DK174986B1 - Anvendelse af purinderivater til fremstilling af et lægemiddel - Google Patents
Anvendelse af purinderivater til fremstilling af et lægemiddel Download PDFInfo
- Publication number
- DK174986B1 DK174986B1 DK199002649A DK264990A DK174986B1 DK 174986 B1 DK174986 B1 DK 174986B1 DK 199002649 A DK199002649 A DK 199002649A DK 264990 A DK264990 A DK 264990A DK 174986 B1 DK174986 B1 DK 174986B1
- Authority
- DK
- Denmark
- Prior art keywords
- hydroxy
- amino
- compounds
- acid
- alkyl
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D473/00—Heterocyclic compounds containing purine ring systems
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
- A61P31/22—Antivirals for DNA viruses for herpes viruses
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
- C07F9/00—Compounds containing elements of Groups 5 or 15 of the Periodic System
- C07F9/02—Phosphorus compounds
- C07F9/547—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom
- C07F9/6561—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom containing systems of two or more relevant hetero rings condensed among themselves or condensed with a common carbocyclic ring or ring system, with or without other non-condensed hetero rings
- C07F9/65616—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom containing systems of two or more relevant hetero rings condensed among themselves or condensed with a common carbocyclic ring or ring system, with or without other non-condensed hetero rings containing the ring system having three or more than three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members, e.g. purine or analogs
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
- C07F9/00—Compounds containing elements of Groups 5 or 15 of the Periodic System
- C07F9/02—Phosphorus compounds
- C07F9/547—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom
- C07F9/6564—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom having phosphorus atoms, with or without nitrogen, oxygen, sulfur, selenium or tellurium atoms, as ring hetero atoms
- C07F9/6571—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom having phosphorus atoms, with or without nitrogen, oxygen, sulfur, selenium or tellurium atoms, as ring hetero atoms having phosphorus and oxygen atoms as the only ring hetero atoms
- C07F9/657163—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom having phosphorus atoms, with or without nitrogen, oxygen, sulfur, selenium or tellurium atoms, as ring hetero atoms having phosphorus and oxygen atoms as the only ring hetero atoms the ring phosphorus atom being bound to at least one carbon atom
- C07F9/657181—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom having phosphorus atoms, with or without nitrogen, oxygen, sulfur, selenium or tellurium atoms, as ring hetero atoms having phosphorus and oxygen atoms as the only ring hetero atoms the ring phosphorus atom being bound to at least one carbon atom the ring phosphorus atom and, at least, one ring oxygen atom being part of a (thio)phosphonic acid derivative
Description
i DK 174986 B1
Den foreliggende opfindelse angår purinderivater og farmaceutisk acceptable salte heraf til anvendelse i terapien ved terapeutisk og profylaktisk behandling af det erhvervede immundeficiente syndrom (AIDS).
S
Virkningerne af vira på legemsfunktioner er slutresulta- * tet af ændringer, der forekommer på de cellulære og sub-cellulære niveauer. De pathogene ændringer på det cellulære niveau er forskellig for forskellige kombinationer 10 af vira og værtsceller. Medens visse vira forårsager en generel destruktion (drab) af visse celler, kan andre omdanne cellerne til en neoplastisk tilstand.
Alvorlige almindelige virale infektioner er herpes derma-15 titis (herunder herpes labialis), herpes keratitis, herpes genitalis, herpes zoster, herpes encephalitis, infek-tiøse mononucleose og cytomegalovirusinfektioner, der alle er forårsaget af vira, der hører til herpes virus gruppen. Andre vigtige virussygdomme er influenza A og B, 20 der er forårsaget af henholdsvis influenza A og B virus.
Andre vigtige almindelige virale sygdomme er viral hepatitis og specielt hepatitis B virus infektioner forekommer ofte. Effektive og selektive antivirale midler er nødvendige for behandlingen af disse sygdomme såvel som 25 andre sygdomme, der er forårsaget af vira.
Adskillige forskellige vira af både DNA og RNA typen har , vist sig at forårsage tumorer hos dyr. Virkningen af can cerogene kemikalier kan på dyr resultere i aktivering af 30 latente tumorvira. Det er muligt, at tumorvira er involveret i humane tumorer. De mest sandsynlige påviste humane tilfælde i dag er leukæmier, sarcoma, bryst-carcino-mer, Burkitt lymphomer, nasopharyngeale carcinomer og cervical cancer, hvor RNA tumorvira og herpes vira er på-35 vist. Dette gør eftersøgningen for selektive inhibitorer 2 DK 174986 B1 af tumorigene vira og deres funktioner som en vigtig opgave i forbindelse med behandlingen af cancer.
I den sidste halvdel af halvfjerdserne blev rapporteret 5 en ny sygdom, der blev betegnet som det erhvervede immun-deficiente syndrom (AIDS). Det er nu generelt accepteret, at et retrovirus omtalt som HIV (Human immundeficient virus) tidligere betegnet humant T-celle lymphotropt virus (HTLV-III) eller det lymphadenopatiassocierede virus 10 (LAV) spiller en væsentlig rolle ved etiologien af AIDS. Forskellige typer HIV er blevet påvist som HIV-1 og HIV-2 og flere bliver sandsynligvis isoleret.
AIDS er karakteriseret ved en dybtgående immundeficient 15 tilstand på grund af det lave antal af en undergruppe af lymphocyt-T-hjælperceller, der er et mål for HIV-infekti-on. Den gennemgribende immundeficiente tilstand hos AIDS patienter bevirker, at disse patienter er særdeles følsomme overfor en hel række opportunistiske infektioner af 20 bakteriel, svampe, protoz eller viral etiologi. De etio-logiske agens blandt virale opportunistiske infektioner findes ofte inden for herpes virus gruppen dvs. herpes simplex virus (HSV), Varicella Zoster virus (VZV), Epstein-Barr virus (EBV) og specielt cytomegalovirus 25 (CMV). Andre vira, der påvirker dyr, er feline leukæmivirus og det equine infektiøse anæmi virus. Humane sygdomme som multiple sclerose, psoriasis og Kawasaki sygdom er også blevet rapporteret som værende associeret med retro-virus-infektioner.
30
Hepatitis B virus infektioner bevirker alvorlige sygdomme som akut hepatitis, kronisk hepatitis, fulminant hepatitis hos et betydeligt antal personer. Det er fastslået, at der er 200 millioner patienter med kronisk hepatitis B 35 infektion i verden. Et betydeligt antal af de kroniske _r· tilfælde skrider fremad til lever cirrosis og lever tumo- 3 DK 174986 B1 rer. I visse tilfælde kan hepatitis infektioner også forårsage et hurtigt og alvorligt forløb som ved fulminant B hepatitis med ca. 90% dødelighed. Der er for øjeblikket ingen kendt effektiv behandling af hepatitis B infektio-5 ner. Replikationen af hepatitis B virus er som replika-tionen af retrovira, og den indeholder den samme essentielle virale omvendt transskriptase-aktivitet.
En hel række nucleosidanaloge udviser adskillige antime-10 taboliske virkninger. De gør dette ved at erstatte eller konkurrere med de naturligt forekommende nucleosider. For nylig har man beskrevet visse nucleosid analoge, der i cellekultur hæmmer multiplikationen af det humane immun-deficiente virus (HIV, også betegnet HTLV-III, LAV), det 15 causative agens ved AIDS og det AIDS-relaterede kompleks (ARC).
Det har nu vist sig, at evnen til at hæmme HIV og/eller herpes multiplikation udvises af nucleosidanaloge, hvori 20 nucleosidbaserne er både naturlige og modificerede purin-baser, der i N-9 stillingen er derivatiseret med en acyc-lisk sidekæde, forgrenet i 2'-stillingen, og som indeholder funktionelle grupper.
25 Purinderivater med antiviral virkning er tidligere blevet omtalt i følgende litteraturhenvisninger: 9-(phosphonylmethoxyalkyl)adeniner er beskrevet i AU-A-56328/86 og AU-A-56468/86; 30 9-(1,3-dihydroxy-2-propoxymethyl)puriner og cycliske phosphatestere er beskrevet i US-A-4 565 868, US-A-4 590 269 og EP-A-184 473; og 35 9-(4-hydroxy-3-hydroxymethylbutyl)purinderivater er beskrevet i EP-A-141 927. ~ 4 DK 174986 B1
Herudover kendes forbindelse med formlen Η Ν/^Ν/ΑχΝ·
CH^ - CH - CH2 - CH2OH
ch2oh 10 fra EP-A-186 64 0;
og forbindelserne med formlen OH
rV> -
CH - CH - CH - CH OH
I 2
20 (CH. ] OH
i n hvor n = 1 eller 2, er kendt fra EP-A-146 516.
Det har nu overraskende vist sig, at forbindelserne med 25 formlen
ArV
30 R " f CH2- CH - ch., - ch2r3 (ΟΗ2)η R4 hvor R1 betegner hydrogen eller hydroxy; 35 R2 betegner amino; R3 og R4 er uafhængigt valgt blandt 5 DK 174986 B1
O O O
I! II II
-P(OM)2, -P-CH2-P (OM) z, hydroxy
5 I
OM
eller en ether eller esterrest heraf, eller 10 O
II
R3 betegner sammen med R4 -P-O-, hvor
OM
15 M er hydrogen eller en farmaceutisk acceptabel modion; og n er 1; og farmaceutisk acceptable salte heraf hæmmer multiplikationen af det humane immundeficiente virus (HIV). Forbindelserne med formlen I er værdifulde som te-20 rapeutiske og/eller profylaktiske midler til kontrol og behandling af HIV virus infektioner hos mennesker.
Alle retrovira, herunder HIV, kræver enzymet omvendt transskriptase til deres naturlige replikationscyclus.
25
Hepatitis B virus (HBV) er et DNA virus med et unikt cirkulært dobbeltstrenget DNA genom, der er delvis enkelt-strenget. Det indeholder en specifik DNA polymerase, der er nødvendig for viral replikation. Denne^DNA polymerase 30 virker også som en omvendt transskriptase under replika-tionen af HBV DNA via et RNA mellemprodukt.
Forbindelserne med formlen I hæmmer aktiviteten af omvendt transskriptase fra retrovira herunder HIV såvel som 35 aktiviteten af DNA polymerase fra hepatitis B virus.
*· 6 DK 174986 B1
Et andet vigtigt anvendelsesområde for forbindelserne med formlen I er behandlingen af herpes virus infektioner. Blandt herpes vira kan nævnes herpes simplex type 1 og 2, varicella (Herpes Zoster), virusforårsaget infektiøs mo-5 nonucleose (dvs. Epstein-Barr virus) og cytomegalovirus. Vigtige sygdomme forårsaget af herpes vira er herpes dermatitis (herunder herpes labialis), herpes genitalis, herpes keratitis, herpes encephalitis og herpes zoster.
10 Et andet muligt anvendelsesområde for forbindelserne i-følge opfindelsen er behandlingen af cancer og tumorer, specielt sådanne, der er forårsaget af vira. Denne virkning kan opnås på forskellig måde dvs. ved at hæmme transformationen af virusinficerede celler til en neo-15 plastisk tilstand, ved at hæmme spredningen af vira fra transformerede celler til andre normale celler og ved at stoppe væksten af virustransformerede celler.
Den foreliggende opfindelse angår anvendelsen af en for-20 bindelse med formlen I
i6c> CH - CH - CH., - CH_R3 ' 4 ICH_) R 2 n hvor 30 R1 betegner hydrogen, hydroxy, mercapto eller amino; R betegner hydrogen, hydroxy, fluor, chlor eller amino; R3 og R4 er uafhængigt valgt blandt 35 7 DK 174986 B1
O O O
I! II II
-P(OM)2/ -P-CH2-P (OM) 2, hydroxy
5 OM
eller en ether eller esterrest heraf, eller 0
10 II
R3 er sammen med R4 -P-O-, hvor
OM
15 M er hydrogen eller en farmaceutisk acceptabel modion; og n er 1; og farmaceutisk acceptable salte heraf til fremstilling af et lægemiddel til terapeutisk og/eller profylaktisk behandling af det erhvervede immundeficiente syndrom.
20
Fortrinsvis kan de anvendes ved behandlingen af infektioner forårsaget af HIV vira.
Forbindelserne med formlen I kan indeholde et asymmetrisk 25 centrum, hvor CH2CH2R3 og {CH2)nR4 er forskellig. Som følge heraf kan de findes i to optiske former, der udgør et yderligere aspekt ved opfindelsen.
Foretrukne forbindelser, der skal anvendes ved opfindel-30 sen, er sådanne, hvor R1 er hydrogen eller hydroxy, og R2 er amino, og hvor R3 er 35 8 DK 174986 B1
O
II
-P(OM)2/ hydroxy eller en ester heraf, og 5 R4 er OH eller en esterderivat heraf, eller hvor R3 og R4 sammen betegner 0
II
10 -P-QM
/
-O
fortrinsvis er R3 og R4 begge hydroxy.
15
Eksempler på særligt foretrukne forbindelser til den i krav 1 nævnte anvendelse er sådanne med formlen I
R1 J\ ^N\ 20 Kl/ , ^ .aA> i CH2‘ “ ch2 " CH2R3
25 1CH,) RA
i n hvor
R1 = OH, R2 = NH2, R3 = OH, R4 = OH
R1 = H, R2 = NH2, R3 = OH, R4 = OH
30
O
II
R1 = OH, R2 - NH2, R3 og R4 = -P-OM
/
35 -O
9 DK 174986 B1
O
II
R1 = H, R2 = NH2, R3 og R4 = -P-OM 5 /
-O
R1 = OH, R2 = NH2/ R3 = 0C0C,-3, R4 = OCOC,-3 R1 = H, R2 = NH2, R3 = OCOCi-3, R4 = OCOC1-3 10 R1 = OH, R2 = NH2, R3 = OCONH-phenyl, R4 = OCONH-phenyl R1 = H, R2 = NH2, R3 = OCONH-phenyl, R4 = OCONH-phenyl
Estere og ethere af purinderivaterne er også omfattet af opfindelsen. Eksempler på estere er phosphatestere, carb-15 oxylsyreestere, carbonatestere, carbamatestere eller sul-fonsyreestere. Syredelen af esterne kan indeholde alkyl, aryl eller arylalkylkæder, hvor arylfunktionaliteterne eventuelt er substitueret med f.eks. alkoxy, amino, nitril, alkyl eller sulfonamidogrupper eller med en eller 20 flere halogenatomer.
Eksempler på andre typer derivater af purinbaserne er alkyl eller arylalkylderivaterne af den/de primære hydr-oxylgruppe/grupper. Arylalkyletherderivaterne kan f.eks.
25 være benzyl eller triphenylmethyl. Yderligere skal det forstås således, at eksemplerne på farmaceutisk acceptable salte omtalt nedenfor også angår de forskellige estere eller derivater af purinbaserne ifølge opfindelsen.
30 I en forbindelse med formlen I kan R3 og R4 som en ether-rest defineres som OR5, hvori R5 er C3-6 alkyl, arylalkyl eventuelt substitueret med en eller flere alkoxy, amino, nitril eller sulfamidogrupper eller et eller flere halo-35 genatomer.
10 DK 174986 B1 R3 og R4 kan som en esterrest stamme fra en carboxylsyre R6COOH, en kulsyre R70C00H, en dobbeltester af en kulsyre R7C02CH (Re) 0C02H, en sulfonsyre, R7S020H; en carbaminsyre R7NHCOOH eller en phosphorsyre, hvori R6 betegner hydro-5 gen, Ci-17 alkyl, alkoxyalkyl, arylalkyl eller aryl, R7be-tegner Ci-ιτ alkyl, arylalkyl eller aryl, R8 betegner hydrogen eller Ci-3 alkyl, og aryl og arylalkylgrupperne kan eventuelt være substitueret med en eller flere alkyl, alkoxy, amino, nitril, sulfonamidgrupper eller med et el-10 ler flere halogenatomer.
Eksempler på farmaceutisk acceptable salte af forbindelserne med formlen I omfatter basesalte f.eks. stammende fra en passende base som alkalimetal (f.eks. natrium, ka-15 lium, jordalkalimetal (f.eks. magnesium) salte, ammonium og NX4" (hvor X er Ci-4 alkyl) . Fysiologisk acceptable syresalte omfatter salte af organiske carboxylsyrer som eddikesyre, mælkesyre, gluconsyre, citronsyre, vinsyre, ma-leinsyre, æblesyre, pantothensyre, isethionsyre, oxalsy-20 re, lactobionsyre og ravsyre; organiske sulfonsyrer som f.eks. methansulfonsyre, ethansulfonsyre, benzensulfonsyre, p-chlorbenzensulfonsyre og p-toluensulfonsyre og uorganiske syrer som f.eks. saltsyre, hydrogeniodidsyre, svovlsyre, phosphorsyre og sulfaminsyrel 25
Fysiologisk acceptable modioner af phosphonatgrupperne omfatter uorganiske og organiske modioner. Uorganiske modioner er f.eks. ammonium, natrium, kalium, lithium, magnesium og calcium. Organiske modioner stammer fra 30 ikke-toxiske baser som f.eks. primære, sekundære og tertiære aminer, herunder naturligt forekommende aminer. Eksempler på sådanne aminer er diethylamin, triethylamin, isopropylamin, ethanolamin, morpholin, 2-diethylamino-ethanol, glucosamin, N-methylglucamin, piperazin og dicy-35 clohexylamin.
11 DK 174986 B1 I klinisk praksis bliver purinderivaterne med formlen I normalt administreret peroralt, ved injektion eller infusion i form af et farmaceutisk præparat der som den aktive bestanddel omfatter den oprindelige forbindelse eller 5 eventuelt sammen med et farmaceutisk acceptabelt bærestof, der kan være et fast, halvfast eller flydende fortyndingsmiddel eller en spiselig kapsel. Forbindelsen kan også anvendes uden bærestofmateriale. Som eksempler på farmaceutiske præparater kan nævnes tabletter, drageer, 10 kapsler, granulater, suspensioner, eliksirer, sirupper eller opløsninger. Sædvanligvis udgør den aktive forbindelse mellem 0,05 og 20% til præparater til injektionsforhold og mellem 10 og 90% til præparater til peroral administrering.
15
Ved behandlingen af patienter, der lider af retrovirus, specielt HIV eller hepatitis B virusinfektioner, foretrækkes det at administrere forbindelserne ad en hvilken som helst passende vej herunder peroralt, parenteralt, 20 rectalt, nasalt, topisk og vaginalt. Den parenterale måde omfatter subkutan, intramuskulær, intravenøs og sublingual administrering. Den topiske måde omfatter buccal og sublingual administrering. Den dosis, hvori de aktive bestanddele administreres, varierer inden for et bredt om-25 råde og afhænger af forskellige faktorer som infektionens sværhedsgrad, patientens alder og lignende og kan tilpasses. individuelt. Som muligt administreringsområde for forbindelserne ifølge opfindelsen eller et fysiologisk acceptabelt salt heraf administreres pr. dag fra ca. 10 30 mg til ca. 10 000 mg, fortrinsvis 100-500 mg ved intravenøs administrering og fortrinsvis 100-3000 mg ved peroral administrering.
Forbindelserne med formlen I kan samarbejdes synergistisk 35 eller additivt med en hel række andre terapeutiske midler, hvorved det terapeutiske potentiale af begge midler 12 DK 174986 B1 forøges uden at forhøje de toxiske virkninger, hvorved man forøger det terapeutiske forhold.
Derfor kan en forbindelse med formlen I eller et farma-5 ceutisk derivat heraf anvendes ved kombinationsterapi, hvori de to aktive midler forefindes i et forhold der giver et optimalt terapeutisk forhold. Dette kan opnås enten ved en synergistisk virkning overfor den virale infektion og/eller ved en nedsættelse af toxicititeten, 10 samtidig med at man opretholder en terapeutisk virkning, der er additiv eller synergistisk.
Det optimale terapeutiske forhold observeres, når de to midler forefindes, i et forhold på 550:1 til 1:500, for-15 trinsvis 100:1 til 1:100, specielt 20:1 til 1:20, og specielt 10:1 til 1:10.
Sådanne kombinationer kan bekvemt administreres sammen f.eks. i en samlet farmaceutisk præparat eller hver for 20 sig f.eks. som en kombination af tabletter og injektioner, der administreres på samme tidspunkt eller på forskellige tidspunkter for at opnå den ønskede terapeutiske virkning.
25 Forbindelserne med formlen I potentieres ved hjælp af in-teferoner, andre antivirale midler som foscarnet, AZT, HIV protease inhibitorer, immunomodulatorer, inteferon inducere og vækstfaktorer.
30 Særligt foretrukne typer af interferon er α, β og γ og interferon-inducere som f.eks. "Ampligen" (Hem Research).
Andre kombinationer omfatter sådanne, hvor det andet middel f.eks. er interleukin II, suramin, foscarnet eller 35 en ester heraf, HPA 23, inhibitorer af HIV protease som f.eks. pepstatin, steroider, lægemidler som levamisol el- 13 DK 174986 B1 ler thymosin for at forøge lymphocytantallet og/eller funktion afhængig hvad der er passende, eller GM-CSF og andre faktorer, der regulerer cellefunktioner.
5 Forbindelserne ifølge opfindelsen kan fremstilles ved en af følgende almene metoder.
A. Kondensering af en acyclisk sidekæde omfattet i formlen I til N-9 stillingen af et purinderivat. Den acyclis-10 ke sidekæde har en endestillet fraspaltelig gruppe og funktionelle grupper kan eventuelt være beskyttet med kendte grupper, der anvendes til beskyttelse af hydroxy, amino eller phosphonatfunktioner.
15 R'· W-CH2CH-CH2CH2R3 P I \ + i -> <ch2>„R<
20 R
_» 25 C«2- CH - CH2 - CH2R3
I A
ICH_) R 2 n 30
Eksempler på passende derivater af de reagerende forbindelser er sådanne, hvor R1' er Cl, eller R1 er som defineret ovenfor, R1, R2, R3, R4 og n er defineret som ovenfor og W betegner en passende fraspaltelig gruppe som 35 f.eks. Cl, Br, J, alkyl eller arylsulfonyloxy eller tri-fluormethansulfonyloxy. Kondenseringen udføres i et orga- 14 DK 174986 B1 nisk opløsningsmiddel som f.eks. dimethylformamid, dime-thylsulfoxid, ethanol, acetonitril, dichlormethan eller lignende ved en temperatur på mellem 0 *C og 150 ‘C i 1 til 5 dage, og efter kondensationen kan slutforbindelser-5 ne hydrolyseres eller omdannes på almindelig måde velkendt af fagmanden til forbindelserne med formlen I.
Når det drejer sig om en phosphonatsidekæde kondenseret til en purinbase kan disse fremstilles på forskellig må-10 de. Et eksempel er følgende reaktionsskema, hvor udgangsmaterialet 5-(2-bromethyl)-2,2-dimethyl-l,3-dioxan er beskrevet af (M.R. Harnden og R.L. Jarvest, Tetrahedron Letters, Vol. 26, side 4265-4268, 1985).
15 XI>^ -» —> 20 ^ ——> Er^O^ a) P(OMe)3; B) H“, MeOH; c) MeO-; d) N-bromsuccinimid, 25 triphenylphosphin; ^ B. Imidazolringslutning af ét substitueret pyrimidinderi-vat til purinbasen efterfulgt af fjernelse af beskyttende grupper. i'
30 I
Ar·1· ,u —>
R2 NH
35 CH2 ' ' CH2 - CH2r3 (CHI R4 2 n DK 174986 B1 15 R *' —' ,λΑ·>
CH2' ~ CH2 " Ch2R
10 <CV nR< R1/ R2, R3 og R4 betegner det ovenfor definerede, R10 be- 15 tegner nitroso, nitro, amino eller et aminoderivat som f.eks. formylamino eller orthoesteramino. Ringslutningen kan udføres på kendt måde (principperne er f.eks. beskrevet af E. Lunt i Comprehensive Organic Chemistry (Udg. D. Barton and W.B. Ollis, Pergamon Press 1979) vol. 4, p.
20 499-505 og af G. Shaw i Comprehensinve Heterocyclic Che mistry (Udg. A.R. Katritzsky og C.W. Reese, Pergamon Press 1984), vol. 5, p. 570-573). Omsætningen kan udføres i et organisk opløsningsmiddel som f.eks. myresyre, formamid, orthoformiatester eller diethoxymethylacetat ved en 25 temperatur fra 25 *C til 250 "C i 10 minutter til 24 timer. Dersom R10 betegner nitroso eller nitro skal disse grupper først reduceres til en aminogruppe på en vilkårlig kendt måde.
30 C. Imidazolringslutning via et furazano[3,4-d]pyrimidin ringsystem til purinbasen efterfulgt af fjernelse af beskyttende grupper 35 16 DK 174986 B1
N - O
/y 2/^ir^N - CHO ) R l „3
CH - CH - CH -CH2R
1 4
(CH2)nR
NH,
10 J
- A> CH - CH - CH2 - CH2ft3 15 I 4 -
ICH,) R
2 n _ R2, R3 og R4 betegner det ovenfor definerede. Ringslutningen kan udføres ved at opvarme efterfulgt af reduktiv spaltning af furazanringen med f.eks. zink i eddikesyre.
20 Efter omsætningen kan 6-NH2-gruppen af purinen eventuelt omdannes til en hydroxygruppe ved behandling f.eks. med natriumnitril i eddikesyre.
D. Pyrimidinringslutning til purinbasen efterfulgt af 25 fjernelse af beskyttende grupper R1 i
HN =C
VS
CH2 “ *jH Γ CH2 * CH2R3· (CH.) RA 2 n 5 35 DK 174986 B1 17 _ éc> '
CH2~ ch - CH2 - CH,fT
I 4 ICH_I (Γ 2 n 10 Ringslutningen kan udføres på kendt måde f.eks. som beskrevet af G. Shaw i Comprehensive Heterocyclic Chemistry (Udg. A.R. Katritzsky og C.W. Reese, Pergamon Press 1984)
Vol. 5, p. 583-591 og af E. Lunt i Comprehensive Organic Chemistry (Eds. D. Barton og W.B. Ollis, Pergamon Press 15 1979) Vol. 4, p. 505-508.
De beskrevne metoder A-D kan anvendes til opnåelse af blandinger af optiske isomere eller i passende tilfælde en enkelt optisk isomer. En forbindelse ifølge opfindel-20 sen i form af en optisk isomer kan fremstilles, dersom i metode A enten en optisk aktiv acyclisk sidekæde kondenseres til N-9 stillingen af purinderivatet eller kondensationen rettes mod dannelse af en optisk isomer ved hjælp af andre optisk aktive forbindelser, og i metoderne 25 B-D underkastes udgangsmaterialer med en optisk aktiv sidekæde for ringslutningen. Yderligere kan en enkelt optisk isomer opnås ud fra de racemiske blandinger ved hjælp af velkendte metoder.
30 Følgende eksempler illustrerer opfindelsen nærmere.
35 DK 174986 B1 18 EKSEMPEL 1 2-(2-aminopurin-9-yl)methyl-butan-1,4-diol 5 Ϊ fty “ VSB 2>2
CT, - CK - CH - CH2OH
10 2 i
CHjOH
Til en opløsning af urenset dimethyl (2-aminopurin-9-yl-methyl)succinat (3,2 g, 10,9 mmol) opløst i tert.-butanol (250 ml) ved 40 *C-blev sat lithiumborhydrid (1,3 g, 60 15 mmol) portionsvis under omrøring. Efter 1 time ved stuetemperatur blev vand (30 ml) langsomt tilsat og omrøringen fortsat natten over. Uorganiske salte blev frafiltreret, og opløsningen blev inddampet til tørhed. Udbyttet af urenset produkt var 1, 6 g (50%). Kromatografi på sili-20 ciumoxi'd (chloroform + methanol 7 + 1) gav den rene for bindelse .
aH NMR (DMSO-de) : δ 31,4 (m, 2H) , CH2CH2OH; 2,14 (m, IH),
CH, 3,33 (d, 2H) , CH-CH2OH; 3,44 (diffus q, 2H) ; 4,05 (AB
25 del af ABX, 2H) , N-CH2; 6,37 (bred s, 2H) NH2; 7,99 (s, IH), H8; 8,56 (s, IH) H6.
13C NMR (D20) : δ 33,11 CH2CH2OH; 39, 58 CH; 46, 34 NCH2; 61,35 og 63,51 2xCH2OH; 128,41 C5; 146,91 C8; 150, 48 C6; 30 155,05 C4; 161,60 C2.
Udgangsmaterialet dimethyl-2-(2-aminopurin-9-ylmethyl)-succinat blev fremstillet på følgende måde (a, b): 35 19 DK 174986 B1 a) Dimethyl-2-(2-amino-6-chlorpurin-9-ylmethyl)-succinat
En blanding af 2-amino-6-chlorpurin (4/07 g, 0,024 mol), 5 dimethylitaconat (5,00 g, 0,032 mol) og natriumhydrid (55% i olie, 0,2 g) i 50 ml tør dimethylformamid blev omrørt 3 dage ved stuetemperatur. Ca. 50 ml vand blev tilsat, og blandingen blev vasket med n-hexan (2 x 50 ml) og derefter ekstraheret med 2 x 50 ml dichlormethan. De for-10 enede CH2C12 ekstrakter blev vasket med 2 x 20 ml vand, tørret med magnesiumsulfat og inddampet i vakuum. Behandling med ether og tørring gav et hvidt krystallinsk stof. Kromatografi (silicagel, chloroform + methanol 15 + 1) gav 5,54 g (71%) eller omkrystallisation (MeOH-H20) gav 15 5,15 g (66,1%) dimethyl-2-(2-amino-6-chlorpurin-9-ylme- thyl)succinat.
UV spektrum i EtOH, λ max (nm): 310 (247).
1NMR (CDCla δ 2,67 (dd, 2H) , CH2COO; 3,46 (m, IH), CH; 20 3, 70 (2s, 2x3H) OCH3; 4,42 (ABX system, J = 14 Hz, 2H) , NCH2; 5,35 (bred s, 2H) , NH2; 7,79 (s, IH) H8.
b) Dimethyl-2-(2-aminopurin-9-ylmethyl)succinat 25 En blanding af dimethyl-2-(2-amino-6-chlorpurin-9-ylme- thyl)-succinat (3,28 g, 10 mmol), natriumacetat (1,5 g) og 5% palladium på carbon (0,4 g) i ethanol (200 ml) blev hydrogeneret under omrøring i et Parr apparat ved 40 psi i 115 timer/stuetemperatur. Efter filtrering blev natri-30 umacetat (1,6 g) og 5% Pd/C (0,4 g) tilsat, og hydrogeneringen blev fortsat i 70 timer. Efter filtrering og ind-dampning til tørhed blev remanensen ekstraheret med 2 x 50 ml chloroform, og de forenede ekstrakter blev inddampet til tørhed, hvorved der blev opnået 2,6 g (89%) uren-35 set dechloreret produkt.
20 DK 174986 B1 *H NMR (DMSO-dg) δ 8,00 (s, IH), H8; 8,56 (s, IH), H6.
EKSEMPEL 2 5 2-(2-aminopurin-9-yl)methylbutan-l, 4-diol-diacetat
H
I j VSC 610 10 / h2n \N^ \ N / CH2 - CH - CH2 - CHjO^CH^ ch2o2cch3 15 En blanding af 4-acetoxy-2-brommethylbutylacetat (0,465 g, 1,74 mmol), 2-aminopurin (0,282 g, 2,09 mmol) og pulveriseret kaliumcarbonat (1,20 g, 8,70 mmol) i N,N-dime-thylformamid (20 ml) blev omrørt 5 dage ved stuetemperatur. Chloroform ‘(40 ml) blev tilsat, fast materiale blev 20 frafiltreret, og opløsningen blev inddampet i vakuum til et ringe rumfang. Kromatografi på 50 g Si02 med chloroform + methanol (7 + 1) som elueringsmiddel gav en fraktion på 70-130 ml, der blev inddampet og tørret i vakuum, til slut ved 0,1 mBar, hvorved der blev opnået 0, 349 g 25 (62%) 2-(2-aminopurin-9-yl)methylbutan-l,4-diol-diacetat.
TLC på silica (chloroform + methanol 7 + 1): Rf 0,57.
*Η NMR (CDCI3+CD3OD) ; δ 8,64 (s, IH), H6; 7,92 (s, IH), H8; 5,82 (bred s, 2H) , NH2; 4,3-4,15 (m, 4H) , 2 CH2OAc; 30 4, 33 (d, 2H) CH2N; 2,50 (m, IH), CH; 2,06 (s, 6H) 2 CH3COO; 1,75 (q, 2H) CH2CH2OAc; 13C NMR (CDC13+CD3CD) : δ 170,96, 170, 66 (2 C=0) ; 159,89 (C2) ; 153,13 (C4), 148,77 (C6) , 142,84 (C8), 126, 83 (C5) , 35 63,78 (CHCH2-0Ac); 61,47 (CH2CH2OAc) ; 44,05 (CH2N) ; 35,15 (CH), 27, 59 (CH2CH20) ; 20,22, 20, 05 (2 CH3) .
21 DK 174986 B1
Udgangsmaterialerne blev fremstillet efter følgende reaktionstrin angivet som reaktionerne (a-e): 5 a) a-Trityloxymethyl-γ -butyrolacton
En blanding af a-hydroxymethyl-y-butyrolacton (26, 83 g, 0,231 mol) (G. Claeson og H.-G. Jonsson, Arkiv for Kemi 28, 167 (1967)), tritylchlorid (77,3 g, 0,277 mol) og tør 10 pyridin (200 ml) blev omrørt ved stuetemperatur i nogle få timer indtil homogen. Efter 10 dage ved stuetemperatur blev opløsningen udhældt i en blanding af 500 ml vand og 500 ml n-hexan. Bundfaldet blev vasket med vand og hexan og til slut tørret ved 0,1 mBar til opnåelse af 65,60 g 15 (79%) urenset produkt forurenet med en vis mængde trityl- alkohol. TLC på siliciumoxid (ethylacetat + n-hexan 1+3): R£ 0,38.
13C NMR (CDC13) : δ 177, 84 (C=0) ; 143,71, 128, 68, 127, 96 og 20 127,20 (phenyl); 86, 96 (0 CPH3) ; 67,26 (CH2OCO); 62,49 (CH20Tr) ; 40,31 (CH) ; 26,15 (CH2CH20) .
b) 2-Trityloxymethyl-l,4-butandiol 25 a-Trityloxymethyl-y-butyrolacton (60,21 g, 0,168 mol) blev tilsat i små portioner til en omrørt suspension af lithiumaluminiumhydrid (9,53 g, 0,251 mol) i tør tetrahy-drofuran (300 ml) og blandingen blev opvarmet med tilbagesvaling i 1 time. Langsom tilsætning af 10 ml H20 + 10 30 ml 15% NaOH og 30 ml H20 frembragte et hvidt sandagtigt bundfald, der blev frafiltreret og vasket med 2 x 50 ml tetrahydrofuran. Filtratet blev inddampet til ringe rumfang og opløst i diethylether (300 ml)/ silicagelgel (250 g) blev tilsat, og blandingen blev forsigtigt inddampet 35 til homogen pulver. I en kromatografisk søjle blev blandingen af den urensede forbindelse og silicagel anbragt 22 DK 174986 B1 på toppen af silicagel (250 g) i n-hexan. Eluering med ethylacetat + n-hexan (1+3), 2200 ml fjernede tritylalko-hoi. Yderligere eluering med ethylacetat + ethanol (9+1) gav fraktionerne 2900-3700 ml (fra start), der efter ind-5 dampning i vakuum gav en krystalliserende olie. Udbytte 52,77 g (87%) TLC på silica: ethylacetat + n-hexan (1+3),
Rf 0,05; ethylacetat + ethanol (9+1), Rf 0,81.
c) 2-Trityloxymethyl-l,4-butandioldiacetat 10
Til en omrørt blanding af 2-trityloxymethyl-l,4-butandiol (50,85 g, 0,140 mol) og triethylamin (42,6 g, 0,42 mol) i tør diethylether (500 ml) blev langsomt sat en opløsning af acetylchlorid (27,5 g, 0,35 mol) i ether (25 ml) under 15 udvendig afkøling med koldt vand for at opretholde stue-tfcmperatur i blandingen. Efter 45 minutters forløb blev triethylaminhydrochlorid frafiltreret og vasket med lidt ether. Det samlede ekstrakt blev vasket med vand (50 ml), 0,5 M saltsyre (100 ml) og vand (50 ml), tørret med mag- 20 nesiumsulfat og inddampet i vakuum, til slut ved 0,1 mBar, til opnåelse af 61,03 g (97%) af en urenset olieagtig forbindelse. TLC på siliciumoxid (ethylacetat + n-hexan 1 + 1) : Rf 0, 68.
25 d) 4-Acetoxy-2-hydroxymethylbutylacetat 2-Trityloxymethyl-l,4-butandioldiacetat (60,90 g, 0,136 mol) blev opløst i eddikesyre (320 ml) ved 100 ’C, og vand (80 ml) blev tilsat. Opløsningen blev holdt ved 100 30 'C i 15 minutter, inddampet til et ringe rumfang i vakuum og afkølet til 0 *C. Bundfaldet blev frafiltreret og vasket med kold ethylacetat, hvorved der blev opnået 26,44 g (teoretisk 35,51 g) tritylalkohol. Det samlede filtrat blev inddampet til et ringe rumfang. Forbindelsen blev 35 renset på en silicagelsøjle (500 g Si02); elueringsmiddel 0-2700 ml ethylacetat + n-hexan (1+1), 2700-3740 ml DK 174986 B1 23 ethylacetat + n-hexan {2+1), herefter rent ethylacetat. Fraktionerne 2540-4800 ml blev inddampet til opnåelse af 14,20 g (51%) rent 4-acetoxy-2-hydroxy-methylbutylacetat.
TLC på siliciumoxid (ethylacetat + n-hexan 1+1): Rf 0,30.
5 13C NMR (CDC13) : δ 171,08, 170,88 (2 C=0) ; 64,07 (CH2OH); 62, 10, 61, 45 (2 CH2OAc) ; 37,07 (CH) ; 26,76 (CH2CH2OAc) ; 20, 39 (2 CH3) .
10 e) 4-Acetoxy-2-brommethylbutylacetat
En opløsning af 4-acetoxy-2-hydroxymethylbutylacetat (11,04 g, 0,054 mol) og triphenylphosphin (21,27 g, 0,081 mol) i tør dichlormethan (150 ml) blev omrørt ved 0 ’C, 15 og N-brom-succinimid (4,43 g, 0,081 mol) blev tilsat i portioner. Blandingen blev holdt ved 0 'C i 20 timer, inddampet til et ringe rumfang og omrørt med 50 ml ethylacetat + n-hexan (1+1). Det hvide triphenylphosphinoxid blev frafiltreret og vasket med lidt ethylacetat + n-he-20 xan (1+1). Det samlede filtrat blev inddampet og “renset på en 200 g Si02 søjle med ethylacetat + n-hexan (1 + 1) som elueringsmiddel. 250-550 ml fraktionen blev inddampet i vakuum, hvorved der blev opnået 11,90 g (82%) rent 4-acetoxy-2-brommethylbutylacetat. TLC på siliumoxid 25 (ethylacetat + n-hexan 1+1): R£ 0,59.
]H NMR (CDCI3) : δ 4,2-4,0 (m, 4H) , 2 CH2OAc; 3,53 (ABX
system, 2H) CH2Br; 2,25-2,1 (m, IH) CH; 2, 08, 2,06 (2 s, 2x3H) 2COCH3; 1,79 (m, 2H) , CH2CH2OAc.
30 13C NMR (CDCI3) : δ 170, 91, 170, 74 (2 C=0) , 64,90 (CHCH2OAc); 61,71 (CH2CH2OAc) ; 36,56 (CH) ; 34,74 (CH2Br) ; 28,88 (CH2CH20) ; 20, 95 (2CH3) .
35 EKSEMPEL 3 24 DK 174986 B1 9-(4-Acetoxy-2-acetoxymethylbutyl)quanin[2-(quanin-9-yl-methyl)-1,4-butandioldiacetat]
5 OH
6c> H-N N / 10 - ru CH - CH - CH - CH O-jCCKL· ί I 2 223 VSC 639 ch2o2cch3
En blanding af 9-(4-hydroxy-2-hydroxymethylbutyl)quanin 15 (0,50 g, 2,0 mmol), eddikesyreanhydrid (1,02 g, 10,0 mmol), pyridin (1,11 g, 14,0 mmol) og tør N,N-dimethyl-formamid (25 ml) blev omrørt 13 dage ved stuetemperatur og herefter inddampet til tørhed i vakuum. Den krystallinske remanens blev opvarmet med 10 ml vand og lyofili-20 seret og omkrystalliseret med vand, hvorved der blev opnået 0,468 g (69%) 9-(4-acetoxy-2-acetoxymethylbutyl)- quanin.
13C NMR (CDCI3+CD3OD) : δ 64,15 (CHCH20) ; 61,98 (CH2CH20) ; 25 44,71 (CH2N) ; 35, 88 (CH) ; 27,95 (CH2CH20) ; 20,87, 20, 69 (2 CH3) .
EKSEMPEL 4 25 DK 174986 B1 9-(4-Propionoxy-2-propionoxymethylbutyl)quanin[2-(guanin- 9-ylmethyl)-1,4-butandiol-dipropionat] 5
OH
XX > H-N VSC 637
10 I
CHj- CH - CH2 - CH202CC2H5 CH2°2CC2HS
En blanding af 9-(4-hydroxy-2-hydroxymethylbutyl)guanin 15 (0,50 g, 2,0 mmol) , propionsyreanhydrid (1,56 g, 12,0 rtunol) , pyridin (1,27 g, 16,0 mmol), og tør N,N-dimethyl-formamid (25 ml) blev omrørt 14 dage ved stuetemperatur og derefter inddampet til tørhed i vakuum. Den krystallinske remanens blev opvarmet med 10 ml vand og lyofili-20 seret og omkrystalliseret med vand, hvorved der blev opnået 0,418 g (57%) 9-(4-propionoxy-2-propionoxymethylbu- tyl)-guanin.
13C NMR (CDCI3+CD3OC) : δ 64,00 (CHCH20) ; 61,86 (CH2CH20) ; 25 44,78 (CH2N); 35,95 (CH); 28,00 (CH2CH20) ; 27, 56, 27, 44 (2 CH3CH2CO) ; 9,00 (2 CH3) .
EKSEMPEL 5 26 DK 174986 B1
(-)-9-(4-Hydroxy-2-hydroxymethylbutyl)guanin 5 OH
^ VSB 647 fT> H NT ^
2 I
CH - CH - CH - CH OH
10 2 j 2 2
CH20H
En opløsning af (-) -2- (2-amino-6-chlorpurin-9-ylinethyl) -1/4-butandiol (11/5 mg, 0,0423 mmol) i 50% vandig myresy-15 re (0,75 ml) blev holdt ved 100 "C i 2 timer og derefter inddampet til tørhed, opløst i 2 ml vand og lyofiliseret. Forbindelsen blev opløst i 1 ml vand, 2 dråber koncentreret vandig ammoniak blev tilsat, og opløsningen henstod ved 100 0C i 10 minutter, blev gennemskyllet med nitrogen 20 for at fjerne ammoniak og lyofiliseret. Remanensen blev opløst ved opvarmning med 1,2 ml 20% vandig methanol, og opløsningen blev filtreret og henstod i fri luft for at muliggøre langsomt delvis afdampning af opløsningsmidlet.
Der dannedes krystallinske nåle. Filtrering, vask med tre 25 dråber vand og tørring gav 6,4 mg (60%) (-)-9-(4-hydroxy- 2-hydroxymethylbutyl)guanin.
Forbindelsen viste sig at være venstredrej ende (ethanol, 589 og 54 6 nm) . Den frembragte en proton NMR (DMSO-d6) 30 identisk med racematens. TLC på siliciumoxid (ethylacetat + methanol + vand 7+2+1): Rf 0,37, identisk med racematens .
Udgangsmaterialet blev fremstillet på følgende måde (a-35 b) : 27 DK 174986 B1 a) (-)-Dimethyl-2-(2-amino-6-chlorpurin-9-ylmethyl)succinat 5 Den raceraiske forbindelse blev opløst ved gentagen kromatografi på en mikrokrystallinsk triacetylcellulosesøjle (Perstorp Biochem. Lund, Sverige) med 95% ethanol som den mobile fase. Den langsommere vandrende (-)-enantiomere frembragte et proton NMR spektrum, der var identisk med 10 den racemiske forbindelse (+). Opløsningen blev fulgt ved hjælp af proton NMR i deuterochloroform ved 200 MHz med tris-[3-(heptafluorpropylhydroxymethylen)-d-camphorato]-europium(III) som det chirale skift reagens. Ved tilsætning af 1-1,5 vægtdele skift reagens, opsplittedes me-15 thylesteresignalet af racematen (2 nære singletter ved 3,69 og 3,695 ppm) i et basislinieadskilt svag-felt par (svagfeltsignal fra den (+)-enantiomere, kraftig feltsignal fra den (-)-enantiomere og et mindre opløst kraftigt feltpar. Det enantiomere overskud blev herefter beregnet 20 ud fra den forholdsmæssige del af svag-felt signalerne.
b) (-)-2- (2-Amino-6-chlorpurin-9-ylmethyl)-1,4-butandiol 25 Til en opløsning af (-)-dimethyl-2-(2-amino-6-chlorpurin-9-ylmethyl)succinat (enantiomert overskud 85%, 19,9 mg, 0,0607 mmol), opløst i tert.butanol (2,0 ml) ved 40 'C blev sat lithiumborhydrid (30 mg, 1,38 mmol) portionsvis under omrøring. Efter 1 time ved stuetemperatur blev vand 30 (0,3 ml) langsomt tilsat og omrøringen fortsatte natten over. Uorganiske salte blev frafiltreret, vasket omhyggeligt med tert.butanol og opløsningen blev inddampet til tørhed. Præparativt tyndtlagskromatografi (PSC-Færdigpla-der, Merck) med chloroform + methanol (5+1) som den mobi-35 le fase gav 16,5 mg (teoretisk udbytte) (-)-2-(2-amino-6-chlorpurin-9-ylmethyl-l,4-butandiol. [a)20o/D - 5,200, DK 174986 B1 28 [α]20/546 - 5,920 (c 0,625, ethanol) TLC på siliciumoxid (chloroform + methanol 5+1): Rf 0,40, identisk med racematens .
5 Biologiske undersøgelser
Undersøgelse I Virkning af forbindelserne med formlen I på HIV i H9 celler 10 Materialer og metoder: HIV infektioner af H9 celler H 9 celler, 105 celler pr. brønd på 24 brønds plade op-slæmmet i 2 ml RPMI-medium indeholdende 10% føtalt kalveserum, 100 pg/ml penicillin, 10 pg/ml streptomycinsulfat 15 og 2 pg/ml polybren blev eksponeret for HIV (HTLV-IIIB) og forskellige koncentrationer af forsøgsforbindelserne. Pladerne blev inkuberet ved 37 'C i 5% CO; i 6-7 dage. Indholdet af hver brønd blev herefter homogeniseret med en pipette og overført til centrifugerør. Efter centrifu-20 gering i 10 minutter ved 1500 omdrejninger pr. minut blev den supernatante del fjernet, og cellepelleten blev analyseret ved fiksering i methanol på glasplader. Humant HIV positivt serum fortyndet 1:80 eller 1:160 blev tilsat og inkuberet i 30 minutter ved 37 'C. Herefter blev pla-25 den vasket med phosphatpufret saltvand (PBS) indeholdende Ca2f og Mg2*. Fåre-antihuman konjugat (FITC) blev tilsat, og efter en yderligere inkubation blev pladen atter vasket med PBS. Kontrastfarvning blev foretaget med Evans blåt, og efter tørring blev frekvensen af HIV antigenhol-30 dige celler bestemt i et mikroskop. Forsøgsresultaterne er angivet i tabel I.
35
TABEL I
29 DK 174986 B1
Koncentration (nM) i for 50% hæmning (IC50) af human im-mundeficient virus multiplikation i cellekultur 5
Forbindelser_IC50 M
9-(4-hydroxy-2-(hydroxymethyl)- butyl]-guanin (VSA 671) 1-10 10 (-)-9-[4-hydroxy-2-(hydroxymethyl)-butyl]-guanin (VSA 647) 0,1-7 (+)-9-(4-hydroxy-2-(hydroxymethyl)-15 butyl]-guanin (VSA 648) 1-5 9-[4-hydroxy-2-(hydroxymethyl)- butyl]-adenin (VSC 600) 10 20 Tabel I viste, at de undersøgte forbindelser er aktive inhibitorer af HIV virus multiplikation.
Undersøgelse II Cellulær toxicitet 25 H9 celler, 2 x 101 celler pr. plade, inkuberes i RPMI-1640 medium indeholdende 10% føtalt kalveserum, 70 mg/li * ter penicillin, 100 mg/liter streptomycin og 10 mM Hepes med eller uden forsøgsforbindelser. Antallet af celler pr. plade blev bestemt efter 48 timer. Celler inkuberet 30 uden forsøgsforbindelserne fik herefter lov til at gagen-nem to celledelingscycler.
F5000 celler, der er humane embryonale celler, lxlO5 celler pr. plade, inkuberes i Eagle's minimalt essentielle 35 medium tilsat Earle's salte, ikke-essentielle aminosyrer, 10% føtalt kalveserum, 10 mM Hepes, 70 mg/liter penicil- DK 174986 B1 30 lin og 10 mg/liter streptomycin med eller uden forsøgsforbindelser. Antallet af celler pr. plade bestemmes efter 48 timer. Celler inkuberet uden forsøgsforbindelserne fik herefter lov at foretage en celledelingscycle. Resul-5 taterne er angivet som procent hæmning af cellemultiplikation, når koncentrationen af forbindelserne er 100 μΜ eller 250 μΜ.
TABEL II
10
Cellulær toxicitet overfor H9 og F5000 celler % hæmning (koncentration μΜ) 15
Forbindelse_H9_F5000 9-[4-hydroxy-2-(hydroxymethyl)- 55 55 butyl]-guanin (VSA 671) (500) (1000) 20 (-)-9-[4-hydroxy-2-(hydroxymethyl)- 5 butyl]-guanin (VSA 647) (100) 9-[4-hydroxy-2-(hydroxymethyl)- 25 25 25 butyl]-adenin (VSC 600) (200) (500) 2-(2-aminopurin-9-yl)methyl- 20 (500) butan-1,4-diol (VSB 212) 75 (500) 30 Tabel II viser, at de koncentrationer, ved hvilke forbindelserne udviser toxicitet, kraftigt overskred de koncentrationer, der var nødvendige for at give 50% hæmning af HIV multiplikation således som angivet i tabel I.
35 31 DK 174986 B1
Undersøgelse III peroral biotilgængelighed
Peroral biotilgængelighed blev bestemt ved at dosere dyrene (cynomologe aber og rotter) intravenøst og peroralt 5 ved forskellige lejligheder med forbindelserne. Blodprøver blev udtaget efter passende mellemrum for at bestemme lægemiddelniveau i plasma. Passende farmakokinetiske beregninger blev herefter udført baseret på plasmakoncentration i forhold til tiden.
10 TABEL III
Peroral biotilgængelighed af forbindelsen bestemt som VSA 671 15 Forbindelser_F* %
Abe 9- [4-hydroxy-2-(hydroxymethyl)- butyl]-guanin (VSA 671) 10 20 2-(2-aminopurin-9-yl)methylbutan- 1,4-diol-diacetat (VSC 610) 32
Rotte 25 9-[4-hydroxy-2-(hydroxymethyl)- butyl]-guanin (VSA 671) 11 9-[4-acetoxy-2-(acetoxymethyl)-butyl]-guanin.HC1 (VSC 640) 20 30 9-[4-propionoxy-2-(propionoxymethyl)-butyl]-guanin.HC1 (VSC 641) 19 2-(2-aminopurin-9-yl)methyl)-butan-35 1,4-diol (VSB 212) 26 32 DK 174986 B1 * Plasma AUC (areal under kurven) af forbindelsen i forhold til AUC efter intravenøs indgivet VSA 671 5
Af tabellen fremgår det, at plasmakoncentrationen af VSA 671 er signifikant forøget efter at VSA 671 er blevet indgivet som et 6-deoxy prolægemiddel (VSB 212) og ester (VSC 640, VSC 641) eller en ester af 6-deoxy prolaegemid-10 del (VSC 610).
Claims (5)
1. Anvendelse af en forbindelse med formlen 5 Rl N^VV il > 10 CH2" |Η ~ ch2 ~ CH2R3 (CH_J R4 2 n 15 hvori R1 betegner hydrogen eller hydroxy; R2 betegner amino; R3 og R4 er uafhængigt valgt blandt 20 0 0 0 II 1 1 -P(0M)2, -P-CH2-P{OM)2/ hydroxy OM 25 eller en ether eller esterrest heraf, eller 0 S R3 betegner sammen med R4 -P-O-, hvor
30 OM M er hydrogen eller en farmaceutisk acceptabel modion; og n er 1 og farmaceutisk acceptable salte heraf til fremstilling af et . lægemiddel til terapeutisk eller profylaktisk behandling af HIV vira. 35 34 DK 174986 B1
2. Anvendelse af en forbindelse ifølge krav 1, kendetegnet ved, at forbindelsen foreligger i form af en optisk isomer.
3. Anvendelse af en forbindelse ifølge krav 1 eller 2, kendetegnet ved, at R3 og R4 begge betegner hydroxy.
4. Anvendelse af en forbindelse ifølge et vilkårligt af 10 kravene 1-3, kendetegnet ved, at R3 og R4 som en etherrest er defineret som OR5, hvor R5 betegner Ci-6 alkyl, arylalkyl eventuelt substitueret med en eller flere alkoxy, amino, nitril eller sulfamidogrupper eller en eller flere halogenatomer. 15
5. Anvendelse af en forbindelse ifølge et vilkårligt af kravene 1-3, kendetegnet ved, at R3 og R4 som en esterrest stammer fra en carboxylsyre R1COOH, en kulsyre R2OCOOH, en dobbeltester af en kulsyre
20 R2C02CH (R3) 0C02H, en sulfonsyre, R2S020H, en carbaminsyre R2NHC00H eller en phosphorsyre, hvor R1 betegner hydrogen, Ci-u alkyl, alkoxyalkyl, arylalkyl eller aryl, R2 betegner C1-17 alkyl, arylalkyl eller aryl, R3 betegner hydrogen eller Ci_3 alkyl, og idet aryl og 25 arylalkylgrupperne eventuelt kan være substitueret med en eller flere alkyl, alkoxy, amino, nitril, sulfonamidogrupper eller en eller flere halogenatomer. Anvendelse af en forbindelse ifølge krav 1 eller 2, 30 kendetegnet ved, at 2 R3 betegner 0
35 I 3 -P(0M)2, 35 DK 174986 B1 og R4 betegner OH, eller 0
5 IJ R3 betegner sammen med R4 betegner -P-0- OM
Applications Claiming Priority (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SE8801729A SE8801729D0 (sv) | 1988-05-06 | 1988-05-06 | Purine derivatives for use in therapy |
| SE8801729 | 1988-05-06 | ||
| PCT/SE1989/000255 WO1989010923A1 (en) | 1988-05-06 | 1989-05-05 | Derivatives of purine, process for their preparation and a pharmaceutical preparation |
| SE8900255 | 1989-05-05 |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| DK264990A DK264990A (da) | 1990-11-05 |
| DK264990D0 DK264990D0 (da) | 1990-11-05 |
| DK174986B1 true DK174986B1 (da) | 2004-04-13 |
Family
ID=20372263
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| DK199002649A DK174986B1 (da) | 1988-05-06 | 1990-11-05 | Anvendelse af purinderivater til fremstilling af et lægemiddel |
Country Status (18)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0343133B1 (da) |
| JP (1) | JP2866688B2 (da) |
| KR (1) | KR0141913B1 (da) |
| AT (1) | ATE74603T1 (da) |
| CA (1) | CA1340909C (da) |
| DE (1) | DE68901153D1 (da) |
| DK (1) | DK174986B1 (da) |
| ES (1) | ES2033548T3 (da) |
| FI (1) | FI98729C (da) |
| GR (1) | GR3004482T3 (da) |
| HU (1) | HU207082B (da) |
| IE (1) | IE62066B1 (da) |
| IL (1) | IL90166A (da) |
| MY (1) | MY108541A (da) |
| NZ (1) | NZ229002A (da) |
| PT (1) | PT90478B (da) |
| SE (1) | SE8801729D0 (da) |
| WO (1) | WO1989010923A1 (da) |
Families Citing this family (26)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB8904855D0 (en) * | 1989-03-03 | 1989-04-12 | Beecham Group Plc | Pharmaceutical treatment |
| US6069252A (en) * | 1990-02-01 | 2000-05-30 | Emory University | Method of resolution and antiviral activity of 1,3-oxathiolane nucleoside enantiomers |
| US5356886A (en) * | 1990-07-19 | 1994-10-18 | Beecham Group P.L.C. | Antiviral phosphono-alken derivatives of purines |
| GB9020932D0 (en) * | 1990-09-26 | 1990-11-07 | Wellcome Found | Heterocyclic compounds |
| US5208221A (en) * | 1990-11-29 | 1993-05-04 | Bristol-Myers Squibb Company | Antiviral (phosphonomethoxy) methoxy purine/pyrimidine derivatives |
| US5334525A (en) * | 1992-08-28 | 1994-08-02 | Fox Chase Cancer Center | Hepadnavirus polymerase gene product having RNA-dependent DNA priming and reverse transcriptase activities and methods of measuring the activities thereof |
| US5360714A (en) * | 1992-08-28 | 1994-11-01 | Fox Chase Cancer Center | Hepadnavirus polymerase gene product having RNA-dependent DNA priming and reverse transcriptase activities and methods of measuring the activities thereof |
| US5656745A (en) * | 1993-09-17 | 1997-08-12 | Gilead Sciences, Inc. | Nucleotide analogs |
| US5798340A (en) | 1993-09-17 | 1998-08-25 | Gilead Sciences, Inc. | Nucleotide analogs |
| AU690587B2 (en) * | 1993-09-17 | 1998-04-30 | Gilead Sciences, Inc. | Method for dosing therapeutic compounds |
| DE19540798A1 (de) * | 1995-11-02 | 1997-05-07 | Hoechst Ag | Alkylxanthinphosphonate und Alkylxanthinphosphinoxide und deren Verwendung als Arzneimittel |
| US20030040467A1 (en) | 1998-06-15 | 2003-02-27 | Mary Ann Pelleymounter | Ig/ob fusions and uses thereof. |
| US5717095A (en) * | 1995-12-29 | 1998-02-10 | Gilead Sciences, Inc. | Nucleotide analogs |
| CA2239020A1 (en) * | 1995-12-29 | 1997-07-10 | Norbert W. Bischofberger | Nucleotide analogs |
| US5869493A (en) | 1996-02-16 | 1999-02-09 | Medivir Ab | Acyclic nucleoside derivatives |
| US6703394B2 (en) | 1996-02-16 | 2004-03-09 | Medivir Ab | Acyclic nucleoside derivatives |
| US6184376B1 (en) | 1997-02-10 | 2001-02-06 | Mediver Ab | Synthesis of acyclic nucleoside derivatives |
| EP0971923B1 (en) * | 1997-02-10 | 2002-11-06 | Medivir Ab | Synthesis of acyclic nucleoside derivatives |
| JP2009298785A (ja) * | 1997-02-10 | 2009-12-24 | Medivir Ab | 非環状ヌクレオシド誘導体の合成 |
| US6753322B2 (en) | 2000-06-06 | 2004-06-22 | Pfizer Inc | 2-aminocarbonyl-9H-purine derivatives |
| EP1440072A4 (en) | 2001-10-30 | 2005-02-02 | Conforma Therapeutic Corp | PURINE ANALOGS HAVING HSP90 INHIBITORY ACTIVITY |
| US7138402B2 (en) | 2003-09-18 | 2006-11-21 | Conforma Therapeutics Corporation | Pyrrolopyrimidines and related analogs as HSP90-inhibitors |
| TWI332507B (en) | 2002-11-19 | 2010-11-01 | Hoffmann La Roche | Antiviral nucleoside derivatives |
| JP2008534609A (ja) | 2005-03-30 | 2008-08-28 | コンフォーマ・セラピューティクス・コーポレイション | Ｈｓｐ９０阻害剤としてのアルキニルピロロピリミジンおよび関連類似体 |
| CA2733390A1 (en) | 2008-08-01 | 2010-02-04 | Bioxiness Pharmaceuticals, Inc. | Methionine analogs and methods of using same |
| CN102250126A (zh) * | 2010-05-18 | 2011-11-23 | 北京化工大学 | 一种双嘌呤类衍生物及其合成 |
Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| ATE33653T1 (de) * | 1982-10-14 | 1988-05-15 | Wellcome Found | Antivirale purinderivate. |
| CS233665B1 (en) * | 1983-01-06 | 1985-03-14 | Antonin Holy | Processing of isomere o-phosphonylmethylderivative of anantiomere racemic vicinal diene |
| IL73682A (en) * | 1983-12-20 | 1991-08-16 | Medivir Ab | Antiviral pharmaceutical compositions containing 9-hydroxy aliphatic derivatives of guanine,some new such derivatives and process for their preparation |
| SE8406538D0 (sv) * | 1984-12-21 | 1984-12-21 | Astra Laekemedel Ab | Novel derivatives of purine |
| MY101126A (en) * | 1985-12-13 | 1991-07-31 | Beecham Group Plc | Novel compounds |
-
1988
- 1988-05-06 SE SE8801729A patent/SE8801729D0/xx unknown
-
1989
- 1989-05-03 IL IL9016689A patent/IL90166A/en active IP Right Grant
- 1989-05-04 NZ NZ229002A patent/NZ229002A/en unknown
- 1989-05-05 HU HU893004A patent/HU207082B/hu not_active IP Right Cessation
- 1989-05-05 AT AT89850146T patent/ATE74603T1/de not_active IP Right Cessation
- 1989-05-05 WO PCT/SE1989/000255 patent/WO1989010923A1/en active IP Right Grant
- 1989-05-05 JP JP1505738A patent/JP2866688B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1989-05-05 EP EP89850146A patent/EP0343133B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1989-05-05 MY MYPI89000618A patent/MY108541A/en unknown
- 1989-05-05 CA CA000598887A patent/CA1340909C/en not_active Expired - Fee Related
- 1989-05-05 ES ES198989850146T patent/ES2033548T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1989-05-05 DE DE8989850146T patent/DE68901153D1/de not_active Expired - Fee Related
- 1989-05-05 IE IE147289A patent/IE62066B1/en not_active IP Right Cessation
- 1989-05-15 PT PT90478A patent/PT90478B/pt not_active IP Right Cessation
-
1990
- 1990-01-06 KR KR90700035A patent/KR0141913B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1990-11-05 DK DK199002649A patent/DK174986B1/da not_active IP Right Cessation
- 1990-11-05 FI FI905475A patent/FI98729C/fi active IP Right Grant
-
1992
- 1992-05-05 GR GR920400840T patent/GR3004482T3/el unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP0343133A1 (en) | 1989-11-23 |
| JP2866688B2 (ja) | 1999-03-08 |
| PT90478A (pt) | 1989-11-30 |
| AU3572689A (en) | 1989-11-29 |
| CA1340909C (en) | 2000-02-22 |
| IL90166A (en) | 1996-09-12 |
| FI98729B (fi) | 1997-04-30 |
| DK264990A (da) | 1990-11-05 |
| AU626300B2 (en) | 1992-07-30 |
| DE68901153D1 (de) | 1992-05-14 |
| NZ229002A (en) | 1997-05-26 |
| HUT57767A (en) | 1991-12-30 |
| PT90478B (pt) | 1994-08-31 |
| JPH03504243A (ja) | 1991-09-19 |
| ATE74603T1 (de) | 1992-04-15 |
| KR0141913B1 (en) | 1998-06-01 |
| ES2033548T3 (es) | 1993-03-16 |
| EP0343133B1 (en) | 1992-04-08 |
| DK264990D0 (da) | 1990-11-05 |
| IE891472L (en) | 1989-11-06 |
| FI98729C (fi) | 1997-08-11 |
| WO1989010923A1 (en) | 1989-11-16 |
| HU207082B (en) | 1993-03-01 |
| IL90166A0 (en) | 1989-12-15 |
| HU893004D0 (en) | 1991-09-30 |
| IE62066B1 (en) | 1994-12-14 |
| FI905475A0 (fi) | 1990-11-05 |
| SE8801729D0 (sv) | 1988-05-06 |
| MY108541A (en) | 1996-10-31 |
| GR3004482T3 (da) | 1993-03-31 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| DK174986B1 (da) | Anvendelse af purinderivater til fremstilling af et lægemiddel | |
| JP7416365B2 (ja) | アポトーシス誘発剤 | |
| US5055458A (en) | Purine derivatives having antiviral activity | |
| JP2015164934A (ja) | ヌクレオチドアナログ | |
| EP0548798A1 (en) | Antiviral agent | |
| CN106167504A (zh) | 非环核苷磷酰胺d‑氨基酸酯衍生物及其盐的制备以及在抗病毒方面的应用 | |
| CA2062299C (en) | Cyclopropane derivatives | |
| US5284837A (en) | Derivatives of purine, process for their preparation and a pharmaceutical preparation | |
| KR20000029705A (ko) | 뉴클레오타이드동족체 | |
| DK166823B1 (da) | Purinforbindelser, fremgangsmaade til fremstilling heraf, samt anvendelse af forbindelserne som farmaceutika | |
| US5247085A (en) | Antiviral purine compounds | |
| EP0319228B1 (en) | Novel compounds | |
| AU3760793A (en) | Antiviral phosphonic acid derivatives of purine analogues | |
| HUT54697A (en) | Process for producing sulfur- and phosphorus-containing purine derivatives and pharmaceutical compositions comprising same as active ingredient | |
| EP0425669B1 (en) | 1-amino-5-halogenouracils, process for their preparation, and central nervous system depressants containing same as active ingredient | |
| AU626300C (en) | Derivatives of purine, process for their preparation and a pharmaceutical preparation | |
| JP3580377B2 (ja) | ホスホナートヌクレオチドエステル誘導体 | |
| NO177306B (no) | Analogifremgangsmåte for fremstilling av terapautisk aktive purinderivater | |
| EP0394346A1 (en) | Pyrimidine and purine 1,2-butadiene-4-ols as anti-retroviral agents | |
| EP2593460A1 (en) | 7, 9-nitrogen radical-4-oxo-4h-pyrido[l,2-a]pyrimidine-2-carboxylic acid benzylamide anti-virals | |
| CN115073518A (zh) | 磷酸双依达拉奉酯类化合物、及其制备方法和用途 | |
| JPH04297463A (ja) | 新規なシクロブタン誘導体 | |
| JPH06206880A (ja) | 新規シクロペンテン誘導体 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PBP | Patent lapsed |
Country of ref document: DK |