EA009366B1 - Связанные с полиэтиленгликолем соединения гпп-1 - Google Patents

Связанные с полиэтиленгликолем соединения гпп-1 Download PDF

Info

Publication number
EA009366B1
EA009366B1 EA200501482A EA200501482A EA009366B1 EA 009366 B1 EA009366 B1 EA 009366B1 EA 200501482 A EA200501482 A EA 200501482A EA 200501482 A EA200501482 A EA 200501482A EA 009366 B1 EA009366 B1 EA 009366B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
haa
suz
denotes
glp
pegylated
Prior art date
Application number
EA200501482A
Other languages
English (en)
Other versions
EA200501482A1 (ru
Inventor
Ричард Дэнниз Димарчи
Вольфган Гласнер
Рон Ли Джуниор Милликан
Эндрю Марк Вик
Лианшан Жанг
Original Assignee
Эли Лилли Энд Компани
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Эли Лилли Энд Компани filed Critical Эли Лилли Энд Компани
Publication of EA200501482A1 publication Critical patent/EA200501482A1/ru
Publication of EA009366B1 publication Critical patent/EA009366B1/ru

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/575—Hormones
    • C07K14/605—Glucagons
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/185—Acids; Anhydrides, halides or salts thereof, e.g. sulfur acids, imidic, hydrazonic or hydroximic acids
    • A61K31/205—Amine addition salts of organic acids; Inner quaternary ammonium salts, e.g. betaine, carnitine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
    • A61K47/59—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes
    • A61K47/60—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes the organic macromolecular compound being a polyoxyalkylene oligomer, polymer or dendrimer, e.g. PEG, PPG, PEO or polyglycerol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/14—Prodigestives, e.g. acids, enzymes, appetite stimulants, antidyspeptics, tonics, antiflatulents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/04—Anorexiants; Antiobesity agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Vascular Medicine (AREA)
  • Nutrition Science (AREA)
  • Emergency Medicine (AREA)
  • Child & Adolescent Psychology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Enzymes And Modification Thereof (AREA)

Abstract

Настоящее изобретение относится к соединениям ГПП-1 (GLP-1), связанным по меньшей мере с одной молекулой полиэтиленгликоля или его производного с получением в результате биологически активного пептида с увеличенным периодом полувыведения и более медленным клиренсом по сравнению с показателями для неПЭГилированного пептида. Эти ПЭГилированные соединения ГПП-1 и композиции с ними пригодны для лечения диабета, ожирения, синдрома раздраженного кишечника и других патологических состояний, при которых было бы полезно снижение уровней глюкозы в плазме, подавление моторики желудка и/или кишечника и подавление опустошения желудка и кишечника или подавление потребления пищи.

Description

Область изобретения
Настоящее изобретение относится к ГНН-1 (ОЬР-1) соединениям, ковалентно связанным с одной или более молекулами полиэтиленгликоля или его производного и относящимся к ним композициям и способам, пригодным для лечения патологических состояний или заболеваний, на которые оказывает благоприятное действие снижение глюкозы в крови, снижение потребления пищи, снижение опустошения желудка и кишечника или снижение моторики желудка и кишечника.
Предпосылки создания изобретения
Глюкагоноподобный пептид-1 (ГНН-1) вызывает многочисленные биологические эффекты, такие как стимуляция секреции инсулина, подавление секреции глюкагона, подавление опустошения желудка, подавление моторики желудка и движений кишечника, усиление утилизации глюкозы и индуцирование потери веса. ГНН-1, кроме того, может предотвращать повреждение β-клеток поджелудочной железы, которое происходит, когда прогрессирует неинсулинозависимый сахарный диабет (НИЗСД; ΝΙΌΌΜ). Значимым свойством ГНН-1 является его способность стимулировать секрецию инсулина без связанного с этим риска гипогликемии, что наблюдается при инсулиновой терапии или некоторых типах пероральной терапии, которая действует посредством повышения секреции инсулина.
Нрименимость терапии с участием пептидов ГНН-1 была ограничена тем фактом, что ГНН-1(1-37) слабо активен, и два природно встречающихся усеченных пептида, ГНН-1(7-37)ОН и ГНН-1(7-36)NΗ2, быстро выводятся ίη νίνο и имеют чрезвычайно короткие периоды полужизни ίη νίνο. Известно, что эндогенно продуцируемая дипептидилпептидаза IV (ЬОО-ΐν) инактивирует циркулирующие пептиды ГНН-1 путем удаления Ν-концевых гистидинового и аланинового остатков и является главной причиной короткого периода полужизни ίη νίνο.
Были предприняты разные подходы для увеличения периода полувыведения пептида ГНН-1 или снижения клиренса пептида из организма при сохранении биологической активности. В патенте США № 5705483 указано, что аналоги пептида ГНН-1 становятся устойчивыми к разрушению ДНН-ΐν посредством включения модификаций на Ν-конце пептида. Альтернативным подходом к увеличению периода полужизни пептидов ГНН-1 является дериватизация, причем большие ацильные группы, которые предотвращают подход ДНН-ΐν к Ν-концу пептида, связаны с разными аминокислотами ГНН-1 (см. международную заявку № РСТ/ОК 97/00340, поданную 22 августа 1997 г., озаглавленную «Нроизводные ГНН1», по которой испрошен приоритет предварительной заявки ΌΚ 0931/96, поданной 30 августа 1996 г., 1259/96, поданной 8 ноября 1996 г., и 1470/96, поданной 20 декабря 1996 г.).
Конкретные аналоги ГНН-1 описаны в патентных заявках США, серийные номера 60/346474, поданной 8 января 2002 г., и 60/405097, поданной 21 августа 2002 г., в настоящее время международная заявка № РСТ/ϋδ 03/058203, поданная 3 января 2003 г., все озаглавлены «Удлиненные аналоги глюкагоноподобного пептида-1» и включены сюда во всей их полноте. В этих заявках описаны аналоги ГНН-1(737)ОН, у которых разные аминокислоты, при добавлении к С-концу дают аналоги пептида ГНН-1 с удлиненным периодом полужизни и сниженным клиренсом, чем клиренс природной молекулы. Кроме того, аналоги ГНН-1 с повышенной активностью описаны в патентной заявке США серийный № 60/314573, зарегистрированной 23 августа 2001 г, в настоящее время международная заявка № РСТ/ϋδ 02/21325, зарегистрированная 14 августа 2002 г, озаглавленная «Аналоги глюкагоноподобного пептида1» (включенная сюда). Экзендин-4 может действовать на рецепторы ГНН-1 ίη νίίτο на некоторых типах клеток, включая секретирующие инсулин клетки |Οο1^. е! а1., I. ΒίοΙ. Сйеш., (1993)268:19650-19655]. В частности, НЭГилированный эксендин и молекулы агониста эксендина описаны в международной заявке номер РСТ/ϋδ 00/11814 (включена сюда во всей ее полноте).
Хотя разные подходы приводили к соединениям ГНН-1 с более длинным периодом полужизни или большей активностью, чем характеристики природного ГНН-1, необходимы другие подходы, которые могли бы использоваться или отдельно, или в комбинации с известными подходами для дальнейшего снижения клиренса соединения ГНН-1 и повышения периода полужизни с оптимизацией тем самым их пригодности в качестве терапевтического средства, которое можно вводить минимальное число раз в течение продолжительного периода времени. Ковалентное связывание одной или более молекул полиэтиленгликоля с небольшим биологически активным пептидом, таким как ГНН-1 или эксендин-4, несет риск придания побочных характеристик, таких как нестабильность, молекуле и такого сильного снижения биоактивности, что сделает молекулу непригодной для использования в качестве терапевтического средства. Настоящее изобретение, однако, основано на обнаружении того, что ковалентная связь одной молекулы или более молекул НЭГ с особыми остатками соединения ГНН-1 дает в результате биологически активное НЭГилированное соединение ГНН-1 с увеличенным периодом полужизни и сниженным клиренсом по сравнению с характеристиками природного ГНН-1 или να18-Π111-1 (или природного эксендина-4 по отношению с модифицированными эксендин-4 пептидами по изобретению).
НЭГилированные соединения ГНН-1 по изобретению обладают большей пригодностью в качестве терапевтического средства, а также большим удобством использования, чем природный ГНН-1, так как они сохраняют всю активность или часть биологической активности природного ГНН-1, и даже имеют увеличенный период полужизни и/или сниженный клиренс по сравнению с характеристиками природного соединения ГНН-1 или характеристиками Vа18-ГНН-1(7-37)ОН. П 111-1(7-37) имеет период полужизни
- 1 009366 в сыворотке крови, составляющий только от 3 до 5 мин. ГПП-1(7-36)амид имеет время действия, равное примерно 50 мин при подкожном введении. Даже аналоги и производные ГИП-1, которые устойчивы к расщеплению эндогенными протеазами, не обладают периодами полужизни в сыворотке, достаточными для исключения повторных введений в течение 24 ч периода. ПЭГилированные Г1П1-1 соединения по изобретению могут обладать периодом полужизни свыше 24 ч, что дает возможность меньшего числа введений ПЭГилированного ГПП-1 соединения при сохранении в то же время высокого уровня в крови этого соединения на протяжении длительного периода времени. Такие ПЭГилированные ГИП-1 соединения можно использовать в терапии для лечения пациентов с заболеваниями, включая, но не ограничивая этим, диабет, ожирение, нарушения моторики желудка и кишечника и нарушения опустошения желудка и кишечника, причем особым преимуществом является то, что ПЭГилированные ГПП-1 соединения по изобретению требуют меньшего числа введений (приемов) в течение 24-часового периода, повышая как удобство для пациента, так и вероятность соблюдения пациентом необходимого режима дозировки.
Краткое изложение изобретения
Изобретение, описанное здесь, относится к ГИП-1 соединениям, ковалентно связанным с одной молекулой или большим числом молекул полиэтиленгликоля (ПЭГ) или его производного, причем каждый ПЭГ связан по аминокислоте Сук или Ьук или с карбоксиконцом пептида с получением в результате ПЭГилированных ГПП-1 соединений с периодом полувыведения, равным по меньшей мере одному часу, предпочтительно по меньшей мере 3, 5, 7, 10, 15, 20 ч и наиболее предпочтительно по меньшей мере 24 ч. ПЭГилированные ГПП-1 соединения по изобретению предпочтительно имеют значение клиренса, равное 200 мл/ч/кг, более предпочтительно 180, 150, 120, 100, 80, 60 мл/ч/кг или менее и наиболее предпочтительно менее 50, 40 или 20 мл/ч/кг.
Одним из вариантов осуществления настоящего изобретения является ПЭГилированное ГИП-1 соединение, содержащее аминокислотную последовательность ГПП-1(7-37)ОН, как показано в 8ЕЦ ГО Νο.:1, с молекулой ПЭГ, ковалентно связанной у 3, 2 или 1 из остатков, выбранных из группы, состоящей из Ьу§2б, Ьу«34 и С>1\; :
7Н18-А1э-61и-!0О1у-'П1г-РЬе-ТЬг-8ет-15А5р-Уа]-8ег-8сГТут-20Теи-С1и-О1уС1п-А1а-иА1а-Ьу8-С1и-И1е-11е-30А1а-Тф-Ьеи-Уа]-Ьу5-35О1у-Аг8-3,61у (Ш) ΙΌ Νο.:1)
Другим вариантом осуществления изобретения является ПЭГилированное ГПП-1 соединение, содержащее аминокислотную последовательность ГПП-1(7-36)NΗ2, которая показана в 8ЕЦ ГО Νο.:2, с молекулой ПЭГ, ковалентно связанной у 3, 2 или 1 из остатков, выбранных из группы, состоящей из Ьу§2б, Ьу8э4 и Агд;..:
7Н1в-А1а-О1и-|0С1у-Т1ц-РЬе-Т11г-8ег-15А5р-Уа]-5ег-5ег-Тут-20Ьеи-С1и-О1уС1п-А1а-24А1а-Еух-С1и-Р11е-Ие-30А]а-Тгр-Теи-Уа1-Еу5-3,'О1у-Агд (Ш) ГО Νο.:2)
Еще одним вариантом осуществления изобретения является ПЭГилированное ГПП-1 соединение, содержащее аминокислотную последовательность формулы I (8ЕО ГО Νο.:3)
Хаат-ХаагС>1и*С1у-Хаа] рХаап-ТЬг-Зег-Авр-Хаа^-Зег-Хаа] з-Хшцр-Хааго-СЛиХаагг Ход- Ход-Ход- Ход-Ха^Рйе-Ие-Хааз^Тгр-Ьеи-Хаазз- ХодХааз5-Хааэ$-Хааз7
Формула 1 (8ЕЦ ГО Νο.:3), где Хаа7 представляет собой: Ь-гистидин, Ό-гистидин, дезаминогистидин, 2-аминогистидин, βгидроксигистидин, гомогистидин, α-фторметилгистидин или α-метилгистидин;
- 2 009366
Хаав представляет: А1а, О1у, Уа1, Ьеи, Не, 2ег или ТЬг;
Хаац представляет; ТЬг или Суз;
Хаа12 представляет: РЬе, Тгр , Туг или Суз;
Хаа1б представляет: Уа1, Тгр , 11е, Ьеи, РЬе , Туг ИЛИ Су5,-
Хаа18 представляет: Зег, Тгр , Туг, РЬе, Ьуз , Не, Ьеи, Уа1;
Ха. а. 19 представляет: Туг, Тгр или РЬе;
Хааго представляет: Ьеи, РЬе , Туг или Тгр;
Хаагг представляет: С1у, С1и , Азр, Ьуз или Суз;
Хаагз представляет: С1п или Суз;
Хаагз представляет: А1а или Суз;
Хаа25 представляет: А1а, Уа1 , Не, Ьеи или Суз;
Хааге представляет: Ьуз или Суз;
Хааг? представляет: Е1и, Не, А1а или Суз;
Хаазо представляет: А1а, С1и или Суз;
Хаазз представляет: Уа1 или Не;
Хаа34 представляет: Ьув или Суз;
Хаазг представляет: С1у или Суз;
Хаазе представляет: Агд или Суз;
Хааз? представляет: С1у, Ηϊβ, Суз, МН; или отсутствует;
и где 2 или 1 из Сук остатков ковалентно связан(ы) с молекулой ПЭГ, или 3, 2 или 1 из Ьук остатков ковалентно связан(ы) с молекулой ПЭГ, или аминокислота карбоксильного конца ковалентно связана с молекулой ПЭГ; и при условии, что в молекуле есть 2, 1 или 0 цистеиновых остатков.
Еще одним вариантом осуществления изобретения является ПЭГилированное ГПП-1 соединение, содержащее аминокислотную последовательность формулы II (8ЕО ГО Νο.: 4):
Хаат-Хаа«-О1и-О1у- Хаац- Хаа11'ТЪг**5ег'А£р-Хаа|£-8сг-Хаа|(-Туг-ЬеибЬ-Ха^г-Хаагг^Цм'Х^гХа^-Хаазг-РЬб-Пе-ХаамгТтр-Ьеи-ХааззХаазт- Хаазз-Хаазб-Хааз7
Формула II (8ЕС ΙΌ Νο.: 4), где Хаа7 представляет собой: Ь-гистидин, Ό-гистидин, дезаминогистидин, 2-аминогистидин, βгидроксигистидин, гомогистидин, α-фторметилгистидин или α-метилгистидин;
Хаае представляет: С1у, А1а, Уа1, Ьеи, 11е, Зег или ТЬг;
Хаац представляет: Хаагг представляет: Хаагб представляет: ТЬг или Суз; РЬе или Суз; УаЬ, РЬе, Туг, Тгр или Суз;
Хаа1а представляет: 5ег, туг, Тгр, РЬе, Ьуз, Не, Ьеи
Хаа79 представляет: Туг или РЬе ;
Хаагг представляет; 61у, 61и, АзЬ, Ьуз или Суз;
Хаагз представляет: С1п или Суз Ζ
Хааг4 представляет: А1а или Суз /
Хаагг представляет : А1а , Уа1 , Не, Ьеи или Суз;
Хааге представляет : Ьуз или Суз;
Хааг? представляет : С1и или Суз;
Хаазо представляет : А1а или Суз;
Хаа3з представляет : Уа1 или 11е,
Хаа34 представляет : Ьуз или Суз;
Хаазг представляет : С1у или Суз;
Хаазе представляет : Агд или Суз; и
Хаазг представляет : С1у , суа , ΝΗ2 или отсутствует.
- 3 009366 и где 2 или 1 из Сук остатков ковалентно связан(ы) с молекулой ПЭГ, или 3, 2 или 1 из Бук остатков ковалентно связаны с молекулой ПЭГ, или карбоксиконцевая аминокислота ковалентно связана с молекулой ПЭГ; и при условии, что в молекуле есть 2, 1 или 0 цистеиновых остатков.
Еще одним вариантом осуществления изобретения является ПЭГилированное ГПП-1 соединение, содержащее аминокислотную последовательность формулы III (8ЕО ГО Νο.: 5):
Хаа7-Хаа8-О1и-С1у-Хаац-Хаа12-'Пп'-8сг-А5р-Хаа|б-8сг-Хаа1г-Хаа|г
Хааго-СИи-Хлагг-Хаагз-Хаагг-Хааи-Хаа2б-Хаа27-Р1>е-Пь-Хааз|)-Ттр-БеиХшкэз**
Хааз^Хааи-Хаазб-Хаазт-Хшзг-Хаод-Хаа'огХаод-'Хаэд-Хаавз-Хаам·· Ха&и-Х&8и-Хаа47~Хш4з*Ха*49-Ха>5о
Формула III (8ЕЭ ΙΌ Νο.: 5), где Xаа7 представляет собой: Б-гистидин, Ό-гистидин, дезаминогистидин, 2-аминогистидин, βгидроксигистидин, гомогистидин, α-фторметилгистидин или α-метилгистидин;
Хаав представляет: А1а, С1у, Уа1, Ьеи, Не, Зег или ТЬг;
Хаац представляет: ТЬг или Сув;
Хаац представляет: РЬе, ТгЬ, Туг или Суз;
Хаа1б представляет: Уа1, Тгр, Не, Ьеи, РЬе, Туг или Суз;
ХаЭ1д Уа1; представляет: Зег, - Тгр, Туг , РЬе, Ьуз , Не, Ьеи или
ХаЭ1э представляет: Туг, Тгр или РЬе;
Хааго представляет: Ьеи, РЬе, Туг или Тгр;
Хаа22 представляет: С1у, С1и, Азр, Ьуз или Суз;
Хаа22 представляет: 51п или Суз;
Хаа24 представляет: А1а или Суз;
Хаа25 представляет: А1а, Уа1, Не, Ьеи или Суз;
Хаа2б представляет: Ьуз или Суз;
Хаа27 представляет: С1и, Не, А1а или Суз;
Хаазо представляет: А1а, С1и или Суз;
Хаазз представляет: Уа1 или Не;
Хааз4 представляет: Ьуз, Азр, Агд, 61и или Суз;
Хаазз представляет: С1у или Суз;
Хаазб представляет: С1у, Рго, Агд или Суз;
Хаазз представляет: С1у, Рго, Зег или Суз;
Хааза представляет: Зег, Рго, ΗΪ3 или Суз;
Хаазз представляет: Зег, Агд, ТЬг, Тгр, Ьуз или Суз;
Хаа^о представляет: Зег, С1у или Суз;
Хаа41 представляет: А1а, Азр, Агд, С1и, Ьуз, С1у или Суз;
Хаа42 представляет: Рго, А1а, Суз или ИН2 или отсутствует;
Хаа4з представляет: Рго, А1а, Суз, ΝΗ2 или отсутствует;
Хаа44 представляет: Рго, А1а, Агд, Ьуз, Нтз, Суз, МН? или
отсутствует;
Хаа45 представляет: Зег, Н1$, Рго, Ьуз, Агд, 61у, Суз ИЛИ
νη2 или отсутствует;
Хаа^е представляет: Ηίβ, Зег, Агд, Ьуз, Рго, 61у, Суз, νη2
или отсутствует;
Хаа47 представляет: Н±з, Зег, Агд, Ьуз, Суз, ΝΗ2 или
отсутствует;
Хаа4з представляет: С1у, Н13, Суз, νη2 ИЛИ отсутствует;
Хаа4 & представляет: Рго, И±з, Суз, ΝΗ2 ИЛИ отсутствует;
Хаа50 представляет: Зег, НЬз, Суз, Зег -νη2, , Ηίδ-ΝΗζ, Суе-ИНг
или отсутствует;
- 4 009366 и где 2 или 1 из Сук остатков ковалентно связан(ы) с молекулой ПЭГ, или 3, 2 или 1 из Ьук остатков ковалентно связаны с молекулой ПЭГ, или карбоксиконцевая аминокислота ковалентно связана с молекулой ПЭГ; и при условии, что если Хаа42. Хаа43, Хаа44, Хаа45, Хаа46, Хаа47, Хаа48 или Хаа49 отсутствует, каждая аминокислота справа отсутствует; и при условии, что в молекуле есть 2, 1 или 0 цистеиновых остатков.
Еще одним вариантом осуществления изобретения является ПЭГилированное ГПП-1 соединение, содержащее аминокислотную последовательность формулы IV (8ЕО ΙΌ Νο.: 6)
Хяа7-Хаав-С1и-С1у-Хаац-Хаа12-Т1и’-Бег-Азр-Хаа16-8ег-Хааи-Хаа19Хаа2о-Ши-Хаа22-Хаа23-Хаа24-Хан25-Хаа24’Хаа27-Рйе-11е-Хаазо-Тгр-ЕеиХяАзз-Х&аз4-Хмзз-Хй^5-Х8а$т'Хаа.з£-Хааз9-Хаа4<)-Хзд41-Хшц2*Х*а43*
Формула IV (8ЕО ΙΌ Νο.: 6), где Хаа7 представляет собой: Ь-гистидин, Ό-гистидин, дезаминогистидин, 2-аминогистидин, βгидроксигистидин, гомогистидин, α-фторметилгистидин или α-метилгистидин;
Хаае представляет: А1а, 61у, Уа1, Ьеи, Не, Зег или ТЬг;
Хаац представляет: ТЬг или Суз;
Хаа12 представляет: РЬе, ТгЬ, Туг или Суз;
Хааге представляет: Уа1, Тгр, Не, Ьеи, РЬе , Туг или Суз;
Хаа1в представляет: Зег, Тгр, Туг, РЬе, Ьуз , Не, Ьеи, 7а1;
Хаа19 представляет: Туг, Тгр или РЬе;
Хаа2о представляет: Ьеи, РЬе, Туг или Тгр;
Хаа22 представляет: О1у, С1и, Азр, Ьуз или Суз;
Хаагз представляет: С1п или Суз;
Хаа24 представляет: А1а или Суз;
Хаагз представляет: А1а, Уа1, 11е, Ьеи или Суз;
Хаа2« представляет: Ьуз или Суз;
Хаа27 представляет: С1и, Не, А1а или Суз;
Хаазо представляет: А1а, <31и или Суз;
Хаазз представляет: Уа1 или Не;
Хаа34 представляет: Ьуз, Азр, Агд, 51и или Суз;
Хаазз представляет: С1у или Суз;
Хаазе представляет: С1у, Рго, Агд ИЛИ Суз;
Хааз7 представляет: С1у, Рго, 8ег или Суз;
Хаазе представляет: Зег, Рго, Η13 или Суз;
Хаазэ представляет: Зег, Агд, ТЬг, Тгр, Ьуз или Суз;
Хаа4о представляет: Зег, С1у или Суз
Хаа41 представляет: А1а, Азр, Агд, С1и, Ьуз, С1у или Суз;
Хаа$2 представляет: Рго, А1а, Суз или ΝΗ2 или отсутствует;
Хаа^з представляет: Рго, А1а, Суз, МН7 или отсутствует;
ХаЭ44 представляет: Рго, А1а, Агд, , Ьуз, Ηί3, Суз, ΝΗ2 или
отсутствует;
Хаа45 представляет: Зег, Ηίε, Рго, Ьуз, Агд, Суз или ‘ЗНг или отсутствует;
Хаа4б представляет: ΗΪ3, Зег, Агд, Ьуз, Суз, МН2 или
отсутствует;
Хаа47 представляет: Н1з, Зег, Агд, ьуз, Суз, ΝΗ2 или
отсутствует;
и где 2 или 1 из Сук остатков ковалентно связан(ы) с молекулой ПЭГ, или 3, 2 или 1 из Ьук остатков ковалентно связаны с молекулой ПЭГ, или карбоксиконцевая аминокислота ковалентно связана с молекулой ПЭГ; и при условии, что если Хаа42, Хаа43, Хаа44, Хаа45 или Хаа46 отсутствует, каждая аминокислота
- 5 009366 справа отсутствует; и при условии, что в молекуле есть 2, 1 или 0 цистеиновых остатков.
Еще одним вариантом осуществления изобретения является ПЭГилированное ГИП-1 соединение, содержащее аминокислотную последовательность формулы V ($ЕО ΙΌ Νο.: 7)
Хааг-Хаа«-О1и-Сйу- Хаа1Г Хаа12-'П1г-$ег-Ач>-Хаа|б-8ег-5ет-Туг-Еу8С1и-Хаа2у Хаац- Ха>м- Хаац-РЬе-Пе- Хаазо-Тгр-ЬеиХаазз-Хаам-Хшз1-ХаазбгХааз?-Хз9зг-Хаазг-Хаа«гХаа«гХаа4г>Хаа4]βФормула V ($ЕО ΙΌ Νο.: 7), где Хаа7 представляет собой: Ь-гистидин, Ό-гистидин, дезаминогистидин, 2-аминогистидин, гидроксигистидин, гомогистидин, α-фторметилгистидин или α-метилгистидин;
Хаав представляет: 61у, Уа1, Ьеи, Не, Зег или ТЬг;
Хаац представляет: ТЬг или Суз;
Хаа12 представляет: РЬе или Суз;
Хаазб представляет: Уа1, Тгр, 11е, Ьеи, РЬе, Туг или Суз;
Хаагг представляет: С1у, 61и, Азр, Ьуз или Суз;
Хаагз представляет: С1п или Суз;
Хаа24 представляет: А1а или Суз;
Хаагь представляет: А1а, Уа1, 11е, Ьеи или Суз;
Хааге представляет: Ьуз или Суз;
Хааг7 представляет: С1и или Суз;
Хаазо представляет: А1а или Суз;
Хаазз представляет: Уа1 или 11е;
Хаа34 представляет: Ьуз, Азр, Агд, <31и или Суз;
Хааз5 представляет: С1у или Суз;
Хаазе представляет: С1у, Рго, Агд или Суз;
Хааз? представляет: С1у, Рго, Зег или Суз;
Хаазе представляет: Зег, Рго, ΗΪ3 или Суз;
Хаазз представляет: Зег, Агд, ТЬг, Тгр, Ьуз или Суз;
Хаа4о представляет: Зег, С1у или Суз;
Хаа41 представляет: А1а, Азр, Агд, С1и, Ьуз, С1у или Суз;
Хаа42 представляет: Рго, А1а или Суз;
Хаа« представляет: Рго, А1а или Суз;
Хаа44 представляет: Рго, А1а, Агд, Ьуз, НЬз, Суз, МН7 или
отсутствует;
Хаа45 представляет:
Зег,
ΗΪ3, Рго, Ьуз, Агд, Суз,
ΝΗ2 или отсутствует;
Хаа4в представляет: Н13, Зег, Агд, Ьуз, Суз, ΝΗ2 или
отсутствует; и
Хаа^? представляет: ΗΪ3, Зег, Агд, Ьуз, Суз, ΝΗ2 или
отсутствует;
и где 2 или 1 из Сук остатков ковалентно связан(ы) с молекулой ПЭГ, или 3, 2 или 1 из Ьук остатков ковалентно связаны с молекулой ПЭГ, или карбоксиконцевая аминокислота ковалентно связана с молекулой ПЭГ; и при условии, что если Хаа44, Хаа45, Хаа46 или Хаа47 отсутствует, каждая аминокислота справа отсутствует; и при условии, что в молекуле есть 2, 1 или 0 цистеиновых остатков.
Еще одним вариантом осуществления изобретения является ПЭГилированное ГПП-1 соединение, содержащее аминокислотную последовательность формулы VI ($ЕО ΙΌ Νο.: 8)
- 6 009366
Хаат-ХаагСЬ-С1у-Хаац-Хаа12-Т11г-8вг-А5р-Хаа1б-8ег-8ег-Туг-Ьу8-О1иХаа32-Хаа2з-Хаа24-Хааг5-Хаа2б-Хаа27-РЬс-11е-Хааз(гТгр-Ьеи-Хаа33-Хаа34ХЗДЗ)-ХШЗб-ХЮЗ?-'Х&аМ-Х&аЭ9-ХЭД(гХя841-ХЯЯ*2*ХЭ34}*ХМ44*’Х8&43* Хаа44-Хав47
Формула VI (8ЕЦ ГО N0.: 8), где Хаа7 представляет собой Ь-гистидин, Ό-гистидин, дезаминогистидин, 2-аминогистидин, βгидроксигистидин, гомогистидин, α-фторметилгистидин или α-метилгистидин;
Хаае представляет: С1у, Уа1, Ьеи, 11е, Зег или ТЬг;
Хаац представляет: ТЬг ИЛИ Суз;
Ха312 представляет: РЬе или Суз;
Хаа1б представляет: Уа1 или Суз;
Хаа22 представляет: С1у С1и, Азр, Ьуз ИЛИ Суз;
Хаа22 представляет: 61п ИЛИ Суз;
Хаа2< представляет: А1а или Суз;
Хаа25 представляет: А1а Уа1, Не, Ьеи или Суз;
Хааге представляет: Ьуз или Суз;
Хаагг представляет: С1и или Суз;
Хаазо представляет: А1а или Суз;
Хаазз представляет: Уа1 или Не;
Хааэ4 представляет: Ьуз или Суз;
Хаазз представляет: С1у или Суз;
Хаазе представляет: С1у или Суз;
Хааз? представляет: Рго ИЛИ Суз;
Хаазе представляет: Зег, Рго, ΗΪ5 или Суз
Хаазз представляет: Зег, Агд, ТЬг, Тгр, Ьуз или Суз;
Хаа«о представляет: Зег, С1у или Суз;
Хаа41 представляет: А1а, Азр, Агд, СЬи, Ьуз, 61у или Суз;
Хаа42 представляет: Рго, А1а или Суз;
Хаалз представляет: Рго, А1а или Сув;
Хаа44 представляет: Рго, А1а, Агд, Ьуз, Н1з, Суз, ΝΗ2 или
отсутствует;
Хав45 представляет: Зег, НЬз, Рго, Ьуз, Агд, Суз или νη2
или отсутствует;
Хаадб представляет: Шз , Зег, Агд, Ьуз, Суз, νη2 или
отсутствует; и
Хаа47 представляет: Н1з , Зег, Агд, Ьуз, Суз, νη2 или
отсутствует;
и где 2 или 1 из Сук остатков ковалентно связан(ы) с молекулой ПЭГ, или 3, 2 или 1 из Ьук остатков ковалентно связаны с молекулой ПЭГ, или карбоксиконцевая аминокислота ковалентно связана с молекулой ПЭГ; и при условии, что если Хаа44, Хаа45, Хаа46 или Хаа4- отсутствует, каждая аминокислота справа отсутствует; и при условии, что в молекуле есть 2, 1 или 0 цистеиновых остатков.
Еще одним вариантом осуществления изобретения является ПЭГилированное ГПП-1 соединение, содержащее аминокислотную последовательность формулы VII (8ЕЦ ГО N0.: 9)
Нк-А1а-С1и-С1у-ТЪг-Р11е-ТЬг-!5ег-А8р-Уа1-!?ег-5;вг-Туг-Е«1-<71и-С1у.С1п-А1аА1а-ЬуБ-О1и-РЪе-Пе-А1а-Т1р-Ьеи>Уа1-Ьу»<О1уЧЭ1у-Рго-Ха1И|-Ха^г%1АюХащ, -Хаа42-Хаа4}>Хаа|И-Хаа4$-Хйам>Хаа47-Хаа|Г-Хаа49-ХаДя>
Формула VII (8ЕЦ ГО N0.: 9), где
- 7 009366
Хаап представляет: ТЬг ИЛИ Суз
Хаа1? представляет: РЬе или Суз
Хааге представляет; Уа1 или Суз
Хаагг представляет: 61 у или Суз
Хаагз представляет: 61п ИЛИ Суз;
Хаа24 представляет: А1а или Суз;
Хаагз представляет: А1а или Суз;
Хаагб представляет: Ьуз или Суз;
Хаа2т представляет: 61и или Суз;
Хаазо представляет: А1а или Суз ;
Хаа34 представляет: Ьуз или Суз ;
Хаа33 представляет: 61у или Суз;
Хаазе представляет: 61 у или Суз;
Хааз7 представляет: Рго или Суз;
Хаазе представляет: Зег, Рго, Ηί з или Суз;
Хаазз представляет: Зег, Агд, ТЬг, Тгр, Ьуз или Суз;
Хаа4о представляет: Зег, . С1у или Суз;
Хаа41 представляет: А1а, Азр, Агд, С1и, Ьуз, С1у или Суз;
Хаа42 представляет: Рго, . А1а, Суз или КНг или отсутствует;
Хаа43 представляет: Рго, А1а, Суз, ΝΗ2 или отсутствует;
Хаа44 представляет: Рго , А1 а, Агд Ьуз, ΗΪ3 , Суз, ΝΗ2 или
отсутствует;
Хаа45 представляет: Зег, Нхз, Рго, Ьуз, Агд, Суз или ΝΗ2 или отсутствует;
Хаа4б представляет: Нхз, Зег, Агд, Ьуз, Рго, С1у, Суз, НН2 или отсутствует;
Хаа4? представляет: Нхз, Зег, Агд, Ьуз, Суз, ИН2 или отсутствует;
Хаа4в представляет: 61у, Нхз, Суз, ΝΗ2 или отсутствует;
Хаа44 представляет: Рго, Нхз, Суз, НН: или отсутствует; и
Хаайо представляет: Зег, Нхз, Суз, Зег-ИНг, Нхз-ЫН2, Суз-ИН2 или отсутствует;
и где 2 или 1 из Сук остатков ковалентно связан(ы) с молекулой ПЭГ, или 3, 2 или 1 из Ьук остатков ковалентно связаны с молекулой ПЭГ, или карбоксиконцевая аминокислота ковалентно связана с молекулой ПЭГ; и при условии, что если Хаа44, Хаа45. Хаа46 или Хаа4- отсутствует, каждая аминокислота справа отсутствует; и при условии, что в молекуле есть 2, 1 или 0 цистеиновых остатков; и при условии, что если Хаад2, Хаа43, Хаа44, Хаа45, Хаа46, Хаа47, Хаа48 или Хаа49 отсутствует, каждая аминокислота справа отсутствует.
Предпочтительные варианты формул Ι-νΙΙ включают соединения Г1П1-1, которые не отличаются от ГПП-1(7-37)ОН или Π111-1(7-36)ΝΗ2 более чем 7 аминокислотами, более чем 6 аминокислотами, более чем 5 аминокислотами, более чем 4 аминокислотами или более чем 3 аминокислотами. Также предпочтительно, чтобы соединения ГПП-1 формул Ι-νΙΙ имели валин или глицин в положении 8 и глутаминовую кислоту в положении 22. Также предпочтительно, чтобы соединения ГПП-1 формул Ι-νΤΙ имели валин или глицин в положении 8 и глутаминовую кислоту в положении 30. Также предпочтительно, чтобы соединения ГПП-1 формул Ι-νΙΙ имели валин или глицин в положении 8 и гистидин или цистеин в положении 37. Также предпочтительно, когда соединения ГПП-1 формул Ι-νΙΙ имеют 2 остатка или 1 остаток или 0 остатков цистеина. Также предпочтительно, когда присутствует одна молекула ПЭГ на соединение ГПП-1.
Еще одним вариантом осуществления изобретения является ПЭГилированное Г1П1-1 соединение, содержащее аминокислотную последовательность формулы VIII (8ЕО ΙΌ Νο.: 10)
Хяа7-Хаав-Хаа9-ХаакгХаа1 ^Хаап-Хаяц-Хаак-Хааи-Хяаи-Хаац-Хаа! яХаа^Хааго-Хаяц-Хаяа-Хаагз-Хааи-Хаяи-Хаагб-Хаазт-Хяагг-Хйаг?Хаазо- Хаац -Хаазх-Хаэ35-Хааз4-Хааз5-Хааэф-Хааэт-Хаа.и-Хаа39-Хаа4оХаао-Хаадг-Хааи-Хаац-Хаа^
Формула νΙΙΙ (8ЕЦ ΙΌ Νο.: 10), где Хаа7 представляет собой: Ь-гистидин, Ό-гистидин, дезаминогистидин, 2-аминогистидин, β- 8 009366 гидроксигистидин, гомогистидин, α-фторметилгистидин или α-метилгистидин, Агд, Туг, А1а или Уа1; Хаае представляет: С1у, Зег, А1а или ТЬг;
Хааэ представляет: С1и, А1а или Азр;
Хааю представляет: С1у, А1а или Уа1_;
Хаап представляет: ТЬг, Суз или А1а;
Хаа12 представляет: РЬе, Суз, А1а или Туг;
Хаа1з представляет: ТЬг или Зег;
Хаац представляет: Зег, А1а или ГЬг;
Хаагз представляет: Азр или С1и;
Хаа1в представляет: Ьеи, Суз, А1а 11е , Уа1 или Ме
Хаац представляет: 5ег или А1а;
Хаа1в представляет: Ьуз или А1а;
Хаа19 представляет: С1п или А1а;
Хаазо представляет: Мер, А1а, Ьеи , Не или Уа1;
Хаагх представляет: С1и или А1а;
Хаа22 представляет: <31и, Суз или А1а;
Хаагз представляет: С1и, Суз или А1а;
Хааг4 представляет: А1а или Суз;
Хааг5 представляет: Уа1, Суз или А1а;
Хааге представляет: Агд, Суз или А1а;
Хаа27 представляет; Ьеи, Суз или А1а;
Хааге представляет: РЬе, А1а или Туг;
Хаагэ представляет г Не, Уа1, Ьеи , С1у или Мер;
Хаазо представляет: С1и, Суз, А1а ИЛИ Азр;
Хааз1 представляет: Тгр, А1а, РЬе ИЛИ Туг;
Хаазг представляет: Ьеи или А1а;
Хаазз представляет: Ьуз или А1а;
Хааз4 представляет: Азп, Суз или А1а;
Хааз5 представляет: С1у или Суз;
Хаазе представляет: С1у или Суз;
Хааз? представляет: Рго или Суз;
Хаазе представляет: Зег, Суз, ΝΗ2 ИЛИ отсутствует;
Хаазз представляет: Зег, Суз, ИНг ИЛИ отсутствует;
Хаазо представляет: 61у, Суз, ЙНг ИЛИ отсутствует;
Хаап представляет: А1а, Суз, КНг ИЛИ отсутствует;
Хаа4г представляет: Рго, Суз, Ш2 ИЛИ отсутствует;
Хаа^з представляет: Рго, Суз, ΝΗ2 ИЛИ отсутствует;
Хаа44 представляет: Рго, Суз, ЫН2 ИЛИ отсутствует;
Хаад5 представляет: 5ег, Суз, ΝΗ2 ИЛИ отсутствует;
и где 2 или 1 из Сук остатков ковалентно связан(ы) с молекулой ПЭГ, и при условии, что в молекуле есть 2 остатка или 1 остаток цистеина; и, кроме того, при условии, что не более чем три из Хаа9, Хаа10, Хаа11, Хаа12, Хаа14, Хаа15, Хаа1б, Хаа,-. Хаа|8. Хаа19, Хаа20, Хаа21, Хаа22, Хаа2з, Хаа24, Хаа2б, Хаа27, Хаазо, Хаа31, Хаа32 являются А1а; и при условии, также, что если Xаа1 является Ηίκ, Агд или Туг, то по меньшей мере один из Хаа9, Хаа10 и Хаа1б является А1а; и, кроме того, при условии, что если Хаа38, Хаа39, Хаа40, Хаа41, Хаа42, Хаа43 или Хаа44 отсутствует, каждая аминокислота справа отсутствует. В положения 7, 28, 29, 31 и 32 формулы VIII не могут быть помещены цистеиновые аминокислотные остатки без получаемой в результате неприемлемой потери активности.
Полиэтиленгликолевые полимеры, используемые в настоящем изобретении («ПЭГ»), предпочтительно имеют молекулярный вес от 500 до 100000 Да, более предпочтительно от 20000 до 60000 Да, наиболее предпочтительно от 20000 до 40000 Да могут иметь линейные или разветвленные молекулы и могут быть производными полиэтиленгликоля, которые описаны в специальной литературе.
Настоящее изобретение охватывает способ стимуляции рецепторов ГИП-1 у пациента, причем указанный способ включает стадию введения пациенту эффективного количества ПЭГилированного ГПП-1
- 9 009366 соединения, описанного здесь. Настоящее изобретение включает также способ стимуляции рецепторов ГНН-1 у пациента, причем указанный способ включает стадию введения пациенту эффективного количества неПЭГилированного ГНН-1 соединения с последовательностью, которая показана в 8ЕО ΙΌ Νο.: 310, при условии, что в молекуле присутствуют(ет) 2 или 1 Сук. Пациенты, нуждающиеся в стимуляции рецепторов ГПП-1, включают лиц с неинсулинозависимым диабетом, вызванной стрессом гипергликемией, ожирением, нарушениями моторики и опустошения желудка и кишечника, включая, например, синдром раздраженного кишечника и функциональную диспепсию.
Подробное описание изобретения
Глюкагоноподобный пептид 1 (ГНН-1) является пептидом из 37 аминокислот, секретируемым Ьклетками кишечника в ответ на проглатывание пищи. Многочисленные аналоги и производные ГНН-1 были описаны в специальной литературе. В настоящем изобретении описаны модификации соединений ГНН-1, которые дают в результате увеличенные периоды полувыведения и/или сниженный клиренс. Включение 1 или 2 Сук остатков в определенные аминокислотные сайты пептида обеспечивает тиольную группу, с которой может быть ковалентно связан полиэтиленгликоль (НЭГ) или производное НЭГ, давая в результате НЭГилированное соединение ГНН-1. Кроме того, лизиновые остатки или карбоксиконец ГНН-1 пептидов, аналогов или фрагментов по изобретению может быть ковалентно связан с одной или более молекул НЭГ или производного НЭГ, давая в результате молекулу соединения с удлиненным периодом полувыведения и/или сниженным клиренсом.
Г1П1-1(7-37)ОН имеет аминокислотную последовательность 8ЕО ΙΌ Νο.:1
В 9 10 11 12 13 14 15 1617
Ηί в-А1а - 01и-б1у-ТЬг- РЬе-ТЬг - 8ег-Аяр-Уа1 - Зег 18 19 20 21 22 23 24 25 26 2728
8ег-Туг-Ьеи-О1и-<31у-(31п-А1а-А1а-Ьуа-С51у-РЬе29 30 31 32 33 34 35 3637
Не-А1а-Тгр-Ьеи-Уа1-Ьув-С1у-Атд-<31у (8ЕС Ш Νο.:1)
Термин «полипептид» или «пептид», который использован здесь, предназначен для обозначения любой структурной формы (например, первичной, вторичной или третичной формы) аминокислотной последовательности, состоящей из более чем 5 аминокислотных остатков, которые могут быть дополнительно модифицированы или немодифицированы (например, ацетилированы, карбоксилированы, фосфорилированы, липидированы или ацилированы). Термин «природный» относится к полипептиду, который имеет аминокислотную последовательность, которая идентична последовательности, обнаруженной в природе. Термин «природный», как предполагается, охватывает аллельные варианты рассматриваемого полипептида.
Термин «аминокислота» используется здесь в его самом широком смысле и включает встречающиеся в природе аминокислоты, а также не встречающиеся в природе аминокислоты, включая варианты и производные аминокислот. Специалист в данной области поймет, принимая во внимание это широкое определение, что упоминание здесь аминокислоты включает, например, встречающиеся в природе протеогенные Ь-аминокислоты; Ό-аминокислоты; химически модифицированные аминокислоты, такие как варианты и производные аминокислот; встречающиеся в природе не протеогенные аминокислоты, такие как норлейцин, β-аланин, орнитин и т.д.; и химически синтезированные соединения, обладающие свойствами, известными, как характерные для аминокислот. Нримеры не встречающихся в природе аминокислот включают α-метиламинокислоты (например, α-метилаланин), Ό-аминокислоты, гистидиноподобные аминокислоты (например, 2-аминогистидин, β-гидроксигистидин, гомогистидин, αфторметилгистидин и α-метилгистидин), аминокислоты, имеющие дополнительный метилен в боковой цепи (гомо-аминокислоты), и аминокислоты, у которых функциональная группа карбоновой кислоты в боковой цепи заменена сульфоновой группой (например, цистеиновая кислота). Нредпочтительно, однако, когда соединения ГНН-1 по изобретению состоят только из природных аминокислот, за исключением специально представленных здесь.
Термин «соединение ГНН-1» в соответствии с описанием включает природный ГНН-1, [Г1П1-1(737)ОН или ГНН-1(7-36)NΗ2], аналоги ГНН-1, производные ГНН-1, биологически активные фрагменты ГНН-1, удлиненный ГНН-1 или аналог или фрагмент удлиненного пептида ГНН-1 (см., например, патентные заявки США серийные №№ 60/346474 и 60/405097), аналоги экзендин-4 и производные экзендин-4, содержащие один остаток или два остатка Сук в определенных положениях пептида, как здесь описано.
Как принято в данной области, аминоконец природного ГНН-1(7-37)ОН был обозначен номером остатка 7, а карбоксиконец номером 37. Другие аминокислоты в полипептиде прономерованы последовательно, как показано в 8ЕО ΙΌ Νο.: 1. Например, в природной молекуле в положении 12 находится фенилаланин, а в положении 22 находится глицин.
«Фрагмент ГНН-1» или «фрагмент соединения ГНН-1» в соответствии с описанием является биоло- 10 009366 гически активным полипептидом, полученным после усечения одной или более из аминокислот на Νконце и/или С-конце соединения ГНН-1. Номенклатура, используемая для описания ГПП-1(7-37)ОН, применяется и к фрагментам ГНН-1. Например, ГПП-1(9-36)ОН означает фрагмент ГПП-1, полученный усечением двух аминокислот на Ν-конце и одной аминокислоты на С-конце. Аминокислоты в этом фрагменте обозначены тем же номером, что и соответствующая аминокислота в ГНП-1(7-37)ОН. Например, Ν-концевая глутаминовая кислота в ГПП-1(9-36)ОН находится в положении 9; положение 12 занято фенилаланином; и положение 22 занято глицином, как и в ГНП-1(7-37)ОН.
ГНП-1 соединения включают аналоги ГНП-1 и аналоги экзендин-4. Для ясности, «аналоги экзендин-4», которые включены в «соединения ГНП-1», всегда имеют один остаток или два остатка Сук. Предпочтительно аналог ГПП-1 имеет аминокислотную последовательность ГПП-1(7-37)ОН или удлиненного пептида ГНН-1, который описан в патентных заявках США серийный № 60/346474, поданной 1 августа 2002 г., или № 60/405097, поданной 21 августа 2002 г., обе озаглавлены «Удлиненные аналоги глюкагоноподобного пептида-1» или его фрагмента, модифицированного так, что 1, 2, 3, 4, 5 или 6 аминокислоты отличаются от аминокислот в соответствующих положениях ГНП-1(7-37)ОН или фрагмента ГНП-1(7-37)ОН, модифицированного так, что 1, 2, 3, 4, 5 или 6 аминокислот отличаются от аминокислоты в соответствующем положении удлиненного пептида ГПП-1. Наиболее предпочтительные аналоги описаны здесь в формулах I, II, III, IV, V, VI и VII. Наиболее предпочтительные аналоги экзендин-4 описаны здесь в формуле VIII.
Термин «ПЭГилированные», когда он касается соединения ГНП-1 по изобретению, относится к соединению ГПП-1, которое химически модифицировано ковалентной связью с одной или более молекул полиэтиленгликоля или его производного. Кроме того, подразумевается, что термин «ПЭГ» относится к полиэтиленгликолю или его производному, которые известны специалистам (см., например, патенты США №№ 5445090, 5900461, 5932462, 6436386, 6448369, 6437025, 6448369, 6495659, 6515100 и 6514491). Предпочтительно в ПЭГилированных соединениях по изобретению ПЭГ (или его производное) ковалентно связаны с одним или более лизиновых или цистеиновых остатков соединения ГПП-1. Наиболее предпочтительно ПЭГ ковалентно связан с одним или более из цистеиновых остатков соединения ГНН-1. Что касается ПЭГилированных аналогов экзендин-4 по изобретению, ПЭГ связан с одним или двумя из цистеиновых остатков, введенных в экзентин-4 и аналог экзендин-4 в положениях, указанных в формуле VIII. По желанию молекулы ПЭГ могут быть связаны с соединением ГНП-1 через линкерную или спейсерную молекулу (см., например, спейсерные молекулы, описанные в патенте США № 6268343).
В номенклатуре, использованной здесь для обозначения соединений ГНН-1, замещающая аминокислота и ее положение показаны с последующим названием исходного пептида. Например, С1и22-ГПП1(7-37)ОН означает соединение ГНН-1, в котором глицин, обычно находящийся в положении 22 ГНП1(7-37)ОН, был заменен глутаминовой кислотой; Vа18С1и22-ГПП-1(7-37)ОН (или ^Е22-ГПП-1(7-37)ОН) означает соединение ГПП-1, в котором аланин, обычно находящийся в положении 8, и глицин, обычно находящийся в положении 22 ГПП-1(7-37)ОН, были заменены валином и глутаминовой кислотой соответственно. Vа18-экзендин-4 означает соединение ГНН-1, в котором серин, обычно находящийся в положении 8 экзендин-4, был заменен валином. Предпочтительно соединения ГПП-1 по изобретению обладают инсулинотропной активностью.
«Инсулинотропная активность» относится к способности стимулировать секрецию инсулина в ответ на повышенные уровни глюкозы, вызывая тем самым поглощение глюкозы клетками и сниженные уровни глюкозы в плазме. Инсулинотропная активность может быть оценена методами, известными специалистам, включая использование экспериментов ίη νίνο и исследований ίη νίίτο, которыми количественно определяют связывающую активность или активацию ГПП-1 рецепторов, например исследования с использованием островковых клеток или клеток инсулиномы, как описано в ЕР 619322, Сейапб, с1 а1., и в патенте США № 5120712 соответственно. Инсулинотропную активность у людей обычно количественно определяют путем измерения уровней инсулина или уровней С-пептида.
В рамках настоящего изобретения используют исследование, сигнализирующее о ГПП-1 рецепторах, для определения того, будет ли ПЭГилированное соединение ГПП-1 по изобретению проявлять инсулинотропную активность ίη νίνο. Инсулинотропная активность является активностью, которую можно использовать для демонстрации того, что ПЭГилированное соединение ГПП-1 является биологически активным.
«Активность ίη νίίτο» в соответствии с настоящим описанием является мерой способности пептида активировать рецепторы ГНН-1 при исследовании на клетках. Активность ίη νίίτο выражается как «ЕС50», которая является эффективной концентрацией соединения, которая дает в результате 50% активность при эксперименте определения ответа на единственную дозу. В рамках настоящего изобретения активность ίη νίίτο определяют, используя флуоресцентное исследование, при котором используют клетки НЕК-293, которые стабильно экспрессируют человеческие ГНП-1 рецепторы. Эти клетки НЕК-293 имеют стабильно интегрированную векторную ДНК, имеющую элемент сАМФ реакции (СКЕ), стимулирующий экспрессию гена β-лактамазы (ВЬАМ).
Взаимодействие соединения ГПП-1 (или агониста) с рецептором инициирует сигнал, который вы- 11 009366 зывает активацию элемента сАМФ реакции и последующую экспрессию β-лактамазы. Субстрат βлактамазы ССГ2/АМ, который испускает флуоресценцию, когда расщепляется β-лактамазой (РапУега ЬЬС), можно затем добавлять к клеткам, которые подверглись воздействию определенного количества агониста ГПП-1 с получением меры активности агониста ГПП-1. Это исследование дополнительно описано 21окатшк е1 а1. (1998) 8с1еисе 279:84-88. Значения ЕС50 для соединений, перечисленных в примере 4, определяли с использованием исследования ВЬАМ, описанного выше. Относительные значения активности ίη νίΐτο можно установить проведением серии опытов с Уа18-ГПП-1 (7-37)ОН или природным ГПП1 в качестве контроля и принимая контроль как стандартное значение для сравнения, равное 100%.
Термин «период полужизни в плазме» относится к сроку, в течение которого половина рассматриваемых молекул циркулирует в плазме до выведения. Альтернативно используемым термином является «период полувыведения». Термин «увеличенный» или «более длительный», используемый в контексте периода полужизни в плазме или периода полувыведения, показывает, что существует статистически значимое увеличение периода полужизни ПЕГилированного соединения ГПП-1 по отношению к показателю для сравниваемой молекулы (например, не ПЭГилированной формы пептида или природного пептида), который определен в сравнимых условиях. Предпочтительно ПЭГилированное соединение ГПП-1 по изобретению имеет период полувыведения, равный по меньшей мере 1 ч, более предпочтительно по меньшей мере 3, 5, 7, 10, 15, 20 ч и наиболее предпочтительно по меньшей мере 24 ч. Период, который представлен здесь в примере 5, является периодом полувыведения; он соответствует концевой 1одлинейной скорости элиминации. Специалисты в данной области поймут, что период полужизни является производным параметром, который зависит как от клиренса, так и от объема распределения.
Клиренс является мерой способности организма выводить лекарственное средство. Так как клиренс уменьшается в результате, например, модификации лекарственного средства, нужно ожидать, что период полужизни увеличится. Однако это обратное отношение является верным только тогда, когда нет изменения в объеме распределения. Подходящее примерное отношение между концевым 1од-линейным полупериодом (ΐ1/2), клиренсом (С) и объемом распределения (V) дается равенством: ΐ1/2 « 0,693 (У/С). Клиренс не показывает, сколько лекарственного средства должно быть удалено, а скорее объем биологической жидкости, такой как кровь или плазма, которая должна быть полностью освобождена от лекарственного средства, чтобы привести к его удалению. Клиренс выражается в виде объема в единицу времени. ПЭГилированные соединения ГПП-1 по изобретению предпочтительно имеют значение клиренса, равное 200 мл/ч/кг или менее, более предпочтительно 180, 150, 120, 100, 80, 60 мл/ч/кг или менее и наиболее предпочтительно 50, 40 или 20 мл/ч/кг или менее (см. пример 5).
В настоящем изобретении аминокислота Сук не может быть включена в положениях 7, 28, 29, 31 или 32 пептидов ГПП-1 или аналога ГПП-1 из-за потери активности получающегося пептида. Предполагается, что все другие остатки могут быть заменены цистеином, но предпочтительно, чтобы такой цистеин был включен в положении(ях), выбранном(ых) из группы, состоящей из 11, 12, 16, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 30, 34, 35, 36 и 37 пептидов Г1П1-1 или аналога ГПП-1, с предпочтительно не более чем 2 или 1 аминокислотами(ой) Сук на молекулу. Когда Сук аминокислоты присутствуют в молекуле ГПП-1, еще более предпочтительно, когда они локализованы в положении(ях), выбранных из группы, состоящей из 22, 26, 34, 35, 36 и 37, и еще более предпочтительно, когда они присутствуют в положениях 26 и/или 34. Получающаяся молекула может быть ПЭГилированной по Сук аминокислотам, давая в результате модифицированную молекулу, которая сохраняет всю биологическую активность или ее часть, давая в то же время более длинный период полувыведения, чем период полувыведения пептида с немодифицированной молекулой или чем период полувыведения пептида с природной молекулой. Альтернативно, в настоящем изобретении пептиды ГПП-1 или аналог ГПП-1 могут быть ПЭГилированными по одному, двум или трем из лизиновых остатков в положениях 18, 22 и 26 или по аминокислоте у карбоксильного конца пептида.
Другим вариантом осуществления изобретения являются неПЭГилированные соединения ГПП-1 с последовательностью, которая показана в 8ЕО Ш Νο.: 3-10, при условии, что присутствует(ют) 2 или 1 Сук в молекуле. Открыто, что остатки в определенном положении соединений ГПП-1 могут быть заменены на Сук, и все же биологическая активность сохраняется. Эти неПЭГилированные соединения ГПП1 могут быть промежуточными соединениями, используемыми в процессе получения ПЭГилированных соединений ГПП-1 по изобретению. Эти соединения можно также использовать в качестве терапевтических средств при заболеваниях, когда нет необходимости в удлиненном периоде полувыведения, например синдром раздраженного кишечника.
Когда пептид для использования по изобретению получен и очищен, его модифицируют ковалентным связыванием по меньшей мере одной молекулы ПЭГ с Сук или Ьук остатками или с карбоксиконцевой аминокислотой. Трудно придать нестойким пептидным или белковым молекулам подходящие новые свойства путем связывания с ними полимеров, не вызывая потери их функциональности. Широкий ряд методов описан в литературе по данной специальности для получения ковалентно конъюгированных с ПЭГ, и конкретный метод, использованный в изобретении, не имеет ограничительного характера (в отношении обзорных статей, см. ЯоЬейк, М. е1 а1. АФ'апсеб Эгид ЭеШ'егу Ве\зе\\'к. 54:459-476, 2002). Кар
- 12 009366 боксиконцевое присоединение ПЭГ может быть выполнено посредством ферментативного присоединения с использованием рекомбинантного пептида ГПП-1 в качестве предшественника или альтернативных методов, известных специалистам в данной области и описанных, например, в патенте США № 4343898 или 1п1сгпа1юпа11оигпа1 Рерйбе & Рго1ет Кекеагсй, 43: 127-38, 1994. ПЭГилирование белков может помочь преодолеть многие фармакологические и токсикологические/иммунологические проблемы, связанные с использованием пептидов или белков в качестве терапевтических средств. Однако для любого конкретного пептида точно не известно, будет ли у ПЭГилированной формы пептида значительная потеря биоактивности по сравнению с неПЭГилированной формой пептида.
На биологическую активность ПЭГилированных белков могут влиять такие факторы, как ί) размер молекулы ПЭГ; ίί) конкретные сайты присоединения; ш) степень модификации; ίν) неблагоприятные условия присоединения; ν) используется ли линкер для присоединения, или непосредственно присоединяется полимер; νί) образование опасных сопродуктов; νίί) повреждение, наносимое активированным полимером, или νίίί) способность сохранять заряд. В зависимости от используемой реакции присоединения, модификация цитокинов полимером, в частности, приводила к заметному снижению биологической активности [Егапшк, О.Е., е1 а1., (1998) РЕСукЛюп о£ суЮкшек апб о1йег Шегареибс рго1ешк апб рерПбек: 1йе ипроПапсе о£ Ыо1ощса1 ορίίιηίζηΐίοη о£ соирНпд 1ес11пк|ие5. Ιηίΐ. ί. Нет. 68:1-18].
ПЭГилированные соединения ГПП-1 по изобретению обладают биологической активностью ш νίίτο, которая составляет по меньшей мере 0,5% от активности природного ГПП-1, или более предпочтительно активности Уа18-ГПП-1(7-37)ОН. Более предпочтительно, когда ПЭГилированное соединение ГПП-1 по изобретению имеет биологическую активность ш νίίτο, которая по меньшей мере составляет 1 или 3% от активности природного ГПП-1 или более предпочтительно от активности Уа18-ПП1-1(737)ОН. Такая биологическая активность может быть определена исследованием активности ш νίίτο, которое описано здесь (пример 4), или другим исследованием ГПП-1, известным специалистам. Хотя некоторые ПЭГилированные соединения ГПП-1 по изобретению могут обладать биологической активностью более низкой, чем биологическая активность природного ГПП-1 или Уа18-ГПП-1(7-37)ОН, которая определена количественно конкретным исследованием; это снижение активности компенсируется увеличенным периодом полужизни соединения и/или более низким значения клиренса, и может быть даже благоприятной характеристикой для соединения ГПП-1 с увеличенным периодом полувыведения.
Дополнительно ожидается, что положения пептида ГПП-1, в которые, как было обнаружено, цистеиновый остаток помещается без потери биологической активности, могут быть замещены цистеином в аналогичном положении экзендин-4, и это дает в результате аналог экзендин-4, еще способный к связыванию с рецепторами ГПП-1. Предпочтительно присутствует не более 2 или 1 Сук аминокислот(ы) на аналог экзендин-4 по изобретению. Предпочтительно Сук, которые существуют в молекуле, находятся в положениях, выбранных из группы, состоящей из положений 11, 12, 16, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 30, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43 и 44 (см. формулу VIII); предпочтительно в положениях, выбранных из группы, состоящей из положений 22, 26, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43 и 44; еще более предпочтительно положения 26 и/или 34. Сук аминокислоты, присутствующие в молекуле, ковалентно соединяются с молекулой ПЭГ, давая в результате ПЭГилированный аналог экзендин-4 с более длинным периодом полувыведения, чем период полувыведения природного экзендин-4. Предпочтительно пептид, ПЭГилированный аналог экзендин-4 (который описан в формуле VIII) по изобретению обладает биологической активностью, которая составляет по меньшей мере 0,5, 1,0, 3, 10, 30 или 50% от активности неПЭГилированного аналога экзендин-4.
Последовательность экзендин-4 дикого типа представляет собой: НСЕСТЕТ80Е8КОМЕЕЕЛУКЕΕΊΕ^ΕΚΝΟΟΡδδΟΑΡΡδ (8ЕЦ II) Νο.: 11).
В его типичной форме ПЭГ является линейным полимером с концевыми гидроксильными группами и имеет формулу НО-СН2СН2-(СН2СН2О)п-СН2СН2-ОН, где п равно от примерно 8 до примерно 4000. Концевой водород может быть замещен защитной группой, такой как алкильная или алканоильная группа. Предпочтительно ПЭГ имеет по меньшей мере одну гидроксильную группу, более предпочтительно, когда она является концевой гидроксильной группой. Она является той гидроксильной группой, которая предпочтительно активирована для того, чтобы реагировать с пептидом. Существует много форм ПЭГ, пригодных для изобретения. Существуют многочисленные производные ПЭГ, известные специалистам и пригодные для использования в настоящем изобретении. (См., например, патенты США №№ 5445090, 5900461, 5932462, 6436386, 6448369, 6437025, 6448369, 6495659, 6515100 и 6514491 и 2аБркку,8. Вюсоп.щда1е Сйет. 6:150-165, 1995). Не предполагается, что молекула ПЭГ, ковалентно связанная с соединениями ГПП-1 в настоящем изобретении, ограничивается конкретным типом. Молекулярный вес ПЭГ предпочтительно составляет 500-100000 Да и более предпочтительно 20000-60000 Да и наиболее предпочтительно от 20000 до 40000 Да. ПЭГ может иметь линейные или разветвленные молекулы, и ПЭГилированные соединения по изобретению могут иметь 1, 2, 3, 4, 5 или 6 молекул ПЭГ, связанных с пептидом. Наиболее предпочтительно, чтобы присутствовала одна молекула ПЭГ на молекулу ПЭГилированного соединения ГПП-1; однако, когда присутствует больше молекул ПЭГ на молекулу пептида, предпочтительно, чтобы их было не более шести. Кроме того, предполагается, что оба конца молекулы ПЭГ могут быть гомо- или йего1у-функционализированы для перекрестного связывания двух или более ГПП-1
- 13 009366 соединений вместе.
Настоящее изобретение относится к ПП1-1 соединениям с одной или более молекул ПЭГ, ковалентно с ними связанными. Один из способов получения ПЭГилированных соединений ГПП-1 по изобретению включает использование ПЭГ -малеимида для непосредственного связывания ПЭГ с тиольной группой пептида. Введение тиольной функциональной группы может быть достигнуто присоединением к пептиду или вставкой Сук в пептид остатка в положения, описанные выше. Тиольная функциональная группа также может быть введена в боковую цепь пептида (например, ацилирование ε-аминогруппы тиолсодержащей кислоты. При способе ПЭГилирования по изобретению используется присоединение Мишеля для образования стабильного тиоэфирного линкера. Реакция является высокоспецифичной и происходит в мягких условиях в присутствии других функциональных групп. ПЭГ-малеимид использовали в качестве реактивного полимера для получения четко определенных биологически активных ПЭГпротеиновых конъюгатов. Предпочтительно, когда по данной методике используют молярный избыток тиолосодержащего ГПП-1 соединения по отношению к малеимиду ПЭГ, чтобы довести реакцию до завершения. Реакции предпочтительно производят при рН от 4,0 до 9,0 при комнатной температуре в течение от 15 до 40 ч. Избыток неПЭГилированного тиолосодержащего пептида легко отделяют от ПЭГилированного продукта обычными методами разделения. Примерные условия для ПЭГилирования ГПП-1 соединений представлены в примере 1. ПЭГилирование цистеина может быть выполнено с использованием малеимида ПЭГ или малеимида ПЭГ с бифуркацией.
Соединения ПП1-1 обладают разной биологической активностью. Например, ГПП-1, как было обнаружено, стимулирует выделение инсулина, вызывая тем самым поглощение глюкозы клетками и сниженные уровни глюкозы в сыворотке [см., например, Μο_)5ον, 8., (1992) Ιηΐ. Рерйбе Рго1еш Векеатсй, 40:333]. ГПП-1 является особенно многообещающим в качестве средства для лечения неинсулинозависимого сахарного диабета (НИЗСД), так как при нем присутствует риск гипогликемии, которая проявляется при лечении НИЗСД. Предполагается также, что ПП1-1 будет средством для лечения ожирения при синдроме раздраженного кишечника и функциональной диспепсии.
Предполагается, что использование ПЭГилированного соединения ГПП-1 по изобретению включает использование при производстве лекарственного препарата для лечения неинсулинозависимого сахарного диабета, ожирения, инсульта, инфаркта миокарда, синдрома раздраженного кишечника или функциональной диспепсии. ПЭГилирование соединения ГПП-1 может сочетаться с другими модификациями, известными специалистам в данной области, для увеличения периода полужизни ПП1-1 (см., например, патентные заявки США с серийными номерами: 60/346474, поданная 1 августа 2002 г. и 60/405097, поданная 21 августа 2002 г.) и тем самым еще дополнительно увеличивать период полужизни соединения по сравнению с одним ПЭГилированием или другими модификациями метода по отдельности.
В соответствии с описанием термин «соединение ГПП-1» включает также фармацевтически приемлемые соли соединений, описанных здесь. ГПП-1 соединение по изобретению может иметь группы с достаточной кислотностью, достаточными основными свойствами, или обе функциональные группы, и соответственно может реагировать с любым соединением из числа неорганических оснований и неорганических и органических кислот с образованием соли. Кислоты, обычно используемые для образования солей присоединения с кислотой, являются неорганическими кислотами, такими как соляная кислота, бромисто-водородная кислота, йодисто-водородная кислота, серная кислота, фосфорная кислота и тому подобное, и органическими кислотами, такими как п-толуолсульфоновая кислота, метансульфоновая кислота, щавелевая кислота, п-бромфенилсульфоновая кислота, угольная кислота, янтарная кислота, лимонная кислота, бензойная кислота, уксусная кислота и тому подобное. Примеры таких солей включают сульфат, пиросульфат, бисульфат, сульфит, бисульфит, фосфат, моногидрофосфат, дигидрофосфат, метафосфат, пирофосфат, хлорид, бромид, йодид, ацетат, пропионат, деканоат, каприлат, акрилат, формиат, изобутират, капроат, гептаноат, пропиолат, оксалат, малонат, сукцинат, суберат, себакат, фумарат, малеат, бутин-1,4-диоат, гексин-1,6-диоат, бензоат, хлорбензоат, метилбензоат, динитробензоат, гидроксибензоат, метоксибензоат, фталат, сульфонат, ксилолсульфонат, фенилацетат, фенилпропионат, фенилбутират, цитрат, лактат, γ-гидроксибутират, гликолят, тартрат, метансульфонат, пропансульфонат, нафтален-1-сульфонат, нафтален-2-сульфонат, манделат и тому подобное.
Соли присоединения с основанием включают соли, которые получают с неорганическими основаниями, такими как гидроксиды аммония или щелочных или щелочно-земельных металлов, карбонаты бикарбонаты и тому подобное. Такие основания пригодны для получения солей по изобретению и, таким образом, включают гидроксид натрия, гидроксид калия, гидроксид аммония, карбонат калия и тому подобное.
ПЭГилированные соединения ГПП-1 по изобретению особенно подходят для парентерального введения, они могут также доставляться перорально, путем назального введения или путем ингаляции. Парентеральное введение может включать, например, системное введение, например, путем внутримышечной, внутривенной, подкожной или внутрибрюшинной инъекции.
ПЭГилированные ГПП-1 соединения можно вводить пациенту в сочетании с приемлемым фарма
- 14 009366 цевтическим носителем, разбавителем или эксципиентом в виде части фармацевтической композиции для лечения заболеваний, обсужденных выше. Фармацевтическая композиция может быть раствором или, если вводится парентерально, суспензией соединения ГНН-1 или суспензией соединения ГНН-1 в виде комплекса с катионом двухвалентного металла, такого как цинк. Нодходящие фармацевтические носители могут содержать инертные ингредиенты, которые не взаимодействуют с пептидом или пептидным производным. Можно использовать стандартные фармацевтические методы изготовления лекарственных препаратов, такие, которые описаны в Κ^ώη^ΐοη'δ Рйагтасеи11са1 Баевее^. Маск РиЬНьЫнд ί,’οιηрану. ΕηδΙοη, РА. Нодходящие фармацевтические носители для парентерального введения включают, например, стерильную воду, физиологический раствор, бактериостатический физиологический раствор, бактериостатический раствор (физиологический раствор, содержащий примерно 0,9% мг/мл бензилового спирта), фосфатно-буферный физиологический раствор, раствор Хенкса, лактат Рингера и тому подобное. Некоторые примеры подходящих наполнителей включают лактозу, декстрозу, сахарозу, трегалозу, сорбит и маннит.
С НЭГилированными соединениями по изобретению могут быть изготовлены препараты для такого введения, что уровни в плазме крови поддерживаются в эффективном интервале в течение увеличенных периодов времени. Основным препятствием для эффективной доставки пептидного лекарственного средства путем перорального введения является плохая биодоступность из-за разложения пептидов кислотами и ферментами, плохое всасывание через эпителиальные мембраны и переход пептидов в нерастворимую форму после воздействия окружающей среды с кислым рН в пищеварительном тракте. Системы для пероральной доставки пептидов, такие как осуществляемые по изобретению, известны специалистам. Например, НЭГилированные ГНН-1 соединения могут быть инкапсулированы с использованием микросфер, а затем доставляться перорально. Например, НЭГилированные соединения ГНН-1 могут быть инкапсулированы в микросферы, состоящие из доступного для приобретения, биологически совместимого, биоразлагаемого полимера, поли(лактид-со-гликолид)-СООН и оливкового масла в качестве наполнителя. См. Ιο^ρΓ, е1 а1. (2000) ОхаЬеФкдха 43:1319-1328. Доступны для приобретения также и микросферы других типов технологии, такие как МеЛ^тЬ® и Рго1еа8е®, биоразлагаемые полимеры от А1кегте§. Нолимеры МеЛ^тЬ® могут быть получены с любым из лактидных изомеров. Отношения лактид:гликолид могут меняться в пределах от 0:100 до 100:0, что дает возможность получения полимеров с широким разнообразием свойств. Это дает возможность создания систем доставки и имплантируемых лекарственных форм с временем ресорбции, находящемся в интервале от недель до месяцев. Еткрйеге также опубликовала многочисленные статьи с обсуждением технологии пероральной доставки для пептидов и белков. Например, см. \УО 9528838, Εόοικ-^-κ е1 а1., где описаны специфические носители для модифицированных аминокислот для облегчения всасывания.
НЭГилированные соединения ГНН-1, описанные здесь, можно использовать для лечения пациентов с заболеваниями из широкого ряда заболеваний и патологических состояний. НЭГ илированные соединения ГНН-1, охватываемые настоящим изобретением, проявляют свои биологические эффекты путем воздействия на рецепторы, называемые «ГНН-1 (СЬР-1) рецепторами» (см. Όί11οη е1 а1. (1993) ΕΊοηίηβ аиб ΕιιηΗίοηη1 ΕχρίΌδδίοη οί Нитап 61исадοη-1^ке РерЦбе-1 (СЬР-1) Кесеркг, Епάοс^тο1οду, 133:1907-1910). Нациентов с заболеваниями и/или патологическими состояниями, которые благоприятно реагируют на стимуляцию рецепторов ГНН-1 или на введение соединений ГНН-1, можно поэтому лечить НЭГилированными соединениями по изобретению. Эти пациенты, как говорят, «нуждаются в лечении соединениями ГНН-1» или «нуждаются в стимуляции рецепторов ГНН-1».
Сюда включаются пациенты с неинсулинозависимым диабетом, инсулинозависимым диабетом, инсультом (см. XV О 00/16797, Е1сп6ю), инфарктом миокарда (см. \УО 98/08531, Е1сп61с), ожирением (см., XV О 98/19698, Е1сп61с), катаболическими изменениями после хирургической операции (патент США № 6006753, Е1сп6ю), функциональной диспепсией и синдромом раздраженного кишечника (см. XVО 99/64060, Е1сп6ю). Сюда также включаются пациенты, нуждающиеся в профилактическом лечении соединением ГНН-1, например пациенты с риском развития неинсулинозависимого диабета (см. VО 00/07617). Дополнительно к пациентам относят пациентов с нарушенной толерантностью к глюкозе или с нарушениями уровней глюкозы натощак, пациентов, масса тела которых примерно на 25% выше нормальной массы тела для лиц данного роста и телосложения, пациентов с частичной панкреоэктомией, пациентов, имеющих одного или более из родителей с неинсулинозависимым диабетом, пациентов, у которых был диабет при беременности, и пациентов, у которых был острый панкреатит или с хроническим панкреатитом, и которые подвергаются риску развития неинсулинозависимого диабета.
НЭГилированные соединения ГНН-1 по изобретению можно использовать для нормализации уровней глюкозы в крови, для профилактики повреждения β-клеток поджелудочной железы, для стимуляции пролиферации β-клеток, стимуляции транскрипции гена инсулина, регуляции в сторону повышения ΙΌΧ1/ΓΌΧ-1 и других факторов роста, улучшения функции β-клеток, активации спящих β-клеток, дифференцировки клеток в β-клетки, стимуляции репликации β-клеток, подавления апоптоза β-клеток, регуляции массы тела и стимуляции потери массы тела.
«Эффективное количество» НЭГилированного соединения ГНН-1 представляет собой количество,
- 15 009366 которое приводит к желаемому терапевтическому и/или профилактическому эффекту, не вызывая неприемлемых побочных эффектов при введении пациенту, нуждающемуся в стимуляции рецепторов ГНН-1. «Желаемый терапевтический эффект» включает одно или более из следующего: 1) улучшение по симптому(ам), связанному(ым) с заболеванием или патологическим состоянием; 2) задержка начала симптомов, связанных с заболеванием или патологическим состоянием; 3) увеличение продолжительности жизни по сравнению с отсутствием лечения и 4) улучшение качества жизни по сравнению с отсутствием лечения. Например, «эффективным количеством» ПЭГилированного соединения ГНН-1 для лечения диабета является количество, которое должно привести к большей регуляции концентрации глюкозы в крови, чем при отсутствии лечения, приводя тем самым к задержке начала осложнений диабета, таких как ретинопатия, нейропатия и заболевание почек. «Эффективным количеством» ПЭГилированного соединения ГПП-1 для профилактики диабета является количество, которое должно отдалять по сравнению с отсутствием лечения начало повышенных уровней глюкозы в крови, которые требуют лечения антигипогликемическими лекарственными препаратами, такими как сульфонилмочевины, тиазолидиндионы, инсулин и/или бисгуанидины.
«Эффективное количество» ПЭГилированного соединения ГНН-1, вводимого пациенту, будет также зависеть от типа и тяжести заболевания и от таких характеристик пациента, как общее состояние здоровья, возраст, пол, масса тела и толерантность к лекарственным средствам. Обычно ПЭГилированные соединения ГПП-1 по изобретению будет вводиться так, чтобы уровни в плазме находились в интервале от примерно 5 до примерно 200 пмоль/л. Оптимальные уровни в плазме для Уа1§-ГПП-1(7-37)ОН, как определено, находятся между 30 и примерно 200 пмоль/л.
Обычный интервал дозирования для ПЭГилированных соединений ГПП-1 по изобретению будет находиться в промежутке от примерно 0,01 до примерно 1000 мг в сутки для взрослого. Предпочтительно дозировка колеблется в пределах от примерно 0,1 до примерно 100 мг в сутки, более предпочтительно от примерно 1,0 до примерно 10 мг/сутки.
«Пациент» является млекопитающим, предпочтительно человеком, но может быть также и животным, таким как, например, животные-компаньоны (например, собаки, кошки и им подобные), сельскохозяйственные животные (например, коровы, овцы, свиньи, лошади и им подобные) и лабораторные животные (например, крысы, мыши, морские свинки и им подобные).
Пептиды, используемые для получения ПЭГилированных соединений ГПП-1 по изобретению, могут быть получены путем применения стандартных методов и методик синтеза пептидов в фазе раствора или твердой фазе. Синтезаторы пептидов можно приобрести, например, у Аррйеб ВюзуЦепъ в Ро81ег Сйу СА. Реагенты для твердофазного синтеза пептидов можно приобрести, например, у Μίά\\Ό8ΐ Вю1есй (Р18Йег8, ΙΝ). Синтезаторы пептидов для твердофазного синтеза можно использовать в соответствии с инструкциями производителя для блокирования препятствующих групп, защиты аминокислот, которые должны прореагировать, соединения, разъединения и кеппирования непрореагировавших аминокислот.
Обычно, защищенную α-Ν-карбамоилом аминокислоту и Ν-концевую аминокислоту наращиваемой пептидной цепи на смоле соединяют при комнатной температуре в инертном растворителе, таком как диметилформамид, Ν-метилпирролидинон или дихлорметан, в присутствии соединяющих средств, таких как дициклогексилкарбодиимид и 1-гидроксибензотриазол и основание, такое как диизопропилэтиламин. α-Ν-карбамоильную защищающую группу удаляют с полученного пептида на смоле, используя такой реагент, как трифторуксусная кислота или пиперидин, и повторяли реакцию присоединения со следующей желательной защищенной по Ν аминокислотой, которую нужно добавить к цепи. Подходящие защищающие амин группы хорошо известны специалистам и описаны, например, у Сгееи алб \Уи18. «Рго1ес11пд Сгоирз ίη Огдашс 8уи1йе518», ίοΐιη \УПеу апб 8оиз, 1991, положения в котором в целом включены сюда в виде ссылки. Примеры включают т-бутилоксикарбонил (т-БОК; ΐ-Вос) и флуоренилметоксикарбонил (ФМОК; Ртос).
Пептиды синтезируют также, используя методы стандартного автоматизированного твердофазного синтеза, используя т-бутоксикарбонил- или флуоренилметоксикарбонил-а-аминокислоты с соответствующей защитой боковой цепи. После завершения синтеза пептиды отщепляют от твердофазного носителя с одновременным удалением защиты боковой цепи, используя стандартные методы с фтористым водородом. Неочищенные пептиды затем дополнительно очищают, используя хроматографию с обращенной фазой на колонках Уубас С18, используя градиенты ацетонитрила в 0,1% трифторуксусной кислоте (ТФК). Чтобы удалить ацетонитрил, пептиды лиофилизируют из раствора, содержащего 0,1% ТФК, ацетонитрил и воду. Чистота может быть подтверждена аналитической хроматографией с обращенной фазой. Идентичность пептидов может быть подтверждена масс-спектрометрией. Пептиды можно солюбилизировать в водных буферах с нейтральным рН.
Настоящее изобретение иллюстрируется следующими примерами, которые не предназначены быть ограничительными каким-либо образом.
- 16 009366
Примеры
Пример 1. ПЭГилирование родственных аналогов ГПП-1.
Реакции ПЭГилирования выполняют в условиях, которые позволяют образование тиоэфирной связи. В частности, рН раствора колеблется в интервале от примерно 4 до 9, а концентрации содержащего тиол пептида колеблются в интервале концентраций от 1 до 10 молярного избыточной концентрации метокси-ПЭГ2-МАЛ. Реакции ПЭГилирования обычно протекают при комнатной температуре. ПЭГилированный пептид ГНП-1 затем выделяют, используя ВЭЖХ с обращенной фазой или хроматографию исключения по размеру (ХИР; 8ЕС). ПЭГилированные аналоги ГНП-1 охарактеризуют, используя аналитические ОФ-ВЭЖХ (КР-НРЬС), ВЭЖХ-ХИР, ДСН-ПАГЭ (8Ό8-ΡΑ6Ε) и/или МА1.1Э! массспектрометрию.
Тиолосодержащие ГПП-1 пептиды приводят во взаимодействие с 40 кДа полиэтиленгликольмалеимидом (ПЭГ-мелеимида) с получением производных с ПЭГ, ковалентно связанным через тиоэфирную связь. Например, пептид Сех-51-С (^ЕИ^СИПП-1, 45аа длиной; 7,5 мг, 1,8 мкмоль) растворяют в 2 мл 200 мМ фосфатного буфера, содержащего 20 мМ ЭДТА, рН 7,4. Затем раствор продувают аргоном. К этому раствору добавляют 40 мг метокси-ПЭГ2-МАЛ, бифуркированного ПЭГ-малеимида (Εοί# РТ-02В10, 811еаг\\'а1ег ΡοΓτικίΈ. Иче.. НиШкуШе. А1аЬата) (отношение ПЭГ к пептиду 0,55:1 моль/моль). Реакция осуществляется в течение 2 ч. Затем 25 мг ПЭГилированного пептида очищают ОФ-ВЭЖХ, характеристики определяли ВЭЖХ исключения по размеру и испытывают на активность ίη νίίτο.
Пример 2. Реакция 40 кДА ПЭГ-малеимида с аналогами ГПП.
Аналоги ГНН-1, такие как С16Е22У8Г1III и ^С38ГПП, селективно ПЭГилируют по введенному остатку цистеина, используя активированный малеимидом бифуркированный 40 кДа мПЭГ (811еаг\та1ег ΡοΙλτικίΈ, Иче.). Для реакции ПЭГилирования пептид, который нужно ПЭГилировать растворяют в 100 мМ ТРИС при рН 8,0 и добавляют всей массой 1,25-кратный молярный избыток 40 кДа-мПЭГ. Реакционную смесь оставляют при перемешивании при комнатной температуре на 2-3 ч и затем диализируют в течение ночи (мембрана на 7 кДа) против 10 мМ цитрата, 10 мМ фосфата, рН 7,4, при примерно 5°С. Молекулы ПЭГилированного ГНИ очищают анионообменной хроматографией на колонке Μοηο-О (АтеткЬат Вю8с1спсс8 Εοη}., Ρ^ксаίа^ау, N1), используя градиент №1С1 при нейтральном рН.
Пример 3. Реакция ДСФЭ-3,4 кДа-ПЭГ-малеимида с аналогами ГНН-1.
Аналоги ГНН-1, такие как С16Е22У8ГПП-1 и У8С38ГНН-1 селективно ПЭГилируют по введенному остатку цистеина, используя активированный малеимидом 3,4 кДа мПЭГ, имеющий на конце липид, дистеароилфосфатидилэтаноламин (ДСФЭ) (811еаг\та1ег Ρο1уте^к, Шс.). Для реакции ПЭГилирования пептид растворяют в 100 мМ ТРИС буфере при рН 8 и добавляют всей массой 1,25-кратный избыток ДСФЭ-3,4 кДа-ПЭГ-малеимида. Добавляют абсолютный спирт до примерно 17%, чтобы помочь солюбилизации ДСФЭ-3,4 кДа-ПЭГ-малеимида. Реакционную смесь оставляют при перемешивании при комнатной температуре на 2-3 ч и затем диализируют в течение ночи (мембрана на 7 кДа) против 10 мМ цитрата, 10 мМ фосфата, рН 7,4, при примерно 5°С. ПЭГилированный пептид очищают анионообменной хроматографией на колонке Μοηο-О (АтеткЬат Вю8с1спсс8 ΕοΓρ., Ρ^8саιа\νау. N1), используя градиент №1С1 при нейтральном рН.
Пример 4. Определение активности ίη νίίτο.
Клетки НЕК-293, экспрессирующие человеческие ГНП-1 рецепторы с использованием системы РаиУега ЬЬС СКЕ-ВЬАМ, засевают при плотности посева 20000-40000 клеток/лунку/100 мкл среды ЭМЕМ с 10% ФБР (ГВ8) в покрытые поли-ё-лизином 96-луночный черный с прозрачным дном планшет. Через день после посева среду стряхивают и добавляют 80 мкл не содержащей плазмы среды ЭМЕМ. На третий день после посева в каждую лунку добавляют 20 мкл не содержащей плазмы среды ЭМЕМ с 0,5% БСА, содержащей разные концентрации ПЭГилированного соединения ГПП-1, для получения кривой зависимости реакции от дозы. Обычно используют четырнадцать разведений, содержащих от 3 до 30 наномолярного ПЭГилированного пептида для получения кривой зависимости реакции от дозы по которой можно определить значения ЕС50. После 5 ч инкубации с ПЭГилированным пептидом добавляют 20 мкл β-лактамазного субстрата (ССГ2/АМ, РанУега ЬЬС) и инкубацию продолжают в течение 1 ч и после этого срока определяют флюоресценцию на цитофлюориметре. Исследование дополнительно описано у ΣΙοΙ^-ιππΕ, еί а1. (1998), 8с1спсс, 278:84-88. Следующие ПЭГилированные ГШ1-1 пептиды испытывали, как описано, и они имели значения ЕС50, представленные ниже (со значением для У8ГПП-1, равным 100%) ν80ι6-3,4 кДа ЕРЗЕ-ПЭГ 4% ν8-3,4 кДа ПЭГ-ГМОС 87%
У8С38-3, 4 кДа ОРЗЕ-ПЭГ 18% ν8ς38-40 кДа ПЭГ 3%
У8ЕггС1б-40 кДа ПЭГ 0,7%
У8Е221ззС«о-4О кДа ПЭГ (СЕХ-51) 9, 4+/-1,5%[п-5]
Пример 5. Анализ фармакокинетики дериватизированного пептида ГПП-1.
ПЭГилированный аналог ГНП-1 (^Е22!33С45-40 кДа ПЭГ (ПЭГилированный, С45-модифициро
- 17 009366 ванный СЕХ-51)) вводят внутривенным (ВВ) или подкожным (ПК) путями в дозе 0,1 мг/кг самцам крыс 8Ό. У животных (2 крысы на один срок для ВВ, 3 крысы на срок для ПК) брали кровь в разные сроки между 0 и 336 ч после введения дозы. Плазму отбирали из каждого образца и анализировали с помощью радиоиммуноанализа.
Фармакокинетические параметры рассчитывали, используя зависимые от модели (данные ВВ) и независимые от модели (данные ПК) методы (νίηΝοηίίη Рго). Сведения о фармакокинетических параметрах представлены в табл. 1 ниже. При ВВ введении ПЭГилированный аналог ГПП-1 имеет период полувыведения, равный примерно 1,5 дням, тогда как при ПК введении ПЭГилированный аналог ГПП-1 имеет период полувыведения, равный примерно 1,3 дня. Никаких побочных клинических проявлений не было связано с ВВ или ПК введением 0,1 мг/кг У8Е22133С45-40 кДа ПЭГ. Для настоящего соединения наблюдаются пролонгированный период полувыведения, медленный клиренс и относительно высокая биодоступность при подкожном введении (примерно 60%).
Таблица 1
Соединение Пуп. с * (нг/мл) у В (дни) ППКочи' (нг*ч/мл) V (дни) сь/г* (мл/ч/кг) (мл/кг) %Е в
ΆΕ22Ι33Γ45 -40кДа ПЭГ ВВ 1135 0,003 30293 1,5 3,3 161
ПК 187 1-2 18128 1,3 — 256 60
а Максимальная наблюдаемая концентрация в плазме ь Время максимальной наблюдаемой концентрации в плазме с Площадь под кривой зависимости концентрации плазмы от времени, измеряемой от 0 до бесконечности а Период полувыведения в днях е Общий клиренс из организма как функция биодоступности г Объем распределения в стабильном состоянии как функция биодоступности д Процент биодоступности
Когда У8-ГПП(7-37)ОН подобным же образом вводят ВВ крысам Иксйет 344 в дозе 10 мкг/кг, получены сильно отличающиеся значения клиренса и полупериода элиминации, которые перечислены ниже.
Клиренс: 1449 мл/ч/кг
61/2 (час) : 0,05
ПЭГилированный аналог ГПП-1 У8Е22133С45-40 кДа ПЭГ (ПЭГилированный, С45-модифицированный СЕХ-51)) вводят внутривенным (ВВ) или подкожным (ПК) путями в дозе 0,1 мг/кг самцам обезьян цитомольгус. У животных отбирали кровь в разные сроки между 0 и 336 ч после введения дозы. Из каждого образца отбирали плазму и анализировали с помощью радиоиммунного исследования. Фармакокинетические параметры рассчитывали с использованием зависимого от модели (данные для ВВ) и независимого (данные для ПК) методов (νίηΝοηίίη Рго). Сведения о фармакокинетических параметрах представлены в табл. 2 ниже. При ВВ введении ПЭГилированный аналог ГПП-1 имеет период полувыведения, равный примерно 59,5 ч, тогда как при ПК введении ПЭГилированный аналог ГПП-1 имеет период полувыведения, равный примерно 61,6 ч.
Таблица 2
ВВ
Доза (мг/кг) Животное# Г 8 ‘-мах (нг/мл) у 0 1мах (дни) ППК^ (нг*ч/мл) ί|/2° (дни) СЬ (мл/час/кг) ν« (мл/кг)
ОД 100473 1662 1,0 149279 59,5 0,67 57,5
100474 2282 4,0 130341 42,1 0,77 46,6
100477 2672 0,0 215992 76,8 0,46 51,3
Среднее со 2205 1,7 165204 59,5 0,63 51,8
509 2,1 1244991 17,4 0,16 5,5
ПК
Доза (мг/кг) Животное# Смах (нг/мл) т ” 1 мах (дни) ППКо-я (нг*ч/мл) (дни) СЬ/РС (мл/час/кг) ν«/ΡΓ (мл/кг)
0,1 100478 657 72,0 113518 64,4 0,88 81,8
100480 976 48,0 138306 58,8 0,72 61,3
Среднее 817 60,0 125912 61,6 0,80 71,6
а Максимальная наблюдаемая концентрация в плазме ь Время максимальной наблюдаемой концентрации в плазме с Площадь под кривой зависимости концентрации плазмы от времени, измеряемой от 0 до бесконечности а Период полувыведения в днях е Общий клиренс из организма как функция биодоступности г Объем распределения в стабильном состоянии как функция биодоступности
- 18 009366
Пример 6. Фармакодинамический анализ дериватизированного ГПП-1 пептида.
ПЭГилированный аналог ГПП-1 У8Е22133С45-40 кДа ПЭГ (ПЭГилированный, ^-модифицированный СЕХ-51))вводят подкожным (ПК) путем в дозах 3 нмоль/кг (12,33 мг/кг = 0,62 мкг (микрограммов)/50 г мышь) или 10 нмоль/кг (41 мг/кг = 2 мкг (микрограмов)/50 г мышь) самцам мышей С57ВЬ/601аНкб-ЬероЬ при сравнении с введением только носителя в качестве контроля. Животным (6 мышей на один срок) вводят дозы одной инъекцией или ПЭГилированного аналога ГПП-1 или носителя в 11:00. Затем мышей выдерживали голодными в течение ночи и выполняли 1РТСС (1 г декстрозы/кг в/б). Отбирали повторные пробы на глюкозу и инсулин до и после инъекции глюкозы через 15, 30, 60, 90 и 120 мин. Сведения о фармакодинамических параметрах представлены в таблицах ниже.
Глюкоза ППК носитель 3 нмоль ПЭГ 10 нмоль ПЭГ
35965,75 28206 29765
58198,5 34884 22603,5
60381 33291 48125
73320,75 55793,25 54038,25
71703 48422,25 25024,5
72067,5 46707,75 24808,5
Среднее 70272,75 41217,38 34060
Стат. ошибка 4100,657 4346,437 5519,325
Значение р 0,000659 0,000365
Носитель День 0 День 0 День 0
Штамм ИД мыши ГРП Вес Глюкоза Фактическая глюкоза
оЬ/оЬ МК А 49,7 231,4 462,8
оЬ/оЬ М5 А 46,9 260,5 521
оЬ/оЬ М2 А 48,5 206,3 412, 6
оЬ/оЬ ΝΑ А 47,1 209, 6 419,2
оЬ/оЬ N1 А 46,8 180,3 360,6
оЬ/оЬ ΝΚ А 48,7 222 444
Среднее 47,95 436,7
Стат. ошибка 0,48563 21,99944
3 нмоль ГПП-1 ПЭГ
оЬ/оЬ МО С 49,4 187,1 374,2
оЬ/оЬ МР С 45,7 212,8 425,6
оЬ/оЬ МТ С 53,3 253,5 507
оЬ/оЬ ИС С 49,9 226 452
оЬ/оЬ ΝΕ С 50,3 247 4 94
оЬ/оЬ ΝΕ С 49,5 207,7 415,4
Среднее 49,6833 444,7
Стат. ошибка 0,99144 20,46022
10 нмоль ГПП-1 ПЭГ
оЬ/оЬ МЛ Ό 49,3 259 518
оЬ/оЬ мд Ό 47,4 221, 9 443,8
оЬ/оЬ ми ϋ 46, 4 232, 6 465,2
оЬ/оЬ ΜΥ ϋ 48,2 227,6 455,2
оЬ/оЬ ΝΒ Ό 51,5 185,7 371,4
оЬ/оЬ Νϋ ϋ 42, 6 196,5 393
Среднее 47,5667 Стат. ошибка 1,22384 441,1 21,50366
- 19 009366
Носитель Срок 0 Срок 15 Срок 30 Срок 60 Срок 90 Срок 120
ИД мыши Доза Факт. глюкоза Факт. глюкоза Факт* глюкоза Факт* глюкоза Факт* глюкоза Факт* глюкоза
мк 0,0994 124,8 566,7 771, 9 869,1 668,4
М3 0,0938 83, 4 299,1 568, 8 759, 3 204
ΜΖ 0, 097 130,5 468,6 597, 9 609, 3 383,4
ΝΑ 0,0942 247,2 577,2 612,3 623, 4 528, 9 699,3
N1 0,0936 174,6 469,2 628,2 635,4 506, 1 687,6
ΝΚ 0,0974 267 563, 4 649,8 662,7 495 572,4
Среднее 171,25 490,7 638,15 693, 2 510 535,85
Стат. ошибка 29,71165596 43,2838538 28,99511166 41,42960294 9,978476838 82,05989581
нмоль
ГНН-1 НЭГ
МО 0,0988 70,2 206,4 325,2 240, 9 214,2
МР 0,0914 96,6 386,7 408 295,2 196,5
мт 0,1066 84 308,7 369, 6 273, 3 247,2
ыс 0,0998 156 481,2 521,7 532,8 449,1 389,7
ΝΕ 0,1006 158,7 453, 6 531 287,1 258 518,7
ыс 0, 099 83,7 433,5 461,4 378,6 310,5 405,3
Среднее 108,2 378,35 436,15 334,65 339,2 328,6
Стат, ошибка 15,91596683 42,33590084 33,90384197 43,80457168 57,00166664 52,57307296
Значение р 0,074622229 0,127534361 0,012940369 0,004544365 0,073533898 0,021860517
нмоль
ГНН-1 НЭГ
МД 0,0986 91,2 164,4 312,3 290,1 217,8
МЪ 0,0948 68,1 318, 6 285,3 152,1 135
ми 0,0928 114,6 384, 6 489,3 420,3 385,8
ΜΥ 0,0964 186 531, 6 606,3 447,3 347,1 363,3
ΝΒ 0,103 92,4 354 261,6 151,5 117 210, 6
N0 0,0852 90,3 277, 5 272,7 209,4 147,6 147
Среднее 107,1 338,45 371,25 278,45 203, 9 243,25
Стат, ошибка 16,88549674 49,69268055 58,24718448 53,42159208 72,14284441 43,7524685
Значение р 0,049860093 0,06660094 0,013403998 0,002986998 0,040209038 0,018193438
0 15 30 60 90 120
Носитель Среднее 171,25 490,7 638,15 693,2 510 535,85
3 нмоль Среднее 108,2 378,35 436,15 334,65 339,2 328, 6
10 нмоль Среднее 107,1 338,45 371,25 278,45 203,9 243,25
- 20 009366
Носитель Срок 0 Срок 15 Срок 30 Срок 60 Срок 90 Срок 120
ид мыши Доза Факт. инсулин Факт. инсулин Факт, инсулин Факт. инсулин Факт. инсулин Факт, инсулин
мк 0,0994 2,7 2,7 2,7 2,7 3,3
ΜΞ 0,0938 12, 3 3,6 2,7 2,7 6,9
ΜΖ 0,097 2,7 2,7 2,7 2,7 5,1
ΝΑ 0,0942 6,3 2,7 2,7 2,7 3,3 3,6
N1 0,0936 3,3 2,7 2,7 2,7 2,7 3, 3
ΝΚ 0,0974 5,4 2,7 2,7 2,7 3 4,2
Среднее 5,45 2, 85 2,7 2,7 3 4,4
Стат. ошибка 1,498832879 0,15 0 0 0,173205081 0,572712843
нмоль
ГПП-1 ПЭГ
МО 0,0988 4,8 3,6 5,7 4,8 2,7
МР 0,0914 5,7 16,5 12,6 8,7 9,6
МТ 0,1066 5,4 4,5 4,8 СО 2,7
ИС 0,0998 70,8 59, 4 69,9 24,6 32,7 30
ΝΕ 0,1006 27,9 14,7 24,6 11,4 12, 9 25,2
N6 0,099 12,6 13,8 10,8 12 12, 6 19,5
Среднее 21,2 18,75 21,4 11, 65 19,4 14,95
Стат. ошибка 10,54808039 8,42807807 10,1231418 2,793295545 6,650563886 4,764504171
Значение р 0,198202864 0,11819731 0,123985904 0,023885517 0,127758283 0,089610323
нмоль
ГПП-1 ПЭГ
МО 0,0988 4,8 3,6 5,7 4,8 2,7
МР 0,0914 5,7 16,5 12,6 8,7 9,6
мт 0,1066 5,4 4,5 4,8 8,4 2,7
ЫС 0,0998 70, 8 59, 4 69, 9 24, 6 32,7 30
ΝΕ 0,1006 27, 9 14,7 24,6 11,4 12, 9 25,2
N0 0,099 12, 6 13,8 10,8 12 12,6 19,5
Среднее 21,2 18,75 21,4 11,65 19,4 14,95
Стат, ошибка 10,54808039 8,42807807 10,1231418 2,793295545 6,650563886 4,764504171
Значение р 0,198202864 0,11819731 0,123985904 0,023885517 0,127758283 0,089610323
0 15 30 60 90 120
Носитель Среднее 5,45 2,85 2,7 2,7 3 4,4
3 нмоль Среднее 21,2 18,75 21,4 11, 65 19,4 14,95
10 нмоль Среднее 52, 1 49,55 48,75 34,05 26,7 18,75
- 21 009366
Носитель Срок 0 Срок 15 Срок 30 Срок 60 Срок 90 Срок 120
ид мыши Доза Факт. с- пептид Факт. с- пептид Факт. с- пептид Факт, С- пептид Факт. с- лептид Факт. С- пептид
мк 0,0994 2127 1188 1167 1182 2736
М3 0,0938 3243 1875 1992 2709 5643
ΜΖ 0,097 1857 1266 1392 1533 2916
ΝΑ 0,0942 3666 2571 2322 2082 1932 3051
N1 0,0936 2391 2178 1776 2181 2469 3777
ΝΚ 0,0974 2580 2517 2115 2577 2910 4695
Среднее 2644 1932,5 1794 2044 2437 3803
Стат. ошибка 280,3597689 245,7235235 180,3779366 241,5706936 282,7772975 471,6178538
нмоль
ГПП-1 ПЭГ
МО 0,0988 2130 34 92 2613 1989
МР 0,0914 2472 5445 4632 4326 4248
мт 0,1066 2577 2919 2802 4149 3027
ыс 0,0998 9663 10278 6759 7197 9849
ΝΕ 0,1006 6726 5349 6747 3843 9855
N0 0,099 5010 4812 3975 5670 6390 8337
Среднее 5289,6 5155,5 4329,6 4703,4 5810 6217,5
Стат, ошибка 1234,320279 1163,8275 615,6346725 644,8310244 1010,714104 1447,410464
Значение р 0,104283454 0,021669546 0,012956014 0,0101054544 0,095491566 0,15910403
нмоль ГПП-1 ПЭГ
Μσ 0,0986 7200 3501 4296 10332 5901
мь 0,0948 3687 8049 9627 4821
ми 0,0928 5955 6300 7278
ΜΥ 0,0964 16212 17643 13266 12423 11124 11943
ΝΒ 0,103 8139 9174 11262 7170 4362 6954
Νϋ 0,0852 12162 8478 10785 4947 3867 4506
Среднее 8892,5 9369 9256 8718 6451 6900,5
Стат. ошибка 1856,727996 2096,294409 1365,273526 1352,954914 2340,865438 1104,975497
Значение р 0,015654599 0,025508262 0,001556618 0,035883718 0,263009115 0,082555028
0 15 30 60 90 120
Носитель Среднее 2644 1932,5 1794 2044 2437 3803
3 нмоль Среднее 5289,6 5155,5 4329,6 4703,4 5810 6217,5
10 нмоль Среднее 8892,5 9369 9256 8718 6451 6900,5
ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

Claims (9)

  1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
    1. ПЭГилированное соединение ГПП-1, содержащее аминокислотную последовательность формулы IV (8Е0 ΙΌ Νο.: 6)
    Хаа7-Хаа{-СИи-С>1у-Хаа||-Хаа12-Ткг-8ег-А5р-Хла|(|-5ег-Хаа|з-Хаа!9Хаа2о-С1и-Хаа22-Хаа2з-Хаа’4-Хаа25-Хаа2б-Хаа27’Рйе-11е-Хааз(}-Тгр-кеиХаап-Хааз4-Хаа35-Хаазб-Хааз7-Хаазв-Хаа19-Хаа|о-Хаа4|-Хаа42-Хаа41Хаа44-Хаа43-Хаа4б-Хаа47
    Формула IV (8Е0 ГО Νο.: 6), где Хаа7 обозначает Ь-гистидин, Ό-гистидин, дезаминогистидин, 2-аминогистидин, β-гидроксигистидин, гомогистидин, α-фторметилгистидин или α-метилгистидин
    - 22 009366
    Хаа^ обозначает: А1а, С1у, νβΐ, Ьеи, 11е, $ег или ТЬг; Хаац обозначает: ТНг или Суа; Ха а 12 обозначает: РЪе, ТгЬ, Туг или Суа; Хаатб обозначает: Уа1, Тгр, Не, Ьеи, Р11е, Туг или Суз; Хаа^й обозначает: 5ег, Тгр, Туг, РЬе, Ьуа, Не, Ьеи, \/а1 Хаа-. $ обозначает: Туг, Тгр или РЬе; Хаа2о обозначает: Ьеи, РЬе, Туг или Тгр; Хаа;;? обозначает: С1у, С1и, Азр, Ьуа или Суа; Хаааз обозначает: С1п или Суз; Хаа?4 обозначает: А1а или Суз; Хаа25 обозначает: А1а, Уа1, 11е, Ьеи или Суз; Хаагб обозначает: Ьуз или Суз; Хаа27 обозначает: С1и, 11е, А1а или Суз; Хаазо обозначает: А1а, С1и или Суз; Хаа^з обозначает: Уа1 или 11е; Хаа34 обозначает: Ьуз, Азр, Агд, С1и или Суз; Хааз5 обозначает: С1у или Суз; Хаазб обозначает: С1у, Рго, Агд или Суа; Хаа3л обозначает: С1у, Рго, 5ег или Суа; Хаа^е обозначает: 5ег, Рго, НЬа или Суз; Хаа 39 обозначает: Зег, Агд, ТИг, Тгр, Ьуз или Суз; Хаа4о обозначает: Зег, С1у или Суз;
    Хаа41 обозначает: А1а, Аар, Агд, . С1и , Ьуз, С1у или Суз; Хаа42 обозначает: Рго, А1а, Суз или : МНг или отсутствует; Хаап обозначает: Рго, А1а, Суз, νη2 или отсутствует; Хаа44 обозначает: Рго, А1а, Агд, Ьуз , ΗΪ3, Суз, , Ж : или отсутствует; Хаа45 обозначает: 5ег, ΗΪ3, Рго, Ьуз , Агд, Суз ИЛИ ННг или отсутствует; Хаа^ обозначает: Н1з, Зег, Агд, Ьуз , Суз, мн2 или отсутствует Хаа4·; обозначает: ΗΪ5, 5ег, Агд, Ьуз , Суз, ΝΗ? или отсутствует
    и где 2 или 1 из Сук остатков ковалентно связан(ы) с молекулой ПЭГ, или 3, 2 или 1 из Ьук остатков ковалентно связан(ы) с молекулой ПЭГ, и при условии, что, если Хаа42, Хаа43, Хаа44, Хаа45 или Хаа46 отсутствует, каждая последующая кислота справа отсутствует; и при условии, что молекула содержит 2, 1 или 0 Сук.
  2. 2. ПЭГилированное соединение ГПП-1 по п.1, при условии, что ПЭГилированное соединение ГПП1 отличается от ГНП-1(7-37)ОН или Π111-1(7-36)ΝΗ2 не более чем 7 аминокислотами из числа аминокислот 7-37.
  3. 3. ПЭГилированное соединение ГНП-1 по п.1, при условии, что ПЭГилированное соединение ГНП1 отличается от ГНП-1(7-37)ОН или Π111-1(7-36)ΝΗ2 не более чем 6 аминокислотами из числа аминокислот 7-37.
  4. 4. ПЭГилированное соединение ГНП-1 по п.1, при условии, что ПЭГилированное соединение ГНП1 отличается от ГНП-1(7-37)ОН или Π111-1(7-36)ΝΗ2 не более чем 5 аминокислотами из числа аминокислот 7-37.
  5. 5. ПЭГилированное соединение ГНП-1 по п.1, при условии, что ПЭГилированное соединение Г1П11 отличается от ГИП-1(7-37)ОН или Π111-1(7-36)ΝΗ2 не более чем 4 аминокислотами из числа аминокислот 7-37.
  6. 6. ПЭГилированное соединение ГНП-1 по п.1, при условии, что ПЭГилированное соединение Г1П11 отличается от ГПП-1(7-37)ОН или 1Π^1-1(7-36)ΝΗ2 не более чем 3 аминокислотами из числа аминокислот 7-37.
  7. 7. Применение ПЭГилированного соединения ГНП-1 по любому из пп.1-6 в производстве лекарственного средства для лечения неинсулинозависимого диабета, ожирения, инсульта, инфаркта миокарда, синдрома раздраженного кишечника или функциональной диспепсии.
  8. 8. Применение по п.7, в котором лекарственное средство используется для лечения неинсулинозависимого диабета.
  9. 9. Применение по п.7, в котором лекарственное средство используется для лечения ожирения.
EA200501482A 2003-03-19 2004-03-19 Связанные с полиэтиленгликолем соединения гпп-1 EA009366B1 (ru)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US45608103P 2003-03-19 2003-03-19
PCT/US2004/006082 WO2004093823A2 (en) 2003-03-19 2004-03-19 Polyethelene glycol link glp-1 compounds

Publications (2)

Publication Number Publication Date
EA200501482A1 EA200501482A1 (ru) 2006-06-30
EA009366B1 true EA009366B1 (ru) 2007-12-28

Family

ID=33310655

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA200501482A EA009366B1 (ru) 2003-03-19 2004-03-19 Связанные с полиэтиленгликолем соединения гпп-1

Country Status (25)

Country Link
US (1) US7557183B2 (ru)
EP (1) EP1605897B1 (ru)
JP (1) JP2006520818A (ru)
KR (1) KR100733940B1 (ru)
CN (1) CN1832959A (ru)
AU (1) AU2004231461B2 (ru)
BR (1) BRPI0407936A (ru)
CA (1) CA2518336A1 (ru)
CO (1) CO5611157A2 (ru)
CR (1) CR7997A (ru)
CY (1) CY1114035T1 (ru)
DK (1) DK1605897T3 (ru)
EA (1) EA009366B1 (ru)
EC (1) ECSP056025A (ru)
ES (1) ES2390270T3 (ru)
HR (1) HRP20050683A2 (ru)
MX (1) MXPA05009940A (ru)
NO (1) NO20054310L (ru)
NZ (1) NZ541534A (ru)
PL (1) PL1605897T3 (ru)
PT (1) PT1605897E (ru)
SI (1) SI1605897T1 (ru)
UA (1) UA92451C2 (ru)
WO (1) WO2004093823A2 (ru)
ZA (1) ZA200506881B (ru)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US8575097B2 (en) 2009-04-23 2013-11-05 Pegbio Co., Ltd. Exendin variant and conjugate thereof
RU2625015C2 (ru) * 2011-03-30 2017-07-11 Шанхай Бенемае Фармасьютикал Корпорэйшн Сайт-специфически монопегилированные аналоги эксендина и способ их получения

Families Citing this family (114)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AU2004236174B2 (en) 2001-10-10 2011-06-02 Novo Nordisk A/S Glycopegylation methods and proteins/peptides produced by the methods
US7173003B2 (en) 2001-10-10 2007-02-06 Neose Technologies, Inc. Granulocyte colony stimulating factor: remodeling and glycoconjugation of G-CSF
US7157277B2 (en) 2001-11-28 2007-01-02 Neose Technologies, Inc. Factor VIII remodeling and glycoconjugation of Factor VIII
US7214660B2 (en) 2001-10-10 2007-05-08 Neose Technologies, Inc. Erythropoietin: remodeling and glycoconjugation of erythropoietin
US20120225033A1 (en) 2010-11-24 2012-09-06 Durect Corporation Biodegradable Drug Delivery Composition
US8791070B2 (en) 2003-04-09 2014-07-29 Novo Nordisk A/S Glycopegylated factor IX
US9005625B2 (en) 2003-07-25 2015-04-14 Novo Nordisk A/S Antibody toxin conjugates
US20080305992A1 (en) 2003-11-24 2008-12-11 Neose Technologies, Inc. Glycopegylated erythropoietin
US20060040856A1 (en) 2003-12-03 2006-02-23 Neose Technologies, Inc. Glycopegylated factor IX
ATE461217T1 (de) 2003-12-18 2010-04-15 Novo Nordisk As Glp-1-verbindungen
US20080300173A1 (en) 2004-07-13 2008-12-04 Defrees Shawn Branched Peg Remodeling and Glycosylation of Glucagon-Like Peptides-1 [Glp-1]
DK2586456T3 (en) 2004-10-29 2016-03-21 Ratiopharm Gmbh Conversion and glycopegylation of fibroblast growth factor (FGF)
EP1858543B1 (en) 2005-01-10 2013-11-27 BioGeneriX AG Glycopegylated granulocyte colony stimulating factor
TWI376234B (en) 2005-02-01 2012-11-11 Msd Oss Bv Conjugates of a polypeptide and an oligosaccharide
TWI372629B (en) 2005-03-18 2012-09-21 Novo Nordisk As Acylated glp-1 compounds
AU2006224537A1 (en) 2005-03-18 2006-09-21 Novo Nordisk A/S Extended GLP-1 compounds
EP2386571B1 (en) 2005-04-08 2016-06-01 ratiopharm GmbH Compositions and methods for the preparation of protease resistant human growth hormone glycosylation mutants
CA2607566A1 (en) * 2005-05-06 2006-11-16 Bayer Pharmaceuticals Corporation Glucagon-like peptide 1 (glp-1) receptor agonists and their pharmacological methods of use
EP1881850B1 (en) * 2005-05-13 2010-09-29 Eli Lilly And Company Glp-1 pegylated compounds
US20080255026A1 (en) 2005-05-25 2008-10-16 Glycopegylated Factor 1X Glycopegylated Factor Ix
US20070105755A1 (en) 2005-10-26 2007-05-10 Neose Technologies, Inc. One pot desialylation and glycopegylation of therapeutic peptides
KR101057284B1 (ko) * 2005-10-26 2011-08-16 일라이 릴리 앤드 캄파니 선택적 ｖｐａｃ２ 수용체 펩티드 작동제
US20090048440A1 (en) 2005-11-03 2009-02-19 Neose Technologies, Inc. Nucleotide Sugar Purification Using Membranes
CA2913805A1 (en) 2005-11-07 2007-05-18 Indiana University Research And Technology Corporation Glucagon analogs exhibiting physiological solubility and stability
WO2007075534A2 (en) * 2005-12-16 2007-07-05 Nektar Therapeutics Al, Corporation Polymer conjugates of glp-1
US8288339B2 (en) * 2006-04-20 2012-10-16 Amgen Inc. GLP-1 compounds
EP2049144B8 (en) 2006-07-21 2015-02-18 ratiopharm GmbH Glycosylation of peptides via o-linked glycosylation sequences
US20100075375A1 (en) 2006-10-03 2010-03-25 Novo Nordisk A/S Methods for the purification of polypeptide conjugates
CN102827284B (zh) 2006-11-14 2015-07-29 上海仁会生物制药股份有限公司 带有聚乙二醇基团的Exendin或其类似物及其制剂和用途
WO2008076933A2 (en) * 2006-12-14 2008-06-26 Bolder Biotechnology, Inc. Long acting proteins and peptides and methods of making and using the same
RU2477286C2 (ru) * 2007-01-05 2013-03-10 Индиана Юниверсити Рисерч Энд Текнолоджи Корпорейшн АНАЛОГИ ГЛЮКАГОНА, ОБЛАДАЮЩИЕ ПОВЫШЕННОЙ РАСТВОРИМОСТЬЮ В БУФЕРАХ С ФИЗИОЛОГИЧЕСКИМ ЗНАЧЕНИЕМ pH
JP2008169195A (ja) 2007-01-05 2008-07-24 Hanmi Pharmaceutical Co Ltd キャリア物質を用いたインスリン分泌ペプチド薬物結合体
CA2677932A1 (en) 2007-02-15 2008-08-21 Indiana University Research And Technology Corporation Glucagon/glp-1 receptor co-agonists
CN101796063B (zh) 2007-04-03 2017-03-22 拉蒂奥法姆有限责任公司 使用糖聚乙二醇化g‑csf的治疗方法
ES2551123T3 (es) 2007-06-12 2015-11-16 Ratiopharm Gmbh Proceso mejorado para la producción de azúcares de nucleótido
CA2696615A1 (en) 2007-06-19 2008-12-24 Otsuka Chemical Co., Ltd. Oligosaccharide chain added glp-1 peptide
US8895694B2 (en) 2007-09-05 2014-11-25 Novo Nordisk A/S Glucagon-Like Peptide-1 derivatives and their pharmaceutical use
ES2532116T3 (es) 2007-09-05 2015-03-24 Novo Nordisk A/S Péptidos derivados con A-B-C-D y sus usos terapéuticos
CN101842386A (zh) 2007-09-05 2010-09-22 诺沃-诺迪斯克有限公司 截短的glp-1衍生物和它们的治疗用途
EP2214691B1 (en) 2007-10-30 2015-09-30 Indiana University Research and Technology Corporation Compounds exhibiting glucagon antagonist and glp-1 agonist activity
WO2009058662A2 (en) 2007-10-30 2009-05-07 Indiana University Research And Technology Corporation Glucagon antagonists
WO2009099763A1 (en) 2008-01-30 2009-08-13 Indiana University Research And Technology Corporation Ester-based peptide prodrugs
MX2010009154A (es) 2008-02-27 2010-09-09 Novo Nordisk As Moleculas conjugadas del factor viii.
CL2009001424A1 (es) 2008-06-17 2010-04-30 Univ Indiana Res & Tech Corp Peptido tipo glucagon; dimero que comprende dos de dichos peptidos; composicion farmaceutica que lo comprende; y su uso para tratar diabetes o inducir perdida de peso.
EP2300035B1 (en) * 2008-06-17 2015-08-12 Indiana University Research and Technology Corporation Gip-based mixed agonists for treatment of metabolic disorders and obesity
JP5753779B2 (ja) 2008-06-17 2015-07-22 インディアナ ユニバーシティー リサーチ アンド テクノロジー コーポレーションＩｎｄｉａｎａ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ 生理学的ｐＨの緩衝液中で向上した溶解性及び安定性を示すグルカゴン類縁体
IT1392655B1 (it) * 2008-11-20 2012-03-16 Bio Ker S R L Site-specific monoconjugated insulinotropic glp-1 peptides.
CA2747195A1 (en) * 2008-12-19 2010-07-15 Indiana University Research And Technology Corporation Dipeptide linked medicinal agents
JP5789515B2 (ja) 2008-12-19 2015-10-07 インディアナ ユニバーシティー リサーチ アンド テクノロジー コーポレーションＩｎｄｉａｎａ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ インスリン類似体
WO2010071807A1 (en) 2008-12-19 2010-06-24 Indiana University Research And Technology Corporation Amide based glucagon superfamily peptide prodrugs
US8697632B2 (en) 2008-12-19 2014-04-15 Indiana University Research And Technology Corporation Amide based insulin prodrugs
AU2010225523B2 (en) * 2009-03-20 2012-05-24 Hanmi Science Co., Ltd. Method for preparing a site-specific physiologically active polypeptide conjugate
SG176858A1 (en) 2009-06-16 2012-02-28 Univ Indiana Res & Tech Corp Gip receptor-active glucagon compounds
US20120264684A1 (en) 2009-10-30 2012-10-18 Yasuhiro Kajihara Glycosylated Form of Antigenic GLP-1 Analogue
CN104311657B (zh) 2009-12-16 2020-12-08 诺沃—诺迪斯克有限公司 双酰化glp-1衍生物
US8703701B2 (en) 2009-12-18 2014-04-22 Indiana University Research And Technology Corporation Glucagon/GLP-1 receptor co-agonists
AR079345A1 (es) 2009-12-22 2012-01-18 Lilly Co Eli Analogo peptidico de oxintomodulina
AR079344A1 (es) 2009-12-22 2012-01-18 Lilly Co Eli Analogo peptidico de oxintomodulina, composicion farmaceutica que lo comprende y uso para preparar un medicamento util para tratar diabetes no insulinodependiente y/u obesidad
EP2528618A4 (en) 2010-01-27 2015-05-27 Univ Indiana Res & Tech Corp GLUCAGON ANTAGONISTE AND GIP AGONISTS CONJUGATES AND COMPOSITIONS FOR THE TREATMENT OF METABOLISM DISEASES AND ADIPOSITAS
EP2569000B1 (en) 2010-05-13 2017-09-27 Indiana University Research and Technology Corporation Glucagon superfamily peptides exhibiting nuclear hormone receptor activity
JP6050746B2 (ja) 2010-05-13 2016-12-21 インディアナ ユニバーシティー リサーチ アンド テクノロジー コーポレーションIndiana University Research And Technology Corporation Ｇタンパク質共役受容体活性を示すグルカゴンスーパーファミリーのペプチド
RU2557301C2 (ru) * 2010-05-17 2015-07-20 Бетта Фармасьютикалз Ко.,Лтд Новые аналоги глюкагон-подобного пептида, композиция и способ применения
CA2802485C (en) 2010-06-16 2019-09-17 Indiana University Research And Technology Corporation Single chain insulin agonists exhibiting high activity at the insulin receptor
US8946147B2 (en) 2010-06-24 2015-02-03 Indiana University Research And Technology Corporation Amide-based insulin prodrugs
KR20130102470A (ko) 2010-06-24 2013-09-17 인디애나 유니버시티 리서치 앤드 테크놀로지 코퍼레이션 아미드계 글루카곤 슈퍼패밀리 펩티드 프로드러그
CN102397558B (zh) * 2010-09-09 2013-08-14 中国人民解放军军事医学科学院毒物药物研究所 Exendin-4类似物的定位聚乙二醇化修饰物及其用途
WO2012054822A1 (en) 2010-10-22 2012-04-26 Nektar Therapeutics Pharmacologically active polymer-glp-1 conjugates
DK2651398T3 (en) 2010-12-16 2018-03-12 Novo Nordisk As Solid compositions comprising a GLP-1 agonist and a salt of N- (8- (2-hydroxybenzyl) amino) caprylic acid
CN103458920B (zh) 2010-12-22 2016-07-06 印第安那大学科技研究公司 表现出gip受体活性的胰高血糖素类似物
CN102718858B (zh) * 2011-03-29 2014-07-02 天津药物研究院 胰高血糖素样肽-1类似物单体、二聚体及其制备方法与应用
KR101972836B1 (ko) 2011-04-12 2019-04-29 노보 노르디스크 에이/에스 이중 아실화된 ｇｌｐ-1 유도체
CN102180963B (zh) * 2011-04-22 2014-06-25 中国药科大学 胰高血糖素样肽-1(glp-1)类似物及其应用
CN102766204B (zh) * 2011-05-05 2014-10-15 天津药物研究院 胰高血糖素样肽-1突变体多肽及其制备方法和其应用
CN102786590A (zh) * 2011-05-19 2012-11-21 江苏豪森药业股份有限公司 分枝型peg修饰的glp-1类似物及其可药用盐
WO2012177443A2 (en) 2011-06-22 2012-12-27 Indiana University Research And Technology Corporation Glucagon/glp-1 receptor co-agonists
RU2014101697A (ru) 2011-06-22 2015-07-27 Индиана Юниверсити Рисерч Энд Текнолоджи Корпорейшн Коагонисты рецепторов глюкагона/glp-1
CN102321170B (zh) * 2011-09-14 2013-11-13 深圳翰宇药业股份有限公司 利拉鲁肽变构体及其缀合物
MX2014003579A (es) 2011-11-17 2015-04-10 Univ Indiana Res & Tech Corp Peptidos de la superfamilia de glucagon que presentan actividad del receptor de glucocorticoide.
US20140294977A1 (en) 2011-11-23 2014-10-02 Durect Corporation Radiation-Sterilized Biodegradable Drug Delivery Composition
BR112014015156A2 (pt) 2011-12-20 2020-10-27 Indiana University Research And Technology Corporation análogos de insulina à base de ctp, seus métodos de produção e uso no tratamento de hiperglicemia, bem como sequência de ácido nucleico e célula hospedeira
DK2827845T3 (en) 2012-03-22 2019-04-01 Novo Nordisk As COMPOSITIONS INCLUDING A PROCEDURE AND PREPARING THEREOF
RS57727B1 (sr) 2012-03-22 2018-12-31 Novo Nordisk As Kompozicije glp-1 peptida i njihovo dobijanje
CN112142855A (zh) 2012-05-18 2020-12-29 爱德迪安（北京）生物技术有限公司 用于糖尿病治疗的蛋白、蛋白缀合物及其应用
CN104487056A (zh) 2012-06-20 2015-04-01 诺和诺德A/S（股份有限公司） 包含肽和递送剂的片剂制剂
RU2015101697A (ru) 2012-06-21 2016-08-10 Индиана Юниверсити Рисерч Энд Текнолоджи Корпорейшн Аналоги глюкагона, обладающие активностью рецептора gip
WO2014052451A2 (en) 2012-09-26 2014-04-03 Indiana University Research And Technology Corporation Insulin analog dimers
CN103087179A (zh) * 2012-11-30 2013-05-08 中国药科大学 长效化胰高血糖素样肽-1(glp-1)类似物及其应用
CN103087175A (zh) * 2012-11-30 2013-05-08 中国药科大学 新型长效化胰高血糖素样肽-1(glp-1)类似物及其应用
CN103087176A (zh) * 2012-11-30 2013-05-08 中国药科大学 长效化胰高血糖素样肽-1(glp-1)类似物及其应用
CN103087177A (zh) * 2012-11-30 2013-05-08 中国药科大学 一类长效化胰高血糖素样肽-1(glp-1)类似物及其应用
CN103087178A (zh) * 2012-11-30 2013-05-08 中国药科大学 长效化胰高血糖素样肽-1(glp-1)类似物及其应用
KR20150131213A (ko) 2013-03-14 2015-11-24 인디애나 유니버시티 리서치 앤드 테크놀로지 코퍼레이션 인슐린-인크레틴 접합체들
CA2915922A1 (en) 2013-06-20 2014-12-24 Novo Nordisk A/S Glp-1 derivatives and uses thereof
KR20160029079A (ko) 2013-07-04 2016-03-14 노보 노르디스크 에이/에스 Glp-1 유사 펩티드의 유도체 및 그것의 사용
WO2015081891A1 (en) 2013-12-06 2015-06-11 Baikang (Suzhou) Co., Ltd Bioreversable promoieties for nitrogen-containing and hydroxyl-containing drugs
WO2015088990A1 (en) 2013-12-09 2015-06-18 Durect Corporation Pharmaceutically active agent complexes, polymer complexes, and compositions and methods involving the same
JP6701208B2 (ja) 2014-09-24 2020-05-27 インディアナ ユニヴァーシティ リサーチ アンド テクノロジー コーポレイション 脂質化アミド系インスリンプロドラッグ
EP3206710B1 (en) 2014-09-24 2020-05-06 Indiana University Research & Technology Corporation Incretin-insulin conjugates
CA2964463C (en) 2014-10-22 2024-02-13 Extend Biosciences, Inc. Therapeutic vitamin d conjugates
US9616109B2 (en) 2014-10-22 2017-04-11 Extend Biosciences, Inc. Insulin vitamin D conjugates
ES2739289T3 (es) 2014-11-27 2020-01-30 Novo Nordisk As Derivados de GLP-1 y sus usos
US10046058B2 (en) * 2014-12-02 2018-08-14 Rezolute, Inc. Use of hydrophobic organic acids to increase hydrophobicity of proteins and protein conjugates
CN107108714B (zh) 2014-12-17 2022-02-08 诺和诺德股份有限公司 Glp-1衍生物及其用途
US11135271B2 (en) 2014-12-30 2021-10-05 Hanmi Pharm. Co., Ltd. Glucagon derivatives with improved stability
MX2017014586A (es) 2015-06-04 2018-03-09 Antriabio Inc Pegilacion de aminas para la preparacion de conjugados de proteinas especificos de un sitio.
EP3322437B1 (en) 2015-06-30 2024-01-17 Hanmi Pharm. Co., Ltd. Glucagon derivative and a composition comprising a long acting conjugate of the same
BR112018013525A2 (pt) * 2015-12-31 2018-12-04 Hanmi Pharm. Co., Ltd. conjugado de longa atuação de agonista de receptor de glucagon/glp-1/gip triplo e composição farmacêutica
CN107266557B (zh) * 2016-04-06 2020-04-07 天津药物研究院有限公司 一种聚乙二醇修饰的胰高血糖素样肽-1类似物
SG11201811697SA (en) 2016-06-29 2019-01-30 Hanmi Pharmaceutical Co Ltd Glucagon derivative, conjugate thereof, composition comprising same and therapeutic use thereof
WO2019149880A1 (en) 2018-02-02 2019-08-08 Novo Nordisk A/S Solid compositions comprising a glp-1 agonist, a salt of n-(8-(2-hydroxybenzoyl)amino)caprylic acid and a lubricant
US20220056077A1 (en) 2018-12-04 2022-02-24 Københavns Universitet Dual agonist glp-1 and neurotensin fusion peptide
WO2020214013A1 (ko) * 2019-04-19 2020-10-22 한미약품 주식회사 글루카곤, glp-1 및 gip 수용체 모두에 활성을 갖는 삼중 활성체 또는 이의 결합체의 고지혈증에 대한 치료적 용도
WO2020214012A1 (ko) * 2019-04-19 2020-10-22 한미약품 주식회사 글루카곤, glp-1 및 gip 수용체 모두에 활성을 갖는 삼중 활성체 또는 이의 결합체를 포함하는 고지혈증 예방 또는 치료용 약학적 조성물 및 예방 또는 치료 방법
US20210187077A1 (en) * 2019-12-23 2021-06-24 Idaho State University GLP-1 Agonist Conjugates for Sustained Glycemic Control

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2126264C1 (ru) * 1993-04-07 1999-02-20 Скиос Инк. Фармацевтическая композиция
WO2000041548A2 (en) * 1999-01-14 2000-07-20 Amylin Pharmaceuticals, Inc. Methods for glucagon suppression
WO2000066629A1 (en) * 1999-04-30 2000-11-09 Amylin Pharmaceuticals, Inc. Modified exendins and exendin agonists
WO2003020201A2 (en) * 2001-08-28 2003-03-13 Eli Lilly And Company Pre-mixes of glp-1 and basal insulin

Family Cites Families (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5705483A (en) * 1993-12-09 1998-01-06 Eli Lilly And Company Glucagon-like insulinotropic peptides, compositions and methods
EP1826216A1 (en) 1996-08-30 2007-08-29 Novo Nordisk A/S Glp-1 derivatives
US5990237A (en) * 1997-05-21 1999-11-23 Shearwater Polymers, Inc. Poly(ethylene glycol) aldehyde hydrates and related polymers and applications in modifying amines
DE69942306D1 (de) * 1998-02-27 2010-06-10 Novo Nordisk As Abkömmlinge von glp-1 analogen
US6924264B1 (en) * 1999-04-30 2005-08-02 Amylin Pharmaceuticals, Inc. Modified exendins and exendin agonists
KR20080085082A (ko) * 2000-12-07 2008-09-22 일라이 릴리 앤드 캄파니 Ｇｌｐ-1 융합 단백질
US7576050B2 (en) * 2001-07-31 2009-08-18 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services GLP-1 exendin-4 peptide analogs and uses thereof
MXPA04001525A (es) 2001-08-23 2004-05-31 Lilly Co Eli Analogos de peptido -1 similar al glucagon.
AR036711A1 (es) 2001-10-05 2004-09-29 Bayer Corp Peptidos que actuan como agonistas del receptor del glp-1 y como antagonistas del receptor del glucagon y sus metodos de uso farmacologico
MXPA04006679A (es) 2002-01-08 2004-11-10 Lilly Co Eli Analogos extendidos de peptido-1 de tipo glucagon.
EP1539210A4 (en) 2002-09-06 2006-06-07 Bayer Pharmaceuticals Corp GLP-1 RECEPTOR MODIFIED AGONISTS AND THEIR PHARMACOLOGICAL METHODS OF USE
ATE461217T1 (de) 2003-12-18 2010-04-15 Novo Nordisk As Glp-1-verbindungen

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2126264C1 (ru) * 1993-04-07 1999-02-20 Скиос Инк. Фармацевтическая композиция
WO2000041548A2 (en) * 1999-01-14 2000-07-20 Amylin Pharmaceuticals, Inc. Methods for glucagon suppression
WO2000066629A1 (en) * 1999-04-30 2000-11-09 Amylin Pharmaceuticals, Inc. Modified exendins and exendin agonists
WO2003020201A2 (en) * 2001-08-28 2003-03-13 Eli Lilly And Company Pre-mixes of glp-1 and basal insulin

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US8575097B2 (en) 2009-04-23 2013-11-05 Pegbio Co., Ltd. Exendin variant and conjugate thereof
RU2528734C2 (ru) * 2009-04-23 2014-09-20 Пегбио Ко., Лтд. Новый вариант эксендина и его конъюгат
RU2625015C2 (ru) * 2011-03-30 2017-07-11 Шанхай Бенемае Фармасьютикал Корпорэйшн Сайт-специфически монопегилированные аналоги эксендина и способ их получения

Also Published As

Publication number Publication date
UA92451C2 (en) 2010-11-10
AU2004231461B2 (en) 2009-11-12
EP1605897B1 (en) 2012-07-25
WO2004093823A3 (en) 2005-12-22
SI1605897T1 (sl) 2012-11-30
NO20054310D0 (no) 2005-09-19
PT1605897E (pt) 2012-09-10
ZA200506881B (en) 2006-11-29
US20080113905A1 (en) 2008-05-15
ES2390270T3 (es) 2012-11-08
JP2006520818A (ja) 2006-09-14
EP1605897A4 (en) 2010-08-04
EA200501482A1 (ru) 2006-06-30
NZ541534A (en) 2008-05-30
BRPI0407936A (pt) 2006-02-21
EP1605897A2 (en) 2005-12-21
KR100733940B1 (ko) 2007-06-29
NO20054310L (no) 2005-11-16
KR20050111386A (ko) 2005-11-24
CY1114035T1 (el) 2016-07-27
CR7997A (es) 2008-11-28
HRP20050683A2 (en) 2006-07-31
CN1832959A (zh) 2006-09-13
DK1605897T3 (da) 2012-08-20
CA2518336A1 (en) 2004-11-04
ECSP056025A (es) 2006-01-27
WO2004093823A2 (en) 2004-11-04
US7557183B2 (en) 2009-07-07
PL1605897T3 (pl) 2012-12-31
MXPA05009940A (es) 2005-12-05
CO5611157A2 (es) 2006-02-28
AU2004231461A1 (en) 2004-11-04

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EA009366B1 (ru) Связанные с полиэтиленгликолем соединения гпп-1
ES2653765T3 (es) Agonistas duales de GLP1/GIP o trigonales de GLP1/GIP/glucagón
TWI784914B (zh) 包含長效胰島素類似物接合物及長效促胰島素肽接合物之治療糖尿病組成物
JP6612251B2 (ja) エキセンジン−４に由来するペプチド二重ｇｌｐ−１／グルカゴン受容体アゴニスト
JP6898231B2 (ja) Ｇｉｐアゴニスト化合物及び方法
JP5399265B2 (ja) 免疫グロブリン断片を用いたインスリン分泌結合体
TWI645856B (zh) 治療糖尿病或糖胖症之包括調酸素類似物之組成物
JP5937963B2 (ja) 新規Ｅｘｅｎｄｉｎ変異体及びその複合物
RU2498814C2 (ru) Пэг-модифицированный эксендин или аналог эксендина и его композиции и применение
KR20160079875A (ko) Ｇｉｐ-ｇｌｐ-1 이원 효능제 화합물 및 방법
JP2006520818A5 (ru)
JP2017078078A (ja) 持続型インスリン結合体及び持続型インスリン分泌ペプチド結合体を含む糖尿病治療用組成物
JP2017519718A (ja) ペプチド二重ｇｌｐ−１／グルカゴン受容体アゴニストとしてのエキセンジン−４誘導体
JP2017517483A (ja) エキセンジン−４に由来する二重ｇｌｐ−１／グルカゴン受容体アゴニスト
JP2022527803A (ja) マルチ受容体刺激剤及びその医療上の使用
TW201119670A (en) Sugar chain adduct of antigenicity GLP-1 analogue
KR20150023690A (ko) 엑센딘-4 펩타이드 유사체
KR20110031458A (ko) 당쇄 부가 ｇｌｐ－１ 펩티드
KR20070115602A (ko) 폴리에틸렌글리콜 또는 이의 유도체로 단일 수식된 엑센딘,이의 제조방법 및 이의 용도

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s)

Designated state(s): AM BY KZ KG MD TM

MM4A Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s)

Designated state(s): AZ TJ RU