DK2324856T3 - Enkeltstrengede oligodeoxynukleotide mutationsvektorer - Google Patents

Claims (15)

1. In vitro anvendelse af en forbindelse til at foretage en forudbestemt genetisk ændring i et kromosomalt målgen af en dyrecelle, hvor forbindelsen er et enkeltstrenget oli-godeoxynukleotid, der har et 3'-ende-nukleotid, et 5'-ende-nukleotid, der har mindst 25 deoxynukleotider og ikke mere end 65 deoxynukleotider, og der har en sekvens omfattende mindst to regioner, hver af mindst 8 deoxynukleotider, som er henholdsvis identiske med mindst to regioner af det kromosomale målgen, hvor regionerne sammen er mindst 24 nukleotider i længde, og hvor regionerne er adskilt af mindst ét nukleotid i sekvensen af det kromosomale målgen eller i sekvensen af oligodeoxynukleotidet eller begge og har en forskellig sekvens, hvor 5'-hydroxylen af 5'-ende-nukleotidet er bundet til en 5'-blokeringssubstituent, hvor 5'-blokeringssubstituenten er en N'-hydroxyalkyl-substitueret 3,3,3',3'-tetra-substitueret indocarbocyaninfarve bundet gennem en linker til 5'-hydroxylen af 5'-ende-nukleotidet.

2. Anvendelse af en forbindelse til at foretage en forudbestemt genetisk ændring i et målgen i en bakteriecelle, hvor forbindelsen er et enkeltstrenget oligodeoxynukleotid, der har et 3'-ende-nukleotid, et 5'-ende-nukleotid, der har mindst 15 deoxynukleotider og ikke mere end 41 deoxynukleotider, og der har en sekvens omfattende mindst to regioner, hver af mindst 7 deoxynukleotider, som er henholdsvis identiske med mindst to regioner af målgenet, hvor regionerne sammen er mindst 14 nukleotider i længde, og hvor regionerne er adskilt af mindst ét nukleotid i sekvensen af målgenet eller i sekvensen af oligodeoxynukleotidet eller begge og har en forskellig sekvens, hvor 5'-hydroxylen af 5'-ende-nukleotidet er bundet til en 5'-blokeringssubstituent, hvor 5'-blokeringssubstituenten er en N'-hydroxyalkyl-substitueret 3,3,3',3'-tetra-substitueret indocarbocyaninfarve bundet gennem en linker til 5'-hydroxylen af 5'-ende-nukleotidet.

3. Anvendelse af en forbindelse til at foretage en forudbestemt genetisk ændring i et målgen i en plantecelle, hvor forbindelsen er et enkeltstrenget oligodeoxynukleotid, der har et 3'-ende-nukleotid, et 5'-ende-nukleotid, der har mindst 21 deoxynukleotider og ikke mere end 55 deoxynukleotider; og der har en sekvens omfattende mindst to regioner, hver af mindst 8 deoxynukleotider, som er henholdsvis identiske med mindst to regioner af målgenet, hvor regionerne sammen er mindst 20 nukleotider i længde, og hvor regionerne er adskilt af mindst ét nukleotid i sekvensen af målgenet eller i sekvensen af oligodeoxynukleotidet eller begge og har en forskellig sekvens, hvor 5'-hydroxylen af 5'-ende-nukleotidet er bundet til en S'-blokeringssubstituent, hvor 5'-blokeringssubstituenten er en N'-hydroxyalkyl-substitueret 3,3,3',3'-tetra-substitueret indocarbocyaninfarve bundet gennem en linker til 5'-hydroxylen af 5'-ende-nukleotidet.

4. Anvendelse ifølge et hvilket som helst af krav 1 til 3, hvor indocarbocyaninfarven og linkeren bundet til 5'-hydroxylen af 5'-ende-nukleotidet sammen er en N-hydroxypropyl, N'-phosphatidylpropyl-3,3,3',3'-tetramethyl-indomonocarbocyanin.

5. Anvendelse ifølge et hvilket som helst af krav 1 til 4, hvor internukleotidbindingen bundet til 3'-ende-nukleotidet og/eller 5'-ende-nukleotid er en phosphorthioatbinding.

6. Anvendelse ifølge et hvilket som helst af krav 1 til 5, hvor 3'-hydroxyen af 3'-ende-nukleotidet er bundet til en 3'-blokeringssubstituent.

7. Anvendelse ifølge krav 6, hvor 3'-blokeringssubstituenten er et blokeringsnukleo-tid, som er 3'-3' koblet til 3'-hydroxylen af 3'-ende-nukleotidet.

8. Anvendelse ifølge krav 7, hvor blokeringsnukleotidet, som er 3'-3' koblet til 3'-hydroxylen af 3'-ende-nukleotidet er deoxycytidin eller thymidin.

9. Anvendelse ifølge et hvilket som helst af krav 1 til 8, hvor dyrecellen er valgt fra gruppen bestående af en pattedyrscelle, en fuglecelle, en insektcelle, en ormecelle og en fiskecelle.

10. Anvendelse ifølge krav 2, hvor målgenet eksisterer på et bakterielt kunstigt kromosom.

11. In vitro anvendelse af en sammensætning til at foretage en forudbestemt genetisk ændring i et kromosomalt målgen afen dyrecelle, sammensætningen omfattende: (a) en forbindelse til at foretage en forudbestemt genetisk ændring i et kromosomalt målgen af en dyrecelle, hvor forbindelsen er et enkeltstrenget oligodeoxynukleotid, der har et 3'-ende-nukleotid, et 5'-ende-nukleotid, der har mindst 25 deoxynukleotider og ikke mere end 65 deoxynukleotider, og der har en sekvens omfattende mindst to regioner hver af mindst 8 deoxynukleotider, som er henholdsvis identiske med mindst to regioner af det kromosomale målgen, hvor regionerne sammen er mindst 24 nukleotider i længde, og hvor regionerne er adskilt af mindst ét nukleotid i sekvensen af det kromosomale målgen eller i sekvensen af oligodeoxynukleotidet eller begge og har en forskellig sekvens, hvor 5'-hydroxylen af 5'-ende-nukleotidet er bundet til en 5'-blokeringssubstituent, hvor 5'-blokeringssubstituenten er en N'-hydroxyalkyl-substitueret 3,3,3',3'-tetra-substitueret in-docarbocyaninfarve bundet gennem en linker til 5'-hydroxylen af 5'-ende-nukleotidet, og; (b) et makromolekylært bærestof valgt fra gruppen bestående af (i) en lipid-vesikel med vandig kerne, hvor den vandige kerne indeholder det enkeltstrengede oligodeoxynukleotid, (ii) en lipid-nanosfære, som omfatter et lipofilt salt af det enkeltstrengede oligodeoxynukleotid, og (iii) en polykation, der har en gennemsnitlig molekylvægt på mellem 500 Dalton og 1,3 Md, hvor polykationen danner et salt med det enkeltstrengede oligodeoxynukleotid.

12. Anvendelse ifølge krav 11, hvor længden af det enkeltstrengede oligodeoxynukleotid er mindst 31 deoxynukleotider og ikke mere end 59 deoxynukleotider.

13. Anvendelse ifølge krav 11, hvor det makromolekylære bærestof yderligere omfatter en ligand til en internaliserbar receptor af cellen, hvor liganden er fæstnet til overfladen af det makromolekylære bærestof.

14. Anvendelse ifølge krav 13, hvor receptoren er valgt fra gruppen bestående af asialoglycoproteinreceptoren, transferinreceptoren, folsyrereceptoren og den epidermale væ kstf a kto rrece pto r.

15. Sammensætning til anvendelse i en terapeutisk fremgangsmåde til at foretage en forudbestemt genetisk ændring i et kromosomalt målgen i et væv, eventuelt leveren, hos et pågældende pattedyr, omfattende at indgive en virkningsfuld mængde af en sammensætning, hvor sammensætningen omfatter: (a) en enkeltstrenget oligodeoxynukleotid, der har et 3'-ende-nukleotid, et 5'-ende-nukleotid, der har mindst 25 deoxynukleotider og ikke mere end 65 deoxynukleotider, og der har en sekvens omfattende mindst to regioner hver ef mindst 8 deoxynukleotider, som er henholdsvis identiske med mindst to regioner af det kromosomale målgen, hvor regionerne sammen er mindst 24 nukleotider i lænde, og hvor regionerne er adskilt af mindst ét nukleotid i sekvensen af det kromosomale målgen eller i sekvensen af oligodeoxynukleoti-det eller begge og har en forskellig sekvens, hvor 5'-hydroxylen af 5'-ende-nukleotidet er bundet til en 5'-blokeringssubstituent, hvor 5'-blokeringssubstituenten er en N'-hydroxyalkyl-substitueret 3,3,3',3'-tetra-substitueret indocarbocyaninfarve bundet gennem en linker til 5'-hydroxylen af 5'-ende-nukleotidet, og; (b) et makromolekylært bærestof valgt fra gruppen bestående af (i) en lipid-vesikel med vandig kerne, hvor den vandige kerne indeholder det enkeltstrengede oligodeoxynukleotid, (ii) en lipid-nanosfære, som omfatter et lipofilt salt af det enkeltstrengede oligodeoxynukleotid, og (iii) en polykation, der har en gennemsnitlig molekylvægt på mellem 500 Dalton og 1,3 Md, hvor polykationen danner et salt med det enkeltstrengede oligodeoxynukleotid.