так, что соединение включает, максимум, 3 гликозида.
Предпочтительно соединение включает 0, 1 или 2 гликозида, ни один из которых не замещен дополнительным гликозидом; гликозиды предпочтительно находятся в Ό-конфигурации.
В выбранных воплощениях в соединениях формулы III каждый из X6, X7, X8 и ОН4 независимо выбран из гидроксигруппы, низшего алкокси, низшего ацилокси и гликозида и предпочтительно выбран из гидроксигруппы и гликозида. В дополнительных воплощениях каждый X8 и ОН4 представляет собой ОН и каждый X6 и X7 независимо выбран из гидроксигруппы и гликозида. Еще в одних дополнительных воплощениях каждый из ОН4, X6 и X8 представляет собой ОН и X7 представляет собой гликозид. Примером соединения формулы III является гинсенозид НН1.
Предпочтительные соединения формул I, II или III, указанные выше, являются эффективными в случаях, если они входят в состав в растворителе при концентрации 1 мкг/мл или меньше, с точки зрения увеличения уровня активности теломеразы в кератиноцитах или фибробластах, как установлено в ТНАРтестах, по крайней мере на 50% выше, чем уровень в указанных клетках, обработанных указанным растворителем, как установлено в ТНАР-тестах, описанных в настоящем изобретении. В дополнительных предпочтительных воплощениях соединение является эффективным, с точки зрения увеличения уровня активности теломеразы в кератиноцитах или фибробластах, как установлено в ТНАР-тестах, по крайней мере на 100% выше, чем уровень в указанных клетках, обработанных указанным растворителем, как установлено в ТНАР-тестах, описанных в настоящем изобретении.
Примеры соединений формул включают те, которые представлены на фиг. 1 и обозначены в настоящем изобретении как 1 (астрагалозид IV), 2 (циклоастрагенол), 3 (астрагенол), 4 (астрагалозид IV 16-он), 5 (20Н,248-эпокси-3в,16в,25-тригидрокси-9в-метил-19-норланост-1,5-диен), 6 (циклоастрагенол 6-в-О-глюкопиранозид), 7 (циклоастрагенол 3-в-О-ксилопиранозид) и 8 (гинсенозид НН1). В выбранных воплощениях соединение выбрано из тех, которое обозначено в настоящем изобретении как 1 (астрагалозид IV), 2 (циклоастрагенол), 3 (астрагенол), 4 (астрагалозид IV 16-он), 5 (20Н,248-эпокси-33,16в,25тригидрокси-9в-метил-19-норланост-1,5-диен), 6 (циклоастрагенол 6-в-О-глюкопиранозид) и 7 (циклоастрагенол 3-в-О-ксилопиранозид). В дополнительных воплощениях соединение выбрано из тех, которые обозначены в настоящем изобретении как 1, 2, 3, 4 и 5. В одном из воплощений соединение представляет собой астрагалозид IV (1) или циклоастрагенол (2).
Способ контактирования состава выделенного соединения формул I, II или III с клеткой или тканью может включать перед указанным контактированием идентификацию клетки или ткани, в которых увеличение активности теломеразы желательно. Польза, которая может быть получена от повышения активности теломеразы в клетке или ткани, заключается, например, в увеличении репликативной способности и/или продолжительности жизни указанной клетки или клеток в указанной ткани.
Способ может включать диагностику состояния субъекта так, что повышение активности теломеразы в клетках или ткани субъекта является желательным и состав вводят субъекту. Субъект является предпочтительно млекопитающим, таким как человек или пациент. Такие состояния могут включать, например, ВИЧ-инфекцию, различные дегенеративные заболевания, такие как нейродегенеративное заболевание, дегенеративное заболевание костей или суставов, дистрофию желтого пятна (сетчатки), атеросклерозы и анемию. Такие состояния также включают наличие раны или другие острые или хронические состояния эпидермиса, такие как, например, ожог, ссадина, надрез, имплантация, повреждение, вызванное инфекционным агентом, хроническая венозная язва, диабетическая язва, компрессионная язва, рана от сдавления, язва слизистой оболочки и келоидное образование.
Соответственно, изобретение обеспечивает способы лечения состояний пациента, таких как описанные выше, путем увеличения активности теломеразы в клетках или ткани пациента, заключающиеся во введении пациенту, нуждающемуся в таком лечении, состава выделенного соединения формулы I, формулы II или формулы III, как определено выше. Композиции могут быть введены различными путями, например орально, местно или парентерально.
Изобретение, кроме того, обеспечивает способ диагностирования у субъекта состояния заболевания для лечения путем увеличения активности теломеразы в клетке или ткани субъекта за счет введения соединения формул I, II или III, как описано выше, предпочтительно соединения формулы I или II, в фармацевтическом носителе субъекту, нуждающемуся в таком лечении.
Дополнительный аспект изобретения обеспечивает способ лечения острого или хронического состояния эпидермиса, включающий контактирование эпидермальных клеток с составом для местного нанесения, выделенного соединения формулы I, формулы II или формулы III, как определено выше. В предпочтительных воплощениях соединение имеет формулу I или формулу II. В дополнительных воплощениях соединение выбрано из астрагалозида IV, циклоастрагенола, астрагенола, астрагалозид IV 16она, циклоастрагенол 6-в-О-глюкопиранозида, циклоастрагенол 3-в-О-ксилопиранозида и 20Н,248-эпокси-3в,16в,25-тригидрокси-9в-метил-19-норланост-1,5-диена (обозначен в настоящем изобретении как соединение 5).
- 5 009442
Клетки, с которыми составы контактируют, могут также включать эксплантат клеток, который взаимодействует ех νίνο, например, для терапий, основанных на клетке, или других клеток в культуре.
Соответственно, изобретение обеспечивает способ повышения репликативной способности клеток ίη νίίτο или ех νίνο, включающий контактирование указанных клеток с эффективным количеством композиции, содержащей соединение формулы I, формулы II или формулы III, как определено выше, включая выбранные воплощения соединений, как определено выше. В предпочтительных воплощениях соединение имеет формулу I или формулу II, включая выбранные воплощения соединений, как определено выше. В целом, клетки относятся к нетрансформируемым клеткам млекопитающих; в выбранных воплощениях клетки представляют собой стволовые клетки, такие как стволовые клетки костного мозга, стромальные клетки костного мозга, молодые или ранние фибробласты кожи, ответственные за прохождение, предшественники инсулоцитов, нейросферические клетки, адренокортикальные клетки, мышечные, насыщенные сателлитные клетки, остеопластические, ретинальные пигментированные эпителиальные клетки и ВИЧ-ограниченные СЭ8+ клетки.
В родственном аспекте изобретение охватывает фармацевтическую композицию, содержащую в фармацевтически приемлемом носителе соединение формулы I, как изображено выше, где каждый из X1 и X2 независимо выбран из гидроксигруппы, низшего алкокси, низшего ацилокси, кето и гликозида;
X3 представляет собой кето;
ОК1 выбран из гидроксигруппы, низшего алкокси, низшего ацилокси и гликозида; где любая из гидроксильных групп на указанном гликозиде может быть замещена дополнительным гликозидом, низшим алкилом или низшим ацилом так, что соединение включает, максимум, 3 гликозида; и
К2 представляет собой метил и -— представляет собой двойную связь между 9 и 11 атомами углерода; или в предпочтительных воплощениях К2 образует совместно с 9 атомом углерода конденсированное циклопропильное кольцо и -— представляет собой простую связь между 9 и 11 атомами углерода.
Предпочтительно соединение включает 0, 1 или 2 гликозида, ни один из которых не замещен дополнительным гликозидом, и гликозиды находятся в Ό-конфигурации.
В выбранных воплощениях композиции X1 представляет собой ОН или гликозид и каждый из X2 и ОК1 независимо представляет собой ОН или гликозид. В одном из воплощений соединение представляет собой астрагалозид IV 16-он (обозначен в настоящем изобретении как соединение 4).
Альтернативно, композиция содержит в фармацевтически приемлемом носителе соединение формулы I, как представлено выше, где один из X1 и X2 выбран из гидроксигруппы, низшего алкокси, низшего ацилокси и кето, а другой представляет собой гликозид; и каждый из X3 и ОК1 независимо выбран из гидроксигруппы, низшего алкокси, низшего ацилокси и гликозида; где любая из гидроксильных групп на указанном гликозиде может быть замещена дополнительным гликозидом, низшим алкилом или низшим ацилом так, что соединение включает, максимум, 3 гликозида; и
К2 представляет собой метил и -— представляет собой двойную связь между 9 и 11 атомами углерода; или в предпочтительных воплощениях К2 образует совместно с 9 атомом углерода конденсированное циклопропильное кольцо и -— представляет собой простую связь между 9 и 11 атомами углерода.
Предпочтительно соединение включает 1 гликозид, который не является замещенным дополнительным гликозидом и который находится в Ό-конфигурации. В одном из воплощений соединение выбрано из циклоастрагенол 6-3-О-глюкопиранозида (обозначен в настоящем изобретении как 6) и циклоастрагенол 3-3-Э-ксилопиранозида (обозначен в настоящем изобретении как соединение 7).
Альтернативно, фармацевтическая композиция содержит в фармацевтически приемлемом носителе соединение формулы II, как определено выше. Выбранные воплощения соединения также определены выше. В одном из воплощений соединение является тем, которое обозначено в настоящем описании как соединение 5.
Изобретение также включает в себя соединения формулы II, как определено выше, включая выбранные воплощения, как определено выше. В одном из воплощений соединение является тем, которое обозначено в настоящем описании как соединение 5.
В родственном аспекте изобретение включает фармацевтические составы для местного нанесения выделенного соединения формулы I, формулы II или формулы III, как определено выше.
Выбранные воплощения соединения также определены выше. В предпочтительных воплощениях соединение имеет формулу I или формулу II. В дополнительных воплощениях соединение выбрано из астрагалозида IV, циклоастрагенола, астрагенола, астрагалозид IV 16-она, циклоастрагенол 6-3-О-глюкопиранозида, циклоастрагенол 3-в-О-ксилопиранозида и 20К,248-эпокси-3в,16в,25-тригидрокси-9в-метил-19-норланост-1,5-диена (обозначен в настоящем изобретении как соединение 5). Обычно состав для местного нанесения содержит один или большее количество компонентов, выбранных из группы, содержащей эмульгатор, загуститель и смягчитель кожи.
- 6 009442
Такие композиции могут быть использованы для лечения ран или других острых или хронических состояний эпидермиса.
Еще в одном родственном аспекте изобретение охватывает БАД-композиции, содержащие БАДсоставы выделенного соединения формулы I, формулы II или формулы III, как определено выше. Выбранные воплощения соединений также определены выше. В предпочтительных воплощениях соединение имеет формулу I или II, включая выбранные воплощения, как определено выше. В дополнительных воплощениях соединение выбрано из астрагалозида IV, циклоастрагенола, астрагенола, астрагалозид IV 16-она, циклоастрагенол 6-в-О-глюкопиранозида, циклоастрагенол 3-в-О-ксилопиранозида и 20В, 248эпокси-3в,16в,25-тригидрокси-9в-метил-19-норланост-1,5-диена (обозначен в настоящем изобретении как соединение 5). В дополнительных воплощениях БАД-составы содержат, в добавление к выделенному соединению формул I, II или III, БАД травяного экстракта, который может быть экстрактом А81гада1и8 тетЬгапасеиз.
Выделенное соединение формул I, II или III, как определено выше, включая выбранные воплощения, как описано выше, может также быть применено для получения лекарственного средства для лечения заболевания за счет увеличения активности теломеразы в клетке или ткани. Примеры таких заболеваний рассмотрены более детально ниже. Аналогично, выделенное соединение формул I, II или III, как определено выше, включая выбранные воплощения, как описано выше, может также быть применено для получения лекарственного средства для лечения хронического или острого состояния эпидермиса. В предпочтительных воплощениях таких применений выделенное соединение имеет формулу I или II, включая выбранные воплощения формулы I или II, как описано выше.
Также предложен способ отбора соединения, эффективного для увеличения активности теломеразы в клетке. В соответствии с этим способом производное соединения формулы I, формулы II, формулы III, как определено выше, проверяют на его способность увеличивать активность теломеразы в кератиноцитах или фибробластах, как установлено в ТВАР-тестах, описанных в настоящем изобретении. Производное выбирают таким образом, что его вводят в растворитель при концентрации 1 мкг/мл или меньше, оно является эффективным, поскольку обеспечивает уровень активности теломеразы в кератиноцитах или фибробластах, как установлено в ТВАР-тестах, по крайней мере на 50% выше и предпочтительно по крайней мере на 100% выше, чем тот, который измерен в указанных клетках, обработанных указанным растворителем. Производное может затем быть составлено с фармацевтическим или БАД-носителем для местного нанесения.
Также предлагается в родственном аспекте способ выбора агента для лечения острых или хронических состояний эпидермиса. В соответствии с этим способом производное соединения формулы I, формулы II, формулы III, как определено выше, проверяют на активность при заживлении раны в кератиноцитах или фибробластах в тестах с царапиной, описанных в настоящем изобретении. Производное выбирают, если оно имеет активность при заживлении раны, как установлено в тестах с царапиной, при концентрации 1 мкг/мл по крайней мере на 50% выше, чем с контрольным растворителем, предпочтительно по крайней мере на 100% выше, чем с контролем с растворителем. Производное может затем быть составлено с носителем для местного нанесения.
Эти и другие объекты и особенности изобретения станут полностью очевидными в последующем подробном описании изобретения с сопроводительными фигурами.
Краткое описание фигур
Фиг. 1А-Н демонстрируют структуры конкретных соединений для применения в способах и композициях, описанных в настоящем изобретении.
Фиг. 2 демонстрирует увеличение активности теломеразы в неонатальных кератиноцитах при обработке их с помощью соединения 2 (циклоастрагенол), как установлено в ТВАР-тестах.
Фиг. 3 демонстрирует увеличение активности теломеразы в неонатальных кератиноцитах при обработке с помощью соединения 1 (астрагалозид IV) по сравнению с ЕСЕ (10 нМ) и контролем при обработке растворителем, как установлено в ТВАР-тестах.
Фиг. 4 представляет собой серию полученных на компьютере изображений, демонстрирующих активность соединения 1 (астрагалозид IV) при заживлении раны в созревших взрослых кератиноцитах, как установлено в «тестах с царапиной».
Фиг. 5 представляет собой серию полученных на компьютере изображений, демонстрирующих активность соединения 1 (астрагалозид IV) и соединения 2 (циклоастрагенол) при заживлении раны в молодых неонатальных кератиноцитах.
Фиг. 6 представляет собой серию полученных на компьютере изображений, демонстрирующих активность соединения 1 (астрагалозид IV) при заживлении раны в созревших кератиноцитах, самих по себе и в присутствии теломеразы, ингибирующей олигонуклеотид (ΟΒΝ163) или контрольный олигонуклеотид (ΟΒΝ137227).
Фиг. 7 представляет собой график активности соединения 1 (астрагалозид IV) при заживлении раны в созревших неонатальных кератиноцитах в присутствии и в отсутствие ингибитора теломеразы ΟΒΝ163 и по сравнению с ~2 нМ РЭСЕ (фактор роста тромбоцитпроизводного).
- 7 009442
Подробное описание изобретения
I. Определения.
Следующие термины, используемые в настоящем изобретении, имеют значение, представленное ниже, если иное не заявлено.
Общий атом углерода для нумерации схемы, используемый для номенклатуры соединений, описан ниже. (Следует заметить, что соединения структуры II не имеют углерод под номером 19, а соединения структуры III не имеют углерод под номером 18, показанный на этой схеме. Таким образом, схема с проставленными номерами атомов не подразумевает ограничения композиций по изобретению.)
Термин «алкил» относится к полностью насыщенному ациклическому моновалентному радикалу, содержащему атомы углерода и водорода, который может иметь разветвленную или линейную структуру. Примеры алкильных групп включают метил, этил, н-бутил, трет-бутил, н-гептил и изопропил. «Алкокси» относится к группе формулы ОК, где К представляет собой алкил, как определено выше. «Ацилокси» относится к группе формулы -ОС(=О)К, где К представляет собой алкил, как определено выше. Таким образом, «ацил» относится к группе -С(=О)К.
Термин «низший алкил» (или низший алкокси, или низший ацилоки) относится к таким группам, которые имеют от 1 до 6 атомов углерода; в выбранных воплощениях такие группы включают от 1 до 4 атомов углерода, 1 или 2 атома углерода или 1 атом углерода (то есть метил, метокси, ацетилокси).
Термин «стволовые клетки» относится к относительно недифференцированным клеткам, имеющим общее происхождение, которые сохраняют способность к делению и прохождению циклов в течение всей постнатальной жизни, чтобы обеспечить клетки, которые могут в дальнейшем отличаться и становиться специализированными (например, стволовые клетки в нижнем слое кожи или в кроветворной ткани, такие как простейшие клетки в костном мозге, из которого получают все различные виды клеток крови).
Термин «эффективное для повышения активности теломеразы в клетке» со ссылкой на соединение обозначает, что композиция, содержащая соединение в концентрации 1 мкг/мл или меньше, является эффективной для обеспечения уровня активности теломеразы в клетке кератиноцита или фибробласта, как установлено в ТКАР-тестах, описанных в настоящем изобретении, который является выше на порядок, по крайней мере равный 1,5 (то есть по крайней мере на 50% выше), чем уровень, достигаемый с помощью аналогичного состава, не содержащего соединение, как установлено в ТКАР-тестах. В предпочтительных воплощениях соединение является эффективным при концентрации 1 мкг/мл или меньше для достижения уровня активности теломеразы в такой клетке, как установлено в ТКАР-тестах, описанных в настоящем изобретении, который является более высоким на порядок, по крайней мере равный 2 (то есть по крайней мере на 100% выше), чем уровень, получаемый с помощью аналогичного состава, не содержащего соединения.
При ссылке, касающейся введения соединения пациенту, термин в «эффективном количестве» относится к количеству, эффективному для повышения активности теломеразы в клетках или ткани пациента, такому, которое приводит к желаемому терапевтическому результату. При ссылке, касающейся обработки клеток ίη νότο или ех νίνο, термин «эффективное количество» относится к количеству, эффективному для повышения активности теломеразы в клетках, что тем самым увеличивает репликативную способность и/или отрезок жизни клеток.
Концентрации выражены в настоящем описании как % (вес/об.), 100% (вес/об.), что соответствует 1 г раствора/мл растворителя. Например, 0,1% (вес/об.)=1 мг/мл.
Термин «состав выделенного соединения» относится к составу, полученному путем комбинирования выделенного соединения с одним или большим количеством других ингредиентов (которые могут быть активными или пассивными ингредиентами), что приводит к получению указанного состава. Если соединение непосредственно очищают из природного источника, определение «выделенное соединение» предполагает, что соединение (до образования состава) было очищено не менее чем в кратность 100 раз по сравнению с чистотой соединения в природном источнике. Если соединение не очищают непосредственно из природного источника, определение «выделенное соединение» относится к соединению, которое (до образования состава) получают с помощью способа, включающего одну или большее количество химических стадий синтеза, заканчивающихся в приготовлении соединения, чистота которого не менее чем 5% (вес/вес).
II. Способы и композиции для увеличения активности теломеразы.
В соответствии с настоящим изобретением обеспечиваются композиции и способы для увеличения активности теломеразы в клетке. В соответствии со способом клетка или ткань контактирует с составом
- 8 009442 выделенного соединения формул I, II или III, как раскрыто в настоящем изобретении, взятом в количестве, эффективном для повышения активности теломеразы в клетке или ткани, относительно уровня активности теломеразы в клетке или ткани при отсутствии соединения. Способ может также включать предварительную стадию идентифицирования клетки или ткани, для которого ожидается повышение активности теломеразы.
В одном из воплощений соединение представлено формулой I
В формуле I каждый из X1, X2, и X3 независимо выбран из гидроксигруппы, низшего алкокси, низшего ацилокси, кето и гликозида, а группа ОК1 выбрана из гидроксигруппы, низшего алкокси, низшего ацилокси и гликозида. В выбранных воплощениях каждый из X1 и X2 независимо выбран из гидроксигруппы, низшего алкокси, низшего ацилокси и гликозида.
В выбранных воплощениях в соединениях формулы I К2 представляет собой метил и — представляет собой двойную связь между 9 и 11 атомами углерода, как представлено. В других воплощениях К2 образует совместно с 9 атомом углерода конденсированное циклопропильное кольцо и — представляет собой простую связь между 9 и 11 атомами углерода, как показано например, в соединении 1 (см. фиг. 1).
Термин «гликозид», как используют в настоящем изобретении, относится к любому соединению формул I, II или III (или их производным) и обозначает один из известных гликозидов (то есть рибозид, арабинозид, ксилозид, ликсоозид, альтрозид, глюкозид, маннозид, гулозид, идозид, галактозид и талозид). Гликозид обычно находится в форме шестичленного кольца (пиранозы), например глюкопиранозида или маннопиранозида. В выбранных воплощениях гликозид представляет собой ϋ-гликозид; такой, который имеет конфигурацию, встречающуюся в природных моносахаридах. Конкретные примеры включают ϋ-рибопиранозид, ϋ-арабинопиранозид, ϋ-ксилопиранозид, ϋ-глюкопиранозид, маннопиранозид и ϋ-галактопиранозид.
Предпочтительные гликозиды включают ϋ-глюкопиранозид и ϋ-ксилопиранозид. В дополнительных воплощениях связь имеет β-конфигурацию; например β-0-глюкопиранозид.
Любые свободные гидроксильные группы на гликозидном кольце, находящиеся в соединениях по изобретению формул I, II или III (или их производных), могут быть, кроме того, замещены с помощью дополнительного гликозида, низшего алкила или низшегом ацила, например метокси или ацетилокси.
Предпочтительно по крайней мере одна такая гидроксильная группа замещена дополнительным гликозидом. Более предпочтительно ни одна такая гидроксильная группа не замещена дополнительным гликозидом; то есть замещение осуществляется низшим ацилом, таким как ацетил, или низшим алкилом, таким как метил. В одном из воплощений все гидроксильные группы на гликозиде(ах) незамещен(а)ы.
Предпочтительно соединение по изобретению формул I, II или III (или их производные) включает, максимум, 3 гликозида, более предпочтительно, максимум, 2 гликозида.
В выбранных воплощениях соединение включает 0, 1 или 2 гликозида, ни один из которых не замещен дополнительным гликозидом. В последующих выбранных воплощениях, в особенности, что касается соединения формулы I, соединение включает 0 или 2 гликозида, ни один из которых не замещен дополнительным гликозидом.
В выбранных воплощениях в соединении формулы I каждый из X1 и X2 независимо выбран из гидроксигруппы, низшего алкокси, низшего ацилокси, глюкопиранозида и ксилопиранозида и X3 выбран из гидроксигруппы, низшего алкокси, низшего ацилокси, кето, глюкопиранозида и ксилопиранозида, предпочтительно из гидроксигруппы, низшего алкокси, низшего ацилокси и кето.
В дополнительных воплощениях в соединении формулы I X1 выбран из гидроксигруппы, низшего алкокси, низшего ацилокси и β-ϋ-ксилопиранозида; X2 выбран из гидроксигруппы, низшего алкокси, низшего ацилокси и β-ϋ-глюкопиранозида; X3 выбран из гидроксигруппы, низшего алкокси, низшего ацилокси и кето (=О); и ОК1 выбран из гидроксигруппы, низшего алкокси, низшего ацилокси и β-0-глюкопиранозида.
В последующих выбранных воплощениях в соединении формулы I X1 представляет собой ОН или гликозид, каждый из X2 и ОК1 независимо представляет собой ОН или гликозид и X3 представляет собой ОН или кето. В дополнительных воплощениях каждый из X1 и X2 представляет собой ОН или гликозид, ОК1 представляет собой ОН и X3 представляет собой ОН. Еще в одних дополнительных воплощениях X1 представляет собой β-ϋ-ксилопиранозид, X2 представляет собой β-ϋ-глюкопиранозид, ОК1 представляет
- 9 009442 собой ОН и X3 представляет собой ОН. В другом воплощении каждый из X1, X2, X3 и ОК1 представляет собой ОН.
Для каждого из этих описанных воплощений последующие воплощения включают соединения, в которых К2 представляет собой метил и — представляет собой двойную связь, и другие воплощения, в целом предпочтительно, включают соединения, в которых К2 образует с 9 атомом углерода конденсиро ванное циклопропильное кольцо.
Примеры соединений структуры I для применения в способах по изобретению включают те, которые показаны на фиг. 1, и обозначены в настоящем изобретении как 1 (астрагалозид IV), 2 (циклоастрагенол), 3 (астрагенол), 4 (астрагалозид [V 16-он), 6 (циклоастрагенол 6-Р-О-глюкопиранозид) и 7 (циклоастрагенол β-β-0-ксилопиранозид).
Другие соединения, имеющие структуру основной цепи циклоастрагенола (2), замещенную 3-β-ϋглюкопиранозидом, также рассмотрены с точки зрения применения в способах изобретения.
Предпочтительно соединение включает общее количество из 1 или 2 гликозидов, присоединенных к отдельным атомами углерода структуры остова (то есть 1 гликозид неприсоединен к дополнительному гликозиду). Примеры включают природные соединения, такие как астрагалозиды А, 1, 2, и 7, так же, как и астраверруцины I и II (которые могут быть выделены из ЛзЕадаЫз уегшсозиз).
Изобретение также обеспечивает фармацевтические композиции, содержащие один или большее количество соединений формулы I, где один из X1 и X2 выбран из гидроксигруппы, низшего алкокси, низшего ацилокси и кето, а другой представляет собой гликозид. В дополнительных воплощениях соединения выбраны из тех, которые обозначены 6 и 7. В других воплощениях фармацевтическая композиция включает соединение формулы I, в которой X3 представляет собой кето; в одном из воплощений соединение представляет собой соединение, обозначенное как 4.
В другом аспекте изобретение обеспечивает фармацевтические композиции, содержащие соединения, представленные формулой II
П
В формуле II каждый из X4 и X5 независимо выбран из гидроксигруппы, низшего алкокси, низшего ацилокси, кето и гликозида и ОК3 выбран из гидроксигруппы, низшего алкокси, низшего ацилокси и гликозида; где «гликозид» и его различные воплощения описаны выше. Как отмечено выше, соединение включает, максимум, 3 гликозида, более предпочтительно, максимум, 2 гликозида. В выбранных воплощениях соединение включает 0, 1 или 2 гликозида, ни один из которых не замещен дополнительным гликозидом.
В выбранных воплощениях в соединениях формулы II X4 выбран из гидроксигруппы, низшего алкокси, низшего ацилокси и гликозида. В дополнительных воплощениях каждый из X4, X5, и ОК3 независимо выбран из гидроксигруппы, низшего алкокси, низшего ацилокси, глюкопиранозида и ксилопиранозида.
В дополнительных воплощениях в соединении формулы II каждый из X4 и ОК3 выбран из гидроксигруппы, низшего алкокси, низшего ацилокси и гликозида, предпочтительно ϋ-ксилопиранозида или Ώглюкопиранозида, и X5 выбран из гидроксигруппы, низшего алкокси, низшего ацилокси и кето (=О). Предпочтительно в этих воплощениях, ОК3 выбран из гидроксигруппы, низшего алкокси и низшего ацилокси и более предпочтительно из гидроксигруппы.
В дополнительных воплощениях в соединении формулы II каждый из X4, X5, и ОК3 представляет собой независимо ОН или гликозид, например ϋ-ксилопиранозид или ϋ-глюкопиранозид. Еще в одних дополнительных воплощениях X4 представляет собой ОН или гликозид и каждый из X5 и ОК3 представляет собой ОН. В одном из воплощений каждый из X4, X5 и ОК3 представляет собой ОН. Это соединение (формально названное 20К,248-эпокси-3в,16в,25-тригидрокси-9в-метил-19-норланост-1,5-диен) обозначено в настоящем описании как 5.
Изобретение также обеспечивает соединения формулы II, приведенные выше, где каждый из X4 и X5 независимо выбран из гидроксигруппы, низшего алкокси, низшего ацилокси, кето и гликозида и ОК3 выбран из гидроксигруппы, низшего алкокси, низшего ацилокси и гликозида, где любая из гидроксигрупп на указанном гликозиде может быть замещена дополнительным гликозидом, низшим алкилом или низшим ацилом. В выбранных воплощениях соединение содержит 0, 1 или 2 гликозида. Предпочтительно каждый указанный гликозид, если он присутствует, находится в ϋ-конфигурации. В дополнительных воплощениях каждый из X4 и ОК3 выбран из гидроксигруппы, низшего алкокси, низшего ацилокси и
- 10 009442 гликозида и X5 выбран из гидроксигруппы, низшего алкокси, низшего ацилокси и кето (=О). Еще в одних дополнительных воплощениях X4 представляет собой ОН или гликозид и каждый из X5 и ОК3 представляет собой ОН. В одном из воплощений каждый из X4, X5, и ОК3 представляет собой ОН; то есть соединение обозначено в настоящем описании как 5.
Дополнительный аспект изобретения обеспечивает способ увеличения теломеразы в клетке или ткани при контакте клетки или ткани с составом выделенного соединения формулы III. Кроме того, способ может включать стадии идентифицирования клетки или ткани, для которых повышение активности
В формуле III каждый из X6, X7, X8 и ОК4 независимо выбран из гидроксигруппы, низшего алкокси, низшего ацилокси, кето и гликозида, где «гликозид» и его воплощения определены выше. Предпочтительно соединение включает, максимум, 2 гликозида, более предпочтительно, максимум, 1 гликозид, ни один из которых не замещен дополнительным гликозидом. Предпочтительно гликозиды включают Όглюкопиранозид и Ό-ксилопиранозид.
В выбранных воплощениях структуры III каждый из X6, X7, X8 и ОК4 независимо выбран из гидроксигруппы, низшего алкокси, низшего ацилокси и гликозида и предпочтительно выбран из гидрокси группы и гликозида.
В дополнительных воплощениях структуры III каждый из X8 и ОК4 представляет собой ОН и каждый из X6 и X7 независимо выбран из гидроксигруппы и гликозида, например β-ϋ-глюкопиранозида. В дополнительных воплощениях ОК4 представляет собой ОН. Предпочтительно каждый из X6 и X8 представляет собой также ОН и X7 представляет собой гликозид. Типичным соединением структуры III является гинсенозид КН1, обозначенный в настоящем описании как 8.
III. Источники и синтез соединений формул Х-Ш.
Соединения формулул I, II и III могут, как правило, быть выделены или синтезированы из природных продуктов. Например, астрагалозиды I-VII могут быть выделены из корня А81гада1и8 шешЬгапасеи8, как описано, например, у А. Кайо1а е1 а1., ΙΡ Кока1 Νο. 62012791 А2 (1987). Как сообщается в указанной ссылке, корневую ткань полезной травы (8 кг), которая является коммерчески доступной из различных источников, нагревают при температуре кипения с обратным холодильником с МеОН и концентрированный экстракт (200 г) повторно растворяют в МеОН и разделяют на фракции с помощью хроматографии на колонке с силикагелем, используя смесь СНС13/МеОН/Н2О в качестве элюантов. Каждую фракцию обрабатывают с помощью реверсивной хроматографии на силикагеле, используя аналогичные смеси растворителей, что дает затем приблизительные количества выделенных соединений: ацетиластрагалозид I (0,2 г), астрагалозид I (3,5 г), изоастрагалозид I (0,3 г), астрагалозид II (2,3 г), астрагалозид III (1,0 г), астрагалозид IV (0,8 г), астрагалозид V (0,1 г), астрагалозид VI (0,3 г) и астрагалозид VII (0,1 г). См. также Кйада^а е1 а1., Сйеш. Рйаге. Ви11. 31 (2): 698-708 (1983Ь).
Астрагалозид IV (обозначенный в настоящем описании как 1) также получают в соответствии с описанием у А1 Сйипше1, Сйепдйи 610041, Р.К. СЫпа.
Циклоастрагенол (2) может быть получен путем обработки астрагалозида IV (1) метанольным раствором НС1 с последующей нейтрализацией, обычной обработкой и очисткой с помощью хроматографии, как описано в экспериментальной части ниже (пример 1).
Циклоастрагенол может также быть получен с помощью окислительного разрушения (обработка кислородом и элементарным натрием) бутанольного экстракта А81гада1и8 шешЬгапасеиз, как описано у Р.-Н. \Уапд е1 а1., I. СЫпе8е Сйеш. 8ос. 49: 103-6 (2002). Астрагенол (3) и циклоастрагенол (2) могут также быть получены в соответствии с методикой, описанной у Кйада^а е1 а1., Сйе/. Рйагш. Ви11. 31 (2): 689697 (1983а).
Соединения, обозначенные в настоящем описании как 6 (циклоастрагенол 6-в-О-глюкопиранозид) и 7 (циклоастрагенол 3-в-О-ксилопиранозид), получают нагреванием до температуры кипения с обратным холодильником раствора астрагалозида IV (1) и серной кислоты в метаноле с последующей обычной обработкой и хроматографией с силикагелем, как описано в экспериментальной части ниже (пример 2). Также получают перегруппированный продукт 5 и агликон, то есть циклоастрагенол (2).
16-Кето-соединение 4 получают путем ацетилирования гликозидных гидроксильных групп астрагалозида IV с последующем окислением хлорхроматом пиридиния 16-гидроксила и восстановлением гликозидных гидроксилов обработкой боргидридом натрия (см. Кйада^а е1 а1., 1983Ь, приведен выше).
- 11 009442
Различные воплощения соединений формул Σ-Ш, например соединений, имеющих различные степени алкилирования или ацилирования, или кетогрупп, могут быть получены в соответствии с известными способами органического синтеза с использованием природных и/или коммерчески доступных исходных продуктов, таких как циклоастрагенол, астрагенол, астрагалозиды, или астраверруцины, или панаксатриол, с отделением продуктов при необходимости. Некоторые примеры приведены в экспериментальной части ниже. Например, менее стерически затруднены 3-, 6-, и/или 16-гидроксильные группы, которые могут, в общем, быть селективно модифицированы, например, путем ацилирования. При необходимости непрореагировавшие гидроксильные группы могут затем быть отдельно модифицированы, например, путем алкилирования с последующим необязательным удалением ацильных групп. Соединения формулы I, имеющие конденсированное циклопропильное кольцо (например, циклоастрагенолы), могут быть превращены в соединения, имеющие 19-метильную группу и 9-11 двойную связь (например, астрагенолы) обработкой серной кислотой. Эти реакции могут сопровождаться дегликозилированием, как показано в реакциях соединений по примерам 9В и 10В ниже.
IV. Определение биологической активности.
А. Протокол теста ТКАР.
Способность соединения увеличивать активность теломеразы в клетках может быть определена с помощью ТКАР (Те1отепс Кереа! АшрНйсайоп Рго!осо1 - протокол амплификации теломерических повторов) теста, известного специалистам данной области (например, К1ш е! а1., и.8. 5629154; Наг1еу е! а1., и.8. 5891639). Фраза «теломеразная активность, измеренная в ТКАР-тесте» означает, что теломеразная активность измерялась в кератиноцитах или фибробластах в соответствии со следующим протоколом. Эта активность обычно сравнивается с активностью, измеренной таким же образом в контрольном тесте на таких же клетках (например, теломеразная активность на 50% выше, чем наблюдаемая в контроле с растворителем).
Клеточные линии, подходящие для использования в тесте, предпочтительно нормальные фибробласты человека (ΝΗΡ) или нормальные кератиноциты человека (ΝΗΚ) могут быть получены в коммерческих фирмах, таких как Сазсайе Вю1ощез, Рог!1апй, ОК или 4С Вю!есй, 8епе££е, Ве1дшш или из АТСС (Атепсап Туре Си1!иге Со11ес!юп). АТСС нормальные фибробласты человека, которые могут быть найдены на \\еЬ-сайте АТСС, включают, например, ССБ135, ССБ137 и ССБ151.
Клетки высевали в количестве приблизительно 5000 клеток на лунку в среду для роста (например, Бр1-Ь1£е Мейшт + Кега!тосу!е Сго\\111 Рас!ог 8ирр1етеп! + 60 мМ СаС12, поставляемые Сазсайе Вю1ощез, Хпс.) на 2 дня. Тестируемые соединения в подходящем растворителе, таком как 95% этанол или ДМСО, добавляли в выбранные лунки в разных концентрациях и инкубировали 16-24 ч. Приведенные здесь данные получены с использованием в качестве растворителя ДМСО.
Лизирующий клетки раствор изготавливали добавлением 3,0 мл №шйе£' Р40, 1,0 мл СНАР8 лизис буфера (см. ниже) и 1,0 мл 10х ТКАР буфера (см. ниже) к 5,0 мл воды, свободной от ДНКазы и РНКазы. Вода, свободная от ДНКазы и РНКазы, может быть получена путем обработки ЭЕРС (диэтилпирокарбонатом) или приобретена у коммерческих фирм, таких как 81§та).
Морфология обработанных клеток вначале изучается под микроскопом, чтобы подтвердить, что нет визуальных признаков нерегулярного роста. Среду удаляли из лунок, клетки ополаскивали дважды в РВ8 (без ионов кальция и магния). Лабораторную посуду охлаждали, предпочтительно на льду, затем к клеткам добавляли лизис буфер (см. ниже) (приблизительно 100 мкл в каждую лунку) и пипетировали. Затем клетки инкубировали на льду в течение 1 ч.
СНАР8 Лизис буфер
Составляющие На 1 мл Конечная
концентрация
1 М ТП8-НС1 рН 7,5 10 мкл 10 мМ
1 М М§С12 1 мкл 1 мМ
0,5 М ЕСТА 2 мкл 1 мМ
100 мМАЕВЗБ 1 мкл 0,1 мМ
10%СНАР8а 50 мкл 0,5%
В8А 1 мг 1 мг/мл
100% глицерин 100 мкл 10%
Свободная от ДНКазы и 936 мкл (до 1 мл)
РНКазы Н2О а СНАР8 детергент добавляли непосредственно перед применением лизис-буфера. Кроме того, АЕВ8Б (4-(2-аминоэтил)-бензолсульфонилфторид НС1) добавляли в лизис-буфер непосредственно перед экстракцией.
- 12 009442
ΙΟχ ТКАР буфер
Составляющие На 5 мл Конечная концентрация
1 М ТП8-НС1 рН 8,3 1 мл 200 мМ
1 М М§С12 75 мкл 15 мМ
1 МКС1 3,15 мл 630 мМ
Τν/ееп 20 (Воейпп§ег МагшЬепп) 25 мкл 0,5%
0,1 МЕСТА 500 мкл 10 мМ
20 мг/мл В8А 250 мкл 1 мг/мл
Следующие компоненты смешивали для получения основной РСК смеси.
Для реакции (40 мкл) Конечная концентрация а
Составляющие
1 Ох ТКАР буфер 5,0 мкл 1х
2,5 мМ άΝΤΡδ 1,0 мкл 50 мкМ
Су5-Т8 Рптег (0,1 мг/мл) 0,2 мкл 0,4 нг/мл
АСХ Рптег (0,1 мг/мл) 1,0 мкл 2 нг/мл
Т8Н2 Ιηί. 8ΐά. (1 пг/мл) 1,0 мкл 20 фг/мл
Н2 Рптег (0,1 мг/мл) 1,0 мкл 2 нг/мл
Тац Ро1утега8е (5 ед./мкл) 0,4 мкл 2 единицы
Свободная от ДНКазы РНКазы Н2О и 30,4 мкл (до 40 мкл общего объема)
а Из расчета конечного объема 40 мкл РСК смеси и 10 мкл лизата клеток = 50 мкл.
РСК смесь включает следующие компоненты: праймер Су5-Т8, 5'-Су5-меченый олигонуклеотид, имеющий последовательность 5'-ААТ ССС ТСС АСС ЛОЛ СТТ-3' (8ЕР Ш N0: 1), которая является субстратом теломеразы. В зависимости от активности теломеразы в среде теломерные повторы (имеющие последовательность ..АСССТТ..) будут добавляться к субстрату до образования удлиненных теломеразных продуктов, также называемых теломеразными продуктами или ТКАР-продуктами. Праймер АСХ, имеющий последовательность 5'-ССС ССС СТТ АСС СТТ АСС СТТ АСС СТА АСС-3' (8ЕР Ш N0: 2), является якорным обратным праймером, который гибридизируется с удлиненными теломеразными продуктами.
Внутренний стандарт Т8И2 - олигонуклеотид, имеющий последовательность 5'-ААТ ССС ТСС АСС АСА СТТ ААА АСС ССС АСА АСС САТ-3' (8ЕР Ш N0: 3), расширение последовательности праймера Т8, добавляли в небольшом контролируемом количестве с целью количественного анализа. Праймер И2, имеющий последовательность 5'-АТС ССТ ТСТ ССС ССТ ТТТ (8ЕР Ш N0: 4), является обратным праймером, предназначенным для гибридизации с 3'-областью внутреннего стандарта.
Образец лизата клеток (10 мкл) добавляли к 40 мкл этой РСК-смеси в реакционную пробирку, полученную смесь инкубировали при комнатной температуре (30°С) в течение 30 мин. РСК осуществляли путем инкубирования смеси в следующем температурном режиме: 94°С/30 с, 60°С/30 с и 72°С/30 с, повторяя такие трехэтапные циклы до выполнения 20-30, предпочтительно 31 цикла.
Добавляли загрузочный краситель, содержащий, например, бромфенол синий и цианолксилол, образцы подвергали 10-15% неденатурирующему РАСЕ в 0,6х ТВЕ до того, как бромфенол синий выделится из геля. Получившийся продукт оценивается, например, с помощью фторопределителя для определения СУ8-меченных теломеразных продуктов (максимальное возбуждение при 650 нм; максимальная эмиссия при 670 нм).
Конечное количество внутреннего стандарта Т8И2 после амплификации 5-10 ато1 на 50 мкл смеси реакции. Такой внутренний контроль дает специфичный 36-членный продукт РСК амплификации, который проявляется как отдельная полоска на геле ниже продукта первого добавления теломера (т.е. продукта одного добавления теломера к Т8 олигонуклеотиду, последовавшего за амплификацией с обратным праймером АСХ). Эта полоска внутреннего контроля может быть использована для стандартизации РСК амплификации в разных образцах.
- 13 009442
Относительное число молекул теломеразных продуктов (ТМ), полученных в ходе теста, определяется в соответствии с нижеприведенной формулой:
ТМ=(Ттвар -продукты- ТвКО1)/(Т1п1 81й-ТбКО2) где ТТВАР-продукты - это общая интенсивность, измеренная в геле для всех теломеразных продуктов, ТбКО1 фоновая интенсивность, измеренная на чистой дорожке для площади, равной по размеру площади, занятой теломеразными продуктами, Т1п( 8(й - интенсивность полоски внутреннего стандарта, ТбКБ)2 - фоновая интенсивность, измеренная на чистой дорожке для площади, равной по размеру площади, занятой полоской внутреннего стандарта. Итоговое число - это количество молекул теломеразных продуктов, полученных за заданное инкубационное время, которое с целью определения ТМ в данном примере принято за 30 мин.
Предпочтительные соединения формул I, II и III, как описано выше, способны обеспечивать при концентрации 1 мкг/мл или ниже уровень активности теломеразы в фибробластах и кератиноцитах по крайней мере на 25% выше, чем уровень активности в контроле с растворителем. Более предпочтительно это соединение способно обеспечивать при концентрации 1 мкг/мл или ниже уровень активности теломеразы по меньшей мере на 50% выше, чем активность в контроле с растворителем. Более выраженные активности могут быть выявлены при некоторых видах применений, таких как соединения, которые обеспечивают активность теломеразы по меньшей мере на 75, 100 или 500% выше, чем этот уровень в контроле с растворителем, что измеряется в описанном ТВАР-тесте, при концентрации 1 мкг/мл или ниже.
В. Пример результатов ТВАР-теста.
Эффективность повышения активности теломеразы оценивали для соединений формулы I в различных концентрациях. Тест проводили на клетках НЕКпеоР (неонатальные кератиноциты) в соответствии с описанным выше протоколом. Значения концентраций находились в пределах от примерно 0,03 до 10 мкМ в ДМСО.
Как показано на фиг. 2 для композиций, содержащих соединение 1 (астрогалозид IV), с увеличением концентрации увеличивается теломеразная активность до примерно 360% от контроля при 1,0 мкМ, затем активность снижается по мере дальнейшего увеличения концентрации до 10 мкМ. Как показано на фиг. 2, для композиций, содержащих соединение 2 (циклоастрогенол), теломеразная активность возрастает до примерно 300% от контроля при концентрации 0,1 мкМ (для сравнения, в клетках, обработанных 10 нМ ЕОЕ (эпидермальным фактором роста), это значение равно 200%), затем при дальнейшем увеличении концентрации активность снижается.
Для композиций, содержащих каждое из соединений, показанных на фиг. 1А-О, в табл. 1 приведена минимально эффективная концентрация (МЕС) соединения, обеспечивающего уровень активности теломеразы в 2 раза больший, чем таковой в контроле с ДМСО (т.е. выше на 100%).
Таблица 1
Обозначение Название МЕС, мкМ
1 Астрагалозид IV 0,01
2 Циклоастрагенол 0,01
3 Астрагенол 0,03
4 Астрагалозид IV 16-он 0,03
5 2ОК.,248-эпо кси-3 β, 16β,25тригидрокси-93-метил-19норланост-1,5 - диен 0,10
6 Циклоастрагенол 6-β-ϋглюкопиранозид 3,2
7 Циклоастрагенол 3-β-ϋксилопиранозид 3,2
8 Гинсенозид КН1 10
С. Протокол теста заживления ран.
Соединения формул могут быть использованы для ускорения заживления ран, ожогов, ссадин или других острых или хронических поражений эпидермиса, которые описаны в дальнейшем. В данном тексте фраза «активность заживления раны по измерению в тесте с царапиной» означает, что активность измерялась на кератиноцитах и фибробластах в соответствии с нижеследующим протоколом, и выражается она как уровень \¥Н (теоипб ЬеаНпд - заживление раны) по приведенной ниже формуле.
- 14 009442
Клетки помещали во флаконы (5х105 клеток на флакон) и культивировали в течение 2 дней во влажной камере в 5% СО2 при 37°С. Для моделирования «раны» 2 мл пластиковой пипеткой аккуратно проводили по пласту клеток, нанося «царапину». Идеальная рана была приблизительно 2-3 мм шириной и 50 мм длиной (вдоль длинной оси флакона с тканевой культурой). Клетки повторно обрабатывали средой, содержащей или наполнитель (ДМСО, контрольный образец), или тестируемые соединения в разных концентрациях. Через 3-4 дня культивирования клеток находили раневую поверхность, помечали флакон и документировали появление клеток при помощи фотосъемки.
Объем закрытия раны определяли путем измерения ширины раны в образцах, обработанных соединением, относительно обработанных наполнителем или других контрольных образцов с клетками. Измерения производили по фотографиям, сделанным для каждого образца на 1-й день (непосредственно после нанесения царапины), а также на 2-й, 3-й и 4-й дни. Процент заживления раны (также называемый «активность заживления раны») подсчитывался по следующей формуле:
МН 100-|100хМ„/М()| где Мп - это ширина раны на η-й день, а М0 - это ширина раны в 1-й день (т.е. непосредственно после нанесения «царапины»).
Предпочтительные соединения формул Ι-ΙΙΙ, как описано выше, способны обеспечивать при концентрации 1 мкг/мл или ниже величину закрытия раны (активность заживления раны) в тесте с царапиной на кератиноцитах или фибробластах по вышеописанной методике, которая по меньшей мере на 25% больше, чем таковая в необработанных или контрольных клетках. Еще более выраженная активность может быть достигнута в некоторых случаях, когда соединения обеспечивают при концентрации 1 мкг/мл или ниже величину закрытия раны в тесте с царапиной на кератиноцитах или фибробластах, которая по меньшей мере на 50 или 100% выше, чем в необработанных и контрольных клетках.
1). Пример результатов теста с царапиной.
Активность заживления раны соединения 1 (астрагалозид IV) и соединения 2 (циклоастрагенол) настоящего изобретения была оценена на примере стареющих кератиноцитов посредством теста с царапиной, описанного выше. Результаты типичного теста продемонстрированы на фиг. 4, где верхний ряд рисунков отображает контрольные клетки (обработанные растворителем, ДМСО), а нижний ряд отображает клетки, обработанные 0,1 мкг/мл (около 0,13 мкМ) соединения 1 в том же растворителе. Обработанные клетки смыкались на 4-й день в отличие от контрольных клеток, в которых на 4-й день оставалась «рана» заметного размера. Сходные результаты были получены с этой композицией и с 0,01 мкМ соединения 2 (циклоастрагенол) в молодых кератиноцитах, как показано на фиг. 5.
Фиг. 6 демонстрирует активность заживления раны композиции, содержащей соединение 1 (астрагалозид IV), в стареющих зрелых кератиноцитах по измерениям в схожем тесте в присутствии и в отсутствие ингибирующего теломеразу олигонуклеотида (ΟΡΝ163) и контрольного олигонуклеотида (ΟΚΝ137227). Было показано, что ингибирующий теломеразу олигонуклеотид ΟΡΝ163 блокирует ранозаживляющие эффекты соединения 1; эффект контрольного олигонуклеотида ΟΚΝ137226 минимален. (Мишенью ΟΚΝ163 - ингибирующего теломеразу олигонуклеотида - является матричная область РНК компонента теломеразы. Точнее, ΟΚΝ163 является 13-членным N3'—Р5'тиофосфорамидат олигонуклеотидом, описан детально в РСТ РиЬп. Νο. МО 01/18015. ΟΚΝ137227 является 13-членным N3'-—Р5'тиофосфорамидат контрольным олигонуклеотидом, имеющим ошибочную последовательность).
В нижеприведенной табл. 2 представлены значения МН (активности заживления раны) для соединений 1 и 2, полученные в тестах царапиной, показанных на фиг. 5 и 6, основанные на результатах этих тестов с использованием указанной выше формулы.
Таблица 2
Приблизительная ширина раны (произвольные единицы) ^^Нк0нтр0ль ΧνΗχεετ
1й день контроль 4й день контроль 1й день тест 4й день тест
рис. 4 (1) 22 10 17 0 54,5 100
рис. 5 (1) 19 9 18 0 52,6 100
рис. 5 (2) 19 9 21 2 52,6 90,5
Фиг. 7 графически иллюстрирует закрытие раны в процентах от контроля для соединения 1 изобретения (астрагалозид IV) в зрелых неонатальных кератиноцитах в присутствии и в отсутствие ингибитора теломеразы (ΟΚΝ163) при сравнении с 50 нг/мл (приблизительно 2 мл) ΡΌΟΕ (вторичный тромбоцитарный фактор роста). Было показано, что эффективность соединения 1 сравнима с таковой ΡΌΟΕ и также блокируется добавлением ΟΚΝ163.
V. Выбор дополнительных соединений.
Изобретение также охватывает способы выбора дополнительных соединений, эффективно увеличивающих активность теломеразы, путем скрининга производных соединений формул I, II или III в ТКАР
- 15 009442 тесте по описанной методике. Термин «производное» подразумевает соединение, полученное путем модификации соединения формулы I, II или III одним или более из указанных способов: замена гидроксильной группы на низший алкилкарбамат, галоген, тиол, низший алкилтиоэфир, аминогруппу, низший алкиламино, низший алкиламид, альдегид или кетогруппу; добавление низшего алкила к таким группам, как альдегидная и кетогруппа, или к существующей кетогруппе (например, алкилирование с образованием в дальнейшем гидроксильной группы); добавление галогена, гидроксильной группы и/или атомов водорода к двойной связи между атомами углерода; удаление гидроксильной группы (т.е. замена атомом водорода); и инверсия стереоструктуры в одном или более хиральных центрах, предпочтительно кислородсодержащем хиральном центре. Используемый здесь термин «производное» относится к любому веществу, полученному путем такой модификации, исключая сами соединения формул I, II и III, как они определены выше.
Все эти модификации могут быть выполнены посредством стандартных способов синтеза с использованием хорошо известных реакций по синтезу, таких как нуклеофильное замещение, которое может включать превращение гидроксильной группы в более легко уходящую, такую как тозилат; этерификация; алкилирование; окисление; восстановление; галогенирование; гидратация; гидрирование и т. п.
Производное соединения формулы I, II или III, приготовленное в подходящей среде растворителя в разных концентрациях, оценивается в ТКАР-тесте на кератиноцитах или фибробластах по вышеописанной методике. Предпочтительно, чтобы производные для выбора включали соединения, эффективные при изготовлении с растворителем в концентрации 1 мкг/мл или ниже, для обеспечения уровня активности теломеразы в кератиноцитах или фибробластах (по измерениям ТКАР-теста) по меньшей мере на 50% выше, чем активность в указанных клетках на фоне применения только растворителя.
Альтернативно или в дополнение, производные соединения формул I, II и III, изготовленные в подходящей среде растворителя в разных концентрациях, оцениваются по активности заживления раны в тесте с царапиной по вышеописанной методике. Предпочтительны для выбора производные соединения, включающие те, которые обладают активностью заживления раны в концентрации 1 мкг/мл или ниже по меньшей мере на 25% больше, более предпочтительно на 50% выше, чем активность в контроле.
VI. Показания и способы лечения.
Настоящее изобретение охватывает способы увеличения активности теломеразы в клетках путем контактирования клетки или ткани с составом выделенного соединения формулы I, II или III, как раскрыто выше в разделе II, в количестве, эффективном для увеличения активности теломеразы клетки. Способ может включать предварительный этап идентификации клетки или ткани, в которых требуется увеличение активности теломеразы. Клетка может находиться в культуре, т.е. быть ίη νίίτο или ех νίνο, а также в организме ίη νίνο.
Преимущества, ожидаемые от увеличения активности теломеразы в клетке или ткани, включают, например, усиление репликативной способности и/или продолжительности жизни обработанных клеток. Этот способ может также включать диагностику заболевания субъекта или пациента, при котором требуется увеличение активности теломеразы в клетках или ткани пациента; например, диагностику заболевания, являющегося показанием к лечению путем увеличения активности теломеразы в клетках или ткани. Соответственно, данное изобретение охватывает способы лечения заболеваний пациента путем увеличения активности теломеразы в клетках и тканях этого пациента, способ, включающий введение субъекту (при необходимости такого лечения) эффективного количества соединений формул I, II или III, раскрытых выше в разделе П. Термин «эффективное количество» означает количество, эффективно повышающее активность теломеразы в клетках и ткани пациента, при условии достижения лечебного результата.
Такие заболевания могут включать, например, заболевания, связанные с клеточным старением или повышенным уровнем пролиферации клеток в отсутствие теломеразы, что приводит к ускоренной потере теломерных повторов. Под «повышенным уровнем пролиферации» подразумевается более высокая скорость деления клеток в сравнении с нормальными клетками этого типа или в сравнении с нормальными клетками этого типа другого индивида. Старение этих клеток и ненормально раннее созревание могут со временем приводить к болезни (см. \Уе51 е! а1., И.8. № 6007989).
Существуют разнообразные болезненные состояния, при которых увеличение активности теломеразы в клетках некоторых типов может оказаться полезным. Соответственно, это изобретение охватывает способы лечения у пациента заболевания, выбранного из нижеследующих, посредством увеличения активности теломеразы в клетках пациента, включающие введение субъекту, нуждающемуся в подобном лечении, эффективного количества соединения формулы I, II или III по вышеописанной методике. В некоторых случаях заболевание может быть также целью клеточной терапии ех νίνο, как это описано ниже, с вовлечением соответствующих типов клеток (указанных в круглых скобках).
(a) Болезнь Альцгеймера, болезнь Паркинсона, болезнь Гентингтона и инсульт (клетки центральной нервной системы, включая нейроны, глиальные клетки, например астроциты, эндотелиальные клетки, фибробласты), (b) возрастные заболевания кожи, такие как атрофия и истончение дермы, эластолиз и морщинистость кожи, гиперплазия или гипоплазия сальных желез, сенильное лентиго и другие пигментные нарушения, поседение волос и прорежение или выпадение волос, хронические кожные язвы (фибробласты,
- 16 009442 сальные кожные железы, меланоциты, кератиноциты, клетки Лангерганса, эндотелиальные клетки микрососудистого русла, клетки волосяных фолликулов), (с) дегенеративные заболевания суставов (клетки суставного хряща, такие как хондроциты и лакунарные и синовиальные фибробласты), (б) остеопороз и другие дегенеративные заболевания костной системы (клетки костной системы, такие как остеобласты, стромальные и мезенхимальные клетки костного мозга, костные клетки-предшественники), (е) обусловленные стрессом и возрастом заболевания сердечно-сосудистой системы, включая атеросклероз, кальцификацию, тромбоз и аневризмы (клетки сердечно-сосудистой системы, включая эндотелиальные клетки, гладкомышечные клетки и фибробласты адвентиции), (Г) возрастная макулярная дегенерация (клетки глаза, такие как пигментный эпителий и эндотелиальные клетки сосудов), (д) СПИД (ВИЧ-рестриктированные СЭ8' клетки), (й) обусловленные стрессом и возрастом нарушения иммунной системы, включая нарушение обновления тканей, которое происходит при естественном старении, раке, лечении рака, острых или хронических инфекциях или при генетических нарушениях, вызывающих ускоренное обновление клеток, связанных анемиях и других дегенеративных заболеваниях (клетки иммунной системы, включая клетки лимфоидного, миелоидного и эритроидного ростков, таких как В- и Т- лимфоциты, моноциты, циркулирующие и специализированные тканевые макрофаги, нейтрофилы, эозинофилы, базофилы, ΝΚ-клетки и их соответствующие предшественники.
Кроме указанных выше типов, следующие типы клеток, в которых увеличение активности теломеразы может оказывать лечебный эффект, включают (но не ограничиваются ими) клетки печени, эндокринных и экзокринных желез, гладкой мускулатуры и скелетной мускулатуры.
В качестве примера, у ВИЧ-инфицированных пациентов обновление СЭ8' клеток возрастает, поскольку эти клетки стремятся сдержать уровень ВИЧ-инфицированных СЭ4' клеток. При СПИДе (вышеуказанный пункт (д)) болезнь предположительно вызвана ранним старением пораженных вирусом клеток СЭ8'. Старение этих клеток объясняется не просто ненормально большими потерями теломерных последовательностей при делении клеток, но еще и увеличенным уровнем репликации клеток, так что истощение теломер в этих клетках выше нормального. Таким образом, изобретение обеспечивает способы лечения ВИЧ-инфицированного субъекта, а конкретно - снижение раннего старения ВИЧ-рестриктированных клеток СЭ8' у ВИЧ-инфицированных пациентов путем введения субъекту, нуждающемуся в подобном лечении, эффективного количества соединения формулы I, II или III, как раскрыто выше в разделе II.
Увеличение активности теломеразы может благотворно влиять на неделящиеся клетки, так же, как и на пролиферирующие, например, при состояниях, связанных с риском клеточной гибели из-за повышенной чувствительности к стрессу, такому как ишемия при сердечной недостаточности или при инсульте (см., например, Ой апб 8сйпе1бег, I. Μοί. Се11. Сагбю1. 34 (7): 717-24; Майкоп, Ехр. 6егоп1о1. 35 (4): 489-502). Таким образом, это изобретение охватывает способы снижения клеточной смерти, вызванной стрессом или повреждением ДНК у субъектов, таких как субъекты, пребывающие в условиях ишемии тканей, обусловленной сердечной недостаточностью или инсультом, путем повышения активности теломеразы в клетках субъекта, включающие введение субъекту, нуждающемуся в подобном лечении, эффективного количества соединения формулы I, II или III, раскрытых выше в разделе II. Как упомянуто выше, способ может включать предварительный этап диагностики у субъекта указанного заболевания.
С другой стороны, композиции могут быть использованы для лечения индивидов, у которых ограничено число клеток одного или более типов и жизнь которых может быть продлена за счет продления способности этих клеток делиться или противостоять клеточной смерти, обусловленной стрессом. Одним из примеров такой группы клеток являются лимфоциты у пациентов с синдромом Дауна. Таким образом, изобретение охватывает способ улучшения репликативной способности и/или продолжительности жизни лимфоцитов у больных синдромом Дауна путем увеличения активности теломеразы в указанных клетках, включающий введение таким пациентам эффективного количества соединения формулы I, II или III, раскрытых выше в разделе II. Эти композиции могут быть также использованы для усиления резистентности к клеточной смерти, обусловленной стрессом, наблюдаемой при нормальном старении.
С другой стороны, повышение активности теломеразы эффективно для обеспечения заживления ран, ожогов, ссадин и других острых или хронических поражений эпидермиса. Таким образом, данное изобретение охватывают способ лечения острых и хронических поражений эпидермиса путем введения пациенту, нуждающемуся в подобном лечении, предпочтительно при местном нанесении на пораженную область эффективного количества одного из соединений формул I, II или III, раскрытых выше в разделе II.
Упоминаемые в данном описании «острые и хронические поражения эпидермиса» включают острые поражения, такие как повреждения при травме, ожоги, ссадины, хирургические разрезы, места забора донорского материала, а также повреждения, вызванные инфекционными агентами, и хронические поражения, такие как хроническая венозная язва, диабетическая язва, компрессионная язва, рана от сдавления, а также язвы и раны слизистых оболочек. Также к ним относятся повреждения кожи и эпители
- 17 009442 альных поверхностей, вызванные персистирующим воспалительным заболеванием или инфекцией, или генетический дефект (такой, как келоидное образование или нарушения свертывания крови). См., например, РСТ РиЬп. Νο. АО 02/91999.
Полезные эффекты повышения активности теломеразы в ходе такого лечения включают пролиферацию или миграцию клеток в месте приложения лечения, эпителизацию поверхности, закрытие раны (если имеется) или восстановление нормальной физиологической функции. Под терминами «эпителизация» и «реэпителизация» в месте приложения лечения подразумевается увеличение плотности эпителиальных клеток в этом месте в результате применения терапии.
Способ может быть также применен для улучшения роста пересаженных клеток. Желаемые эффекты увеличения активности теломеразы при таком лечении включают покрытие клетками места приложения лечения, выживание пересаженных клеток, отсутствие иммунного отторжения, закрытие раны (если имеется) или восстановление нормальной физиологической функции. Пересаженные клетки могут участвовать в закрытии раны или путем участия непосредственно в процессе заживления (например, становясь частью восстановленной ткани), или путем покрывания раны, таким образом обеспечивая условия, ускоряющие заживление за счет клеток хозяина.
Изобретение также рассматривает манипуляции на коже и коррекцию любых дефектов кожной поверхности с другими целями, такими как косметический эффект.
С другой стороны, способы и композиции изобретения могут быть также использованы для увеличения репликативной способности и/или увеличения продолжительности жизни клеток в культуре, например, при клеточной терапии ех νίνο или в производстве моноклональных антител путем увеличения активности теломеразы в клетках. Увеличение активности теломеразы повышает репликативную способность таких клеток путем замедления потери теломерных повторов и/или повышает резистентность к клеточной смерти, обусловленной стрессом, во время пролиферации клетки.
В случае применения ех νίνο эффективное количество соединения формул I, II или III, описанных выше, добавляют к эксплантированным клеткам, взятым у субъекта. Под «эффективным количеством» понимают количество, эффективное для увеличения активности теломеразы в клетках и повышения репликативной способности и/или продолжительности жизни клеток.
Эксплантированные клетки могут включать, например, стволовые клетки, такие как стволовые клетки костного мозга (И.8. 6007989), стромальные клетки костного мозга (81топ§еп е1 а1., Ναι. ΒίοΝοΙιηοΙ. 20 (6): 592-6,2002) или клетки коры надпочечников (Т1юта5 е1 а1., Ναι. Βίο^οΐιηοΐ. 18 (1): 39-42,2000). Болезненные состояния, такие как указанные выше в пп.(а)-(д), могут быть также целью клеточной терапии ех νίνο. Примеры включают использование мышечных клеток-спутников для лечения мышечной дистрофии, остеобластов для лечения остеопороза, пигментированных эпителиальных клеток сетчатки при возрастной макулярной дегенерации, хондроцитов при остеоартрите и т.д.
Например, понимание того, что у больных СПИДом недостаточно функционирующих клеток СЭ8' для сдерживания роста зараженных клеток СИ4+, позволило разработать терапевтический протокол, по которому ВИЧ-рестриктированные СЭ8' клетки забирают у пациента на ранней стадии ВИЧ-инфекции, при первом выявлении СПИДа, сохраняют в банке, а затем снова вводят больному на более поздней стадии, когда у него уже не хватает необходимого количества СЭ8' клеток. Таким образом, жизнь пациента может быть продлена за счет продолжительного введения недостающих клеток в соответствующем временном режиме. Этот режим может быть определен по старению клеток СЭ8' или путем измерения длины теломер в этих клетках как признака старения этих клеток. В соответствии с изобретением хранящиеся клетки могут увеличиваться в количестве в присутствии вещества, замедляющего потерю теломерных повторов, т.е. соединения формулы I, II или III, как раскрыто выше в разделе II.
Соответственно, изобретение охватывает способы клеточной терапии ех νίνο, которая включает забор популяции клеток у субъекта, увеличение клеточной популяции ех νίνο, за счет воздействия на популяцию соединения формулы I, II или III, как раскрыто выше в разделе II, в количестве, эффективном для повышения активности теломеразы и увеличения репликативной способности и/или продолжительности жизни клеточной популяции. Способ обычно включает выявление у субъекта заболевания (такого, как перечисленные выше), которое может быть подвержено клеточной терапией ех νίνο.
В другом воплощении изобретение обеспечивает способ пролиферации стволовых клеток, при котором популяция стволовых клеток обрабатывается соединением формулы I, II или III, как раскрыто выше в разделе II, в количестве, эффективном для повышения активности теломеразы и увеличения репликативной способности и/или продолжительности жизни клеточной популяции.
VII. Лекарственные формы и способы введения.
Изобретение охватывает способы получения фармацевтических композиций, пригодных для увеличения активности теломеразы в клетке и/или обеспечения заживления раны. Соответственно, выделенное соединение формулы I, II или III, раскрытое выше в разделе II, комбинируют с фармацевтическим наполнителем и возможно с другими лечебными веществами, адъювантами и подобными агентами, которые могут включать активные и неактивные ингредиенты. Композиции могут быть представлены твердыми, полутвердыми, лиофилизированными порошками или жидкими дозированными формами, такими как, например, таблетки, капсулы, порошки, препараты длительного высвобождения, растворы, суспен
- 18 009442 зии, эмульсии, суппозитории, кремы, мази, лосьоны, аэрозоли или им подобные. Лекарственные формы могут быть представлены дозированными препаратами, подходящими для простого введения точного количества соединения.
Выделенное соединение формулы I, II или III может быть также изготовлено в виде пищевой добавки для применения внутрь. Для изготовления пищевой добавки или фармацевтического перорального состава подходят следующие наполнители фармацевтической категории: маннитол, лактоза, глюкоза, сахароза, крахмал, целлюлоза, желатин, стеарат магния, сахарин натрия и/или магния карбонат. Для использования в виде жидкой лекарственной формы композиция может быть изготовлена в форме раствора, суспензии, эмульсии или сиропа и может выпускаться либо в твердой, либо в жидкой форме, пригодной для гидратации в водном носителе, таком как, например, водный раствор соли, водный раствор декстрозы, глицерин или этанол, предпочтительно вода или физиологический раствор. При необходимости композиция может также содержать малые количества нетоксичных вспомогательных веществ, таких как смачивающие вещества, эмульгаторы или буферы. Выделенное соединение формулы I, II или III также может быть включено в существующую пищевую добавку, легко доступную, которая может также включать экстракт травы, такой как экстракт А81гада1и8 тетЬгаиасеш.
При использовании для заживления ран или лечения других острых или хронических поражений эпидермиса соединение формулы I, II или III изготавливается для местного нанесения. Носитель для местного применения может быть представлен различными формами, например в виде лосьона, крема, геля, мази, карандаша, спрея или пасты. Эти лекарственные формы могут быть изготовлены в соответствии с хорошо известными методиками. Они могут содержать различные виды наполнителей, включая (но не ограничиваясь ими) растворы, аэрозоли, эмульсии, гели и липосомы. Наполнитель может быть изготовлен, например, в виде эмульсии на основе «масло-в-воде» или «вода-в-масле». Подходящие гидрофобные (масляные) компоненты, применяемые в эмульсиях, включают, например, растительные масла, животные жиры и масла, синтетические углеводороды, их сложные эфиры и спирты, включая полиэфиры, а также полиорганосилоксановые масла. Такие эмульсии также включают эмульгатор и/или поверхностно-активное вещество, например неионное поверхностно-активное вещество, которое хорошо известно специалисту в данной области, для диспергирования и суспендирования дисперсной фазы в непрерывную фазу.
Лекарственная форма для местного применения обычно содержит один или более компонентов, выбранных из следующего списка: структурирующее вещество, загуститель или желатинирующее вещество, смягчающее или смазывающее вещество. Часто применяемые структурирующие вещества включают длинноцепочечные спирты, такие как стеариновый спирт, простые и сложные эфиры глицерина и олиго(этиленоксид)эфиры или их сложные эфиры. Загустители и желатинирующие вещества включают, например, полимеры акриловой или метакриловой кислот и их сложные эфиры, полиакриламиды и природные загустители, такие как агар-агар, каррагенан, желатин и гуаровая смола. Примеры смягчающих веществ включают сложные эфиры триглицерида, амиды и сложные эфиры жирных кислот, воски, такие как пчелиный воск, спермацет или карнубский воск, фосфолипиды, такие как лецитин и их стерины и сложные эфиры с жирными кислотами. Лекарственные формы для местного нанесения могут также включать другие компоненты, известные специалисту в данной области, например вяжущие средства, ароматизаторы, пигменты, улучшающие проникновение через кожу средства, солнцезащитные вещества и т.п.
Фармацевтические композиции могут быть также изготовлены для парентерального, трансдермального или ингаляционного введения. Композиции для инъекций обычно содержат активное соединение в подходящем растворе, таком как стерильный физиологический раствор. Композиция может быть также изготовлена в виде суспензии в липиде или фосфолипиде, в виде липосомальной суспензии или в виде водной эмульсии.
Для ингаляционного введения активное соединение изготавливается в виде твердых или жидких аэрозольных частиц. Такая лекарственная форма может также включать сжатую жидкость в аэрозольном баллончике и/или диспергатор, такой как лактоза, для обеспечения образования аэрозоля. Для трансдермального введения активное соединение предпочтительно включено в состав трансдермального пластыря, который обеспечивает медленное попадание соединения на выбранную область кожи и который может также содержать вещества, улучшающие проницаемость кожи, такие как алифатические спирты или глицерин.
Способы для изготовления таких лекарственных форм известны или очевидны специалисту в данной области; например, см. Кетшдои'к РйагтасеиИса1 8с1еисе8 (19'1' Еб., ^1Шат8 & νίΙΚίηδ. 1995). Композиция должна содержать количество выбранного соединения в фармацевтически безопасном и эффективном количестве для увеличения активности теломеразы в клетках или ткани, выбранных в качестве мишени.
Предпочтительно фармацевтическая композиция или пищевая добавка содержит по меньшей мере 0,1% (масса/объем) соединения формулы I, II или III, описанного выше, предпочтительно больше чем 0,1%, до примерно 10%, предпочтительно до примерно 5%, еще более предпочтительно до примерно 1% (масса/объем). Выбор необходимой концентрации зависит от таких факторов, как требуемая доза, частота и способ введения активного вещества.
Для лечения субъекта или пациента, например млекопитающего или человека, дозировка определяется на основе таких факторов, как вес, общее состояние здоровья субъекта, вид заболевания, тяжесть
- 19 009442 симптомов и т.п. Дозировку и концентрации определяют по наступлению желаемого благоприятного действия, в то же время избегая развития нежелательных побочных эффектов. Обычные дозы соединений находятся в пределах от примерно 0,5 до 500 мг/день для человека, предпочтительно около 1-100 мг/день. Например, режимы с более высокими дозами включают 50-100, 75-100 или 50-75 мг/день, а режимы с более низкими дозами включают 1-50, 25-50 или 1-25 мг/день. В особых воплощениях, например, соединение, обозначенное в данном описании под номером 2 (циклоастрагенол), вводится на уровне по меньшей мере 1 мг/день, предпочтительно по меньшей мере 5 мг/день; а соединение, обозначенное в данном описании под номером 1 (астрагалозид IV), вводится на уровне по меньшей мере 50 мг/день, предпочтительно по меньшей мере 100 мг/день.
Исследования в сфере изобретения показали, что соединения формулы ЕШ имеют отличную биодоступность и низкую токсичность. Например, показательное соединение, циклоастрагенол (2), оказалось отрицательным в Лшез-тесте бактериального мутагенного потенциала, на примере 8а1шопе11а ТурЫшипиш 1ез1ег δίΓαίηδ ТА98,ТА100, ТА1535, ТА 1537 и Е. сой 1ез!ег δίΓαίη \АР2и\'гЛ. при уровне до 5000 ЬЕ/планшет. Оно оказалось хорошо переносимым крысами Зргадие-ЭаЮеу после однократных внутривенных инъекций до 10 мг/кг. Не было отмечено значимых дозозависимых изменений у самцов и самок в поведении (питание, питье), весе целиком и отдельных органов (сердце, легкое, печень, почки, надпочечники, селезенка), гематологических или биохимических показателях.
Примеры
Пример 1. Превращение астрагалозида IV (1) в циклоастрагенол (2).
К астрагалозиду IV (1) (5,00 г, ммоль) добавляют «НС1-МеОН 10» (ТС1 Ашепса) (500 мл) и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 7 дней. Реакционную смесь концентрируют примерно до половины объема при пониженном давлении при температуре 20°С (нагревание отсутствует). Смесь распределяют между водным раствором бикарбоната натрия и этилацетатом.
Водный слой повторно экстрагируют этилацетатом. Органические слои объединяют, промывают насыщенным раствором хлорида натрия, сушат над безводным сульфатом натрия и концентрируют при пониженном давлении. Остаток очищают с помощью хроматографии на колонке (смесь хлороформ/метанол 20:1~14:1). Для того, чтобы заместить остаток растворителя этанолом, очищенный продукт растворяют в этаноле и растворитель удаляют при пониженном давлении, что дает 2 (2,1 г, 64%).
!Н ЯМР (СЭС1э) δ (ч./млн) 0,34 (д, 1=4,7 Гц, 1Н), 0,48 (д, 1=4,3 Гц, 1Н), 0,92 (с, 3Н), 0,93 (с, 3Н), 1,01,8 (м, 13Н), 1,11 (с, 3Н), 1,19 (с, 3Н), 1,22 (с, 6Н), 1,27 (с, 3Н), 1,9-2,0 (м, 4Н), 2,30 (д, 1=7,8 Гц, 1Н), 2,54 (кв, 1=11,8 Гц, 1Н), 3,27 (м, 1Н), 3,50 (м, 1Н), 3,72 (т, 1=7,4 Гц, 1Н), 4,65 (кв, 1=7,4 Гц, 1Н). Е8ЕМ8 м/е положительный 491 (М+Н)+, отрицательный 549 (М+АсО)-. ТЬС (Мегск, Κ^еδе1де1 60) К,=0,33 (смесь хлороформ/метанол 6:1).
Пример 2. Получение соединений 5, 6 и 7 из астрагалозида IV (1): удаление гликозидов из астрагалозида IV (1) с и без сопутствующей перегруппировки.
метаноле (80 мл) добавляют серную кислоту в
К раствору астрагалозида IV (1, 1,00 г, 1,28 ммоль) (0,4 мл) и смесь нагревают при температуре кипения в течение 1,5 ч. После охлаждения до комнатной
- 20 009442 температуры смесь выливают в этилацетат и воду. Органический слой промывают рассолом и сушат над безводным сульфатом натрия. Растворитель удаляют при пониженном давлении и остаток очищают с помощью хроматографии на колонке с силикагелем (смесь хлороформ/метанол 20:1~10:1~7:1), что дает продукт перегруппировки 5 (24 мг, 4,0%), моноглюкозиды 6 (172 мг, 21%) и 7 (29 мг, 3,6%) и агликон, циклоастрагенол (2) (326 мг, 52%).
СВШ40724: Е8ГМ8 м/е 623 (М+Н)+ С35Н58О9=622.
СВШ40725: Е8ГМ8 м/е 653 (М+Н)+ С36Н60О10=652.
СВШ40726: Е8ГМ8 м/е 473 (М+Н)+ С30Н48О4=472.
'Н ЯМР (400 МГц, СОС13) δ (ч./млн) 0,72, 0,85, 0,95, 1,05, 1,11, 1,17, 1,18 и 1,25 (с, 3Н каждый), 0,92,1 (м, 13Н), 2,20 (д, 1=7,4 Гц, 1Н), 2,4-2,6 (м, 2Н), 3,42 (м, 1Н), 3,70 (дд, 1=7,8, 5,9 Гц, 1Н), 4,63 (кв, 1=7,4 Гц, 1Н), 5,45 (уширенный с, 1Н), 5,57 (уширенный с, 1Н).
Пример 3. Ацетилирование 1: получение 16-кетона 10.
Соединения 9 и 10, представленные ниже, получены в соответствии со способом К Радара 1983Ь, приведенным выше. Кратко, ацетилирование астрагалозида IV (1) обеспечивает соединение 9 совместно с небольшим количеством побочного 16-ацетата. Окисление с помощью хлорхромата пиридиния 9 дает 10.
Пример 4. Получение 4 (см. фиг. 1 ) путем деацилирования 10.
К раствору 10, полученному выше (10 мг, 0,0093 ммоль), в метаноле добавляют боргидрид натрия (10 мг, 0,26 ммоль) и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение ночи. Смесь разбавляют хлороформом (3 мл) и непосредственно подвергают хроматографии на колонке с силикагелем (3:1 смесь хлороформ/метанол), что дает соединение 4 (8,0 мг, квант.). Е8ГМ8 м/е 783 (М+Н)+ С44Н66О14=782.
Пример 5. Получение триона 11 из циклоастрагенола 2.
3,6,16-Трионовое производное циклоастрагенола 11 получают с помощью окисления соединения 2 СгО3 в соответствии со способом Кйадатеа е! а1., Сйет. РЬагт. Ви11. 31 (2): 689-697 (1983а).
Пример 6. Ацилирование 3- или 6-гидроксильной группы циклоастрагенола (2).
К раствору циклоастрагенола (2) (50 мг, 0,10 ммоль) в дихлорметане (5 мл) добавляют триэтиламин (0,030 мл, 0,22 ммоль) и пивалоилхлорид (0,014 мл, 0,12 ммоль) и смесь перемешивают при температуре 0°С в течение ночи. Затем смесь непосредственно подвергают хроматографии на колонке с силикагелем (смесь гексан/этилацетат 1:1~1:2), что дает соединение 12 (17 мг, 30%) и 13 (3,3 мг, 2,9%).
Соединение 12: Е8ГМ8 м/е 575 (М+Н)+ С35Н58О6=574.
- 21 009442 1Н ЯМР (400 МГц, С^С13) δ (ч./млн) 0,32 (д, 1 4,7 Гц, 1Н), 0,49 (д, 14,7 Гц, 1Н), 0,92 (с, 3Н), 0,95 (с, 3Н), 1,07 (с, 3Н), 1,1-2,0 (м, 17Н), 1,15 (с, 9Н), 1,18 (с, 3Н), 1,21 (с, 3Н), 1,34 (с, 6н), 2,19 (дд, 1=13,7, 9,8 Гц, 1Н), 2,36 (д, ^=7,8 Гц, 1Н), 3,27 (м, 1Н), 3,51 (тд, 1=9,4, 3,5 Гц, 1Н), 3,71 (т, ^=7,4 Гц, 1Н), 5,32 (тд, 1=7,8, 4,7 Гц, 1Н).
Соединение13: Ε8Ι-Μ8 м/е 575 (М+Н)+ С35Н58О6=574.
Ίΐ ЯМР (400 МГц, С^С13) δ (ч./млн) 0,35 (д, 1 4,3 Гц, 1Н), 0,51 (д, 1 4,3 Гц, 1Н), 0,92 (с, 3Н), 1,0-2,0 (м, 17Н), 1,03 (с, 3Н), 1,09 (с, 3Н), 1,12 (с, 3Н), 1,17 (с, 9н), 1,21 (с, 3Н), 1,24 (с, 3Н), 1,28 (с, 3Н), 2,29 (д, .17,8 Гц, 1Н), 2,53 (м, 1Н), 3,50 (м, 1Н), 3,73 (т, ^=7,2 Гц, 1Н), 4,50 (дд, 1=10,9, 4,3 Гц, 1Н), 4,65 (м, 1Н).
Пример 7А. Ацетилирование вторичных гидроксилов циклоастрагенола (2).
Эту реакцию осуществляют в соответствии со способом по Кйадаша 1983а, приведенным выше. Кратко, ацетилирование смесью уксусный ангидрид/пиридин дает смесь соединений 14 (основной продукт) и 15 (второстепенный продукт).
Пример 7В. Метилирование 3,6-диацетилциклоастрагенола (14) с сохранением ацетильных групп.
К раствору соединения 14 (30 мг, 0,052 ммоль) в диметилформамиде (3 мл) добавляют иодометан (0,75 мл, 12 ммоль) и гидрид натрия (60% дисперсионное масло, 40 мг, 1,0 ммоль) при температуре 0°С в атмосфере азота и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение ночи. Добавляют воду и смесь экстрагируют этилацетатом. Органический слой промывают водой и рассолом и сушат над безводным сульфатом натрия. Растворитель удаляют при пониженном давлении и остаток очищают с помощью хроматографии на колонке с силикагелем (смесь гексан/этилацетат 4:1), что дает соединение 16 (29 мг, 92%).
Ε8Ι-Μ8 м/е 603 (М+Н)+ С36Н58О7=602.
1Н ЯМР (400 МГц, С^С13) δ (ч./млн) 0,33 (д, 1 4,7 Гц, 1Н), 0,56 (д, 14,7 Гц, 1Н), 0,82 (с, 3Н), 0,89 (с, 3Н), 0,96 (с, 3Н), 1,06 (с, 3Н), 1,1-1,9 (м, 17Н), 1,13 (с, 3Н), 1,19 (с, 3Н), 1,23 (с, 3Н), 1,97 (с, 3Н), 2,02 (с, 3Н), 2,3-2,4 (м, 2н), 3,05 (с, 3Н), 3,23 (с, 3Н), 3,81 (дд, 1=9,0, 6,6 Гц, 1Н), 3,95 (тд, 1=7,8, 5,1 Гц, 1Н), 4,54 (дд, 1=10,9, 4,7 Гц, 1Н), 4,70 (тд, 1=9,4, 4,3 Гц, 1Н).
Пример 7С. Получение 16,25-диметоксициклоастрагенола 17: удаление ацетильных групп из соединения 16.
Смесь соединения 16 (28 мг, 0,046 ммоль) и метилата натрия (0,5 моль/л в метаноле, 6 мл) перемешивают при комнатной температуре в течение 48 ч. Затем добавляют воду и смесь экстрагируют этилацетатом. Органический слой промывают водой и рассолом и сушат над безводным сульфатом натрия. Растворитель удаляют при пониженном давлении и остаток очищают с помощью хроматографии на колонке с силикагелем (смесь гексан/этилацетат 2:3), что дает диметоксидиольное соединение 17 (23 мг, 96%).
- 22 009442
ЕЗГМЗ м/е 519 (М+Н)+ С32Н54О5=518.
1Н ЯМР (400 МГц, СПС13) δ (ч./млн) 0,32 (д, 1=4,7 Гц, 1Н), 0,47 (д, 1=4,3 Гц, 1Н), 0,90 (с, 3Н), 0,93 (с, 3Н), 1,06 (с, 3Н), 1,1-1,9 (м, 17Н), 1,13 (с, 3Н), 1,20 (с, 3Н), 1,22 (с, 3Н), 1,23 (с, 3Н), 2,3-2,4 (м, 2Н), 3,06 (с, 3Н), 3,23 (с, 3Н), 3,27 (м, 1Н), 3,51 (тд, 1=9,4, 3,5 Гц, 1Н), 3,81 (дд, 1=9,4, 6,6 Гц, 1н), 3,96 (тд, 1=7,8, 5,5 Гц, 1Н).
Пример 7Ό. Алкилирование 3,6-диацетилциклоастрагенола (14) с сохранением ацетильных групп.
дихлорметане (10 мл) добавляют диизопропилК раствору соединения 14 (109 мг, 0.190 ммоль) в этиламин (1,0 мл) и хлорметилметиловый эфир (0,5 мл) и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 24 ч. Добавляют воду и смесь экстрагируют этилацетатом. Органический слой промывают водой и рассолом и сушат над безводным сульфатом натрия. Растворитель удаляют при пониженном давлении и остаток очищают с помощью хроматографии на колонке с силикагелем (3:1 смесь гексан/этилацетат), что дает соединение 18 (114 мг, 90%).
1Н ЯМР (400 МГц, СПС13) δ (ч./млн) 0,31 (д, 1=5,1 Гц, 1Н), 0,56 (д, 1=4,7 Гц, 1Н), 0,80 (с, 3Н), 0,88 (с, 3Н), 0,96 (с, 3Н), 1,1-2,0 (м, 18Н), 1,15 (с, 3Н), 1,17 (с, 3Н), 1,28 (с, 3Н), 1,34 (с, 3Н), 1,96 (с, 3н), 2,02 (с, 3Н), 2,28 (д, 1=8,2 Гц, 1н), 3,30 (с, 3Н), 3,33 (с, 3Н), 3,81 (т, 1=7,2 Гц, 1Н), 4,17 (м, 1Н), 4,5-4,6 (м, 3Н), 4,7-4,8 (м, 3Н).
Пример 7Е. Удаление ацетильных групп из соединения 18.
Смесь соединения 18, указанного выше, (3,6-диацетил-16,25-ди(метоксиметил)эфирное производное циклоастрагенола) (102 мг, 0,150 ммоль) и метилат натрия (0,5 моль/л в метаноле, 10 мл) перемешивают при комнатной температуре в течение 48 ч. Добавляют воду и смесь экстрагируют этилацетатом. Органический слой промывают водой и рассолом и сушат над безводным сульфатом натрия. Растворитель удаляют при пониженном давлении и остаток очищают с помощью хроматографии на колонке с силикагелем (смесь гексан/этилацетат 1:1), что дает ди(метоксиметил) или соединение 19 (80 мг, 92%).
ЕЗГМЗ м/е 579 (М+Н)+ С34Н58О7=578.
1Н ЯМР (400 МГц, СЭС13) δ (ч./млн) 0,32 (д, 1=4,7 Гц, 1Н), 0,48 (д, 1=4,3 Гц, 1Н), 0,89 (с, 3Н), 0,93 (с, 3Н), 1,1-2,0 (м, 18Н), 1,15 (с, 3Н), 1,17 (с, 3Н), 1,22 (с, 3Н), 1,29 (с, 3Н), 1,34 (с, 3н), 2,29 (д, 1=8,6 Гц, 1Н), 3,28 (м, 1Н), 3,30 (с, 3Н), 3,33 (с, 3Н), 3,53 (м, 1Н), 3,81 (т, 1=7,2 Гц, 1Н), 4,18 (тд, 1=7,8, 5,5 Гц, 1Н), 4,50 (д, 1=6,6 Гц, 1Н), 4,54 (д, 1=6,2 Гц, 1н), 4,71 (д, 1=7,0 Гц, 1Н), 4,76 (д, 1=7,4 Гц, 1Н).
Пример 8. Алкилирование триацетилциклоастрагенола 15 с последующим удалением ацетильных групп.
- 23 009442
К раствору соединения 15 (30 мг, 0.049 ммоль) в диметилформамиде (3 мл) добавляют иодометан (0,75 мл, 12 ммоль) и гидрид натрия (60% дисперсионное масло, 40 мг, 1,0 ммоль) при температуре 0°С в атмосфере азота и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение ночи. Добавляют воду и смесь экстрагируют этилацетатом. Органический слой промывают водой и рассолом и сушат над безводным сульфатом натрия. Растворитель удаляют при пониженном давлении. К остатку добавляют метилат натрия в метаноле (0,5 моль/л, 6 мл) и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение ночи. Добавляют 10% раствор соляной кислоты и смесь экстрагируют этилацетатом. Органический слой промывают водой и рассолом и сушат над безводным сульфатом натрия. Растворитель удаляют при пониженном давлении и остаток очищают с помощью хроматографии на колонке с силикагелем (смесь гексан/этилацетат 1:2), что дает соединение 20 (23 мг, 93%).
ЕЗЕМЗ м/е 505 (М+Н)+ С31Н52О5=504.
Ή ЯМР (400 МГц, СПС13) δ (ч./млн) 0,33 (д, 1=4,3 Гц, 1Н), 0,48 (д, 1=4,3 Гц, 1Н), 0,8-2,1 (м, 17Н), 0,91 (с, 3Н), 0,93 (с, 3Н), 1,04 (с, 3Н), 1,14 (с, 3Н), 1,20 (с, 3Н), 1,22 (с, 3Н), 1,23 (с, 3Н), 2,28 (д, 1=7,8 Гц, 1Н), 2,60 (кв, 1=10,9 Гц, 1Н), 3,17 (с, 3Н), 3,27 (м, 1Н), 3,51 (тд, 1=9,8, 3,5 Гц, 1Н), 3,72 (дд, 1=9,0, 5,5 Гц, 1н), 4,62 (м, 1Н).
Пример 9 А. Алкилирование свободных гидроксилов циклоастрагенолмоногликозида 6.
К раствору соединения 6 (50 мг, 0,077 ммоль) в диметилформамиде (4 мл) добавляют иодометан (1,0 мл, 16 ммоль) и гидрид натрия (60% дисперсионное масло, 60 мг, 1,5 ммоль) при температуре 0°С в атмосфере азота и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение ночи. Добавляют воду и смесь экстрагируют этилацетатом. Органический слой промывают водой и рассолом и сушат над безводным сульфатом натрия. Растворитель удаляют при пониженном давлении и остаток очищают с помощью хроматографии на колонке с силикагелем (смесь гексан/этилацетат 3:1), что дает перметоксисоединение 21 (33 мг, 57%).
ЕЗЕМЗ м/е 751 (М+Н)+ С43Н74О10=750.
Ή ЯМР (400 МГц, СПС13) δ (ч./млн) 0,21 (д, 1=4,7 Гц, 1Н), 0,47 (д, 1=4,3 Гц, 1Н), 0,8-2,0 (м, 17Н), 0,87 (с, 3Н), 0,89 (с, 3Н), 1,05 (с, 3Н), 1,13 (с, 3Н), 1,17 (с, 3н), 1,22 (с, 3Н), 2,3-2,4 (м, 2Н), 2,67 (дд, 1=11,0, 4,1 Гц, 1Н), 2,92 (т, 1=8,2 Гц, 1н), 3,06 (с, 3Н), 3,1-3,6 (м, 6Н), 3,22 (с, 3Н), 3,32 (с, 3Н), 3,35 (с, 3Н), 3,48 (с, 3Н), 3,49 (с, 3Н), 3,59 (с, 3Н), 3,80 (дд, 1=9,0, 6,6 Гц, 1Н), 3,94 (м, 1Н), 4,24 (д, 1=7,4 Гц, 1Н).
Пример 9В. Получение 3,16,25-триметоксиастрагенола, 22: удаление гликозида из перметоксисоединения 21 с сопутствующей перегруппировкой.
К раствору соединения 21 (30 мг, 0,040 ммоль) в метаноле (10 мл) добавляют серную кислоту (0,2 мл) и смесь нагревают при температуре кипения с обратным холодильником в течение 10 ч. Добавляют воду и смесь экстрагируют этил ацетатом. Органический слой промывают водой и рассолом и сушат над безводным сульфатом натрия. Растворитель удаляют при пониженном давлении и остаток очищают с помощью хроматографии на колонке с силикагелем (смесь гексан/этилацетат 4:1), что дает соединение 22 (3,6 мг, 17%).
ЕЗЕМЗ м/е 533 (М+Н)+ С33Н56О5=532.
- 24 009442 'Н ЯМР (400 МГц, СПС13) δ (ч./млн) 0,73 (с, 3Н), 0,8-2,0 (м, 18Н), 0,85 (с, 3Н), 1,00 (с, 3Н), 1,03 (с, 3Н), 1,06 (с, 3Н), 1,14 (с, 3Н), 1,24 (с, 3Н), 1,25 (с, 3Н), 2,3-2,4 (м, 2Н), 2,58 (дд, 1=10,9, 3,9 Гц, 1Н), 3,09 (с, 3н), 3,24 (с, 3н), 3,34 (с, 3н), 3,80 (дд, 1=9,4, 6,6 Гц, 1Н), 3,98 (м, 1Н), 5,25 (уширенный д, 1=5,5 Гц, 1Н).
Пример 10 А. Алкилирование свободных гидроксилов циклоастрагенолмоногликозида 7.
Соединение 23 (18 мг, 53%) получают из соединения 7 (30 мг) в соответствии с методикой, применяемой для получения соединения 21, указанного выше.
Ε8Σ-Μ8 м/е 707 (М+Н)+ С41Н70О9=706.
'Н ЯМР (400 МГц, СПС13) δ (ч./млн) 0,20 (д, 1=4,3 Гц, 1Н), 0,44 (д, 1=4,3 Гц, 1Н), 0,8-1,9 (м, 17Н), 0,90 (с, 3Н), 0,93 (с, 3Н), 1,05 (с, 3Н), 1,11 (с, 3Н), 1,13 (с, 3Н), 1,18 (с, 3Н), 1,23 (с, 3Н), 2,3-2,4 (м, 2н), 2,9-3,6 (м, 6Н), 3,09 (с, 3Н), 3,20 (с, 3Н), 3,22 (с, 3Н), 3,42 (с, 3Н), 3,58 (с, 3Н), 3,59 (с, 3н), 3,80 (дд, 1=9,0, 6,6 Гц, 1Н), 3,9-4,0 (м, 2Н), 4,21 (д, 1=7,4 Гц, 1Н).
Пример 10В. Получение 6,16,25-триметоксиастрагенола, 24: удаление гликозида у перметоксисоединения 23 с сопутствующей перегруппировкой.
Соединение 24 (7,1 мг, 56%) получают из соединения 23 (17 мг) в соответствии с методикой, применяемой для получения соединения 22, указанного выше.
Ε8Σ-Μ8 м/е 533 (М+Н)+ С33Н5бО5=532.
1Н ЯМР (400 МГц, СПС13) δ (ч./млн) 0,74 (с, 3Н), 0,8-2,4 (м, 18Н), 0,85 (с, 3Н), 0,92 (с, 3Н), 1,03 (с, 3Н), 1,06 (с, 3Н), 1,14 (с, 3Н), 1,23 (с, 3Н), 1,24 (с, 3Н), 3,10 (с, 3Н), 3,18 (м, 1Н), 3,23 (с, 3Н), 3,34 (с, 3Н), 3,53 (м, 1Н), 3,80 (дд, 1=9,4, 6,6 Гц, 1Н), 3,97 (м, 1Н), 5,24 (д, 1=5,5 Гц, 1Н).
Пример 11. Получение 3,6-диметоксициклоастрагенола, 25: метилирование 16,25-ди(метоксиметил) эфира, соединения 19, путем удаления ди(метоксиметил)эфирных групп.
К раствору соединения 19 (30 мг, 0,052 ммоль) в диметилформамиде (3 мл) добавляют иодометан (0,75 мл, 12 ммоль) и гидрид натрия (60% дисперсионное масло, 40 мг, 1,0 ммоль) при температуре 0°С в атмосфере азота и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение ночи. Добавляют воду и смесь экстрагируют этилацетатом. Органический слой промывают водой и рассолом и сушат над безводным сульфатом натрия. Растворитель удаляют при пониженном давлении. К этому остатку добавляют тетрагидрофуран (5 мл) и 10% раствор соляной кислоты (1 мл) и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение ночи, затем при температуре кипения в течение часа. Добавляют воду и смесь экстрагируют этилацетатом. Органический слой промывают водой и рассолом и сушат над безводным сульфатом натрия. Растворитель удаляют при пониженном давлении и остаток очищают с помощью хро
- 25 009442 матографии на колонке с силикагелем (смесь гексан/этилацетат 3:1-1:1), что дает соединение 25 (13 мг, 48%) и небольшое количество (7,4 мг, 25%) 3,6-диметокси-16-(метоксиметил) или соединение 26.
Соединение 25: Ε8Σ-Μ8 м/е 563 (М+Н)+ С34Н58О6=562.
1Н ЯМР (400 МГц, СПС13) δ (ч./млн) 0,19 (д, 1=4,7 Гц, 1Н), 0,45 (1=4,3 Гц, 1Н), 0,8-2,3 (м, 18Н), 0,86 (с, 3Н), 0,92 (с, 3Н), 1,05 (с, 3Н), 1,07 (с, 3Н), 1,20 (с, 3Н), 1,24 (с, 3Н), 1,28 (с, 3Н), 2,41 (д, 1=8,2 Гц, 1Н), 2,70 (дд, 1=11,1, 4,5 Гц, 1Н), 2,90 (м, 1Н), 3,19 (с, 3Н), 3,326 (с, 3Н), 3,330 (с, 3Н), 3,71 (т, 1=7,4 Гц, 1н), 4,37 (м, 1Н), 4,53 (д, 1=6,2 Гц, 1Н), 4,59 (д, 1=6,2 Гц, 1Н).
Соединение 26: Ε8Σ-Μ8 м/е 519 (М+Н)+ С33Н54О5=518.
1Н ЯМР (400 МГц, СПС13) δ (ч./млн) 0,21 (д, 1=4,3 Гц, 1Н), 0,45 (д, 1=4,3 Гц, 1Н), 0,8-2,0 (м, 17Н), 0,86 (с, 3Н), 0,93 (с, 3Н), 1,06 (с, 3Н), 1,12 (с, 3Н), 1,20 (с, 3Н), 1,21 (с, 3Н), 1,28 (с, 3Н), 2,30 (д, 1=7,8 Гц, 1Н), 2,54 (кв, 1=10,2 Гц, 1Н), 2,69 (дд, 1=11,3, 4,3 Гц, 1Н), 2,89 (тд, 1=8,2, 4,3 Гц, 1Н), 3,19 (с, 3Н), 3,32 (с, 3Н), 3,72 (т, 1=7,2 Гц, 1Н), 4,66 (м, 1Н).

Claims (61)

  1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
    1. Способ увеличения активности теломеразы в клетке или ткани, включающий идентифицирование клетки или ткани, в которых увеличение активности теломеразы является желательным, и контактирование указанной клетки или ткани с соединением формулы I где каждый из X1, X2, и X3 независимо выбран из гидроксигруппы, низшего алкокси, низшего ацилокси, кето и гликозида;
    ОК1 выбран из гидроксигруппы, низшего алкокси, низшего ацилокси и гликозида;
    где любая из гидроксигрупп на указанном гликозиде может быть замещена дополнительным гликозидом, низшим алкилом или низшим ацилом так, что соединение включает, максимум, 3 гликозида; и
    К2 представляет собой метил и — представляет собой двойную связь между 9 и 11 атомами углерода или К2 образует совместно с 9 атомом углерода конденсированное циклопропильное кольцо и — представляет собой простую связь между 9 и 11 атомами углерода.
  2. 2. Способ по п.1, отличающийся тем, что указанное соединение включает 0 или 2 гликозида, ни один из которых не замещен дополнительным гликозидом.
  3. 3. Способ по п.1, отличающийся тем, что К2 образует совместно с 9 атомом углерода конденсированное циклопропильное кольцо и — представляет собой простую связь между 9 и 11 атомами углерода.
  4. 4. Способ по п.1, отличающийся тем, что X1 представляет собой ОН или гликозид, каждый из X2 и ОК1 представляет собой независимо ОН или гликозид и X3 представляет собой ОН или кето.
  5. 5. Способ по п.1, отличающийся тем, что соединение выбрано из астрагалозида IV, циклоастрагенола, астрагенола, астрагалозид IV 16-она, циклоастрагенол 6-3-П-глюкопиранозида и циклоастрагенол 3-3-П-ксилопиранозида.
  6. 6. Способ по п.5, отличающийся тем, что соединение выбрано из астрагалозида IV, циклоастрагенола, астрагенола и астрагалозид IV 16-она.
  7. 7. Способ по п.6, отличающийся тем, что указанное соединение представляет собой астрагалозид IV.
  8. 8. Способ увеличения активности теломеразы в клетке или ткани, включающий идентифицирование клетки или ткани, в которых увеличение активности теломеразы является желательным и контактирование указанной клетки или ткани с соединением формулы II где каждый из X4 и X5 независимо выбран из гидроксигруппы, низшего алкокси, низшего ацилокси, кето и гликозида и
    - 26 009442
    0К3 выбран из гидроксигруппы, низшего алкокси, низшего ацилокси и гликозида;
    где любая из гидроксигрупп на указанном гликозиде может быть замещена дополнительным гликозидом, низшим алкилом или низшим ацилом так, что соединение включает, максимум, 3 гликозида.
  9. 9. Способ по п.8, отличающийся тем, что каждый X4 и 0К3 выбран из гидроксигруппы, низшего алкокси, низшего ацилокси и гликозида и X5 выбран из гидроксигруппы, низшего алкокси, низшего ацилокси и кето(=0).
  10. 10. Способ по п.8, отличающийся тем, что X4 представляет собой 0Н или гликозид и каждый из X5 и 0К3 представляет собой 0Н.
  11. 11. Способ по п.10, отличающийся тем, что X4 представляет собой 0Н.
  12. 12. Способ увеличения активности теломеразы в клетке или ткани, включающий идентифицирование клетки или ткани, в которых увеличение активности теломеразы является желательным, и контактирование указанной клетки или ткани с соединением формулы III где каждый из X6, X7 и X8 независимо выбран из гидроксигруппы, низшего алкокси, низшего ацилокси, кето и гликозида, и
    0К4 выбран из гидроксигруппы, низшего алкокси, низшего ацилокси и гликозида;
    где любая из гидроксильных групп на указанном гликозиде может быть замещена дополнительным гликозидом, низшим алкилом или низшим ацилом так, что соединение включает, максимум, 3 гликозида.
  13. 13. Способ по п.12, отличающийся тем, что каждый из X6, X7, X8 и 0К4 независимо выбран из гидроксигруппы и гликозида.
  14. 14. Способ по п.13, отличающийся тем, что каждый 0К4, X6 и X8 представляет собой 0Н и X7 представляет собой гликозид.
  15. 15. Способ по п.14, отличающийся тем, что соединение представляет собой гинсенозид КН1.
  16. 16. Способ лечения состояния пациента путем увеличения активности теломеразы в клетках или ткани пациента, включающий введение пациенту, нуждающемуся в таком лечении, эффективного количества соединения формулы I по п.1, или формулы II по п.8, или формулы III по п.12.
  17. 17. Способ по п.16, отличающийся тем, что соединение имеет формулу I или формулу II.
  18. 18. Способ по п.16, отличающийся тем, что указанное состояние представляет собой ВИЧ-инфекцию или дегенеративное заболевание.
  19. 19. Способ по п.18, отличающийся тем, что дегенеративное заболевание выбрано из группы, включающей нейродегенеративное заболевание, дегенеративное заболевание костей или суставов, дистрофию жёлтого пятна сетчатки, атеросклероз и анемию.
  20. 20. Способ по п.16, отличающийся тем, что указанное состояние представляет собой рану или другое острое или хроническое состояние эпидермиса.
  21. 21. Фармацевтическая композиция, содержащая соединение формулы I в фармацевтически приемлемом носителе где каждый из X1 и X2 независимо выбран из гидроксигруппы, низшего алкокси, низшего ацилокси, кето и гликозида;
    X3 представляет собой кето;
    0К1 выбран из гидроксигруппы, низшего алкокси, низшего ацилокси и гликозида;
    где любая из гидроксигрупп на указанном гликозиде может быть замещена дополнительным гликозидом, низшим алкилом или низшим ацилом так, что соединение включает, максимум, 3 гликозида; и
    - 27 009442
    В2 представляет собой метил и — представляет собой двойную связь между 9 и 11 атомами углерода или В2 образует совместно с 9 атомом углерода конденсированное циклопропильное кольцо и — представляет собой простую связь между 9 и 11 атомами углерода.
  22. 22. Композиция по п.21, отличающаяся тем, что В2 образует совместно с 9 атомом углерода конденсированное циклопропильное кольцо и — представляет собой простую связь между 9 и 11 атомами углерода.
  23. 23. Композиция по п.21, отличающаяся тем, что X1 представляет собой ОН или гликозид и каждый из X2 и ОВ1 представляет собой независимо ОН или гликозид.
  24. 24. Композиция по п.21, отличающаяся тем, что соединение представляет собой астрагалозид IV 16-он.
  25. 25. Фармацевтическая композиция, содержащая соединение формулы I в фармацевтически приемлемом носителе
    I где один из X1 и X2 выбран из гидроксигруппы, низшего алкокси, низшего ацилокси, и кето, а другой представляет собой гликозид и каждый из X3 и ОВ1 независимо выбран из гидроксигруппы, низшего алкокси, низшего ацилокси и гликозида;
    где любая из гидроксигрупп на указанном гликозиде может быть замещена дополнительным гликозидом, низшим алкилом или низшим ацилом так, что соединение включает, максимум, 3 гликозида; и
    В2 представляет собой метил и — представляет собой двойную связь между 9 и 11 атомами углерода или В2 образует совместно с 9 атомом углерода конденсированное циклопропильное кольцо и — представляет собой простую связь между 9 и 11 атомами углерода.
  26. 26. Композиция по п.25, отличающаяся тем, что соединение включает 1 гликозид, который не замещен дополнительным гликозидом.
  27. 27. Композиция по п.25, отличающаяся тем, что В2 образует совместно с 9 атомом углерода конденсированное циклопропильное кольцо и — представляет собой простую связь между 9 и 11 атомами углерода.
  28. 28. Композиция по п.25, отличающаяся тем, что соединение выбрано из циклоастрагенол 6-β-ϋглюкопиранозида и циклоастрагенол 3-в-О-ксилопиранозида.
  29. 29. Фармацевтическая композиция, содержащая соединение формулы II в фармацевтически приемлемом носителе где каждый из X4 и X5 независимо выбран из гидроксигруппы, низшего алкокси, низшего ацилокси, кето и гликозида, и
    ОВ3 выбран из гидроксигруппы, низшего алкокси, низшего ацилокси и гликозида;
    где любая из гидроксигрупп на указанном гликозиде может быть замещена дополнительным гликозидом, низшим алкилом или низшим ацилом так, что соединение включает, максимум, 3 гликозида.
  30. 30. Композиция по п.29, отличающаяся тем, что каждый из X4 и ОВ3 выбран из гидроксигруппы, низшего алкокси, низшего ацилокси и гликозида и X5 выбран из гидроксигруппы, низшего алкокси, низшего ацилокси и кето(=О).
  31. 31. Композиция по п.30, отличающаяся тем, что X4 представляет собой ОН или гликозид и каждый из X5 и ОВ3 представляет собой ОН.
  32. 32. Способ лечения острого или хронического состояния эпидермиса, включающий контактирование эпидермальных клеток с наносимым местно составом выделенного соединения формулы I по п.1, или формулы II по п.8, или формулы III по п.12.
  33. 33. Способ по п.32, отличающийся тем, что соединение имеет формулу I или формулу II.
    - 28 009442
  34. 34. Способ по п.32, отличающийся тем, что указанное острое или хроническое состояние выбрано из группы, включающей рану, ожог, ссадину, надрез, имплантацию, повреждение, вызванное инфекционным агентом, хроническую венозную язву, диабетическую язву, компрессионную язву, рану от сдавления, язву слизистой оболочки и келоидное образование.
  35. 35. Фармацевтическая композиция, содержащая наносимый местно состав выделенного соединения формулы I по п.1, или формулы II по п.8, или формулы III по п.12.
  36. 36. Композиция по п.35, отличающаяся тем, что соединение имеет формулу I или формулу II.
  37. 37. Композиция по п.35, отличающаяся тем, что соединение присутствует в составе в концентрации по крайней мере 0,1% (вес./об.).
  38. 38. Применение соединения формулы I по п.1, формулы II по п.8 или формулы III по п.12 для изготовления лекарственного средства для лечения заболевания путем увеличения активности теломеразы в клетке или ткани.
  39. 39. Применение по п.38, отличающееся тем, что заболевание представляет собой ВИЧ-инфекцию или дегенеративное заболевание.
  40. 40. Применение по п.39, отличающееся тем, что заболевание представляет собой ВИЧ.
  41. 41. Применение по п.39, отличающееся тем, что дегенеративное заболевание выбрано из группы, включающей нейродегенеративное заболевание, дегенеративное заболевание костей или суставов, дистрофию жёлтого пятна сетчатки, атеросклероз и анемию.
  42. 42. Применение соединения формулы I по п.1, формулы II по п. 8 или формулы III по п.12 для изготовления лекарственного средства для лечения хронических или острых состояний эпидермиса.
  43. 43. Применение по п.42, отличающееся тем, что острое или хроническое состояние выбрано из группы, включающей рану, ожог, ссадину, надрез, имплантацию, повреждение, вызванное инфекционным агентом, хроническую венозную язву, диабетическую язву, компрессионную язву, рану от сдавления, язву слизистой оболочки и келоидное образование.
  44. 44. Применение по п.38 или 42, отличающееся тем, что соединение имеет формулу I или формулу II.
  45. 45. Способ повышения репликативной способности клеток ίη νίίτο или ех νίνο, включающий контактирование клеток с соединением формулы I по п.1, формулы II по п.8 или формулы III по п.12, взятым в количестве, эффективном для увеличения активности теломеразы в указанных клетках.
  46. 46. Способ по п.45, отличающийся тем, что соединение имеет формулу I или формулу II.
  47. 47. Способ по п.45, отличающийся тем, что соединение выбрано из астрагалозида IV, циклоастрагенола, астрагенола, астрагалозид IV 16-она, циклоастрагенол 6-в-Э-глюкопиранозида, циклоастрагенол 3-в-В-ксилопиранозида и 20К, 248-эпокси-3в,16в,25-тригидрокси-9в-метил-19-норланост-1,5-диена.
  48. 48. Способ по п.45, отличающийся тем, что указанные клетки представляют собой эксплантантные клетки, полученные от пациента.
  49. 49. Способ по п.45, отличающийся тем, что указанные клетки представляют собой стволовые клетки.
  50. 50. Способ по п.45, отличающийся тем, что указанные клетки представляют собой ВИЧ-рестриктированные СЭ8' клетки.
  51. 51. Способ выбора соединения, эффективного для увеличения активности теломеразы в клетке, включающий тестирование производного соединения формулы I по п.1, формулы II по п.8 или формулы III по п.12 на способность увеличения активности теломеразы в кератиноцитах или фибробластах в ТКАРтестах и выбор производного, если оно является эффективным, с точки зрения увеличения уровня активности теломеразы в кератиноцитах или фибробластах, при концентрации 1 мкг/мл в растворителе по крайней мере на 50% выше по сравнению с измеренной в указанных клетках, обработанных растворителем.
  52. 52. Способ по п.51, отличающийся тем, что указанное производное выбирают по эффективности повышать уровень активности теломеразы в кератиноцитах или фибробластах в ТКАР-тестах при концентрации 1 мкг/мл в растворителе по крайней мере на 100% выше по сравнению измеренной в указанных клетках, обработанных указанным растворителем.
  53. 53. Способ выбора агента для лечения острых или хронических состояний эпидермиса, включающий тестирование производного соединения формулы I по п.1, формулы II по п.8 или формулы III по п.12 для повышения активности заживления раны, в тесте с царапиной на кератиноцитах или фибробластах, и выбор производного, обладающего активностью заживления раны, при концентрации 1 мкг/мл по крайней мере на 50% выше, чем у контроля с растворителем.
  54. 54. Способ по п.53, отличающийся тем, что указанное производное выбирается, если оно обладает активностью заживления раны, как установлено в тестах с царапиной, при концентрации 1 мкг/мл по крайней мере на 100% выше, чем у контроля с растворителем.
  55. 55. Композиция биологически активной добавки, содержащая биологически активный состав соединения формулы I по п.1, формулы II по п.8 или формулы III по п.12.
  56. 56. Композиция по п.55, отличающаяся тем, что соединение имеет формулу I или формулу II.
  57. 57. Композиция по п.56, отличающаяся тем, что соединение выбрано из астрагалозида IV, циклоастрагенола, астрагенола, астрагалозид IV 16-она, циклоастрагенол 6-в-О-глюкопиранозида, циклоастрагенол 3-в-О-ксилопиранозида и 20К,248-эпокси-3в,16в,25-тригидрокси-9в-метил-19-норланост-1,5-диена.
    - 29 009442
  58. 58. Композиция по п.55, отличающаяся тем, что состав биологически активной добавки содержит где каждый из X4 и X5 независимо выбран из гидроксигруппы, низшего алкокси, низшего ацилокси, кето и гликозида и
    ОК3 выбран из гидроксигруппы, низшего алкокси, низшего ацилокси и гликозида;
    где любая из гидроксигрупп на указанном гликозиде может быть замещена дополнительным гликозидом, низшим алкилом или низшим ацилом.
  59. 60. Соединение по п.59, отличающееся тем, что каждый из X4 и ОК3 выбран из гидроксигруппы, низшего алкокси, низшего ацилокси и гликозида и X5 выбран из гидроксигруппы, низшего алкокси, низшего ацилокси и кето(=О).
  60. 61. Соединение по п.59, отличающееся тем, что X4 представляет собой ОН или гликозид и каждый из X5 и ОК3 представляет собой ОН.
  61. 62. Соединение по п.61, отличающееся тем, что X4 представляет собой ОН.
EA200600076A 2003-06-23 2004-06-23 Композиции и способы увеличения активности теломеразы EA009442B1 (ru)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US48098803P 2003-06-23 2003-06-23
PCT/US2004/020277 WO2005000245A2 (en) 2003-06-23 2004-06-23 Compositions and methods for increasing telomerase activity

Publications (2)

Publication Number Publication Date
EA200600076A1 EA200600076A1 (ru) 2006-08-25
EA009442B1 true EA009442B1 (ru) 2007-12-28

Family

ID=33551962

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA200600076A EA009442B1 (ru) 2003-06-23 2004-06-23 Композиции и способы увеличения активности теломеразы

Country Status (24)

Country Link
US (3) US7846904B2 (ru)
EP (2) EP2548880B1 (ru)
JP (4) JP5583882B2 (ru)
KR (3) KR20110089887A (ru)
CN (1) CN1809364B (ru)
AP (1) AP2280A (ru)
AU (2) AU2004251753C1 (ru)
BR (1) BRPI0411856A (ru)
CA (1) CA2528483C (ru)
CY (2) CY1119951T1 (ru)
DK (2) DK1644009T3 (ru)
EA (1) EA009442B1 (ru)
ES (2) ES2716528T3 (ru)
HR (2) HRP20180330T1 (ru)
HU (2) HUE036559T2 (ru)
LT (2) LT1644009T (ru)
MX (1) MXPA05013844A (ru)
NZ (1) NZ544191A (ru)
PL (2) PL1644009T3 (ru)
PT (2) PT2548880T (ru)
SI (2) SI2548880T1 (ru)
TR (2) TR201903587T4 (ru)
WO (1) WO2005000245A2 (ru)
ZA (1) ZA200509846B (ru)

Families Citing this family (42)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US7585622B1 (en) 1996-10-01 2009-09-08 Geron Corporation Increasing the proliferative capacity of cells using telomerase reverse transcriptase
US6337200B1 (en) 1998-03-31 2002-01-08 Geron Corporation Human telomerase catalytic subunit variants
PL1644009T3 (pl) * 2003-06-23 2018-07-31 Telomerase Activation Sciences, Inc. Kompozycje do zwiększania aktywności telomerazy i leczenia zakażenia hiv
US9248088B2 (en) * 2003-06-25 2016-02-02 Telomerase Activation Sciences, Inc. Compositions and methods for skin conditioning
EP1876893B1 (en) 2005-04-15 2012-04-11 Geron Corporation Cancer treatment by combined inhibition of proteasome and telomerase activities
US8197860B2 (en) * 2005-06-23 2012-06-12 Nuliv Holding Inc. Method for enhancing nutrient absorption with astragalosides
CN100333731C (zh) * 2005-09-08 2007-08-29 南京医科大学 黄芪甲苷在制备治疗糖尿病周围神经病变药物中的应用
CN100384830C (zh) * 2006-01-12 2008-04-30 天津药物研究院 环黄芪醇类衍生物以及用途
US7992749B2 (en) 2006-03-30 2011-08-09 Nike, Inc. Support element for a carry strap
PT2101789E (pt) 2006-10-30 2015-03-24 Geron Corp Inibidor de telomerase combinado e gencitabina para o tratamento de cancro
EP2152663B1 (en) 2007-06-04 2014-03-19 Ben Gurion University of the Negev Research and Development Authority Tri-aryl compounds and compositions comprising the same
CN101225424B (zh) 2007-09-13 2013-05-29 天津药物研究院 环黄芪醇的单葡萄糖苷、其制备方法、药物组合物和应用
US8168596B2 (en) * 2008-10-17 2012-05-01 Nuliv Holding Inc. Use of cycloartane compounds for treating arthritis
CN104447936A (zh) * 2009-05-18 2015-03-25 Ta科学公司(美国) 用于增加端粒酶活性的组合物和方法
US20160081912A1 (en) * 2013-05-15 2016-03-24 Fybrands Corp. Compositions for improving the hair, skin, and nails
WO2015068156A1 (en) 2013-11-05 2015-05-14 Ben-Gurion University Of The Negev Research And Development Authority Compounds for the treatment of diabetes and disease complications arising from same
CN104435371A (zh) * 2014-12-06 2015-03-25 郭亮 一种用于治疗关节炎的药酒
CN104491185A (zh) * 2014-12-06 2015-04-08 郭亮 一种祛风湿药酒及其制备方法
CN104435370A (zh) * 2014-12-06 2015-03-25 王香平 风湿保健酒
KR20160069857A (ko) 2014-12-09 2016-06-17 (주)스피어테크 텔로미어 활성을 증가시키기 위한 조성물 및 그 조성물의 제조방법
CN104817610A (zh) * 2015-03-15 2015-08-05 北京化工大学 利用硫酸水解制备环黄芪醇的方法
CN107636149A (zh) 2015-04-03 2018-01-26 普罗帕格尼克斯公司 上皮细胞的离体增殖
US10100285B2 (en) 2015-04-03 2018-10-16 Propagenix Inc. Ex vivo proliferation of epithelial cells
CN106474094A (zh) * 2015-08-31 2017-03-08 南京理工大学 一种环黄芪醇电纺纤维膜及其制备方法
CA2998372A1 (en) 2015-09-11 2017-03-16 Chengkang ZHANG Ex vivo proliferation of epithelial cells
CN106307522A (zh) * 2016-11-06 2017-01-11 谭淞文 一种抗衰老保健品及其制备方法和食用方法
CN106831927B (zh) * 2017-02-07 2018-02-09 江西师范大学 一种黄芪甲苷的合成方法
CN108498521B (zh) * 2017-02-24 2020-05-05 北京大学 环黄芪醇在制备抑制腹主动脉瘤的药物中的应用
US10098922B1 (en) 2017-11-30 2018-10-16 Optigenex, Inc. Increasing telomere length in a cell
CA3145888A1 (en) * 2018-07-31 2020-02-06 Isilay KAVADARLI Ophthalmic formulations and uses thereof
KR102635196B1 (ko) 2018-10-17 2024-02-13 (주)아모레퍼시픽 신규 진세노사이드를 포함하는 미백 조성물
US11000537B2 (en) 2018-10-17 2021-05-11 Amorepacific Corporation Composition comprising novel ginsenoside
US11000538B2 (en) 2018-10-31 2021-05-11 Amorepacific Corporation Composition for enhancing exercise ability or anti-fatigue comprising novel ginsenoside
WO2020131058A1 (en) * 2018-12-20 2020-06-25 Muhammed Majeed Telomerase enhancement potential of ecdysterone
CN109942663B (zh) * 2019-04-22 2021-10-26 中国人民解放军联勤保障部队第九八九医院 利用双相酸水解制备环黄芪醇的方法
MX2019006749A (es) 2019-06-10 2022-11-28 Univ Mexico Nac Autonoma Compuestos activadores de senescencia celular.
KR20210037257A (ko) 2019-09-27 2021-04-06 (주)아모레퍼시픽 신규 진세노사이드를 포함하는 피부 탄력 개선용 조성물
KR20210037256A (ko) 2019-09-27 2021-04-06 (주)아모레퍼시픽 신규 진세노사이드를 포함하는 갱년기 증상의 예방 또는 개선용 조성물
CN111419854B (zh) * 2020-05-18 2021-03-30 南通大学 具有特殊七元环结构的三萜在制备预防和治疗神经损伤药物中的应用
CN113480628B (zh) * 2021-08-17 2022-06-21 贵州师范大学 一种贵州疣螈多肽tk-cath及其编码基因和应用
CN113968894B (zh) * 2021-11-05 2024-05-28 山西大学 一种用黄芪甲苷降解制备环黄芪醇的方法
KR102666469B1 (ko) * 2023-05-04 2024-05-17 주식회사 아리바이오 텔로머라제 활성화제와 나노 입자를 포함하는 약물 전달용 조성물 및 이를 포함하는 탈모 예방, 개선 또는 치료용 조성물

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU97101883A (ru) * 1994-07-07 1999-05-10 Герон Корпорейшн Теломераза млекопитающих
UA47407C2 (ru) * 1994-07-07 2002-07-15 Джерон Корпорейшн Translated By PlajРНК-КОМПОНЕНТ ТЕЛОМЕРАЗЫ МЛЕКОПИТАЮЩЕГО, ОЛИГОНУКЛЕОТИД (ВАРИАНТЫ), РЕКОМБИНАНТНАЯ ЭКСПРЕССИРУЮЩАЯ ПЛАЗМИДА (ВАРИАНТЫ), ЭУКАРИОТИЧЕСКАЯ КЛЕТКА-ХОЗЯИН, ТРАНСФОРМИРОВАННАЯ С ПОМОЩЬЮ РЕКОМБИНАНТНОЙ ЭКСПРЕССИРУЮЩЕЙ ПЛАЗМИДЫ (ВАРИАНТЫ), СПОСОБ ПРОДУЦИРОВАНИЯ РЕКОМБИНАНТНОГО ФЕРМЕНТА ТЕЛОМЕРАЗЫ (ВАРИАНТЫ), СПОСОБ ИДЕНТИФИКАЦИИ ВОЗМОЖНЫХ АГЕНТОВ, МОДУЛИРУЮЩИХ ТЕЛОМЕРАЗУ, СПОСОБ ТОРМОЖЕНИЯ АКТИВНОСТИ ТЕЛОМЕРАЗЫ В КЛЕТКАХ ЧЕЛОВЕКА (ВАРИАНТЫ), СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ НАЛИЧИЯ НЕОПЛАСТИЧЕСКОГО СОСТОЯНИЯ У ПАЦИЕНТА, СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ НАЛИЧИЯ РНК-КОМПОНЕНТА ТЕЛОМЕРАЗЫ МЛЕКОПИТАЮЩЕГО В КЛЕТКЕ ИЛИ КЛЕТОЧНОМ ОБРАЗЦЕ (ВАРИАНТЫ)

Family Cites Families (62)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS6212791A (ja) 1986-07-18 1987-01-21 Osaka Chem Lab オウギサポニン、その単離法およびその用途
JPS6212792A (ja) * 1986-07-18 1987-01-21 Osaka Chem Lab オウギサポニン類の単離法
IT1259645B (it) 1992-04-10 1996-03-25 Solis Srl Metodo per la rivelazione della variazione di densita' di un tessuto e dispositivo per la sua attuazione
US6007989A (en) * 1992-05-13 1999-12-28 Board Of Regents, The University Of Texas System Methods of screening for compounds that derepress or increase telomerase activity
US5629154A (en) * 1993-11-12 1997-05-13 Geron Corporation Telomerase activity assays
FR2695561B1 (fr) 1992-09-17 1994-12-02 Lvmh Rech Gie Composition cosmétique ou dermatologique contenant au moins une saponine de type ginsenoside, et ses applications, notamment pour le soin des cheveux.
US5863726A (en) 1993-11-12 1999-01-26 Geron Corporation Telomerase activity assays
JPH07238026A (ja) * 1994-02-25 1995-09-12 Pola Chem Ind Inc 動脈硬化抑制剤及びこれを含む食品又は医薬
AT402890B (de) * 1994-03-16 1997-09-25 Berbi Gmbh Verwendung von notoginsenosid r1 zur herstellung von arzneimitteln
US5583016A (en) 1994-07-07 1996-12-10 Geron Corporation Mammalian telomerase
US6162459A (en) * 1995-02-24 2000-12-19 National Science Council Acyclovir transdermal delivery system
AUPN411195A0 (en) * 1995-07-10 1995-08-03 Cathay Herbal Laboratories Pty Ltd Medicinal composition
CN1079265C (zh) 1995-08-01 2002-02-20 裴国增 灵芝口服液及其配制方法
US5785977A (en) * 1996-02-07 1998-07-28 Breithbarth; Richard Non-metallic microparticle carrier materials
US5916565A (en) * 1996-03-08 1999-06-29 In Clover, Inc. Product and method for treating joint disorders in vertebrates
TW452494B (en) * 1996-03-12 2001-09-01 Jang De Shan Herbal composition for stimulating blood circulation
US5900226A (en) * 1997-04-09 1999-05-04 Uop Llc Drying agents for non-foamed polyurethanes
JPH1036388A (ja) * 1996-07-25 1998-02-10 Kureha Chem Ind Co Ltd ジンセノサイド類含有ｈｓｐ４７合成抑制剤
US6261836B1 (en) 1996-10-01 2001-07-17 Geron Corporation Telomerase
US6093809A (en) 1996-10-01 2000-07-25 University Technology Corporation Telomerase
ATE552341T1 (de) 1996-10-01 2012-04-15 Geron Corp Katalytische untereinheit der menschlichen telomerase
ATE382360T1 (de) * 1997-01-28 2008-01-15 Amelio Frank D Wasser/ethanol pflanzenextrakte aus centipeda cunninghamii
US5786343A (en) * 1997-03-05 1998-07-28 Immudyne, Inc. Phagocytosis activator compositions and their use
CA2302444C (en) * 1997-09-05 2007-04-10 The Procter & Gamble Company Cleansing and conditioning products for skin or hair with improved deposition of conditioning ingredients
CA2302561C (en) * 1997-09-12 2006-02-14 The Procter & Gamble Company Cleansing and conditioning article for skin or hair
CA2315265A1 (en) 1998-01-12 1999-07-15 Cold Spring Harbor Laboratory Extension of cellular lifespan, methods and reagents
GB9815177D0 (en) * 1998-07-13 1998-09-09 King S College London Treatment of skin disorders
WO2000008135A1 (en) 1998-08-09 2000-02-17 Board Of Regents, The University Of Texas System Methods and compositions for inhibiting or stimulating telomerase assembly
AU2156600A (en) 1998-11-25 2000-06-13 Cold Spring Harbor Laboratory Methods and reagents for increasing proliferative capacity and preventing replicative senescence
JP2000204091A (ja) * 1999-01-13 2000-07-25 Nippon Suisan Kaisha Ltd 新規ベンゾジオキソ―ル誘導体
JP2000229827A (ja) * 1999-02-05 2000-08-22 Kose Corp 皮膚外用剤
JP2000229834A (ja) * 1999-02-10 2000-08-22 Kanebo Ltd 化粧料
AUPQ127399A0 (en) 1999-06-29 1999-07-22 Guangzhou University Of Traditional Chinese Medicine Compositions and methods for treating or preventing osteoporosis
DK1210357T3 (da) 1999-09-10 2008-07-21 Geron Corp Oligonukleotid-N3' -P5' -thiophosphoramidater: syntese og anvendelse deraf
JP2001258505A (ja) * 2000-03-24 2001-09-25 Fancl Corp 食品組成物
CA2307393A1 (en) * 2000-05-01 2001-11-01 The University Of British Columbia Ginsenoside chemotherapy
US6277396B1 (en) * 2000-05-11 2001-08-21 Maximum Human Performance, Inc. Dietary supplement containing a thermogenic substance and an adrenal support substance
CN1452629A (zh) 2000-05-31 2003-10-29 科学技术振兴事业团 含有人参皂甙Rb1的皮肤组织再生促进剂
CN1172677C (zh) * 2000-07-14 2004-10-27 复旦大学附属中山医院 黄芪甲苷在制备药物组合物中的应用
GB0105613D0 (en) 2001-03-07 2001-04-25 Univ Cambridge Tech Pharmaceutically effective compounds and their use
AU2001275707A1 (en) * 2000-07-26 2002-02-05 Cambridge University Technical Services Limited Use of panaxatriol for stimulation angiogenesis
US6696094B2 (en) * 2000-10-18 2004-02-24 Tzu-Sheng Wu Herbal pharmaceutical composition for treatment of HIV/AIDS patients
CN1242807C (zh) * 2000-11-08 2006-02-22 天津市延龄营养保健品有限公司 一种抗皮肤过敏的药物组合物及其制法和用途
CN1369276A (zh) * 2001-02-12 2002-09-18 徐秀荣 有效减轻体重的组合物和方法
JP2002275086A (ja) * 2001-03-15 2002-09-25 Fancl Corp 虚弱体質改善用組成物
WO2002091999A2 (en) 2001-05-09 2002-11-21 Geron Corporation Treatment for wounds
US20020182272A1 (en) * 2001-05-30 2002-12-05 Bruce Halstead Methods of treatment of HIV-associated conditions
WO2003004473A1 (fr) 2001-07-03 2003-01-16 Tanabe Seiyaku Co., Ltd. Nouveaux derives de butadiene, leur procede de preparation et les intermediaires pour leur synthese
JP2003089687A (ja) * 2001-07-03 2003-03-28 Tanabe Seiyaku Co Ltd 新規ブタジエン誘導体、その製法およびその合成中間体
US6855344B2 (en) * 2001-07-17 2005-02-15 Integrated Chinese Medicine Holdings, Ltd. Compositions and methods for prostate and kidney health and disorders, an herbal preparation
US20030108629A1 (en) * 2001-07-17 2003-06-12 Chou Wen Hsien Compositions and methods for prostate and kidney health and disorders, an herbal preparation
CN1164608C (zh) * 2001-08-31 2004-09-01 上海中医药大学 具有抗心肌纤维化作用的黄芪皂甙甲
CN1406585A (zh) 2001-09-07 2003-04-02 中国科学院上海药物研究所 一种治疗病毒性心肌炎的药物组合物
JP2003160497A (ja) * 2001-11-22 2003-06-03 Toshin Kagaku Kk 皮膚外用剤
AU2003212936A1 (en) * 2002-02-04 2003-09-02 Ceremedix, Inc. Peptide-dependent upregulation of telomerase expression
CN1236803C (zh) 2002-03-20 2006-01-18 郑国芃 一种治疗风湿症的中药
CN1189176C (zh) * 2002-07-22 2005-02-16 江苏正大天晴药业股份有限公司 黄芪甲甙组合物及其制备方法
WO2004096251A1 (en) * 2003-03-26 2004-11-11 Westlake Partners Herbal compositions and methods for effecting weight loss in humans
AU2004249295A1 (en) * 2003-06-20 2004-12-29 Viral Genomix, Inc. Compositions for and methods for treating HIV
PL1644009T3 (pl) * 2003-06-23 2018-07-31 Telomerase Activation Sciences, Inc. Kompozycje do zwiększania aktywności telomerazy i leczenia zakażenia hiv
US9248088B2 (en) * 2003-06-25 2016-02-02 Telomerase Activation Sciences, Inc. Compositions and methods for skin conditioning
WO2005044179A2 (en) 2003-06-27 2005-05-19 Hong Kong University Of Science And Technology Formulations containing astragalus extracts and uses thereof

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU97101883A (ru) * 1994-07-07 1999-05-10 Герон Корпорейшн Теломераза млекопитающих
UA47407C2 (ru) * 1994-07-07 2002-07-15 Джерон Корпорейшн Translated By PlajРНК-КОМПОНЕНТ ТЕЛОМЕРАЗЫ МЛЕКОПИТАЮЩЕГО, ОЛИГОНУКЛЕОТИД (ВАРИАНТЫ), РЕКОМБИНАНТНАЯ ЭКСПРЕССИРУЮЩАЯ ПЛАЗМИДА (ВАРИАНТЫ), ЭУКАРИОТИЧЕСКАЯ КЛЕТКА-ХОЗЯИН, ТРАНСФОРМИРОВАННАЯ С ПОМОЩЬЮ РЕКОМБИНАНТНОЙ ЭКСПРЕССИРУЮЩЕЙ ПЛАЗМИДЫ (ВАРИАНТЫ), СПОСОБ ПРОДУЦИРОВАНИЯ РЕКОМБИНАНТНОГО ФЕРМЕНТА ТЕЛОМЕРАЗЫ (ВАРИАНТЫ), СПОСОБ ИДЕНТИФИКАЦИИ ВОЗМОЖНЫХ АГЕНТОВ, МОДУЛИРУЮЩИХ ТЕЛОМЕРАЗУ, СПОСОБ ТОРМОЖЕНИЯ АКТИВНОСТИ ТЕЛОМЕРАЗЫ В КЛЕТКАХ ЧЕЛОВЕКА (ВАРИАНТЫ), СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ НАЛИЧИЯ НЕОПЛАСТИЧЕСКОГО СОСТОЯНИЯ У ПАЦИЕНТА, СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ НАЛИЧИЯ РНК-КОМПОНЕНТА ТЕЛОМЕРАЗЫ МЛЕКОПИТАЮЩЕГО В КЛЕТКЕ ИЛИ КЛЕТОЧНОМ ОБРАЗЦЕ (ВАРИАНТЫ)
RU2000102361A (ru) * 1997-07-01 2002-03-10 Камбиа Биосистемз Ллс Гены и белки теломеразы позвоночных и их применение

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Nikolaev V. Eleksir bessmertiya? Pridetsya podozhdat'... //Farmatsevticheskiy vestnik, rubrika Nauka, Ôäû 4 (95), 16-28 fevralya 1998 g., on-layn, [naydeno v Internet na http://www.pharmvestnik.ru/issues/0095_019.htm], naydeno 27.07.2006 *

Also Published As

Publication number Publication date
JP2014024861A (ja) 2014-02-06
US20110071095A1 (en) 2011-03-24
PL2548880T3 (pl) 2019-07-31
CN1809364A (zh) 2006-07-26
TR201903587T4 (tr) 2019-04-22
HUE043168T2 (hu) 2019-08-28
MXPA05013844A (es) 2006-07-06
WO2005000245A2 (en) 2005-01-06
CY1121447T1 (el) 2020-05-29
AU2008249200A1 (en) 2008-12-18
AU2004251753C1 (en) 2009-04-09
EP2548880B1 (en) 2019-01-09
CA2528483A1 (en) 2005-01-06
LT1644009T (lt) 2018-03-12
AP2280A (en) 2011-10-31
EP1644009A4 (en) 2010-04-07
EA200600076A1 (ru) 2006-08-25
SI2548880T1 (sl) 2019-04-30
KR20130137252A (ko) 2013-12-16
KR20060034237A (ko) 2006-04-21
KR20110089887A (ko) 2011-08-09
TR201802543T4 (tr) 2018-03-21
CA2528483C (en) 2012-04-10
NZ544191A (en) 2008-12-24
EP2548880A3 (en) 2013-06-19
US20080113925A1 (en) 2008-05-15
JP2007524627A (ja) 2007-08-30
PT1644009T (pt) 2018-02-28
PL1644009T3 (pl) 2018-07-31
JP2016041770A (ja) 2016-03-31
AP2005003474A0 (en) 2005-12-31
HRP20190322T1 (hr) 2019-04-19
US8759304B2 (en) 2014-06-24
EP1644009A2 (en) 2006-04-12
US7846904B2 (en) 2010-12-07
AU2004251753B2 (en) 2008-11-20
PT2548880T (pt) 2019-02-27
CY1119951T1 (el) 2018-12-12
SI1644009T1 (en) 2018-04-30
ZA200509846B (en) 2007-04-25
EP2548880A2 (en) 2013-01-23
JP5913253B2 (ja) 2016-04-27
LT2548880T (lt) 2019-03-25
JP2011098991A (ja) 2011-05-19
DK2548880T3 (en) 2019-04-08
US20150093455A1 (en) 2015-04-02
CN1809364B (zh) 2010-06-16
EP1644009B1 (en) 2017-11-29
JP5583882B2 (ja) 2014-09-03
DK1644009T3 (en) 2018-03-05
HUE036559T2 (hu) 2018-07-30
WO2005000245A3 (en) 2005-05-26
HRP20180330T1 (hr) 2018-04-20
BRPI0411856A (pt) 2006-08-29
ES2716528T3 (es) 2019-06-13
JP5841337B2 (ja) 2016-01-13
ES2666864T3 (es) 2018-05-08
KR101465515B1 (ko) 2014-11-26
AU2004251753A1 (en) 2005-01-06
KR101312389B1 (ko) 2013-09-27

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EA009442B1 (ru) Композиции и способы увеличения активности теломеразы
US9403866B2 (en) Compositions and methods for increasing telomerase activity
KR20100055734A (ko) 7,3',4'-트리하이드록시이소플라본을 함유하는 피부 장벽 강화용 또는 보습용 피부 외용제 조성물
KR20180027157A (ko) 아멘토플라본을 포함하는 피지 과다분비 또는 지루성 습진의 억제 또는 개선용 조성물
KR102000502B1 (ko) 골쇄보 추출물을 포함하는 피지 과다분비 또는 지루성 습진의 억제 또는 개선용 조성물
JP2023158912A (ja) タイトジャンクション形成促進用組成物
JP2021001127A (ja) 皮膚疾患の治療効果を有するキク抽出物の作製方法、皮膚疾患の治療効果を有するキク抽出物、およびその抽出物を含む医薬組成物
KR20180119910A (ko) 피지 과다분비 또는 지루성 습진의 억제 또는 개선용 조성물
JPH06239759A (ja) 細胞増殖促進物質及びそれを含有する組成物

Legal Events

Date Code Title Description
PC4A Registration of transfer of a eurasian patent by assignment