RU97101883A - Теломераза млекопитающих - Google Patents

Claims (1)

1. РНК-компонент теломеразы млекопитающих в практически очищенной форме.

2. РНК-компонент по п.1, имеющий последовательность
3. Олигонуклеотид в практически очищенной форме, содержащий последовательность, идентичную или строго комплементарную смежной последовательности РНК-компонента по п.2 длиной 10 - 500 нуклеотидов.

4. Олигонуклеотид по п.3, который при связывании с РНК-компонентом теломеразы человека ингибирует или блокирует активность теломеразы.

5. Рекомбинантная плазмида экспрессии, содержащая олигонуклеотид по п.3 и промотор, расположенный так, чтобы направлять транскрипцию РНК, комплементарной или идентичной последовательности указанного олигонуклеотида.

6. Рекомбинантная плазмида экспрессии по п.5, при том, что указанный ген включает нуклеотидную последовательность
7. Эукариотическая клетка-хозяин, трансформированная рекомбинантной плазмидой экспрессии по п.5, кодирующей РНК-молекулу, способную объединяться с белковыми компонентами теломеразы млекопитающих с образованием активной теломеразы, способной добавлять повторяющиеся последовательности нуклеотидов к теломерам.

8. Способ получения фрагмента рекомбинантной теломеразы, включающий трансформацию эукариотической клетки-хозяина, экспрессирующей белковые компоненты теломеразы, рекомбинантным вектором экспрессии, кодирующим РНК-компонент по п.7 и культивирование указанной клетки-хозяина, трансформированной указанным вектором, в условиях, обеспечивающих экспрессию белковых компонентов и РНК-компонента теломеразы и объединение их с образованием активной молекулы теломеразы, способной добавлять последовательности к теломерам хромосомальной ДНК.

9. Способ идентификации возможных агентов, модулирующих активность теломеразы, включающий:
осуществление исследования гетеродимеризации или теломеразной активности с использованием:
(1) полинуклеотида, содержащего полинуклеотид, практически идентичный РНК-компоненту теломеразы человека и способный связывать белок теломеразы человека, (2) практически очищенного белка теломеразы человека, и (3) агента;
определение способности агента ингибировать гетеродимеризацию или теломеразную активность теломеразной РНК человека и теломеразного белка человека;
идентификацию агентов, которые ингибируют указанную гетеродимеризацию или теломеразную активность, в качестве возможных агентов, модулирующих теломеразу, которые ингибируют активность теломеразы.

10. Способ ингибирования активности теломеразы в клетках человека, включающий перенос в клетки экзогенного полинуклеотида, содержащего транскрипционную единицу, имеющую полинуклеотидную последовательность по крайней мере из 25 последовательно расположенных нуклеотидов, которые практически идентичны или практически комплементарны РНК-последовательности теломеразы человека, функционально связанную с гетерологичной регулирующей транскрипцию последовательностью, которая обеспечивает транскрипцию функционально связанного полинуклеотида в указанных клетках.

11. Способ обнаружения неопластического состояния у пациента, включающий стадии
получение клеточного образца от пациента;
выявление теломеразного РНК-компонента человека в клеточном образце для определения диагностического значения;
сравнение диагностического значения со стандартным значением экспрессии телемеразного РНК-компонента человека в неподвергшихся неоплазии клетках того же типа, что и полученный клеточный образец;
диагностирование неопластического состояния по выявлению диагностического значения, которое существенно выше стандартного значения, так что указывает на присутствие неопластического состояния.

12. Способ обнаружения теломеразного РНК-компонента млекопитающего в клетке или клеточном образце, включающий осуществление амплификации или гибридизации с полинуклеотидом теломеразного РНК-компонента, праймером теломеразного РНК-компонента или последовательностью, комплементарной полинуклеотиду теломеразного РНК-компонента или праймеру теломеразного РНК-компонента.