DK170778B1 - BU-3608 N-alkylderivater, farmaceutiske præparater med indhold deraf samt BU-3608 mellemprodukter - Google Patents
BU-3608 N-alkylderivater, farmaceutiske præparater med indhold deraf samt BU-3608 mellemprodukter Download PDFInfo
- Publication number
- DK170778B1 DK170778B1 DK354689A DK354689A DK170778B1 DK 170778 B1 DK170778 B1 DK 170778B1 DK 354689 A DK354689 A DK 354689A DK 354689 A DK354689 A DK 354689A DK 170778 B1 DK170778 B1 DK 170778B1
- Authority
- DK
- Denmark
- Prior art keywords
- pharmaceutically acceptable
- acceptable salts
- compound according
- methyl
- formula
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H15/00—Compounds containing hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals directly attached to hetero atoms of saccharide radicals
- C07H15/20—Carbocyclic rings
- C07H15/24—Condensed ring systems having three or more rings
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
- C12P19/44—Preparation of O-glycosides, e.g. glucosides
- C12P19/56—Preparation of O-glycosides, e.g. glucosides having an oxygen atom of the saccharide radical directly bound to a condensed ring system having three or more carbocyclic rings, e.g. daunomycin, adriamycin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D309/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom, not condensed with other rings
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H15/00—Compounds containing hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals directly attached to hetero atoms of saccharide radicals
- C07H15/20—Carbocyclic rings
- C07H15/24—Condensed ring systems having three or more rings
- C07H15/244—Anthraquinone radicals, e.g. sennosides
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Public Health (AREA)
- Oncology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
- Cephalosporin Compounds (AREA)
- Steroid Compounds (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Description
i DK 170778 B1
Den foreliggende opfindelse angår N-alkylderivater af antibiotiske BU-3608-komplekser. Disse forbindelser er aktive som antifungale midler.
Fermenterings-, isolerings- og oprensningsmetoder for antibiotikaene BU-3608, BU-3608 B og BU-3608 C er beskrevet i detaljer i EP 5 offentliggørelsesskrift nr. O 277 621. Isolerings- og oprensningsmetoderne for antibiotisk BU-3608 D og BU-3608 E er beskrevet i EP offentliggørelsesskrift nr. O 315 147. Strukturen af ovennævnte antibiotika er anført nedenfor som formel la til le.
Rl
10 I
CONHCHCOgH
HCL JL ΓΗ,
O HO
R20 20 la: BU-3608; R1 = CH3; R2 = 0-xy1 osy 1; R3 = CH3
Ib: BU-3608 B; R1=CH3; R2 = H; R3=CH3
Ic: BU-3608 C; R1=CH3; R2=D-xy1 osy 1 ; R3 = H
Id: BU-3608 D; R1 = H; R2 = D-xy1 osy 1 ; R3=CH3
le: BU-3608 E; R1 = H; R2 = 0-xy1 osy 1 ; R3 = H
25 7 7 BU-3608 har imidlertid meget begrænset opløselighed i vand. Et formål ved den foreliggende opfindelse er således at tilvejebringe vand-30 opløselige derivater af de forskellige komponenter af det antibiotiske BU-3608-kompleks.
Ifølge den foreliggende opfindelse tilvejebringes BU-3608 N-alkyl derivater med den almene formel II
35 DK 170778 B1 2 R1
CONHCHCOjH
SAAAa o^cr^\CH3 5 il x^ π hvor R1 er H eller methyl, i hvilket tilfælde det resulterende alanyl er 10 D-alanyl, R2 er H eller Ø-D-xylosyl, Y er NR3R4 eller N+R3R4R3X~, hvor R3, R4 og R5 er ens eller forskellige C, c-alkyl grupper, og X* er en anion, samt farmaceutisk acceptable salte deraf.
15 /3-D-xylosyl betegner fragmentet
—----^OH
20 Ifølge et andet aspekt ved den foreliggende opfindelse tilveje bringes BU-3608 derivater med den almene formel
Rl i
CONHCHCOjH
O H0HOvYii 3 25 HCOL^AJLJkJ 111 13 1 30 hvor R er H, og R er H eller methyl, eller R er methyl, i hvilket tilfælde den resulterende alanylsubstituent er en D-alanylsubstituent, og R er H, og farmaceutisk acceptable salte deraf.
Antibiotikaene BU-3608, BU-3608 B, BU-3608 C, BU-3608 D og BU-3608 E anvendes som udgangsmaterialer for forbindelser ifølge den forelig-35 gende opfindelse og kan fremstilles ved dyrkning af en antibiotikumproducerende stamme af Actinomadura hibisca sp. nov. Actinomadura hibisca stammerne nr. P157-2 og Q278-4 er blevet deponeret ved American DK 170778 B1 3
Type Culture Collection (Rockville, MD) og er blevet tildelt accessionsnummer ATCC 53557 hhv. ATCC 53646. Stammerne er blevet almindeligt tilgængelige den 10. august 1988 i forbindelse med offentliggørelsen af EP patentansøgning nr. 88.101.410. En mutantstamme afledt fra stamme P157-2 5 ved behandling med N-methyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidin (NTG) producerer D- og E-komponenterne i større mængder end både P157-2- og Q278-4-stammen. Denne som A2660 benævnte mutantstamme er også blevet deponeret ved ATCC under accessionsnummer ATCC 53762.
BU-3608 B er desxylosylderivatet af BU-3608. BU-3608 B, desxylosyl 10 BU-3608 C, BU-3608 D og BU-3608 E kan fremstilles ved opvarmning af hhv. BU-3608, BU-3608 C, BU-3608 D og BU-3608 E i saltsyre i et tidsrum, der er tilstrækkeligt til at fraspalte xylosegruppen, og indstille opløsningens pH-værdi til præcipitering af det ønskede produkt.
Aminogruppen af BU-3608, BU-3608 C, BU-3608 D og BU-3608 E eller 15 de tilsvarende desxylosylderivater kan alkyleres ved reduktiv alkyle-ring, hvorved det antibiotiske udgangsmateriale først omsættes med et aldehyd eller en keton til dannelse af en imin, som derefter reduceres. Kondenseringen og reduktionen kan udføres i samme reaktionsbeholder i et trin, eller i to separate trin. Den primære aminogruppe i BU-3608 C, 20 BU-3608 E eller i deres desxylosylderivater kan omdannes til en tertiær amin med to identiske alkylgrupper ved behandling med mindst to ækvivalenter af carbonyl forbi ndel sen i forhold til antibiotikumet efterfulgt af reduktion. En tertiær amin med to forskellige alkylsubstituenter kan opnås ved anvendelse af en kontrolleret mængde af en første carbonyl-25 reaktant til omdannelse af den primære amin til en sekundær amin, som derefter omsættes med en anden afvigende carbonyl forbi ndel se til opnåelse af det tertiære aminprodukt.
Carbonyl reaktanten kan være et aldehyd eller en keton med 1-5 carbonatomer, f.eks. formaldehyd, acetaldehyd, propionaldehyd eller ace-30 tone. Reduktion af iminen kan udføres ved anvendelse af reduktionsmidler, såsom metalhydrider, f.eks. natriumborhydrid, natriumcyanoborhydrid eller 1ithiumaluminiumhydrid. Omsætningen udføres i et polært organisk opløsningsmiddel, såsom vand, acetonitril, lavere alkanoler eller dimethyl sul foxid eller en blanding deraf. Reaktionstemperaturen er ikke 35 særligt kritisk og kan være fra stuetemperatur til ca. 100°C. En alkyle-ringsreaktion udført ved stuetemperatur er erfaringsmæssigt tilendebragt i løbet af 24 timer. Optimale reaktionsbetingelser afhænger selvfølgelig DK 170778 B1 4 af arten og reaktiviteten af de særlige reaktanter, der anvendes.
Aminogrupperne kan også alkyleres ved omsætning med et al kyl halogenid, og kvaternære ammoniumforbindelser kan opnås ved udtømmende at 3 4 alkylere forbindelser med formel I, III eller II, hvor Y er NR R .
5 Opløseligheden af de forskellige antibiotika bestemtes i phosphat- pufferindstiIlede saltvandsopløsninger (PBS) og de opnåede data er vist nedenfor. PBS(-) henviser til en opløsning indeholdende 0,2 g KC1, 0,2 g KH2P04, 8 g NaCl og 1,15 g Na2HP04 pr. liter og PBS(+) indeholder endvidere 100 mg MgCl2*6H20 og 100 mg CaClg * 10
Forbindelse Opløselighed (Mg/ml) iflg. eks. PBS(-) PBS(+) 5 330 42 15 6 >2100 122 7 1800 >2000 8 3100 3 9 73 32 10 >2700 20
Til sammenligning er opløseligheden af BU-3608 16-18 øg/ml og 9-23 /ig/ml i PBS(-)- hhv. PBS(+)-opløsninger. Forbindelser med formel II udviser således forøget vandopløselighed sammenlignet med BU-3608.
25 Biologiske egenskaber
Antifungale aktiviteter af repræsentative forbindelser ifølge den foreliggende opfindelse vurderes både in vitro og in vivo. De minimale inhibitoriske koncentrationer (MIC) overfor forskellige fungi bestemtes ved en agarseriefortyndingsmetode under anvendelse af "Sabouraud"-dex-30 troseagar. Ca. 0,003 ml fungussuspension indeholdende 106 celler/ml overførtes således til overfladen af agarplader indeholdende test-antibiotika. MIC-værdi erne noteret efter inkubering af kulturerne i 44 timer ved 28°C er anført nedenfor i tabel I.
DK 170778 B1 5
Tabel I
Antifungal aktivitet in vitro
Forbindelse MIC (ua/mll 5 iflg. eks. C.albicans C.neoformans A.fumigatus T.mentagrophtes 3 3,1 1,6 >100 >100 5 6,3 1,6 6,3 6,3 6 3,1 1,6 12,5 25 10 7 6,3 1,6 12,5 25 8 3,1 0,8 6,3 6,3 9 6,3 1,6 25 12,5 10 12,5 12,5 >100 >50 15 In vivo-aktiviteten af forbindelser ifølge den foreliggende opfin delse afprøvedes overfor Candida albicans A9540-infektion i mus. Testorganismerne dyrkedes i 18 timer ved 28°C i YGP-medium (gærekstrakt, glucose, pepton, KgHPO^, MgSO^) og suspenderedes derefter i saltvand. ICR-hanmus med en vægt på 20-24 g inficeredes intravenøst med ca. 10 20 gange den gennemsnitlige letale dosis af test-fungi. Antibiotika i forskellige dosisniveauer administreredes intravenøst til grupper på 5 mus umiddelbart efter fungusinfektion. Den dosis, der beskytter 50% af dyrene mod infektion (PDjq, mg/kg) beregnedes ud fra overlevelsesantallet noteret på 20. dag efter fungusinfektionen. Alle kontroldyr døde i 25 løbet af 7-15 dage efter infektion. PD^q for forbindelserne ifølge eksempel 5, 7 og 8 er hhv. 14 mg/kg (toksisk), 11 mg/kg og 3,5 mg/kg.
Forbindelserne ifølge den foreliggende opfindelse kan følgeligt anvendes til behandling af fungusinfektioner, hvorved man til en vært inficeret med en påvirkelig fungus administrerer en mod fungus effektiv 30 mængde af en forbindelse ifølge den foreliggende opfindelse. Ifølge et sidste aspekt ved den foreliggende opfindelse tilvejebringes således farmaceutiske præparater, der er ejendommelige ved, at omfatte en antifungal effektiv dosis af en forbindelse med den almene formel II. Til behandling af fungusinfektioner hos dyr og mennesker, kan antibiotika 35 ifølge den foreliggende opfindelse administreres i en antifungalt effektiv mængde ad en vilkårlig accepteret administreringsvej, herunder intravenøs, intramuskulær, oral eller intranasal administrering, og DK 170778 B1 6 topisk administrering i tilfælde af superficielle infektioner. Præparater til parenteral administrering omfatter sterile, vandige eller ikke-vandige opløsninger, suspensioner eller emulsioner. De kan også fremstilles i form af sterile faste præparater, som kan opløses i sterilt 5 vand, fysiologisk saltvand eller et andet, sterilt, injicerbart medium umiddelbart før anvendelse. Orale præparater kan være i form af tabletter, gelatinekapsler, pulvere, pastiller, sirupper eller lignende. Til topisk administrering kan forbindelserne inkorporeres i lotioner, salver, geler, cremer, balsamer, tinkturer eller lignende. Enhedsdosisfor-10 mer kan fremstilles ved metoder, der kendes af fagmanden indenfor farmaceutiske præparater.
Det er åbenbart, at ved behandling af en vært inficeret med en fungus, der er påvirkelig med antibiotika ifølge den foreliggende opfindelse, vil den faktisk foretrukne administreringsvej og dosering, der 15 anvendes, afhænge af det skøn, som anlægges af klinikeren indenfor behandling af fungusinfektioner eller virale infektioner, og vil variere i afhængighed af den sygdomsfremkaldende organisme, dens følsomhed over for antibiotikumet, alvoren af og stedet for infektion, samt patientkarakteristika, såsom alder, legemsvægt, udskillelseshastighed, samtidige 20 medi kat ioner og almen fysisk tilstand.
I de følgende eksempler belyses fremstillingen af forbindelserne ifølge den foreliggende opfindelse nærmere.
Eksempel 1 25 Fermentering af Actinomadura hibisca stamme P157-2 (a) Skråstivnet agar. Actinomadura hibisca stamme P157-2 dyrkedes på en skråstivnet agar bestående af 0,5% opløselig stivelse (Nichiden Kagaku Co.), 0,5% glucose, 0,1% fiskemel ekstrakt (Mikuni Kagaku), 0,1% gærekstrakt (Oriental Yeast Co.), 0,2% "NZ case" (Sheffield), 0,1% 30 CaCOj, 0,2% NaCl og 1,6% agar. Kulturen inkuberedes ved 28°C i 7 dage.
(b) Podningskultur. En portion af den mikrobielle vækst fra den skråstivnede kultur overførtes til en 500 ml Erlenmeyer kolbe indeholdende 100 ml vegetativt medium med følgende sammensætning: 1,0% glucose, 2% opløselig stivelse (Nichiden Kagaku Co.), 0,5% "NZ amin A" 35 (Sheffield), 0,5% gærekstrakt (Oriental Yeast Co.) og 0,1% CaC03>
Mediets pH-værdi indstilledes til 7,2 før sterilisation. Podningskulturen inkuberedes ved 28°C i 4 dage på en rotationsomryster indstillet til DK 170778 B1 7 200 omdr./minut.
(c) Kolbefermentering. 5 ml af den mikrobielle vækst overførtes fra podningskulturen til en 500 ml Erlenmeyer kolbe indeholdende 100 ml sterilt produktionsmedium med følgende sammensætning: 3,0% glucose, 3,0% 5 soyabønnemel (Nikko Seiyu Co.), 0,5% "Pharmamedia" (Traders Protein), 0,1% gærekstrakt (Oriental Yeast Co.) og 0,3% CaCOj. Fermenteringen udførtes ved 28°C i 5-6 dage på en rotationsomryster. Antibiotikumproduktionen i fermentationsmediet overvågedes ved en næringsmediumfortyndingsmetode under anvendelse af Candida albicans A9540 som indikatoror- 10 ganisme i "Sabouraud"-dextrosenæringsmedium. UV-assay ved 500 nm i 0,01 N NaOH-MeOH-opløsning (1:1) anvendtes ligeledes. Antibiotikumproduktionen nåede et maksimum på 650 pg/ml på dag 5.
(d) Tankfermentering. 3 liter af podningskulturen anvendtes til inokulering af 120 liter sterilt produktionsmedium i en 200 liter fer- 15 menteringstank. Sammensætningen af produktionsmediet var den samme som mediet anvendt ved kolbefermentering. Fermenteringen i tanken gennemførtes ved 28°C med en omrøringshastighed på 250 omdr./minut og gennemluft-ning med 120 liter/minut. Efter fermentering i 96 timer opnåedes en antibiotisk styrke på 500 øg/ml, og pH af næringsmediet var 7,9.
20
Eksempel 2
Isolering oa oprensning af antibiotika
Detaljerede beskrivelser af fremgangsmåder til isolering og oprensning af antibiotikaene BU-3608, BU-3608 B og BU-3608 C er anført i 25 EP offentliggørelsesskrift nr. 277.621. Isolering og oprensning af BU-3608 D- og BU-3608 E-komponenterne er beskrevet i EP offentliggørelsesskrift nr. 315.147. Den anvendte fremgangsmåde til isolering og oprensning af de forskellige komponenter af det antibiotiske BU-3608 kompleks er beskrevet nedenfor.
30 Høstet næringsmedium (pH 7,8) centrifugeredes og supernatanten forsyredes til pH 2,0 med 6N HC1 til udfældning af bio-inaktivt faststof. Efter fjernelse af præcipitatet indstilledes filtratets pH til 5,0 med 6N NaOH og opløsningen omrørtes forsigtigt i 30 minutter ved stuetemperatur. Det resulterende mørkerøde faststof frafiltreredes og tørre-
35 des i vakuum. Dette faststof opløstes i en 3:1:4 blanding af n-butanol:-methanol:l% NaCl og blandingen omrørtes i 30 minutter. Det nedre vandige lag frasepareredes, vaskedes atter med frisk øvre lag, forsyredes til pH
DK 170778 B1 8 2,0 med 6N HC1, og ekstraheredes derefter med n-butanol. n-Butanoleks-trakten vaskedes med vand, koncentreredes i vakuum og lyophiliseredes til opnåelse af halvrent BU-3608,hydrochlorid. En opløsning af faststoffet i n-butanol omrystedes med alkalisk vand (pH 9,0). Det vandige lag 5 forsyredes til pH 2,0 og vaskedes med ethyl acetat. Ekstraktion med n-butanol efterfulgt af afdampning af opløsningsmidlet gav en renere prøve af BU-3608,HC1. Dette materiale underkastedes reversfase-silica-gelchromatografi ("ODS-60", 350/250 mesh, Yamamura Chemical Lab., kolonne 4,5 x 90 cm). Prøven opløstes i vand og overførtes til kolonnen, 10 som var blevet ækvilibreret med en blanding af acetonitril og 0,15% KHgPO^ (pH 3,5) i et forhold på 17:83 på volumenbasis. Kolonnen vaskedes successivt med acetonitril-0,15% KHgPO^ blandinger i følgende forhold: 17:83, 18:82, 19:81 og 20:80, idet der anvendtes 5 liter af hver blanding, og elueredes derefter med samme opløsningsmiddelblanding i et for-15 hold på 22:78. Eluatet opsamledes i 100 ml fraktioner, som undersøgtes ved et mikroplade-assay under anvendelse af C. albicans A9540 og tyndt-lagschromatografi (SiOg, methyl acetat:n-propanol:28% ammoniumhydroxid, 45:105:60 på volumenbasis). Fraktionerne indeholdende den homogene hovedforbindelse, kombineredes og oprensedes yderligere til opnåelse af 20 BU-3608.
Ved den ovenfor beskrevne revers-si 1icagelchromatografi sk metode kombineredes fraktionerne, der var elueret før og efter den homogene BU-3608 hovedfraktion. Det kombinerede el uat afsaltedes under anvendelse af "HP-20"-harpiks til opnåelse af et BU-3608 B-holdigt faststof og et 25 BU-3608 C-holdigt faststof. Det BU-3608 B-holdige faststof opløstes i vand og overførtes til en kolonne af "0DS-60" (Yamamura Chem. Lab., 8,0 x 90 cm), som var vasket grundigt med en blanding af acetonitril og 0,15% KHgPO^, 22:78 på volumenbasis (pH 3,5). Den samme opløsningsmiddelblanding anvendtes til eluering af den fyldte kolonne. Fraktioner 30 opsamledes og undersøgtes ved HPLC. Fraktioner indeholdende BU-3608 B kombineredes, koncentreredes i vakuum og afsaltedes ved "HP-20"-harpiks-chromatografi til opnåelse af urent BU-3608, rent BU-3608 og BU-3608 B. BU-3608 B oprensedes yderligere ved præparativ HPLC under anvendelse af en "Microsorb Short One Cjg"-kolonne (4,6 mm I.D. x 100 mm, 3 /xm, Rainin 35 Instrument Co.), og eluering udførtes under anvendelse af en blanding af acetonitril og 0,15% KHgPO^, 29:71 på volumenbasis (pH 3,5). Det BU-3608 C-holdige faststof oprensedes på lignende måde under anvendelse af DK 170778 B1 9 "ODS"-kolonnen under eluering med en blanding af acetonitril og 0,15% KH2PO^, 21:79 på volumenbasis (pH 3,5). HPLC anvendtes til undersøgelse af eluatet, og fraktioner indeholdende BU-3608 C kombineredes og koncentreredes i vakuum. Den resulterende vandige opløsning afsaltedes ved 5 "HP-20"-chromatografi til opnåelse af næsten rent BU-3608 C og næsten rent BU-3608.
Ved ovennævnte reversfase-silicagelchromatografiske metode opsam-ledes og kombineredes fraktioner, der elueredes før BU-3608 C, separat og forenedes. De forenede bl egorangefarvede fraktioner afsaltedes ved 10 "Diaion HP-20"-chromatografi. Det således opnåede faststof var relativt beriget med hensyn til D- og E-komponenterne, men indeholdt stadig en stor mængde af C-komponenten. De kombinerede faststoffer overførtes til en kolonne af reversfase silicagel ("0DS-60", Yamamura Chem. Lab., $ 8,0 x 90 cm), og elueredes med en blanding af acetonitril og 0,15% KHgPO^, 15 21:79 (pH 3,5). Eluatet undersøgtes ved HPLC under anvendelse af en "Microsorb Short One Cjg"-kolonne (Rainin Instrument Co., 4,6 mm I.D. x 100 mm, 3μιτι), en blanding af acetonitril og 0,15% KHgPO^, 7:17 (pH 3,5) som den mobile fase ved en flowhastighed på 1,2 ml/min, og UV-absorption ved 254 nm til detektion. BU-3608 E elueredes først efterfulgt af 20 BU-3608 D. Fraktioner indeholdende BU-3608 E kombineredes, koncentreredes i vakuum og afsaltedes ved "HP-20"-chromatografi til opnåelse af næsten homogent BU-3608 E,HC1. En vandig opløsning af BU-3608 E,HC1 indstilledes til pH 5,0 med 0,1N NaOH til udfældning af rent BU-3608 E som en zwitterion. På lignende måde opnåedes BU-3608 D som zwitterionen.
25
Eksempel 3
Fremstilling af desxvlosvl BU-3608 E (III. R*=R3=H1
En opløsning af BU-3608 E,hydrochlorid (97 mg) i 2N HC1 (12 ml) opvarmedes ved 115°C i 70 minutter i et forseglet rør. Den resulterende 30 opløsning indstilledes til pH 5,5 ved tilsætning af IN NaOH og centrifugeredes derefter. Det således opnåede faststof vaskedes med isopropanol og acetone til opnåelse af 87 mg desxylosyl BU-3608 E.
Smp. 205-209°C (dek.).
UV λ °^*N Na0H nm (c): 235,2 (23600), 319,2 35 (11100), 498,4 (10800).
DK 170778 B1 10
Eksempel 4 fremstil!i no af desxvlosvl BU-3608 C (III. R*=CHy R3=H)
Fremgangsmåden i eksempel 3 gentoges under anvendelse af BU-3608 C,hydrochlorid til tilvejebringelse af titel forbi ndel sen, smp. 208-215°C 5 (dek.).
Eksempel 5
Fremstilling af N-methvl-BU-3608 B (II. R2=H. R^R^R^CHj)
En blanding af BU-3608 (540 mg) i 2N HC1 (60 ml) opvarmedes ved 10 115°C i et forseglet rør i 70 minutter og afkøledes. Det resulterende faste materiale opsamledes ved centrifugering (3000 omdr. min.), suspenderes i HgO og pH-værdien indstilledes til 11,7 ved tilsætning af 6N NaOH. Opløsningen (60 ml) sattes til acetone (300 ml) og det resulterende BU-3608 B opsamledes som et faststof. Faststoffet opløstes i H20 (20 15 ml), og IN HC1 tilsattes til indstilling af pH-værdien til 8,3, hvorefter opløsningen fortyndedes med CH^CN (20 ml). Vandigt HCH0 (37%, 0,8 ml) og NaBHgCN (120 mg) sattes successivt til opløsningen ved stuetemperatur, og opløsningen omrørtes ved stuetemperatur i 15 timer. Opløsningsmidlet fjernedes i vakuum og den vandige remanens sattes dråbevist 20 til omrørt acetone. Det resulterende faststof vaskedes med acetone og tørredes til opnåelse af 440 mg natriumsalt af N-methyl-BU-3608 B. En del af dette salt (50 mg) opløstes i H20 og opløsningen indstilles til pH 6,0 med IN HC1. Det resulterende faststof vaskedes med H20 og lyophi-liseredes til opnåelse af 33 mg af zwitterionformen, smp. 211-215°C 25 (dek.).
UV λ 0,01 Nm5!x0H"Me°Hm (c): 240,8 (29700), 319,2 (13400), 499,2 (13100).
Eksempel 6 30 Fremstillino af N.N-dimethvl-desxvlosvl BU-3608 E ΠΙ. R*=R3=H.
r3=r4=ch3i
En opløsning af desxylosyl BU-3608 E (52,9 mg) i H20 (5 ml, pH
8,4) fortyndedes med CH3CN (5 ml). Vandigt HCH0 (0,2 ml) og NaBH^CN (30 mg) sattes successivt ved stuetemperatur til opløsningen, og den resul-35 terende opløsning omrørtes ved stuetemperatur i 14 timer. Opløsningsmidlet fjernedes i vakuum og den vandige remanens (pH 11,3) sattes dråbevist til omrørt acetone. Det opsamlede præcipitat opløstes i H20 og DK 170778 B1 11 indstilledes til pH 5,5 til opnåelse af et faststof, som vaskedes successivt med H20, isopropanol og acetone og tørredes til opnåelse af 28,7 mg Ν,Ν-dimethyldesxylosyl BU-3608 E, smp. 205-208°C (dek.).
UV λ max1N Na°Hnm 232,8 (3400°)’ 319>2 5 (15700), 497,6 (14900).
Eksempel 7
Fremstilling af N.N-dimethvl BU-3608 E (II. R*=H. R2gD-xvlosvl♦ r3=r4=ch3) 10 Til en opløsning af BU-3608 E (485 mg) i en blanding af H20 (40 ml) og CH^CN (40 ml) ved pH 8,0 sattes successivt vandigt HCH0 (37%, 1,6 ml) og NaBH^CN (240 mg) ved stuetemperatur. Opløsningen omrørtes ved stuetemperatur i 15 timer og opløsningsmidlet fjernedes i vakuum. Remanensen opløstes i H20 (50 ml), indstilledes til pH 11,0 og sattes dråbe-15 vist til omrørt acetone (300 ml). Det resulterende præcipitat opsamledes, opløstes i H20 og indstilledes til pH 2,0 med 6N HC1. Opløsningen afsaltedes ved passage over "HP-20". Opløsningen indeholdende produktet indstilledes til pH 5,5 til udfældning af et faststof, som opsamledes, vaskedes med H20 og acetone og tørredes til opnåelse af 364 mg N,N-20 dimethyl BU-3608 E, smp. 214-218°C (dek.).
UV λ °^1N Na0Hnm (c): 233,6 (32900), 319,2 (15500), 497,6 (15100).
Analyse for C40H44N2°18*1,5H20:
Beregnet: C: 55,36%, H: 5,46%, N: 3,23%.
25 Fundet: C: 55,26%, H: 5,45%, N: 3,19%.
Eksempel 8
Fremstilling af N-methvl BU-3608 (II. R*=R3»R4=CHV R2=D-xvlo-
«U
30 Til en omrørt opløsning af natriumsaltet af BU-3608 (550 mg) i 50% vandig CH3CN (55 ml) sattes HCH0 (37%, 0,75 ml) og NaBHjCN (150 mg) og blandingen omrørtes i 18 timer ved stuetemperatur. Efter koncentrering fortyndedes det vandige koncentrat (200 ml), forsyredes til pH 3,0 og underkastedes kolonnechromatografi på "HP-20" (300 ml). Efter vask med 35 vand og efterfølgende eluering med 60% vandig acetone (pH 3,0) koncentreredes det rød-farvede eluat i vakuum og indstilledes til pH 5,5 til præcipitering af N-methyl BU-3608, som opsamledes ved filtrering (425 DK 170778 B1 12 mg), smp. 190-195°C (dek.).
IR (KBr) cm'1: 3400, 1605, 1450, 1295.
UV λ max Me°H nm 220 (3370°)» 278 (26800), 488 (11400).
5 SI-MS m/z 855 (M+H)+.
Eksempel 9
Fremstilling af N-propvl BU-3608 (II. R1=R^=CH^. R2=D-xvlosvl.
r4-(ch2i2ch3i 10 Den almene fremgangsmåde i eksempel 8 gentoges under anvendelse af natriumsaltet af BU-3608 (200 mg), propionaldehyd (1 ml) og NaBH^CN (200 mg) til opnåelse af N-propyl BU-3608 (127 mg), smp. 187-192°C (dek.).
IR (KBr) cm'1: 3380, 1605, 1450, 1295, 1255.
UV λ 5[JaXMe0H nm (c): 223 (33000), 278 (27500), 15 488 (11700).
SI-MS m/z 883 (M+H)+.
Eksempel 10
Fremstilling af et kvaternært ammoniumderivat af BU-3608 ΠΙ.
20 Y=N(CH3)3m
Natriumsaltet af BU-3608 (140 mg) behandledes med methyliodid (1,5 ml) og kaliumbicarbonat (200 mg) i dimethyl sul foxid (5 ml) og methanol (20 ml) ved stuetemperatur i 43 timer. Blandingen koncentreredes, fortyndedes med 0,5 NaOH (20 ml) og holdtes i 30 minutter ved 70°C. Opløs-25 ningen indstilledes til pH 3,0 og overførtes til en "HP-20"-kolonne (150 ml) til afsaltning. Eluatet indeholdende titel forbindelsen inddampedes til opnåelse af et råt faststof af et kvaternært ammoniumderivat af BU-3608 (144 mg). Det rå faststof oprensedes ved reversfase silicagel-chromatografi ($ 2,0 x 45 cm) under eluering med CH^CN:0,15% KH2P04 30 (20:80) pH 3,0. Eluatet undersøgtes ved HPLC og fraktionerne indeholdende rent kvaternært derivat kombineredes og afsaltedes ved "HP-20"-chro-matografi (150 ml) til opnåelse af den rene titelforbindelse (71 mg), smp. 205-210°C (dek.).
IR (KBr) cm'1: 3400, 1620, 1600, 1440, 1255.
35 UV λ max Me°H nm 276 (2230°)’ 498 (9800).
SI-MS m/z 869 (M+).
Molekyl formel C42H4gN2°18C1- DK 170778 B1 13
Eksempel 11
Fremstilling af desxvlosvl BU-3608 D (IIL R*=H, R^=CHj)
Fremgangsmåden beskrevet i eksempel 3 gentoges under anvendelse af BU-3608 D,hydrochlorid til tilvejebringelse af titelforbindelsen, smp.
5 205-2110C (dek.).
Claims (12)
1 I hvor
15 R1 er H eller methyl, i hvilket til fæl de den resulterende alanylsubsti- tuent er en D-alanylsubstituent, R2 er H eller Ø-D-xylosyl, Y er NR3R4 + 345- 34 5 eller NR R R X , hvor R , R og R hver især betegner samme eller forskellige Cj_5*alkylsubstituenter, og X” er en anion, samt farmaceutisk acceptable salte deraf. 20
1. BU-3608-N-alkylderivat med den almene formel Rl i CONHCHCOgH 5 hcl j:h3 O HO , WY^i·
2. Forbindelse ifølge krav 1 med formlen conhchjCOjH HCL JL ^CH,
0 HO jTjl 25 H0 o M0 \ NCCHjlj 30 og farmaceutisk acceptable salte deraf. 35 DK 170778 B1
3. Forbindelse ifølge krav 1 med formlen <o> CONHCH(CHj)COjH HCL JL JL H, O HO || Å 8 Λ -0^>τή u \ N<CH3)j » "s^V og farmaceutisk acceptable salte deraf.
4. Forbindelse ifølge krav 1 med formlen 15 <o> CONHCH< CHj)COjH HQ. JL -CH· O HO
20 XT x og farmaceutisk accpetable salte deraf.
5. Forbindelse ifølge krav 1 med formlen (D) conhch<ch3)cOjH HO. JL -CH, O HO 7*1^ H3C
30. II II I I \ N<CHj)CCHjCHjCH,) OH og farmaceutisk acceptable salte deraf. 35 DK 170778 B1
6. Forbindelse ifølge krav 1 med formlen CONHCHjCOjH Ha 1 .ch3 VkA^V· cr-Vr-^"’ X 10 og farmaceutisk acceptable salte deraf.
7. Forbindelse ifølge krav 1 med formlen <o> CONHCH(CH3>COjH
15 H(L jL ^-CH, o ho W^VssST H° ø H" \ N< CHj53* Cl' og farmaceutisk acceptable salte deraf. 25
8. BU-3608-derivat med den almene formel R1 CONHCHCOjH HQ. JL .CH, 30 0 ΗΟ H.C1 Λ J-L JL j<5>. J ΥυΎΥΥ ^ kAAAJ'·· o^rtr-^TCH’ X« x 35 DK 170778 B1 hvor R1 er H, og R3 er H eller methyl, eller R1 er methyl, i hvilket tilfælde den resulterende alanylsubstituent er en D-alanylsubstituent, og R er H, og farmaceutisk acceptable salte deraf. 5
9. Forbindelse ifølge krav 8 og farmaceutisk acceptable salte deraf, KENDETEGNET ved, at R* og R3 begge er H.
10. Forbindelse ifølge krav 8 og farmaceutisk acceptable salte 10 deraf, KENDETEGNET ved, at R* er H, og R3 er methyl.
11. Forbindelse ifølge krav 8 og farmaceutisk acceptable salte deraf, KENDETEGNET ved, at R1 er methyl, og R3 er H.
12. Farmaceutisk præparat, KENDETEGNET ved, at det omfatter en antifungal effektiv dosis af en forbindelse ifølge krav 1 til 7.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US22114488 | 1988-07-19 | ||
| US07/221,144 US4960755A (en) | 1988-07-19 | 1988-07-19 | BU-3608 derivatives |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| DK354689D0 DK354689D0 (da) | 1989-07-18 |
| DK354689A DK354689A (da) | 1990-01-20 |
| DK170778B1 true DK170778B1 (da) | 1996-01-15 |
Family
ID=22826542
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| DK354689A DK170778B1 (da) | 1988-07-19 | 1989-07-18 | BU-3608 N-alkylderivater, farmaceutiske præparater med indhold deraf samt BU-3608 mellemprodukter |
Country Status (23)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4960755A (da) |
| EP (1) | EP0351799B1 (da) |
| JP (1) | JP2772549B2 (da) |
| KR (1) | KR970003127B1 (da) |
| AT (1) | ATE100459T1 (da) |
| AU (1) | AU622197B2 (da) |
| CA (1) | CA1337907C (da) |
| CS (1) | CS274700B2 (da) |
| DD (2) | DD296081A5 (da) |
| DE (1) | DE68912438T2 (da) |
| DK (1) | DK170778B1 (da) |
| ES (1) | ES2048793T3 (da) |
| FI (1) | FI92206C (da) |
| HU (2) | HU205131B (da) |
| IE (1) | IE62586B1 (da) |
| IL (1) | IL91001A (da) |
| MY (1) | MY105128A (da) |
| NO (1) | NO170544C (da) |
| NZ (1) | NZ229964A (da) |
| PT (1) | PT91203B (da) |
| RU (2) | RU2032693C1 (da) |
| YU (1) | YU138289A (da) |
| ZA (1) | ZA895455B (da) |
Families Citing this family (12)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5183808A (en) * | 1988-11-10 | 1993-02-02 | Bristol-Myers Squibb Company | Method for treating fungal infections with serine analogs of BU-3608 antibiotics |
| US5114857A (en) * | 1988-11-10 | 1992-05-19 | Bristol-Myers Company | Actinomadura hibisca microorganism useful for preparing serine analogs of BU-3608 antibiotics |
| JP2643404B2 (ja) * | 1989-01-13 | 1997-08-20 | 財団法人微生物化学研究会 | 新抗生物質ｎ―アセチルベナノマイシンｂならびにその製造法 |
| US5098708A (en) * | 1990-06-14 | 1992-03-24 | Bristol-Myers Squibb Company | Antiviral antibiotic BU-3889V |
| FI903460A0 (fi) * | 1989-07-10 | 1990-07-09 | Bristol Myers Squibb Co | Antiviralt antibiotikum bu-3889v. |
| US5227370A (en) * | 1989-11-14 | 1993-07-13 | Bristol-Myers Squibb Company | Pradimicin derivatives |
| FI92207C (fi) * | 1989-11-14 | 1994-10-10 | Squibb Bristol Myers Co | Menetelmä terapeuttisesti käyttökelpoisten pradimisiinijohdannaisten valmistamiseksi |
| CA2030166C (en) * | 1989-11-22 | 1997-10-07 | Shimpei Aburaki | Pradimicin derivatives |
| US5696096A (en) * | 1990-09-28 | 1997-12-09 | Bristol-Myers Squibb Company | Pradimicin derivatives |
| US5843908A (en) * | 1990-09-28 | 1998-12-01 | Bristol-Myers Squibb Company | Pradimicins l and fl, and derivatives thereof |
| US5326867A (en) * | 1992-07-16 | 1994-07-05 | Bristol-Myers Squibb Company | Pradimic acids, amides, and pradimicin derivatives |
| US5338728A (en) * | 1992-08-14 | 1994-08-16 | Bristol-Myers Squibb | Pradimicin compounds |
Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4591637A (en) * | 1985-01-17 | 1986-05-27 | Sri International | Open chain-morpholino adriamycins |
| US4870165A (en) * | 1987-02-02 | 1989-09-26 | Bristol-Myers Company | Antifungal antibiotics |
| US5055453A (en) * | 1987-11-02 | 1991-10-08 | Zaidan Hojin Biseibutsu Kagaku Kenkyu Kai | Benanomicins a and antibiotic compositions |
| JP2512050B2 (ja) * | 1987-12-25 | 1996-07-03 | 財団法人微生物化学研究会 | 新規抗かび性抗生物質デキシロシルベナノマイシンｂならびにその製造法 |
| US5696096A (en) * | 1990-09-28 | 1997-12-09 | Bristol-Myers Squibb Company | Pradimicin derivatives |
-
1988
- 1988-07-19 US US07/221,144 patent/US4960755A/en not_active Expired - Lifetime
-
1989
- 1989-07-07 CA CA000605139A patent/CA1337907C/en not_active Expired - Fee Related
- 1989-07-11 YU YU01382/89A patent/YU138289A/xx unknown
- 1989-07-14 FI FI893426A patent/FI92206C/fi not_active IP Right Cessation
- 1989-07-17 NZ NZ229964A patent/NZ229964A/en unknown
- 1989-07-17 IL IL9100189A patent/IL91001A/en not_active IP Right Cessation
- 1989-07-18 KR KR1019890010190A patent/KR970003127B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1989-07-18 ZA ZA895455A patent/ZA895455B/xx unknown
- 1989-07-18 DK DK354689A patent/DK170778B1/da not_active IP Right Cessation
- 1989-07-18 RU SU894614706A patent/RU2032693C1/ru active
- 1989-07-18 DD DD89338278A patent/DD296081A5/de unknown
- 1989-07-18 EP EP89113184A patent/EP0351799B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1989-07-18 PT PT91203A patent/PT91203B/pt active IP Right Grant
- 1989-07-18 ES ES89113184T patent/ES2048793T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1989-07-18 DE DE68912438T patent/DE68912438T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1989-07-18 DD DD89330937A patent/DD287509A5/de not_active IP Right Cessation
- 1989-07-18 NO NO892939A patent/NO170544C/no not_active IP Right Cessation
- 1989-07-18 AT AT89113184T patent/ATE100459T1/de not_active IP Right Cessation
- 1989-07-18 IE IE232589A patent/IE62586B1/en not_active IP Right Cessation
- 1989-07-19 JP JP1184858A patent/JP2772549B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1989-07-19 MY MYPI89000980A patent/MY105128A/en unknown
- 1989-07-19 HU HU908256A patent/HU205131B/hu not_active IP Right Cessation
- 1989-07-19 AU AU38274/89A patent/AU622197B2/en not_active Ceased
- 1989-07-19 HU HU893664A patent/HU203112B/hu not_active IP Right Cessation
- 1989-07-19 CS CS440889A patent/CS274700B2/cs unknown
-
1990
- 1990-09-10 RU SU904830946A patent/RU2026302C1/ru active
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| DK170778B1 (da) | BU-3608 N-alkylderivater, farmaceutiske præparater med indhold deraf samt BU-3608 mellemprodukter | |
| JP2817064B2 (ja) | Ｂｕ―３６０８抗生物質のセリン類縁体 | |
| JPH035398B2 (da) | ||
| JP2860370B2 (ja) | 抗生物質ｂｕ―３６０８ｄおよびｂｕ―３６０８ｅ | |
| AU761782B2 (en) | Vancoresmycin, a process for its production and its use as a pharmaceutical | |
| DK170028B1 (da) | N-Acetylbenanomicin B samt salte og estere deraf, antifungale og antivirale præparater med indhold deraf samt fremgangsmåde til fremstilling deraf | |
| EP0407939A1 (en) | Antiviral antibiotic BU-3889V | |
| NO852758L (no) | 1-hydroksy-cytorodiner, en mikrobiologisk fremgangsmaate til deres fremstilling, og deres anvendelse som cytostatika | |
| US5096817A (en) | Process for producing antibiotics BU-3608 D and BU-3608 E | |
| IL106806A (en) | History of amino and N-alkyl of the antibiotic compounds from the complex of UB-8063 and their preparation | |
| NO146811B (no) | Fremgangsmaate til fremstilling av aminocyklitolantibiotika | |
| JP3875024B2 (ja) | ヒト免疫不全ウイルス（ｈｉｖ）増殖を抑制する新規生理活性物質 | |
| EP0487756A1 (en) | Antibiotics napsamycins A-D, process for their production and their use as pharmaceuticals | |
| JPH09511902A (ja) | Ｗｆ１５６０４物質 | |
| IL107367A (en) | Aglycone of d-serine intermediate for the synthesis of bu-3608 antibiotics | |
| CS228936B2 (cs) | Předběžné, respektive doplňkové krmivo pra vytvoření krmivá pro hospodářská zvířata, zvláště přežvýkavco | |
| JPH05268974A (ja) | Ｗｓ６８４５物質、その製法及び用途 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PBP | Patent lapsed |
Country of ref document: DK |