WO2006107106A1

WO2006107106A1 - 小胞アセチルコリントランスポーターに対するリガンド

Info

Publication number: WO2006107106A1
Application number: PCT/JP2006/307418
Authority: WO
Inventors: Kazuhiro Shiba; Kiichi Ishiwata; Hideo Tsukada; Shingo Nishiyama
Original assignee: National University Corporation Kanazawa University; Tokyo Metropolitan Foundation For Research On Aging And Promotion Of Human Welfare; Hamamatsu Photonics K.K.
Priority date: 2005-04-01
Filing date: 2006-03-31
Publication date: 2006-10-12
Also published as: EP1867634A1; JP4985977B2; EP1867634A4; DE602006014522D1; JPWO2006107106A1; US20090163461A1; EP1867634B1

Abstract

ポジトロン放出断層撮影法(positron　cmission　tomography;PET)に用いることができる、VAChTをマッピングするための試薬(ラジオトレーサー)などとして有用な、式(I):(I)[式中、R1およびR2は、明細書中と同義を表す。]で表される新規化合物またはその塩、および該化合物の製造方法を提供する。また、前記化合物を含む、コリン作動性神経変性障害(例えば、アルツハイマー病、記憶障害、学習障害、統合失調症、認知機能障害、多動性障害、不安神経症、うつ病、無痛覚症、パーキンソン氏病など)などを診断するための診断剤を提供する。

Description

明細書

小胞ァセチルコリントランスポーターに対するリガンド

技術分野

本発明は、小胞アセチルコリントランスポーター（vesicular acetylcholine transporter；以下、 VAC hTと略記する。）に対して特異的な結合親和性を有する化合物（リガンド）に関する。

背景技術

2— （ 4—フエ二ルビペリジノ）ーシクロへキサノール（ベサミコール (vesamicol))は、シナプス前コリン作動性-ユーロン (presynaptic cholinergic neuron)中の VAC h Tに対して、強い結合親和性を有することが知られている。そのため、多くのべサミコールアナログが、コリン作動性神経変性障害

(cholinergic neurodegenerative disorder) (例 χΐί 、ァノレッノヽイマ一;)丙) 断するための診断剤として開発されている。例えば、べサミコールのベンゼン環部分のメタ位にヨウ素を導入したべサミコールアナログ（（一）一m—ョードべサミコール）は、 VAChTマッピング剤として有用であることが報告されている。しかしながら、べサミコールおよびそのアナログのいくつかは、 VAC h T以外に、シグマ受容体（ひ一 1 および σ— 2) を含む異種受容体にも結合することが報告されている。

S h i b aらは、べサミコールのベンゼン環部分のオルト、メタまたはパラ位にヨウ素を導入したべサミコールアナログのェナンチォマーについて、インビト口での VAC h Tおよびシグマ受容体に対する親和性を調査した。その結果、 (一）一 o—ョードべサミコールが、他のアナログと比較して、（一）一べサミコ一ルと同等に、 V A C h Tに対する高い結合親和性およびシダマ受容体に対する低い結合親和性を有することを明らかにした（例えば、 S h i b aら、 Life Sciences 71 (2002) 1591 - 1598を参照のこと）。

さらに、 S h i b aらは、（一）一 [¹²⁵ I ] — o—ョードべサミコールについて、 VAC h Tをマツビングするためのラジオトレーサーとしての能力をラットで評価した。その結果、（―） — ο—ョードべサミコールは、 VAC hTマツピング剤として有用であることが明らかになった（例えば、 Sh i b aら、 Annals of Nuclear Medicine Vol. 17， No.6, 451-456, 2003を参照のこと）。

発明の開示

(-) 一 o—ョードべサミコールをヒト患者に利用する場合、前述の（一）一

[¹²⁵ I] _o—ョードべサミコールより短い半减期を有する（一）一 [¹²³1] — o—ョードべサミコールが、単光子放出断層撮影法（single photon emission computed tomography; 以下、 SPECT と略記する。）を用いた V A C h Tマツピング剤として期待できる。しかし、 S PECTは、他の撮影法と比較して、汎用性に優れているが、感度、解像度、定量性の点において、あまり優れているとはいえない。例えば、 SPECTでは、初期の神経変性障害における脳内のわずかな神経化学的変化を捉えることが困難である。

そこで、本発明者らは、 S PECTよりも、感度、解像度、定量性に優れているポジトロン放出断層撮影法（positron emission tomography; 以下、 PET と略記する。）を用いて VAC hTをマッピングすることに着目した。

このことから、本発明は、 S PECTよりも、感度、解像度、定量性に優れた PETを用いて、 VAC h Tをマッピングするための試薬（ラジオトレーサー）として有用な新規化合物およびその製造方法、並びに V A C h Tの減少により特徴付けられるコリン作動性神経変性障害（例えば、ァルツハイマー病、記憶障害、学習障害、統合失調症、認知機能障害、多動性障害、不安神経症、うつ病、無痛覚症、パーキンソン氏病など）などを診断するための上記新規化合物を含む診断剤を提供することを目的とする。

本発明者らは、上記課題を解決するため鋭意研究を重ねた結果、（一） —ベサミコールのベンゼン環部分のオルト位にメチル基を導入した新規べサミコールアナログ（すなわち、（一）一 o—メチルべサミコール）力 (-) 一べサミコールに匹敵する、 V A C h Tに対する高い結合親和性およびシダマ受容体に対する低い結合親和性を有することを見出し、この（一）一 o _メチルべサミコールのメチル基部分として、ポジトロン核種である¹¹ Cで標識した¹¹ CH₃基を導入した新規化合物（すなわち、（一）一 [^C] _ o—メチルべサミコール）を、 PET 用の診断剤として利用することを着想し、さらに検討を進めて、本発明を完成するに至った。

即ち、本発明は以下に関する。

(1) 以下の式（I ) ：

[式中、 R¹および R²は、同一または異なって、水素原子、ハロゲン原子、水酸基、アミノ基、ァシル基、カルボキシ基、。 ₆アルコキシ基、 C^eアルキル基、またはフエ二ル基を表す。あるいは、 R¹および R²は、一緒になつて、隣接する炭素原子と共に環を形成してもよい（該環は、ハロゲン原子、水酸基、アミノ基、 Ci- 6ァシル基、カルボキシ基、 C^ ₆アルコキシ基、 C — ₆アルキル基からなる群より選択される 1個または 2個以上の置換基を有していてもよい)。]

で表される化合物またはその塩。

(2) 前記式中の R¹および R²が水素原子である、上記（1)記載の化合物（すなわち、（一）一 ¹。] — o—メチルべサミコール）またはその塩。

(3) 以下の式（I I ) :

[式中、 R¹および R²は、同一または異なって、水素原子、ハロゲン原子、水酸基、アミノ基、じい ₆ァシル基、カルボキシ基、 ₆アルコキシ基、 Ci-eアルキル基、またはフエ二ル基を表す。あるいは、！^ぉょび ^ま、一緒になつて、隣接する炭素原子と共に環を形成してもよい（該環は、ハロゲン原子、水酸基、アミノ基、 C i— 6ァシル基、カルボキシ基、 C -eアルコキシ基、 C ^eアルキル基からなる群より選択される 1個または 2個以上の置換基を有していてもよい)。]

で表される化合物またはその塩を、 ^ CHa l と反応させる工程を包含する、以下の式（ I ) ：

[式中、 R ¹および R²は、前記式（ I I ) における R ¹および R²と同義である。] で表される化合物またはその塩の製造方法。

(4) 前記式中の R ¹および R²が水素原子である、上記（3)記載の製造方法。

( 5) 上記（1 ) または（2) に記載の化合物またはその塩を含む、コリン作動性神経変性障害の診断剤。

(6) 前記コリン作動性神経変性障害が、アルツハイマー病、記憶障害、学習障害、統合失調症、認知機能障害、多動性障害、不安神経症、うつ病、無痛覚症、またはパーキンソン氏病である、上記（5 ) に記載の診断剤。

( 7) 以下の式（I I ) :

[式中、 R¹および R²は、同一または異なって、水素原子、ハロゲン原子、水酸基、アミノ基、じい ₆ァシル基、カルボキシ基、 C ^ ₆アルコキシ基、 C , ₆アルキル基、またはフエ二ル基を表す。あるいは、 R ¹および R²は、一緒になつて、隣接する炭素原子と共に環を形成してもよい（該環は、ハロゲン原子、水酸基、アミノ基、ァシル基、カルボキシ基、 C^ ₆アルコキシ基、 ₆アルキル基からなる群より選択される 1個または 2個以上の置換基を有していてもよい)。]

で表される化合物またはその塩。

(8) 前記式中の R¹および R²が水素原子である、上記（7) 記載の化合物またはその塩。

(9) 以下の式（l a) :

[式中、 1^ぉょび1 ²は、同一または異なって、水素原子、ハロゲン原子、水酸基、アミノ基、 C - 6ァシル基、カルボキシ基、アルコキシ基、 Ci- eアルキル基、またはフエ二ル基を表す。あるいは、 R¹および R²は、一緒になつて、隣接する炭素原子と共に環を形成してもよい（該環は、ハロゲン原子、水酸基、アミノ基、じァシル基、カルボキシ基、 — ₆アルコキシ基、 Ci— ₆アルキル基からなる群より選択される 1個または 2個以上の置換基を有していてもよい)。]

で表される化合物またはその塩。

(10) 前記式中の R¹および R²が水素原子である、上記（9) 記載の化合物 (すなわち、（一） — o—メチルべサミコール）またはその塩。

(1 1) コリン作動性神経変性障害の診断剤である、以下の式（ I ) ：

[式中、 R¹および R²は、同一または異なって、水素原子、ハロゲン原子、水酸基、アミノ基、 Ci- 6ァシル基、カルボキシ基、 C — ₆アルコキシ基、 Ci-eアルキル基、またはフエ-ル基を表す。あるいは、 R¹および R²は、一緒になつて、隣接する炭素原子と共に環を形成してもよい（該環は、ハロゲン原子、水酸基、アミノ基、じ ₆ァシル基、カルボキシ基、じい ₆アルコキシ基、アルキル基からなる群より選択される 1個または 2個以上の置換基を有していてもよい)。]

で表される化合物またはその塩。

(1 2) 前記式中の R¹および R ²が水素原子である、上記（1 1) 記載の化合物（すなわち、（―） ― [^C] 一 o—メチルべサミコール）またはその塩。

(1 3) 前記コリン作動性神経変性障害が、アルツハイマー病、記憶障害、学習障害、統合失調症、認知機能障害、多動性障害、不安神経症、うつ病、無痛覚症、またはパーキンソン氏病である、上記（1 1) または（1 2) に記載の化合物またはその塩。

(14) コリン作動性神経変性障害の被診断動物に、以下の式（ I ) ：

[式中、 R¹および R²は、同一または異なって、水素原子、ハロゲン原子、水酸基、アミノ基、 C - 6ァシル基、カルボキシ基、 C^eアルコキシ基、じアルキル基、またはフエ二ル基を表す。あるいは、 R¹および R²は、一緒になつて、隣接する炭素原子と共に環を形成してもよい（該環は、ハロゲン原子、水酸基、アミノ基、 Ct- 6ァシル基、カルボキシ基、 C - 6アルコキシ基、 C^ ₆アルキル基からなる群より選択される 1個または 2個以上の置換基を有していてもよい)。]

で表される化合物またはその塩を投与し、コリン作動性神経変性障害部の像を撮影することからなるコリン作動性神経変性障害の画像診断方法。

(1 5) 前記式中の R¹および R²が水素原子である、上記（14) 記載のコリン作動性神経変性障害の画像診断方法。

(16) 前記コリン作動性神経変性障害が、アルツハイマー病、記憶障害、学習障害、統合失調症、認知機能障害、多動性障害、不安神経症、うつ病、無痛覚症、またはパーキンソン氏病である、上記（14) または（1 5) に記載のコリン作動性神経変性障害の画像診断方法。

図面の簡単な説明

図 1は、実施例 4における、本発明の（―）一 [HC] —o—メチルベサミコ一ルの合成に用いる装置の模式図を示す。図 1において、 TGはターゲット（この中で、 [HC] C0₂が¹⁴ N (Ρ， α) ¹¹ C核反応により産生される）を表し、 ME Iは ¹。] ヨウ化メチル合成装置を表し、 VA 1は反応試薬を注入するシリンジを表し、 VA 2は HP LC用溶離液を注入するシリンジを表し、 RV 1は反応容器を表す。

図 2は、実施例 7における、本発明の（一）一 ¹。] 一 o_メチルベサミコ一ルを用いた、ラット脳のェキソビボオートラジオグラフィ一の結果を示す写真である。図 2の上段は（一） ― ¹。] — o _メチルべサミコール注射の 1 5分後に屠殺したラットの脳の 4切片の写真であり、図 2の下段は（一）一 ¹。] 一 o—メチルべサミコール注射の 30分後に屠殺したラットの脳の 4切片の写真である。

図 3は、図 2の上段の写真の模式図であって、ラットの脳の各部位を矢印で示している。

図 4は、実施例 8における、本発明の（―）一 [^C] —o—メチルベサミコ一ル投与後 1 5分から 60分で得られた画像データを画像化した、覚醒サルの脳 (Conscious Monkey Brain) の PET画像写真である。左図は（一）一 ["C] 一 o—メチルべサミコール投与後の健常サルの脳画像であり、右図は（一）一 [：¹ ¹ C] _o—メチルべサミコール投与後の神経破壊したサルの脳画像である。各写真中左が左脳、右が右脳である。大脳皮質を矢印で示す。当該画像写真は本来カラー写真であり、赤い領域は（一）一 [nc] — o—メチルべサミコールが多く集積している領域であり、すなわち V A C h T密度が高い領域であることを表す。右図のモデルサル（神経破壊サル）の右脳（破壊側）では神経破壊により、 VAChTの密度が低くなつており、（一）一 [H C] _o—メチルベサミコ一ルの集積が少なく、結果としてその領域の VAC hT密度が少ないことを示す緑色になっている。例えば、アルツハイマー病の場合においても、 VAChT密度が少なくなっていると考えられることから、緑色のような欠損画像として現れ、診断に利用できる。

図 5は、図 4の赤い領域を明確にするため図 4の写真を作図し、赤い領域を黒く塗りつぶして示した概略図である。

発明の詳細な説明

本発明は、 VAChTに対して特異的な結合親和性を有する、ポジトロン核種である¹¹ Cで標識された以下の式（ I) ：

[式中、 R¹および R ²の定義は前述のとおりである。]

で表される化合物（以下、化合物（I) という。）またはその塩、を提供する。上記式（1 )、および後述の式（ I I ) 並びに式（l a) 中、 R¹および R²は、同一または異なって、水素原子、ハロゲン原子、水酸基、アミノ基、 C^eァシル基、カルボキシ基、 C ₆アルコキシ基、 Ci- 6アルキル基、またはフエニル基を表す。好ましくは、 ¹ぉょび!^²は、水素原子である。

ハロゲン原子としては、例えば、フッ素、塩素、臭素、ヨウ素などが挙げられる。

Cj- 6ァシル基としては、例えば、ホルミル、および、ァセチル、プロピオ- ル、ブチリル、イソブチリル、ビバロイル、バレリル、イソバレリル、へキサノィルなどの C _ ₅アルキル一カルボニル基などが挙げられる。

アルコキシ基としては、炭素数 1〜6のアルコキシ基、例えば、メトキシ、エトキシ、プロボキシ、イソプロボキシ、ブトキシ、イソブトキシ、 sec -ブトキシ、ペンチルォキシ、へキシルォキシなどが挙げられる。

Cj- 6アルキル基としては、炭素数 1〜6のアルキル基、例えば、メチル、ェチノレ、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソプチノレ、 s e cーブチル、 t e r t—プチル、ペンチル、へキシルなどが挙げられる。

あるいは、上記式（ 1 )、および後述の式（ I I) 並びに式（l a) 中、 R¹および R²は、一緒になつて、隣接する炭素原子と共に環を形成してもよい。このような環としては、例えば、シクロペンチル、シクロへキシル、ベンゼン環、および 5または 6員の芳香族複素環などが挙げられる。

これらの環は、ハロゲン原子、水酸基、アミノ基、。ァシル基、カルボキシ基、 C^eアルコキシ基、 C - 6アルキル基からなる群より選択される 1個または 2個以上の置換基を有していてもよい。ここで、ハロゲン原子、 C^eァシル基、じ ₆アルコキシ基、および C ! - 6アルキル基は、上記で定義したとおりである。

化合物（I) の塩としては、薬学的に許容される塩が好ましく、例えば、無機塩基との塩、有機塩基との塩、無機酸との塩、有機酸との塩、塩基性または酸性アミノ酸との塩などが挙げられる。

塩を形成する無機塩基としては、例えば、ナトリウム、カリウムなどのアル力リ金属；カルシウム、マグネシウムなどのアルカリ土類金属；ならびにアルミ二ゥム、アンモニゥムなどが挙げられる。塩を形成する有機塩基としては、例えば、トリメチルァミン、トリエチルァミン、ピリジン、ピコリン、エタノールァミン、ジエタノールァミン、トリエタノールァミン、ジシクロへキシルァミン、 Ν', N，ージベンジルエチレンジァミンなどが挙げられる。塩を形成する無機酸としては、例えば、塩酸、臭化水素酸、硝酸、硫酸、リン酸などが挙げられる。塩を形成する有機酸としては、例えば、ギ酸、酢酸、トリフルォロ酢酸、フマール酸、シュゥ酸、酒石酸、マレイン酸、クヱン酸、コハク酸、リンゴ酸、メタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、 p—トルエンスルホン酸などが挙げられる。塩を形成する塩基性アミノ酸としては、例えば、アルギニン、リジン、オル二チンなどが挙げ - られ、塩を形成する酸性アミノ酸としては、例えば、ァスパラギン酸、グルタミン酸などが挙げられる。

化合物（ I ) は、当該分野で公知の方法によって、その薬学的に許容される塩にすることができる。

化合物（ I ) またはその塩は、以下の製造方法 1、あるいは当該分野で公知の有機化学合成方法を適宜使用することにより製造することができる。

(製造方法 1 )

(スキーム 1一 1 )

スキーム 1一 1の各工程において用いられる試薬などをそれぞれ以下に示す。

Ife a ：

工程 b (一）ージー p—トルオイル一 L—酒石酸；

工程 c HN0₃, H₂ S 0₄ ；

工程 d F e , HC 1 ；

工程 e N a NO₂, HC 1 , K I ；

工程 f [(CH₃) ₃S n] ₂，触媒

各式中、 1^ぉょび11²は、上記で定義したとおりである。スキーム 1— 1において、式（A 2) で表される化合物（以下、化合物（A2) という。）の合成は、例えば、 Shibaら、 Life Sciences 71 (2002) 1591- 1598および Shiba ら、 Annals of Nuclear Medicine Vol. 17, No.6, 451-456, 2003に記載される方法に従って、 4—フエ二ルビペリジン（式（A 1) で表される化合物）から a〜eの工程を経て合成できる。

スキーム 1一 1において、化合物（A 2) から式（ I I) で表される化合物（以下、化合物（I I ) という。）の合成は、ハロゲン一金属交換アルキル化反応によつて行うことができる。この反応は、通常、無水溶媒中、不活性ガス（例えば、窒素、アルゴンなど）気流下にて、触媒の存在下で、化合物（A2) とへキサメチルニスズとを、通常、約 1〜10分間、好ましくは、約 3〜5分問攪拌した後、さらに約 1 5〜20時間、使用する溶媒に応じて一 1 5°C〜200°Cの間の任意の適切な温度で反応させることにより行われる。

この反応に用いられる溶媒としては、反応を阻害しない溶媒であれば特に限定はなく、例えば、トルエン、テトラヒドロフラン（THF)、トリェチルァミン、へキサンおよびこれらの混合溶媒などが挙げられる。好ましい溶媒としては、トルェンが挙げられる。

この反応における溶媒の使用量は、化合物（A 2)に対して、通常、約 20〜5 0重量倍、好ましくは、約 35〜45重量倍である。

この反応に用いられる触媒としては、例えば、テトラキス（トリフエ-ルホスフィン）パラジウム（0) ( (P h₃P) ₄P d (0))、トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（P d₂ (d b a ) ₃)、トリー o— トルィルホスフィン ((o -T o 1 ) ₃P) 等が挙げられるが、これらに限定されない。これらの触媒は、 2種以上を組み合わせて用いてもよい。好ましい触媒としては、テトラキス (トリフエニルホスフィン）パラジウム（0) が挙げられる。

この反応に用いられる触媒の使用量は、化合物（A2) に対して、通常、約 0. 01〜 10倍モル、好ましくは、約 0. 05〜0. 1倍モルである。

(スキーム 1一 2)

各式中、尺ェぉょび尺ま、上記で定義したとおりである。

スキーム 1 _ 2に示す化合物（I ) の合成は、通常、化合物（I I) を、溶媒中、触媒の存在下で、 ¹。] ヨウ化メチルと反応させることにより行われる。この反応に用いられる溶媒としては、反応を阻害しない溶媒であれば特に限定はなく、例えば、 N, N—ジメチルホルムアミド（DMF)、ジメチルスルホキシド（DMSO)、ァセトニトリル、 1， 4_ジォキサン、キシレン、 1, 2—ジメトキシェタン、ジクロロメタンおよびこれらの混合溶媒などが挙げられる。好ましい溶媒としては、 DMFが挙げられる。

この反応における溶媒の使用量は、化合物（I I)に対して、通常、約 250〜 1000重量倍、好ましくは、約 400〜600重量倍である。

この反応に用いられる触媒としては、例えば、トリス（ジベンジリデンァセトン）ジパラジウム（P d₂ (d b a) 3)、トリー o— トルィルホスフィン（（o— T o 1 ) ₃P)、テトラキス（トリフエニルホスフィン）パラジウム（P d (P P h₃) ₄)、トリー o— トルィルホスフィンパラジウム（P d [P (o— To 1 ) 3] ₂)、塩化第一銅（Cu C l )、炭酸カリウム（K₂C0₃) 等が挙げられるが、これらに限定されない。

好ましい触媒としては、トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウムと、トリ一 o— トルィルホスフィンと、塩化第一銅（CuC 1 ) と、炭酸カリゥム（K ₂ C〇₃) の組合せが挙げられる。

この反応に用いられる触媒の使用量は、化合物（ I I ) に対して、通常、約 0. 1〜 150倍モル、好ましくは、約 1〜 100倍モルである。

この反応に用いられる [^C] ヨウ化メチルの使用量は、放射能量として、 0. 5GB q〜； 100GB q、好ましくは 10GB q〜50GB qである。メチル化反応の温度は、通常、約 40〜90°C、好ましくは、約 70〜85°C である。反応時間は、通常、約 3〜10分程度である。

化合物（ I )またはその塩は、 VAC hTに対して特異的な結合親和性を有し、かつ、 P ETにおいて検出可能なポジト口ン核種である¹¹ Cで標識されているため、ヒトまたは非ヒト哺乳動物（サル、ゥマ、ゥシ、ブタ、ャギ、ヒッジ、ィヌ、ネコ、モルモット、ラット、マウス、ハムスターなど）における、 PETを用いた VAC h Tをマッピングするための試薬（ラジオトレーサー）として有用である。

化合物（ I) またはその塩はまた、ヒトまたは非ヒト哺乳動物（サル、ゥマ、ゥシ、ブタ、ャギ、ヒッジ、ィヌ、ネコ、モノレモット、ラット、マウス、ハムスターなど）における、 VAC hTの減少により特徴付けられるコリン作動性神経変性障害を診断するための診断剤として有用である。

コリン作動性神経変性障害としては、 VAC h Tの減少により特徴付けられる疾患、例えば、アルツハイマー病、記憶障害、学習障害、統合失調症、認知機能障害、多動性障害、不安神経症、うつ病、無痛覚症、パーキンソン氏病などが挙げられる。

化合物（I ) またはその塩を診断剤として用いる場合、診断に効果的な量の化合物（I) またはその塩が、被験体へ投与、好ましくは、静脈内投与される。診断に効果的な量とは、インビボで標識の局在化およびその検出を可能にするのに十分な量のことを意味する。

化合物（ I) またはその塩を静脈内投与のための注射剤として用いる場合、化合物（I ) またはその塩を、安定化剤（例えば、ァスコルビン酸）、可溶化剤（例えば、 β—シクロデキストリン類など）、分散剤（例えば、 Twe e n 80、力ルボキシメチルセルロース、アルギン酸ナトリウムなど）、保存剤（例えば、メチノレパラベン、プロピルパラベン、ベンジルアルコール、クロロブタノールなど）、等張化剤（例えば、塩化ナトリウム、グリセリン、ソルビトール、ブドウ糖など）などと共に、常法に従って水性注射剤としてもよいし、植物油（例えば、オリーブ油、ゴマ油、ラッカセィ油、綿実油、コーン油など）、プロピレングリコールなどに、溶解、懸濁、または乳化させて油性注射剤としてもよい。

投与されるべき単位用量は、成人に用いる場合、一般的に、約 300MB q〜約 800MB q、好ましくは、約 40 OMB q〜600MB qの放射能を有する量である。また、注入する溶液の量は、約 1 Om 1〜約 2 Om 1である。

本発明の診断剤を被験体に静脈内投与した後、 30分〜 90分間の PETによるダイナミック計測をすることにより、被験体内の VAC h Tの画像化が可能となる。

本発明に用いられるポジト口ン核種である¹¹ Cは半減期が非常に短いため、 P ETによる分析または診断を行う直前に、分析または診断する現場で、化合物（ I I ) を [ c] メチル化して化合物（I) を製造して用いてもよい。

従って、本発明はまた、化合物（I ) ( [H C] 標識化べサミコール）の前駆体として、以下の式（ I I) :

[式中、 R¹および R²の定義は前述のとおりである] で表される化合物（化合物 ( I I)) またはその塩を提供する。

化合物（I I ) の塩としては、前述の化合物（ I) において例示したような塩が挙げられる。化合物（ I I ) は、当該分野で公知の方法によって、その薬学的に許容される塩にすることができる。

本発明はまた、 [U C] 標識がされていない以下の式（ l a ) :

(la)

[式中、 R¹および R²の定義は前述のとおりである。]で表される化合物（以下、化合物（ l a) という。）またはその塩を提供する。

化合物（l a) またはその塩は、以下の製造方法 la、上記製造方法 1において ^{1 J}CH₃ Iの代わりに CH₃ Iを用いる方法、あるいは当該分野で公知の有機化学合成方法を適宜使用することによって製造することができる。

(製造方法 1 a)

(スキーム la)

(la)

各式中の R¹および R²は、上記で定義したとおりである。 _A 1 k基は、低級アルキル基、好ましくは、アルキル基、より好ましくは、ェチル基を表す。 (式（a 1) で表される化合物（以下、化合物（a 1) という。）の合成） 2—ブロモベンズアルデヒドの一 B r基を、グリニャール反応により、 —CH ₃基とすることで、化合物（ώ 1) を得ることができる。この反応は、通常、不活性ガス（例えば、窒素、アルゴンなど）気流下にて、無水溶媒に溶解したマグネシゥムに、無水溶媒に溶解した 2—ブロモベンズアルデヒドを滴下し、触媒量のヨウ素を加えて、使用する溶媒に応じて— 1 5°C〜200°Cの間の任意の適切な温度で約 1〜1. 5時間反応させた後、無水溶媒に溶解したジメチル硫酸を滴下し、さらに、使用する溶媒に応じて一 15°C〜200°Cの間の任意の適切な温度で約 1. 5〜 2時間反応させることによって行われる。

この反応に用いられる溶媒としては、反応を阻害しない溶媒であれば特に限定はなく、例えば、 THF、ジェチルエーテル、ジォキサン、へキサメチルフォスフィントリアミド（HMPA)、ベンゼンおよびこれらの混合溶媒などが挙げられる。好ましい溶媒としては、 THFが挙げられる。

この反応における溶媒の使用量は、 2—プロモべンズアルデヒドに対して、通常、約 2〜 10重量倍、好ましくは約 4〜 5重量倍である。

この反応に用いられるマグネシウムの使用量は、 2—ブロモベンズアルデヒドに対して、通常、約 1. 0〜3. 0倍モル、好ましくは、約 1. 1〜1. 8倍モルである。

この反応に用いられるジメチル硫酸の使用量は、 2—ブロモベンズアルデヒドに対して、通常、約 1. 0〜5倍モル、好ましくは、約 1. 2〜 3倍モルである。必要に応じて、 2—ブロモベンズアルデヒドの一 CHO基を保護した後、ダリ二ヤール反応に供してもよレ、。

好ましくは、 2—ブロモベンズアルデヒドは、溶媒（例えば、ベンゼン）中で、エチレンダリコールおょぴ p—トルエンスルホン酸を加え、使用する溶媒に応じて _ 15°C〜200°Cの間の適切な温度で約 2〜4時間反応させてケタール体とした後、グリニャール反応に供し、その後、任意の適切な酸（例えば、塩酸）を用いて脱保護される。

(式（a 2) で表される化合物（以下、化合物（a 2) という。）の合成）化合物（a 2) は、通常、適当な溶媒中、化合物（a 1) を、任意の適切な酸 (例えば、酢酸）および塩基（例えば、ピロリジン）の存在下で、 CNCH₂C OO-A 1 k (式中、一 A 1 kは前記と同義を示す。）と反応させることにより合成される。

この反応に用いられる溶媒としては、反応を阻害しない溶媒であれば特に限定はなく、例えば、ベンゼン、トルエン、 THF、ジェチルエーテル、ァセトニトリル、 1, 4一ジォキサンおよびこれらの混合溶媒などが挙げられる。好ましい溶媒としては、ベンゼンが挙げられる。

この反応における溶媒の使用量は、化合物（a 1) に対して、通常、約 5〜1 0重量倍、好ましくは、約 7〜 9重量倍である。

この反応に用いられる酸の使用量は、化合物（a 1) に対して、通常、約 0. 2〜1. 0倍モル、好ましくは約 0. 5〜0. 7倍モルである。

この反応に用いられる塩基の使用量は、化合物（a 1) に対して、通常、約 0. 1〜し 0倍モル、好ましくは約 0. 3〜0. 6倍モルである。

この反応に用いられる CNCH₂COO— A 1 k (式中、一 A l kは前記と同義を示す。）の使用量は、化合物（a 1) に対して、通常、約 1. 0〜3. 0倍モノレ、好ましくは、約 1. 2〜1. 5倍モルである。

この反応の反応温度は、使用する溶媒に応じて一 1 5°C〜200°Cの間の適切な温度が選択され、反応時間は、通常、約 1〜5時間、好ましくは、約 2〜3時間である。

(式（a 3) で表される化合物（以下、化合物（a 3) という。）の合成）化合物（a 3) は、通常、不活性ガス（例えば、窒素、アルゴンなど）気流下にて、適当な溶媒中、化合物（a 2) を、任意の適切な塩基（例えば、 N a H) の存在下で、 C (COO-A 1 k) ₂ (式中、 — A l kは前記と同義を示す。）と反応させ、次いで、任意の適切な酸（例えば、塩酸）により処理することによつて合成される。

この反応に用いられる溶媒としては、反応を阻害しない溶媒であれば特に限定はなく、例えば、 THF、ジェチルエーテル、 1， 4一ジォキサン、ベンゼン、ァセト-トリノレ、トルエンおよびこれらの混合溶媒などが挙げられる。好ましい溶媒としては、 THFが挙げられる。

この反応における溶媒の使用量は、化合物（a 2) に対して、通常、約 3〜1 0重量倍、好ましくは、約 5〜6重量倍である。

この反応に用いられる塩基の使用量は、化合物（a 2) に対して、通常、約 1. 0〜3. 0倍モル、好ましくは、約 1. 5〜2. 5倍モルである。

この反応に用いられる C (COO-A 1 k) ₂ (式中、一A 1 kは前記と同義を示す。）の使用量は、化合物（a 2) に対して、通常、約 1. 0~3. 0倍モル、好ましくは約 2. 0〜2. 5倍モルである。

この反応に用いられる酸の使用量は、化合物（a 2) に対して、通常、約 20 〜 50倍モル、好ましくは約 30〜40倍モルである。

この反応の反応温度は、使用する溶媒に応じて一 1 5°C〜200°Cの間の適切な温度が選択され、反応時間は、合計で約 50〜90時間、好ましくは、合計で約 70〜80時間である。

(式（a 4) で表される化合物（以下、化合物（a 4) という。）の合成）化合物（a 4) は、通常、無水溶媒中で化合物（a 3) と塩化チォニルとを反応させた後、一旦溶媒を留去し、尿素を加え、次いで、無水溶媒中のナトリウムを加えて、還流することにより合成される。

この反応に用いられる溶媒としては、反応を阻害しない溶媒であれば特に限定はなく、例えば、メタノール、エタノール、イソプロピルアルコール、ァセトニトリルおよびこれらの混合溶媒などが挙げられる。好ましい溶媒としては、エタノールが挙げられる。

この反応における溶媒の使用量は、化合物（a 3) に対して、通常、約 2〜1 0重量倍、好ましくは約 4〜 5重量倍である。

この反応に用いられる塩化チォニルの使用量は、化合物（a 3) に対して、通常、約 2〜 10倍モル、好ましくは約 3〜 5倍モルである。

この反応に用いられる尿素の使用量は、化合物（a 3) に対して、通常、約 1. 1〜5. 0倍モル、好ましくは約 2. 0〜3. 0倍モルである。

この反応に用いられるナトリゥムの使用量は、化合物（a 3) に対して、通常、約 1. 1~5. 0倍モル、好ましくは約 2. 0-3. 0倍モルである。

この反応の反応温度は、使用する溶媒に応じて一 15°C〜200°Cの間の適切な温度が選択され、反応時間は、通常、約 10〜 24時間、好ましくは、約 20 〜24時間である。

(式（a 5) で表される化合物（以下、化合物（a 5) という。）の合成）化合物（a 5) は、氷冷下で、溶媒中の還元剤（例えば、 BH₃) に化合物（a 4) を加えて還流した後、さらに、必要に応じて、任意の適切な酸（例えば、塩酸）を加えて、さらに還流することにより合成される。

この反応に用いられる溶媒としては、反応を阻害しない溶媒であれば特に限定はなく、例えば、 THF、ジェチルエーテル、 1, 4—ジォキサンおよびこれらの混合溶媒などが挙げられる。好ましい溶媒としては、 THFが挙げられる。この反応における溶媒の使用量は、化合物（a 4) に対して、通常、約 10〜 20重量倍、好ましくは約 1 2〜 1 5重量倍である。

この反応に用いられる還元剤の使用量は、化合物（a 4) に対して、通常、約 1. 1〜10倍モル、好ましくは約 2〜 5倍モルである。

(式（a 6) で表される化合物（以下、化合物（a 6) という。）および化合物（ I a) の合成）

化合物（a 5) から化合物（a 6)、さらに、化合物（a 6) から化合物（ l a) への合成は、前述の製造方法 1のスキーム 1一 1に示す a〜 eの工程に従って合成できる。

化合物（ l a) の塩としては、前述の化合物（ I) において例示したような塩が挙げられる。化合物（ l a) は、当該分野で公知の方法によって、その薬学的に許容される塩にすることができる。

化合物（ l a) およびその塩は、 VAC hTに対して特異的な結合親和性を有するので、 VAC hTを研究するためのツール、例えば、 VAC hTの機能を調ベるための試薬（例えばトレーサーなど）等として有用である。

実施例

以下、実施例により本発明をより具体的に説明するが、これらの実施例は、本発明の単なる例示にすぎず、本発明の範囲を何ら限定するものではない。なお、単位「M」は mo 1 ZLを表す。

(実施例 1 ： (―) 一 2— （4一（2—メチルフユニル）ピペリジノ）シクロへキサノール（以下、「（一）一 o—メチルべサミコール」または「（一） - o -Me VES」と略記する場合がある。）の合成）

(工程 A： 2—メチルベンズアルデヒドの合成）

ベンゼン（30 OmL) 中に、 2—ブロモベンズアルデヒド（25 g , 1 35 mm o 1 )、エチレングリコーノレ（41. 9 g， 675 mm o 1 )、および p— トルエンスルホン酸（2. 57 g, 1 3. 5mmo 1 ) を加え、 3時間還流することにより、ケタール体を得た。次いで、アルゴン気流下で、無水 THF (50m L) にマグネシウム（3. 64 g, 1 5 Ommo 1 ) を加え攪拌したさらに、ケタール体を溶解させた無水 THF (5 OmL) を滴下し、触媒量のヨウ素を加え、 1時間還流後、無水 THF (6 OmL) に溶解させたジメチル硫酸（37. 8 g， 30 Ommo 1 ) を滴下し、さらに 1. 5時間還流して、 2—ブロモベンズアルデヒドのブロム（一 B r) 部分をメチル（一CH₃) ィ匕した。生成したメチル体を、 5%塩酸を用いて脱ケタール化して、表題化合物をオイルとして得た (2—ブロモベンズアルデヒドからの収率 70. 8%)o

一 NMR(CDC1₃)： δ 10.26 (bs, 1H), 7.84-7.31 (m, 4H) , 2.66 (s， 3H)

Mass(m/e)： 129 ( ⁺)

(工程 B ：ェチル 2—シァノー 3_ (2—メチルフエニル）アタリラートの合成）

ベンゼン（1 5 OmL) 中に、 2—メチノレベンズアルデヒド（1 7. 8 g , 1 48 mm o 1 )、およぴェチルシアノアセテート（20. l g, 1 77. 7mm o 1 ) を加え、さらに、酢酸（5. 6mL)、およびピロリジン（3. 07mL) を加え、約 2時間還流することにより、表題化合物を白色固体として得た（収率 5 5. 3%)₀

1 H-NMR(CDC1₃)： δ 8.56 (s, 1H), 8.18-8.09 (m, 1H), 7.38— 7.34 (m, 3H), 4.58-4.22 (dd, J= 7.02 Hz, J= 14.3 Hz, 2H), 2.45 (s, 3H) , 1.52—1.29 (t, J= 7.02Hz, 3H)

ass(m/e)： 215 (M⁺)

(工程 C : 4— (2—メチルフエニル）ピペリジン一 2, 6—ジオンの合成）アルゴン気流下で、水素化ナトリウム（3. 18 g, 79. 6mmo 1 ) を加えた無水 THF (25mL) 中に、ジェチルマロネート（1 2. 96 g, 8 1m mo 1 ) を加え、室温で 1 5分間撹拌した後、無水 THF (5 OmL) に溶解したェチル 2—シァノー 3— （2—メチルフエ-ル）アタリラート（8. 56 g , 39. 8mmo 1 ) を滴下し、室温で 1 5時間撹拌した。反応終了後、さらに、 6M—塩酸（20 OmL) 中で 60時間還流した。反応終了後、得られた 3— (2 —メチルフエ-ル）ペンタン一 1， 5—二酸（1 3 g, 58. 6mmo l ) と塩化チォニル（2 1. 62 g, 1 3. 3mmo 1 ) を氷冷した無水メタノール（9 OmL) に加え、 60分間撹拌して反応させた。反応終了後、溶媒を留去し、飽和炭酸水素ナトリウム溶液で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させた。無水エタノール（5 OmL) に溶媒留去後に得られたオイルおよび尿素（5. 28 g, 87. 9mmo 1 ) を加え、さらに、ナトリウム（2. 03 g , 87. 9 mm o 1 ) を加えた後、 1 9時間還流した。反応終了後、冷却し、ろ過することにより、固体として表題化合物を得た（ェチル 2—シァノ一3— ( 2 _メチルフエニル）アタリラートからの収率 64. 1%)。

-删 R(CD₃0D)： δ 7.19 (s， 4H) , 2.83-2.70 (d, 4H), 3.92-3.61 (m, 1H), 2.36

(s, 3H)

Mass(m/e)： 203 (M⁺)

(工程 D ： 4一（2—メチルフエニル）ピぺリジンの合成）

氷冷下、 1M— BH₃— THF ( 1 5 OmL) に 4一（2—メチルフエニル）ピぺリジン一 2, 6—ジオン（9. 46 g, 46. 6 mm o 1 ) を加えた後、 1

9時間還流し、ついで、 6M—塩酸（100m l ) を入れ、さらに 22時間還流することにより、固体として表題化合物を得た（収率 8 1. 0%)。

¹ H-NMR (CD₃0D)： δ 7.19 (s， 4H) , 4.15-3.54 (m, 5H)， 2.35 (s, 3H), 2.05 (m,

4H)

Mass(m/e)： 175 (M⁺)

(工程 E ： (—） -2- (4— (2—メチルフエニル）ピペリジノ）シクロへキサノールの合成）

4— (2—メチルフエニル）ピぺリジン（4. 65 g , 26. 6 mm o 1 ) およびシクロへキセンォキシド（9. 8 g , 101 mmo 1 ) を無水エタノール（3 OmL) に加え、 20時間還流することにより、（土）一 2— (4— ( 2 _メチルフエニル）ピペリジノ）シクロへキサノール（（土）一 o—メチルべサミコール）を得た（収率 3 1. 9%)。次いで、得られた（±)—o—メチルべサミコール（1. 63 g, 6. Ommo 1 ) をアセトン（25mL) に溶解させ、この溶液に、ァセトン（25mL) に溶解した（一）ージー p- トルオイル一 L—酒石酸（2. 54 g, 6. 56mmo 1 ) を滴下し、室温で 5分間撹拌した。析出した結晶を、グラスフィルターでろ過した。フィルター内の結晶を、 2 M—水酸化ナトリウム溶液に溶かし、 5分間撹拌した。撹拌後、 5%メタノールを含有する塩化メチレン混合溶媒を用いて抽出し、無水硫酸マグネシウムによる乾燥後、溶媒留去し、エタノールにより再結晶することによって、固体として表題化合物を得た（収率

6 6. 5%)。

Mp: 116-118°C

^-NMR (CD₃0D)： 6 7.25-7.09 (m, 4H), 3.70-3.42 (m， 1H) , 2.86-2.69 (m, 3H) , 2.33 (s, 3H), 2.33-2.07 (m, 3H), 1.84-1.71 (m， 8H) , 1.38-1.19 (m, 4H) Mass (m/e)： 273 (M+)

Anal. Calcd. For C₁₈H₂₇NO: C, 79.07； H， 9.95； N， 5.12. Found: C, 78.88; H, 10.15； N, 5.06

(実施例 2 ： (-) 一 o—Me VE Sの、インビトロにおける、 VAC h Tに対する親和性とシグマ受容体（σ— 1および σ— 2) に対する親和性との比較）インビトロ薬物阻害実験により、（一）一 ο— Me VE Sの VAC h Τおよびシダマ受容体 (_σ— 1、ひ一 2) に対する親和性を調べた。

(ラット脳の膜組織および肝臓の膜組織の調製）

初めに、ラットから脳おょぴ肝臓を摘出し、各組織の 1 0倍重量の 0. 3 2Μ ショ糖溶液を加え、テフロンホモジナイザーを用いてすりつぶした。次いで、すりつぶした組織溶液を、 1 ◦ 00 gで 1 0分間、遠心分離に供し、沈殿した分画を取り除いた。さらに、上清を、 5 5000 gで 60分間、遠心分離に供し、沈殿した組織を、 5 OmMのトリス一 HC 1緩衝液 0. 3 2^1ショ糖溶液（ ^[ 7. 8) に加えて懸濁させた。

(VAC h Tに対する親和性の試験）

1 0 nMの（一）一 [³H]べサミコーノレを、 VAC h T用のラジオアイソトープ（R I ) として用いた。検査化合物として、表 1— 1に示す、（一）一 ο— Me VE S、（一）一べサミコール、 1ー（3, 4—ジメトキシフエネチル）一 4一（3 一フエニル一プロピル）ピぺラジン（以下、 S A4503という。）、ハロペリドーノレ、および（+ ) —ペンタゾシンを用いた。各検査化合物について、 10種類の濃度（10— ⁵M〜10— ^1QMの範囲内で 10段階に設定した濃度）のサンプルを調製した。

各サンプルについて、試験管に、 R I ( 100 / 1 )、サンプル（50 /i 1 )、

5 OmMトリス _HC 1緩衝液（ρΗ7. 8) (100 /x l )、 2； uMの DTG溶液（50 μ 1 ) (最終濃度として 200 ηΜ)、最後に、調製したラット脳の膜組織（500〜900 /i g (タンパク質重量） Z200 1 ) を加え、 37°Cにて

60分間反応させた。試験管を氷冷することにより反応を終了させ、直ちに、セルハーべスターを用いて、ラット脳の膜組織をグラスフィルターに吸着させた。グラスフィルターを、 5 OmMのトリス _HC 1緩衝液（p H 7. 8) (5m l) で 3回洗浄した後、グラスフィルターごと液体シンチレーションバイアルに入れ、液体シンチレーターを加えた後、液体シンチレーションカウンタを用いて放射能を測定した。

なお、非特異的な結合量を調べるために、 10 μΜのべサミコールを加えたサンプルを同時に試験した。

(σ- l受容体に対する親和性の試験）

3 ηΜの（+ ) - [³Η] ペンタゾシンを、 σ— 1受容体用のラジオアイソトープ（R I ) として用い、反応を 37 °Cで 90分間行った以外、 VAC hTに対する親和性の試験と同様の操作で試験した。

なお、非特異的な結合量を調べるために、 10 //Mのペンタゾシンを加えたサンプルを同時に試験した。

(σ -2受容体に対する親和性の試験）

3 ηΜの [³H] DTG ([³Η] 一 1， 3—ジ一 ο _トリルグァニジン）を、 σ _ 2受容体用のラジオアイソトープ（R I ) として用いた。この R Iの σ _ 1 受容体に対する結合を抑えるために、 1 のペンタゾシン（50 // 1 )を加え、 50 mMのトリス一 H C 1緩衝液（pH7. 8) (100// 1 ) を加えた。ラット肝臓の膜組織（300〜6 00 /z g (タンパク質重量） / 200 μ 1 ) を使用した以外、び一 1受容体に対する親和性の試験と同様の操作で試験した。

なお、非特異的な結合量を調べるために、 1 0

13丁0ぉょび1 μΜのぺンタゾシンを加えたサンプルを同時に試験した。

結果を表 1— 1に示す。

[表 1 _ 1 ]

IC₅₀ (nM)

VAChT* σ一 1受容体 ^# σ— 2受容体 ^s

(-)-o-MeVES 16 38 320

(-) - サミコ-ル 13 130 420

SA4503 120 5.1 280

ハ口べ'リドール 97 3.0 190

(+) ンタゾシン 830 6.3 -

N = 3 (3回の実験の平均)

表中の値は、 3回の実験の平均値である。

* ：ラット脳の膜組織（rat cerebral membranes) を、 2つのシグマ受容体をマスクするための 200 nMの DTGの存在下で、 3 7°Cにて 60分間、 50m Mのトリス— HC 1緩衝液（p H 7. 8) 中の（一）一 [³H] べサミコールと共にインキュベートした。

# : ラット脳の膜組織を、 3 7 °Cにて 90分間、 5 OmMのトリス _HC 1緩衝液（ρΗ 7. 8) 中の（+ ) - [³Η] ペンタゾシン（p e n t a z o c i n e) と共にインキュベートした。

$ ：ラット肝臓の膜組織（rat liver membranes) を、 σ _ 1受容体をマスクするための 0. O O lmMの（+ ) —ペンタゾシンの存在下で、 3 7°Cにて 90分間、 5 OmMのトリス一 HC 1緩衝液（p H7. 8) 中の [³H] DTGと共にインキュべ一トした。

次に、上記の実験結果（n = 3) 及び上記の実験と同様に行った 5回の実験結果（n= 5) をもとに、 K i値を求めた（計 _n = 8)。 K i値は、一般に各実験ごとに得られる親和性（I C₅₀値）を各実験ごとの条件の違いによるデータの違いを補正するために用いられ、これにより、例えば実験日の違うデータや他の受容体間（例えば VAChTと δ— 1受容体）の親和性の比較ができる。

K i値は、下記の計算式に従って算出した。結果を表 1一 2に示す。

式： K i = I C₅。/ ( 1 + CZK d) (nM)

(計算式中、 Kdは放射性リガンドの解離定数を示し、 Cは放射性リガンドの濃度を示す。）

ほ 1一 2]

K i (nM)

VAC h T δ一 1受容体 δ一 2受容体

(-) -o-MeVES 6.7 土 0.4 33.7 土 5.9 266 土 28

(-) -へ、'サミコ-ル 4.4 土 0.6 73.8 土 11.2 346 士 37

SA4503 50.2 ± 7.2 4.4 土 1.0 242 土 17

ハ口へリト —ル 41.4 士 17.6 2.6 ± 0· 8 167 土 19

(+) -へ。ンタソ、'シン 315 土 121 5.5 士 2.0 ―

Ν = 8 (追加実験を行い計 8回の平均)

表中の値は平均士標準偏差を示す。

表 1一 2に示すように、（一）一べサミコールの VAC h Tとの親和性を示す Κ iィ直は 4. 4±0. 6 nMであり、本発明の（―） — o— M e V E Sの V A C h Tとの親和性を示す K i値は 6. 7± 0. 4 nMである。また、（一）一ベサミコ一ルの δ一 1受容体および δ— 2受容体との親和性を示す K i値は、それぞれ 73. 8 ± 1 1. 2 nMおよび 346 ± 37 nMであり、本発明の（一）一 o— Me V E Sの δ— 1受容体および δ— 2受容体との親和性を示す K i値は、それぞれ 3 3. 7 ± 5. 9 nMおよび 266 ± 28 nMである。この結果より、（一）一べサミコールおよび本発明の（一） _ 0—^16 ¥£ 3は、他のリガンド（SA450 3、ハロペリドールおよび（+ ) —ペンタゾシン）と比較して、 VAChTに対する高い親和性と δ— 1受容体および δ— 2受容体に対する低い親和性を有していることが認められた。

これらの結果から、本発明の（―）一 ο—MeVESは、（一） —ベサミコールの持つ VAC hTに対する高い親和性および δ - 1受容体および δ _ 2受容体に対する低い親和性という性質を維持しているといえる。さらに、本発明の（一） - [^{1 X}C] 一 o— MeVESは、（一）一ベサミコールの持つ上記の性質を有しながら、 "じ一標識を有するので、 VAC hTを指標する診断方法に用いられる診断剤として有用であるといえる。

なお、前述の Life Sciences 71 (2002) 1591-1598には、ラット脳を用いたィンビトロ実験の結果、（―） — o—ョードべサミコールと VAChT、 δ— 1受容体、 δ— 2受容体との親和性が K i値（平均士標準偏差）としてそれぞれ 1 5. 0± 2. 9 nM、 62. 2± 1 2. O nM、 554 ± 1 37 n Mであったことが記載されている。一方、本発明の（―） —o—MeVE Sの、 VAChT、 8— 1受容体、 δ— 2受容体に対する K i値は、表 1—2から、それぞれ 6. 7±0. 4 nM、 33. 7 ± 5. 9 nM、 266 ± 28 n Mであった。このように、（一） — o— Me VE Sおよび（一）一 o—ョ一ドべサミコールはいずれも V A C h T に対する高い親和性と δ一 1受容体、 δ一 2受容体に対する低い親和性を有する力これらを比較すると、 VAC hTとの親和性は、（一）一o— MeVE Sの方力 S (―) —o—ョードべサミコールよりさらに高い。また、 1値の3— 1受容体 ZVAC h T比および δ— 2受容体ノ VAC h T比は、（―）― ο— Me VE S の方が（―） _ o _ョードべサミコールより高く、 VAC h Tに対する特異性という点で優れている。

また、（一）一 o—ョードべサミコールは、前述のように S PECT用として期待できるが、本発明の（―）一 o— Me VE Sおよび（一）一！：¹¹。] — o— M eVESは、 S PECTよりも、感度、解像度、定量性に優れている P E Tに用いることができる点で有用である。

以上の結果から、（一） _o— Me VE Sにおける（一）一ベサミコールのベンゼン環部分のオルト位へのメチル基の導入は、（一）一べサミコールが有する VA C hTに対する高い親和性および 2つのシグマ受容体に対する低い親和性に影響を与えないことが示された。その結果、（一）一 o— Me VE Sは、（一）一べサミコールと同等の優れた VAC hTリガンドであることが示された。

(実施例 3 : (— ) — 2— (4— (2—トリメチルスタニルフエニル）ピペリジノ）シクロへキサノーノレ（以下、「（一） _ o— トリメチノレスタニルーべサミコ一ノレ」と略記する。）の合成）

Shibaら、し ife Sciences 71 (2002) 159ト 1598および Shibaら、 Annals of Nuclear Medicine Vol. 17, No.6, 451-456, 2003に記載される方法に従って、（一）一 o —ョードべサミコールを得た。

(一）一 o—ョードべサミコール ( 1 1 6 m g , 0. 3mmo l )、へキサメチルニスズ（2 4 6m g， 0. 7 5 mm o 1 )、およびテトラキス（トリフエニルホスフイン）パラジウム（0) ( 2 0m g， 1 7. 5 μ τηο 1 ) を無水トルエン（5 mL) に加え、アルゴン気流下で 5分間撹拌した後、さらに 1 5時間還流した。反応液を溶媒留去した後、分取用薄相ク口マトグラフィー（溶媒：酢酸ェチルへキサン = 1 ： 5) により精製し、表題化合物を無色オイルとして得た（収率 3 3. 0%)。

'H-MNR (CDC1₃) ： δ 0.30 (9Η, s), 1.42-1.60 (4H， m) , 1.60-1.95 (8H, m) , 2.02-2.40 (3H, m), 2.62-3.00 (3H, m), 4.22-4.68 (1H, m), 6.95-7.50 (4H, m) Mass (m/e)： 421,423 [M] ⁺

(実施例 4 ： (一）一 [^{J 1} C] - 2 - (4— (2—メチルフユニル）ピペリジノ）シクロへキサノール（以下、「（一）一 [i i _C] — ₀一メチルべサミコール J と略記する。）の合成）

(o-Tol)₃P トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（P d ₂ (d b a ) ₃) ( 2. 8 m g , 3. 0 /i mo 1 ) およびトリ一 o— トノレィルホスフィン（（o— T o 1 ) ₃ P) (3. 7mg , 1 2 0 // mo 1 ) を枰量し、 DMFに溶解し、図 1に示す装置の反応容器（RV 1 ) に入れた。 C u C l ( 1. 2m g , 1 2 μ mo 1 K₂ C0₃ (0. 6 mg , 4. 3 i m o 1 ), および実施例 3で得られた（一）一 o _ トリメチノレスタ二/レーべサミコール（0. 6mg， 1. 5 μ τη ο 1 ) を、 DMF (0. 3m l ) に溶解し、図 1に示す装置の第 1シリンジ（VA 1) に入れた。 ¹ ' CH, I ([^{J 1} C] ヨウ化メチル (放射能量として、 1 0〜 5 0 GB q)) を、室温で、図 1に示す装置の反応容器（RV 1 ) に導入し、導入後 1分間 [ C] ョゥ化メチルを上記の試薬と反応させた。次いで、第 1シリンジ（VA 1 )中の（一）一 o—トリメチルスタニルーべサミコールを含む溶液を、反応容器 (RV 1 ) へと導入し、 80°Cにて 3分間、メチル化反応を行った。反応容器を冷却後、第 2 シリンジ（VA2) に入っていた HP LC用溶離液を N₂ガスを使って反応溶液に加え、さらに反応溶液を直径 13mm、ポアサイズ 0. 7 μτηのグラスフィルターでろ過した。得られたろ液を、分離 HP LCにより、以下に示す条件で分離した。

(-) - C¹¹ C]一 ο—メチルべサミコールを含む HP LC画分を、エバポレーターによって溶媒を留去し、生理食塩水を加えて注射用製剤とした。表題化合物の放射化学的収率は、 [^C] ヨウ化メチルに対して 38%であった。分析用 H P LCを用いて以下に示す条件により分析した、（一）一 [^C] — o—メチルべサミコールの標識結果を表 2に示す。

分離用 HP LC条件

Y C Pack ODS-A 10x250mm (日本分光）

CH₃CN ： 50mM AcONH₄ (2.51g/650mL H₂0)= 350 ： 650

流速 = 5mL/min. , UV波長 = 260nm

分析用 HPLC条件

Finepak SIL C18S 4.6x250隨（日本分光）

CH₃CN ： 30mM AcONH₄： AcOH = 500 ： 500 ： 2

流速 = 2mL/min. ， UV波長 = 254nm

2]

(実施例 5 ：ラットにおける、（一）一 [nc] — o—メチルべサミコールの静血心肺肝膝脾脳筋賢小

脈内注騰臓臓臆液職腸肉射後の放射能の組織分布）

ラットの尾静脈より、 20MB qの（一）一 [：¹¹。] — o— MeVESを含む注射液（0. 2m l) を投与した。投与後、 5分、 1 5分、 30分、 60分の時点で頸椎脱臼によりラットを屠殺し、シリンジを用いて心臓から採血した後、心臓、肺、肝臓、脳などの組織を摘出し、各組織の放射能をガンマ一カウンターで測定した。また、各組織の重量も測定した。

結果を表 3に示す。

3] 放射能レベル（％ID/g)*

組織 5 mm 13 min J0 min 60 mm

0.45土 0.04 0.27 ± 0.03 0.24土 0.02 0.18土 0.02

3.37士 0.30 1.82土 0.19 1.52土 0.11 0.96士 0.02

16.55土 2.56 10.38土 2.48 8.74土 0.34 4.81土 0.76

2.58土 0.23 2.93土 0.38 3.22 ± 0.76 3.28士 0.32

8.44 1.93 12.13土 2.23 11.53 ± 2.67 10.67士 1.22

4.97士 1.06 5.90 ± 0.51 5.56 ± 0.52 4.24土 0.35

11.10土 4.31 7.52土 0.40 6.02 0.09 4.15土 0.50

6.19土 0.58 8.76 ± 1.66 8.48土 1.85 8.90土 0.50

1.57土 0.27 1.42土 0.44 1.18 0.24 1.00土 0.16

5.47 + 0.44 4.54土 0.54 4.71 + 0.45 3.86 0.28

*放射能レベルは、投与した全放射能に対する組織 1グラムあたりの放射能の平均％±S. D. (n = 4-6) として表す。表 3の結果は、（―） ― [^C] 一 o—Me VE Sのラット体内分布を示す。このデータにより脳にどのくらい放射能が集積するか、すなわち脳を画像化できるかがわかる。脳への集積保持性があり、血液中の放射能クリアランスも早く、画像化には適していることがわかる。また、（一）一 [^C] —o— Me VES は放射性化合物であるので、臨床使用に際して体内の被爆を考慮する必要があるが、表 3の結果から、本発明の（―）一 [^C] _ o— Me VE Sについては、特に高い集積を示す臓器や時間とともに極端に集積増加を示す臓器もなく、特に高い被爆線量を示す臓器もないので、被爆に関する問題はないと考えられる。

(実施例 6 ：ラットにおける、（一）一 [^C] — o—メチルべサミコールの脳内分布に対する、（―）一 o—メチルべサミコール、（一）一べサミコール、およびシグマ受容体リガンドの阻害効果）

非放射性リガンドとして、（―）— o—メチルべサミコール、（―）—ベサミコ一ノレ、 S A4503、ノヽロペリドール、および（+ ) —ペンタゾシンを、それぞれ、 1 250 nmo 1 /m 1の濃度となるように DM SOに溶かした。

ラット尾静脈に、 20MB qの（―） ― [：¹¹。] _ o― Me VE Sを含む注射液（0. 1 m 1 ) と、上記の非放射性のリガンドをそれぞれ含む DMSO溶液 0. lm l (体重 1 k gあたり 500 nmo 1に相当する）とを合わせて投与した。投与の 30分後、頸椎脱臼によりラットを屠殺し、シリンジを用いて心臓から採血した後、ラットから脳を摘出した。摘出した脳を、大脳皮質、海馬、線条体、小脳、延髄、およびその他の部分に分け、各組織の放射能をガンマ一カウンターで測定した。また、各組織の重量も測定した。

コントロールは、 20MB qの（一） ― [：^{1 1}。] ― o― Me VE Sを含む注射液（0. lm l ) とリガンドを含まない DM SO溶液（0. lm l ) をラット尾静脈に投与して上記と同様に測定した。

結果を表 4に示す。 .

ほ 4] 放射能レベル（％ID/g)

(- )-o "メザ

コント 0-ルサミコール _ (-) サミコ-ル _ SA4503 _ Λ口へ'リト'—ル（+)·Λ'ンタ'ノ'シン大脳皮質 2.58 ± 0.26 0.70 0.10 0.71土 0.04 0.62土 0.08 1.03 ± 0.05 2.72土 0.40

2.40土 0.30 0.71 ± 0.08 0.66 ± 0.05 0.84土 0.18 1.61 ± 0.15 2.59 ± 0.44 線条体 2.14土 0.18 0.71土 0.10 0.72土 0.03 0.61 ± 0.07 1.04土 0.10 2.39土 0.40 小脳 2.18土 0.23 0.60土 0.07 0.62 ± 0.03 0.52 0.07 0.92 0.04 2.07土 0.31 延被 2.68 ± 0.23 0.74 0.09 0.80 0.08 0.66土 0.08 1.10士 0.05 2.83士 0.45 脳 (上 ffi以外） 2.40土 0.23 0.63 0.10 0.69土 0.04 0.55 ± 0.05 0.95 0.06 2.52 ± 0.43 脳 (全体） 2.48 ± 0.23 0.68 ± 0.10 0.70土 0.04 0.59 0.07 1.03 0.04 2.52 ± 0.40 血液 0.11 ± 0.01 0.14土 0.02 0.13土 0.01 0.14土 0.02 0.16土 0.01 0.12土 0.01

*放射能レベルは、投与した全放射能に対する組織 1グラムあたりの放射能の平均⁰ /₀土 S. D. (n = 4〜6) として表す。

以上の結果から、（一） ― [H C] 一 o—Me VE Sの脳局所への集積は、 V AC hTに対して高い親和性を有する非放射性の（一）— o——メチルベサミコ一ルおよび（一） —ベサミコール、 VAC h Tに対して低い親和性を有する SA4 503およびハロペリドールにより阻害された。一方、シグマ受容体に対して選択的な（+ ) —ペンタゾシンでは阻害されなかった。このことから、（一）一 ¹ C] — o— MeVESは、脳内では V A C h Tに特異的に結合していることが示された。

(実施例 7 ： (―) — [^{J 1}C] 一 o—メチルべサミコールを用いた、ラット脳のォートラジオグラフィー）

ラットの尾静脈に、 1 10~1 20MB qの（一）一！：¹¹。] 一 o— Me VE Sを投与し、第 1のラットは投与の 1 5分後、および第 2のラットは 30分後に、頸椎脱臼によりラットを屠殺して、脳を摘出した。摘出した脳は、直ちにドライアイスにより凍結し、クライオミクロト一ムにより厚さ 20 /xmの脳切片を作製した。脳切片を、ガラスプレートに載せ、ホットプレート（60°C) でこの切片を乾燥し、ラジオルミノグラフィにより放射能分布の画像を得た。結果を図 2に示す。以上の結果から、（一）一 [ C] — o—Me VE Sの脳内局所分布は、シグマ受容体をマスクした（―）一 [³H] —ベサミコールのインビトロ脳局所分布とよく一致し、他方、シグマ受容体を反映する ¹。] SA4503の分布とは明らかに異なることから、（一）一！：¹¹。] 一 o— Me VESは、脳內の VAC hTを画像化することが可能なインビボリガンドであることが示された。

ここで、 VAChTは、海馬、小脳、運動神経核に多く存在し、線条体、皮質、視床 ·視床下部にも比較的多く存在している。

図 2に示される画像は、本発明の（一） ― [^C] _o—Me VESの脳内分布が、ラッ卜脳内での VAC h Tの分布を反映したものであるといえる。

コリン作動性神経系が関与すると考えられる疾病の場合、一般に、 VAChT の活性、数量などに変化が見られる。本発明の（―） ― [^C] -o-Me VE Sから得られる脳の PET画像は鋭敏に VAChTの活性、数量などの変化をその画像の濃淡（あるいは色調の違い）として視覚的に捉えることができるとともに、画像解析によりその変化を定量化できる。このことから、コリン作動性祌経変性障害（例えば、アルツハイマー病、記憶障害、学習障害、統合失調症、認知機能障害、多動性障害、不安神経症、うつ病、無痛覚症、パーキンソン氏病など）などの疾病に対して、本発明の（一）一 [ C] — o— Me VE Sを用いることにより、視覚的な診断が可能となる。また、 VAChTの変化の定量化ができることから、変化の程度により疾病の進行程度がわかるとともに、早期診断が可能となる。

(実施例 8 ： (―) - [^{1 J}C] —o—メチルべサミコールを用いた、学習障害モデルサルと健常サルの P E T脳画像比較）

192-Saporin (Advanced Targeting Systems $1) で、右月側の p75NTR positive 細胞（ACh neurons) を選択的に破壊することにより作製した学習障害モデルサル (神経破壊サル）及び健常サルの静脈に、それぞれ 185〜740MB qの（一） - [^{1 J}C] 一 o— Me VESを投与し、投与後 10秒から 9 1分まで動物用 PET (PET ;浜松フォトニクス製、 SHR-7700) で画像データを収集した。投与後 1 5分から 60分で得られた画像データを画像化した写真を図 4に示す。投与後 1 5分から 60分で得られた画像において、神経破壊サルの破壊側（右脳側）の大脳皮質で、健常側に比べて有意な R Iの集積減少が見られた。一方、健常サルでは集積の変化は観察されなかった。

以上の結果から、（―）一 [^C] _o_Me VESはサルを使った PETによるインビボ撮影で、鋭敏に VAC hTの変化を画像化することができ、コリン作動性神経変性障害などを診断するための診断剤となりうることが示された。

産業上の利用可能性

本発明の化合物（I) またはその塩は、 P ETを用いた VAC h Tマッピングのための試薬などとして利用可能である。化合物（I) またはその塩はまた、 V A C hTの減少により特徴付けられるコリン作動性神経変性障害（例えば、アルッハイマー病、記憶障害、学習障害、統合失調症、認知機能障害、多動性障害、不安神経症、うつ病、無痛覚症、パーキンソン氏病など）を診断するための診断剤などとして有用である。また、本発明の化合物（I I ) またはその塩は、上記の試薬および診断剤を製造するための前駆体などとして有用である。さらに、本発明の化合物（ l a) またはその塩は、 VAC h Tを研究するためのツールなどとして有用である。

本出願は、日本で出願された特願 2005- 106824 (出願日： 2005 年 4月 1日）を基礎としており、その内容は本明細書に全て包含されるものである。

Claims

請求の範囲

以下の式（I)

[式中、 R¹および R²は、同一または異なって、水素原子、ハロゲン原子、水酸基、アミノ基、 C ₆ァシル基、カルボキシ基、 Ci-eアルコキシ基、 C ₆アルキル基、またはフエ二ル基を表す。あるいは、 ¹ぉょび!¾²は、一緒になつて、隣接する炭素原子と共に環を形成してもよい（該環は、ハロゲン原子、水酸基、アミノ基、 C^eァシル基、カルボキシ基、 Ci- 6アルコキシ基、 C^eアルキル基からなる群より選択される 1個または 2個以上の置換基を有していてもよい)。]

で表される化合物またはその塩。

2. 前記式中の R¹および R ²が水素原子である、請求項 1記載の化合物またはその塩。

3. 以下の式（I I) :

[式中、 1^ぉょぴ1¾²は、同一または異なって、水素原子、ハロゲン原子、水酸基、アミノ基、。^ 6ァシル基、カルボキシ基、 C^sアルコキシ基、 C^eアルキル基、またはフエ二ル基を表す。あるいは、 ¹ぉょび!¾²は、一緒になつて、隣接する炭素原子と共に環を形成してもよい（該環は、ハロゲン原子、水酸基、アミノ基、 Ci- 6ァシル基、カルボキシ基、 Ci- 6アルコキシ基、 Ci ₆アルキル基からなる群より選択される 1個または 2個以上の置換基を有していてもよい)。]

で表される化合物またはその塩を、 HCH3 I と反応させる工程を包含する、以下の式（ I ) ：

[式中、 R¹および R²は、前記式（ I I ) における R¹および R²と同義である。] で表される化合物またはその塩の製造方法。

4. 前記式中の R¹および R ²が水素原子である、請求項 3記載の製造方法。

5. 請求項 1または 2に記載の化合物またはその塩を含む、コリン作動性神経変性障害の診断剤。

6. 前記コリン作動性神経変性障害が、アルツハイマー病、記憶障害、学習障害、統合失調症、認知機能障害、多動性障害、不安神経症、うつ病、無痛覚症、またはパーキンソン氏病である、請求項 5に記載の診断剤。

7. 以下の式（ I I) :

[式中、 R¹および R²は、同一または異なって、水素原子、ハロゲン原子、水酸基、アミノ基、 C! - 6ァシル基、カルボキシ基、アルコキシ基、じアルキル基、またはフエ二ル基を表す。あるいは、 R¹および R²は、一緒になつて、隣接する炭素原子と共に環を形成してもよい（該環は、ハロゲン原子、水酸基、アミノ基、 C - 6ァシル基、カルボキシ基、 C, ₆アルコキシ基、 C^ ₆アルキル基からなる群より選択される 1個または 2個以上の置換基を有していてもよい )。]

で表される化合物またはその塩。

8. 前記式中の R¹および R²が水素原子である、請求項 7記載の化合物またはその塩。

9. 以下の式（ l a) :

[式中、 1^ぉょび11²は、同一または異なって、水素原子、ハロゲン原子、水酸基、アミノ基、 C^ ₆ァシル基、カルボキシ基、 C -e;アルコキシ基、 C^eアルキル基、またはフエ二ル基を表す。あるいは、 R¹および R²は、一緒になつて、隣接する炭素原子と共に環を形成してもよい（該環は、ハロゲン原子、水酸基、アミノ基、 C^eァシル基、カルボキシ基、 Ci-eアルコキシ基、 C - 6アルキル基からなる群より選択される 1個または 2個以上の置換基を有していてもよい)。]

で表される化合物またはその塩。

10. 前記式中の R¹および R²が水素原子である、請求項 9記載の化合物またはその塩。