EA007964B1

EA007964B1 - Способ получения эхинокандиновых соединений

Info

Publication number: EA007964B1
Application number: EA200400806A
Authority: EA
Inventors: Филипп Боффелли; Аньес Бруйар; Колетт Колладан; Серж Дру; Мишель Эльтер; Дидье Ферру; Ги Лемэтр; Жозеф Паладино
Original assignee: Авентис Фарма С.А.
Priority date: 2001-12-14
Filing date: 2002-12-12
Publication date: 2007-02-27
Also published as: BR0214937A; HUP0402602A3; AU2002364991B2; HK1087720A1; IL162385A0; EP1456229B1; WO2003054001A2; TW200301133A; DE60233589D1; AR037827A1; AU2002364991A1; TWI322820B; CN1326872C; US20070105760A1; EA200400806A1; CN1781938A; FR2833596A1; MXPA04005484A; AU2002364991B9; JP2005523245A

Abstract

Объектом настоящего изобретения является способ получения соединений формулы (I)где R является таким, как определено в описании, а также их солей, промежуточных соединений, применение дигидрохлорида в качестве лекарственного средства, и фармацевтические композиции, содержащие их.

Description

Целью настоящего изобретения является способ получения эхинокандиновых соединений, промежуточных соединений и полученных из них продуктов, и их применение в качестве противогрибкового лекарственного средства.

Из литературы известно множество соединений, имеющих противогрибковую активность. В частности, могут быть рассмотрены эхинокандиновые соединения, как описано в заявке ШО99/29716.

Целью настоящего изобретения является создание нового способа получения эхинокандиновых соединений и для получения их новых солей.

Эхинокандин может присутствовать в форме двух эпимеров, называемых изомер А и изомер В, соответствующих К и δ конфигурациям заместителя в положении 4. Одной из целей настоящего изобретения является достижение, в ходе реализации способа, количественного преобладания одного из двух изомеров, то есть, по меньшей мере, более 50% изомера, называемого форма А, соответствующего фармакологически активному соединению формулы (I), что не является случаем, соответствующим способу, раскрытому в заявке ШО99/29716, в ходе которого активный изомер А, получаемый в ходе реализации способа, перед очисткой на хроматографической колонке, находится в количественном меньшинстве.

Еще одной целью настоящего изобретения является исключение операций очистки промежуточных продуктов с помощью хроматографии и получения кристаллизованных продуктов, что делает возможным значительное повышение выходов.

Следовательно, целью настоящего изобретения является способ получения соединений формулы (I)

в которой К представляет собой линейную или разветвленную, или циклическую цепь, содержащую до 30 атомов углерода, необязательно, содержащую один или несколько гетероатомов и один или несколько гетероциклов, включающий в себя следующие стадии

а) Соединение формулы (II)

подвергают действию кислоты формулы К-СО₂Н, где К является таким, как определено выше, указанная кислота находится, если приемлемо, в выделенной или невыделенной активированной форме, с получением соединения формулы (III)

Ь) если приемлемо, соединение формулы (III) подвергают реакции алкилирования спиртом по по- 1 007964 ложению 5 действием спирта формулы А1к-ОН, в присутствии РРТ8, А1к представляет собой алкильный радикал, содержащий 1-4 атома углерода, с получением соединения формулы (III')

с) соединение формулы (III) или (III') подвергают реакции дегидратации, с получением соединения формулы (IV)

б) соединение формулы (IV) подвергают реакции восстановительного аминирования под действием этилендиамина в присутствии восстановительного агента, такого как ЖВН₃СН в присутствии кислоты Льюиса, или ЖВН(ОСОК'), где ОСОК' представляет собой Вос-Ь-Рго, Βζΐ-Ь-Рго или любую другую оптически активную аминокислоту, а также любую другую хиральную или нехиральную карбоновую кислоту, с получением соединения формулы (I), как определено выше, содержащего количественное большинство одного из активных изомеров, затем указанное соединение формулы (I) подвергают, если необходимо, и в любом приемлемом порядке, одной или нескольким из следующих далее операций:

очистке хроматографией; очистке кристаллизацией; действию основания; преобразованию в форму соли.

Предпочтительно целью настоящего изобретения является способ, определенный ранее, в котором

Предпочтительно целью настоящего изобретения является способ, определенный ранее, в котором соединения формул (I), (III), (III') или (IV) содержат радикал К, представляющий собой следующую группу:

Соединение формулы (II) получают в соответствии со способом, описанным в заявке Ж)99/29716 страница 18 (Получение 2, ядро дезоксимулундокандина).

Активирование кислоты формулы К-СО₂Н осуществляют в соответствии со стандартными методами, известными специалистам в данной области (боигпе! М. е! а1., б. Огд. СЕет. (1999) , 64, 2411-2417; РосЕ1аиег Р. е! а1. Те!гаЕебгоп 54 (1998) 3489-3494; КипизЕхша е! а1. Те!гаЕебгоп (1999) 55 13159-13170). В частности, пентафторфенол используют для получения активированного сложного пентафторфенолового эфира, который выделяют перед использованием в реакции ацилирования амина. Другой способ пред- 2 007964 ставляет собой использование Ν-гидроксисукцинимида (необязательно, Ν-гидроксибензотриазола), с получением активированного сложного Ν-гидроксисукцинимидного (необязательно, Νгидроксибензотриазолового) эфира, который также выделяют.

Стадия ацилирования, которая следует далее, для получения соединения формулы (III), осуществляется в присутствии основания, в соответствии со способами, известными специалистам в данной области, и иллюстрируется в примерах, описываемых далее. Также возможно осуществление ацилирования без выделения активного сложного эфира и без добавления основания, проводя реакцию в присутствии хлорида 4-(4,6-диметокси-1,3,5-триазин-2-ил)-4-мил-морфолиния (ΏΜΤΜΜ). Эта последняя альтернатива обладает преимуществом исключения стадии выделения и, следовательно, повышения выходов.

Стадия дегидратации соединения формулы (III), с получением соединения формулы (IV), может осуществляться следующим образом.

Стадия дегидратации осуществляется в присутствии галогеноводородной кислоты, такой как НВг, в присутствии МцБ. В этом случае не является необходимым проходить через промежуточное соединение формулы (III').

В качестве одного из вариантов, может быть желательным алкилировать гидроксильную группу в положении 5, перед переходом к стадии дегидратации. Например, метилирование может осуществляться с помощью метанола, в присутствии РРТЗ (паратолуолсульфоната пиридиния), с получением соединения формулы (III'), где А1к представляет собой метил.

Наконец, эта реакция дегидратации может также осуществляться в присутствии альфа-ацетокси изобутирил бромида (АГОВ) в диоксане. В этом последнем случае, в реакцию может быть введено либо соединение формулы (III'), либо непосредственно соединение формулы (III), в присутствии МдС.

Предпочтительно соединение, полученное после реакции дегидратации, затем очищают кристаллизацией из смеси ДМФ (диметилформамид)/ΜеСN (ацетонитрил). Также могут использоваться смеси следующих растворителей: ДМФ/ацетон и ДМФ/АсОЕ! (этилацетат).

Реакции восстановительного аминирования соединений формулы (IV) с получением эхинокандина формулы (I), осуществляют в соответствии со способами, описанными в литературе и известными специалистам в данной области (Уашаба К. е! а1. I. Сйеш. Зое. Регкш Тгапз I (1983) 265-270; Ни1еЫп5 К. е! а1. Огд. ргер. Ргос. Ση!. 11(5) (1979) 201-246). В частности, этилендиамин используют в присутствии ΝπΒΙ ΙΑΝ, проводя сочетание с ПС1₄ или любой другой кислотой Льюиса, или в присутствии №В11(ОСОК'), где ОСОК' представляет собой Вос-Б-Рго, В/1-Б-Рго или любую другую оптически активную аминокислоту, а также, любую другую хиральную или нехиральную карбоновую кислоту.

Сочетание восстановительного реагента №В1 ΙΑΝ с кислотой Льюиса, в частности, с ПС1₄, является существенным для селективности и, следовательно, для получения смеси изомера А и изомера В, в которой активный изомер А находится в количественном большинстве. Как правило, получают отношение изомера А, большее чем 70%, и в частности, находящееся в пределах между 80 и 85%. Похожая ситуация происходит и с другими реагентами, рассмотренными выше.

В частности, для соединения формулы ^а), на этой стадии, получают отношение изомер А/изомер В, равное 80-85%/20-15%, соответственно, в то время как способ, описанный в АО 97/29716, приводит к получению смеси, в которой изомер А находится в количественном меньшинстве или в равном отношении (рацемическая смесь А и В).

Во время стадии восстановительного аминирования, перед восстановлением, может быть, если необходимо, выделен промежуточный продукт реакции, и, следовательно, он представляет собой цель настоящего изобретения. Он представляет собой имидазолидин формулы (IV') или ^ν^), где К представляет собой группу -Рй-Рй-О-С₈Н₁₇.

Может быть желательной очистка полученного продукта или продуктов, с помощью хроматографии или перекристаллизации. Эта операция осуществляется в соответствии с обычными способами, известными специалистам в данной области. Когда полученный продукт, в частности, находится, после хроматографии, в форме соли трифторуксусной кислоты, желательно разрушение этой соли под действием основания, с получением соединения формулы (I) в форме основания.

- 3 007964

Реакция солеобразования осуществляется в соответствии с обычными способами, известными специалистам в данной области. Получение гидрохлорида или дигидрохлорида осуществляют в присутствии хлористо-водородной кислоты в метаноле.

В особенности, целью настоящего изобретения является способ получения соединений формулы (1а)

включающий в себя следующие стадии

а) Соединение формулы (II)

подвергают воздействию кислоты формулы С₈Н17-О-Рй-Рй-СО₂И, указанная кислота находится, если это необходимо, в активированной, выделенной или невыделенной форме, с получением соединения формулы (111а)

Ь) если это приемлемо, соединение формулы (111а) подвергают реакции алкилирования спиртом по

с) соединение формулы (111а) или (111а') подвергают реакции дегидратации, с получением соединения формулы (1Уа)

- 4 007964

ά) соединение формулы (1Уа) подвергают реакции восстановительного аминирования действием этилендиамина, в присутствии восстановительного агента, такого как ΝαΒΗ₃ϋΝ, связанного с Т1С1₄, №ВН(Вос-Ь-Рго)з или ΝαΒΗ(Βζ1-Ε-Ρτο)₃, с получением соединения формулы (1а), как определено выше, содержащего количественное большинство одного из активных изомеров, указанное соединение формулы (1а) подвергают одной или нескольким из следующих далее операций, в приемлемом порядке:

хроматографии; кристаллизации; воздействию основания;

преобразованию в форму соли под действием хлористо-водородной кислоты.

Соединение формулы (Ха) может находиться в форме смеси двух эпимеров (асимметричный атом углерода в положении 4), которые называют изомер А или изомер В. Соединение формулы (I), полученное в соответствии со способом, определенным выше, делает возможным получение смеси изомер А/изомер В, в соотношении приблизительно 70-85%/30-15%.

Стадии очистки/кристаллизации и преобразования в форму соли, которые осуществляют после реакции восстановительного аминирования, дают возможность для селективного получения активного эпимера А соединения формулы (1а).

Предпочтительно соединение формулы (1а) очищают с помощью хроматографии на силикагеле, затем с помощью хроматографии с обращенной фазой, используя смеси органических растворителей, воды и трифторуксусной кислоты, для получения соли трифторуксусной кислоты соединения формулы (1а). Затем эту соль подвергают действию основания, например, действию водного раствора бикарбоната натрия, с получением соединения формулы (1а) в форме основания. Затем полученное основание преобразуют в форму соли действием хлористо-водородной кислоты, с получением соответствующей соли, а именно, дигидрохлорида соединения формулы (1а).

По этой причине совершенно конкретной целью настоящего изобретения является способ, определенный ранее, отличающийся тем, что соединение формулы (1а) подвергают последовательно следующим операциям:

a) очистке хроматографией на силикагеле, затем хроматографии с обращенной фазой, с использованием смеси органических растворителей, воды и трифторуксусной кислоты, с получением соли трифторуксусной кислоты соединения формулы (1а);

b) действию основания, например, действию водного раствора бикарбоната натрия, с получением соединения формулы (1а) в форме основания;

c) преобразованию в форму соли под действием хлористо-водородной кислоты, с получением соответствующей соли, а именно, дигидрохлорида соединения формулы (1а).

По этой причине совершенно конкретной целью настоящего изобретения является способ, определенный ранее, отличающийся тем, что реакция активирования кислоты осуществляется в присутствии пентафторфенола, Ν-гидроксисукцинимида или, необязательно, Ν-гидроксибензотриазола.

По этой причине совершенно конкретной целью настоящего изобретения является способ, определенный ранее, отличающийся тем, что реакция ацилирования в присутствии выделенной активированной кислоты осуществляется в присутствии диизопропилэтиламина.

По этой причине совершенно конкретной целью настоящего изобретения является способ, определенный ранее, отличающийся тем, что реакцию активирования, а затем реакцию ацилирования в присутствии выделенной активированной кислоты осуществляют в присутствии Ν-метилпирролидона и ΌΜΤΜΜ.

По этой причине совершенно конкретной целью настоящего изобретения является способ, определенный ранее, отличающийся тем, что реакция дегидратации осуществляется в присутствии ΑΙΒΒ и, если это приемлемо, Мд1₂.

По этой причине совершенно конкретной целью настоящего изобретения является способ, определенный ранее, отличающийся тем, что реакция дегидратации осуществляется в присутствии НВг-АсОН и Мд1₂.

По этой причине совершенно конкретной целью настоящего изобретения является способ, определенный ранее, отличающийся тем, что продукт, получаемый после дегидратации, очищают кристаллизацией из смеси диметилформамид (ДМФ)/ацетонитрил, ДМФ/ацетон или ДМФ/АсОЕР

- 5 007964

По этой причине совершенно конкретной целью настоящего изобретения является способ, определенный ранее, отличающийся тем, что реакцию восстановительного аминирования осуществляют в присутствии восстановительного агента, выбранного из ΝαΒΗΑ’Ν. связанного с ΤίΟ.·|/ΝαΗ(Έοο-Γ-ΡΐΌ)₃ и ΝαΗ(Βζ1-Ε-Ρτο)₃.

По этой причине целью настоящего изобретения является также дигидрохлорид 1-[4-[(2-аминоэтил)амино]-Ш-[[4'-(октилокси)[1,1 '-бифенил]-4-ил]карбонил]-Е-орнитин]-4-[4-(4-гидроксифенил)-Ьтреонин]-5-Ь-серин эхинокандина В в 48 или 4Ρ форме, или в форме смеси этих двух стереоизомеров.

Способ, описанный ранее, дает возможность для получения изомера А соединения формулы (I) или (1а) в количественном большинстве, до разделения изомеров с помощью хроматографии.

По этой причине, целью настоящего изобретения также является дигидрохлорид 1-[4-[(2-аминоэтил)амино]-Ш-[[4'-(октилокси)[1,Г-бифенил]-4-ил]карбонил]-Е-орнитин]-4-[4-(4-гидроксифенил)-Етреонин]-5-Ь-серин эхинокандина В в форме активного изомера А, полученного с помощью способа, как описано ранее.

Целью настоящего изобретения является также дигидрохлорид 1-[4-[(2-аминоэтил)амино]-№-[[4'(октилокси)[1,1 '-бифенил]-4-ил]карбонил]-Е-орнитин]-4-[4-(4-гидроксифенил)-Е-треонин]-5-Ь-серин эхинокандина В в 48 или 4Ρ форме, или в форме смеси этих двух стереоизомеров, в качестве лекарственного средства и, в частности, в качестве, противогрибкового лекарственного средства.

Наконец, целью настоящего изобретения является фармацевтические композиции, содержащие дигидрохлорид 1-[4-[(2-аминоэтил)амино]-№-[[4'-(октилокси)[1,Г-бифенил]-4-ил]-карбонил]-Е-орнитин]4-[4-(4-гидроксифенил)-Е-треонин]-5-Ь-серин эхинокандина В в 48 или 4Ρ форме, или в форме смеси этих двух стереоизомеров, и фармацевтически приемлемый носитель.

1-[4-[(2-Аминоэтил)амино]-№-[[4'-(октилокси)[1,Т-бифенил]-4-ил]карбонил]-Е-орнитин]-4-[4-(4-гидроксифенил)-Е-треонин]-5-Ь-серин эхинокандин В получают в заявке XVО 99/29716 в форме основания или соли трифторуксусной кислоты (пример 14). Преимущество дигидрохлорида заключается в лучшей стабильности и растворимости в воде. Кроме того, дигидрохлорид представляет собой предпочтительную фармацевтически приемлемую соль, которая представляет собой цель настоящего изобретения.

Пример 1. Дигидрохлорид 1-[4-[(2-аминоил)амино]-Ш-[[4'-(октилокси)[1,1'-бифенил]-4-ил]карбонил]-Е-орнитин]-4-[4-(4-гидроксифенил)-Е-треонин]-5-Ь-серин эхинокандина В.

I) Первая стадия. Ацилирование соединения формулы (11а) и получение соединения формулы (III).

1-[(4К,5К)-4,5-Дигидрокси-Ш-[[4'-(октилокси)[1,Г-бифенил]-4-ил]карбонил]-Е-орнитин]-4-[4-(4гидроксифенил)-Е-треонин]-5-Ь-серин эхинокандин В.

Способ 1. С помощью активированного сложного эфира выделенного пентафторфенола.

Стадия 1. Получение активированного сложного эфира.

Пентафторфенил 4'-октилокси-бифенил-4-карбоксилат.

100 г 4-октилоксибифенил-4' карбоновой кислоты и 62 г пентафторфенола вводят в 1 л дихлорметана. Перемешивание осуществляют в течение 15 мин и добавляют 69,6 г Ν,Ν'дициклогексилкарбодиимида в виде раствора 500 мл дихлорметана, в течение 15 мин. Темно-бежевую суспензию перемешивают в течение 20 ч при температуре окружающей среды.

Дициклогексилмочевину фильтруют и фильтрат концентрируют. Дистилляцию до получения постоянного объема осуществляют с регулярным добавлением этанола до получения температуры паров 74°С. Реакционную среду охлаждают до температуры окружающей среды с последующим перемешиванием, в течение 1 ч, фильтрованием, а затем промывкой этанолом. После сушки получают 145,7 г 5 целевого продукта в форме кристаллов.

Выход: 96,5%.

ЯМР (СБС1₃): 8,23-7,72 (АА'ВВ') 4Н; 7,01-7,60 (АА'ВВ') 4Н; 4,02 (т) 2Н; 1,82 (квинт.) 2Н; 1,48 (квинт.) 2Н; 1,32 (м) 8Н; 0,89 (т) 3Н.

Стадия 2. Ацилирование.

Вводят 23,2 г соединения формулы (II) (ядра деоксимулундокандина, полученного в соответствии с получением 2 νθ 99/29716) и 14,1 г сложного эфира, полученного выше, в 60 мл ДМФ. В суспензию вводят 6,7 мл диизопропилэтиламина и перемешивание осуществляют в течение 24 ч, в атмосфере азота, при температуре окружающей среды. Гомогенную реакционную среду выливают в 1 л воды, в течение 10 мин, при этом осуществляют острожное перемешивание, суспензию перемешивают в течение 2 ч, фильтруют, и твердый продукт промывают водой. Твердый продукт сушат в вакууме при комнатной температуре, затем нагревают с обратным холодильником в 100 мл метиленхлорида, в атмосфере азота, при этом перемешивают в течение 2 ч (40°С), с последующим охлаждением до температуры окружающей среды в течение 1 ч, перемешиванием в течение 1 ч, фильтрованием твердого продукта и промывкой его метиленхлоридом 3 раза и сушкой в вакууме при комнатной температуре. Получают 26,9 г экстрагированного продукта в форме бежевого твердого продукта.

Выход: 91,5%.

ТСХ: ΡΓ: 0,13 пластинка с силикагелем; проявление УФ 254 нм; элюент: СН₂С1₂-МеОН-вода: 86-13-1.

ЯМР: (ДМСО).

Треонин: 8,16 (1Н), 4,85 (1Н), 4,41 (1Н), 1,13 (3Н); γ-гидроксипролин: 4,42 (1Н), 1,92-2,28 (2Н), 4,44

- 6 007964 (1Н), 3,86-3,70 (2Н); β-гидроксигомотирозин 7,36 (1Н), 4,23 (1Н), 4,20 (1Н), 2,53-2,46 (2Н), 6,98 (2Н), 6,68 (2Н); серин: 7,40 (1Н), 4,86 (1Н), 3,66-3,60 (2Н), β-гидрокси γ-метилпролин: 4,27 (1Н), 4,03 (1Н), 2,38 (1Н), 0,99 (3Н), 3,25-3,93 (2Н), «орнитин»: 7,98 (1Н), 5,16 (1Н), 3,96 (1Н), 8,54 (1Н), 4,44 (1Н), 1,98 (2Н); ароматика и октилоксицепь: 7,98 (2Н), 7,71 (2Н), 7,68 (2Н), 7,02 (2Н), 4,00 (2Н), 1,72 (2Н), 1,41 (2Н), 1,28 (2Н), 1,25 (2Н), 1,31 (2Н), 1,27 (2Н), 0,86 (3Н).

Способ 2. С помощью активированного сложного эфира выделенного НО8и.

Стадия 1. Синтез активированного сложного эфира 2,5-диоксопирролидин 4'-октилокси-бифенил-4карбоксилата.

Вводят 9,3 г октилоксибифениловой кислоты, 93 мл дихлорметана, 3,8 г Ν-гидроксисукцинимида,

6,3 г БОС и осуществляют перемешивание в течение 3 ч при температуре окружающей среды. Добавляют 6 мл воды, осуществляют перемешивание в течение 10 мин с последующим декантированием и повторным экстрагированием 45 мл дихлорметана. Органическую фазу промывают водой (3 раза по 45 мл) и сушат над сульфатом натрия. После высушивания в вакууме получают 12,05 г ожидаемого продукта в форме кристаллов.

Выход: 99,9%.

ЯМР СОС1₃: 8,2-7,65 (АА'ВВ') 4Н; 7,6-6,97 (АА'ВВ') 4Н; 4,02 (т, 2Н); 2,93 (шир.) 4Н; 1,83 (квинт. 2Н); 1,45 (м) 2Н; 1,3 (м) 8Н; 0,9 (т) 3Н.

Стадия 2. Ацилирование.

1,43 г сложного сукцинимидного эфира, как получено выше, растворяют в 6 мл ДМФ. Вводят 2,42 г ядра диоксимулункандина (полученного в соответствии с Получением 2, \УО 99/29716) и 0,66 мл диизопропилэтиламина. Раствор перемешивают в течение 18 ч, при температуре окружающей среды. Вводят 35 мл воды и перемешивание осуществляют в течение 2 ч при температуре окружающей среды. После фильтрования твердый продукт извлекают в 30 мл воды, при перемешивании в течение 2 ч в реакционной емкости, с последующим фильтрованием и промывкой водой. Твердый продукт сушат в вакууме, при температуре окружающей среды и получают 2,75 г ожидаемого продукта в форме бежевого твердого продукта.

Выход: 98,2%.

Способ 3. Синтез путем непосредственного активирования с помощью ΌΜΤΜΜ.

2,8 г диоксимулундокандина (полученного в соответствии с Получением 2, XVО 99/29716) растворяют в 8,3 мл Ν-метилпиролидона. Добавляют 1,12 г октилоксибифениловой кислоты и 0,95 г 4-(4,6диметокси-1,3,5-триазин-2-ил)-4-Ме-морфолиний хлорида (ΌΜΤΜΜ). После перемешивания в течение 24 ч при температуре окружающей среды реакционную среду выливают в 133 мл воды, при перемешивании. Перемешивание осуществляют в течение 20 мин, твердый продукт фильтруют и промывают 3 раза водой (3 раза по 7 мл). После сушки в вакууме, при 40°С, получают 2,66 г ожидаемого продукта 4, в форме бежевого твердого продукта.

Выход: 73,5%.

II) Вторая стадия. Дегидратация (получение соединения формулы (1Уа)).

1-[Ш-[4'-(Октилокси)-[1,Г-бифенил]-4-ил]карбонил]-4-оксо-Т-орнитин]-4-[4-(4-гидроксифенил)-Ьтреонин]-5-Ь-серин-эхинокандин В.

Способ 1. Через соединение формулы (111'а).

Стадия 1. Алкилирование.

1-[(4К,5К)-4-Гидрокси,5-метокси-Ш-[[4'-(октилокси)[1,Г-бифенил]-4-ил]карбонил]-Ь-орнитин]-4[4-(4-гидроксифенил)-Ь-треонин]-5-Ь-серин эхинокандин В (111'а).

283 г продукта 111а, полученного на первой стадии, растворяют в 5,67 л метанола. 22,7 г птолуолсульфоната пиридиния добавляют за 1 раз при перемешивании и перемешивание осуществляют в течение 6 ч, при нагревании с обратным холодильником (42°С), и в течение 12 ч при температуре окружающей среды. Концентрирование осуществляют в вакууме до двух остаточных объемов, затем добавляют 1,2 л воды. Суспензию перемешивают в течение 18 ч. Твердый продукт фильтруют и дважды промывают водой. После сушки в печи, в вакууме, при температуре окружающей среды, получают 270,5 г ожидаемого продукта в форме бежевого порошка.

Выход: 94,2%.

ЯМР: (ДМСО).

Треонин: 8,11 (1Н), 4,84 (1Н), 4,41 (1Н), 1,11 (3Н); γ-гидроксипролин: 4,40 (1Н), 1,91-2,27 (2Н), 4,42 (1Н), 3,67-3,87 (2Н); β-гидроксигомотирозин 7,32 (1Н), 4,22 (1Н), 4,18 (1Н), 2,51-2,44 (2Н), 6,96 (2Н), 6,65 (2Н), 9,03 (1Н); серин: 7,36 (1Н), 4,87 (1Н), 3,58-3,63 (2Н), β-гидрокси γ-метилпролин: 4,32 (1Н), 4,05 (1Н), 2,37 (1Н), 1,00 (3Н), 3,27-3,94 (2Н), «орнитин»: 7,88 (1Н), 4,94 (1Н), 4,06 (1Н), 8,50 (1Н), 4,43 (1Н), 3,16 (3Н); 1,93-2,03 (2Н); ароматика и октилоксицепь: 7,97 (2Н), 7,70 (2Н), 7,65 (2Н), 7,02 (2Н), 4,00 (2Н), 1,73 (2Н), 1,43 (2Н), 1,32 (2Н), 1,27-1,28 (6Н), 0,87 (3Н).

Стадия 2. Дегидратация.

265,3 г метоксилированного продукта (111'а), полученного выше, растворяют в 5,3 л диоксана. Добавляют 71,8 мл α-ацетоксиизобутил бромида (ΑΙΒΒ), в течение 20 мин. Среду перемешивают в течение

- 7 007964

ч. Добавляют 4,1 л насыщенного водного раствора бикарбоната натрия (ЫаНСОз), в течение 15 мин. Перемешивание осуществляют в течение 15 мин и диоксан дистиллируют в вакууме, при температуре, которая не превышает 30°С. Добавляют 3,2 л воды, и перемешивание осуществляют в течение 15 ч, при температуре окружающей среды. Твердый продукт фильтруют и дважды промывают водой. После сушки в печи, в вакууме, получают 251,2 г ожидаемого продукта в форме твердого продукта бледного коричневато-желтого цвета.

Выход: 97,5%.

Продукт кристаллизуют в соответствии с получением, описанным ниже.

Способ 2. Начиная с продукта (111а), полученного на стадии а), под действием Л1ВВ/М§1₂/диоксана.

23,26 г безводного йодида магния суспендируют в 500 мл диоксана, и осуществляют перемешивание в течение 30 мин. Вводят 12,25 мл α-ацетоксиизобутил бромида (ΑΙΒΒ), и перемешивают суспензию бледного коричневато-желтого цвета при температуре окружающей среды, в течение 45 мин. Раствор 50 г продукта (111а), полученного на первой стадии, растворенный в 400 мл, диоксана добавляют в течение 1 ч, и капельную воронку промывают 25 мл диоксана. Суспензию перемешивают в течение 19 ч, при температуре окружающей среды. Раствор 5 г бикарбоната натрия, растворенного в 50 мл воды, вводят в течение 30 мин (рН 5-6, к концу добавления). Перемешивание осуществляют в течение 2 ч, с последующей дистилляцией в вакууме до остаточного объема 250 мл, при внутренней температуре, меньшей, чем 35°С. Восстанавливают атмосферное давление азота и добавляют 200 мл диметилформамида с последующей дистилляцией в вакууме до остаточного объема 250 мл и этот раствор выливают при температуре окружающей среды в 2,8 л воды. После промывки ДМФ перемешивание осуществляют в течение 1 ч. Твердый продукт фильтруют и промывают водой. Твердый продукт сушат в течение 24 ч в вакууме, при 30°С. Получают 46 г ожидаемого продукта в форме бежевого твердого продукта.

Выход: 98,6%.

Затем продукт кристаллизуют в соответствии со способом, описанным ниже.

Способ 3. Начиная с продукта 111а, полученного на первой стадии, под действием НВгАсОН/М§1₂/МЕК.

г продукта, полученного на стадии а), растворяют в 180 мл метилэтилкетона (МЕК). Вводят 4,65 г безводного йодида магния и 10 мл МЕК. Осуществляют перемешивание в течение 35 мин при температуре окружающей среды, с последующим охлаждением до 20°С. Вводят в ЛсОН 3 мл 33% раствора НВг. Суспензию перемешивают в течение 4 ч при 20°С. Добавляют 10 мл насыщенного водного раствора ΝαНСО3 (бикарбоната натрия). Перемешивание осуществляют в течение 1 ч при 20°С, (растворение). Раствор выливают в 700 мл воды в течение 2 ч, при этом дистиллируя МЕК в вакууме при 40°С. Дистилляцию осуществляют до остаточного объема 430 мл. Добавляют 100 мл воды, и дистилляцию продолжают до остаточного объема 430 мл. Операцию повторяют дважды. Суспензию доводят до температуры окружающей среды, и перемешивают в течение ночи. Твердый продукт фильтруют и промывают 3 раза 50 мл воды. После сушки в вакууме, при температуре окружающей среды, получают 9,3 г ожидаемого продукта в форме бежевого порошка. Продукт очищают путем кристаллизации, в соответствии со способом, описанным ниже.

Выход: 94,5%, растворители не учитываются.

Кристаллизация продукта формулы (1Уа), полученного выше (способ 1, 2 или 3).

г 1-[Ш-[4'-(октилокси)-[1,Т-бифенил]-4-ил]карбонил]-4-оксо-Т-орнитин]-4-[4-(4-гидроксифенил)Е-треонин]-5-Ь-серин эхинокандина В (полученного выше, способ 1, 2 или 3) растворяют в течение 1 ч при перемешивании и при температуре окружающей среды, в 30 мл диметилформамида (ДМФ). Вводят 51 мг инициатора (кристаллов продукта, полученного в соответствии со способами 1, 2 или 3), и осуществляют перемешивание в течение 2 ч. Затем равномерно вводят 67 мл ацетонитрила, в течение 2 ч. После окончания введения осуществляют перемешивание в течение 19 ч, с последующим фильтрованием и промывкой, 3 раза по 10 мл ацетонитрила. После сушки в вакууме, при температуре окружающей среды, получают 7,10 г ожидаемого продукта в форме белых кристаллов.

Выход: 71%.

ТСХ: Κί=0,28.

Силикагель 60Р₂₅₄, УФ 254 нм

Подвижная фаза: СН₂С1₂/МеОН/вода 86/13/1

ЯМР: (ДМСО).

Треонин: 7,94 (1Н), 4,50 (1Н), 4,25 (1Н), 1,18 (3Н); γ-гидроксипролин: 4,39 (1Н), 1,93-2,20 (2Н), 4,40 (1Н), 3,85-3,71 (2Н); β-гидроксигомотирозин 7,53 (1Н), 4,06 (1Н), 4,25 (1Н), 2,44-2,53 (2Н), 6,96 (2Н), 6,66 (2Н), 9,06 (1Н); серин: 7,74 (1Н), 4,96 (1Н), 3,72 (2Н), β-гидрокси γ-метилпролин: 4,33 (1Н), 3,98 (1Н), 2,31 (1Н), 0,99 (3Н), 3,26-4,0 (2Н), «орнитин»: 8,37 (1Н), 3,84-3,64 (2Н), 8,11 (1Н), 4,83 (1Н), 2,82-3,11 (2Н); ароматика и октилоксицепь: 7,91 (2Н), 7,69 (2Н), 7,66 (2Н), 7,02 (2Н), 4,02 (2Н), 1,74 (2Н), 1,43 (2Н), 1,32-1,28 (6Н), 1,28 (2Н), 0,87 (3Н).

- 8 007964

III) Третья стадия. Восстановительное аминирование соединения формулы (1Уа) и получение соединения формулы (1а).

1-[4-[(2-аминоил)амино]-М2-[[4'-(октилокси)[1,1'-бифенил]-4-ил]карбонил]-Ь-орнитин]-4-[4-(4гидроксифенил)-Т-треонин]-5-Ь-серинэхинокандин В.

Способ 1.

г продукта формулы (1Уа), полученного в соответствии со стадией II, и 2,52 мл этилендиамина растворяют в 80 мл тетрагидрофурана (ТГФ), при этом перемешивая в течение от 30 мин до 1 ч, в атмосфере азота и при температуре окружающей среды. Раствор 0,36 г тетрахлорида титана, растворенного в 80 мл ТГФ, добавляют в течение 30 мин. Перемешивание осуществляют в течение 1 ч, с последующим охлаждением до 5°С. Добавляют 3,2 мл ледяной уксусной кислоты, растворенной в 16 мл ТГФ. Перемешивание осуществляют в течение 1 ч при 5°С с последующим охлаждением до 0°С, и раствор 1,04 г цианоборгидрида натрия, растворенного в 24 мл ТГФ, добавляют в течение 15 мин. Реакционную среду оставляют с повышением температуры до 5°С, в течение 30 мин и перемешивают в течение 30 мин при этой температуре. Затем оставляют с повышением температуры до температуры окружающей среды, при этом перемешивая в течение 3 ч, с последующими дистилляцией в вакууме до 40 мл объема, добавлением раствора 7,2 г бикарбоната натрия, растворенного в 80 мл воды, дистиллированием в вакууме до остаточного объема 80 мл, затем добавляют 32 мл метанола и 128 мл этилацетата. Перемешивание осуществляют в течение 10 мин, с последующим декантированием, повторным экстрагированием водной фазы смесью этилацетата/метанола и дистилляцией всех органических фаз в вакууме до остаточного объема 40 мл. Вводят 40 мл ДМФ, и продолжают дистилляцию до остаточного объема 60 мл. Этот раствор выливают в 320 мл воды в течение 20 мин и перемешивают в течение 15 ч при температуре окружающей среды. Если это необходимо, рН доводят до 9-9,5 с помощью разбавленного раствора соды с последующим фильтрованием и промывкой водным раствором 1,2 г бикарбоната натрия (рН 9-9,5). После сушки твердого продукта в сушильном шкафу в вакууме при 30°С в течение 18 ч получают 8,55 г ожидаемого неочищенного основания в форме белого твердого продукта.

Выход: 100%.

Отношение изомеров А/В=80/20.

Способ 2.

г продукта формулы (IV), полученного на стадии II, вводят при перемешивании и в атмосфере азота, в 600 мл ТГФ. Добавляют 20 г 3 А молекулярных сит, затем 3,16 мл этилендиамина и, наконец,

110,4 г три-бензил-Ь-пролинборгидрида натрия. Гомогенный раствор перемешивают при температуре окружающей среды в течение 6 ч, с последующим фильтрованием молекулярных сит и промывкой ТГФ. Фильтрат дистиллируют досуха в вакууме при внутренней температуре, меньшей, чем 40°С. 600 мл насыщенного водного раствора бикарбоната натрия медленно добавляют на смолу, полученную во время перемешивания. К суспензии добавляют 20 г фильтрационного реагента НуЙ08ирсгсс1 К|С5с1дисНг и осуществляют перемешивание в течение 16 ч, при температуре окружающей среды, с последующим фильтрованием и промывкой водой. Лепешку растворяют путем пропускания через 100 мл метанола четыре раза. Метанольный фильтрат концентрируют досуха в вакууме, при температуре, не превышающей 40°С. Получают 21,25 г ожидаемого продукта.

Способ 3. Выделение промежуточного продукта реакции восстановительного аминирования (соединение формулы IV;·!).

1-[4-[М,№-Имидазолидин]-Н2-[[4'-(октилокси)[1,Т-бифенил]-4-ил]карбонил]-Е-орнитин]-4-[4-(4гидроксифенил)-Е-треонин]-5-Е-серин эхинокандин В.

Суспензию продукта формулы ^να), полученного на стадии II, в 40 мл дихлорметана и 0,32 мл этилендиамина перемешивают в течение 18 ч. Добавляют 80 мл простого диэтилового эфира, и осуществляют перемешивание в течение 5 ч. Твердый продукт фильтруют и промывают несколько раз диэтиловым эфиром. После сушки в сушильном шкафу в вакууме в течение 15 ч при температуре окружающей среды получают 0,76 г ожидаемого соединения в форме белого твердого продукта. Это промежуточное соединение затем подвергают реакции восстановления, в соответствии с предыдущими способами 1 или 2. Это выделенное соединение является новым и представляет собой часть настоящего изобретения.

Выход: 73%.

МА88: (РАВ) МН+ 1100; МЫа⁺: 1122.

ЯМР: Треонин: 8,51 (1Н), 4,72 (1Н), 4,38 (1Н), 1,20 (3Н); γ-гидроксипролин: 4,37 (1Н), 1,90-2,22 (2Н), 4,42 (1Н), 3,88-3,66 (2Н); β-гидроксигомотирозин 7,46 (1Н), 4,17 (1Н), 4,17 (1Н), 2,46 (2Н), 6,96 (2Н), 6,65 (2Н), серин: 7,47 (1Н), 4,84 (1Н), 3,65-3,60 (2Н), β-гидрокси γ-метилпролин: 4,22 (1Н), 3,93 (1Н), 2,29 (1Н), 0,95 (3Н), 3,22-3,90 (2Н), «орнитин»: 7,45 (1Н), 2,72-3,51 (2Н), 9,55 (1Н), 4,28 (1Н), 1,632,12 (2Н); имидазолидин: 2,63-2,94 (2Н); 2,78-3,02 (2Н); ароматика и октилоксицепь: 7,87-7,72 (2Н, 2Н), 7,66 (2Н), 7,03 (2Н), 4,02 (2Н), 1,72 (2Н), 1,27 1,32 1,43 (4х2Н), 1,29 (2Н), 0,88 (3Н).

IV) Четвертая стадия.

Очистка с помощью хроматографии соединения формулы (Ш), полученного ранее (в соответствии со способами 1, 2 или 3), и разделение двух изомеров А и В (А или В соответствуют стереоизомерам К

- 9 007964 или 8 в положении 4).

Ди-трифторацетат 1-[4-[(2-аминоил)амино]-Х2-[[4'-(октилокси)[1,Г-бифенил]-4-ил]карбонил]-корнитин]-4-[4-(4-гидроксифенил)-Ь-треонин]-5-Е-серин эхинокандина В.

Колонку РгосЬгош ЬС 200 кондиционируют с помощью 2,5 г силикагеля Мегск 11763, используя в качестве подвижной фазы смесь метиленхлорид (43)-ацетонитрил (50)-метанол (7)-вода (5)трифторуксусная кислота (1). 24 г соединения, полученного выше (стадия III, способ 1), растворяют в 126 мл смеси, состоящей из ацетонитрила (50)-метанола (7)-воды (5)-ТФУ (1). Раствор фильтруют и добавляют 86 мл метиленхлорида. Этот раствор инжектируют в колонку. Элюирование осуществляют при объемном расходе 76 л/ч и при давлении 14 бар. Детектирование осуществляют при 280 нм, с последующей дистилляцией собранных фракций в вакууме при внешней температуре, меньшей, чем 40°С. Получают 36,75 г продукта в форме твердой дисоли ТФУ.

Отношение изомеров А/В=99,3/0,7.

V) Пятая стадия.

Очистка с помощью хроматографии дитрифторацетата (устранение всех других солей).

Колонку РгосЬгош ЬС 50 кондиционируют с помощью 300 г обращенной фазы силикагеля [)а18оце1 8Р 120 п°5/1502, используя в качестве подвижной фазы смесь вода (90)-ацетонитрил (10)трифторуксусная кислота (0,1). 36,75 г соли, полученной выше, при первом процессе хроматографии, растворяют в смеси, содержащей 57,3 мл воды (90)-ацетонитрила (10)-трифторуксусной кислоты (0,1) и 26,8 мл чистого ацетонитрила. Раствор фильтруют, и этот раствор вводят в колонку. Элюирование осуществляют с помощью воды (90)-ацетонитрила (10)-трифторуксусной кислоты (0,1), в первом случае, для удаления всех минеральных солей, затем с помощью воды (50)-ацетонитрила (50)-трифторуксусной кислоты (0,1), для удаления продукта. Собранные фракции дистиллируют в вакууме при внешней температуре, меньшей, чем 40°С. Полученный прозрачный водный раствор лиофилизируют. Получают 15,59 г ожидаемого продукта в форме пушистой белой твердой дисоли ТФУ.

Отношение изомеров А/В=99,4/0,6.

Суммарный выход после двух процессов хроматографии: 53,8%.

Выход аминовосстановления: 28,7%.

VI) Шестая стадия. Регенерация основания.

1-[4-[(2-Аминоил)амино]-Х2-[[4'-(октилокси)[1,1'-бифенил]-4-ил]карбонил]-Е-орнитин]-4-[4-(4гидроксифенил)-Е-треонин]-5-Е-серин эхинокандин В.

14,37 г соединения, полученного выше, в форме лиофилизированной ди-трифторацетатной соли, растворяют в 143,7 мл воды. Перемешивание осуществляют в течение 15 мин в атмосфере азота и добавляют 57,5 мл насыщенного водного раствора бикарбоната натрия в течение 15 мин при температуре окружающей среды. Перемешивание осуществляют в течение 17 ч. Добавляют 430 мл смеси этилацетат/метанол 8/2, и осуществляют перемешивание в течение 15 мин. Верхнюю органическую фазу декантируют, и водную фазу повторно экстрагируют 288 мл смеси этилацетат (8)-метанол (2). Органические фазы объединяют, осторожно декантируют и дистиллируют досуха в вакууме при температуре, не превышающей 35°С. К сухому экстракту добавляют 143,7 мл воды, и суспензию перемешивают в течение 30 мин, с последующим фильтрованием и промывкой водой, до тех пор, пока фторидов больше не останется. После сушки твердого продукта в вакууме при 40°С получают 10,91 г ожидаемого продукта в форме белого порошка.

Выход: 91,6%.

Микроанализ: (вода: 8,8%)

VII) Седьмая стадия.

Преобразования в форму соли (хлористо-водородной кислоты).

Дигидрохлорид 1-[4-[(2-аминоил)амино]-Х2-[[4'-(октилокси)[1,1'-бифенил]-4-ил]карбонил]-Е-орнитин]-4-[4-(4-гидроксифенил)-Е-треонин]-5-Е-серин эхинокандина В.

10,53 г соединения, полученного на предыдущей стадии, растворяют в 263 мл метанола, при этом перемешивая в течение 30 мин при температуре окружающей среды с последующим фильтрованием и промывкой, дважды по 31,6 мл метанола. Добавляют 2,1 мл 36% хлористо-водородной кислоты при перемешивании в атмосфере азота при температуре окружающей среды. Перемешивание осуществляют в течение 30 мин, с последующей дистилляцией досуха в вакууме при температуре, не превышающей 35°С. Сухой экстракт извлекают 105,3 мл диизопропилоксида. Полученную суспензию перемешивают в течение 2 ч с последующим фильтрованием и промывкой, дважды по 21,1 мл диизопропилоксида. После

- 10 007964 сушки твердого продукта в печи в вакууме, при 40°С, получают 10,52 г ожидаемого продукта в форме белого порошка.

Выход: 93,7%.

Микроанализ: (вода: 5,75%)

VIII) Восьмая стадия.

Кристаллизация соли хлористо-водородной кислоты.

Дигидрохлорид 1-[4-[(2-аминоил)амино]-Х2-[[4'-(октилокси)[1,1'-бифенил]-4-ил]карбонил]-Ь-орнитин]-4-[4-(4-гидроксифенил)-Ь-треонин]-5-Ь-серин эхинокандина В.

2,75 г соединения, полученного в соответствии со стадией VII, растворяют в смеси 235,4 мл ацетонитрила и 14,8 мл деминерализованной воды, при этом нагревая с обратным холодильником (77,4°С). Перемешивание осуществляют в течение 15 мин при 77°С, затем реакционную среду охлаждают до +50°С в течение 45 мин. Инициирование осуществляют с помощью 41,25 мг кристаллизованного соединения с последующим равномерным охлаждением до 20°С в течение 30 мин и перемешиванием в течение 2 ч 15 мин, давая возможность для развития кристаллизации. Суспензию концентрируют в вакууме до остаточного объема 55 мл, при этом позволяя температуре расти от 5 до 20°С. Повторно устанавливают нормальное давление азота с последующим охлаждением до 0°С, в течение 20 мин перемешиванием при 0°С в течение 17 ч, фильтрованием в атмосфере азота и промывкой 11 мл ацетонитрила. После сушки кристаллизованного твердого продукта в сушильном шкафу, в вакууме и при 40°С в течение 24 ч получают 2,29 г ожидаемого продукта в форме белого кристаллического твердого продукта.

Выход: 83,3%.

ВЭЖХ: К1=5,8 (изомер А); К1=7,1 (изомер В).

Кгошазй С18, 15 см, 4,6 мм, 5 мкм

Подвижная фаза: ацетонитрил-вода-ТФУ 50/50/0,1 210 нм, 35°С, 1 мл/мин.

ЯМР: СИС1₃.

9,07 (м) 1Н; 8,48 (д, л=8) 1Н; 8,00 (д, л=8) 2Н; 7,96 (д, л=8,5) 2Н; 7,71 (д, л=8,5) 2Н; 7,64 (д, л=8,5) 2Н; 7,60 (д, л=9) 1Н; 7,37 (д, л=9,5) 1Н; 7,02 (д, л=8,5) 2Н; 6,97 (д, л=8,5) 2Н; 6,65 (д, л=8,5) 2Н; 4,90 (м) 1Н; 4,77 (м) 1Н; 4,66 (м) 1Н; 4,45 (м) 1Н; 4,42 (м) 1Н; 4,39 (м) 1Н; 4,34 (с) 1Н; 4,26 (м) 1Н; 4,22 (м) 1Н; 4,08 (м) 1Н; 4,01 (т, л=6,5) 2Н; 3,88 (м) 3Н; 3,70 (м) 21Н; 3,51 (м) 2Н; 3,48 (м) 1Н; 3,31 (м) 2Н; 3,28 (м) 1Н; 3,16 (м) 2Н; 2,53 (дд, ]=6 и 13,5) 1Н; 2,44 (дд, л=7,5 и 13,5) 1Н; 2,27 (м) 1Н; 2,25 (м) 1Н; 2,15 (м) 2Н; 1,94 (м) 1Н; 1,74 (м) 2Н; 1,44 (м) 2Н; 1,22-1,40 (м) 8Н; 1,13 (д, л=6) 3Н; 0,99 (д, л=6,5) 3Н; 0,88 (т, л=7).

Пример 2. Фармацевтическая композиция.

Изготавливают таблетки, содержащие

Продукт примера 1 150 мг

Наполнитель, §.ц.£ 1 г

Составляющие наполнителя: крахмал, тальк, стеарат магния.

в которой К представляет собой линейную или разветвленную, или циклическую цепь, содержащую до 30 атомов углерода, необязательно, содержащую один или несколько гетероатомов и один или несколько

- 11 007964 гетероциклов, включающий в себя следующие стадии:

подвергают действию кислоты формулы К-СО₂Н, указанная кислота находится, если это приемлемо, в выделенной или невыделенной активированной форме, с получением соединения формулы (III)

Ь) если это приемлемо, соединение формулы (III) подвергают реакции алкилирования спиртом по положению 5, под действием спирта формулы А1к-ОН, в присутствии РРТ8, А1к представляет собой алкильный радикал, содержащий 1-4 атома углерода, с получением соединения формулы (III')

ά) соединение формулы (IV) подвергают реакции восстановительного аминирования под действием этилендиамина в присутствии восстановительного агента, такого как КаВН₃СК, в присутствии кислоты Льюиса, или ΝαΒΙ 1(ОСОК'), где ОСОК' представляет собой Вос-Ь-Рго, Βζΐ-Ь-Рго или любую другую оптически активную аминокислоту, а также любую другую хиральную или нехиральную карбоновую кислоту, с получением соединения формулы (I), как определено выше, содержащего преимущественно один из активных изомеров, затем указанное соединение формулы (I) подвергают, если это приемлемо, и в любом приемлемом

- 12 007964 порядке, одной или нескольким из следующих далее операций: хроматографированию; кристаллизации; действию основания; преобразованию в форму соли.

Claims

3. Способ по п.1, в котором соединения формулы (I), (III), (III'), (IV) содержат радикал К, представляющий собой следующую группу:
4. Способ получения соединений формулы ^а) включающий в себя следующие стадии:

а) соединение формулы (II) подвергают действию кислоты формулы С₈Н₁₇-О-Рй-Рй-СО₂Н, указанная кислота находится, если это приемлемо, в активированной, выделенной или невыделенной форме, с получением соединения формулы (Ша)

- 13 007964

Ь) если это приемлемо, соединение формулы (Ша) подвергают реакции алкилирования спиртом по положению 5, под действием метанола, в присутствии ΡΡΤδ, с получением соединения формулы (Ша')

с) соединение формулы (Ша) или (Ша') подвергают реакции дегидратации, с получением соединения формулы ^να)

ά) соединение формулы ^να) подвергают реакции восстановительного аминирования под действием этилендиамина, в присутствии восстановительного агента, такого как ЫаВН₃СЫ, связанного с Т1С1₄, ЫаВН(Вос-Ь-Рго)₃ или ЫаВН(В71-Ь-Рго)₃, с получением соединения формулы О^а), как определено выше, преимущественно один из активных изомеров, указанное соединение формулы ^а) подвергают одной или нескольким из следующих далее операций, в приемлемом порядке:

хроматографираванию; кристаллизации; действию основания;

преобразованию в форму соли под действием хлористо-водородной кислоты.
5. Способ по п.4, отличающийся тем, что соединение формулы ^а) последовательно подвергается следующим операциям:

a) очистке хроматографией на силикагеле, затем хроматографией с обращенной фазой с использованием смеси органических растворителей, воды и трифторуксусной кислоты с получением соли трифторуксусной кислоты соединения формулы ^а);

b) действию основания, например, действию водного раствора бикарбоната натрия, с получением соединения формулы ^а) в форме основания;

c) преобразованию в форму соли под действием хлористо-водородной кислоты, с получением соответствующей соли, а именно, дигидрохлорида соединения формулы ^а).
6. Способ по любому из пп.1-5, отличающийся тем, что реакцию активирования кислоты осуществляют в присутствии пентафторфенола, Ν-гидроксисукцинимида или, необязательно, Νгидроксибензотриазола.
7. Способ по любому из пп.1-5, отличающийся тем, что реакцию ацилирования в присутствии выделенной активированной кислоты осуществляют в присутствии диизопропилэтиламина.

- 14 007964
8. Способ по любому из пп.1-5, отличающийся тем, что реакцию активирования, а затем реакцию ацилирования в присутствии невыделенной активированной кислоты осуществляют в присутствии Νметилпирролидона и ΌΜΤΜΜ.
9. Способ по любому из пп.1-5, отличающийся тем, что реакцию дегидратации осуществляют в присутствии ΑΙΒΒ и, если это приемлемо, Мд1₂.
10. Способ по любому из пп.1-7, отличающийся тем, что реакцию дегидратации осуществляют в присутствии НВг-АсОН и Мд1₂.
11. Способ по пп.9 и 10, отличающийся тем, что продукт, получаемый от дегидратации, очищают кристаллизацией из смеси ДМФ/ацетон или ДМФ/АсОЕ1.
12. Способ по любому из пп.1-5, отличающийся тем, что реакцию восстановительного аминирования осуществляют в присутствии восстановительного агента, выбранного из ЖВН₃СН связанного с ТЮЕ, ЖВН(Вос-Е-Рго)з и ΝαΒΗ(Βζί-Ε-ΡΓθ)3.
13. Способ получения соединения формулы (III) или (111а) ацилированием соединений формулы (II), как определено в любом из пп.1-4 и 6-8.
14. Способ получения соединения формулы (IV) или ^να) дегидратацией соединений формулы (III), (III'), (Ша) или (Ш'а), как определено в любом из пп.1-4 и 9-11.
15. Способ получения соединения формулы (I) или (Ш) восстановительным аминированием соединений формулы (IV) или ^να), как определено в любом из пп.1-4 и 12.
16. Дигидрохлорид 1-[4-[(2-аминоэтил)амино]-Ш-[[4'-(октилокси)[1,1'-бифенил]-4-ил]карбонил]-Еорнитин]-4-[4-(4-гидроксифенил)-Ь-треонин]-5-Ь-серинэхинокандина В в 48 или 4К форме или в форме смеси стереоизомеров.
17. Дигидрохлорид 1-[4-[(2-аминоэтил)амино]-Ш-[[4'-(октилокси)[1,1'-бифенил]-4-ил]карбонил]-Еорнитин]-4-[4-(4-гидроксифенил)-Ь-треонин]-5-Ь-серинэхинокандина В в форме активного изомера А, который может быть получен способом, описанным в пп.1-15.
18. Применение дигидрохлорида 1-[4-[(2-аминоэтил)амино]-Ш-[[4'-(октилокси)[1,1'-бифенил]-4ил]карбонил]-Е-орнитин]-4-[4-(4-гидроксифенил)-Е-треонин]-5-Ь-серинэхинокандина В в форме 4К или 48 изомера или в виде смеси указанных стереоизомеров в качестве лекарственного средства.
19. Применение дигидрохлорида 1-[4-[(2-аминоэтил)амино]-Ш-[[4'-(октилокси)[1,1'-бифенил]-4ил]карбонил]-Е-орнитин]-4-[4-(4-гидроксифенил)-Е-треонин]-5-Ь-серинэхинокандина В в виде активного изомера А в качестве противогрибкового лекарственного средства.
20. Фармацевтическая композиция, содержащая дигидрохлорид 1-[4-[(2-аминоэтил)амино]-Ш-[[4'(октилокси)[1,1'-бифенил]-4-ил]карбонил]-Е-орнитин]-4-[4-(4-гидроксифенил)-Е-треонин]-5-Ьсеринэхинокандина В, как определено в п.16 или 17, и фармацевтически приемлемый носитель.
21. Промежуточные соединения формул (III') или (Ш'а), как определено в пп.1 и 6.
22. Промежуточные соединения формул (IV), К является таким, как определено в любом из пп.1-2, или ^ν'α), где К представляет собой Рй-Рй-ОС₈Н₁₇