JP5813571B2 - 一本鎖オリゴヌクレオチド変異ベクター - Google Patents
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Description
本発明は、一本鎖オリゴデオキシヌクレオチド、その特定の誘導体、および生細胞内の標的遺伝子中の所定の位置に所定の変化を導入するためのこれらの使用に関する。細胞は、哺乳動物、昆虫、魚類、蠕形動物もしくは鳥類の細胞でよく、これらは人工的培養培地中にあるものでも器官内にあるものでもよく、または細菌細胞もしくは植物細胞であってもよい。標的遺伝子は、染色体内の遺伝子でもよく、染色体外の遺伝子(つまり、細菌人工染色体上の遺伝子)でもよい。
細胞の標的核酸配列内の所定の位置に所定の変化をもたらす技術は既に記載されている。これらの技術は、DNAの修復および相同組換えに関する細胞の酵素を利用する。これらの技術では、標的遺伝子とは異なる「変異誘発領域(mutator region)」と呼ばれる領域に隣接する2つの標的遺伝子配列を有している領域を含むオリゴヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチド類似体を合成する。本明細書中では、このようなオリゴヌクレオチドおよび類似体は概して「変異ベクター(mutational vector)」と呼ぶ。このような変異ベクターにより、相同組換えならびに/または核酸の切除および修復に関与すると考えられる機構により標的遺伝子内に所定の遺伝子変化を導入することができる。
本発明は、一本鎖オリゴデオキシヌクレオチドが、特に、適切に修飾されているか、または適切な高分子担体と共に組成物中に含まれる場合、細胞内の標的遺伝子における所定の遺伝子変化を作製するのに先行技術(即ち、Kmiec型変異ベクター)と同等またはそれ以上に効果的であり得るという予想外の発見に基づいている。本発明に適切な一本鎖オリゴデオキシヌクレオチドは、以後、一本鎖オリゴデオキシヌクレオチド変異ベクターまたはSSOMVと呼ぶ。
SSOMVの配列は、従来の変異ベクター(mutational vector)と同じ原理に基づく。SSOMVの配列は、「変異誘発領域」と呼ばれる所望の遺伝子変化を含む領域により隔てられた、2つの標的配列に相同な領域を含む。変異誘発領域は、標的配列中の該相同領域を隔てる配列と同じ長さで且つ異なる配列を有することができる。このような変異誘発領域は、置換を引き起こす。あるいは、SSOMV中の該相同領域は互いに連続していてもよいが、標的遺伝子中の同じ配列を有する該領域は、1個、2個またはそれ以上のヌクレオチドにより隔てられていてもよい。このようなSSOMVは、SSOMVには無いヌクレオチドを標的遺伝子から欠失させる。また、標的遺伝子中の該相同領域と同じ配列は該標的遺伝子の中で隣接していてもよいが、SSOMVの配列中では1個、2個またはそれ以上のヌクレオチドにより隔てられていてもよい。このようなSSOMVは、標的遺伝子の配列において挿入を引き起こす。
Gunnラットは、クリグラー‐ナジャー病において突然変異している遺伝子と同じ遺伝子である、UDP-グルクロノシルトランスフェラーゼ遺伝子の中に突然変異を含む(Roy-Chowdhuryら, 1991, J. Biol. Chem. 266: 18294;Iyanangiら, 1989, J. Biol. Chem. 264: 21302)。Gunnラットにおいて、1206番目のヌクレオチドに突然変異があり、これはGの欠失を有する。CN3-35UPと呼ばれる35ヌクレオチドのSSOMV(アンチセンス鎖に対応)は、この突然変異を復帰させるために構築したものであり、以下の配列を有する:5'-ATCATCGGCAGTCATTTCCAGGACATTCAGGGTCA-3'(配列番号1)。CN3-35LOWと呼ばれる第2のSSOMV(センス鎖に対応)は、以下の配列を有する:5'-TGACCCTGAATGTCCTGGAAATGACTGCCGATGAT-3'(配列番号2)。変異誘発ヌクレオチドは下線で示してある。
以下の実施例は、高分子担体中の非修飾SSOMVを用いて、人工培地中の哺乳動物細胞内に特異的遺伝子変化を、Kmiec型DNA/2'OMeRNA変異ベクターで観察される比率の約3分の1の比率で、導入することができることを示す。これらのデータはさらに、ホスホロチオエート結合1つという最小限の修飾で、十分に匹敵する比率が得られることを示す。
5'Cy3 SSOMV 15%
3'-3'dC SSOMV 5%
5'Cy3, 3'-3' dC SSOMV 15%
5'ホスホロチオエート SSOMV 16%
3'ホスホロチオエート 12%
Kmiec型MV 14%
これらのデータは、高分子担体の存在下において修飾SSOMVがKmiec型変異ベクターと同じくらい有効であったこと、および非修飾SSOMVはその約3分の1の効力しかなかったことを示す。
以下の実施例は、細菌細胞内において、修飾SSOMVがKmiec DNA/2'OMeRNA変異ベクターよりも効率的であることを示す。
68 nt Kmiec MV w/2'OMe RNAリンカー 0.04
68 nt Kmiec MV w/DNAリンカー 0.004
41 nt SSOMV w/3',5'ホスホチオエート 0.4
35 nt SSOMV w/3',5'ホスホチオエート 4.0
29 nt SSOMV w/3',5'ホスホチオエート 0.9
25 nt SSOMV w/3',5'ホスホチオエート 1.0
41 nt SSOMV w/3'-3'dC,5'Cy3 2.0
35 nt SSOMV w/3'-3'dC,5'Cy3 2.9
35 nt SSOMV w/3'-3'dC 2.5
35 nt SSOMV w/5'Cy3 2.5
29 nt SSOMV w/3'-3'dC,5'Cy3 4.2
25 nt SSOMV w/3'-3'dC,5'Cy3 42.0
25 nt SSOMV w/3'-3'dC 1.3
25 nt SSOMV w/5'Cy3 1.8
25 nt SSOMV w/3'ホスホチオエート,5'Cy3 8.4
35 nt SSOMV w/3'ホスホチオエート,5'Cy3 10.2
これらのデータは、最適SSOMVの転換率がKmiec型変異ベクターの転換率に比べて103〜104倍大きかったことを示す。
この実施例は、保護高分子担体の不在下で修飾SSOMVを用いた哺乳動物細胞の改変を示す。修飾SSOMVは、Kmiec型変異ベクターよりも15〜30倍の高率で遺伝子改変を導入することができた。この実施例は実施例3と同じ遺伝子を用いている。ただしこの遺伝子はHuH-7細胞株中で発現させる。
この実施例は、哺乳動物細胞系において、保護担体を用いない非修飾SSOMVが5'Cy3/3'-3'dC修飾SSOMVおよびKmiec型DNA/2'OMe RNA変異ベクターの両方よりも優れていることを示す。
非修飾SSOMV 5
SSOMV w/3',5'ホスホロチオエート 6
SSOMV w/3'-3'dC 2
SSOMV w/5'Cy3 3
SSOMV w/3'-3'dC, 5'Cy3 1
10.実施例6:植物中の修飾SSOMVの使用
この実施例は、シロイヌナズナArabodopsis thalianaのアセトヒドロキシ酸シンターゼ(アセトール酸シンターゼ(acetolatate synthase)としても知られている)の653位に変異(Ser→Asn)を導入するためのSSOMVの使用に関する。この変異は、AGTコドンのAATコドンへの変換を必要とし、イミダゾリン除草剤およびスルホニル尿素除草剤に対する耐性を導入する。
この実施例は、本発明で高分子担体として使用するのに適した葉酸コンジュゲートPEIの調製について記載する。
Claims (53)
- 動物細胞の標的とする染色体内の遺伝子の中に所定の遺伝子変化をもたらすための組成物であって:
(a) 3'末端ヌクレオチドと5'末端ヌクレオチドとを有し、25個以上65個以下のデオキシヌクレオチドを有する一本鎖オリゴデオキシヌクレオチドであって、それぞれ少なくとも8個のデオキシヌクレオチドからなる少なくとも2つの領域を含む配列を有しており、該少なくとも2つの領域は、それぞれ標的とする染色体内の遺伝子の少なくとも2つの領域と同一であり、かつ標的とする染色体内の遺伝子のコード鎖または非コード鎖のいずれかに相補的であり、これら少なくとも2つの領域は、標的とする染色体内の遺伝子の配列内もしくはオリゴデオキシヌクレオチドの配列内、またはその両方において、少なくとも1個のヌクレオチドで隔てられており、該少なくとも2つの領域を合計すると少なくとも24ヌクレオチド長であり、該少なくとも2つの領域を隔てる少なくとも1個のヌクレオチドが所定の遺伝子変化を含む、上記一本鎖オリゴデオキシヌクレオチド;ならびに
(b) 以下:
(i) 水性コア内に上記一本鎖オリゴヌクレオチドを含んでいる水性コアを有する脂質小胞、
(ii) 一本鎖オリゴヌクレオチドの親油性の塩を含んでいる脂質ナノスフェア、および
(iii) オリゴ核酸塩基と塩を形成する、平均分子量が500ダルトン〜1.3Mdであるポリカチオン、
からなる群より選択される高分子担体;
を含み、前記一本鎖オリゴデオキシヌクレオチドが5'末端ヌクレオチドおよび3'末端ヌクレオチドの一方または両方において修飾されている、上記組成物。 - 5'末端ヌクレオチドに連結しているヌクレオチド間結合および3'末端ヌクレオチドに連結しているヌクレオチド間結合の一方または両方が、ホスホロチオエート結合又はホスホロアミダイト結合に置換されている、請求項1記載の組成物。
- 5'末端ヌクレオチドおよび3'末端ヌクレオチドの一方または両方がそれぞれ5'ブロッキング置換基または3'ブロッキング置換基の結合により修飾されている、請求項1または2記載の組成物。
- 5'ブロッキング置換基が5'結合インドカルボシアニン色素であり、3'ブロッキング置換基が3'-3'結合デオキシシチジンである、請求項3記載の組成物。
- 一本鎖オリゴヌクレオチドが31個以上59個以下のデオキシヌクレオチドからなる長さを有する、請求項1〜4のいずれか1項記載の組成物。
- 高分子担体が、その表面に接着した、動物細胞の細胞内移行可能な受容体に対するリガンドをさらに含んでいる、請求項1〜5のいずれか1項記載の組成物。
- (a) 薬学的に許容される担体中の請求項6記載の組成物を対象の哺乳動物に投与し;そして
(b) 対象の哺乳動物の組織の細胞内における所定の遺伝子変化の存在を検出すること;
を含む方法により対象とする哺乳動物の組織内に所定の遺伝子変化をもたらすための、請求項6記載の組成物。 - 対象の哺乳動物が、遺伝子障害を有するヒトであり、該遺伝子障害は所定の遺伝子変化によって復帰するものであり、前記方法が該遺伝子障害の影響を回復させるのに有効な量の上記組成物を投与することを含む、請求項7記載の組成物。
- 組織が肝臓である、請求項7または8記載の組成物。
- 受容体が、アシアロ糖タンパク質受容体、トランスフェリン受容体および上皮増殖因子受容体からなる群より選択されたものである、請求項6記載の組成物。
- 受容体が葉酸受容体である、請求項6記載の組成物。
- 3'末端ヌクレオチドに連結しているヌクレオチド間結合がホスホロチオエート結合である、請求項2記載の組成物。
- 5'末端ヌクレオチドに連結しているヌクレオチド間結合がホスホロチオエート結合である、請求項2記載の組成物。
- 5'末端ヌクレオチドの5'水酸基が5'ブロッキング置換基に結合している、請求項3記載の組成物。
- 5'ブロッキング置換基が、N'-ヒドロキシアルキル置換3,3,3',3'-テトラ置換インドカルボシアニン色素であり、リンカーを介して5'水酸基に結合している、請求項14記載の組成物。
- インドカルボシアニン色素およびリンカーが一緒になって、N-ヒドロキシプロピル, N'-ホスファチジルプロピル3,3,3',3'-テトラメチルインドモノカルボシアニンを形成している、請求項15記載の組成物。
- 3'末端ヌクレオチドに結合しているヌクレオチド間結合がホスホロチオエート結合である、請求項15記載の組成物。
- 3'末端ヌクレオチドの3'水酸基が3'ブロッキング置換基に結合している、請求項3記載の組成物。
- 3'ブロッキング置換基が、3'末端ヌクレオチドの3'水酸基に3'-3'結合しているブロッキングヌクレオチドである、請求項18記載の組成物。
- 標的とする遺伝子の中に所定の遺伝子変化を含む動物細胞を取得する方法であって、
(a) 培養培地に入った動物細胞の集団を用意し;
(b) 該培養培地に請求項1〜19のいずれか1項記載の組成物を添加し;そして
(c) 該集団内の所定の遺伝子変化を有する細胞を同定すること;
を含む、上記方法。 - 同定された細胞を単離することをさらに含む、請求項20記載の方法。
- 動物細胞の標的とする染色体内の遺伝子の中に所定の遺伝子変化をもたらすための化合物であって、3'末端ヌクレオチドと5'末端ヌクレオチドとを有し、25個以上65個以下のデオキシヌクレオチドを有する一本鎖オリゴデオキシヌクレオチドを含んでおり、該一本鎖オリゴデオキシヌクレオチドは、それぞれ少なくとも8個のデオキシヌクレオチドからなる少なくとも2つの領域を含む配列を有しており、該少なくとも2つの領域は、それぞれ標的とする染色体内の遺伝子の少なくとも2つの領域と同一であり、かつ標的とする染色体内の遺伝子のコード鎖または非コード鎖のいずれかに相補的であり、これら少なくとも2つの領域は、標的とする染色体内の遺伝子の配列内もしくはオリゴデオキシヌクレオチドの配列内、またはその両方において、少なくとも1個のヌクレオチドで隔てられており、該少なくとも2つの領域を合計すると少なくとも24ヌクレオチド長であり、該少なくとも2つの領域を隔てる少なくとも1個のヌクレオチドが所定の遺伝子変化を含む、上記化合物。
- 一本鎖オリゴデオキシヌクレオチドが5'末端ヌクレオチドおよび3'末端ヌクレオチドの一方または両方において修飾されている、請求項22記載の化合物。
- 5'末端ヌクレオチドに連結しているヌクレオチド間結合および3'末端ヌクレオチドに連結しているヌクレオチド間結合の一方または両方が、ホスホロチオエート結合又はホスホロアミダイト結合に置換されている、請求項23記載の化合物。
- 5'末端ヌクレオチドおよび3'末端ヌクレオチドの一方または両方がそれぞれ5'ブロッキング置換基または3'ブロッキング置換基の結合により修飾されている、請求項23または24記載の化合物。
- 5'ブロッキング置換基が5'結合インドカルボシアニン色素であり、3'ブロッキング置換基が3'-3'結合デオキシシチジンである、請求項25記載の化合物。
- 3'末端ヌクレオチドに連結しているヌクレオチド間結合がホスホロチオエート結合である、請求項24記載の化合物。
- 5'末端ヌクレオチドに連結しているヌクレオチド間結合がホスホロチオエート結合である、請求項24または27記載の化合物。
- N'-ヒドロキシアルキル置換3,3,3',3'-テトラ置換インドカルボシアニン色素が、リンカーを介して5'末端ヌクレオチドの5'水酸基に結合している、請求項27記載の化合物。
- 3'末端ヌクレオチドに連結しているヌクレオチド間結合がホスホロチオエート結合であるか、デオキシシチジンもしくはチミジンヌクレオチドが3'末端ヌクレオチドの3'水酸基に3'-3'結合しているか、またはこの両方である、請求項28記載の化合物。
- 細菌細胞内の標的とする遺伝子の中に所定の遺伝子変化をもたらす化合物であって:
(a) 3'末端ヌクレオチドと5'末端ヌクレオチドとを有し、15個以上41個以下のデオキシヌクレオチドを有する一本鎖オリゴヌクレオチドであって、それぞれ少なくとも7個のデオキシヌクレオチドからなる少なくとも2つの領域を含む配列を有しており、該少なくとも2つの領域は、それぞれ標的とする遺伝子の少なくとも2つの領域と同一であり、かつ標的とする遺伝子のコード鎖または非コード鎖のいずれかに相補的であり、これら少なくとも2つの領域は、標的とする遺伝子の配列内もしくは上記一本鎖オリゴヌクレオチドの配列内、またはその両方において、少なくとも1個のヌクレオチドで隔てられており、該少なくとも2つの領域を合計すると少なくとも14ヌクレオチド長であり、該少なくとも2つの領域を隔てる少なくとも1個のヌクレオチドが所定の遺伝子変化を含む、上記一本鎖オリゴヌクレオチド;
(b) 5'末端ヌクレオチドに連結しているヌクレオチド間結合がホスホロチオエート結合であるか、またはN'-ヒドロキシアルキル置換3,3,3',3'-テトラ置換インドカルボシアニン色素がリンカーを介して5'末端ヌクレオチドの5'水酸基に結合している5'修飾;および
(C) 3'末端ヌクレオチドに連結しているヌクレオチド間結合がホスホロチオエート結合であるか、デオキシシチジンもしくはチミジンヌクレオチドが3'末端ヌクレオチドの3'水酸基に3'-3'結合しているか、またはこの両方である3'修飾;
を含む、上記化合物。 - 5'修飾がN-ヒドロキシプロピル,N'-ホスファチジルプロピル3,3,3',3'-テトラメチルインドモノカルボシアニンを含むものである、請求項31記載の化合物。
- 3'修飾が3'-3'結合デオキシシチジンからなるものである、請求項31または32記載の化合物。
- 3'修飾が3'末端ヌクレオチドに連結しているヌクレオチド間ホスホロチオエート結合からなるものである、請求項31記載の化合物。
- 植物細胞内の標的とする染色体内の遺伝子の中に所定の遺伝子変化をもたらす化合物であって、3'末端ヌクレオチドと5'末端ヌクレオチドとを有し、21個以上55個以下のデオキシヌクレオチドを有する一本鎖オリゴヌクレオチドを含み、該一本鎖オリゴヌクレオチドは、それぞれ少なくとも8個のヌクレオチドからなる少なくとも2つの領域を含む配列を有しており、該少なくとも2つの領域は、それぞれ標的とする遺伝子の少なくとも2つの領域と同一であり、かつ標的とする染色体内の遺伝子のコード鎖または非コード鎖のいずれかに相補的であり、これら少なくとも2つの領域は、標的とする遺伝子の配列内もしくは一本鎖オリゴヌクレオチドの配列内、またはその両方において、少なくとも1個のヌクレオチドで隔てられており、該少なくとも2つの領域を合計すると少なくとも20ヌクレオチド長であり、該少なくとも2つの領域を隔てる少なくとも1個のヌクレオチドが所定の遺伝子変化を含む、上記化合物。
- 一本鎖オリゴデオキシヌクレオチドが5'末端ヌクレオチドおよび3'末端ヌクレオチドの一方または両方において修飾されている、請求項35記載の化合物。
- 5'末端ヌクレオチドに連結しているヌクレオチド間結合および3'末端ヌクレオチドに連結しているヌクレオチド間結合の一方または両方が、ホスホロチオエート結合又はホスホロアミダイト結合に置換されている、請求項36記載の化合物。
- 5'末端ヌクレオチドおよび3'末端ヌクレオチドの一方または両方がそれぞれ5'ブロッキング置換基または3'ブロッキング置換基の結合により修飾されている、請求項36または37記載の化合物。
- 5'ブロッキング置換基が5'結合インドカルボシアニン色素であり、3'ブロッキング置換基が3'-3'結合デオキシシチジンである、請求項38記載の化合物。
- 5'末端ヌクレオチドの5'水酸基が5'ブロッキング置換基に結合している、請求項38記載の化合物。
- 3'末端ヌクレオチドの3'水酸基が3'ブロッキング置換基に結合している、請求項38記載の化合物。
- 請求項41記載の化合物であって、
(a) 5'ブロッキング置換基が、N'-ヒドロキシアルキル置換3,3,3',3'-テトラ置換インドカルボシアニン色素であり、リンカーを介して5'末端ヌクレオチドの5'水酸基に結合しており;そして
(b) 3'ブロッキング置換基が3'末端ヌクレオチドの3'水酸基に3'-3'結合しているブロッキングヌクレオチドである;
上記化合物。 - 一本鎖オリゴヌクレオチドが、25ヌクレオチド以上35ヌクレオチド以下の長さを有する、請求項42記載の化合物。
- ブロッキングヌクレオチドがデオキシシチジンまたはチミジンである、請求項42記載の化合物。
- インドカルボシアニン色素およびリンカーが一緒になって、N-ヒドロキシプロピル,N'-ホスファチジルプロピル3,3,3',3'-テトラメチルインドモノカルボシアニンを形成している、請求項42記載の化合物。
- 3'末端ヌクレオチドに連結しているヌクレオチド間結合がホスホロチオエート結合である、請求項37記載の化合物。
- 5'末端ヌクレオチドに連結しているヌクレオチド間結合がホスホロチオエート結合である、請求項37記載の化合物。
- 請求項37記載の化合物であって、
(a) 5'末端ヌクレオチドの5'水酸基が、5'ブロッキング置換基に結合しており;そして
(b) 3'末端ヌクレオチドに連結しているヌクレオチド間結合がホスホロチオエート結合である;
上記化合物。 - 5'ブロッキング置換基が、N'-ヒドロキシアルキル置換3,3,3',3'-テトラ置換インドカルボシアニン色素であり、リンカーを介して5'末端ヌクレオチドの5'水酸基に結合している、請求項48記載の化合物。
- 動物細胞が、哺乳動物細胞、鳥類細胞、昆虫細胞、蠕形動物細胞および魚類細胞からなる群より選択される、請求項1〜19のいずれか1項記載の組成物。
- 動物細胞が、哺乳動物細胞、鳥類細胞、昆虫細胞、蠕形動物細胞および魚類細胞からなる群より選択される、請求項22〜30のいずれか1項記載の化合物。
- 動物細胞が、哺乳動物細胞、鳥類細胞、昆虫細胞、蠕形動物細胞および魚類細胞からなる群より選択される、請求項20または21記載の方法。
- 標的とする遺伝子が細菌の人工染色体上にある、請求項31記載の化合物。
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US6652607B2 (en) | 1999-07-07 | 2003-11-25 | The Lubrizol Corporation | Concentrated emulsion for making an aqueous hydrocarbon fuel |
EP1212406A1 (en) * | 1999-08-20 | 2002-06-12 | University Of Delaware | Cell-free assay for plant gene targeting and conversion |
US6271360B1 (en) * | 1999-08-27 | 2001-08-07 | Valigen (Us), Inc. | Single-stranded oligodeoxynucleotide mutational vectors |
AR025996A1 (es) | 1999-10-07 | 2002-12-26 | Valigen Us Inc | Plantas no transgenicas resistentes a los herbicidas. |
US6936467B2 (en) * | 2000-03-27 | 2005-08-30 | University Of Delaware | Targeted chromosomal genomic alterations with modified single stranded oligonucleotides |
EP1268768A2 (en) * | 2000-03-27 | 2003-01-02 | University Of Delaware | Targeted chromosomal genomic alterations with modified single stranded oligonucleotides |
EP1284985A2 (en) * | 2000-05-17 | 2003-02-26 | University Of Delaware | Plant gene targeting using oligonucleotides |
AU2001279069A1 (en) * | 2000-07-27 | 2002-02-13 | University Of Delaware | Methods for enhancing targeted gene alteration using oligonucleotides |
US7053195B1 (en) * | 2001-06-12 | 2006-05-30 | Syngenta Participatious Ag | Locked nucleic acid containing heteropolymers and related methods |
AU2002326589B2 (en) * | 2001-08-07 | 2008-06-05 | University Of Delaware | Compositions and methods for the prevention and treatment of Huntington's disease |
US20040096880A1 (en) * | 2001-08-07 | 2004-05-20 | Kmiec Eric B. | Compositions and methods for the treatment of diseases exhibiting protein misassembly and aggregation |
AU2002341905A2 (en) * | 2001-09-27 | 2003-04-07 | University Of Delaware | Composition and methods for enhancing oligonucleotide-directed nucleic acid sequence alteration |
US20030207327A1 (en) * | 2001-09-27 | 2003-11-06 | Kmiec Eric B. | Coisogenic eukaryotic cell collections |
IL163875A0 (en) * | 2002-03-07 | 2005-12-18 | Univ Delaware | Methods, compositions, and kits for enhancing oli gonucleotide mediated nucleic acid sequence alteration using compositions comprising a histone de |
GB0218803D0 (en) * | 2002-08-13 | 2002-09-18 | Nl Kanker I | Targeted gene modification by single-standed DNA oligonucleotides |
US20040175722A1 (en) * | 2002-10-07 | 2004-09-09 | Kmiec Eric B. | Methods and compositions for reducing screening in oligonucleotide-directed nucleic acid sequence alteration |
US6929917B2 (en) * | 2002-11-18 | 2005-08-16 | Pregentis | Method for cloning of a rare, specifically mutated cell |
US20070072815A1 (en) * | 2004-05-04 | 2007-03-29 | Kmiec Eric B | Methods and kits to increase the efficiency of oligonucleotide-directed nucleic acid sequence alteration |
SI2465341T1 (sl) | 2006-01-12 | 2015-04-30 | Cibus Europe B.V. | Mutantni epsps |
WO2008002643A2 (en) | 2006-06-28 | 2008-01-03 | Cibus Llc | Fatty acid blends and uses therefor |
WO2008040787A2 (de) | 2006-10-06 | 2008-04-10 | Basf Plant Science Gmbh | Verfahren zur herstellung mehrfach ungesättigter fettsäuren in transgenen organismen |
US9102948B2 (en) | 2006-11-17 | 2015-08-11 | 22Nd Century Limited, Llc | Regulating alkaloids |
EP2700722B1 (en) | 2007-10-05 | 2019-06-19 | Cibus Europe B.V. | Mutated acetohydroxyacid synthase genes in brassica |
US20110023352A1 (en) * | 2007-12-27 | 2011-02-03 | Knuth Mark E | Alkylester fatty acid blends and uses therefor |
CA2725175A1 (en) * | 2008-05-23 | 2009-11-26 | Cibus Oils, Llc | Production of squalene using yeast |
CA2737939C (en) | 2008-09-26 | 2021-04-27 | Basf Agrochemical Products B.V. | Herbicide-resistant ahas-mutants and methods of use |
PL2376638T3 (pl) | 2008-12-12 | 2014-01-31 | Basf Plant Science Gmbh | Desaturazy oraz sposób wytwarzania wielonienasyconych kwasów tłuszczowych w organizmach transgenicznych |
DK2504421T3 (en) | 2009-11-23 | 2017-05-22 | Nucelis Inc | METHODS AND COMPOSITIONS FOR PREPARING SQUAL USING Yeast |
US20120122223A1 (en) | 2010-08-03 | 2012-05-17 | Cibus Us Llc | Mutated protoporphyrinogen ix oxidase (ppx) genes |
UA112969C2 (uk) | 2010-08-03 | 2016-11-25 | Сібас Юс Ллс | Рослина, стійка до одного або більше ррх-інгібуючих гербіцидів, яка містить мутантний ген протопорфіриноген ix оксидази (ррх) |
EP2426204A1 (en) | 2010-09-02 | 2012-03-07 | Ludwig-Maximilians-Universität München | Spontaneous nodule organogenesis in plants |
WO2012028673A1 (en) | 2010-09-02 | 2012-03-08 | Ludwig-Maximilians-Universitaet Muenchen | Spontaneous organogenesis in plants |
KR101137285B1 (ko) | 2010-10-28 | 2012-04-20 | 위월드 주식회사 | 초소형 광대역 송수신 안테나 피더 |
KR20150041788A (ko) | 2012-08-17 | 2015-04-17 | 다우 아그로사이언시즈 엘엘씨 | 식물에서의 트랜스진 발현을 위한 옥수수 비번역 영역의 용도 |
AU2014236181B2 (en) | 2013-03-14 | 2020-03-19 | Cibus Europe B.V. | Mutated allene oxide synthase 2 (AOS2) genes |
KR102304487B1 (ko) | 2013-03-15 | 2021-09-24 | 시버스 유에스 엘엘씨 | 올리고뉴클레오타이드 매개 유전자 보수를 사용한 표적화된 유전자 변형 |
KR20240036153A (ko) | 2013-03-15 | 2024-03-19 | 시버스 유에스 엘엘씨 | 올리고뉴클레오타이드 매개 유전자 보수를 사용한 표적화된 유전자 변형의 효율을 증가시키기 위한 방법 및 조성물 |
US9957515B2 (en) | 2013-03-15 | 2018-05-01 | Cibus Us Llc | Methods and compositions for targeted gene modification |
CN106455514A (zh) | 2014-03-14 | 2017-02-22 | 希博斯美国有限公司 | 采用寡核苷酸介导的基因修复提高靶向基因修饰的效率的方法和组合物 |
CA3014036A1 (en) | 2016-02-09 | 2017-08-17 | Cibus Us Llc | Methods and compositions for increasing efficiency of targeted gene modification using oligonucleotide-mediated gene repair |
US10584363B2 (en) | 2016-06-03 | 2020-03-10 | Takara Bio Usa, Inc. | Methods of producing and using single-stranded deoxyribonucleic acids and compositions for use in practicing the same |
EP3737766A4 (en) | 2018-01-09 | 2021-11-24 | Cibus US LLC | BREAK-PROOF GENES AND MUTATIONS |
Family Cites Families (23)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2731844B2 (ja) * | 1987-04-22 | 1998-03-25 | ザ・ユニヴァーシティー・オブ・コネチカット | 哺乳動物の細胞にポリヌクレオチドを導入するキャリア及び水溶性高分子複合体並びにその導入方法 |
ATE151076T1 (de) * | 1990-07-02 | 1997-04-15 | Hoechst Ag | Oligonucleotid-analoge mit terminalen 3'-3'-bzw. 5'-5'-internucleotidverknüpfungen |
KR100252547B1 (ko) | 1991-09-05 | 2000-09-01 | 프레드 마리얀스키 | 폴리-또는 올리고누클레오티드의 세포로의 표적화된 전달 |
US5808044A (en) * | 1993-01-22 | 1998-09-15 | Pharmacia Biotech Inc. | Indocarbocyanine and benzindocarbocyanine phosphoramidites |
US5556959A (en) | 1993-01-22 | 1996-09-17 | Pharmacia P-L Biochemicals Inc. | Indocarbocyanine-linked phosphoramidites |
NZ278490A (en) * | 1993-12-09 | 1998-03-25 | Univ Jefferson | Chimeric polynucleotide with both ribo- and deoxyribonucleotides in one strand and deoxyribonucleotides in a second strand |
US5780296A (en) | 1995-01-17 | 1998-07-14 | Thomas Jefferson University | Compositions and methods to promote homologous recombination in eukaryotic cells and organisms |
AU6328696A (en) * | 1995-06-07 | 1996-12-30 | Yale University | Treatment of hemoglobinopathies |
US5908777A (en) * | 1995-06-23 | 1999-06-01 | University Of Pittsburgh | Lipidic vector for nucleic acid delivery |
FR2736926B1 (fr) | 1995-07-19 | 1997-08-22 | Rhone Poulenc Agrochimie | 5-enol pyruvylshikimate-3-phosphate synthase mutee, gene codant pour cette proteine et plantes transformees contenant ce gene |
US5731181A (en) | 1996-06-17 | 1998-03-24 | Thomas Jefferson University | Chimeric mutational vectors having non-natural nucleotides |
US5888983A (en) | 1996-05-01 | 1999-03-30 | Thomas Jefferson University | Method and oligonucleobase compounds for curing diseases caused by mutations |
US5760012A (en) | 1996-05-01 | 1998-06-02 | Thomas Jefferson University | Methods and compounds for curing diseases caused by mutations |
CA2282729A1 (en) * | 1997-02-26 | 1998-09-03 | The General Hospital Corporation | Transgenic animals and cell lines for screening drugs effective for the treatment or prevention of alzheimer's disease |
AU749410B2 (en) | 1997-04-30 | 2002-06-27 | Regents Of The University Of Minnesota | In vivo use of recombinagenic oligonucleobases to correct genetic lesions in hepatocytes |
US6524613B1 (en) | 1997-04-30 | 2003-02-25 | Regents Of The University Of Minnesota | Hepatocellular chimeraplasty |
GB9711015D0 (en) | 1997-05-28 | 1997-07-23 | Zeneca Ltd | Improvements in or relating to organic compounds |
US5986086A (en) * | 1997-06-20 | 1999-11-16 | Amersham Pharmacia Biotech Inc. | Non-sulfonated cyanine dyes for labeling nucleosides and nucleotides |
CN100419083C (zh) | 1997-08-05 | 2008-09-17 | 金默拉根有限公司 | 用混合双链寡核苷酸在植物中实现定点遗传改变的用途 |
CA2309719A1 (en) | 1997-11-18 | 1999-05-27 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Targeted manipulation of genes in plants |
US6004804A (en) | 1998-05-12 | 1999-12-21 | Kimeragen, Inc. | Non-chimeric mutational vectors |
US6271360B1 (en) * | 1999-08-27 | 2001-08-07 | Valigen (Us), Inc. | Single-stranded oligodeoxynucleotide mutational vectors |
JP2017533158A (ja) | 2014-08-21 | 2017-11-09 | コーニング インコーポレイテッド | 積層ガラス物品においてブリスターを防ぐ方法およびそれにより形成された積層ガラス物品 |
-
1999
- 1999-08-27 US US09/384,960 patent/US6271360B1/en not_active Expired - Lifetime
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