JPH05268974A - Ｗｓ６８４５物質、その製法及び用途 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【構成】 放線菌に属するストレプトミセス エスピー
Ｎｏ．６８４５株（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｓ
ｐ．Ｎｏ．６８４５）を培養して、融点が２２０℃より
も高い白色粉末物質、ＷＳ６８４５物質を製造する。 【効果】 この物質は、すぐれたエンドセリン拮抗作用
を有する。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、ＷＳ６８４５物質、そ
の製法及び用途に関するものである。ＷＳ６８４５物質
は、ストレプトミセス属菌の培養物から分離採取された
従来未知の新規物質であり、すぐれたエンドセリン拮抗
作用を示し、医薬、特にクモ膜下出血後の脳血管れん
縮、心筋梗塞、急性腎不全等虚血疾患の予防、治療剤と
して有用である。

【０００２】

【従来の技術】エンドセリン（Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｎ）
については、柳沢らにより１９８８年にＮａｔｕｒｅ
〔Ｎａｔｕｒｅ ３３２，４４１（１９８８）〕に発表
されて以来多数の報告があり、クモ膜下出血後の脳血管
れん縮、心筋梗塞、急性腎不全という３大虚血疾患の病
態における密接な関与が証明されている。

【０００３】また最近になって、急性腎不全モデル、心
筋梗塞モデルにおいてエンドセリン抗血清が有効である
ことが示され、これらの病態におけるエンドセリンの関
与が実証された。

【０００４】そこで、当業界においては、これら虚血疾
患の個々についてこれを完全に予防ないし治療するのに
有効な薬剤の開発が希求されており、またこれらの病因
のひとつであるエンドセリンについてこれを抑制し、も
って虚血疾患に対処することのできる薬剤についてもそ
の開発が強く希求されている。

【０００５】

【発明が解決すべき課題】本発明はこのような技術の現
状に鑑みてなされたものであって、本発明は、すぐれた
エンドセリン拮抗作用を有する物質を開発することをそ
の目的とするものである。

【０００６】また本発明の目的は、エンドセリン拮抗作
用を利用して、癌とならんで現代の成人病の重要な部分
を構成するクモ膜下出血後の脳血管れん縮、心筋梗塞及
び／又は急性腎不全に対して、これらを有効に予防及び
／又は治療できる新規薬剤を開発することである。

【０００７】

【課題を解決するための手段】本発明は上記目的を達成
するために既知の化学物質についてのスクリーニングを
行ったけれども目的達成には至らなかった。

【０００８】そこで本発明者らは微生物の発酵生産物に
着目し、各種微生物を検索した結果、宮城県松島の土壌
から分離した微生物Ｎｏ．６８４５株が培養液中に目的
物質を蓄積することを発見した。そして更にこの物質に
ついてその理化学的性質を詳細に研究したところ、従来
未知の新規物質であることを確認し、この物質を新たに
ＷＳ６８４５物質と命名し、そして更に研究の結果、こ
の工業的製法を確立し、またエンドセリン拮抗作用も併
せて確認し、本発明を完成するに至った。

【０００９】本発明に係るＷＳ６８４５物質は、下記の
表２に示される理化学的性質を有している。

【００１０】

【表２】

【００１１】本発明に係るＷＳ６８４５物質は、例えば
本発明者らが宮城県松島で採取した土壌サンプルから新
たに分離した微生物Ｎｏ．６８４５株によって生産され
る。

【００１２】本菌株の形態、培養性状、生理的性質等菌
学的性質についての研究の内、培地、方法はシャーリン
グとゴットリーブ（下記の表３で示される各参考文献の
内の１）、ワックスマン（同じく参考文献２）に従っ
た。それぞれの培養は３０℃で１４日間行った後、観察
した。形態観察は、酵母エキス・麦芽エキス寒天、オー
トミール寒天、無機塩・でんぷん寒天で培養後、光学及
び走査型電子顕微鏡で観察した。炭素源の利用性はプリ
ドハム・ゴットリーブの培地（参考文献３）、生育温度
は酵母エキス・麦芽エキス寒天を用いた。色名は“メシ
ューエン・ハンドブック・オブ・カラー”（参考文献
４）から引用した。細胞壁中のアミノ酸はベッカー等
（参考文献５）、山口（参考文献６）の方法に従った。
以下に、本発明の菌学的性質を示す。

【００１３】

【表３】

【００１４】

【（１）形態的特徴】基生菌糸はよく発達し、不規則に
分枝するが断裂しない。基生菌糸から伸長した気菌糸は
単純分枝し、長い胞子鎖を形成する。気菌糸の形は波
状、ループ状又は不完全ならせん状でプリドハム等の分
類（参考文献７）のＲＡタイプに属する。１つの胞子連
鎖は２０個以上の胞子からなる。胞子は、表面が平滑
で、０．５−０．７×０．７−０．９μｍの大きさの卵
型であった。菌核、胞子のう、遊走子等は観察されなか
った。

【００１５】

【（２）培養性状】結果を下記の表４、表５で示される
第１表に示す。気菌糸の色は白色から黄味白、茶味灰を
呈し、成熟すると湿潤化し黒色化することが多い。生育
裏面の色は、明るい黄から灰味黄を呈す。オートミール
寒天、無機塩・でんぷん寒天で明るい黄色の可溶性色素
がわずかに産生された。菌体内色素、可溶性色素はｐＨ
感受性ではない。メラノイド色素生産はみられなかっ
た。

【００１６】

【表４】

【００１７】

【表５】

【００１８】

【（３）細胞壁タイプ】全菌体分解物の分析の結果、Ｌ
Ｌ−ジアミノピメリン酸の存在が確認できた。従った本
菌株の細胞壁はＩ型と考えられる。

【００１９】

【（４）生理的性質】本菌の生理的性質を、下記の表
６、表７で表わされる第２表、第３表に示した。

【００２０】

【表６】

【００２１】

【表７】

【００２２】以上述べた特徴、特に形態観察及び化学分
析の結果から、本菌株はストレプトミセス（Ｓｔｒｅｐ
ｔｏｍｙｃｅｓ）属に属すると考えられた（参考文献
８、９）。よって本菌株をストレプトミセス・エスピー
・Ｎｏ．６８４５（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｓｐ．
Ｎｏ．６８４５）と命名した。このＮｏ．６８４５株
は、通産省工業技術院微生物工業技術研究所に寄託され
ている（受託番号ＦＥＲＭＰ−１２１０７、寄託日：１
９９１年 ３月１４日）。

【００２３】本物質の生産は、単に説明を目的として挙
げただけの本明細書記載の特定の微生物の使用に限定さ
れるものではないことを理解すべきである。この発明
は、記載の微生物からＸ線照射、紫外線照射、Ｎ−メチ
ル−Ｎ’−ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニジン、２−アミ
ノプリン等の変異処理により取得できる人工変異株並び
に自然変異株を含めて本物質を生産しうる全ての変異株
の使用をも包含するものである。

【００２４】本発明に係る物質は、ストレプトミセス属
に属する該物質生産菌（例えばＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅ
ｓ ｓｐ．Ｎｏ．６８４５）を資化しうる炭素及び窒素
源を含む栄養培地中に接種し、好気条件下で培養するこ
とにより（例えば、振とう培養、通気攪拌培養等）、生
産せしめることができる。

【００２５】炭素源としては、グルコース、シュークロ
ース、澱粉、変性澱粉、フラクトース、グリセリンその
他の炭水化物を使用するのが好ましい。

【００２６】窒素源としては、オートミール、酵母エキ
ス、ペプトン、グルテンミール、綿実粉、綿実油粕、大
豆粉、コーンスティープリカー、乾燥酵母、小麦胚芽、
落花生粉、チキン骨肉ミール等を使用するのが好ましい
が、アンモニウム塩（例えば、硝酸アンモニウム、硫酸
アンモニウム、リン酸アンモニウム等）尿素、アミノ酸
等の無機及び有機の窒素化合物も有利に使用することが
できる。

【００２７】これらの炭素源及び窒素源は、併用するの
が有利であるが、純粋なものを必らずしも使用する必要
はない。不純なものには、生長因子や微量要素が含まれ
ている場合などもあり、有利な場合があるからである。

【００２８】必要ある場合には、例えば次のような無機
塩類を培地に添加してもよい：炭酸ナトリウム、炭酸カ
リウム、リン酸ナトリウム、リン酸カリウム、塩化ナト
リウム、塩化カリウム、ヨウ化ナトリウム、ヨウ化カリ
ウム、マグネシウム塩、銅塩、コバルト塩等。

【００２９】特に、培地が強く発泡するのであれば、必
要あるときに、液体パラフィン、動物油、植物油、鉱物
油、シリコン等を添加してもよい。

【００３０】目的物質を大量に工業生産するには、他の
発酵生産物の場合と同様に、通気攪拌培養するのが好ま
しい。少量生産の場合は、フラスコを用いる振とう培養
が好適である。

【００３１】また、培養を大きなタンクで行う場合、本
物質の生産工程において菌の生育遅延を防止するため、
はじめに比較的少量の培地に生産菌を接種培養した後、
次に培養物を大きな生産タンクに移してそこで生産培養
するのが好ましい。この場合、前培養に使用する培地及
び生産培養に使用する培地の組成は、両者ともに同一で
あってもよいし必要あれば両者を変えてもよい。

【００３２】培養は通気攪拌条件で行うのが好ましく、
例えばプロペラやその他機械による攪拌、ファーメンタ
ーの回転または振とう、ポンプ処理、空気の吹込み等既
知の方法が適宜使用される。通気用の空気は滅菌したも
のを用いる。

【００３３】培養温度は、本物質生産菌が本物質を生産
する範囲内で適宜変更しうるが、通常は１〜４０℃、好
ましくは１０〜３６℃で培養するのがよい。培養時間
は、培養条件や培養量によっても異なるが通常は約１日
〜１週間である。

【００３４】発酵終了後、培養物から目的とする本物質
を回収する。すなわち、菌体は、直接水及び／又は有機
溶媒による抽出、あるいは、これを機械的に又は超音波
等既知の手段を用いて破壊した後、水及び／又は有機溶
媒で抽出した後、常法にしたがって回収、精製する。培
養液の場合は、直接、常法にしたがって回収、精製すれ
ばよい。

【００３５】回収、精製方法としては、例えば、水、有
機溶媒、これらの混合溶媒による溶媒抽出：クロマトグ
ラフィー；単一溶媒又は混合溶媒からの再結晶等常法が
適宜単独であるいは組合わせて使用できる。

【００３６】本物質の回収、精製は、上記のように既知
の方法を適宜利用して行うが、例えば次のようにしても
よい。先ず培養物をアセトン水で抽出し、中性吸着樹脂
〔例えばＨＰ−２０（三菱化成社製）〕に吸着させ、メ
タノールで溶出し、溶出液からメタノールを除去した後
加水する。水相にメタノールを加え、これを逆相クロマ
トグラフィー処理し、アセトニトリル溶出液を得る。そ
の内のメインフラクションについて、中性樹脂吸着処
理、メタノール溶出液の濃縮、乾固処理することによっ
て、目的物質粉末を得る。また他方サイドフラクション
についても、逆相クロマトグラフィー処理を行った後に
メインフラクションと同様の分離精製処理をくり返すこ
とによって、目的物質粉末を得ることができる。

【００３７】本発明に係る薬剤組成物は、ＷＳ６８４５
物質及び／又はその塩を有効成分としてこれに常用され
る無機又は有機の担体を加えて、固体、半固体又は液体
の形で、経口投与剤のほか、外用剤等の非経口投与剤に
製剤化する。

【００３８】経口投与のための製剤としては、錠剤、丸
剤、顆粒剤、軟・伸カプセル剤、散剤、細粒剤、粉剤、
乳濁剤、懸濁剤、シロップ剤、ペレット剤、エリキシル
等が挙げられる。非経口投与のための製剤としては、注
射剤、点滴剤、輸液、軟膏、ローション、トニック、ス
プレー、懸濁剤、油剤、乳剤、坐剤等が挙げられる。本
発明の有効成分を製剤化するには、常法にしたがえばよ
く、界面活性剤、賦形剤、着色料、着香料、保存料、安
定剤、緩衝剤、懸濁剤、等張剤その他常用される佐薬を
適宜使用する。

【００３９】本発明に係る薬剤組成物の投与量は、その
種類、治療ないし予防対象疾病の種類、投与方法、患者
の年令、患者の症状、処理時間等によって相違するが、
静脈投与の場合は成人ひとり当り１日に有効成分（本物
質）を０．０１〜１０００ｍｇ／ｋｇ、好ましくは０．
１〜１００ｍｇ／ｋｇ投与し、筋肉投与の場合は同じく
０．０１〜１０００ｍｇ／ｋｇ、好ましくは０．１〜１
００ｍｇ／ｋｇ投与し、経口投与の場合も同じく０．５
〜２０００ｍｇ／ｋｇ、好ましくは１〜１０００ｍｇ／
ｋｇの範囲内で投与する。

【００４０】以下、本発明を実施例について更に詳しく
説明する。

【００４１】

【実施例１】

【００４２】

【（１）Ｎｏ．６８４５株の培養】変性澱粉１％、シュ
ークロース１％、グルコース１％、綿実粉１％、ペプト
ン０．５％、脱脂大豆粉０．５％、ＣａＣＯ₃ ０．１
％からなる培地を５００ｍｌ容三角フラスコに１６０ｍ
ｌ分注し、１２１℃、３０分間滅菌した。これにＳｔｒ
ｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｓｐ．Ｎｏ．６８４５（ＦＥＲＭ
Ｐ−１２１０７）のスラントを一白金耳接種し３０
℃、７２時間ロータリーシェーカー（毎分２５０回転）
で培養を行い種培養液とした。

【００４３】別にシュークロース４％、チキンミートボ
ーンミール２％、ファーマメディア１％、グルテンミー
ル１％、乾燥酵母 １％からなる培地を、２００ l容ジ
ャーファメンターに１５０ l注入し、消泡剤としてアデ
カノール ＬＧ−１０９（旭電化工業（株））０．０５
％を添加し、１２１℃、３０分間滅菌後上記の種培養液
を２％接種し、通気量２０ l／分、内圧１ｋｇ／ｃ
ｍ²、回転数２５０回転／分、３０℃で１０８時間攪拌
培養を行った。

【００４４】

【（２）ＷＳ６８４５物質の精製（１）】上記の培養方
法で得られた培養液１５０ lにラジオライト５ｋｇを添
加後、濾過し菌体を得た。その菌体に７０ lの水と１０
０ lのアセトンを加え、攪拌しながら室温で一晩抽出
後、濾過し菌体抽出液１８０ lを得た。その抽出液を水
２２０ lで希釈し、計４００ lを８ lのＨＰ−２０（三
菱化成）に付した。水３２ l次いで４０％メタノール水
３２ lでカラムを洗浄した後、目的物質をメタノール５
０ lで溶出した。得られた溶出液のメタノールを減圧下
で蒸発させ、水を加え４ lとした。これを６ＮのＨＣｌ
でｐＨを５．０に調整した後、ヘキサン−酢酸エチル
１：３の混合溶媒６ lで洗浄した。その水層中に残る溶
媒を減圧下で除去した後、メタノール１ lを加え、２０
％メタノール溶液とした。次にその溶液を、予め０．０
５％トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）含有１０％アセトニト
リル水で平衡化した逆層系担体、ＹＭＣ−ＧＥＬ ＯＤ
Ｓ−ＡＭ１２０−Ｓ５０（株式会社山村化学研究所）１
lに付し、０．０５％ＴＦＡ含有２０％アセトニトリル
水、０．０５％ＴＦＡ含有３０％アセトニトリル水、
０．０５％ＴＦＡ含有３３％アセトニトリル水、各々２
lずつでカラムを洗浄した後、０．０５％ＴＦＡ含有３
７％アセトニトリル水１．５ lでＷＳ６８４５物質を溶
出した。その溶出活性画分を水で２倍に希釈した後、Ｈ
Ｐ−２０ ７０ｍｌのカラムに付し、水２００ｍｌ、５
０％メタノール水２００ｍｌで洗浄した後、メタノール
４００ｍｌでＷＳ６８４５物質を溶出した。溶出画分は
減圧下、濃縮乾固し、その残さに少量のメタノールを加
え、生ずる沈澱を濾取した。これを少量のメタノールで
洗浄後、乾燥させることによりＷＳ６８４５物質の白色
粉末７７６ｍｇを得た。また、上記のＹＭＣ−ＧＥＬ
ＯＤＳ−ＡＭ １２０−Ｓ５０の溶出サイドフラクショ
ンは同樹脂２００ｍｌで再度クロマトグラフィーを行っ
た。カラムは０．０５％ＴＦＡを含むメタノール−水系
で、メタノールを漸増させることによりクロマトグラフ
ィーを行い、０．０５％ＴＦＡ含有６０％メタノール５
００ｍｌでＷＳ６８４５物質を溶出した。その後、上記
と同様の方法でＨＰ−２０、メタノール沈澱を行いＷＳ
６８４５物質の白色粉末２６６ｍｇを得た。

【００４５】

【（３）ＷＳ６８４５物質の精製（２）】前述第（１）
項と同様の培養方法によって得たブロス２３０ lから上
記と同じ方法で菌体を得、その菌体に水１１０ lとアセ
トン１１０ lを加え、室温で一晩抽出した。濾過後、そ
の濾液２３０ lに水を２３０ l加え希釈した後、ＨＰ−
２０（三菱化成工業株式会社製）〔４０ l〕のカラムに
付した。カラムを水２０ l、５０％メタノール４０ lで
洗浄した後、メタノール５０ lでＷＳ６８４５物質を溶
出した。その溶出液をそのまま塩基性アルミナ（ＩＣＮ
ＡｌｕｍｉｎａＢ，Ａｋｔ．Ｉ）（ＩＣＮ ＢＩＯＭ
ＥＤＩＣＡＬＳ，Ｇｅｒｍａｎｙ）〔２．３ l〕カラム
に付し、メタノール７ l、０．５％酢酸含有メタノール
７ lで洗浄した後、２％酢酸含有メタノール６ l、３％
酢酸メタノール７ l、５％酢酸メタノール６ lでＷＳ６
８４５物質を溶出した。得られた活性画分を濃縮乾固
し、黄色油状物質を得た。これを少量のメタノールで溶
解しＹＭＣ−ＧＥＬ ＯＤＳ−ＡＭ １２０−Ｓ５０
（山村化学研究所製）〔１ l〕のカラムで計６回分取し
た。カラムは予め、０．２％ＴＦＡ含有３７．１％アセ
トニトリル水で平衡化しておき、チャージ後、同溶媒に
て展開した。活性は２ lから４ lめにかけて溶出され
た。溶出活性画分は等量の水で希釈し、ＨＰ−２０〔２
３０ｍｌ〕のカラムに付し、水１ l次いで５０％メタノ
ール水５００ｍｌで洗浄後、メタノール８００ｍｌでＷ
Ｓ６８４５物質を溶出した。その溶出液を減圧下、濃縮
乾固し、その残さに少量のメタノールを加え生ずる沈澱
を濾取し、メタノールで洗浄後乾燥させＷＳ６８４５物
質の白色粉末６００ｍｇを得た。

【００４６】このようにして得られたＷＳ６８４５物質
について、その理化学的性質を調査して、既述のデータ
を得た。なお、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬ
Ｃ）の条件は次のとおりであった。カラム：ＹＭＣ Ｐ
ａｃｋｅｄ ｃｏｌｕｍｎ ＡＭ−３０３（Ｓ−５ １
２０Ａ ＯＤＳ）（山村化学研究所製）、検出：ＵＶ
２２０ｎｍ、流速：１ｍｌ／分、展開溶媒：０．２％ト
リフルオロ酢酸（ＴＦＡ）含有４０％アセトニトリル
水、保持時間（ＲＴ）：１０．９分。

【００４７】また、ＷＳ６８４５物質の理化学的性質の
内、アミノ酸分析については次の２つの方法によって分
析を行った。

【００４８】（１）ＷＳ６８４５物質（１ｍｇ）を、６
Ｎ ＨＣｌ（１ｍｌ）を用いて１１０℃、２０時間加水
分解した。反応混合物を蒸発乾固し、得られた加水分解
物をアミノ酸自動分析機（Ｈｉｔａｃｈｉ ８３５ Ａ
ｕｔｏｍａｔｉｃ Ａｍｉｎｏ−Ａｃｉｄ Ａｎａｌｙ
ｓｅｒ）で分析して、次の結果を得た：Ａｓｐ、Ｔｈ
ｒ、Ｐｒｏ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ、Ｎ
Ｈ₃、Ｈｉｓ。

【００４９】（２）ＷＳ６８４５物質（１ｍｇ）を、４
Ｎメタンスルホン酸（販売元：Ｐｉｅｒｃｅ Ｃｈｅｍ
ｉｃａｌ Ｃｏｍｐａｎｙ，ＵＳＡ）を用いて１１５
℃、２４時間加水分解した。反応混合物を水酸化ナトリ
ウム溶液で中和した後、上記と同様にしてアミノ酸自動
分析機で分析し、次の結果を得た：Ａｓｐ、Ｔｈｒ、Ｐ
ｒｏ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ、ＮＨ₃、Ｈｉ
ｓ、Ｔｒｐ。

【００５０】

【実施例２】放射性リガンド結合アッセイ

【００５１】

【（ａ）粗製受容体膜画分の調製】ペル・フリーズ・バ
イオロジカルズ（Ｐｅｌ−Ｆｒｅｅｚ Ｂｉｏｌｏｇｉ
ｃａｌｓ）（アメリカ）からブタ大動脈を購入し、用時
まで−８０℃で保存した。

【００５２】ブタ大動脈（５０ｇ）を解凍し、脂肪組織
を切り取って除き、ハサミで細かく刻み、１００ｍｌの
緩衝液（０．２５Ｍシュクロース、１０ｍＭトリス・塩
酸、０．１ｍＭ ＥＤＴＡ、ｐＨ７．５）中でポリトロ
ン〔ブリンクマン（Ｂｒｉｎｋｍａｎｎ）ＰＴ−２０、
最大速度３×１０秒間〕を用いてホモジナイズした。ホ
モジネートを１０，０００ｇで２０分間４℃で遠心分離
した。

【００５３】細胞膜画分を含有する上澄みを１００，０
００ｇ、４℃で６０分間遠心分離した。得られたペレッ
トを粗製膜画分と呼ぶ。ペレットを、結合アッセイ用緩
衝液（５０ｍＭトリス・塩酸、１００ｍＭ ＮａＣｌ、
５ｍＭ ＭｇＣｌ₂、１．５μｇ／ｍｌフェニルメチル
スルホニルフルオライド（ＰＭＳＦ）、１２０μｇ／ｍ
ｌバシトラシン、１２μｇ／ｍｌロイペプチン、６μｇ
／ｍｌキモスタチン、０．１％ウシ血清アルブミン（Ｂ
ＳＡ）、ｐＨ７．５）２５ｍｌ中に再懸濁させた。この
大動脈膜画分を、使用時まで、−８０℃で保存した。

【００５４】〔（ｂ）¹²⁵Ｉ−エンドセリン結合アッセ
イ（１）〕¹²⁵Ｉ−エンドセリン−１（¹²⁵Ｉ−ＥＴ−
１）あるいは¹²⁵Ｉ−エンドセリン−３（¹²⁵Ｉ−ＥＴ−
３）〔アマーシャム ジャパン（Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｊ
ａｐａｎ）、比放射能２０００Ｃｉ／ｍｍｏｌ〕を結合
アッセイ用緩衝液中の大動脈膜試料５０μｌと共に、最
終体積２５０μｌ中室温（２０〜２２℃）で６０分間イ
ンキュベートした。

【００５５】インキュベーションののち、セルハーベス
ター〔ブランデル（Ｂｒａｎｄｅｌ）Ｍ−２４５〕を用
い、ガラス繊維ＧＦ／Ｃフィルター（使用前３時間０．
１％ポリエチレンイミンで前処理）でインキュベーショ
ン混合物を濾過した。つぎに、フィルターを０℃で、計
３ｍｌの洗浄用緩衝液（５０ｍＭトリス・塩酸、ｐＨ
７．５）で１０回洗った。フィルターをガンマーカウン
ター〔バッカードオートガンマ５６５０型（Ｐａｃｋａ
ｒｄ Ａｕｔｏ Ｇａｍｍａ Ｍｏｄｅｌ ５６５
０）〕中で計測した。

【００５６】

【（ｃ）¹²⁵Ｉ−エンドセリン結合アッセイ（２）】上
記（ｂ）におけるブタ大動脈のかわりに、ブタの腎臓、
肺臓、脳の組織を用いて、細胞膜画分について、上記
（ｂ）と同様の操作を行ってエンドセリン結合試験を行
った。

【００５７】上記（ｂ）及び（ｃ）の結果を下記の表８
で表わされる第４表に示すが、第４表の阻害値（Ｉ
Ｃ₅₀）から明らかなように、ＷＳ６８４５物質は、ブタ
大動脈試料への結合に関して、¹²⁵Ｉ−エンドセリンと
競合し、ブタの腎臓、肺臓、脳の細胞膜画分のレセプタ
ーに対する¹²⁵Ｉ−エセドセリンの結合を阻害した。

【００５８】

【表８】

【００５９】

【（ｄ）本物質の急性毒性】生後５週令のＩＣＲ系雌マ
ウス５匹に、ＷＳ６８４５物質を１００ｍｇ／ｋｇの投
与量で毎日１回、３日間連続腹腔内投与したが死亡例は
認められず、体重増加も無投与マウス群と全く同じであ
り、ＷＳ６８４５物質の安全性の高さが確認された。

【００６０】

【実施例３：注射剤の製造】 （１）実施例１（３）で製造したＷＳ６８４５物質 ５ｇ （２）食塩 ９ｇ （３）炭酸水素ナトリウム １ｇ

【００６１】（１）〜（３）の全成分を蒸留水１０００
ｍｌに溶解した後、アンプルに１ｍｌずつ分注して、注
射剤１０００本を製造した。

【００６２】

【発明の効果】本発明はＷＳ６８４５物質を提供するも
のであるが、この物質は従来未知の新規薬理活性物質で
あって、すぐれたエンドセリン拮抗作用を示し、医薬、
例えば、クモ膜下出血後の脳血管れん縮、心筋梗塞、急
性腎不全等の予防及び／又は治療剤として、虚血疾患の
予防及び／又は治療に有用である。

【００６３】また、本発明によって、微生物を利用する
上記物質の工業的製法も確立された。

【図面の簡単な説明】

【図１】ＷＳ６８４５物質の¹Ｈ核磁気共鳴スペクトル
を示す図面である。

【表４】

【表４】

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 清 遠 純 夫 茨城県つくば市並木 ３−17−１ ロイヤ ルコ−ポ 405 (72)発明者 奥 原 正 国 茨城県つくば市梅園 ２−14−10

Claims (3)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 下記表１に示される物性を有することを
   特徴とするＷＳ６８４５物質。 【表１】
2. 【請求項２】 ストレプトミセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙ
   ｃｅｓ）属に属するＷＳ６８４５物質生産菌を培養して
   ＷＳ６８４５物質を生成せしめ、これを採取することを
   特徴とするＷＳ６８４５物質の製造方法。
3. 【請求項３】 ＷＳ６８４５物質を有効成分とするエン
   ドセリン拮抗剤及び／又は抗虚血性疾患予防治療剤。