DK166323B - Griseolsyrederivater og farmaceutiske midler indeholdende disse - Google Patents

Description

i

DK 166323 B

Den foreliggende opfindelse angår en række hidtil ukendte gri-seolsyrederivater samt farmaceutiske midler indeholdende disse .

5 Griseolsyre er en forbindelse af nucleosid-typen med en ade-ninbase og to carboxyl syregrupper. Den blev først omtalt i bl.a. europæisk patentpublikation nr. 29.329A, men dens struktur kendtes ikke på dette tidspunkt. Dens struktur blev først beskrevet i US patentskrift nr. 4.460.765.

10

Griseolsyres struktur kan angives ved hjælp af-formlen:

Iffø

rr'V

3 * 20 s 0 \ o/ s1 uy \ , 25 HOOC / \ / X>-*

™ N0X OH

ao wm oh

Det skal bemærkes, at naturlig griseolsyre, der er et produkt opnået ved naturlig biosyntese, syntetiseres stereospecifikt.

Den har i virkeligheden ved både 2'- og 7'-sti 11 i ngen R-kon-35 fi gurat ionen.

2

DK 166323 B

Efter anbefalinger fra International Union of Pure and Applied Chemistry (I.U.P.A.C) navngives forbindelserne ifølge den 5 foreliggende opfindelse som derivater af griseolsyre, idet griseolsyre anvendes som grundstrukturen. Det heri anvendte nummereringssystem er som vist i ovennævnte formel for griseolsyre - 10 Ved navngivning af specifikke forbindelser ifølge den fore liggende opfindelse i overensstemmelse med denne konvention, % antages substituenter ved 2'- og 7'-stillingen at være i Il- konfigurationen (ligesom naturlig griseolsyre), medmindre andet er anført.

15

Griseolsyre har ligesom derivaterne ifølge den foreliggende opfindelse evnen til at inhibere aktiviteten af cyklisk adeno-sinmonophosphat (cAMP) phosphordiesterase (PDE) og kan således forøge koncentrationen af cAMP i cellerne hos en dermed 2Q behandlet patient.

Det er velkendt, at cAMP, som er vidt udbredt i dyrevæv, fungerer som en anden budbringer for og formidler virkningen af et stort antal hormoner. Af denne grund spiller cAMP en 25 række meget vigtige fysiologiske og biokemiske roller. Man ved desuden, at det har en virkning på eller deltager i: deling, vækst og differentiering af celler; systole; hæma= poiesis; forskellige af centralnervesystemets aktiviteter; immunreaktioner og udskillelse af insulin og histamin. Dets 3q koncentration i væv, og således dets indvirkning på disse forskellige funktioner, afhænger af ligevægten mellem enzymet, som syntetiserer cAMP (adenylat-cyklase) ,og enzymet, som dekomponerer cAMP PDE. En inhibitor mod cAMP PDE vil forøge koncentrationen af cAMP i cellerne og vil således være et 35 værdifuldt angiocardiokinetisk middel, antiastmatisk middel, glatmuskelafslappelsesmiddel, psykotropisk- og neurotropisk middel, anti-inflammatorisk middel, cancermodvirkende middel og middel til behandling af diabetes.

3

DK 166323 B

Det er blevet påvist, at griseolsyre har sådanne biologiske aktiviteter, der er beskrevet i det foregående afsnit, og man har nu fundet en række hidtil ukendte griseolsyrederi-vater, som ligeledes har disse aktiviteter, men som har en 5 overraskende lav toksicitet i forhold til griseolsyre.

Forbindelserne ifølge opfindelsen har især vist sig at forbedre hjernemetabolismen væsentligt, at forstærke virkningen af kendte cancermodvirkende midler og at forstærke insulins 10 virkning. Forbindelserne ifølge opfindelsen har desuden vist sig at forbedre blodviskositeten.

Griseolsyrederivaterne ifølge opfindelsen har vist sig at have en overraskende lav oral toksicitet sammenlignet med griseol-15 syre, således som det fremgår af det nedenfor omtalte forsøg.

(1) Forsøgsmetode:

Undersøgelser af den orale toksicitet af griseolsyrederivater blev udført med hanrotter. Medikamentet blev admi-20 nistreret oralt til rotter i 4 dage med dagsdoser på 50, 100 og 200 mg/kg legemsvægt. Den kendte forbindelse griseolsyre blev benyttet som sammenligningsforbindelse.

(2) Forsøgsresultater: 25 Resultaterne er sammenfattet i den følgende tabel. 1 35 4

DK 166323 B

Tabel

Oral toksicitet af griseolsyrederivater og af qriseolsyre i rotter__ 5 ___[__

Forsøgs- Dosis, Dødelighed Vigtige toksiske forbindelser mg/kg tegn antal døde/ 1Q antal be- Legems- Nyreska- handlede vægt, tab der

Forbindelse51 50 0/5 100 0/5 200 0/5

Forbindelse26 50 0/5 : 15 100 0/5 200 0/5

Forbindelse36 50 0/5 100 0/5 200 0/5

Forbindelse 37 50 0/5 100 0/5 20 200 0/5

Forbindelse 35 50 0/5 100 0/5 200 0/5

Forbindelse 202 50 0/5 100 0/5 200 0/5

Forbindelse 10 50 0/5 25 100 0/5 200 0/5

Forbindelse 12 50 0/5 100 0/5 200 0/5

Forbindelse 58 50 0/5 100 0/5 30 200 0/5

Griseolsyre 50 0/5 ++ ++ 100 3/5 +++ + + + 200 4/5 +++ +++

Bemærkninger til tabellen: 1. Numrene på forbindelserne ifølge opfindelsen i spalten med overskriften "forsøgsforbindelser" angiver de tilsvarende 5

DK 166323 B

forbindelsesnumre, som er anført i den efterfølgende liste.

2. Symbolet angiver negative resultater for tab af le gemsvægt og for nyreskader, medens symbolet "++" angiver 5 en moderat grad af legemsvægt-tab eller moderate nyreska der, og symbolet "+++" angiver alvorlig grad af legemsvægt-tab eller alvorlige nyreskader.

(3) Konklusion: 10

Fald i legemsvægt blev iagttaget ved alle doser af grise-olsyre, og dødst i 1fældene forekom for 3 ud af 5 rotter ved 100 mg/kg legemsvægt og for 4 ud af 5 rotter ved 200 mg/kg legemsvægt. Alvorlige nyreskader blev konstateret ved al-15 le doser ved den histopatologiske undersøgelse. Derimod blev der for alle de afprøvede griseolsyrederivater ikke konstateret noget legemsvægt-tab, dødstilfælde eller nyreskader endog ved en dosis på 200 mg/kg legemsvægt. Det vil derfor fremgå af de opnåede forsøgsresultater, at griseol-20 syrederivaterne ifølge opfindelsen er langt mindre toksis ke end sammenligningsforbindelsen, dvs. griseolsyre selv, hvilket resultat må betragtes som helt uventet.

Det er derfor et formål med opfindelsen som en hidtil ukendt 25 stofgruppe at tilvejebringe en række forbindelser med inhi-berende virkning mod cAMP PDE og med en lav toksicitet. Det er et yderligere formål med opfindelsen at tilvejebringe et farmaceutisk middel til bedring af organiske lidelser, der skyldes en utilstrækkelig cAMP-koncentration i vævene.

30

Gr iseolsyrederivaterne ifølge opfindelsen er karakteriseret ved formlen I: 35 6

DK 166323 B

Rl H R3 . 0 A

hooc Y—v y (Il 5 HOOC-( \ / i \ N (Γ R1

V

10 hvori A betegner en gruppe med formlen:

r5 NH

6 R?Xn^V\ 6 is I R eller /—1,6 ; S-'S'7

I I

Ri, R2, R5 og R6 er ens eller forskellige og hver betegner et 20 hydrogen- eller halogenatom> en azidogruppe eller en gruppe med formlen -OR9, -Nr1°r11 eller -SR9; R3 betegner et hydrogen- eller halogenatom eller en Cj-Cg-a-cyloxy- eller Cj-Cg-alkoxygruppe; 25 R4 betegner et hydrogen- eller halogenatom, eller R3 og R4 sammen betegner en ekstra carbon-carbon-binding mellem carbonatomerne, hvortil de er bundet, eller 30 R3 og R2 sammen betegner et oxygenatom, som forbinder carbonatomerne, hvortil de er bundet; R7 betegner en eventuelt substitueret Cj-Cg-alkyl-, Cj-Cg-al-35 kenyl- eller aralkylgruppe (hvori alkyldelen har fra 1 til 6 carbonatomer), idet substituenterne er valgt blandt halogenatomer, Cj-C4-alkoxygrupper, (Cj-C^-alkoxy)carbonylgrupper og (når R7 er substitueret aralkyl) Ci-C4-alkylgrupper; 7

DK 166323 B

R9 betegner et hydrogenatom, en Cj-Cg-alkylgruppe, en tetrahy-dropyranylgruppe, en alkylsulfonylgruppe, en halogenalkylsul-fonylgruppe, en arylsulfonylgruppe, en usubsti tueret C^-C20 alifatisk acylgruppe eller en substitueret eller usubsti tueret 5 aromatisk acylgruppe;

RlO

og RU er ens eller forskellige og hver betegner et hydrogenatom, en C^-Cg-alkylgruppe, en Ci-Cg-hydroxyalkylgruppe, en Ci-Cs-aminoalkylgruppe, en aralkylgruppe, en ary 1 gruppe, en 20 Cj-Cg-alkoxygruppe, en aminogruppe, en usubsti tueret C2-C20 alifatisk acylgruppe eller en substitueret eller usubsti tueret aromatisk acylgruppe; eller Rl° og RU sammen med nitrogenatomet, hvortil de er bundet, betegner en piperidinogruppe eller morpholi nogruppe; 15 og farmaceutisk acceptable salte og estere deraf; men ikke 7'(R)-griseolsyre selv og salte deraf.

20 Opfindelsen angår også et farmaceutisk middel, der omfatter mindst én af forbindelserne ifølge opfindelsen i blanding med en farmaceutisk acceptabel bærer eller et farmaceutisk acceptabelt fortyndingsmiddel.

2g Hvor R^ og sammen betegner en ekstra binding, danner dette i forbindelserne ifølge opfindelsen en carbon-carbon-dobbelt-binding mellem carbonatomerne ved 4'- og 5'-stillingerne (som i griseolsyire selv)/ og de resulterende forbindelser kan angives ved hjælp af formlen (la) 30 /°\ HOOCs^/ C -fj llQl HOOC—( \ / ^

35 \ K

R2 12 8

DK 166323 B

(hvori R , R og A har de ovenfor definerede betydninger).

Hvor R2 og R3 sammen betegner et forbindende (af ethertypen) 5 oxygenatom, kan forbindelserne angives ved hjælp af formlen (Ib):

R4 Η o A

™0C\/7\ /1 Hb)

HOOC—/\/ / X

\0,Λ<Κ R1 15 (hvori R1, R4 og A har de ovenfor definerede betydninger). Forbindelser med formlen (Ib) navngives efter det subtraktive "anhydro"-nomenklatursystem ifølge I.U.P.A.C.

20 Rules on Nomenclature of Organic Chemistry, regel C-44.1.

De betagtes således som forbindelser med en hydroxygruppe i 4’α-stillingen (R3 = hydroxy) og med ét vandmolekyle fjernet mellem stillingerne 4'a og 7'. De navngives følgeligt som 4',7,-anhydro-4'a-hydroxygriseolsyrederivater.

25

Hvor R^, R2, R3, R4, R^, R^ eller substituenten på en gruppe 7 repræsenteret af R er et halogenatom i forbindelserne ifølge opfindelsen, er dette passende et fluor-, chlor-, brom- eller jodatom.

30 1 2 5 6 9

Hvor R , R , R eller R betegner en gruppe med formlen -OR , er det en hydroxy-, C^_g-alkoxy-, tetrahydropyranyloxy-, alkylsulfonyloxy-, halogenalkylsulfonyloxy-, arylsulfonyloxy-, C1~C20 alifatisk acyloxy—eller· r.eventuelt substitueret - aromatisk 35 acyloxygruppe. Alkoxygruppen kan være en ligekædet eller forgrenet gruppe,og eksempler omfatter methoxv-, ethoxy-, propoxy-, isopropoxy-, butoxy-, isobutoxy-, sek.-butoxy-, tert.-butoxy-, 9

DK 166323 B

pentyloxy- og hexy1oxygrupperne. Foretrukne alkylsulfonyloxy-grupper er methansulfonyloxy-, ethansulfonyloxy- og 1-propan-su1fony 1oxygrupperne. I halogenalkylsulfony1oxygrupperne er halogenatomet fortrinsvis mindst ét fluoratom, idet perfluor-5 alkylsulfonyloxygrupperne særligt foretrækkes; sådanne foretrukne grupper er trifluormethansulfonyloxy- og pentafluore-thansulfony 1oxygrupperne. Foretrukne arylsulfonyloxygrupper omfatter benzensu1fony1oxy- og p-toluensulfony1oxygrupperne.

De alifatiske acyloxygrpper, der kan være repræsenteret af 10 -OR9, kan være ligekædede eller forgrenede grupper, som kan være mættede eller umættede, og som kan være kortkædede eller langkædede grupper; eksempler på sådanne acy1oxygrupper omfatter acetoxy-, propiony 1oxy-, butyryloxy-, isobutyry1oxy-, valeryloxy-, isovaleryloxy-, octanoy1oxy-, lauroyloxy-, 15 palmitoyloxy- og stearoyloxygrupperne. Eksempler på eventuelt substituerede aromatiske acyloxygrupper omfatter benzoyloxy-, p-toluoy1oxy-, p-anisoyloxy-, p-chlorbenzoyloxy- og p-nitro-benzoyloxygrupperne.

- 9 20 De eventuelt substituerede mercaptogrupper med formlen -SR , 1 p c g der kan være repræsenteret af R , R / R eller R , kan være de thioanaloge til de substituerede hydroxygrupper med den

Q

ovennævnte formel -OR . Foretrukne grupper af denne type omfatter imidlertid: mercaptogruppen, C^-Cg-alkylthiogruppen, 25 især methylthio-, ethylthio-, propylthio-, isopropylthio-, butylthio-, isobutylthio-, -sek.-butylthio-, tert.-butylthio-, pentylthio- og hexylthiogrupperne; alifatiske acylthiogrup-per, såsom acetylthio-, propionylthio-, butyrylthio- og iso= butyrylthiogrupperne; og eventuelt substituerede aromatiske 3C acy1 thi ogrupper, såsom benzoylthio-, p-toluoy1thi o-, p-aniso- ylthio- og p-chlorbenzoylthiogrupperne.

Hvor Ri, r2 og eller R® betegner en amino- eller substitueret aminogruppe med formlen -Nr1°rH, kan RlO og RU være ens 35 eller forskellige og hver betegne et hydrogenatom, en C^-Cg-alkylgruppe, en Ci-Cg-hydroxyalkylgruppe, en Cj-Cg-aminoalkyl-gruppe, en aralkylgruppe, en arylgruppe, en C^-Cg-alkoxygruppe, 10

DK 166323 B

en aminogruppe, en Cj-C2o al i fat i sk acylgruppe eller en aromatisk acylgruppe; eller Rl° og Ril kan sammen med N-atomet, hvortil de er bundet, danne en p i per id i nogruppe eller morpho-linogruppe. Medmindre andet er anført foretrækkes det, at Ril 5 betegner hydrogen, og RlO betegner hydrogen eller én af de ovenfor anførte grupper.

Hvor R^ og/eller R** betegner en alkylgruppe, kan gruppen, der er repræsenteret af -NR*°R**, vare en mono- eller di- alkylaminogruppe, især methylamino-, dimethylamino-, ethyl= amino-, diethylamino-, propylamino-, dipropylamino-, butyl= amino-, isobutylamino-, sek.-butylamino-, tert.-butylamino-, pentylamino- og hexylaminogrupperne. Hvor betegner en hydroxyalkylgruppe ,er foretrukne eksempler på grupperne'repræ-.

1 f. senteret af -NR^R^ 2-hydroxyethylamino- og 3-hydroxypropyl= in aminogrupperne. Hvor R betegner en ammoalkylgruppe, er foretrukne eksempler på grupperne' repræsenteret af -nr^r^ 2-aminoethyiamino- og 3-aminopropy 1 aminogrupperne. Hvor R*° betegner en aralkylgruppe, er foretrukne eksempler på grupper 2o repræsenteret af -NR1°r11 benzyl ami no-, p-methylbenzylamino-, p-methoxybenzylamino-, p-chlorbenzylamino-, phenethylamino-, anaphthylmethylamino- og jS-naphthylmethylaminogrupperne. Hvor Rl° betegner en arylgruppe, er foretrukne eksempler på grupper repræsenteret af -NRlOpll anilino-, p-toluidino-, p-anisidi-25 no-, p-chlorani1 i no-, α-naphthy 1 ami no- og jS-naphtyl ami nogrup-perne. Hvor Rl° repræsenterer en alkoxygruppe, er foretrukne eksempler på grupper repræsenteret af -NR1°r11 methoxyamino-, ethoxyamino- og propoxyaminogrupperne. Hvor Rl° repræsenterer en aminogruppe, er gruppen repræsenteret af -NR1°r11 fortrins-30 vis hydrazinogruppen. Hvor Rl° og/eller RU betegner en ali-fat isk acylgruppe, er foretrukne eksempler på grupper repræsenteret af -NR1°r11 acetamido-, propionylamido-, di propi ony1 -amido-, butyrylamido-, dibutyrylamido-, isobutyrylamido-, valerylamido-, isovalerylamido-, octanoylamido-, lauroylami-35 do-, palmitoylamido- og stearoylamidogrupperne. Hvor Rl° og/eller RU betegner en aromatisk acylgruppe, er foretrukne eksempler på grupper repræsenteret af -nr1°r11 benzamiao-, dibenzamido-, p-to1uoy1 am ido-, di-p-toluoy1 am i do-, p-anisoyl-

H

DK 166323 B

amido-, di-p-anisoylamido-, p-chlorbenzamido-, di-p-chlorbenz-amido- og p-nitrobenzamidogrupperne.

3

Hvor R betegner en acyloxygruppe eller en -Cg-alkoxygrup-5 pe, er eksempler på sådanne grupper givet i relation til gruppen -OR9 repræsenteret af R1, R2, R^ eller R^.

7

Hvor R betegner en eventuelt substitueret alkylgruppe, er dette fortrinsvis en methyl-, ethyl-, propyl-, isopropyl-, -A0 butyl-, isobutyl-, sek.-butyl-, tert.-butyl-, methoxycarbonyl= methyl-, ethoxycarbonylmethyl-, propoxycarbonylmethyl-, 2-methoxycarbonylethyl- eller 2-ethoxycarbonylethylgruppe.

7

Hvor R betegner en eventuelt substitueret alkenylgruppe, 15 er den fortrinsvis usubstitueret og foretrukne grupper omfatter allyl- og 2-butenylgrupperne.

7

Hvor R betegner en eventuelt substitueret aralkylgruppe, er dette fortrinsvis en benzyl-, p-methylbenzyl-, p-methoxy= 20 benzyl-, p-chlorbenzyl-, p-nitrobenzyl-, 2,4,6-trimethylbenzyl-, phenethyl-, p-methylphenethyl-, p-methoxyphenethyl- eller p-chlorphenethylgruppen.

Foretrukne klasser af forbindelser ifølge opfindelsen kan 25 defineres på følgende måde: (A) Forbindelser med formlen (I), deres salte og estere, hvori R1 betegner et hydrogen- eller halogenatom, azidogruppe eller 3 0 g nævnte gruppe med formlen -OR , 2 g R betegner hydrogen eller nævnte gruppe med formlen -OR , 3 4 R og R samme betegner nævnte ekstra binding, 5 R betegner en hydroxy-, amino-, C^-Cg-alkylamino-, acylamino-eller mercaptogruppe, og 12

DK 166323 B

R6 betegner hydrogenatomet.

(B) Forbindelser med formlen (I), deres salte og estere, 5 hvori R1 betegner et hydrogen- eller halogenatom eller nævnte grup- q pe med formlen -OR , 2 1° R betegner hydrogenatomet eller nævnte gruppe med formlen 9 -OR , 3 4 R og R sammen betegner nævnte ekstra binding, 15 R^ betegner aminogruppen, og 6 R betegner et halogenatom, en mercapto- eller C.-C^-alkoxy- 10 11 1 °

gruppe eller nævnte gruppe med formlen -NR R

20 (C) Forbindelser med formlen (I), deres salte og estere, hvori R^· betegner hydroxygruppen, 25 R betegner et halogenatom, 3 2 R og R sammen betegner nævnte oxygenatom, R5 betegner aminogruppen, og 30 g R betegner hydrogenatomet.

(D) Estrene, der er defineret under (C) ovenfor.

35 (E) Forbindelser, der er defineret under (A) - (D) ovenfor, hvori 7 R betegner nævnte eventuelt substituerede aralkylgruppe.

13

DK 166323 B

Forbindelserne med formlen (I) indeholder to carboxygrupper og kan således danne mono- eller disalte og mono- eller diestere. I tilfældet med di-saltene og di-estrene, kan de kat-ioniske dele af saltene eller de alkoholiske dele af estrene 5 være ens eller forskellige. I praksis er det imidlertid let test at fremstille di-salte eller di-estere, især de, hvori de to kationiske dele eller de to alkoholiske dele er ens.

Der er ikke nogen særlig begrænsning med hensyn til karakteren 10 af esterens alkoholiske del, forudsat, at den ikke eller ikke i et uacceptabelt omfang reducerer aktiviteten af forbindelsen eller forøger dens toksicitet, og alle estere, som almindeligvis dannes med forbindelser af denne type, kan dannes med forbindelserne ifølge opfindelsen. Eksempler på estere 15 omfatter: C^-Cg-alkylestere, især methyl-, ethyl-, propyl- og butylestrene; aralkylestere, især benzyl- og benzhydryl-estrene; alifatiske acyloxyalkylestere (især acyloxymethyl-og acyloxyethylestrene), såsom acetoxymethyl-, propionyloxy= methyl-, butyryloxymethyl-, pivaloyloxymethyl-, l-acetoxy= 20 ethyl-, 1-propionyloxyethyl-, 1-butyryloxyethyl- og l-pivaloyl= oxyethylestrene; (C^-C^-alkyl)oxycarbonyloxyethylestrene, såsan 1-methoxycarbonyloxyethyl-, 1-ethoxycarbonyloxyethyl-, 1-propoxycarbonyloxyethyl-, 1-isopropoxycarbonyloxyethyl-, 1- ’utoxycarbonyloxyethyl- og 1-isobutoxycarbonyloxyethylestrene; 2 5 heterocykliske estere, såsom phthalidylestrene; og heterocyklyl- methylestere (hvori den heterocykliske gruppe fortrinsvis q er som defineret for R ), f.eks. 5-methyl-2-oxo-l,3-dioxolen- 4-ylmethylestrene.

3 0

Der er ingen særlige begrænsninger med hensyn til karakteren af de kationer, der anvendes til dannelse af salte af forbindelserne ifølge opfindelsen, forudsat, at de ikke eller ikke i et uacceptabelt omfang reducerer forbindelsernes aktivitet eller forøger forbindelsernes toksicitet. Foretrukne 3 5 salte omfatter salte med alkalimetaller (såsom natrium eller kalium) eller med jordalkalimetaller (såsom calcium).

14

DK 166323 B

i p c r Når ét eller flere af R , R , R og R betegner en aminogrup-pe, vil forbindelserne ifølge opfindelsen også danne syreadditionssalte. Arten af den til dannelse af sådanne salte anvendte syre er ikke kritisk, forudsat, at den ikke eller 5 ikke i et uacceptabelt omfang reducerer aktiviteten eller forøger toksiciteten af forbindelserne. Eksempler på sådanne syrer omfatter: uorganiske syrer, såsom saltsyre, svovlsyre og phosphorsyre; organiske carboxylsyrer, såsom eddikesyre, oxalsyre, maleinsyre, ravsyre, citronsyre, vinsyre, fumar-syre, laurinsyre, stearinsyre og palmitinsyre; og sådanne organiske sulfonsyrer som methansulfonsyre, benzensulfonsyre og p-toluensulfonsyre.

Forbindelserne ifølge opfindelsen har en række asymmetriske carbonatomer i deres molekyler og kan derfor eksistere i form af forskellige stereoisomere. Den foreliggende opfindelse omfatter både de enkelte isolerede isomerer såvel som blandinger af disse isomerer. Griseolsyre, der er et naturligt produkt, er en enkelt isomer, hvori både 2'- og 7'-carbon-atomet er i R-konfigurationen; forbindelser, der er fremstillet af griseolsyre, kan bevare den samme konfiguration eller kan have den omvendte konfiguration ved ét eller flere af de asymmetriske carbonatomer. Når R^ betegner en gruppe eller ^ et atom, der er forskelligt fra hydrogen, kan f.eks. konfigu rationen af forbindelserne ved 2'-stillingen være cc eller /3. Når R betegner en gruppe eller et atom, der er forskelligt fra hydrogen, kan konfigurationen ved 7'-stillingen være RS, R eller S.

30

Eksempler på forbindelser ifølge opfindelsen er anført i den efterfølgende liste. Forbindelserne er herefter, hvor det er hensigtsmæssigt, angivet ved hjælp af de numre, de har fået i denne liste.

35 662' 7' 1. dibenzhydryl-N ,N ,O ,0 -tetrabenzoylgriseolat, 6 6 21 71 2. dibenzhydryl-N ,N,o ,0 -tetra-p-toluoylgriseolat, 15

DK 166323 B

a a «s i *71 3. dibenzhydryl-N ,N ,(j ,0 -tetra-p-chlorbenzoylgriseolat, 4. dibenzhydryl-N^,N^,0^ ,0^ -tetra-p-nitrobenzoylgriseolat, 5 . 6 6 2' 7' 5. dibenzhydryl-N ,N ,0 ,0 -tetra-p-anisoylgriseolat, 2 · 6 6 71 6. dibenzhydryl-0 -benzoyl-N ,N ,0 -tri-p-toluoylgriseolat, 6 6 71 2f 7. dibenzhydryl-N ,N,0 -tri-p-anisoyl-0 -benzoylgriseolat, 10 6 6 21 71 8. dibenzhydryl-N ,N ,0 ,0 -tetrapropionylgriseolat, 9. dibenzhydryl-N0,N ,<j ,07 -tetrabutyrylgriseolat, 15 , 6 2' 71 10. dibenzhydryl-N ,0 ,0 -tripropionylgriseolat, 6 2' 7' 11. dibenzhydryl-N ,0 ,0 -tributyrylgriseolat, 6 2' 7' 12. dibenzhydryl-N ,0 ,0 -tribenzoylgriseolat, 20 6 2' 71 13. dibenzhydryl-N ,0 ,0 -triacetylgriseolat, 6 7» 2 * 14. dibenzhydryl-N ,0 -diacetyl-0 -benzoylgriseolat, 25 2' 7 * 15. dibenzhydryl-0 ,0 -dibenzoylgriseolat, 2« 7» 16. dibenzhydryl-0 ,0 -dipropionylgriseolat, 2' 7 1 17. dibenzhydryl-0 ,0 -dibutyrylgriseolat, 30 2' 7' 18. dibenzhydryl-0 ,0 -diacetylgriseolat, 2' 19. dibenzhydryl-0 -benzoylgriseolat, 35 20. dibenzhydrylgriseolat, 21. dimethylgriseolat, 16

DK 166323 B

2' 7' 22. dimethyl-0 ,0 -diacetylgriseolat, 6 21 71 23. dimethyl-N ,0 ,0 -tribenzoylgriseolat, r 6 21 71 & 24. dimethyl-N ,0 ,0 -tri-p-chlorbenzoylgriseolat, 25. dimethyl-41,7’-anhydro-5'a-brom-4'α-hydroxygriseolat, 6 21 7 * 26. dinatrium-N ,0 ,0 -tribenzoylgriseolat, 10 6 21 71 27. dinatrium-N ,0 ,0 -tri-p-toluoylgriseolat, 6 21 71 28. dinatrium-N ,0 ,0 -tri-p-chlorbenzoylgriseolat, .. 6 21 71 29. dinatrium-N ,0 ,0 -tri-p-nitrobenzoylgriseolat, 6 2' 71 30. dinatrium-N ,0 ,0 -tri-p-anisoylgriseolat, 21 6 71 31. drnatrium-0 -benzoyl-N ,0 -di-p-toluoylgriseolat, 20 g 71 21 32. dinatrium-N ,0 -di-p-anisoyl-O -benzoylgriseolat, 6 7' 21 33. N ,0 -diacetyl-0 -benzoylgnseolsyre, 6 21 71 25 34. N ,0 ,0 -tributyrylgriseolsyre, g 35. N -benzoylgriseolsyre, 2' 36. 0 -benzoylgriseolsyre, 30 7 · 37. 0 -benzoylgriseolsyre, 6 21 38. N ,0 -dibenzoylgriseolsyre, 6 71 35 39. N ,0 -dibenzoylgriseolsyre, 1 · 7 * 40. 0 ,0 -dibenzoylgriseolsyre, 17

DK 166323 B

2' 7' 41. O ,0 -diacetylgriseolsyre, 42. N^-methylgriseolsyre, 71 1 5 43. 0 -acetyl-N -methylgriseolsyre, 44. N^-butylgriseolsyre, 45. N^-benzylgriseolsyre, 10 71 1 46. O -acetyl-N -benzylgriseolsyre, 47. dibenzhydryl-N^-benzylgriseolat, 15 48. N^-allylgriseolsyre, 49. N1-methoKycarbonylmethylgriseolsyre, 50. N^-phenethylgriseolsyre, 20 51. 6-desamino-6-hydroxygriseolsyre, 52. 6-chlor-6-desaminogriseolsyre, 25 53. 6-desamino-6-hydrogriseolsyre, 54. 6-desamino-6-mercaptogriseolsyre, 55. 6“desamino-6-methylmercaptogriseolsyre, 30 56. 6-azido-6-desaminogriseolsyre, g 57. N -methoxygriseolsyre, g 35 58. N -methylgriseolsyre, g g 59. N ,N -dimethylgriseolsyre, 18

DK 166323 B

60. 6-desamino~6-hydrazinogriseolsyre, g 61. N -(2-hydroxyethyl)griseolsyre, 5 62. N6-(2-aminoethyl)griseolsyre, g 63. N -benzylgriseolsyre, 64. N^-phenethylgriseolsyre, 10 g 65. N -a-naphthylmethylgriseolsyre, 66. 6-desamino-6-piperidinogriseolsyre, 1 s 67. 6-desamino-6-morpholinogriseolsyre, 68. dibenzhydryl-6-desamino-6-hydroxygriseolat, 2» 7» 63. O ,0 -diacetyl-6-desamino-6-hydroxygriseolsyre, 20 2« 7» 70. 0 ,0 -dibenzoyl-6-desammo-6-hydroxygriseolsyre, 2' 7' 71. dibenzhydryl-0 ,0 -diacetyl-6-desamino-6-hydroxygriseolat, 2 * 7 1 25 72. 0 ,0 -diacetyl-6-chlor-6-desaminogriseolsyre, 2' 71 73. dimethyl-0 ,0 -diacetyl-6-chlor-6-desaminogriseolat, 74. dibenzhydryl-6-chlor-6-desaminogriseolat, 30 2' 7» 75. dibenzhydryl-0 ,0 -diacetyl-6-chlor-6-desaminogriseolat, 2' 76. dimethyl-0 -benzoylgnseolat, 2« i 35 77. dibenzhydryl-0 -benzoyl-0 -mesylgriseolat, 2' 7' 78. dimethyl-0 -benzoyl-0 -mesylgriseolat, 19

DK 166323 B

2' 7 · 79. dibenzhydryl-0 -benzoyl-O -trifluormethansulfonylgriseolat, 2 ' 7' 80. dimethyl-0 -benzoyl-0 -trifluormethansulfonylgriseolat, 5 81. 71-azido-7'-deoxygriseolsyre, 82. 7'-amino-7'-deoxygriseolsyre, 10 83. 7'-deoxy-7'-mercaptogriseolsyre, 84. 7'-deoxy-7'-methylthiogriseolsyre, 85. 7'-deoxy-7'-methylaminogriseolsyre, 15 86. 7'-deoxy-7'-dimethylaminogriseolsyre, 87. 7'-benzylamino-7'-deoxygriseolsyre, 20 88. 7'-chlor-7'-deoxygriseolsyre, 89. 7'-brom-7'-deoxygriseolsyre, 90. 7'-deoxy-7'-jodgriseolsyre, 25 91. 7'-deoxy-7'-fluorgriseolsyre, 92. 7'-deoxy-7’-methylaminogriseolsyre, 30 93. 7'-acetamido-7'-deoxygriseolsyre, 94. 7'-benzamido-7'-deoxygriseolsyre, 7' 95. O -methylgnseolsyre, 35 η i 96. O -ethylgriseolsyre, 7' 97. O -propylgnseolsyre,

DK 166323 B

20 7' 98. O -butylgriseolsyre, 7 1 99. O -benzylgriseolsyre, 5 71 100. O -(tetrahydropyran-2-yl)griseolsyre, 7 · 101. dimethyl-0 -(tetrahydropyran-2-yl)griseolat, 7 1 102. dibenzhydryl-0 -(tetrahydropyran-2-yl)griseolat, 2 · 7' 103. dimethyl-0 -mesyl-0 -(tetrahydropyran-2-yl)-griseolat, 2 * 7 * 104. dibenzhydryl-0 -mesyl-0 -(tetrahydropyran-2-yl)griseo= I5 lat, 7' 2' 105. dimethyl-O -{tetrahydropyran-2-yl)-o -trifluormethan= sulfonylgriseolat, 20 106. dibenzhydryl-O^ -(tetrahydropyran-2-yl)-0^ -trifluor= methansulfonylgriseolat, 107. 21-azido-2’-deoxygriseolsyre, 25 108.2’-amino-2'-deoxygriseolsyre, 109. 2'-chlor-2'-deoxygriseolsyre, 110. 21-brom-2'-deoxygriseolsyre, 30 111. 2'-deoxy-21-jodgriseolsyre, 112. 2'-deoxy-2’-fluorgriseolsyre, 35 113. 2'-deoxy-2'-methylaminogriseolsyre, 114. 2'-deoxy-2'-dimethylaminogriseolsyre, 21

DK 166323 B

115. 2'-benzylamino-2'-deoxygriseolsyre, 116. 2'-acetamido-2'-deoxygriseolsyre, 5 117. 21-benzamido-2'-deoxygriseolsyre, 2 ' 118. 0 -methylgnseolsyre, 2' 10 119· 0 -ethylgriseolsyre, 2 1 120. O -propylgriseolsyre, 2 1 121. O -butylgriseolsyre, 15 122. 2'-deoxy-2'(S)-mercaptogriseolsyre, 123. 2,-deoxy-2l(S)-methylmercaptogriseolsyre, 20 124. 6-desamino-6-methoxygriseolsyre, g 125. N -phenylgriseolsyre, 2' 126. O -ben2oyl-6-desamino-6-hydroxygriseolsyre, 25 1 127. 6-desamino-6-hydroxy-N -(2,4,6-trimethylbenzyl)- griseolsyre, 2' 7' 128. dibenzhydryl-0 ,0 -diacetyl-6-desamino-6-hydroxy-Ν'*·- (2,4,6-trimethylbenzyl )griseolat, 129. dimethyl-0 ,0 -diacetyl-6-desamino-6-hydroxygriseolat, 130. dibenzhydryl-7'-azido-0 -benzoyl-7'-deoxygnseolat, 35 6 21 71 131. N ,0 ,0 -tribenzoylgriseolsyre, 2' 71 132. dibenzhydryl-0 ,0 -dibenzoyl-6-desamino-6-hydroxy= griseolat, 22

DK 166323 B

133. 7'-deoxygriseolsyre, 2' 134. dibenzhydryl-7'(S)-amino-O -benzoyl-7'-deoxygrisolat, 5 135. 7'(S)-amino-7'-deoxygriseolsyre, 2 1 136. dibenzhydryl-0 -benzoyl-7'(S)~brom-7'-deoxy-griseolat, 10 137. 71(S)-brom-7'-deoxygriseolsyre, 138. 6-desamino-7'-deoxy-6-hydroxygriseolsyre, 2 1 139. dibenzhydryl-71(S)-acetoxy-0 -benzoyl-7'-deoxy- 15 griseolat, 140. 7'-deoxy-7'(S)-hydroxygriseolsyre, 141. 7'(S)-acetoxy-7'-deoxygriseolsyre, 20 142. 2'(S)-chlor-2'-deoxygriseolsyre, 143. 2'(S)-brom-2'-deoxygriseolsyre, 25 144. 2'-deoxygriseolsyre, 145. bis{1-acetoxyethyl)griseolat, 146. bis(1-propionyloxyethyl)griseolat, 30 147. bis(1-butyryloxyethyl)griseolat, 148. bis(1-pivaloyloxyethyl)griseolat, 35 149. bis(1-methoxycarbonyloxyethyl)griseolat, 150. bis(1-ethoxycarbonyloxyethyl)griseolat, 23

DK 166323 B

151. bis(1-propoxycarbonyloxyethyl)griseolat, 152. bis(1-isopropoxycarbonyloxyethyl)griseolat, 5 153. bis(1-butoxycarbonyloxyethyl)griseolat, 154. bis(1-isobutoxycarbonyloxyethyl)griseolat, 155. diphthalidylgriseolat, 10 156. bis(5-methyl-2-oxo-l,3-dioxolen-4-ylmethyl)griseolat, 157. bis(1-acetoxyethyl)-6-desamino-6-hydroxygriseolat, 15 158. bis(1-propionyloxyethyl)-6-desamino-6-hydroxygriseolat, 159. bis{1-butyryloxyethyl)-6-desamino-6-hydroxygriseolat/ 160. bi s(1-piva1oy1oxyethy1)-6-desamino-6-hydroxygri seolat, 20 161. bis(1-methoxycarbonyloxyethy1)-6-desamino-6-hydroxy= griseolat, 162. bis(1-ethoxycarbonyloxyethyl)-6-desamino-6-hydroxy= 25 griseolat, 163. bis(1-propoxycarbonyloxyethyl)-6-desamino-6-hydroxy= griseolat, 30 164. bis(1-isopropoxycarbonyloxyethyl)-6-desamino-6-hydroxy= griseolat, 165. bis(1-butoxycarbonyloxyethyl)-6-desamino-6-hydroxy= griseolat, 35 166. bis{1-isobutoxycarbonyloxyethyl)-6-desamino-6-hydroxy= griseolat, 24

DK 166323 B

167. diphthalidyl-6-desamino-6-hydroxygriseolat, 168. bis(5-methyl-2-oxo-l,3-dioxolen-4-ylméthyl)-6-desamino- 6-hydroxygriseolat, 5 169. 7'(S)-griseolsyre, 2 1 7 1 170. dimethyl-4 1/3-acetoxy-0 ,0 -diacetyl-5 1 -hydrogriseolat, 10 21 7' 171. dimethyl-0 /0 -diacetyl-4'Ø-brom-5'-hydrogriseolat/ 2' 71 172. dimethyl-0 ,0 -diacetyl-4'β,5'-dihydrogriseolat, 173. 4 '/3,5 1-dihydrogriseolsyre, 15 2 1 7» 174. dimethyl-4'/3-acetoxy-O ,0 -diacetyl-6-desamino-5 '-hydro-6-hydroxygriseolat, 2« 7 · 175. dimethyl-4‘a-acetoxy-0 ,0 -diacetyl - 6-desammo-51 - 2 0 hydro-6-hydroxygrrseolat, 21 7' 176. dimethyl-0 ,0 -diacetyl-4'Ø-chlor-e-desamino-S'-hydro- 6-hydroxygriseolat , 25 2' 71 177. dimethyl-0 /0 -diacetyl-4'0-brom-6-desamino-51-hydro- 6-hydroxygriseolat, 2' 7 1 178. dimethyl-0 ,0 -diacetyl-6-desamino-41j3,5'-dihydro-6- hydroxygriseolat, 30 179. 6-desamino-4'β,5'-dihydro-6-hydroxygriseolsyre, 2 * 7 1 180. dimethyl-0 /0 -diacetyl-5' cc-chlor-6-desamino-6-hydroxy- 4'β-methoxygriseolat, 35 2 * 7' 181. dimethyl-0 ,0 -diacetyl-5'a-brom-6-desamino-6-hydroxy-41β-methoxygriseolat, 25

DK 166323 B

182. 4 ', 7'-anhydro-5'a-brom-6-desamino-41a,6-dihydroxy= griseolsyre, 5 183. 4',7'-anhydro-5'a-chlor-4'a-hydroxygriseolsyre, 184. 4 ', 7 1 -anhydro-5' ct-brom-4' α-hydroxygriseolsyre, 185. 4',7'-anhydro-4'a-hydroxy-5'a-jodgriseolsyre, 10 186. 4',7'-anhydro-8-brom-5'a-chlor-4'a-hydroxygriseolsyre, 187. 4 ’, 7'-anhydro-5'a,8-dibrom-4’a-hydroxygriseolsyre, 15 188. 4',7'-anhydro-8-brom-4'a-hydroxy-5'a-jodgriseolsyre, 189. dibenzhydryl-4',7'-anhydro-5'a,8-dibrom-4'a-hydroxygriseolat, 2Q 190. dibenzhydryl-4',7'-anhydro-5'a-brom-4'a-hydroxy-8-mer= captogriseolat, 191. dibenzhydryl-8-mercaptogriseolat, 192. 8-mercaptogriseolsyre, 2 5 193. dibenzhydryl-41,71-anhydro-5'a-brom-41a-hydroxy-8-methoxygriseolat, 194. dibenzhydryl-8-methoxygriseolat, 195. 8-methoxygriseolsyre, 196. 8-bromgriseolsyre, 35 197. 8-brom-6-desamino-6-hydroxygriseolsyre, 198. dibenzhydryl-8-bromgriseolat, 26

DK 166323 B

199. dibenzhydryl-8-azidogriseolat, 200. dibenzhydryl-8-aminogriseolat, 5 201. 8-aminogriseolsyre, 202. dibenzhydryl-4 ', 7 '-anhydro-5 'a-brom-4 'α-hydroxygriseolat, 203. dimethyl-41,7'-anhydro-41a-hydroxy-5'a-jodgriseolat, 10 204. dibenzhydryl-4',7'-anhydro-4'a-hydroxy-5'a-jodgriseolat, 205. dibenzhydryl-4',7'-anhydro-5'a-brom-6-desamino-4'a,6-dihydroxygri s eo1at, 15 206. dimethyl-4',7'-anhydro-51a-brom-6-desamino-4'a,6-di= hydroxygriseolat, 6 6 j1 207. dimethyl-4,,7'-anhydro-N ,N rO -tribenzoyl-5'a-brom- 20 4'a-hydroxygriseolat, 208. dimethyl-4',7'-anhydro-N6,,02 -tribenzoyl-4'e-hydroxys' α-jodgriseolat, 2' 7' 25 209. dimethyl-0 /0 -diacetyl-4'0-chlor-5'-hydrogriseolat, 2' 7' 210. dimethyl-0 ,0 -diacetyl-5'-hydro-4'Ø-^odgriseolat, 2' 7' 211. dimethyl-0 ,0 -diacetyl-6-desamino-5'-hydro-6-hydroxy- 30 4 '/3-jodgriseolat, 212. 4',7'-anhydro-5'a-chlor-6-desamino-4'a,6-dihydroxy= griseolsyre, 35 213. 4'f7'-anhydro-6-desamino-4'a,6-dihydroxy-5'a-jod= griseolsyre, 214. 4',7'-anhydro-5'a-brom-8-chlor-4'a-hydroxygriseolsyre, 27

DK 166323 B

215. 41,7'-anhydro-8-chlor-41a-hydroxy-5'a-jodgriseolsyre, 216. 8-methylthiogriseolsyre, 5 217. 8-benzylthiogriseolsyre, 218. 8-phenylthiogriseolsyre, 219. 8-hydroxygriseolsyre, 10 220. 8-benzyloxygriseolsyre, 221. 8-phenoxygriseolsyre, 15 222. 8-methylaminogriseolsyre, 223. 8-benzylaminogriseolsyre, 224. 8-phenylaminogriseolsyre, 20 225. 8-chlor-6-desamino-6-hydroxygriseolsyre, 226. 8-chlorgriseolsyre, 25 227. dipivaloyloxymethyl-8-broingriseolat, 228. diphthalidyl-8-bromgriseolat, 229. bis(l-methoxycarbonyloxyethyl)-8-bromgriseolat, 30 230. dipivaloyloxymethyl-8-brom-6-desamino-6-hydroxygriseolat, 231. diphthalidyl-8-brom-6-desamino-6-hydroxygriseolat, 35 232. bis(1-methoxycarbonyloxyethyl)-8-brom-6-desamino-6-hy= droxygriseolat, 28

DK 166323 B

233. dipivaloyloxymethyl-8-mercaptogriseolat, 234. dipivaloyloxymethyl-8-methoxygriseolat, 5 235. dipivaloyloxymethyl-8-aminogriseolat, 236. dipivaloyloxymethyl-4',7'-anhydro-5'a-brom-4'a-hy= droxygriseolat, 10 237. diphthalidyl-41,7'-anhydro-5'a-brom-4'a-hydroxygnseolat, 238. bis(1-methoxycarbonyloxyethyl)—41,7 *-anhydro-5'a-brom-4'a-hydroxygriseolat, 239. diphthalidyl-4' ,7 '-anhydro-4 'a-hydroxy-5 ' a- jodgriseolat, 240. dipivaloyloxymethyl-4', 71-anhydro-4'a-hydroxy-51a-jod= griseolat, 20 241. bis(1-methoxycarbonyloxyethyl)-4',71-anhydro-4'a-hydroxy- 51a-jodgriseolat, 242. bis(5-methyl-2-oxo-1,3-dioxolen-4-ylmethyl)-4',71-an= hydro-41a-hydroxy-5'a-jodgriseolat, 25 243. bis(5-methyl-2-oxo-l,3-dioxolen-4-ylmethyl)-4',7'-an= hydro-8-brom-4'α-hydroxygriseolat, 244. bis(5-methyl-2-oxo-1,3-dioxolen-4-ylmethyl)-8-brom-6- 30 desamino-6-hydroxygriseolat, 245. bis(5-methyl-2-oxo-1,3-dioxolen-4-ylmethyl)-8-bromgriseo= lat, 2 1 7 1 35 246. dimethyl-0 -benzoyl-0 -(tetrahydropyran-2-yl)griseo= lat, 247. 2'(S)-azido-2'-deoxygriseolsyre, 29

DK 166323 B

248. 2'(S)-amino-2'-deoxygriseolsyre, 249. 2'-deoxy-2'(S)-jodgriseolsyre, 5

Foretrukne forbindelser ifølge opfindelsen er forbindelserne nr. 1, 2, 5, 10, 12, 15, 20, 21, 24, 26, 29, 35, 36, 37, 40, 41, 45, 47, 51, 54, 58, 62, 63, 65, 81, 82, 88, 89, 109, 110, 125, 131, 133, 138, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 149, 150, 155, 156, 157, 160, 161, 162, 167, 168, 169, 171, 10 173, 176, 177, 179, 183, 184, 185, 186, 187, 188, 192, 195, 196, 198, 201, 202, 203, 204, 205, 206, 217, 226, 227, 230, 231, 237, 241, 242 og 247. Af disse foretrækkes især forbind elserne nr. 10, 26, 35, 36, 37, 51, 54, 58, 131, 133, 138, 141, 142, 143, 144, 148, 156, 160, 168, 169, 192, 195, 196, 15 201, 202 og 247.

Forbindelserne ifølge opfindelsen kan fremstilles ved hjælp af fremgangsmåderne, der er belyst i de efterfølgende reaktionsskemaer: 20 25 1 35 30

DK 166323 B

jft NH2 vp gc>

H0DC'/=51Y ' HODCn/KJ

“V*. Η00ε-Ο 0R12 ID) tin, IX» JJ2 ]H2 NH2

Co Co -u. w rBooc^QI r1300Cs/=Q h... /=(^ .

(III) i OR12 N0Rl2 J«,! " / “ R\/V / 8 f nh2 1¾) tø R%^n »«nTO " "'-Ο * «t-Λ' « (IV) OR12 jrrirø NHR12 NHR12 NHR12 tø - . tø Si tø HOOCy^J MOOCH=Q HOOCv/tøj

HMC \»12 8812 MOOCH; 8 ORl2 HOOC-tø OH

(vi 0Rl2 uh m (Vil (VII) 31

DK 166323 B

ψΐ 7 HH NH

l (Γ% k'\\

kNjL,j/ ΜηΚΙ ^hAN/ ^J5 kNXN/ m^0 H00C./=O RttO0Cv/^jJ

HOOC—OH HOOC—ς 0 OH R%C~( 1°'oH

nn 0H i OH ØH

t«« «» “

1¾ Bil j HK

vf>- W»-‘'Cr;>

R%cy^W R1%0C^r<^j Rl300CxT=W

Rl300C-( 0 OH R13oric—or12 D orI2 11111 (Vin) (XIII) rriri2

, NH KH

\V> R\V> ^νΛν7 Trin)3 ^„Al/ HOOC >rX-j! HOOCx/'Xji' «-Τ'Π. moc-Λ0' 0R12 OR12 qr32 (XVI (XIV)

DK 166323B

32 KH2 OH 0 rSr\ rV\ S Vs ir'*" Trin 20^ Trin 16^ H00Cv^l}l HOOCs/K^ ΗΟΟΟν/5^^ HOOC-('0'oH HOOC-^0 (|H ΗΟΟΟ-^0'^

OH OH OH

HD IXX) . (ΧΫΠ) , rriril ΓΓτϊγ22 Trif$ «h2 oh o

φ - φ KW

β13οοοφφί Ri3ooc-y^_ji

RnODC—<φ° OH R13ooC-( 0 (IH Rl300C-< 0 [IH OH OH OH

rail (XXI) I (XIX) i Γτϊιί3 Eri^8 OH 0 ζΧ> κ""φ:> _/0N _

*^SO-T

OR12 R130DC—<φ° OR12 (XXIII R IXVDII DR

33

DK 166323 B

J2 m W *S2L W »JL iff)

JZfiH

Hs «5 z » vT> »„ a fr\ -V\ jyj ^ k»Ar s* kX>

Rl3o0c°!i>0-^2

«> - :;X

ITrin 26 å> .oJ (mi

Hooc^nJ

HW~V *

UH

34

DK 166323 B

f2 l«2 tø w 6> 'a>

Trin 9 Trin 27 H°OC /=<N H00c r!30oC /=<”)

H00C-V °R

™ (XI! (XXVII

jltin 28 H«2 NH2 &> 1¾

Trin 29-

Rl3°oc'/=C!y r13ooc r13°0C-V° OR12 r13°0C-<^ OR12 (XXVIII! ^S02r15

Trin 30 (XXVIII

RH2 OH

&> fo

Trin 6 2

HOOC /=<J HOOCsT^J

H00C^° o« (XXIX1 |L XI) 35

DK 166323 B

|h2 *«2 IW2

W tO tO

Trin 31 " N Trin 3 2 N 11

R13°oc^=<7 HOOC

Ab-C **<%« (XXVI) (XXX) (XXXI) fcrin 33 H«2 |H2 tO ^ to r,3°0CnT0 R13oocNK‘y R%C-^°'~f 15 ftoc-A^

\Dr16 0S02« \0R16 0H

(XXXIII) lirin 35 (XXXIII

NH2 «h2 to ^ to r13ooc/==<J 0000^/=0 R%C-( ttOOC—( 'or(® r Λη r (XXXIV) (XXXV) j1*1"37

OH

to

hddc^=Q

hoocV^^I

/νννυτι 'nu ·» 36

DK 166323B

f2 *fH2 NH2

TO TO -TO

Trin 5 NN Trin -jo n

n —t H AqO

fil3oocyTO)l r13°0c jTO-/ R13oocO^°y

Rl3°0C V »« Rl3°0C^?2 OR^ Ac-Mt 11111 I <™> (XXXVII)

Trin ] Trin 39 ]H2 «2 NH2 fo fo_ 00 .½ ti\i ,½ih *mv'« (Π1 (XXXVIII) (XXXIX) ' ' nh2 1¾) «O-o0-

Hoocv5—r

«Λκ° ”H

(XL) °H

37

DK 166323 B

OH

tø .%¾¾ ixuv) 4

Ttin (5

« OH

rV> rV\

S^-R7 Μη 42 ^IK'T

r,3°0C)K^ Λκ\ϊηΜ]2 ^ jTtin 43

«* OH

¢¢^ *> R r13°^2° °«'2 ,ItLIIl IXLIII) I 46

OH

tø »ilk “OOC^Ttj ntV «

(XLV) 0H

DK 166323B

38

jfH2 OH OH

0C> 0c> Oc>

^$0 HOOcjVJ

R1300C^^> oh Βΐ3°0[-γ° j|| irø^O'H

(LIXI i . (LX) (XLVI) 1

Jitui 60 [τήη^

fl f2 OH

L iT% * it% N H Trin^8 Trin jø

x//°N _/0N JL

H00Cn(7W “C/\i H00Cs/^=O

H00C-Y0 OH HOOCH; 15 o« HOOC^O^ “ 'OH 'oh Dtl

(XLVII) ^into »n (XXI

f* f2 HH2 tXy . Q> d>'s u Trin 50 Trin 5] N H · ^\i_yOn \/ ,(k Z i* η

H00C )0_7 R^oocYtO R%c/tQI

HOOC-^7o oh R%C-^/Vfo R,3OOC-UO oH

(XL™) (XUXi |L I I Urin 52 hh2 nh2 'Cry H00C /==Q R13OOC^=(j «νΐ 39

DK 166323 B

NH2 <«Φο

HOOC-//0 OH

0 (XLVIIU L . rf Iltern 54

OH

HOOCnTV/ ηοοοα=Λ "“V^1 m\H ' " (UI" μ» 56 <“V| f2 *h2 NHz 0>' o . 0>> ^^SC^-Y R1300CJ=<^j/ fi130°cV/==C^y

η^οοο-Λο dh r%c-<N oh r,3ooc-( O oH

" OH

<LVI (LVIJ (LVIII jTrin 5g NH2 y>"’ HOOoW)

H00C-Y OH ara« UH

40

DK 166323 B

1 8 I de ovennævnte formler har R -R de ovenfor definerede be-12 tydninger.R betegner en acylgruppe, der kan være en hvilken som helst af de acylgrupper, der er defineret ovenfor for 9 13 R . R betegner en beskyttelsesgruppe for carboxy og kan 5 være en hvilken som helst af de ovenfor nævnte esterdannen de grupper. Hvor der i en forbindelse findes to eller flere 12 13 grupper, repræsenteret ved R og R , kan disse være ens 14 eller forskellige, men de er hensigtsmæssigt ens. R betegner et hydrogenatom eller en aralkylgruppe (f.eks. benzhydryl-10 gruppen). R^SC^- betegner en sulfonylgruppe, der kan være en hvilken som helst af de sulfonylgrupper, der tidligere 9 16 er defineret for R . R betegner en tetrahydropyranylgruppe eller en tri(C^-C4-alkyl)silyl-gruppe , R17 betegner en alkyl-gruppe og kan være en hvilken som helst af de grupper, der . 3 15 ovenfor er defineret for R . Ac betegner en acylgruppe og kan være en hvilken som helst af de grupper, der ovenfor er 3 defineret for R . M betegner et alkalimetalatom (f.eks. et natrium- eller kaliumatom). Z og Z1 kan være ens eller forskellige og hvert betegner et halogenatom, f.eks. et chlor-, 20 brom- eller jodatom.

De ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen anvendte trin kan sammenfattes på følgende måder 25 (1) Forestring af en carboxylsyre (trinnene 1, 22, 27, 33, 50, 56, 60 og 61).

(a) Til dannelse af en benzhydrylester.

30 Udgangsmaterialet i hvert af disse trin, som er en forbind else, der indeholder frie carboxylsyregrupper, omsættes med diphenyldiazomethan. Reaktionen gennemføres fortrinsvis i nærværelse af et opløsningsmiddel, hvis karakter ikke er afgørende, forudsat at det ikke påvirker reaktionen negativt.

35 Det foretrukne opløsningsmiddel er vandig acetone.

41

DK 166323 B

7 Reaktionstemperatureri er ikke særlig afgørende, og reaktion en gennemføres derfor normalt ved en temperatur fra 0 til 100°C, fortrinsvis, for nemheds skyld, ved omgivelsernes temperatur. Hvor lang tid reaktionen tager, afhænger af reagen-5 sernes karakter og af reaktionstemperaturen. Det er imidler- ' tid normalt tilstrækkeligt med et tidsrum fra 15 til 24 timer.

(b) Forestring til en methylester.

10 Ved denne proces omdannes udgangsmaterialets carboxylsyre- gruppe eller carboxylsyregrupper til tilsvarende methylester-grupper ved omsætning af carboxylsyren med diazomethan, tri= methylsilyldiazomethan eller l-methyl-3-p-tolyltriazen. Reaktionen gennemføres fortrinsvis i nærværelse af et opløsnings-15 middel, hvis karakter ikke er afgørende, forudsat at det ikke påvirker reaktionen negativt, og at det i det mindste i nogen grad opløser udgangsmaterialet. Vandig acetone eller vandig dimethylformamid foretrækkes.

20 Reaktionstemperaturen er ikke særlig afgørende, og en tem peratur fra 0°C til omgivelsernes temperatur foretrækkes.

Den til reaktionen nødvendige tid vil variere, afhængigt af arten af reagenserne og reaktionstemperaturen. En periode fra 1 til 10 timer vil imidlertid normalt være tilstrækkelig.

25 (c) Forestring til en lavere alkylester.

Ved denne proces omdannes carboxylsyreudgangsmaterialet til den tilsvarende lavere alkylester ved behandling af et blandet 3 0 syreanhydrid.

Det blandede syreanhydrid vil normalt blive fremstillet ved omsætning af en lavere alkohol (såsom methanol, ethanol eller propanol, eller anden alkohol, hvis estere ønskes fremstillet) 35 med et konventionelt reagens, såsom benzoylchlorid eller chlor= ethylcarbonat.

42

DK 166323 B

Reaktionen gennemføres fortrinsvis i nærværelse af et opløsningsmiddel, hvis karakter ikke er afgørende, forudsat at det ikke påvirker reaktionen negativt. Almindeligvis foretrækkes det som opløsningsmiddel at anvende den alkohol, hvis 5 ester skal fremstilles.

Reaktionstemperaturen er ikke særlig afgørende og kan passende ligge i intervallet fra -20°C til 100°C, men for at undgå bireaktioner foretrækkes en temperatur fra -10°C til 10 omgivelsernes temperatur. Hvor lang tid, reaktionen tager, vil afhænge af arten af reagenserne og af reaktionstemperaturen. Hvor reaktionen f.eks. gennemføres ved omgivelsernes temperatur, vil den normalt tage ca. 15 timer.

15 (2) Acyleringsproces.

(a) Fuldstændig acylering (trin 2 og 23).

Ved denne proces acyleres i alle stillinger, hvor acylering 20 er mulig. Udgangsmaterialet omsættes med et konventionelt acyleringsmiddel, f.eks. et syrehalogenid (såsom acetylchlorid, butyrylchlorid, palmitoylchlorid eller benzoylchlorid), eller et syreanhydrid (såsom eddikesyreanhydrid eller benzoesyrean= hydrid). Reaktionen gennemføres fortrinsvis i nærværelse af 25 et syrebindende middel, såsom triethylamin eller pyridin.

Reaktionen gennemføres fortrinsvis i nærværelse af et opløsningsmiddel, hvis karakter ikke er afgørende,, forudsat at det ikke påvirker reaktionen negativt. Hvor der anvendes pyridin 30 som syrebindende middel, anvendes det sædvanligvis i et til- Γ strækkeligt overskud til, at det også kan fungere som reak tionsopløsningsmiddel .

Reaktionstemperaturen er ikke særlig afgørende, og det fore-35 trækkes at gennemføre reaktionen ved en temperatur i inter vallet fra 0°C til omgivelsernes temperatur. Hvor lang tid,

DK 166323B

43 reaktionen tager, vil variere afhængigt af reaktionstemperaturen og arten af reagenserne, men fra 1 til 15 timer vil normalt være tilstrækkeligt.

5 (b) Partiel acylering (trin 6).

Ved denne proces acyleres hydroxygrupperne, men fortrinsvis g ikke gruppen ved N -stillingen, ved omsætning af udgangsmaterialet med et egnet acyleringsmiddel. Acyleringsmidlet er 10 fortrinsvis et syreanhydridfog arten heraf afhænger af den acylgruppe, som ønskes indført, og reaktionen gennemføres i nærværelse af uorganisk carbonat (såsom kaliumcarbonat) som syrebindende middel.

15 Reaktionen gennemføres fortrinsvis i nærværelse af et opløsningsmiddel, hvis karakter ikke er afgørende, forudsat at det ikke påvirker reaktionen negativt. En lavere keton, såsom acetone, foretrækkes.

20 Reaktionstemperaturen er ikke særlig afgørende, selv om en temperatur fra 0 til 100°C foretrækkes. Reaktionen gennemføres normalt nær ved opløsningsmidlets kogepunkt. Hvor lang tid reaktionen tager, afhænger af reagenserne, reaktionstem-peraturen og opløsningsmidlet. Hvor der anvendes acetone som 25 opløsningsmiddel, og reaktionen gennemføres under tilbagesvaling, vil f.eks. reaktionen normalt tage fra 5 til 20 timer.

(c) Partiel acylering (trin 9).

30 Ved denne proces acyleres kun hydroxygruppen ved 2'-stillingen. Dette opnås ved langsom tilsætning af en base (såsom natrium= hydroxid) til reaktionsopløsningen, indtil pH-værdien når en værdi i intervallet fra 10 til 13. Acyleringsmidlet (som kan være et hvilket som helst af de ovenfor beskrevne) til-35 sættes derpå. Alternativt opløses udgangsmaterialet i en pufferopløsning med pH 10 - 13, hvorefter acyleringsmidlet tilsættes .

44

DK 166323 B

Reaktionen gennemføres fortrinsvis i nærværelse af et opløsningsmiddel, hvis karakter ikke er afgørende, forudsat at det ikke påvirker reaktionen negativt. Til nogle formål kan man foretrække et opløsningsmiddel, som ikke kan blandes med 5 vand. Det foretrækkes normalt at anvende en blanding af ethyl= acetat og vand.

Reaktionstemperaturen er ikke særlig afgørende, men det foretrækkes normalt at gennemføre reaktionen ved en temperatur fra -20°C til +50°C. Den temperatur, der opnås ved iskøling, foretrækkes især. Den nødvendige reaktionstid vil variere, afhængig af arten af reagenserne og reaktionstemperaturen.

Ved temperaturer mellem temperaturen ved iskøling og omgivelsernes temperatur vil f.eks. en periode fra 1 til 10 timer 15 normalt være tilstrækkeligt.

(3) Esterhydrolyse.

(a) Hydrolyse af benzhydrylesteren (trin 3, 7, 12, 15, 19, 20 30, 36, 41, 46, 53 og 59).

Ved denne proces fjérnes benzhydrylgrupper, der tjener som carboxybeskyttelsesgrupper, ved syrning. Den anvendte syre er fortrinsvis trifluoreddikesyre. Reaktionen foregår for-25 trinsvis i nærværelse af et opløsningsmiddel, hvis karakter ikke er afgørende, forudsat at det ikke påvirker reaktionen negativt. Aromatiske hydrocarbonopløsningsmidler (såsom anisol) foretrækkes, da de muliggør, at reaktionen forløber glat uden bireaktioner.

30

Reaktionstemperaturen er ikke særlig afgørende, selv om en temperatur i intervallet fra -20°C til +50°C foretrækkes, især en temperatur fra 0°C til omgivelsernes temperatur. Den til reaktionen krævede tid vil variere afhængigt af reagen-55 serne og af reaktionstemperaturen, men ved f.eks. stuetem peratur vil en periode fra 1 til 20 timer normalt være tilstrækkelig.

DK 166323B

45 (b) Hydrolyse af alkylestere (trin 14+15, 18+19, 26, 30, 36, 41, 46, 53 og 59).

Ved denne proces hydrolyseres den lavere alkylester, af hvil-5 ken den lavere alkylgruppe fungerer som carboxybeskyttelses gruppe, under basiske betingelser. Hvor udgangsmaterialet også indeholder en acyloxygruppe, kan denne ligeledes hydrolyseres til den fri hydroxygruppe. Reaktionen gennemføres fortrinsvis i et vandigt medium, fortrinsvis ved anvendelse 10 af en vandig opløsning af en base, f.eks. vandig natrium= hydroxid, hensigtsmæssigt ved en IN koncentration.

Reaktionstemperaturen er ikke særlig afgørende;og det foretrækkes almindeligvis at gennemføre reaktionen ved omkring 15 stuetemperatur, ved hvilken temperatur reaktionen tager fra 1 til 15 timer.

(4) Deacy1erinq.

20 (a) Fuldstændig deacylerinq (trin 14, 18, 30 og 36).

Ved denne proces omdannes acyloxygrupper til hydroxygrupper. Hvis carboxylsyregrupperne i udgangsmaterialet ikke er beskyttede eller er blevet omdannet til alkylestergrupper, er 25 reaktionstemperaturen og reaktionstiden ikke særlig afgørende.

Hvis en vandig base (såsom IN vandig natriumhydroxid) anvendes, fjernes acylgrupperne,og estrene hydrolyseres samtidigt som ved proces (3). Hvor imidlertid carboxylsyregrupperne i udgangsmaterialet er beskyttet med benzhydrylgrupper, foretræk-30 kes det at gennemføre reaktionen under anvendelse af en me= thanolisk opløsning af ammoniak (fortrinsvis ca. 20% vægt/ volumen) under iskøling i en periode fra 10 til 100 minutter. Dette vil fjerne acylgrupper fra acyloxygrupper, men vil bevare benzhydrylgrupperne intakte.

35 (b) Partiel deacylerinq (trin 8 og 13).

Ved denne proces fjernes en acyloxygruppe ved 2'-stillingen 46

DK 166323 B

I af udgangsmaterialet, men andre acylgrupper forbliver intakte.

Det anvendte reagens er methanolisk ammoniak, hensigtsmæssigt ved en koncentration på ca. 20% vægt volumen, og dette vil hensigtsmæssigt tjene som reaktionsopløsningsmiddel. Tempera-5 turen er ikke særlig afgørende, men er fortrinsvis i inter vallet fra -30°C til +50°C. En temperatur fra 0°C til omgivelsernes temperatur foretrækkes almindeligvis. Den til reaktionen nødvendige tid afhænger af reagenserne og reaktionstemperaturen, men en periode fra 10 til 200 minutter vil nor-10 malt være tilstrækkelig.

(c) Partiel deacylering (trin 5).

Ved denne proces har udgangsmaterialet acylgrupper ved N^- 15 stillingen såvel som ved 2'- og 7'-stillingerne. Acylgrupper- ne ved 2'- og 7'-stillingerne skal fjernes, men acylgruppen 6 ved N -stillingen skal forblive intakt. I dette tilfælde er det anvendte reagens fortrinsvis en alkalisk opløsning som ikke er tilstrækkelig basisk til at frigøre en aminogruppe

C

20 fra amidogruppen ved N -stillingen, og IN vandig natriumhy= droxid anvendes fortrinsvis. Reaktionstemperaturen er ikke særlig afgørende, og reaktionen gennemføres fortrinsvis ved omgivelsernes temperatur, i hvilket tilfælde der normalt kræves en periode fra 10 til 20 timer.

25 (5) Alkylerinq (trin 10, 11, 16 og 17).

Ved denne proces alkyleres eller aralkyleres N^-stillingen af udgangsmaterialet, medens carboxylsyregrupperne og hy= 30 droxygrupperne er beskyttede eller ubeskyttede. Det anvendte reagens er fortrinsvis et alkylhalogenid (såsom methyljodid eller ethylbromid) eller et aralkylhalogenid (såsom benzyl= bromid eller phenacylbromid). I nogle tilfælde kan det være ønskeligt at anvende et carbonat (f.eks. kaliumcarbonat) som 3 5 syrebindende middel.

DK 166323B

47

Reaktionen gennemføres fortrinsvis i nærværelse af et opløsningsmiddel, hvis karakter ikke er afgørende, forudsat at det ikke har nogen negativ virkning på reaktionen. Et polært opløsningsmiddel, såsom dimethylformamid, foretrækkes.

5

Reaktionstemperaturen vil afhænge af reagensernes karakter.

Når der anvendes en forbindelse med ubeskyttede carboxylsyre-og hydroxygrupper, gennemføres reaktionen fortrinsvis ved omgivelsernes temperatur. Hvor disse grupper er beskyttede, XO er på den anden side reaktionstemperaturen normalt ca. 70°C.

. Den krævede reaktionstid vil naturligvis ligeledes være af hængig af reagenserne og vil også være afhængig af reaktionstemperaturen. Ved omgivelsernes temperatur vil reaktionen normalt tage fra 1 til 7 dage, medens reaktionen ved 70°C 15 normalt vil tage fra 1 til 20 timer.

(6) Deaminering (trin 20, 21, 37, 55 og 62).

Ved denne proces omdannes aminogruppen ved 6-stillingen i 20 udgangsmaterialet til en hydroxygruppe. Det anvendte reagens -= er fortrinsvis et nitrit (såsom natriumnitrit) og anvendes fortrinsvis under sure betingelser. Surhedsgraden fremkaldes fortrinsvis ved hjælp af eddikesyre, og reaktionsopløsningsmidlet er så fortrinsvis vandig eddikesyre. Hvis udgangsma-25 terialet kun vanskeligt opløses, kan en eddikesyrepufferopløsning med pH-værdi 4 være mere fortrukket. Reaktionstemperaturen ligger fortrinsvis i intervallet fra 0°C til omgivelsernes temperatur og den nødvendige reaktionstid vil normalt variere fra 10 til 50 timer.

30 (7) Halogenerinq ved 6-stillinqen (trin 24).

Ved denne proces halogeneres hydroxygruppen ved udgangsmaterialets 6-stilling, medens de resterende hydroxygrupper 35 og carboxygrupperne er passende beskyttede. Halogenerings- midlet er ikke særligt afgørende, og et hvilket som helst middel, som normalt anvendes til halogenering af hydroxygrup- 48

DK 166323 B

per i en heterocyklisk forbindelse, kan anvendes ved denne proces. Det foretrækkes at anvende phosphoroxychlorid eller phosphorbromid. Nærværelsen af et syrebindende middel kan have en katalytisk virkning,.og egnede midler af denne art 5 er aromatiske, tertiære aminer (såsom diethylanilin eller dimethylanilin) eller alifatiske, tertiære aminer (såsom tri= ethylamin).

Reaktionen gennemføres fortrinsvis i nærværelse af et opløs-10 ningsmiddel, hvis karakter ikke er afgørende, forudsat at det ikke påvirker reaktionen negativt. Halogeneringsmidlet selv kan almindeligvis tjene som reaktionsopløsningsmiddel/ og det samme gælder det syrebindende middel. I nogle tilfælde ' kan imidlertid en ester (såsom ethylacetat) anvendes som op-15 løsningsmiddel sammen med et overskud af halogeneringsmidlet.

Reaktionen gennemføres fortrinsvis ved opløsningsmidlets kogepunkt. Den nødvendige reaktionstid vil variere afhængig af reagenserne og reaktionstiden. Med phosphoroxychlorid som halogeneringsmiddel vil f.eks. en periode fra 10 minutter 20 til 5 timer normalt være tilstrækkelig.

(8) Substitution ved 6- eller 8-stillingen (trin 25, 51 og 57).

25 Ved denne proces fremstilles et griseolsyrederivat med en ønsket substituent ved 6- eller 8-stillingen ved omsætning af et tilsvarende derivat (hvori aminogruppen ved 6-stillingen er blevet erstattet med et halogenatom og som har et halogenatom ved 8-stillingen) med en af forskellige typer af nucleo-30 file midler. Egnede midler af denne art omfatter natrium= ” methoxid, natriumhydrosulfid, natriumazid, hydrazin, methylamin, dimethylamin, j8-hydroxyethylamin, benzylamin, naphthylamin, piperidin eller morpholin. Når der anvendes en amin som det nucleofile middel, vil reaktionen normalt forløbe glat under 35 anvendelse af et overskud af aminen, og et syrebindende middel er ikke nødvendigt. Et hvilket som helst andet nucleofilt middel end en amin vil imidlertid normalt kræve nærværelsen 49

DK 166323 B

af et syrebindende middel (således som de, der er eksemplificeret ved de foregående processer), forudsat at det ikke selv fungerer som et nucleofilt middel.

5 Reaktionen gennemføres fortrinsvis i nærværelse af et opløs ningsmiddel, hvis karakter ikke er afgørende, forudsat at det ikke påvirker reaktionen negativt. En lavere alkohol, såsom methanol eller ethanol og dimethylformamid, foretrækkes .

10

Reaktionstemperaturen er ikke særlig afgørende, og en temperatur fra omgivelsernes temperatur til opløsningsmidlets kogepunkt anvendes fortrinsvis. Den nødvendige reaktionstid vil afhænge af det nucleofile middel og reaktionstemperaturen.

15 Reaktion ved omgivelsernes temperatur vil f.eks. normalt kræve ca. 20 timer, medens reaktion ved opløsningsmidlets kogepunkt normalt vil kræve ca. 6 timer.

(9) Pyranylering (trin 31).

20

Ved denne proces indføres en pyranylgruppe på udgangsmaterialets hydroxygruppe. Det foretrukne reagens er 3,4-dihydropyran,· og reaktionen gennemføres fortrinsvis i nærværelse af en sur katalysator, såsom saltsyre. Reaktionen gennemføres også for-25 trinsvis i nærværelse af et opløsningsmiddel, hvis karakter ikke er afgørende, forudsat at det ikke påvirker reaktionen negativt. Egnede opløsningsmidler omfatter chloroform, ethyl= acetat, dioxan og dimethylformamid. Reaktionstemperaturen er ikke særlig afgørende, og omgivelsernes temperatur fore-30 trækkes. Reaktionen vil normalt tage fra 1 til 20 timer.

(10) Silylering (trin 31).

Ved denne proces indføres en trialkylsilylgruppe (f.eks. t-35 butyl-dimethylsilylgruppen) på hydroxygruppen ved O -stil lingen. Silyleringsmidlet er fortrinsvis et trialkylsilyl= halogenid (f.eks. t-butyl-dimethylsilylchlorid), og reaktionen 50

DK 166323 B

; gennemføres fortrinsvis i nærværelse af en katalysator, såsom imidazol. Reaktionsopløsningsmidlet er fortrinsvis et polært opløsningsmiddel, såsom dimethylformamid. Reaktionen gennemføres fortrinsvis ved omgivelsernes temperatur, og ved denne tem-5 peratur er den nødvendige reaktionstid normalt fra 2 til 30 7 timer.

(11) Hydrolyse af estere (trin 32).

10 ved denne proces hydrolyseres alle estergrupper fuldstændigt, bortset fra beskyttelsesgruppen ved 7'-stillingen, som er stabil under basiske betingelser. Hydrolysen opnås fortrinsvis under anvendelse af en IN vandig hydroxidopløsning ved stuetemperatur'i 1-15 timer.

15 (12) Sulfonylering (trin 28 og 34).

Ved denne proces sulfonyleres hydroxygrupperne ved 2'- og 7'-stillingerne i udgangsmaterialet selektivt eller samtidigt.

20 Reaktionen gennemføres fortrinsvis under anvendelse af et sulfonylhalogenid, såsom methansulfonylchlorid, p-toluensul= fonylchlorid eller trifluormethansulfonylchlorid,som sulfo= nyleringsmiddel.Reaktionen gennemføres fortrinsvis i nærværelse af et syrebindende middel (såsom pyridin eller dimethylamino= 25 pyridin) og i nærværelse af et opløsningsmiddel. Opløsnings-7 midlet er ikke afgørende, forudsat at det ikke indvirker på reaktionen. Methylenchlorid og chloroform foretrækkes.

Reaktionstemperaturen er ikke særlig afgørende, men en tem-30 peratur fra -10°C til omgivelsernes temperatur foretrækkes.

7 ' Den nødvendige reaktionstid vil variere afhængigt af reagenserne og reaktionstemperaturen, men en periode fra 1 til 20 timer vil normalt være tilstrækkelig.

35 (13) Substitution ved 2'- eller 7'-stillingen (trin 29 og 35).

Ved denne proces erstattes sulfonylgruppen ved 2'- eller 7'- 51

DK 166323 B

stillingen med et passende nucleofilt middel, som nævnt ovenfor ved proces (8). Hvor der anvendes en amin som det nucleo-file middel, anvendes det fortrinsvis i overskud. Hvor det nucleofile middel ikke er en amin, foretrækkes nærværelsen 5 af et egnet syrebindende middel (såsom pyridin, triethylamin, kaliumcarbonat eller natriumcarbonat).

Reaktionen gennemføres fortrinsvis i nærværelse af et opløsningsmiddel, hvis karakter ikke er afgørende, forudsat at 10 det ikke påvirker reaktionen negativt. Et polært opløsnings middel, såsom dimethylformamid, dimethylsulfoxid, hexamethyl= phosphortriamid eller triethylphosphat, foretrækkes især.

15 Reaktionstemperaturen vil variere afhængig af de anvendte reagenser og opløsningsmidler, men den er normalt ikke særlig afgørende, og en temperatur i intervallet fra 0 til 150°C foretrækkes. Hvor et trifluormethansulfonylderivat er udgangsmaterialet og hexamethylphosphortriamid er opløsningsmidlet, 20 foretrækkes omgivelsernes temperatur. Den nødvendige reak tionstid vil variere afhængig af reagenserne og reaktionstemperaturen. Reaktionen i hexamethylphosphortriamid, som nævnt ovenfor, vil imidlertid normalt tage fra 1 til 100 timer ved omgivelsernes temperatur. Forbindelser, som har en azido-25 gruppe, et chloratom eller et bromatom ved 2'- eller 7'-stil lingen, kan reduceres til de tilsvarende forbindelse med en aminogruppe eller et hydrogenatom i denne stilling.

(14) Saltdannelsesproces (trin 4).

30

Ved denne proces fremstilles et alkalimetalsalt på sædvanlig måde. Carboxylsyreudgangsmaterialet opløses i et vandigt organisk opløsningsmiddel (såsom en blanding af vand og ethyl= acetat). Hertil sættes en opløsning af et alkalimetalcarbo-35 nat eller -bicarbonat (såsom vandig opløsning af bicarbonat eller af kaliumcarbonat). Dette sker fortrinsvis ved en temperatur fra 0°C til omgivelsernes temperatur. Ved indstilling 52

DK 166323 B

af pH-værdien til en værdi nær det neutrale (pH 7), dannes der et bundfald af det ønskede salt/ og dette kan filtreres fra.

5 (15) Indføring af en carboxylsyre over dobbeltbindingen (trin 38 og 42).

Ved denne proces indføres en carboxylsyre/ hvis karakter vil afhænge af karakteren af gruppen, som ønskes indført, over 10 dobbeltbindingen mellem 4'- og 5'-stillingerne i griseolsyre.

Reaktionen gennemføres fortrinsvis i nærværelse af et opløsningsmiddel, hvis art ikke er afgørende, forudsat at det er i stand til i det mindste i en vis udstrækning at opløse begge reagenser og under forudsætning af, at det ikke påvirker 15 reaktionen. Hvor der anvendes en carboxylsyre, såsom eddike syre som reagens, kan dette hensigtsmæssigt tjener som reaktionsopløsningsmiddel .

For at fremme reaktionen, kan der tilsættes en stærk syre 20 (såsom vandfri saltsyre, hydrogenbromidsyre, hydrogenjodid- syre, svovlsyre eller trifluormethansulfonsyre) eller en katalysator (såsom platinoxid) til reaktionsblandingen sammen med carboxylsyren (f.eks. eddikesyre eller propionsyre).

25 Reaktionstemperaturen er ikke særlig afgørende, men en tem peratur i intervallet fra 0°C til 100°C foretrækkes. Den nødvendige reaktionstid vil variere afhængig af reaktionstemperaturen og reagenserne. En reaktionstid fra 1 time til 3 dag vil normalt være tilstrækkelig.

30 (16) Indføring af en hydrogenhaloqenidsyre ved dobbeltbindingen (trin 39 og 43).

Ved denne proces indføres en hydrogenhalogenidsyre over griseol-35 syres dobbeltbinding. Hydrogenhalogenidsyren vil normalt være saltsyre, hydrogenbromidsyre eller hydrogenjodidsyre, afhængigt af hvilket halogenatom, der ønskes indført. Reaktionen 53

DK 166323 B

gennemføres fortrinsvis i nærværelse af et opløsningsmiddel, hvis art ikke er afgørende, forudsat at den ikke påvirker reaktionen negativt. En organisk syre, såsom eddikesyre, foretrækkes. Reaktionstemperaturen er ikke afgørende, og er for-5 trinsvis fra 0°C til omgivelsernes temperatur, selv om op varmning til 80 - 100°C kan være ønskeligt i nogle tilfælde. Den nødvendige reaktionstid vil variere afhængigt af reagenserne, reaktionsopløsningsmidlet og reaktionstemperaturen, men fra 1 til 72 timer vil normalt være tilstrækkeligt.

10 (17) Indføring af et halogenatom og en alkoxygruppe ved · dobbeltbindingen (trin 45).

Ved denne proces indføres en alkoxygruppe og et halogenatom 15 over griseolsyres dobbeltbinding. Reaktionen gennemføres almindeligvis ved at opløse udgangsmaterialet i en alkohol (såsom methanol eller ethanol), der tjener både som reagens og reaktionsopløsningsmiddel, og tilsætning af et haloge-neringsmiddel, såsom fluor, chlor, brom, jod, N-chlorsuccin= 20 imid, N-bromsuccinimid eller N-jodsuccinimid. Reaktionstem peraturen er ikke særlig afgørende, og en temperatur fra 0°C til omkring omgivelsernes temperatur foretrækkes. Den nødvendige reaktionstid vil variere afhængigt af reaktionstemperaturen og reagenserne, men fra 1 til 30 minutter vil normalt 25 være tilstrækkeligt.

(18) Reduktion af haloqenderivater (trin 40 og 44).

Ved denne proces reduceres halogengruppe ved griseolsyrederi-30 vatets 4'-stilling. Det anvendte reagens kan være et hvilket som helst reagens, der normalt anvendes til reduktionen af halogenatomer. Tributyltinhydrid eller zinkpulver foretrækkes .

35 Reaktionen gennemføres normalt i nærværelse af et opløsningsmiddel, men det er ikke særligt afgørende hvilket, forudsat at det ikke påvirker reaktionen negativt. Hvor tributyltin= 54

DK 166323 B

hydrid anvendes som reagens, er opløsningsmidlet fortrinsvis en aromatisk hydrocarbon, såsom benzen, toluen eller xylen.

Hvor zinkpulver anvendes som reagens, foretrækkes en lavere alifatisk carboxylsyre, såsom vandig eddikesyre, eller en 5 alkohol, såsom methanol eller ethanol.

Hvor tributyltinhydrid anvendes, gennemføres reaktionen fortrinsvis nær ved reaktionsopløsningsmidlets kogepunkt. Hvor zinkpulver anvendes, kan reaktionen gennemføres ved en tem-peratur fra omgivelsernes temperatur til 100°C. Den nødvendige reaktionstid varierer ligeledes: hvor tributyltinhydrid anvendes, er det nødvendigt med en periode fra 2 til 10 timer? hvor zinkpulver anvendes, er det nødvendigt med en periode fra 2 til 20 timer.

15 (19) Syntese af 4',7'-anhydroforbindelse (trin 47 og 48).

Ved denne proces fremstilles en forbindelse med et halogenatom ved 5'-stillingen og med en anhydro(ether)binding mel-20 lem 4'- og 7'-stillingerne af et griseolsyrederivat med en 45'-dobbeltbinding. Reaktionen gennemføres ved at bringe udgangsmaterialet i kontakt med et halogen (såsom fluor, chlor, brom eller jod) i en vandig alkalisk opløsning ved en pH-værdi over 12. En egnet base er et alkalimetalhydroxid (såsom natrium-25 hydroxid eller kaliumhydroxid).

Reaktionen gennemføres fortrinsvis i nærværelse af et opløsningsmiddel, normalt vand. Hvor der anvendes et reagens, som er uopløseligt i vand, såsom jod, kan der imidlertid anvendes 30 en blanding af en alkohold (f.eks. methanol) med vand. Reak tionen gennemføres fortrinsvis ved en temperatur fra 0°C til omgivelsernes temperatur, og den nødvendige reaktionstid, som vil variere afhængigt af reagenserne og reaktionstempera-turen, er normalt fra 30 minutter til 6 timer.

35 (20) Halogenering ved 8-stillinqen (trin 49).

Ved denne proces fremstilles et griseolsyrederivat med et 55

DK 166323 B

halogenatom ved 8-stillingen. Det anvendte reagens kan være et hvilket som helst halogeneringsmiddel, der er i stand til at halogenere 8-stillingen af et adeninderivat. Bromvand i en pH-4-pufferopløsning, såsom en 1M acetatpuffer, foretræk-5 kes. Reaktionsopløsningsmidet er fortrinsvis en vandig op løsning med pH 4, og reaktionen gennemføres fortrinsvis ved en temperatur fra 0°C til omkring omgivelsernes temperatur, ved hvilken temperatur den nødvendige reaktionstid normalt er fra 1 til 10 timer.

10 (21) Genindførinq af dobbeltbindingen (trin 52 og 54).

Ved denne proces dannes en dobbeltbinding mellem 4’- og 5'-stillingerne ved omsætning af et 4'a-hydroxy-41,7r-anhydro= 15 griseolsyrederivat med et halogenatom ved 5'-stillingen, enten under sure betingelser eller med zinkpulver.

Hvor halogenatomet ved 5'-stillingen er chlor eller brom, opvarmes udgangsmaterialet under tilbagesvaling med zinkpulver 20 i et vandigt opløsningsmiddel, såsom vandig methanol eller vandig ethanol. Det omsættes alternativt med zinkpulver ved en temperatur fra omgivelsernes temperatur til 80°C i en vandig organis syre, såsom vandig eddikesyre.

25 Hvor halogenatomet ved 5'-stillingen er jod, kan dobbeltbin dingen indføres ved hjælp af den samme proces, som beskrevet i det foregående afsnit vedrørende det tilfælde, hvor halogenatomet er chlor eller brom. Alternativt kan en vandig opløsning af udgangsmaterialet syrnes til en pH-værdi fra 0 til 30 3 og derefter henstilles ved 0 - 60°C i nærværelse eller fra værelse af et uorganisk salt, såsom kaliumjodid eller natrium= hydrogensulfit.

(22) Omdannelse af en azidogruppe til en aminoqruppe (trin 35 58).

Ved denne proces omdannes azidogruppen ved 8-stillingen i

DK 166323B

56 et griseolsyrederivat til en aminogruppe. Reaktionen gennemføres ved at behandle udgangsmaterialet i et middel som omfatter en alkohol (såsom methanol eller ethanol) med hydrogen i nærværelse af en katalysator, såsom palladium-på-carbon.

5 Udgangsmaterialet kan alternativt få lov til at henstå ved stuetemperatur i en organisk base (såsom pyridin) indeholdende hydrogensulfid i et tidsrum fra 10 til 30 timer.

Efter at enhver af de ovennævnte reaktioner er afsluttet, 10 kan den ønskede forbindelse skilles fra reaktionsblandingen på sædvanlig måde. En egnet udvindingsmetode omfatter f.eks.: om nødvendigt vaskning af reaktionsblandingen med vand; af-destillation af opløsningsmidlet under reduceret tryk og derpå rensning af produktet på forskellige sædvanlige måder, 15 såsom omkrystallisation, søjlekromatografi eller præparativ tyndtlagskromatografi.

7'-deoxygriseolsyre kan også fremstilles ved at dyrke en 7'-deoxygriseolsyre-dannende mikroorganisme af slægten Strepto= 20 myces, specielt S. griseoaurantiacus nr. 43894 (FERM P-5223), i et næringssubstrat derfor og derpå udvinde 7'-deoxygriseol= syren fra næringssuppen.

S. griseoaurantiacus nr. 43894 er den mikroorganismestamme, 25 der i den europæiske patentbeskrivelse nr. 29.329 og US pa tentbeskrivelse nr. 4.460.765 er identificeret som SANK 63479, og som den 9. oktober 1979 blev deponeret hos Fermentation Research Institute, Agency of Industrial Science and Technology, Japan, hvor den er tilgængelig under accessionsnummer FERM 30 P-5223.

Som det er velkendt, er egenskaberne af Actinomycetes herunder Streptomycesstammer ikke konstante,og de undergår let mutation både af naturlige årsager og som et resultat af kunstig 35 mutation. Selv om fremstillingen af 7'-deoxygriseolsyre, spe cielt ved dyrkning af den ovenfor identificerede Streptomyces

57 DK 166323 B

griseoaurantiacus-stamme, er beskrevet, er anvendelsen af mutanter af denne organisme og generelt af en hvilken som 5 helst Streptomyces-stamme, som er i stand til at danne 7'- deoxygriseolsyre også mulig.

Dyrkningen af den 7' -deoxygriseolsyre-dannende mikroorganisme kan gennemføres under betingelser, som normalt anvendes til dyrk- ning af Actinomycetes-stammer, f.eks. som beskrevet generelt i US patentskrift nr. 4.460.765. Rystekultur i et flydende medium eller en fast dyrkningsmetode foretrækkes. Væsentlige variationer inden for de nedenfor bredt beskrevne betingelser er imidlertid mulige med henblik på at fremme fremstillingen af enten griseolsyre eller 7'-deoxygriseolsyre i forhold til 15 den anden.

Næringssubstratet eller næringsmediet, der anvendes til dyrkningen, kan være et materiale, som almindeligt anvendes til 2Q dyrkning af Actinomycetes. Det plejer således at indeholder en assimilerbar carbonkilde og en assimilerbar nitrogenkilde. Egnede assimilerbare carbonkilder omfatter: en koncentreret opløsning af en sukker (f.eks. af sucrose og/eller invert-sukker eller en blanding af sucrose med en anden sukker, så-som glucose eller majssirup), stivelse, dextrose, mannitol, fructose, galactose eller rhamnose eller en hvilken som helst kombination eller to eller flere heraf. Nitrogenkilden kan være: en organisk eller uorganisk forbindelse, f.eks. ammonium-chlorid, ammoniumsulfat, urinstof, ammoniumnitrat eller natrium-3Q nitrat, eller naturlige produkter, såsom pepton, kødekstrakt, gærekstrakt, tørgær, levende gær, majsstøbevæske, groftmalet sojabønnemel, sojabønnemel, casaminosyre eller opløselige vegetabilste proteiner. Der kan anvendes en enkelt nitrogenkilde eller en kombination af to eller flere af flere nitrogen-35 kilder. Næringsmediet kan desuden også indeholde uorganiske salte (såsom kaliumchlorid, kaliumcarbonat eller phosphorsyre-salte) eventuelt samme med andre organiske eller uorganiske

DK 166323 B

58 stoffer til fremme af væksten af mikroorganismen eller dens dannelse af 7'-deoxygriseolsyre.

Dyrkningsmetoden kan være en flydende dyrkningsmetode med 5 frem og tilbagegående eller roterende omrystning, eller en fast dyrkningsmetode, idet en dyb-omrøringsdyrkningsmetode især foretrækkes. Selv om mikroorganismen vil udvikle sig inden for et bredt temperaturinterval, foretrækkes det især at gennemføre dyrkningen ved en temperatur fra 20 til 35°C 10 og ved en i alt væsentligt neutral pH-værdi.. Når der anvendes en flydende dyrkningsmetode, gennemføres dyrkningen normalt i en periode fra 48 timer til 120 timer, i hvilket tidsrum 7'-deoxygriseolsyre dannes og akkumuleres i næringssuppen. Dyrkningens fremadskriden kan overvåges,og indholdet af 7'-15 deoxygriseolsyre i suppen bestemmes ved bestemmelse af sup pens enzyminhiberende aktivitet. Efter endt dyb-væskedyrkning, vil kultursuppen almindeligvis udvise en inhiberende aktivitet fra 70 til 85%.

20 Biologisk aktivitet.

Forbindelserne ifølge opfindelsen har forskellige værdifulde farmakologiske virkninger. De udviser således en udpræget evne til at inhibere aktiviteten af PDE, både cAMP PDE og 25 cGMP (cyklisk guanosinmonophosphat) PDE; evnen til at frem me genvindingen af cerebral funktion efter anoxia-fremkaldt hjerneskade; de forbedrer sukker metabolismen og højenergi-phosphatmetabolismen i hjernen hos rotter med cerebral is-kaemia; de gendanner fleksibiliteten af erythrocytter, som 30 er blevet affedtet ved acidosis; de forøger den cerebrale blodstrøm i kaniner; de fremmer gendannelsen af hjernefunktion hos rotter med cerebral iskaemia; og når de kombineres med cancermodvirkende midler eller insulin forøger de disses virkning. Disse aktiviteter er belyst nedenfor.

Forbindelserne ifølge opfindelsen er angivet ved hjælp af numrene, som de fik tildelt i den foregående liste.

35

59 DK 166323 B

Toksicitet.

De undersøgte forbindelser var griseolsyre og forbindelserne nr. 26 og 51 fra listen over forbindelser ifølge opfindelsen 5 som tidligere angivet. Forsøgsdyrene var hanrotter af Fisher- stammen. Rotterne blev anvendt i grupper på 5 til hver forsøg.

Forbindelserne, der afprøvedes, blev givet som en enkelt daglig dosis på 50 mg/kg eller 100 mg/kg i løbet af 4 dage under 10 forsøget.

Ved en dosis på 50 mg/kg udviste alle de 3 undersøgte forbindelser en dødelighed på 0/5 ved forsøgets afslutning (dvs. ingen af de 5 rotter i hver forsøgsgruppe døde). Ved en do-15 sis på 100 mg/kg var dødeligheden,fremkaldt af griseolsyre, 3/5 (0/5 for de to første dage og 3/5 efter tredje dag). Dødeligheden for de to forbindelser ifølge opfindelsen ved 100 mg/kg var 0/5 ved forsøgets afslutning, dvs. ingen dødelighed.

20u

Disse resultater viser,at forbindelserne ifølge opfindelsen sandsynligvis er mindre giftige end griseolsyre.

Phosphodiesterase (PDE) inhiberende aktivitet.

25 34 af forbindelserne ifølge opfindelsen, der identificeret ved hjælp af numrene fra den tidligere anførte liste, blev undersøgt sammen med theophyllin til sammenligning.

30 Undersøgelsen blev gennemført ved anvendelse i alt væsent ligt af metoden ifølge A.L. Pichard og Y.U. Chung [Journal of Biological Chemistry, 251, 5726-5737 (1976)]. En rå enzymatisk opløsning stammende fra rottehjerner blev anvendt som kilde for cAMP PDE.

C-mærket cAMP blev anvendt som substrat. Det blev anvendt 14 35 ,n DK 166323 Β 60 i en 0,2M tris-saltsyrepufferopløsning (pH 8,0) i en mængde, som er tilstrækkelig til at give en slutkoncentration på 0,14 μΜ. "Tris" er tris(hydroxymethylJaminomethan. Substratopløsningen blev blandet med en passende mængde af den forbindelse, 5 der undersøges, opløst i 2 - 5 pdimethylsulfoxid og med 20 μΐ af en sneglegiftopløsning og 40 μΐ af den rå enzymopløsning. Der blev tilsat tilstrækkeligt tris-saltsyr.epuffer til opnåelse af et samlet volumen på 100 μΐ. Blandingen fik lov til at reagere ved 30°C i 20 minutter. Efter afslutningen 10 af dette tidsrum blev reaktionsblandingen behandlet med " Amber lite*' (varemærke) IRP-58 harpiksrog størrelsen af ade-nosinrestradioaktiviteten i produktet blev bestemt. Forsøget blev gennemført ved en række koncentrationer af hver aktiv forbindelse,og heraf blev 50% inhiberingsværdierne (Ij-q) be-15 regnet.

Forsøget blev gentaget bortset fra, at cyklisk guanosinmono= phosphat (cGMP) blev anvendt som substrat i stedet for cAMP. I^Q-værdien mod cGMP PDE blev også beregnet.

20

Resultaterne er vist i tabel 1, hvor I^Q-værdierne er angivet i μιηοΐ.

Tabel 1.

Forbindelse _ , , 25 I (umol) nr.

CAMP PDE cGMP PDE

36 6,8 48 30 37 0,31 2,9 39 33 111 40 3,2 90 41 9,3 243 35 ’ 45 0;6 1,2 46 1,8 0,9 51 0,32 0,13 53 14 1,2 54 19 9,1 61

Tabel 1. (fortsat).

DK 166323 B

Forbindelse l^Cumol) nr.

CAMP PDE cGMP PDE

58 2.0 14 59 31 39 60 5,4 4,8 63 7.4 9,7 81 4,4 13 88 1,5 14,8 124 10 4,9 133 0,14 1,1 135 2,0 4,2 137 3,4 19,0 138 0,14 0,05 140 0,76 2,8 141 0,22 1,05 142 0,15 2,5 143 0,09 4,1 144 0,19 1,1 187 35,0 32 192 30,4 45,8 195 3.9 3,2 i .....................1

Tabel 1 (fortsat).

^2

DK 166323 B

** Forbindelse I (umol) nr.

CAMP PDE cGMP PDE

10 196 2,5 1,7 197 25,0 13,1 247 0,45 6,4 248 3,2 12,7 15 249 0,44 2,8 theophyllin 360,0 196,0 20

Den til sammenligning anvendte kendte forbindelse er theo= phyllin, som man ved inhiberer både cAMP PDE og cGMP PDE og anvendes terapeutisk til dette formål. Den mindst effektive 25 af de afprøvede forbindelser ifølge opfindelsen har en i ^-værdi, som er omtrent en størrelsesorden mindre end den tilsvarende værdi for theophyllin, medens den mest effektive af de afprøvede forbindelser ifølge opfindelsen har I^g-værdi, som er ca. 3-4 størrelsesordenen lavere, hvilket viser, at aktivi-teterne af forbindelserne ifølge opfindelsen som PDE inhibitorer er ekstraordinært kraftige.

Forøget helbredelse for cerebral dysfunktion fremkaldt af iltmangel.

I dette forsøg blev en rottes åndedræt standset i tilstrækkelig lang tid til at dens EEG (elektroencephalograf) spor blev fladt, og det tidsrum, som forløb indtil EEG viste yder- 35

DK 166323 B

63 ~ ligere aktivitet efter at åndedrættet var blevet startet igen, blev bestemt.

Under bedøvelse blev en kanyle indført i luftrøret i en rotte, 5 som allerede havde en elektrode implanteret i skulderen. Rot ten blev immobiliseret ved indgift af pancuroniumbromid, og dens spontane EEG blev optegnet. Efter at rotten var blevet vækket fra bedøvelsen, blev forbindelsen, der undersøges, suspenderet i en vandig opløsning af carboxymethylcellulose 10 indgivet intraperiotonealt til rotten. Under forsøget blev rotten bragt til at ånde kunstigt. 30 minutter efter indgift af forbindelsen, der undersøges, blev det kunstige åndedræt standset i 120 sekunder. Efter at åndedrættet var blevet startet igen, bestemtes det tidsrum,som gik inden EEG var resti-15 tueret (restitutionstid) bestemt.

Der blev gennemført et kontrolforsøg, hvori en carboxymethyl= cellulosesuspension alene blev indgivet uden nogen aktiv forbindelse.

20

Resultaterne er sammenfattet i tabel 2,hvoraf det fremgår, at forbindelsen ifølge opfindelsen væsentligt forbedrer restitutionstiden.

25 Restitutionstiden er angivet i tabel 1 i sekunder, som middel værdien af restitutionstiderne for alle dyrene i den relevante forsøgsgruppe plus eller minus den statistiske fejl.

Tabel 2.

30 . . Aktiv Dosis Antal Restitutionstid forbindelse (mq/kg)_dyr_(sek. )_

Kontrol - 8 20,8+2,5 (ingen)

Forbindelse 10 8 14,5+1,2 nr. 131 30 8 13,8+1,3 (P<0,05) 35

DK 166323 B

64

Virkning på sukker- og højenergiphosphatmetabolisme i hjernen hos rotter med cerebral iskaemia.

Cerebral iskæmia blev fremkaldt i rotter, og sukker- og høj-5 energiphosphatmetabolismen i hjernen blev undersøgt-

Begge carotidarterier i rotterne, der undersøgtes, blev ligateret, og samtidigt blev forbindelsen, der undersøges, indgivet ved intraperitoneal injektion. Mængderne af sukkere 10 og metaboliske produkter deraf (glucose og mælkesyre) og høj- energiphosphat (ATP-adenosintriphosphat) i hjernen blev bestemt ved hjælp af Lowry og Passonneau's metode (A flexible system of enzymatic analysis, Academic Press, New York, 1972). Når forbindelse nr. 131 blev indgivet i en mængde på 1 mg/kg 15 eller 10 mg/kg, blev der observeret en forøgelse i glucose- koncentrationer, en reduktion i mælkesyrekoncentrationer og en forøgelse i ATP-koncentrationer i rotterne med cerebral iskæmia. Dette antyder, at sukker- og højenergiphosphatmetabolismen hos rotterne var blevet genetableret enten delvis 20 eller fuldstændigt.

Virkningen på helbredelse for erythrocytfleksibilitet, reduceret ved acidosis.

25 Fuldt udviklede hanrotter blev anvendt i dette forsøg i grupper med 5 til hvert forsøg. Forbindelsen, der undersøges, blev suspenderet i en vandig opløsning af carboxymethylcellulose og indgivet oralt. To timer efter indgivelsen blev rotterne bedøvet med pentobarbital og en 5 ml blodprøve udtaget fra 30 hjertet. Dens pH-værdi blev indstillet på 5,1,og prøven fik lov at henstå. Flydenheden af erythrocytterne blev bestemt ved en svagt modificeret version af metoden, der er angivet i the Journal of Clinical Pathology, 29, 855-858 (1976). Kontroldyr blev behandlet på tilsvarende måde, bortset fra, at 35 carboxymethylcelluloseopløsningen ikke indeholdt nogen ak tiv forbindelse. Resultaterne er vist i tabel 3. Resultater-

DK 166323 B

65 ne er angivet som middelværdier for hver gruppe plus eller minus den statistiske fejl, og den statistiske signifikans blev beregnet ved sammenligning med kontrolgruppen.

5 Tabel 3.

Aktiv Dosis Blod Samlet antal passerende g forbindelse (mg/kg) pH erythrocytter x 10

Ingen; (a) normalt blod - 7,2 4,00+0,06 (b) kontrol - 5,1 2,40+0,13

Forbindelse 15 nr. 71 50 mg/kg 5,1 3,00+0,16 (P<0,05)

Forbindelse nr. 131 50 mg/kg 5,1 3,30+0,16 20 (P<0,05)

Som det fremgår helt klart af denne tabel, forbedrer forbindelserne ifølge opfindelsen signifikant erythrocytternes flydenhed 2^ eller fluiditet i det syrnede blod.

Forbedring af cerebral blodstrøm.

Forsøgsdyrene var fuldt udviklede rotter, og cerebral blodstrøm-men blev undersøgt ved hjælp af en termoelektrisk kobling i overensstemmelse med Hagiwara et al.'s metode [Folia Phar= macol. Japon., 71, 709-725 (1974)]. Resultaterne er vist i tabel 4. "Forøgelsen i cerebral blodstrøm (Vp)" er udtryk som et forhold med blodstrømmen opnået ved indgift af papa= verin indgivet i en dosis på 1 mg/kg. "Varighed (Tl/2)" er tiden i minutter, som medgår til forøgelsen i cerebral blodstrømmen for at reducere med 1/2.

Tabel 4.

DK 166323 B

66

I - — i " , I I

Aktiv Dosis Forøgelse i Varighed Ændring i , cerebral (t 1/2) blodtryk (rag/kg) blodstrøm (mm. ) (Vp) mm Hg (pascal)

Papaverin 1 1.0 2,4 -7,8 (-1040)

Vincamin 1 1,7 3,2 -2 (-270) 2,5 3,2 2.1 -22 (-2930)

Nicardipin 0,01 3,2 14 -12 (-1600)

Forbindelse i i nr-71 10 3,0 >60 ingen ændring! ί I nr. 133 χο 10 >60 · | ; nr. 138 10 5,5 >60 " | : nr. i4i io 9.2 >60 /

DK 166323 B

67

Resultaterne viser klart, at forbindelserne ifølge opfindelsen forbedrer cerebral-blodstrømmen. Denne forøgelse var langvarig, og det er signifikant, at lægemidlet ikke havde nogen indvirkning på blodtryk, i modsætning til kontrollæge-5 midlerne, som man ved anvendes til dette formål.

Forbedring i blodviskositet.

Forsøgsdyrene var Wistar hanrotter. De blev anvendt i grupper 10 på 5 til hvert forsøg. Rotterne blev bedøvet med pentobarti- tal, og samtidigt blev forbindelsen, der undersøgtes, indgivet oralt i den dosis, der er angivet i tabel 5, i en carboxy-methylcellulosesuspension. Der blev straks foretaget indsnit i nakken, og en blodprøve på 0,5 ml blev udtaget fra halsvenen. 15 Denne prøves viskositet blev bestemt ved hjælp af et rota- tionsviskosimeter.

30 minutter efter oral indgift blev den almindelige halspulsåre ombundet bilateralt. 1 time senere (dvs. 90 minutter efter 20 oral indgift) blev der opsamlet endnu en 0,5 ml blodprøve fra halspulsåren, og blodets viskositet blev bestemt på samme måde.

Middelblodviskositeten hos hvert forsøgsdyr og standardaf-25 vigeisen blev beregnet for hver af de fire forskydningshas tigheder (73,5, 75, 150 og 375 sek. ^) af rotationsviskosi-meteret. Værdierne før underbinding og efter underbinding for hver gruppe (dvs. ændringen over en periode på 60 minutter) blev analyseret ved hjælp af den statistiske t-test.

30 Resultaterne er angivet i tabel 5 som følger: for hver for skydningshastighed, når der ikke blev noteret nogen signifikant forøgelse i blodtryk (P<0,05) mellem værdierne før og efter underbinding, er der angivet et enkelt plustegn (+). Hvis der f.eks. ikke er nogen signifikant viskositetsforskel mellem 35 værdierne før underbinding og efter underbinding ved nogen af de fire forskydningshastigheder, vil resultaterne således

DK 166323 B

68 blive ++++. Parallelt med disse forsøg blev der gennemført et tilsvarende forsøg, bortset fra, at forsøgsdyrene udelukkende fik en carboxymethylcelluloseopløsning uden aktiv forbindelse. Resultaterne for denne forsøgsgruppe viste en sig-5 nifikant forøgelse i blodviskositeten ved hver af de fire forskydningshastigheder.

Som det fremgår af tabel 5 blev der opnået en signifikant forbedring (dvs. stabilisering) af blodviskositet med forbind-10 else nr. 202 ved alle doser, med forbindelse 131 ved en dosis på højst 30 mg/kg og med forbindelse nr. 10 og 54 ved doser på ikke under 50 mg/kg.

Tabel 5.

15 _

Forbindelse Dosis (mg/kg) nr. 10 30 50 100 10 - ++++ ++++ nt 54 nt ++ +++ nt 20 131 nt + +++ +-H-+ 202 + +++ +++ +++ nt betyder ikke afprøvet.

25 Hjernerystelsesforsøg.

Forsøgsforbindelsen, der er suspenderet i en vandig opløsning af carboxymethylcellulose, blev indgivet intraperitonealt til mus. Efter 30 minutters forløb lod man fra en højde på 30 50 cm en vægt på 16 g falde i hovedet på hver mus, og man målte for hver mus det tidsrum, som forløb, før musen fik sin stabilitetsrefleks og spontane bevægelsesaktivitet igen.

Et tilsvarende forsøg blev gennemført som kontrol under an-35 vendelse af carboxymethylcelluloseopløsningen uden nogen aktiv forbindelse.

DK 166323 B

69

Resultaterne er angivet i tabel 6 som middeltiden (i sek.) plus eller minus den statistiske fejl. Der var 20 mus i kontrolgruppen og 17 mus i gruppen,som fik indgivet forbindelsen, der undersøges.

5

Tabel 6.

Forbindelse Dosis Retableringstid (sek.) nr. (mg/kg) Stabilitets- Spontan be- 10 refleks vægelsesak- tivitet.

Ingen - 71,4+29,3 185,9+51,1 (kontrol) 15 202 10 20,9+2,9 72,8+15,7 (P<0,05)

Forbindelserne ifølge opfindelsen kan derfor anvendes som 20 terapeutiske midler mod forskellige cerebral cirkulations sygdomme, såsom cerebral apopleksi sequelae og cerebral infark-tion sequelae, og som hjernemetabolismeaktivatorer, f.eks. til behandlingen af senil dementia eller traumatisk hjerne-infarkt. Forbindelserne ifølge opfindelsen kan indgives oralt 25 eller ikke-oralt (f.eks. ved subkutan eller intramuskulær injektion).

Forbindelserne ifølge opfindelsen kan indgives oralt i form af faste præparater, der om nødvendigt kan indeholde for-30 skellige sædvanlige tilsætninger. Sådanne tilsætninger omfat ter: fortyndingsmidler såsom sukkerstoffer og cellulosepræparater; bindemidler såsom stivelse, gummier og methylcellu-lose; og desintegrationsmidler. Dosen vil variere afhængigt af patientens symptomer, alder og legemsvægt. Når patienten 35 er et voksent menneske, kan en egnet daglig dosis f.eks.

være fra 0,1 til 100 mg af den aktive forbindelse, som kan indgives i en enkelt dosis eller som deldoser.

DK 166323 B

70

Fremstillingen af de forskellige forbindelser ifølge den foreliggende opfindelse er belyst i de efterfølgende eksempler.

Eksempel 1.

5

Dibenzhydrylgriseolat (forbindelse nr. 20).

10 g griseolsyre blev suspenderet i en blanding af 400 ml acetone og 50 ml vand. Hertil blev tilsat en opløsning af 10 15,4 g diphenyldiazomethan i 100 ml acetone, og blandingen blev omrørt i 16 timer ved stuetemperatur. Reaktionsproduktet blev derpå dråbevis sat til 2 liter hexan. Det resulterende pulveragtige stof blev filtreret fra og derpå vasket med 500 ml hexan og tørret ved 55-65°C i 10 timer under et tryk på 15 1-2 mm Hg (100-250 Pa) til opnåelse af et udbytte på 17,95 g (95,6% udbytte) af titelforbindelsen som et hvidt pulver.

Ultraviolet absorptionsspektrum (methanol) 20 λ nm , max 258 (11200).

Kernemagnetisk resonansspektrum (hexadeuteret dimethylsulf= oxid) δ ppm (ppm = dele.per million): 28 4,68 (IH, doublet, J = 6,0.Hz), 4,93 (IH, singlet), 5,27 (IH, doublet, J = 3,0.Hz), 6,35 (IH, doublet af doubletter, J = 3,0 og 6.0Hz), 6,58 (IH, singlet), 2Q 8,18 (IH, singlet), 8,37 (IH, singlet).

Eksempel 2.

35 Dimethylqriseolat (forbindelse nr. 21).

(a) Under anvendelse af diazomethan.

DK 166323B

71 700 mg griseolsyre blev opløst i 100 ml isafkølet dimethylform-amid. En opløsning af 1,0 - 1,2 mmol diazomethan i 1 ml di= ethylether blev derpå sat til den resulterende opløsning under omrøring, indtil blandingen antog en gullig farve. Blandingen 5 henstod derpå til reaktion i 10 minutter. Efter endt reaktion blev eddikesyre sat til reaktionsproduktet,indtil reaktionsproduktet mistede farven. Blandingen blev derpå inddampet til tørhed under reduceret tryk. Det tørrede produkt blev opløst i methanol, og den resulterende opløsning blev fil-10 treret. Filtratet blev inddampet til tørhed under reduceret tryk. Det tørrede produkt blev omkrystalliseret fra vand til dannelse af 540 mg af titelforbindelsen.

(b) Via blandede syreanhydrider.

15 1,14 g griseolsyre blev suspenderet i 20 ml methanol. 1,39 ml benzoylchlorid blev under iskøling sat til opløsningen, som blev henstillet ved stuetemperatur i 16 timer. Opløsningsmidlet blev derpå afdampet under reduceret tryk, og den re-20 suiterende rest blev behandlet med diethylether til dannelse af et hvidt fast stof, som blev filtreret fra og opløst i en ringe mængde vand. Blandingen pH-værdi blev indstillet på 7. Den resulterende blanding blev opbevaret i et køleskab natten over. De udfældede krystaller blev filtreret fra til 25 opnåelse af 1,08 g af den ønskede forbindelse.

Ultraviolet absorptionsspektrum (methanol) λ nm (ε): 30 258 (15600).

Kernemagnetisk resonansspektrum (hexadeuteret dimethylsulf-oxid) δ ppm: 35 4,60 (IH, doublet, J = 6,0 Hz), 4,66 (IH, singlet),

DK 166323B

72 5,12 (IH, doublet, J = 3,0 Hz), 6.06 (IH, doublet af doubletter, J = 3,0 og 6,0Hz), 6,53 (IH, singlet), 8,33 (IH, singlet), 5 8,37 (IH, singlet).

Eksempel 3.

6 21 71

Dibenzhydryl-N ,0 ,0 -triacetylgriseolat (forbindelse nr.

10 13).

1.06 g dibenzhydrylgriseolat (fremstillet som beskrevet i eksempel 1) blev opløst i 10 ml vandfrit pyridin. Hertil blev der under iskøling tilsat 1,13 ml eddikesyreanhydrid. Blan- 15 dingen blev derpå omrørt i 30 minutter under iskøling og der på holdt ved 50°C i 16 timer. Der blev herefter tilsat me= thanol til blandingen under iskøling, og blandingen blev derpå omrørt i 30 minutter. Derefter blev opløsningsmidlet af-destilleret under reduceret tryk. Ethanol og vand blev sat 2 0 til resten og derpå afdestilleret. Denne proces blev gentaget 4 gange, indtil man ikke længere kunne skelne lugten af pyridin. Det resulterende produkt blev derpå opløst i 15 ml ben= zen, og den resulterende opløsning blev lyofiliseret til dannelse af 1,21 g af titelforbindelsen som et råprodukt. Dette 25 gullige pulver kan anvendes som sådant til efterfølgende reak tioner, men en analyseprøve blev opnået ved silicagel søjlekromatografi, idet der som elueringsmiddel blev anvendt me= thylenchlorid indeholdende 1% volumen/volumen methanol.

30 Ultraviolet absorptionsspektrum (methanol) λ nm (ε): max 262 (15400), 280 skulder (7900).

35 Kernemagnetisk resonansspektrum (hexadeuteret dimethylsulf- oxid) 5 ppm: 73

DK 166323 B

5,35 (IH, doublet, J = 3,0 Hz), 5,75 (IH, doublet, J = 6,0 Hz), 5,99 (IH, singlet), 6,49 (IH, doublet af doubletter, J = 3,0 og 6,0. Hz), 5 7,00 (IH, singlet), 8.59 (IH, singlet), 8,65 (IH, singlet).

Eksempel 4.

10 6 2' 7 ’

Dibenzhydryl-N ,0 ,0 -tripropionylgriseolat (forbindelse nr. 10).

Den i eksempel 3 beskrevne fremgangsmåde blev gentaget, bort-15 set fra, at vandfri propionsyre blev anvendt i stedet for eddikesyreanhydrid, og reaktionen blev gennemført ved stuetemperatur til dannelse af den ønskede forbindelse.

Ultraviolet absorptionsspektrum (50% volumen/volumen vandig 20 methanol) λ nm (ε): max 270 (17700).

Kernemagnetisk resonansspektrum (hexadeuteret dimethylsulf= oxid) 5 ppm: 25 5,34 (IH, doublet, J = 3,0! Hz), 5,80 (IH, doublet, J = 6,6.Hz), 6,01 (IH, singlet), 6,52 (IH, doublet af doubletter, J = 3,0 og 6,6Hz), 7,00 (IH, singlet), 8.60 (IH, singlet), 8,69 (IH, singlet).

Eksempel 5.

6 21 7'

Dibenzhydryl-N ,0 ,0 -tributyrylgriseolat (forbindelse nr.

11).

35

DK 166323 B

74

Den i eksempel 3 beskrevne fremgangsmåde blev gentaget, bortset fra, at vandfri smørsyre blev anvendt i stedet for eddike-syreanhydrid, og reaktionen blev gennemført ved stuetemperatur til dannelse af den ønskede forbindelse.

5

Ultraviolet absorptionsspektrum (50% volumen/volumen vandig methanol) λ nm (ε): max 271,5 (17400).

10 Kernemagnetisk resonansspektrum (hexadeuteret dimethylsulf= oxid) δ ppm: 5,33 (IH, doublet, J = 3,0Hz), 5,83 (IH, doublet, J = 6,6Hz), 6,02 (IH, singlet), 15 6,58 (IH, doublet af doubletter, J = 3,0 og 6,6Hz), 7,00 (IH, singlet), 8,61 (IH, singlet), 8,71 (IH, singlet).

2 0 Eksempel 6.

6 6 2' 7'

Dibenzhydryl-N ,N ,0 ,0 -tetrabenzoylgriseolat (forbindelse nr. 1).

25 17,8 g dibenzhydrylgriseolat (fremstillet som beskrevet i eksempel 1) blev opløst i vandfrit pyridin. Til denne opløsning blev der tilsat 18,5 ml benzoylchlorid under iskøling, og blandingen blev holdt ved stuetemperatur i 16 timer, idet den blev beskyttet mod fugtighed. Reaktionsproduktet blev 30 derpå isafkølet og 10 ml vand tilsat. Blandingen blev omrørt ved stuetemperatur i 1 time. Opløsningsmidlet blev derpå aides ti 11 er et under reduceret tryk. Resten blev opløst i en blanding af 100 ml ethylacetat og 50 ml vand, og ethylacetat-laget blev derpå skilt fra. Det fraskilte lag blev vasket 33 med fortyndet saltsyre, vand, en vandig opløsning af natrium- bicarbonat og en vandig mættet opløsning af natriumchlorid i nævnte rækkefølge. Den organiske opløsning blev skilt fra

DK 166323B

75 og tørret over vandfrit magnesiumsulfat. Opløsningsmidlet blev afdestilleret under reduceret tryk til dannelse af en lysegul rest. Denne rest blev opløst i en ringe mængde me= thylenchlorid, hvortil ethanol derpå blev tilsat. Opløsnings-5 midlet blev derpå langsomt afdestilleret under reduceret tryk med et sugeapparat, hvilket giver et gulligt pulverformet stof som rest. Dette stof blev filtreret fra, vasket med ethanol og derpå tørret til dannelse af 9,1 g af titelforbindelsen i form af et gulligt pulver og et udbytte på 92,5%.

10 En analyseprøve blev opnået ved med benzen at lyofilisere produktet, renset ved silicagel søjlekromatografi, elueret med en 10% volumen/volumen opløsning af acetone i benzen.

Ultraviolet absorptionsspektrum (methanol) 15 nm (ε): max 273 (22000).

Kernemagnetisk resonansspektrum (hexadeuteret dimethylsulf= oxid) 5 ppm: 20 5.63 (IH, doublet, J = 3,3Hz), 6,04 (IH, doublet, J = 6,6Hz), 6,13 (IH, singlet), 6.63 (IH, doublet af doubletter, J = 3,0 og 6,6Hz), 25 8,63 (IH, singlet), 8,89 (IH, singlet).

De i eksemplerne 7-13 anførte forbindelser blev opnået på samme måde som beskrevet i eksempel 6, bortset fra, at den 30 tilsvarende forbindelse fra eksempel 1 eller 2 blev valgt som udgangsmateriale, og at det tilsvarende syrechlorid eller syreanhydrid blev valgt i stedet for benzoylchlorid.

Eksempel 7.

Dibenzhydryl-Ν^,Ν^,Ο^ ,Cp -tetra-p-toluoylqriseolat (forbindelse nr. 2).

35

DK 166323 B

76

Ultraviolet absorptionsspektrum (methanol) λ run (ε): max 247 (49700), 275 skulder (32900).

5 Kernemagnetisk resonansspektrum (hexadeuteret dimethylsulf= oxid) 6 ppm: 5,63 (IH, doublet, J = 3,0Hz), 6.00 (IH, doublet, J = 6,0Hz), 10 6,13 (IH, singlet), 6.62 (IH, doublet af doubletter, J = 3,0 og 6,0Hz), 8.63 (IH, singlet), 8.88 (IH, singlet).

15 Eksempel 8.

6 6 21 7 ·

Dibenzhydryl-N ,N ,0 ,0 -tetra-p-chlor-benzoylqriseolat (forbindelse nr. 3).

20 Ultraviolet absorptionsspektrum (methanol) λ run (ε): max 248 (56400), 275 skulder (31700).

Kernemagnetisk resonansspektrum (hexadeuteret dimethylsulf= 25 oxid) δ ppm: 5,70 (IH, doublet, J = 3,0Hz), 6.00 (IH, doublet, J = 6,0Hz), 6,11 (IH, singlet), 30 66,2 (IH, doublet af doubletter, J = 3,0 og 6,0Hz), 7,05 (IH, singlet), 8,68 (IH, singlet), 8.89 (IH, singlet).

35 Eksempel 9.

Dibenzhydryl-N^,N^,Q^ ,Q^ -tetra-p-nitrobenzoylqriseolat (forbindelse nr. 4).

77

DK 166323 B

Ultraviolet absorptionsspektrum (methanol).

Nnax (ε): 261 (57400).

5

Kernemagnetisk resonansspektrum (hexadeuteret dimethylsulf= oxid) 6 ppm: 5,78 (IH, doublet, J = 3,0Hz), 10 6,07 (IH, doublet, J = 6,0Hz), 6,16 (IH, singlet), 6.62 (IH, doublet af doubletter, J = 3,0 og 6,0Hz), 8,75 (IH, singlet), 8.97 (IH, singlet).

15

Eksempel 10.

6 6 21 71

Dibenzhydryl-N ,N ,0 ,0 -tetra-p-anisoylgriseolat (forbindelse nr.5).

20

Ultraviolet absorptionsspektrum (methanol)

Vx nm (ε): 264(53100), 273 (52400), 275 skulder (35000).

25 Kernemagnetisk resonansspektrum (hexadeuteret dimethylsulf= oxid) 6 ppm: 5.64 (IH, doublet, J = 3,0Hz), 5.98 (IH, doublet, J = 6,0Hz), 30 6,11 (IH, singlet), 6.62 (IH, bred multiplet), 8.65 (IH, singlet), 8,85 (IH, singlet).

35

Eksempel 11.

DK 166323 B

78 21 7'

Dimethyl-0 ,0 -diacetylgriseolat (forbindelse nr. 22).

5 Ultraviolet absorptionsspektrum (methanol) λ nm (ε): max 257 (17100).

Kernemagnetisk resonansspektrum (hexadeuteret dimethylsulf= 10 oxid) δ ppm: 5,17 (IH, doublet, J = 3,0Hz), 5,66 (IH, doublet, J = 6,0Hz), 5,73 (IH, singlet), 15 6,31 (IH, doublet af doubletter, J = 3,0 og 6,0Hz), 6,89 (IH, singlet), 8,23 (IH, singlet), 8,36 (IH, singlet).

20 Eksempel 12.

6 21 7'

Dimethyl-N ,0 ,0 -tribenzoylqriseolat (forbindelse nr. 23).

Ultraviolet absorptionsspektrum (50% volumen/volumen vandig 25 methanol) λ__nm (ε): max 230 (48100), 279 (26800).

Kernemagnetisk resonansspektrum (hexadeuteret dimethylsulf= oxid) δ ppm: 30 5.50 (IH, doublet, J = 3,0Hz), 5,82 (IH, singlet), 5,93 (IH, doublet, J = 6,6Hz), 6.51 (IH, doublet af doubletter, J = 3,0 og 6,6Hz), 35 7,10 - 8,30 (16H, multiplet), 8,76 (IH, singlet), 8,88 (IH, singlet).

Eksempel 13.

DK 166323 B

79 6 21 7'

Dimethyl-N ,O ,0 -tri-p-chlorbenzoylqriseolat (forbindelse nr. 24).

5

Ultraviolet absorptionsspektrum (50% volumen/volumen vandig methanol) λ nm (ε): max 246 (48100 ), 279 (29200).

10 Kernemagnetisk resonansspektrum (hexadeuteret dimethylsulf= oxid) δ ppm: 5,52 (IH, doublet, J = 3,0Hz), 5,76 (IH, singlet), 15 5,89 (IH, doublet, J = 6,6Hz), 6,47 (IH, doublet af doubletter, J = 3,0 og 6,6Hz), 7,14 - 8,20 (9H, multiplet), 8,74 (IH, singlet), 8,88 (IH, singlet).

20

Eksempel 14.

2' 0 -benzoylgriseolsyre (forbindelse nr. 36).

25 6,81 g griseolsyre blev opløst i 120 ml af 0,5M vandig opløs ning af trinatriumphosphat. 120 ml ethylacetat blev derpå tilsat. Blandingen blev omrørt og iskølet under tilsætning af 18 ml benzoylchlorid, og blandingen blev derpå omrørt i yderligere 3 timer. Reaktionsproduktet blev overført til en 30 skilletragt, og det vandige lag blev skilt fra, medens det organiske lag blev vasket med 20 ml vand. Det vandige lag og vaskevæskerne blev forenet og vasket med 50 ml ethylacetat. Yderligere 100 ml ethylacetat blev sat til det vandige lag, hvis pH-værdi derpå blev indstillet til en værdi på 2,0 ved 35 tilsætning af koncentreret saltsyre under iskøling. Der dannedes et fast stof, men blandingen henstod natten over i et køleskab. Det faste stof blev derpå filtreret fra og vasket med en ringe mængde vand og derpå tørret til opnåelse af 7,60

DK 166323 B

80 g af titelforbindelsen.

Ultraviolet absorptionsspektrum (methanol) nm (ε): max 5 230 (17600), 257 (16000).

Kernemagnetisk resonansspektrum (hexadeuteret dimethylsulf= oxid) 6 ppm; 10 4,55 (IH, singlet), 5,28 (IH, doublet, J = 3,0Hz), 5,90 (IH, doublet, J = 6,0Hz), 6,41 (IH, doublet af doubletter, J = 3,0 og 6,0Hz), 7,27 (IH, singlet), I5 8,33 (IH, singlet), 8,43 (IH, singlet).

Eksempel 15.

. 21 20 Dibenzhydryl-0 -benzoylqriseolat (forbindelse nr. 19).

Den i eksempel 1 beskrevne fremgangsmåde blev gentaget, bort-2 1 set fra, at O -benzoylgriseolsyre (fremstillet som beskrevet i eksempel 14) blev anvendt i stedet for griseolsyre som ud-25 gangsmateriale til dannelse af titelforbindelsen.

Ultraviolet absorptionsspektrum (methanol).

λ nm (ε): max 30 257 (19000).

Kernemagnetisk resonansspektrum (hexadeuteret dimethylsulf= oxid) δ ppm; 35 4,98 (IH, singlet), 5,25 (IH, doublet, J = 3,0Hz),

DK 166323 B

81 5,93 (IH, doublet, J = 6,0Hz), 6,73 (IH, doublet af doubletter, J = 3,0 og 6,0Hz), 7,04 (IH, singlet), 8,18 (IH, singlet), 5 8,40 (IH, singlet).

De i eksemplerne 16 - 18 anførte forbindelser blev opnået på samme måde som beskrevet i eksempel 6, bortset fra, at den i eksempel 14 beskrevne forbindelse blev valgt som ud-10 gangsmateriale i stedet for forbindelsen fra eksempel 1, og at det tilsvarende syrechlorid eller syreanhydrid blev anvendt i stedet for benzoylchlorid.

Eksempel 16.

15 . 67' 21

Dibenzhydryl-N ,0 -diacetyl-0 -benzoylqriseolat (forbindelse nr. 14).

Ultraviolet absorptionsspektrum (methanol).

20

Nnax nm (ε): 265 (14100).

Kernemagnetisk resonansspektrum (hexadeuteret dimethylsulf= 25 oxid) 6 ppm: 5,43 (IH, doublet, J = 3,0Hz), 5,97 (IH, singlet), 6,02 (IH, doublet, J = 6,0Hz), 30 6,59 (IH, doublet af doubletter, J = 3,0 og 6,0Hz), 8,91 (2H, singlet).

Eksempel 17.

2 · 6 6 71 35 Dibenzhydryl-0 -benzoyl-N ,N ,0 -tri-p-toluoylgriseolat (forbindelse nr. 6).

82

DK 166323 B

Ultraviolet absorptionsspektrum (methanol) λ nm (ε): max 250 skulder (41700), 270 skulder (35300).

5

Kernemagnetisk resonansspektrum (hexadeuteret dimethylsulf= oxid) δ ppm: 5.61 (1J, doublet, J = 3,0Hz), 10 6,03 (IH, doublet, J = 6,0Hz), 6,11 (IH, singlet), 6.62 (lH, doublet af doubletter, J = 3,0 og 6,0Hz), 8.63 (IH, singlet), 8,87 (IH, singlet).

15

Eksempel 18.

667' 21

Dibenzhydryl-N ,N ,0 -tri-p-anisoyl-0 -benzoylqriseolat (forbindelse nr. 7).

20

Ultraviolet absorptionsspektrum (methanol) nm (ε): max 260 skulder (41400), 273 (45200), 290 (38900).

25

Kernemagnetisk resonansspektrum (hexadeuteret dimethylsulf= oxid) δ ppm: 5,60 (IH, doublet, J = 3,0Hz),4 6,03 (IH, doublet, J = 6,0Hz), 30 6,11 (IH, singlet), 6.64 (IH, doublet af doubletter, J = 3,0 og 6,0Hz), 8.65 (IH, singlet), 8,86 (1Ή, singlet).

35

Eksempel 19.

DK 166323 B

83 2' 7 1

Dibenzhydryl-0 ,0 -dibenzoylqriseolat (forbindelse nr. 15).

5 7,11 g dibenzhydrylgriseolat (fremstillet som beskrevet i eksempel 1) blev opløst i 200 ml acetone. 22,6 g vandfri benzoesyre og 27,6 g vandfrit natriumcarbonat blev derpå tilsat, og blandingen blev tilbagesvalet i 7 timer. Uopløselige, uorganiske stoffer blev filtreret fra, og opløsningsmidlet 10 blev destilleret fra filtratet under reduceret tryk til dan nelse af en lysegul karamellignende rest. Denne rest blev renset ved søjlekromatografi under anvendelse af methylen-chlorid indeholdende 1% volumen/volumen methanol som eluerings-middel og en forud pakket silicagelsøjle (Merck). Det rensede 15 produkt blev lyofiliseret til dannelse af 4,3 g af titelfor bindelsen.

Ultraviolet absorptionssektrum (methanol).

20 W ™ (ε)! 257 (19500), 280 skulder (5500). .

Kernemagnetisk resonansspektrum (hexadeuteret dimethylsulf= oxid) δ ppm: 25 5,57 (IH, doublet, J = 3,0Hz), 5,93 (IH, doublet, J = 6,0Hz), 6,16 (IH, singlet), 6,85 (IH, doublet af doubletter, J = 3,0 og 6,0Hz), 30 8,17 (IH, singlet), 8,43 (IH, singlet).

Eksempel 20.

•3 r 2 ' 7 ' J Dibenzhydryl-0 ,0 -diacetylqriseolat (forbindelse nr. 18).

1,37 g dibenzhydrylgriseolat (fremstillet som beskrevet i

DK 166323B

84 eksempel 1) blev suspenderet i 20 ml pyridin. 0,94 ml eddike-syreanhydrid blev tilsat under iskøling, og blandingen blev omrørt, medens den blev beskyttet mod fugtighed. Ethanol blev sat til reaktionsproduktet under iskøling, og blandingen blev 5 omrørt i 30 minutter. Resten, der blev opnået ved at afdestil- lere opløsningsmidlet fra reaktionsproduktet under reduceret tryk, blev opløst i 30 ml chloroform, og opløsningen blev vasket med vand. Det organiske lag blev skilt fra, og opløsningsmidlet afdestilleret under reduceret tryk. Den resul-10 terende rest blev derpå renset ved præparativ tyndtlagskroma tografi under anvendelse af benzen, som indeholder 10% volumen/ volumen methanol/ som fremkaldermiddel og derpå lyofiliseret fra benzen til dannelse af 936 mg af titelforbindelsen i form af et hvidt fast stof.

15

Ultraviolet absorptionsspektrum (methanol) λ nm (ε): max 257 (15400).

20

Kernemagnetisk resonansspektrum (hexadeuteret dimethylsulf= oxid) 5 ppm: 5,28 (IH, doublet, J = 3,0Hz), 25 5,70 (IH, doublet, J = 6,0Hz), 5,98 (IH, singlet), 6,60 (IH, doublet af doubletter, J = 3,0 og 6,0Hz), 6,92 (IH, singlet), 8,13 (IH, singlet), 30 8,35 (IH, singlet).

Eksempel 21.

6 2' 7'

Dinatrrum-N ,0 ,0 -trrbenzoylgriseolat (forbindelse nr.

35 26).

26,2 g dibenzhydryl-Ν^,Ν^,ο^ ,0^ -tetrabenzoylgriseolat (frem- 85

DK 166323 B

stillet som beskrevet i eksempel 6) blev opløst i 52 ml anisol. 52 ml trifluoreddikesyre blev derpå tilsat under iskøling, og blandingen blev omrørt i 4 timer ved stuetemperatur. Opløsningsmidlet blev afdestilleret under reduceret tryk, og 5 resten blev opløst i acetone. Toluen blev sat til acetoneop løsningen og afdestilleret. Denne proces blev gentaget 3 gange. Resten blev opløst i 150 ml acetone, og opløsningen blev langsomt under omrøring hældt i 2,5 liter hexan. Det resulterende bundfald blev filtreret fra, vasket med hexan og tørret til 10 dannelse af 17 g af et hvidt pulver, som blev opløst i en blanding af 350 ml ethylacetat og 60 ml vand og behandlet med aktivt carbon. 8 ækvivalenter natriumbicarbonat, opløst i 90 ml vand, blev tilsat under omrøring til denne opløsning, og blandingen blev omrørt i 2 timer. Det resulterende faste 15 stof blev filtreret fra til dannelse af 17,7 g af titelstof fet i uren form. Dette blev derpå omkrystalliseret fra en blanding af 1 volumendel vand til 8 volumendele acetone under anvendelse af aktivt carbon til dannelse af 15,7 g af titelforbindelsen.

20

Ultraviolet absorptionsspektrum (methanol) nm (ε): max 228 (39800), 277 (24900).

25

Kernemagnetisk resonansspektrum (hexadeuteret dimethylsulf= oxid) 6 ppm: 5,25 (IH, doublet, J = 3,0Hz), 30 5,74 (IH, bred doublet, J = 6,0Hz), 6.47 (IH, singlet), 6.48 (IH, doublet af doubletter, J = 3,0 og 6,0Hz), 6,98 (IH, singlet), 8,85 (2H, singlet).

35

DK 166323 B

86

De i eksemplerne 22-29 anførte forbindelser blev opnået på samme måde som beskrevet i eksempel 21, bortset fra, at forbindelserne, der er angivet i henholdsvis eksemplerne 7, 8, 9, 10, 17, 18, 16 og 5, blev anvendt som udgangsmateriale 5 i stedet for forbindelsen, der er anført i eksempel 6.

Eksempel 22.

6 21 7T

Dinatrium-N ,0 ,0 -tri-p-toluoylqriseolat (forbindelse nr.

10 27).

Ultraviolet absorptionsspektrum (methanol) λ ran (ε): max ' 241 (39100), 279 (27200).

15

Kernemagnetisk resonansspektrum (hexadeuteret dimethylsul£= oxid) δ ppm: 5,22 (IH, bred singlet), 20 5,62 (IH, bred doublet, J = 6,6Hz), 6,04 (IH, singlet), 6,46 (IH, bred multiplet), 6,91 (IH, singlet), 8,76 (2H, singlet).

25

Eksempel 2 3.

6 21 7'

Dinatrium-N ,0 ,0 -tri-^p-chlorbenzoylgriseolat (forbindelse nr. 28).

30

Ultraviolet absorptionsspektrum (methanol) λ ran (ε): max 241 (43000), 278 (21400).

35 Kernemagnetisk resonansspektrum (hexadeuteret dimethylsulf= oxid) δ ppm:

DK 166323 B

87 5,30 (IH, bred singlet), 5,71 (IH, bred doublet), 5,96 (IH, singlet), 6,45 (IH, bred doublet), 5 8,82 (IH, singlet), 8,87 (IH, singlet).

Eksempel 24.

6 21 71 10 Dinatrium-N ,0 ,0 -tri-p-nitrobenzoylqriseolat (forbindelse nr. 29).

Ultraviolet absorptionsspektrum (tetrahydrofuran) λ nm (ε): max 15 262 (35000).

Kernemagnetisk resonansspektrum (hexadeuteret dimethylsulf= oxid) 6 ppm: 20 5,32 (IH, bred singlet), 5,77 (IH, bred multiplet), 6,02 (IH, singlet), 6,48 (IH, bred multiplet), 7,19 (IH, singlet), 25 8,72 (2H, singlet).

Eksempel 25.

6 21 71

Dinatrium-N ,0 ,0 -tri-p-anisoylqriseolat (forbindelse nr.

30 30).

Ultraviolet absorptionsspektrum (methanol) λ nm (ε): max 259 (43800), 273 (39800), 290 skulder (32700).

35

Kernemagnetisk resonansspektrum (hexadeuteret dimethylsulf= oxid) δ ppm:

DK 166323B

88 5,23 (IH, bred singlet), 5,70 (IH, bred doublet), 6,06 (IH, singlet), 6,48 (IH, bred multiplet), 5 8,74 (2H, singlet).

Eksempel 26.

21 67'.

Dinatrium-0 -benzoyl-N ,0 -di-p-toluoylgriseolat (forbindelse 10 nr. 31).

Ultraviolet absorptionsspektrum (methanol) λ ran ( ε) : max 234 (39900), 280 (30900).

15

Kernemagnetisk resonansspektrum (hexadeuteret dimethylsulf= oxid) δ ppm: 5,22 (IH, bred singlet), 20 5,73 (IH, bred doublet), 6,02 (IH, singlet), 6,44 (IH, bred multiplet), 8,82 (2H, singlet).

25 Eksempel 27.

6 71 2’

Dinatrium-N ,0 -di-p-anisoyl-0 -benzoylgriseolat (forbindelse nr. 32).

30 Ultraviolet absorptionsspektrum (methanol) λ ran (ε): max 259 (34100), 284 (36400).

Kernemagnetisk resonansspektrum (hexadeuteret dimethylsulf= 35 oxid) δ ppm:

DK 166323 B

89 5,23 (IH, bred singlet), 5,72 (IH, bred doublet), 6,06 (IH, singlet), 6,46 (IH, bred multiplet), 5 8,79 (2H, singlet).

Eksempel 28.

c 71 o i N ,0 -diacetyl-0 -benzoylgriseolsyre (forbindelse nr. 33).

10

Ultraviolet absorptionsspektrum (methanol) λ nm (ε) : max 210 (31800), 269 (18900), 228 (skulder (20400).

15 Kernemagnetisk resonansspektrum (hexadeuteret dimethylsulf= oxid) δ ppm: 5,20 (IH, doublet, J = 3,0Hz), 5,56 (IH, singlet), 20 5,85 (IH, doublet, J = 6,0Hz), 6,37 (IH, doublet af doubletter, J = 3,0 og 6,0Hz), 7,16 (IH, singlet), 8,70 (IH, singlet), 8,78 (IH, singlet).

25

Eksempel 29.

6 2' 7' N ,0 ,0 -tributyrylgriseolsyre (forbindelse nr. 34).

30 Ultraviolet absorptionsspektrum (50% volumen/volumen vandig methanol) nm (ε): max 272 (17400).

Kernemagnetisk resonansspektrum (hexadeuteret dimethylsulf= oxid) δ ppm:

DK 166323B

90 5,20 (IH, doublet, J = 3,0Hz), 5,72 (IH, singlet), 5,77 (IH, doublet, J = 6,6Hz), 6,26 (IH, doublet af doubletter, J = 3,0 og 6,6Hz), 5 6,94 (IH, singlet), 8,71 (IH, singlet), 8,76 (IH, singlet).

Eksempel 30.

10 6 21 71 N ,0 ,0 -tribenzoylqriseolsyre (forbindelse nr. 131).

6 21 71 5,2 g dinatrium-N ,0 ,0 -tribenzoylgriseolat (fremstillet som beskrevet i eksempel 21) blev suspenderet i en blanding af 300 ml ethylacetat og 180 ml vand, og suspensionen blev omrørt indtil der så at sige ikke længere var noget uopløseligt materiale tilbage deri. Suspensionens pH-værdi blev derpå indstillet på værdien 1,3 med 3N saltsyre under iskøling. Det organiske lag blev skilt fra, vasket med en mættet vandig 20 opløsning af natriumchlorid og tørret over vandfrit magnesium sulfat. Opløsningsmidlet blev derpå afdestilleret, indtil det organiske lag blev kondenseret til 270 ml. 270 ml hexan blev sat til kondensatet, og det resulterende hvide pulveragtige stof blev filtreret fra, vasket med hexan og tørret til op- or 0 naelse af 4,37 g af titelforbindelsen.

Ultraviolet absorptionsspektrum (50% volumen/volumen vandig methanol) nm ( ε) : - λ ΓΓ19.Χ 30 232 (41400), 278 (27700).

Kernemagnetisk resonansspektrum (hexadeuteret dimethylsulf= oxid) δ ppm: 33 5,43 (IH, doublet, J = 3,0Hz), 5,79 (IH, singlet),

DK 166323 B

91 5,92 (IH, doublet, J = 6,0Hz), 6,47 (IH, doublet af doubletter, J = 3,0 og 6,0Hz), 7,10 - 8,20 (16H, multiplet), 8,77 (IH, singlet), 5 8,88 (IH, singlet).

Eksempel 31.

2 ' 7 1 0 ,0 -dibenzoylqriseolsyre (forbindelse nr. 40).

10 2' 71 2,80 g dibenzhydryl-0 ,0 -dibenzoylgriseolat (fremstillet som beskrevet i eksempel 19) blev opløst i 10 ml anisol. 10 ml trifluoreddikesyre blev derpå tilsat under iskøling, og blandingen blev holdt ved stuetemperatur i 1 time. Resten, der blev opnået ved afdestillation af opløsningsmidlet under reduceret tryk, blev opløst i acetone, toluen blev tilsat, og opløsningsmidlet blev derpå afdestilleret. Denne proces blev gentaget 3 gange. Det resulterende gullige karamellignende stof blev opløst i 20 ml acetone, og denne opløsning blev 20 langsomt hældt i 200 ml hexan under omrøring. Blandingen blev derpå omrørt i 30 minutter, og bundfaldet blev filtreret fra. Bundfaldet blev suspenderet i 20 ml af en 5% vægt/volumen vandig opløsning af natriumbicarbonat og 20 ml vand. 50 ml ethylacetat blev tilsat, og blandingens pH-værdi blev justeret 2 S o til en værdi pa 0,5 - 1 ved tilsætning af koncentreret saltsyre for således fuldstændigt af opløse bundfaldet. Denne opløsnings pH-værdi blev derpå indstillet på værdien 2,0 med natriumbicarbonat, og det resulterende hvide krystallinske stof blev filtreret fra og vasket med 100 ml vand og 100 ml 3 0 hexan og derpå tørret til opnåelse af 2,27 g af titelforbindelsen i form af et hvidt pulver

Ultraviolet absorptionsspektrum (methanol) λ nm (ε): max 35 230 (28000), 256 (17700).

DK 166323 B

92

Kernemagnetisk resonansspektrum (hexadeuteret dimethylsulf= oxid) δ ppm: 5,40 (IH, doublet, J = 3,0Hz), 5 5,80 (IH, singlet), 5,87 (IH, doublet, J = 6,0Hz), 6,51 (IH, doublet af doubletter, J = 3,0 og 6,0Hz), 7,15 (IH, singlet), 8,32 (IH, singlet), 10 8,48 (IH, singlet).

Eksempel 32.

2' 7 1 O ,0 -diacetylgriseolsyre (forbindelse nr. 41).

15 2' 71 1,0 g dibenzhydryl-0 ,0 -diacetylgriseolat (fremstillet som beskrevet i eksempel 20) blev opløst i 10 ml anisol - 10 ml trifluoreddikesyre blev derpå tilsat, medens der blev isafkølet, og blandingen blev henstillet i 30 minutter ved stue-20 temperatur. Opløsningsmidlet blev afdestilleret fra produktet under reduceret tryk. Den resulterende rest blev opløst i acetone. Toluen blev sat til opløsningen til ekstraktion og derpå afdestilleret under reduceret tryk. Denne proces blev gentaget 3 gange til dannelse af en lysegul rest. Resten 25 blev opløst i 10 ml acetone, og opløsningen blev langsomt hældt i 250 ml hexan under omrøring. Det resulterende hvide bundfald blev filtreret fra, vasket med hexan og tørret. Bundfaldet blev opløst i 10 ml af en mættet vandig opløsning af natriumbicarbonat under isafkøling. Blandingen blev syrnet 30 med 6N saltsyre, og der dannedes et hvidt bundfald. Ved yderligere tilsætning af saltsyre til en pH-værdi på 0,5 - 1,0, opløstes bundfaldet igen til dannelse af en klar opløsning. Denne klare opløsning blev underkastet en omvendt fasesøjlekromatografi under anvendelse af en forudpakket søjle, Rp-8· 35 (Merck), som blev vasket med vand og derpå elueret med en 10% volumen/volumen vandig opløsning af acetonitril. Hovedspidserne af eluatet blev opsamlet og lyofiliseret til dan

DK 166323 B

93 nelse af 412 mg af titelforbindelse som et lysegult pulver.

Ultraviolet absorptionsspektrum (methanol) λ nm (ε): max 5 257 (15400).

Kernemagnetisk resonansspektrum (hexadeuteret dimethylsulf= oxid) δ ppm: 10 5,64 (2H), 6,24 (IH, doublet af doubletter, J = 3,0 og 6,0Hz), 6,85 (IH, singlet), 8,23 (lH, singlet), 8,37 (IH, singlet).

15

Eksempel 33.

7' 0 -benzoylgriseolsyre (forbindelse nr. 37).

20 1,174 g 0 ,0 -dibenzoylgriseolsyre (fremstillet som beskrevet 1 eksempel 31) blev opløst i en 20% vægt/volumen opløsning af ammoniak i methanol, og opløsningen blev henstillet i 2 timer under isafkøling. Opløsningsmidlet blev derpå afdestilleret under reduceret tryk til dannelse af et hvidt bundfald, 25 som blev suspenderet i en blanding af 30 ml vand og 30 ml diethylether. Koncentreret saltsyre blev sat til denne suspension, indtil dens pH-værdi nåede en værdi inden for intervallet fra 0 til 1. I begyndelsen dannedes et hvidt uopløseligt stof, men dette opløstes imidlertid hurtigt igen. Det 30 vandige lag blev skilt fra, vasket med 30 ml diethylether og derpå overført til et bægerglas, hvortil der var blevet tilsat fast natriumbicarbonat, indtil blandingens pH-værdi nåede en værdi på 2,0. Det resulterende hvide bundfald blev filtreret fra og tørret til dannelse af et hvidt pulveragtigt 35 stof, som blev omkrystalliseret fra vandig acetone til dan nelse af 700 mg af titelforbindelsen som et hvidt pulver.

DK 166323 B

94

Ultraviolet absorptionsspektrum (methanol) λ nm (ε):

III 3.X

216 (31900), 227 (20000), 257 (17500).

5 Kernemagnetisk resonansspektrum (hexadeuteret dimethylsulf= oxid) 5 ppm: 4,71 (IH, doublet, J = 6,0Hz), 5,17 (IH, doublet, J = 3,0Hz), 10 5,59 (IH, singlet), 5,82 (IH, singlet), 6,11 (IH, doublet af doubletter, J = 3,0 og 6,0Hz), 8,26 (IH, singlet), 8,42 (IH, singlet).

15

Eksempel 34.

g N -benzoylqriseolsyre (forbindelse nr. 35).

6 21 71 20 1,47 g dinatrium-N ,0 ,0 -tribenzoylgriseolat (fremstillet som beskrevet i eksempel 21) blev opløst i en IN vandig opløsning af natriumhydroxid, og opløsningen blev henstillet i 15 timer ved stuetemperatur. 30 ml ethylacetat blev derpå tilsat, og opløsningens pH-værdi blev indstillet på værdien 25 2,0 med 2N saltsyre under isafkøling. Den dannedes et uop løseligt bundfald. Blandingen blev omrørt i yderligere 20 minutter. Bundfaldet blev filtreret fra og omkrystalliseret fra vandig acetone til opnåelse af 725 mg af den ønskede forbindelse som lysegule krystaller.

30

Ultraviolet absorptionsspektrum (methanol) λ ran (ε): max 278 (25400).

25 Kernemagnetisk resonansspektrum (hexadeuteret dimethylsulf= oxid: δ ppm:

DK 166323 B

95 4,56 (IH, singlet), 4,72 (IH, doublet, J = 6,0Hz), 5,18 (IH, doublet, J = 3,0Hz), 6,08 (IH, doublet af doubletter, J = 3,0 og 6,0Hz), 5 6,67 (IH, singlet), 8,74 (IH, singlet), 8,87 (IH, singlet).

Eksempel 35.

10 6 7' N ,0 -dibenzoylqriseolsyre (forbindelse nr. 39).

6 21 71 1.7 g dinatrium-N ,0 ,0 -tribenzoylgriseolat (fremstillet som beskrevet i eksempel 21) blev opløst under isafkøling 15 i 17 ml af en 0,5N vandig opløsning af natriumhydroxid, og blandingen blev omrørt i 1 time. Blandingens pH-værdi blev derpå indstillet på værdien 2 med 3N saltsyre, og blandingen blev renset ved omvendt fasekromatografi gennem en forudpak-ket kolonne, Rp-8 (Merck) til opnåelse af 460 mg af titel-20 forbindelsen.

Ultraviolet absorptionsspektrum (50% volumen/volumen vandig methanol) ίε): 25 279 (23200).

Kernemagnetisk resonansspektrum (hexadeuteret dimethylsulf= oxid) 6 ppm: 30 4,76 (IH, doublet, J = 6,0Hz), 5,20 (IH, doublet, J = 3,0Hz), 5.82 (IH, singlet), 6.08 (IH, doublet af doubletter, J = 3,0 og 6,0Hz), 6,69 (IH, singlet), 35 8,73 (IH, singlet), 8.83 (IH, singlet).

Eksempel 36.

DK 166323 B

96 6-desamino-6-hydroxyqriseolsyre (forbindelse nr. 51).

5 5,31 g griseolsyre blev under opvarmning opløst i en 80% vægt/ volumen vandig opløsning af eddikesyre, som derefter blev afkølet til stuetemperatur. 9,60 g natriumnitrit blev derpå tilsat. Luften i beholderen, som indeholdt denne opløsning, blev erstattet med nitrogen, og beholderen blev lukket tæt 10 og henstillet i 16 timer. Opløsningsmidlet blev afdestilleret under reduceret tryk til dannelse af en rest, hvortil ethanol blev tilsat og derpå afdestilleret. Denne proces blev gentaget indtil blandingen ikke længere lugtede af eddikesyre. Resten blev opløst i 50 ml vand, og opløsningens pH-værdi blev ind-15 stillet på 1,0 med koncentreret saltsyre under isafkøling.

Opløsningen blev henstillet i 16 timer i et køleskab, og derpå blev bundfaldet filtreret fra og vasket med en ringe mængde vand. Bundfaldet blev derpå omkrystalliseret fra vandig acetone til opnåelse af 1,66 g af titelforbindelsen. Ved kon-20 densation af moderluden blev der opnået 2,20 g råkrystaller.

Disse råkrystaller blev derpå omkrystalliseret fra vandig acetone til opnåelse af yderligere 1,2 g af titelforbindelsen.

Ultraviolet absorptionsspektrum (^0) 25 λ nm (ε): max 247 (11800), 270 skulder (3700).

Kernemagnetisk resonansspektrum (hexadeuteret dimethylsulf= oxid) δ ppm: 30 4,50 (IH, singlet), 4,57 (IH, doublet, J = 6,0Hz), 5,12 (IH, doublet, J = 3,0Hz), 5,88 (IH, doublet af doubletter, J = 3,0 og 6,0Hz), 35 6,50 (IH, singlet), 8,17 (IH, singlet), 8,33 (IH, singlet).

Eksempel 37.

DK 166323 B

97

Dibenzhydryl-6-desamino-6-hydroxygriseolat (forbindelse nr.

68).

5 (a) Den i eksempel 1 beskrevne fremgangsmåde blev gentaget, bortset fra, at 6-desamino-6-hydroxygriseolsyre (fremstillet som beskrevet i eksempel 36) blev anvendt i stedet for griseol-syre som udgangsmateriale til dannelse af den ønskede for- ^ g bindelse.

(b) 28,5 g dibenzhydrylgriseolat (fremstillet som beskrevet i eksempel 1) blev med nogen opvarmning opløst i 560 ml eddikesyre, hvorpå der blev tilsat 140 ml vand. Oxygenet i reaktions-15 beholderen blev erstattet med nitrogen under isafkøling, og natriumnitrit blev derpå tilsat lidt efter lidt uden omrøring. Blandingen blev henstillet natten over, omhyggeligt indelukket. Vand blev derpå sat til reaktionsproduktet, og opløsningsmidlet blev afdestilleret. Denne proces blev gentaget, 20 og bundfaldet filtreret fra og vasket omhyggeligt med vand til opnåelse af 28,5 g af titelforbindelsen.

Ultraviolet absorptionsspektrum (methanol) λΠΒΧ ™ U): 25 241 (12000), 248 skulder (11300), 270 skulder (4300).

Kernemagnetisk resonansspektrum (hexadeuteret dimethylsulf= oxid) δ ppm: 30 4,60 (IH, doublet, J = 6,0Hz), 4,90 (IH, singlet), 5,31 (IH, doublet, J = 3,0Hz), 6,06 (IH, doublet af doubletter, J = 3,0 og 6,0Hz), 6,53 (IH, singlet), 35 8,06 (IH, singlet),· 8,28 (IH, singlet).

DK 166323 B

98

De i eksemplerne 38 - 42 anførte forbindelser blev opnået på samme måde som beskrevet i eksempel 37 (b), bortset fra, at de eksemplerne henholdsvis 20, 19, 15, 32 og 31 anførte forbindelser blev anvendt i stedet for den i eksempel 1 anførte 5 forbindelse.

Eksempel 38.

2 * 7 i

Dibenzhydryl-0 ,0 -diacetyl-6-desamxno-6-hydroxygrxseolat 10 (forbindelse nr. 71).

Ultraviolet absorptionsspektrum (methanol) λ nm (ε): max 242 (12300), 250 (11100), 270 skulder (4000).

15

Kernemagnetisk resonansspektrum (hexadeuteret dimethylsulf= oxid) δ ppm: 5,35 (IH, doublet, J = 3,0Hz), 20 5,66 (IH, doublet, J = 6,0Hz), 5,97 (IH, singlet), 6,32 (IH, doublet af doubletter, J = 3,0 og 6,0Hz), 6,79 (IH, singlet), 8,00 (IH, singlet), 25 8,29 (IH, singlet).

Eksempel 39.

2' 7'

Dibenzhydryl-0 ,0 -dibenzoyl-6-desam:Lno-6-hydroxyqriseolat 30 (forbindelse nr. 132).

Ultraviolet absorptionsspektrum (50% volumen/volumen vandig methanol) λ nm (ε): Π13ιΧ 35 221 (59900), 270 skulder (11400).

DK 166323 B

99

Kernemagnetisk resonansspektrum (hexadeuteret dimethylsulf= oxid) δ ppm: 5,65 (IH, doublet, J = 3,0Hz), 5 5,89 (IH, doublet, J = 6,8Hz), 6,14 (IH, singlet), 6,53 (IH, doublet af doubletter, J = 3,0 og 6,8Hz), 7,07 (IH, singlet), 8,02 (IH, singlet), 10 8,39 (IH, singlet).

Eksempel 40.

2 1 O -benzoyl-6-desamino-6-hydroxyqriseolsyre (forbindelse nr.

15 126).

Ultraviolet absorptionsspektrum (^0) \nax nm (ε): 239,5 (20000), 274 skulder (3500).

20

Kernemagnetisk resonansspektrum (hexadeuteret dimethylsulf= oxid) δ ppm: 4,40 (IH, singlet), 25 5,23 (IH, doublet, J = 3,0Hz), 5,51 (IH, doublet, J = 6,0Hz), 6.21 (IH, doublet af doubletter, J = 3,0 og 6,0Hz), 7,00 (IH, singlet), 8.22 (IH, singlet), 3° 8,37 (IH, singlet).

Eksempel 41. o > 7 * 0 ,0 -diacetyl-6-desamino-6-hydroxyqriseolsyre (forbindelse 35 nr. 69).

DK 166323 B

100

Ultraviolet absorptionsspektrum (methanol) λ nm (ε): max 242.5 (12000), 248 skulder (11000), 270 skulder (4200).

5 Kernemagnetisk resonansspektrum (hexadeuteret dimethylsulf= oxid) δ ppm: 5.19 (IH, doublet, J = 3,0Hz), 5,63 (IH, doublet, J = 6,0Hz), 10 5,68 (lH, singlet), 6.11 (IH, doublet af doubletter, J = 3,0 og 6,0Hz), 6,87 (IH, singlet), 8.20 (IH, singlet), 8,36 (IH, singlet).

15

Eksempel 42.

2 1 7 1 0 ,0 -dibenzoyl-6-desamino-6-hydroxyqriseolsyre (forbindelse nr. 70).

20

Ultraviolet absorptionsspektrum (50% volumen/volumen vandig methanol + nm (ε): max 234.5 (34100), 274 skulder (5700), 283 skulder (3400).

25

Kernemagnetisk resonansspektrum (hexadeuteret dimethylsulf= oxid) δ ppm: 5,40 (IH, doublet, J = 3,0Hz), 30 5,80 (IH, doublet, J = 6,6Hz), 5,77 (IH, singlet), 6,33 (IH, doublet af doubletter, J = 3,0 og 6,6Hz), 7.12 (IH, singlet), 8.20 (IH, singlet), 3(5 840 (IH, singlet).

Eksempel 43.

DK 166323 B

101 N^-methylqriseolsyre (forbindelse nr. 42).

5 758 mg griseolsyre blev suspenderet i 20 ml dimethylformamid.

2 ml methyl jodid blev under isafkøling tilsat til suspensionen. Blandingen, omhyggeligt indelukket, blev omrørt i 2 dage ved stuetemperatur, hvorpå der blev tilsat ethanol. Opløsningsmidlet blev derpå afdestilleret under reduceret tryk. Denne 10 proces blev gentaget 3 gange. Den resulterende rest blev op løst i 10 ml methanol og 10 ml koncentreret vandig ammoniak, og blandingen blev, omhyggeligt indelukket^ henstillet i 4 timer ved stuetemperatur. Opløsningsmidlet blev afdestilleret under reduceret tryk, og resten blev opløst i en ringe mængde vand. Den resulterende opløsnings pH-værdi blev indstillet på 1 med IN saltsyre, og blandingen blev renset ved omvendt fasekromatografi gennem en forudpakket kolonne, Rp-8 (Merck). Hovedspidserne blev opsamlet og inddampet til tørhed under reduceret tryk. Den resulterende rest blev opløst i den mindst 2 0 mulige mængde methanol, hvortil der var blevet tilsat benzen, og opløsningen blev lyofiliseret til opnåelse af 400 mg af titelforbindelsen i form af et lysegult pulver.

Ultraviolet absorptionsspektrum (methanol) 25 XmaXnmU): 256,5 (14900).

Kernemagnetisk resonansspektrum (hexadeuteret dimethylsulf= oxid) 6 ppm: 30 4,15 (IH, singlet), 4,50 (IH, doublet, J = 6,0Hz), 4,91 (IH, doublet, J = 3,0Hz), 5,75 (IH, doublet af doubletter, J = 3,0 og 6,0Hz), 6,49 (IH, singlet), 8,66 (IH, singlet), 8,71 (IH, singlet).

35

DK 166323 B

102

De i eksemplerne 44 og 45 anførte forbindelser blev opnået på samme måde som i eksempel 43, bortset fra, at benzylbromid blev anvendt i stedet for methyl jodid i eksempel 44/og at 2,4,6-trimethylbenzylbromid og 6-desamino-6-hydroxygriseolsyre 5 (fremstillet som beskrevet i eksempel 36) blev anvendt som udgangsmaterialer i eksempel 45.

Eksempel 44.

10 N^-benzylgriseolsyre (forbindelse nr. 45).

Ultraviolet absorptionsspektrum (50% volumen/volumen vandig methanol) λ nm (ε): max 15 259 (13800).

Kernemagnetisk resonansspektrum (hexadeuteret dimethylsulf= oxid) δ ppm: 20 4,19 (IH, singlet), 4,50 (IH, doublet, J = 6,0Hz), 4,93 (IH, doublet, J = 3,0Hz), 5,74 (IH, doublet af doubletter, J = 3,0 og 6,0Hz), 6,44 (IH, singlet), 25 8,57 (IH, singlet), 8,77 (IH, singlet).

Eksempel 45.

30 e-desamino-e-hydroxy-N'*'- (2,4,6-trimethylbenzvl)griseolsyre (forbindelse nr. 127).

Ultraviolet absorptionsspektrum (methanol) λ nm (ε): max 35 246 (9400), 251 (9200), 267 (5500).

DK 166323 B

103

Kernemagnetisk resonansspektrum (hexadeuteret dimethylsulfoxid) δ ppm: 4,52 (IH, doublet, J = 6,0Hz), 5 4,53 (IH, singlet), 5,12 (IH, doublet, J = 3,0Hz), 5,87 (IH, doublet af doubletter, J = 3,0 & 6,0Hz), 6,47 (IH, singlet), 7,73 (lH, singlet), 10 8,31 (IH, singlet).

Eksempel 46.

Dibenzhydryl-N^-benzylqriseolat (forbindelse nr. 47).

15 1,42 g dibenzhydrylgriseolat (fremstillet som beskrevet i eksempel 1) blev opløst i 10 ml dimethylformamid, hvorpå der under isafkøling blev tilsat 4 ml benzylbromid. Blandingen fik lov til at genantage stuetemperatur og blev derpå henstil-20 let i 5 hele dage. Opløsningsmidlet blev derefter afdestil lér et, og resten blev opløst i acetone. Den resulterende opløsning blev langsomt hældt i hexanrog det opnåede bundfald blev skilt fra og opløst i acetone. Opløsningen blev inddampet til tørhed under reduceret tryk, og resten renset ved sili-25 cagelsøjlekromatografi til dannelse af 850 mg af titelfor bindelsen.

Ultraviolet absorptionsspektrum (50% volumen/volumen vandig methanol) λ nm (ε): max 30 253 skulder (13400), 258,5 (14500), 268 skulder (11100).

Kernemagnetisk resonansspektrum (hexadeuteret dimethylsulf= oxid) δ ppm: 35

DK 166323 B

104 4,60 (IH, doublet, J = 6,6Hz), 4,90 (IH, bred doublet, J = 7,0Hz), 5,20-5,38 (3H, doublet), 6,07 (IH, doublet af doubletter), 5 6,49 (IH, singlet), 8,18 (IH, singlet), 8,21 (IH, singlet).

Eksempel 47.

10 2' 7' 1

Dibenzhydryl-0 ,0 -diacetyl-6-desamino-6-hydroxv-N -(2, 4,6-trimethylbenzyl)qriseolat (forbindelse nr. 129).

Den i eksempel 46 beskrevne fremgangsmåde blev gentaget, bortset 2 f j 20 fra, at dibenzhydryl-Cr ,0 -diacetyl-6-hydroxygriseolat (frem stillet som beskrevet i eksempel 38) og 2,4,6-trimethylbenzyl= bromid blev anvendt som udgangsmaterialer til opnåelse af titelforbindelsen.

25 Ultraviolet absorptionssepktrum (methanol) λ run ( ε ) : max 244 (16200), 250 (15000), 267 (9600).

30

Kernemagnetisk resonansspektrum (hexadeuteret dimethylsulf= oxid) δ ppm: 5,28 (IH, doublet, J = 2,6Hz), 35 5,62 (IH, doublet, J = 6,0Hz), 5,97 .(IH, singlet), 6,38 (IH, doublet af doubletter, J = 2,6 & 6,0Hz), 6,94 (IH, singlet), 7,58 (IH, singlet), 8,37 (IH, singlet).

Eksempel 48.

DK 166323 B

105 7' 1 O -acetyl-N -methylgriseolsyre (forbindelse nr. 43).

5 771 mg dibenzhydryl-0 ,0 -diacetylgriseolsyre (fremstil let som beskrevet i eksempel 20) blev opløst i 10 ml dimethyl= formamid. 1 ml methyljodid blev sat til denne opløsning, og blandingen blev henstillet i 2 dage ved stuetemperatur i en omhyggeligt lukket beholder. Opløsningsmidlet blev derpå af-10 destilleret under reduceret tryk, og resten blev opløst i toluen. Denne rækkefølge af destillation og opløsning blev gentaget 3 gange, og den resulterende rest blev renset ved normal fase-søjlekromatografi under anvendelse af en Merck forudpakket kolonne. Spidserne, som indeholdt den ønskede 15 forbindelse, blev lyofiliseret fra benzen til opnåelse af 850 mg af et lyst gulligt pulver.

639 mg af dette pulver blev opløst i 5 ml anisol, hvorpå der under isafkøling blev tilsat 10 ml trifluoreddikesyre. Blan-20 dingen fik lov til at henstå i 30 minutter ved stuetemperatur.

Opløsningsmidlet blev derpå afdestilleret under reduceret tryk, og toluen blev sat til resten og derpå afdestilleret. Denne proces blev gentaget 3 gange. Resten blev opløst i en blanding af chloroform og vand. Det vandige lag blev skilt 25 fra, vasket med chloroform og derpå inddampet til tørhed under reduceret tryk til opnåelse af et klart og farveløst karamellignende stof. Dette stof blev opløst i 20 ml af en 20% vægt/ volumen opløsning af ammoniak i methanol, og opløsningen fik lov til at henstå i 30 minutter ved stuetemperatur. Opløs-30 ningsmidlet blev derpå afdestilleret under reduceret tryk.

Resten blev renset ved omvendt fase-kromatografi under anvendelse af en Merck forudpakket kolonne. Spidserne, som indeholdt den ønskede forbindelse, blev opsamlet og lyofiliseret fra vand til opnåelse af 117 mg af titelforbindelsen.

Ultraviolet absorptionsspektrum (methanol) 35

DK 166323 B

106 λ nm (ε): max 257 (13800).

Kernemagnetisk resonansspektrum (hexadeuteret dimethylsulf= 5 oxid) δ ppm: 4.53 (IH, doublet, J = 6,0Hz), 4,87 (IH, doublet, J = 3,0Hz), 5,17 (IH, singlet), 10 5,82 (IH, doublet af doubletter, J = 3,0 & 6,0Hz), 6.53 (IH, singlet), 8,67 (IH, singlet), 8,73 (IH, singlet).

15 Eksempel 49.

71 1 0 -acetyl-N -benzylqriseolsyre (forbindelse nr. 46).

Den i eksempel 48 beskrevne fremgangsmåde blev gentaget, bort-20 set fra, at benzylbromid blev anvendt i stedet for methyl- jodid til opnåelse af titelforbindelsen.

Ultraviolet absorptionsspektrum (50% volumen/volumen vandig methanol) λ nm (ε): max 25 259 (14300).

Kernemagnetisk resonansspektrum (hexadeuteret dimethylsulf= oxid) 6 ppm: 30 4,56 (IH, doublet, J = 6,0Hz), 4,92 (IH, doublet, J = 3,0Hz), 5,22 (IH, singlet), 5.83 (IH, doublet af doubletter, J = 3,0 & 6,0Hz), 35 6,60 (IH, singlet), 8,63 (IH, singlet), 8.83 (IH, singlet.

Eksempel 50.

DK 166323 B

107 2' 7'

Dxmethyl-0 ,0 -diacetyl-6-desamino-6-hydroxyqrisolat (forbindelse nr. 129).

5 2' 7 ’ 1,82 g dimethyl-0 ,0 -diacetylgriseolat (fremstillet som beskrevet i eksempel 11) blev opløst i en 80% vægt/volumen vandig opløsning af eddikesyre. 2,55 g natriumnitrit blev sat til den resulterende opløsning under isafkøling, og blan-10 dingen henstod i 16 timer i en tæt lukket beholder. Ved hjælp af tyndtlagskromatografi på dette stadium viste det sig, at noget af udgangsmaterialet fortsat var til stede,og der blev derpå tilsat yderligere 1 g natriumnitrit, og blandingen blev henstillet i 3 timer. Den ved afdestillation af opløsnings-15 midlet under reduceret tryk opnåede rest blev opløst i acetone, hvortil toluen først blev tilsat og derpå afdestilleret. Denne proces blev gentaget 3 gange.

Resten blev opløst i en blanding af vand og chloroform. Det 20 organiske lag blev vasket med en vandig opløsning af natrium- bicarbonat og derpå med en mættet vandig opløsning af natrium-chlorid og tørret over vandfrit magnesiumsulfat. Opløsningsmidlet blev afdestilleret til dannelse af et lysebrunt glaslignende stof. Dette stof blev renset ved hjælp af silicagel-25 søjlekromatografi og derpå opløst i en ringe mængde acetone, hvortil der var blevet tilsat benzen, og blandingen fik lov til at henstå. De resulterende hvide krystaller blev filtreret fra til opnåelse af 1,28 g af titelforbindelsen i form af hvide krystaller.

30

Ultraviolet absorptionsspektrum (50% volumen/volumen vandig methanol) λ nm (ε): max 243 (12700), 248 skulder (12500), 275 skulder (4300).

Kernemagnetisk resonansspektrum (hexadeuteret dimethylsulf= oxid) 5 ppm: 35

DK 166323 B

108 5,22 (IH, doublet, J = 3,0Hz), 5,62 (IH, doublet, J = 6,0Hz), 5,73 (IH, singlet), 6,13 (IH, doublet af doubletter, J = 3,0 & 6,OHz), 5 6,88 (IH, singlet), 8,18 (IH, singlet), 8,34 (IH, singlet).

Eksempel 51.

10 2' 7 1

Dimethyl-0 ,0 -diacetyl-6-chlor-6-desaminogriseolat (forbindelse nr. 73).

2' 7 1 492 mg dimethyl-0 ,0 -diacetyl-6-desamino-6-hydroxygriseo= 15 lat (fremstillet som beskrevet i eksempel 50) blev suspenderet i 10 ml ethylacetat. 10 ml phosphoroxychlorid blev sat til suspensionen efterfulgt af 0,24 ml Ν,Ν-diethylanilin. Blandingen blev tilbagesvalet, idet den blev beskyttet mod fugtighed. Opløsningsmidlet blev afdestilleret under reduceret tryk, 20 og ethylacetat blev sat til resten og derpå afdestilleret.

Denne proces blev gentaget 3 gange. Resten blev opløst i 20 ml ethylacetat, og opløsningen blev vasket med en mættet vandig opløsning af natriumbicarbonat og derpå med en mættet vandig opløsning af natriumchlorid. Det organiske lag blev 25 tørret over vandfrit magnesiumsulfat,og opløsningsmidlet blev afdestilleret. Den resulterende rest blev renset ved silicagel-kromatografi. Spidserne, som indeholdt titelstoffet, blev opsamlet og kondenseret. Resten blev lyofiliseret fra benzen til opnåelse af 482 mg af titelforbindelsen.

30

Ultraviolet absorptionsspektrum (methanol) λ nm (ε): max 35 247 (7500), 262 (8700).

DK 166323 B

109

Kernemagnetisk resonansspektrum (hexadeuteret dimethylsulf= oxid) δ ppm: 5,28 (IH, doublet, J = 3,0Hz), 5 5,73 (IH, doublet, J = 6,0Hz), 5,76 (IH, singlet), 6,21 (IH, doublet af doubletter, J = 3,0 & 6,0Hz), 7,06 (IH, singlet), 8,92 (2H, singlet).

10

Eksempel 52.

2' 7'

Dibenzhydryl-0 ,0 -diacetyl-6-chlor-6-desaminogriseolat (forbindelse nr. 75).

15 120 ml ethylacetat (tørret med en molekylsigte) blev sat til 2' 7' 12,2 g dibenzhydryl-0 ,0 -diacetyl-6-desamino-6-hydroxy= griseolat (fremstillet som beskrevet i eksempel 38) efterfulgt af 120 ml phosphoroxychlorid og 3,66 ml N,N-diethyl= 20 anilin, og blandingen blev tilbagesvalet i 3 timer under op varmning. Opløsningsmidlet blev derpå afdestilleret, og resten blev opløst i en blanding af ethylacetat og vand. Ethylacetat-laget blev skilt fra og vasket først med fortyndet saltsyre og derpå med en mættet vandig opløsning af natriumchlorid.

2^ Opløsningen blev derpå tørret over vandfrit magnesiumsulfat.

Opløsningsmidlet blev afdestilleret og resten blev renset ved silicagelsøjlekromatografi til opnåelse af 10,2 g af titelforbindelsen.

30 Ultraviolet absorptionsspektrum (methanol) λ nm (ε): max 247 (7700), 258 skulder (8400), 263 (9000).

Kernemagnetisk resonansspektrum (hexadeuteret dimethylsulf= oxid) 6 ppm: 35

DK 166323 B

110 5.40 (IH, doublet, J = 3,0Hz), 5,76 (IH, doublet, J = 6,0Hz), 6,01 (IH, singlet), 6.41 (IH, doublet af doubletter, J = 3,0 & 6,0Hz), 5 7,07 (IH, singlet), 8,72 (IH, singlet), 8,87 (IH, singlet).

Eksempel 53.

10 2 1 7' 0 ,0 -diacetyl-6-chlor-6-desaminoqriseolsyre (forbindelse nr. 12).

1,8 ml ethylacetat, 180 ml phosphoroxychlorid og 5,4 ml N,N-15 diethylanilin blev sat til 18 g dibenzhydryl-0 ,0 -diacetyl- 6-desamino-6-hydroxygriseolat (fremstillet som beskrevet i eksempel 38), og blandingen blev tilbagesvalet i 20 minutter under opvarmning. Opløsningsmidlet blev derpå afdestilleret og ethylacetat og vand blev sat til resten. Ethylacetatlaget 20 blev skilt fra og ekstraheret 2 gange, hver gang med en 20% vægt/volumen vandig opløsning af natriumbicarbonat. Det vandige lags pH-værdi blev justeret til en værdi på 2, og det resulterende bundfald blev filtreret fra til opnåelse af 6,9 g af titelforbindelsen (et udbytte på 63%). Natriumchlorid blev 2 5 tilsat indtil mætning af filtratet, som derpå blev ekstra heret 2 gange med ethylacetat til opnåelse af yderligere 2,4 g af titelforbindelsen.

Ultraviolet absorptionsspektrum (50% volumen/volumen vandig 30 methanol) λ nm (ε): max 246,5 (7400), 262 (8700).

Kernemagnetisk resonansspektrum (hexadeuteret dimethylsulf= 35 oxid) δ ppm:

DK 166323 B

111 5,23 (IH, doublet, J = 3,0Hz), 5,68 (IH, singlet), 5,72 (IH, doublet, J = 6,0Hz), 6.17 (IH, doublet af doubletter, J = 3,0 & 6,0Hz), 5 7,01 (IH, singlet), 8.91 (2H, singlet).

Eksempel 54.

10 Dibenzhydryl-6-chlor-6-desaminogriseolat (forbindelse nr.

74).

150 ml af en 20% vægt/volumen methanolisk opløsning af am- 2' 7' moniak blev sat til 5 g dibenzhydryl-0 ,0 -diacetyl-6-chlor-15 6-desaminogriseolat (fremstillet som beskrevet i eksempel 52), og blandingen blev omrørt i 50 minutter. Opløsningsmidlet blev derpå afdestilleret ved en lav temperatur, og resten blev renset ved søjlekromatografi til dannelse af 3,7 g af titelforbindelsen.

20

Ultraviolet absorptionsspektrum (methanol) λ nm (ε): max 25 247 skulder (9100), 258 skulder (9300), 263 (9800).

Kernemagnetisk resonansspektrum (hexadeuteret dimethylsulf= oxid) δ ppm: 30 4,72 (IH, bred triplet), 4,94 (IH, doublet, J = 9,9Hz), 5,38 (IH, doublet, J = 3,0Hz), 6.17 IH, doublet af doubletter, J = 3,0 & 6,0Hz), 6,81 (IH, singlet), 35 8,79 (IH, singlet), 8.91 (IH, singlet).

Eksempel 55.

DK 166323 B

112 6-chlor-6-desaminoqriseolsyre (forbindelse nr. 52).

5 3,7 g dibenzhydryl-6-chlor-6-desaminogriseolat (fremstillet som beskrevet i eksempel 54) blev opløst i 25 ml anisol, og der blev derpå under isafkøling tilsat 25 ml trifluoreddike-syre. Blandingen blev derefter henstillet ved stuetemperatur. Opløsningsmidlet blev afdestilleret. En blanding af acetone 0g toluen blev sat til resten og afdestilleret. Denne proces blev gentaget. Resten blev opløst i en ringe mængde acetone, og denne opløsning blev hældt i 300 ml hexan til dannelse af et pulveragtigt stof. Dette stof blev opløst i en 20% vægt/ volumen vandig opløsning af natriumbicarbonat, og den resul-15 terende opløsnings pH-værdi blev justeret til en værdi på 2 med 3N saltsyre. Opløsningen blev renset ved omvendt fasekromatografi under anvendelse af en Merck Rp-8 forudpakket kolonne til opnåelse af 1,46 g af titelforbindelsen.

2 0 Ultraviolet absorptionsspektrum (^0) λ nm (ε): max 250 skulder (7200), 263 (9200).

25

Kernemagnetisk resonansspektrum (hexadeuteret dimethylsulf= oxid) δ ppm: 4,21 (IH, singlet), 30 4,59 (IH, doublet, J = 6,0Hz), 4,96 (IH, doublet, J = 3,0Hz), 5.87 (IH, doublet af doubletter, J = 3,0 & 6,0Hz), 6,58 (IH, singlet), 8.88 (2H, singlet).

35

DK 166323 B

113

Eksempel 56.

6-desamino-6--methoxygriseolsyre (forbindelse nr. 124).

3 408 mg dimethyl-0 ,0 -diacetyl-6-chlor-6-desaminogriseo= lat (fremstillet som beskrevet i eksempel 51) blev suspenderes i 16 ml vandfri methanol, og blandingen blev afkølet til en temperatur mellem -20°C og -10°C. En IN methanolisk opløsning af natriummethoxid blev derpå tilsat, og blandingen blev omrørt, idet temperaturen blev holdt under 0°C i 2 -2 1/2 time. Opløsningsmidlet blev derpå afdestilleret, og 4 ml vand blev tilsat. Blandingen blev omrørt i 3 timer ved stuetemperatur, hvorpå dens pH-værdi blev indstillet på 2 med 3N saltsyre. De udfældede krystaller blev filtreret fra til opnåelse af 251 mg (79,7%) af titelforbindelsen.

Ultraviolet absorptionsspektrum (E^O) λ ran ( ε):

20 maX

246 (12700).

Kernemagnetisk resonansspektrum (hexadeuteret dimethylsulf= oxid) 6 ppm: 25 4,53 (IH, singlet), 4.63 (IH, doublet, J = 6,0Hz), 5,13 (IH, doublet, J = 3,0Hz), 6,03 (IH, doublet af doubletter, J =3,0 & 6,0Hz), 6.60 (IH, singlet), 8.61 (IH, singlet), 8.63 (IH, singlet).

Eksempel 57.

6-desamino-6-mercaptogriseolsyre (forbindelse nr. 54).

35

DK 166323 B

114 2' 7 ' 1/0 g O ,0 -diacetyl-6-chlor-6-desaminogriseolsyre (fremstillet som beskrevet i eksempel 53) blev opløst i 30 ml di= methylformamid. Luften i reaktionsbeholderen blev erstattet med nitrogen, og der blev derpå tilsat 1,5 g natriumhydrosul= 5 fid til opløsningen. Blandingen blev omrørt natten over ved stuetemperatur. Blandingen blev under nitrogengasstrøm syrnet med koncentreret saltsyre, hvorefter opløsningsmidlet blev afdestilieret. 20 ml af en IN vandig opløsning af natrium= hydroxid blev sat til resten, og blandingen blev henstillet ^ natten over ved stuetemperatur. Opløsningens pH-værdi blev derpå justeret til en værdi på 2 med koncentreret saltsyre, og blandingen blev derefter renset ved omvendt fasekromatografi gennem en Rp-8 forudpakket kolonne (Merck) til opnåelse af 0,44 g af titelforbindelsen.

15

Ultraviolet absorptions spektrum (^0) λ nm (ε): max 20 321 (20300).

Kernemagnetisk resonansspektrum (hexadeuteret dimethylsulf= oxid) δ ppm: ^ 4,51 (IH, singlet), 4,58 (IH, doublet, J = 6,0Hz), 5,14 (IH, doublet, J = 3,0Hz), 5,81 (IH, doublet af doubletter, J = 3,0 & 6,0Hz), 6,51 (IH, singlet), 8,30 (IH, singlet), 8,50 (IH, singlet).

Eksempel 58.

^ 6-desamino-6-hydrazinogriseolsyre (forbindelse nr. 60) 1,0 g 6-chlor-6-desaminogriseolsyre (fremstillet som beskrevet

DK 166323 B

115 i eksempel 55) blev opløst i 120 ml methanol. 1,85 ml hydrazinhydrat blev sat til opløsningen, og blandingen blev omrørt ved stuetemperatur i 16 - 20 timer. Opløsningsmidlet blev derpå afdestilleret, og restens pH-værdi blev indstillet på 5 2 med 3N saltsyre. Opløsningen blev renset ved omvendt fase kromatografi gennem en Rp-8 forudpakket kolonne (Merck) til opnåelse af 0,5 g af titelforbindelsen (udbytte 50,7%).

Ultraviolet absorptionsspektrum (E^O) 10 λ nm (ε): max 265 (15500).

15 Kernemagnetisk resonansspektrum (hexadeuteret dimethylsulf= oxid) 6 ppm: 4,50 (IH, singlet), 4,59 (IH, doublet, J = 6,0Hz), 20 5,09 (IH, doublet, J = 3,0Hz), 6,05 (IH, doublet af doubletter, J = 3,0 & 6,0Hz), 6,52 (IH, singlet), 8,34 (IH, singlet), 8,37 (IH, singlet).

25

Eksempel 59.

N^-methylgriseolsyre (forbindelse nr. 58).

30 2,5 g 0 ,0 -diacetyl-6-chlor-6-desaminogriseolsyre (frem stillet som beskrevet i eksempel 53) blev opløst i 20 ml methanol. 4 ml af en 40% vægt/volumen methanolisk opløsning af methylamin blev sat til den resulterende opløsning, og blandingen blev omrørt i 5 timer ved stuetemperatur. Opløsnings-35 midlet blev derpå afdestilleret, og 20 ml af en IN vandig opløsning af natriumhydroxid blev sat til resten. Blandingen blev henstillet natten over ved stuetemperatur. Blandingens

DK 166323B

116 pH-værdi blev indstillet på 2 med koncentreret saltsyre, og blandingen blev henstillet natten over et koldt sted. De udfældede krystaller blev filtreret fra til opnåelse af 1,45 g af titelforbindelsen.

5

Ultraviolet absorptionsspektrum (^O) λ nm (ε): max 10 265 (17200).

Kernemagnetisk resonansspektrum (hexadeuteret dimethylsulf= oxid) δ ppm: 15 4,52 (IH, singlet), 4,60 (IH, doublet, J = 6,0Hz), 5,10 (IH, doublet, J = 3,0Hz), 6,08 (IH, doublet af doubletter, J = 3,0 & 6,0Hz), 6,53 (IH, singlet), 20 8,31 (IH, singlet), 8,35 (IH, singlet).

Den i eksempel 59 beskrevne fremgangsmåde blev gentaget bortset fra, at methylamin blev erstattet med den passende anden amin, ^ til fremstilling af forbindelserne i eksemplerne 60-68.

Eksempel 60.

6 6 N ,N -dimethylqriseolsyre (forbindelse nr. 59).

30

Ultraviolet absorptionsspektrum (^0) λ nm (ε): max 35 273 (19800).

DK 166323 B

117

Kernemagnetisk resonansspektrum (hexadeuteret dimethylsulf= oxid) 6 ppm: 4.52 (IH, singlet), 5 4,58 (IH, doublet, J = 6,0Hz), 5,11 (IH, doublet, J = 3,0Hz), 6,02 (IH, doublet af doubletter, J = 3,0 & 6,0Hz), 6.53 (IH, singlet), 8.30 (IH, singlet), 8,38 (IH, singlet).

Eksempel 61.

g N -benzylgriseolsyre (forbindelse nr. 63).

15

Ultraviolet absorptionsspektrum (50% volumen/volumen vandig methanol) λ nm (ε): max 267 (22000).

20

Kernemagnetisk resonansspektrum (hexadeuteret dimethylsulf= oxid) δ ppm: 4.53 (IH, singlet), 4,61 (IH, doublet, J = 6,0Hz), 5,10 (IH, doublet, J = 3,0Hz), 6,07 (IH, doublet af doubletter, J = 3,0 & 6,0Hz), 6.54 (IH, singlet), 8.30 (IH, singlet), 8,40 (IH, singlet).

Eksempel 62.

6 N -phenethylqriseolsyre (forbindelse nr. 64).

Ultraviolet absorptionsspektrum (50% volumen/volumen vandig methanol) λ nm (ε): max ΐ 35

DK 166323B

118 268 (18400).

Kernemagnetisk resonansspektrum (hexadeuteret dimethylsulf= oxid) δ ppm: 5 4,55 (IH, singlet), 4.59 (IH, doublet, J = 6,0Hz), 5,10 (IH, doublet, J = 3,0Hz), 6.04 (IH, doublet af doubletter, J = 3,0 & 6,0Hz), 10 6,50 (IH, singlet), 8.29 (IH, singlet), 8,33 (IH, singlet).

Eksempel 63.

15 g N -a-naphthylmethylqriseolsyre (forbindelse nr. 65).

Ultraviolet absorptionsspektrum (50% volumen/volumen vandig methanol) λ nm (ε): max 20 271 (23200), 280 (22600), 293 skulder (12500).

Kernemagnetisk resonansspektrum (hexadeuteret dimethylsulf= oxid) 5 ppm: 25 4,44 (IH, singlet), 4.59 (IH, doublet, J = 6,0Hz), 5.05 (IH, doublet, J = 3,0Hz), 6,03 (IH, doublet af doubletter, J = 3,0 & 6,0Hz), 6,51 (IH, singlet), 8.30 (IH, singlet), 8,38 (IH, singlet).

Eksempel 64.

6-desamino-6-piperidinoqriseolsyre (forbindelse nr. 66).

35

DK 166323 B

119

Ultraviolet absorptionsspektrum (E^O) λ nm (ε): max 5 280 (21100).

Kernemagnetisk resonansspektrum (hexadeuteret dimethylsulf= oxid) δ ppm: 10 4,52 (IH, singlet), 4,58 (IH, doublet, J = 6,0Hz), 5.11 (IH, doublet, J = 3,0Hz), 6,02 (IH, doublet af doubletter, J = 3,0 & 6,0Hz), 6.52 (IH, singlet), 15 8,29 (IH, singlet), 8,36 (IH, singlet).

Eksempel 65.

20 6-desamino-6-morpholinoqriseolsyre (forbindelse nr. 67).

Ultraviolet absorptionsspektrum (H00) λ nm (ε):

IUcLX

279 (21900).

25

Kernemagnetisk resonansspektrum (hexadeuteret dimethylsulf= oxid) 6 ppm: 4,51 (IH, singlet), 30 4,57 (IH, doublet, J = 6,0Hz), 5.11 (IH, doublet, J = 3,0Hz), 6,01 (IH, doublet af doubletter, J = 3,0 & 6,0Hz), 6.53 (IH, singlet), 8,33 (IH, singlet), 35 8,40 (IH, singlet).

DK 166323 B

120

Eksempel 66.

g N -phenylqriseolsyre (forbindelse nr. 125).

5 Ultraviolet absorptionsspektrum (50% volumen/volumen vandig methanol) λ , , max nm (ε): 291 (21700).

^ Kernemagnetisk resonansspektrum (hexadeuteret dimethylsulf= oxid) δ ppm: 4,54 (IH, singlet), 4,66 (IH, doublet, J = 6,0Hz), 15 5,14 (IH, doublet, J = 3,0Hz), 6,10 (IH, doublet af doubletter, J = 3,0 & 6,0Hz), 6,59 (IH, singlet), 8,46 (IH, singlet), 8.56 (IH, singlet).

20

Eksempel 67.

g N -(2-hydroxyethyl)griseolsyre (forbindelse nr. 61).

25

Ultraviolet absorptionsspektrum (^0) λ nm(s): max 265 (18400).

30

Kernemagnetisk resonansspektrum (hexadeuteret dimethylsulf= oxid) 5 ppm: 4,48 (IH, singlet), 35 4.57 (IH, doublet, J = 6,0Hz), 5,08 (IH, doublet, J = 3,0Hz)

DK 166323 B

121 6,04 (IH, doublet af doubletter, J = 3,0 & 6,0Hz), 6,51 (IH, singlet), 8,28 (IH, singlet), 8,36 (IH, singlet).

5

Eksempel 68.

N6-(2-aminoethyl)qriseolsyre (forbindelse nr. 62).

10 Ultraviolet absorptionsspektrum (E^O) nm (ε): max 264 (18700).

15

Kernemagnetisk resonansspektrum (hexadeuteret dimethylsulf= oxid) δ ppm: 4,15 (IH, singlet), 20 4,48 (IH, doublet, J = 6,0Hz), 4,86 (IH, doublet, J = 3,0Hz), 5,89 (IH, doublet af doubletter, J = 3,0 & 6,0Hz), 6,45 (IH, singlet), 8,32 (IH, singlet), 2^ 8,39 (IH, singlet).

Eksempel 69.

6-desamino-6-hydroqenqriseolsyre (forbindelse nr. 53).

30 1,83 g dibenzhydryl-6-chlor-6-desaminogriseolat (fremstillet som beskrevet i eksempel 54) blev opløst i en 80% vægt/ volumen vandig opløsning af eddikesyre og 5 g zinkpulver blev sat til opløsningen. Blandingen blev omrørt ved stuetempera-

O C

tur i 3 - 4 timer. Opløsningsmidlet blev derpå afdestilleret, og resten blev opløst i en blanding af ethylacetat og vand. Ethylacetatlaget blev skilt fra og vasket med en 20% vægt/

DK 166323 B

122 volumen vandig opløsning af natriumbicarbonat og derpå med en mættet vandig opløsning af natriumchlorid, hvorefter det blev tørret over vandfrit magnesiumsulfat. Opløsningen blev opsamlet ved filtrering, og opløsningsmidlet blev afdestil-5 leret. Resten blev opløst i en blanding af ethylacetat og vand. Ethylacetatlaget blev skilt fra og vasket med en 20% vægt/volumen vandig opløsning af natriumbicarbonat og derpå med en mættet vandig opløsning af natriumchlorid, hvorefter det blev tørret over vandfrit magnesiumsulfat. Opløsningen 10 blev opsamlet ved filtrering, og opløsningsmidlet blev afdes tilleret. Resten blev renset ved hjælp af silicagel-kromato-grafi til opnåelse af 1,9 g af dibenzhydrylesteren af titelforbindelsen.

15 1,2 g af denne dibenzhydrylester blev opløst i 6 ml anisol, og 6 ml trifluoreddikesyre blev under isafkøling tilsat til opløsningen. Blandingen blev henstillet i 15 minutter, hvorefter opløsningsmidlet blev afdestilleret. En blanding af acetone og toluen blev sat til resten, og dette opløsnings-20 middel blev derpå afdestilleret. Denne proces blev gentaget, hvorefter en ringe mængde benzen blev sat til opløsningen, hvorefter denne under omrøring blev sat til 200 ml hexan til udfældning af et pulver. Pulveret blev filtreret fra og opløst i en vandig opløsning af natriumbicarbonat. Den resulterende 25 opløsnings pH-værdi blev indstillet på 2, hvorefter opløsningen blev renset ved omvendt fasekromatografi gennem en Rp-8 forud-pakket kolonne (Merck) til opnåelse af 0,5 g af titelforbindelsen.

20 Ultraviolet absorptionsspektrum (E^O) λ nm (ε): max 262 (7300).

Kernemagnetisk resonansspektrum (hexadeuteret dimethylsulf= oxid) 6 ppm:

DK 166323 B

123 4,53 (IH, singlet), 4,72 (IH, doublet, J = 6,0Hz), 5,15 (IH, doublet, J = 3,0Hz), 5,89 (IH, doublet af doubletter, J = 3,0 & 6,0Hz), 5 6,45 (IH, singlet), 8,32 (IH, singlet), 8,39 (IH, singlet).

10 Eksempel 70.

. 21 71

Dibenzhydryl-0 -benzoyl-0 -mesylqriseolat (forbindelse nr.

77).

2' 15 2,17 g dibenzhydryl-0 -benzoylgriseolat (fremstillet som beskrevet i eksempel 15) blev opløst i 30 ml vandfri pyri= din. Til den resulterende opløsning blev der tilsat 0,693 ml methansulfonylchlorid under isafkøling. Blandingen blev henstillet i 15 timer ved stuetemperatur og derpå, under is-20 afkøling, blev der tilsat 3 ml vand til reaktionsblandingen.

Blandingen blev omrørt i 30 minutter. Opløsningsmidlet blev derpå afdestilleret under reduceret tryk, og resten blev opløst i ethylacetat. Opløsningen blev vasket med vand og derpå med en mættet vandig opløsning af natriumchlorid. Det or-25 ganiske lag blev skilt fra, tørret og straks behandlet med aktivt carbon. Opløsningsmidlet blev afdestilleret til dannelse af en lysegul rest. Resten blev opløst i en ringe mængde me= thylenchlorid, hvortil ethanol derpå blev tilsat. Ved langsom kondensation af blandingen under reduceret tryk ved hjælp 30 af et sugeapparat dannedes et hvidt bundfald. Dette blev fil treret fra og tørret til opnåelse af 1,30 g af titelforbindelsen.

Ultraviolet absorptionsspektrum (methanol) 35 λ-.,, nm (ε): max 258 (17400).

DK 166323 B

124

Kernemagnetisk resonansspektrum (hexadeuteret dimethylsulf= oxid) δ ppm: 5,23 (IH, doublet, J = 3,0Hz), 5 5,84 (IH, singlet), 6,02 (IH, doublet, J = 6,0Hz), 8,13 (IH, singlet), 8,35 (IH, singlet).

10 Eksempel 71.

2' 7 1

Dibenzhydryl-0 -benzoyl-0 -tnfluormethansulfonylgriseolat (forbindelse nr. 79).

2' 15 7,99 g dibenzhydryl-0 -benzoylgriseolat (fremstillet som beskrevet i eksempel 15) og 1,46 g 4-(dimethylamino)pyridin blev inført i en 100 ml trehalset rundbundet kolbe, som derpå blev tørret under reduceret tryk i nærværelse af phosphor= pentaoxid. Ligeledes i nærværelse af phosphorpentaoxid blev 20 50 ml methylenchlorid destilleret særskilt og derpå sat til den trehalsede kolbe. 2,02 ml trifluormethansulfonylchlorid blev derpå tilsat under isafkøling og beskyttet mod fugtighed, og blandingen blev omrørt i 2 timer under de samme betingelser. Efter tilsætning af 10 ml vand blev blandingen 25 omrørt i yderligere 15 minutter under isafkøling. Reaktionsproduktet blev derpå overført til en skilletragt, hvortil der blev tilsat 20 ml 0,1N saltsyre til vaskning af det organiske lag. Dette lag blev derpå vasket med en mættet vandig opløsning af natriumchlorid og derpå med en mættet vandig 30 opløsning af natriumbicarbonat, hvorefter det blev tørret over vandfrit natriumsulfat. Opløsningsmidlet blev afdestilleret under reduceret tryk. Den resulterende rest blev renset ved silicagel-søjlekromatografi under anvendelse af methy= lenchlorid indeholdende 1% volumen/volumen methanol som elu-35 eringsmiddel. Fraktionerne, som indeholder hovedproduktet, blev opsamlet og kondenseret. Kondensatet blev lyofiliseret

DK 166323 B

125 fra benzen til opnåelse af 7,38 g af titelforbindelsen som et lysegult fast stof.

Ultraviolet absorptionsspektrum (methanol) 5 nm (ε): max 257 (17100).

10 Kernemagnetisk resonansspektrum (hexadeuteret dimethylsulf= oxid) δ ppm: 5,21 (IH, doublet, J = 3,0Hz), 6,00 (IH, doublet, J = 6,0Hz), 15 6,05 (IH, singlet), 8,08 (IH, singlet), 8,33 (IH,singlet).

Eksempel 72.

20 2 1

Dibenzhydryl-7'-(S)-azido-0 -benzoyl-71-deoxyqriseolat (forbind nr. 130).

2' 7' 935 mg dibenzhydryl-0 -benzoyl-0 -trifluormethansulfonyl= 25 griseolat (fremstillet som beskrevet i eksempel 71) blev opløst i 5 ml veltørret hexamethylphosphortriamid, hvortil der derpå blev tilsat 68,3 mg veltørret natriumazid (som var blevet opnået ved lyofilisering fra vand). Blandingen blev omsat ved stuetemperatur i 2 timer, medens den blev beskyttet mod 30 fugtighed. Reaktionsproduktet blev derpå hældt i isvand, og det resulterende uopløselige stof blev filtreret fra, vasket med vand og tørret. Det resulterende faste stof blev renset ved silicagel-præparativ-tyndtlagskromatografi. Hovedbåndene blev ekstraheret, og ekstrakten blev lyofiliseret fra benzen 33 til opnåelse af 455 mg af titelforbindelsen i form af et lyse gult pulver. Forbindelsen gav et usædvanligt kraftigt infrarødt absorptionsspektrum-spids på grund af azid ved 2100 cm

DK 166323 B

126

Ultraviolet absorptionsspektrum (methanol) W U): 5 257 (18900).

Kernemagnetisk resonansspektrum (hexadeuteret dimethylsulf= oxid) δ ppm: 10 4,87 (IH, singlet), 5,34 (IH, doublet, J = 3,0Hz), 5,85 (IH, doublet, J = 6,0Hz), 6,93 (IH, singlet), 8,11 (IH, singlet), 15 8,36 (IH, singlet).

Eksempel 7 3.

7'-azido-7'-deoxygriseolsyre (forbindelse nr. 81).

20 2' 300 mg dibenzhydryl-71-azido-0 -benzoyl-7'-deoxygriseolat (fremstillet som beskrevet i eksempel 72) blev opløst i 5 ml anisol. 5 ml trifluoreddikesyre blev tilsat under isafkøling til den resulterende opløsning, og blandingen blev henstillet 25 i 30 minutter i en omhyggeligt lukket beholder. Opløsningsmid let blev derpå afdestilleret under reduceret tryk. Resten blev opløst i acetone, hvortil der derpå blev tilsat toluen, og opløsningsmidlet blev afdestilleret. Denne proces blev gentaget 3 gange. Resten blev opløst i 10 ml acetone, og op-50 løsningen blev hældt i 100 ml hexan. Det resulterende bundfald blev filtreret fra, omhyggeligt vasket med hexan og derpå tørret. Det resulterende lysegule faste stof blev opløst i 20 ml af en 20% vægt/volumen opløsning af ammoniak i methanol, og blandingen blev henstillet natten over. Opløsningsmidlet

O ET

blev afdestilleret under reduceret tryk, og den resulterende rest blev opløst i en ringe mængde vand. Den resulterende opløsnings pH-værdi blev justeret til en værdi på 2,0, og opløsningen blev derpå vasket med en ringe mængde diethyl=

DK 166323 B

127 ether og underkastet søjlekromatografi gennem en Rp-8 kolonne (Merck). Søjlen blev vasket med vand og derpå elueret med vand indeholdende 10% volumen/volumen acetoniril. Hovedspidserne blev opsamlet og opløsningsmidlet afdestilleret.

5 Den resulterende rest blev lyofiliseret fra vand til opnå else af 70 mg af titelforbindelsen i form af et lysegult kornet stof. Det infrarøde absorptionsspektrum af denne forbindelse viste en kraftig spids ved 2110 cm hvilket tilskrives azid.

10 Ultraviolet absorptionsspektrum (methanol) w nm ίε): 258 (14700).

15

Kernemagnetisk resonansspektrum (hexadeuteret dimethylsulf= oxid) 5 ppm: 4,27 (IH, singlet), 20 4,61 (IH, doublet, J = 6,0Hz), 5,01 (IH, doublet, J = 3,0Hz), 6,08 (IH, doublet af doubletter, J = 3,0 & 6,0Hz), 6,50 (IH, singlet), 8,21 (IH, singlet), 25 8,36 (IH, singlet).

Eksempel 74.

6-desamino-6-methylmercaptogriseolsyre (forbindelse nr. 55).

30 0,44 g 6-desamino-6-mercaptogriseolsyre (fremstillet som beskrevet i eksempel 57) blev opløst i 20 ml af en IN vandig opløsning af natriumhydroxid, og 0,4 ml methyl jodid blev sat til den resulterende opløsning. Blandingen blev henstillet 35 natten over ved stuetemperatur. Opløsningsmidlet blev derpå afdestilleret, og restens pH-veerdi justeret til en værdi på

DK 166323B

128 2,5. Den resulterende opløsning blev renset ved omvendt fasekromatografi gennem en Rp-8 forudpakket kolonne (Merck) til opnåelse af 0,4 g af titelforbindelsen.

5 Ultraviolet absorptions spektrum (^0) λ nm (ε): max 299 (20500).

10

Kernemagnetisk resonansspektrum (hexadeuteret dimethylsulf= oxid) δ ppm: 4,53 (IH, singlet), 15 4,64 (IH, doublet, J = 6,0Hz), 5,16 (IH, doublet, J = 3,0Hz), 6,03 (IH, doublet af doubletter, J = 3,0 & 6,0Hz), 6,62 (IH, singlet), 8,68 (IH, singlet), 20 8,83 (IH, singlet).

Eksempel 75.

6-azido-6~desaminoqriseolsyre (forbindelse nr. 56).

25 0,26 g 6-desamino-6-hydrazingriseolsyre (fremstillet som beskrevet i eksempel 58) blev opløst i 4 ml af en 5% vægt/volumen vandig opløsning af eddikesyre, hvortil der derpå blev tilsat 0,052 g natriumnitrit opløst i 10 ml vand under isafkøling 30 og under en nitrogengasstrøm. Blandingen blev omrørt i 2 timer under de samme betingelser. Blandingens pH-vsrdi blev derpå indstillet på en værdi på 2,0 med 3N saltsyre. Blandingen blev renset ved omvendt fasekromatografi gennem en Rp-8 forudpakket kolonne (Merck) til opnåelse af 0,18 g af titelfor-35 bindeisen.

DK 166323 B

129

Ultraviolet absorptionsspektrum (1^0) w nm (ε): 5 251 (4900)r 259 (5100), 287 (8700), 300 skulder (5100).

Kernemagnetisk resonansspektrum (hexadeuteret dimethylsulf= oxid) δ ppm: 10 4,53 (IH, singlet), 4,66 (IH, doublet, J = 6,0Hz), 5,21 (IH, doublet, J = 3,0Hz), 5,90 (IH, doublet af doubletter, J = 3,0 & 6,0Hz), 6,75 (IH, singlet), 15 8,89 (IH, singlet), 10,28 (IH, singlet).

Eksempel 76.

g 20 N -methoxyqriseolsyre (forbindelse nr. 57).

1,0 g 6-chlor-6-desaminogriseolsyre (fremstillet som beskrevet i eksempel 55) blev suspenderet i methanol, hvorefter luften i reaktionsbeholderen, som indeholdt suspensionen, blev er-25 stattet med nitrogen. 2,3 g methoxyamin blev tilsat til den ne suspension, og blandingen blev omsat ved 60°C i 7 timer, hvorefter der blev tilsat yderligere 1,8 g methoxyamin til blandingen, og blandingen blev omsat ved 80°C i yderligere 15 timer. Opløsningsmidlet blev derpå afdestilleret og pH-50 værdien af en vandig opløsning af resten blev indstillet på værdien 3,0. Opløsningen blev derpå renset ved omvendt fasekromatografi gennem en Rp-8 forudpakket kolonne (Merck) til opnåelse af 0,28 g af titelforbindelsen.

55 Ultraviolet absorptions spektrum (^0)

Naax ™ (ε): 267 (13300)

DK 166323 B

130

Kernemagnetisk resonans spektrum (hexadeuteret dimethyl sul ir-oxid) δ ppm: 4,25 (IH, singlet), 5 4,46 (IH, doublet, J = 6,0Hz), 4,92 (IH, doublet, J = 3,0Hz), 5,79 (IH, doublet af doubletter, J = 3,0 & 6,0Hz), 6,37 (IH, singlet), 7,71 (IH, singlet), 10 8,13 (IH, singlet).

Eksempel 77.

N^-butylgriseolsyre (forbindelse nr. 44).

15 2' 7' 4,0 g dibenzhydryl-0 ,0 -diacetylgriseolat (fremstillet som beskrevet i eksempel 20) blev opløst i dimethylformamid.

12,8 ml butyljodid blev under isafkøling tilsat til den resulterende opløsning, og blandingen blev omsat ved 70°C i 48 20 timer. Opløsningsmidlet blev derpå afdampet under reduceret tryk, og resten blev ekstraheret med en blanding af en mættet vandig opløsning af. natriumbicarbonat og methylenchlorid. Det organiske lag blev skilt fra, tørret over vandfrit magnesiumsulfat og derpå inddampet til tørhed under reduceret 25 tryk. Resten blev renset ved silicagel-kromatografi under anvendelse af en opløsning af 5% volumen/volumen methanol i methylenchlorid som elueringsmiddel til opnåelse af 3,3 g af -butyIderivatet med beskyttede hydroxy- og carboxyl- grupper.

30

En 20% vasgt/volumen opløsning af ammoniak i methanol blev tilsat under iskøling til 2,5 g af denne forbindelse, og blandingen blev henstillet i 1 time med iskøling. Opløsningsmidlet blev derpå afdestilleret under reduceret tryk. En opløs-ning af diphenyldiazomethan i acetone blev sat til resten, og blandingen fik lov til at henså i 30 minutter ved stuetemperatur. Den resulterende opløsning blev inddampet til

DK 166323 B

131 tørhed. Resten blev renset ved silicagel-søjlekromatografi under anvendelse af en 7% volumen/volumen opløsning af methanol i methylenchlorid som elueringsmiddel til opnåelse af 1,7 g dibenzhydryl-N^-butylgriseolat.

5 10 ml trifluoreddikesyre blev under iskøling sat til en opløsning af 1,2 g af denne forbindelse i anisol, og blandingen blev henstillet ved stuetemperatur i 10 minutter. Opløsningsmidlet blev derpå afdestilleret under reduceret tryk. Toluen 10 blev sat til resten, og opløsningen blev inddampet til tørhed under reduceret tryk. Denne fremgangsmåde blev gentaget 2 gange. Resten blev renset ved omvendt fasesøj lekromatografi gennem en Rp-8 forudpakket kolonne under anvendelse af en blanding af 31 volumen/volumen acetonitril, 0,02% volumen/ 15 volumen eddikesyre og vand som elueringsmiddel til opnåelse af 400 mg af titelforbindelsen.

Ultraviolet absorptionsspektrum (50% volumen/volumen vandig methanol) λ nm (ε): max 20 258 (14700).

Kernemagnetisk resonansspektrum (hexadeuteret dimethylsulf= oxid) δ ppm: 25 4,21 (IH, singlet), 4,54 (IH, doublet, J = 6,0Hz), 4,75 - 5,20 (2H), 5,78 (IH, doublet af doubletter, J - 3,0 & 6,0Hz), 30 6,53 (IH, singlet), 8,65 (IH, singlet), 8,70 (IH, singlet).

Eksempel 78.

N^-allylgriseolsyre (forbindelse nr. 48).

35

DK 166323B

132 2' 7' 4,0 g dibenzhydryl-0 ,0 -diacetylgriseolat (fremstillet som beskrevet i eksempel 20) blev opløst i dimethylformamid.

9,4 ml allyljodid blev tilsat under iskøling til opløsningen. Den resulterende blanding blev ved stuetemperatur omsat i 5 24 timer. Opløsningsmidlet blev derpå afdestilleret under reduceret tryk, og resten blev ekstraheret med en blanding af en mættet vandig opløsning af natriumbicarbonat og methylen= chlorid. Det organiske lag blev skilt fra, tørret over vandfrit magnesiumsulfat og derpå inddampet til tørhed under re-10 duceret tryk. Resten blev renset ved silicagel-søjlekroma tografi under anvendelse af en 5:95 volumen/volumen blanding af methanol og methylenchlorid som elueringsmiddel til opnåelse af 3,2 g af N^-butylderivatet med beskyttede hydroxy-og carboxylgrupper.

15

En 20% vægt/volumen opløsning af ammoniak i methanol blev tilsat under iskøling til 2,5 g af denne forbindelse, og blandingen blev henstillet 1 time med isafkøling. Opløsningsmidlet blev derpå afdestilleret under reduceret tryk. En opløsning 20 af diphenyldiazomethan i acetone blev tilsat til resten, og blandingen blev henstillet i 30 minutter og blev derpå inddampet til tørhed. Resten blev renset ved silicagel-søjlekromatografi under anvendelse af en 7:93 volumen/volumen blanding af methanol og methylenchlorid som elueringsmiddel til 25 opnåelse af 2,0 g dibenzhydryl-N^-allylgriseolat.

10 ml trifluoreddikesyre blev tilsat under isafkøling til en opløsning af 1,5 g af denne forbindelse i anisol. Blandingen blev henstillet i 10 minutter ved stuetemperatur, hvor-20 efter opløsningsmidlet blev afdestilleret under reduceret tryk. Toluen blev tilsat til resten, og blandingen blev inddampet til tørhed. Denne proces blev gentaget 2 gange. Resten blev renset ved omvendt søjlekromatografi gennem en Rp-8 forud-pakket kolonne under anvendelse af en 3:0,02:96,98 volumen/

O ET

volumen blanding af acetonitnl, eddikesyre og vand som elueringsmiddel til opnåelse af 370 mg af titelforbindelsen.

DK 166323B

133

Ultraviolet absorptionsspektrum (50% volumen/volumen vandig methanol) λ nm (ε): max 259 (14700).

5

Kernemagnetisk resonansspektrum (hexadeuteret dimethylsulf= oxid) δ ppm: 4,17 (IH, singlet), 10 4,55 (IH, doublet, J = 60Hz), 5,02 (IH, doublet, J = 3,0Hz), 5,80 (IH, doublet af doubletter, J = 3,0 & 6,0Hz), 6,55 (IH, singlet), 8,63 (IH, singlet), 15 8,70 (IH, singlet).

Eksempel 79.

7‘-chlor-?1-deoxygriseolsyre (forbindelse nr. 88).

20 , 2' 71 2,84 g dibenzhydryl-0 -benzoyl-0 -trifluormethansulfonyl= griseolat (fremstillet som beskrevet i eksempel 71) blev opløst i 50 ml dimethylformamid, hvorefter 1,27 g vandfrit lithium= chlorid blev tilsat, og blandingen blev omrørt i 1 time under 25 opvarmning til 100°C. Det blev derpå bekræftet, at der ikke var noget udgangsmateriale tilbage (under anvendelse af silica-gel-tyndtlagskromatografi med methylenchlorid indeholdende 5% volumen/volumen methanol som fremkaldermiddel), og opløsningsmidlet blev afdestilleret under reduceret tryk. Den re-30 suiterende rest blev opløst i 30 ml vand og 50 ml ethylacetat, og det organiske lag blev skilt fra. Dette blev vasket med vand og tørret over vandfrit magnesiumsulfat, og opløsningsmidlet blev afdampet til dannelse af en lysebrun rest. Resten blev skilt fra og renset ved hjælp af silicagel-søjlekroma-35 tografi til dannelse af 1,74 g af et lysegult karammellig- nende stof, som var titelforbindelsen, men med hydroxygrup-pen og carboxygruppe heraf beskyttet.

DK 166323 B

134 1,34 g af denne forbindelse blev opløst i 10 ml anisol, og trifluoreddikesyre blev derpå tilsat under isafkøling. Blandingen fik lov til at henstå i 30 minutter ved stuetemperatur. Opløsningsmidlet blev derpå afdestilleret under reduceret 5 tryk, og resten blev opløst i acetone. Toluen blev tilsat til opløsningen og derpå afdestilleret. Denne proces blev gentaget 3 gange. Resten blev opløst i en ringe mængde acetone, og den resulterende opløsning blev langsomt under omrøring hældt i 100 ml hexan. Det resulterende hvide bundfald 10 blev filtreret fra og tørret til dannelse af 860 mg af et hvidt pulver. Dette hvide pulver blev opløst i 20 ml af en 20% vægt/volumen opløsning af ammoniak i methanol, og opløsningen blev henstillet i 2 timer ved stuetemperatur i en tæt lukket beholder. Opløsningsmidlet blev derpå afdestilleret 15 under reduceret tryk, og resten blev opløst i 30 ml vand.

Den resulterende opløsning blev vasket to gange, hver gang med 20 ml diethylether, og dens pH-værdi blev indstillet på 2,0 med koncentreret saltsyre. Opløsningen blev renset ved kromatografi gennem en Rp-8 forudpakket kolonne (Merck).

20 Fraktionerne, som indeholdt titelforbindelsen, blev opsam let og lyofiliseret til opnåelse af 525 mg af titelforbindelsen i form af et lyst gulligt pulver.

Ultraviolet absorptionsspektrum U^O) 25 λ nm (ε): max 257 (16500).

30 Kernemagnetisk resonansspektrum (hexadeuteret dimethylsulf= oxid) δ ppm: 4,70 (IH, doublet, J = 6,0Hz), 4,97 (1 H, singlet), 35 5,25 (IH, doublet, J = 3,0Hz), 6,10 (IH, doublet af doubletter, J = 3,0 & 6,0Hz), 6,58 (IH, singlet),

DK 166323 B

135 8,31 (IH, singlet), 8,42 (IH, singlet).

Eksempel 80.

5 71-deoxygriseolsyre (forbindelse nr. 133).

500 mg 7'-chlor-7'-deoxygriseolsyre (fremstillet som beskrevet i eksempel 79) blev opløst i 30 ml 80% vandig eddike-10 syre. 600 mg zinkpulver blev derpå tilsat i 3 omtrent lige store portioner med 1 times mellemrum med kraftig omrøring. Omrøringen blev fortsat under de samme betingelser. Det uopløselige stof blev filtreret fra, og filtratet blev inddampet til tørhed. Den resulterende rests pH-vsardi blev indstil-15 let på 2,0 med IN saltsyre. Opløsningen blev derpå renset under anvendelse af en Rp-8 forudpakket kolonne (Merck) og derpå lyofiliseret fra vand til opnåelse af 250 mg af titelforbindelsen i form af et hvidt pulver.

20 Ultraviolet absorptionsspektrum (^0) λ nm (ε): max 260 (16000).

25

Kernemagnetisk resonansspektrum (hexadeuteret dimethylsulf= oxid) 6 ppm: 2,92 (IH, kvartet), 30 4,59 (IH, doublet, J = 5,0Hz), 5,08 (IH, doublet, J = 2,4Hz), 5,99 (IH, doublet af doubletter, J = 2,4 & 5,0Hz), 6,46 (IH, singlet), 8,23 (IH, singlet), 8,33 (IH, singlet).

DK 166323B

136

Eksempel 81.

2 1

Dibenzhydryl-7' (S)-0 -benzoyl-7'-deoxygriseolat (forbindelse nr. 134).

5 2' 1,20 g dibenzhydryl-7'-azido-0 -benzoyl-7'-deoxygnseolat (fremstillet som beskrevet i eksempel 72) blev opløst i 15 ml pyridin, hvortil der derpå blev tilsat 5 ml vand. Nitrogengas blev ledt gennem blandingen i ca. 5 minutter, hvor-10 efter en hydrogensulfidgas blev ledt igennem i 30 minutter under isafkøling. Luften i kolben blev erstattet med nitrogengas, og reaktionsproduktet blev henstillet ved stuetemperatur i 17 timer i en omhyggeligt lukket beholder. Nitrogengas blev derpå ledt gennem reaktionsproduktet i 1 time ved stuetempera-15 tur til fjernelse af hydrogensulfidgasoverskud. 10 ml eddike syre blev sat til reaktionsproduktet, og opløsningsmidlet blev derefter afdestilleret under reduceret tryk. 10 ml ethanol blev sat til resten og derpå afdestilleret. Denne proces blev gentaget 1 gang. Resten blev derefter opløst i 20 30 ml ethylacetat og 20 ml vand og derpå underkastet frak tionering af det organiske og det vandige lag. Det organiske lag blev vasket med 20 ml 0,1N saltsyre, 20 ml af en 5% vægt/ volumen vandig opløsning af natriumbicarbonat og 20 ml af en mættet vandig opløsning af natriumchlorid (i nævnte ræk-25 kefølge) og derpå tørret over vandfrit magnesiumsulfat. Op løsningsmidlet blev afdestilleret under reduceret tryk til dannelse af en lysegul rest. Denne rest blev renset ved kromatografi gennem en Rp-8 forudpakket kolonne af silicagel (Merck) under anvendelse af methylenchlorid indeholdende 2% 30 volumen/volumen methanol som elueringsmiddel. Hovedspidsma terialet blev lyofiliseret med benzen til opnåelse af 494 mg af titelforbindelsen i form af et lysegult fast stof.

Ultraviolet absorptionsspektrum (H-O) 35 ^ λ nm (ε): max v ' 260 (18200).

DK 166323 B

137

Kernemagnetisk resonansspektrum (hexadeuteret dimethylsulf= oxid) δ ppm: 4,07 (IH, singlet), 5 5,47 (IH, doublet, J = 3,0Hz), 5,90 (IH, doublet, J = 3,0Hz), 6,63 & 6,66 (IH, singlet), 8,15 (IH, singlet), 8,43 (IH, singlet).

10

Eksempel 82.

7'-(S)-amino-71-deoxygriseolsyre (forbindelse nr. 135).

i c 2 * 434 mg dibenzhydryl-7'(S)-ammo-O -benzoyl-7'-deoxygriseolat (fremstillet som beskrevet i eksempel 81) blev opløst i 5 ml anisol. 5 ml trifluoreddikesyre blev tilsat under isafkøling til den resulterende opløsning, og blandingen blev henstillet i 30 minutter ved stuetemperatur i en omhyggeligt 20 lukket beholder. Opløsningsmidlet blev afdestilleret under reduceret tryk. 5 ml acetone og 5 ml toluen blev tilsat til resten og blev derpå afdestilleret. Denne proces blev gentaget 3 gange. Den resulterende rest blev opløst i 5 ml ethanol og 5 ml acetone, og opløsningen blev langsomt hældt i 50 ml af en 50% volumen/volumen blanding af hexan og acetone under omrøring. Det resulterende bundfald blev filtreret fra, vasket med hexan og tørret. Det resulterende okkerfarvede pulver blev opløst i 20 ml af en 20% volumen/volumen opløsning af ammoniak i methanol og henstillet i 17 timer ved stuetempera-3 0 tur i en omhyggeligt lukket beholder. Opløsningsmidlet blev afdestilleret under reduceret tryk, og 20 ml vand blev sat til resten til opløsning heraf. Den resulterende opløsning blev lidt efter lidt syrnet med IN saltsyre, hvorpå uopløseligt stof først viste sig, men derpå opløstes, da pH-værdien 3 5 nåede værdien 1. Opløsningen blev vasket med 20 ml ethylace-tat. Det vandige lags pH-værdi blev justeret til ca. 7 ved tilsætning af natriumbicarbonat. Det vandige lag blev derpå

DK 166323 B

138 renset ved kromatografi gennem en Rp-8 forudpakket kolonne (Merck). Hovedspidserne blev opsamlet og lyofiliseret fra vand til opnåelse af 133 mg af titelforbindelsen i form af et lysegult fast stof.

5

Ultraviolet absorptionsspektrum (methanol) λ nm (ε): max 10 206 (25800), 257,5 (15100).

Eksempel 83.

. 2'

Dibenzhydryl-0 benzoyl-71(S)-brom-71-deoxyqriseolat (forbind-I5 else nr. 136).

2' 7 * 14,1 g dibenzhydryl-0 -benzoyl-0 -trifluormethansulfonylgri= seolat (fremstillet som beskrevet i eksempel 71) blev opløst i 50 ml dimethylformamid. 13 g lithiumbromid blev sat til 20 den resulterende opløsning, og blandingen blev opvarmet til 95°C i 22 minutter. Opløsningsmidlet blev derpå afdestilleret, og ethylacetat og vand blev sat til resten. Det organiske lag blev skilt fra, vasket med en mættet vandig opløsning af natriumchlorid og tørret over vandfrit magnesiumsulfat.

25 Den tørrede opløsning blev filtreret, og opløsningsmidlet blev destilleret fra filtratet. Resten blev renset ved silica-gelkromatografi til opnåelse af 6,9 g af titelforbindelsen.

Ultraviolet absorptionsspektrum (H~0) 30

Vax ίε,: 258 (17200).

Kernemagnetisk resonansspektrum (hexadeuteret dimethylsulf= oxid) δ ppm:

DK 166323 B

139 5,13 (IH, singlet), 5.40 (IH, doublet, J = 2,4Hz), 5,97 (IH, doublet, J = 6,0Hz), 6,67 (IH, singlet), 5 6,75 (lH, kvartet, J = 2,4 " 6,0Hz), 8,09 (lH, singlet), 8.40 (IH, singlet).

Eksempel 84.

10 7'(S)-brom-7'-deoxygriseolsyre (forbindelse nr. 137).

2' 878 mg dibenzhydryl-0 -benzoyl-7'(S)-brom-71-deoxygriseo= lat (fremstillet som beskrevet i eksempel 83) blev opløst 15 i 10 ml anisol. 10 ml trifluoreddikesyre blev tilsat under isafkøling til den resulterende opløsning, og blandingen blev henstillet i 30 minutter ved stuetemperatur. Opløsningsmidlet blev derpå afdestilieret under reduceret tryk. 5 ml acetone og 5 ml toluen blev tilsat til resten og blev derpå af-20 destilleret. Denne proces blev gentaget 3 gange. Resten blev opløst i en ringe mængde acetone. Den resulterende opløsning blev langsomt hældt i 100 ml hexan under omrøring. Det resulterende bundfald blev filtreret fra, vasket med hexan og tør ret. Bundfaldet blev derpå opløst i 20 ml af en 20% vægt/ 25 volumen opløsning af ammoniak i methanol og henstillet i 17 timer i en omhyggeligt lukket beholder. Opløsningsmidlet blev afdestilleret under reduceret tryk. Den resulterende rest blev opløst i vand og opløsningens pH-værdi blev indstillet på 2,3. Den vandige opløsning blev derpå renset ved kroma-30 tografi gennem en Rp-8 forudpakket kolonne (Merck) til op nåelse af 250 mg af titelforbindelsen.

Ultraviolet absorptionsspektrum (methanol) 35 λ nm (ε): max 257 (16000).

DK 166323 B

140

Kernemagnetisk resonansspektrum (hexadeuteret dimethylsulf= oxid) δ ppm: 4,83 (IH, doublet, J = 5,7Hz), 5 5,13 (IH, singlet), 6,31 (IH, doublet, J = 2,1Hz), 6,52 (IH, kvartet, J = 2,1 & 5,7Hz), 6,80 (IH, singlet), 8,26 (IH, singlet), 10 8,47 (IH, singlet).

Eksempel 85.

6-desamino-71-deoxy-6-hydroxygriseolsyre (forbindelse nr.

15 138).

300 mg 7'-deoxygriseolsyre (fremstillet som beskrevet i eksempel 80) blev opløst under opvarmning i 100 ml 80% volumen/ volumen vandig syre. Nitrogengas blev derpå ledt gennem op-20 løsningen i 15 minutter. Opløsningen blev isafkølet, og 600 mg natriumnitrit blev derpå tilsat og blandingen blev henstillet i 24 timer ved stuetemperatur i en omhyggeligt lukket beholder. Nitrogengas blev derpå ledt gennem blandingen i 30 minutter, hvorefter opløsningsmidlet blev afdestilleret 25 under reduceret tryk. 10 ml acetone og 10 ml toluen blev der på sat til en resulterende rest og blev derefter afdestilleret. Denne proces blev gentaget 3 gange. 30 ml vand blev sat til resten, og opløsningens pH-værdi blev derefter indstillet på 0,5 med koncentreret saltsyre under isafkøling.

30 Blandingen blev derpå inddampet til tørhed. Resten blev op løst i 50 ml vand, og den vandige opløsning blev renset ved kromatografi gennem en Rp-8 forudpakket kolonne under anvendelse af vand som indeholdt 10% volumen/volumen acetonitril som elueringsmiddel. Hovedspidsmaterialet blev opsamlet og lyofiliseret til opnåelse af 260 mg af titelforbindelsen som et hvidt pulver.

DK 166323 B

141

Ultraviolet absorptionsspektrum (methanol) λ nm (ε): max 5 248 (12500).

Kernemagnetisk resonansspektrum (hexadeuteret dimethylsulf= oxid) 6 ppm: 10 2,68, 2,87, 3,00 & 3,19 (2H, kvartet, J = 17,0Hz), 4,57 (IH, doublet, J = 5,1Hz), 5,13 (IH, doublet, J = 2,4Hz), 5,87 (IH, kvartet, J = 2,4 & 5,1Hz), 6,48 (IH, singlet), 15 8,20 (IH, singlet), 8,30 (IH, singlet).

Eksempel 86.

9 n 2'

Dibenzhydryl-7'(S)-acetoxy-0 -benzoyl-71-deoxygriseolat (forbindelse nr. 139).

3,2 g natriumacetat (som forud var blevet smeltet og tørret) blev opløst under opvarmning til 95°C i 50 ml eddikesyre.

9 R 21 7' J 3,79 g dibenzhydryl-0 -benzoyl-0 -trifluormethansulfonyl= griseolat (fremstillet som beskrevet i eksempel 71) blev tilsat, og blandingen blev omrørt i 1 time ved 95°C, medens den blev beskyttet mod fugtighed. Opløsningsmidlet blev afdestil-leret under reduceret tryk, og 10 ml acetone og 10 ml toluen 30 blev sat til resten og blev derpå afdestilleret. Denne proces blev gentaget 3 gange. Resten blev opløst i acetone indeholdende 10% volumen/volumen vand. Opløsningens pH-værdi blev indstillet på en værdi som ikke overstiger 1 under anvendelse af IN saltsyre, og derpå blev diphenyldiazomethan tilsat til blandingen, indtil den rødlige farve forsvandt. Blandingen fik lov til at reagere ved stuetemperatur i ca. 1 time, og overskud af diphenyldiazomethan blev nedbrudt med eddikesyre.

DK 166323 B

142

Opløsningsmidlet blev afdestilleret under reduceret tryk. Resten blev opløst i 50 ml ethylacetat og 50 ml vand og underkastet fraktionering. Det organiske lag blev vasket med en 5% vægt/volumen vandig opløsning af natriumbicarbonat og en 5 mættet vandig opløsning af natriumchlorid og tørret over vand frit magnesiumsulfat. Tørremidlet blev filtreret fra, og opløsningsmidlet blev afdestilleret. Resten blev renset ved silicagel-søjlekromatografi til opnåelse af 2,33 g af titelforbindelsen i form af et lysegult karamellignende stof.

10

Ultraviolet absorptionsspektrum (H^O) nm ( ε): max 15 257 (18100).

Kernemagnetisk resonansspektrum (hexadeuteret dimethylsulf= oxid δ ppm: 20 5,32 (IH, doublet, J = 2,4Hz), 5,91 (IH, doublet, J = 5,4Hz), 6,00 (IH, singlet), 8,14 (IH, singlet), 8,38 (IH, singlet).

25

Eksempel 87.

71-deoxy-71(S)-hydroxyqriseolsyre (forbindelse nr. 140).

•5 Λ 21 2,23 g dibenzhydryl-7’(S)-acetoxy-0 -benzoyl-7'-deoxygriseo= lat (fremstillet som beskrevet i eksempel 86) blev opløst i 20 ml anisol og 20 ml trifluoreddikesyre, og blandingen blev derpå henstillet i 1 time under isafkøling. Opløsningsmidlet blev derpå afdestilleret under reduceret tryk. 10 ml 3 5 o acetone og 10 ml toluen blev derpå tilsat til resten og derefter afdestilleret. Denne proces blev gentaget 3 gange. Den resulterende hvide rest blev opløst i 20 ml acetone, og op-

DK 166323 B

143 løsningen blev langsomt hældt i 300 ml hexan under omrøring.

Det resulterende bundfald blev filtreret fra og tørret til opnåelse af 690 mg af et hvidt pulver. Det hvide pulver blev opløst i 30 ml af en 20% vægt/volumen opløsning af ammoniak 5 i methanol og henstillet natten over. Opløsningsmidlet blev afdestilleret under reduceret tryk. Den resulterende rest blev opløst i vand, og den vandige opløsnings pH-værdi blev indstillet til en værdi på 2,3 med koncentreret saltsyre. Opløsningen blev yderligere renset ved omvendt fasekromato-10 grafi gennem en Rp-8 kolonne (Merck). Udgangsspidsmaterialet blev opsamlet og lyofiliseret fra vand indeholdende 10% volumen/ volumen acetonitril til opnåelse af 300 mg af titelforbindelsen i form af et lysegult pulver.

15 Ultraviolet absorptionsspektrum (^0) W (ε): 205 (27200), 256,5 (16200).

20

Kernemagnetisk resonansspektrum (hexadeuteret dimethylsulf= oxid) δ ppm: 4.53 (IH, singlet), 25 4,62 (IH, doublet, J = 5,1Hz), 5,11 (IH, doublet, J = 2,4Hz), 6,06 (IH, kvartet, J = 2,4 & 5,1Hz), 6.54 (IH, singlet), 8,27 (IH, singlet), 30 8,40 (IH, singlet).

Eksempel 88.

71(S)-acetoxy-71-deoxygriseolsyre (forbindelse nr. 141).

Ved rensemetoden med en Rp-8 kolonne, som beskrevet i eksempel 87, blev det andet spidsmateriale, der blev elueret med vand, 35

DK 166323 B

144 indeholdende 10% volumen/volumen acetonitril, opsamlet og lyofiliseret til opnåelse af 200 mg af titelforbindelsen i form af et lysegult pulver.

5 Ultraviolet absorptionsspektrum (^0) λ nm (ε): max 205 (27700), 257 (16100).

10

Kernemagnetisk resonansspektrum (hexadeuteret dimethylsulf= oxid) δ ppm: 4,63 (IH, doublet, J = 5,1Hz), 15 5,13 (IH, doublet, J = 2,1Hz), 5,49 (IH, singlet), 6,07 (IH, kvartet, J = 2,1 & 5,1Hz), 6,56 (IH, singlet), 8,23 (IH, singlet), 20 8,38 (IH, singlet).

Eksempel 89.

2'

Dimethyl-0 -benzoylgriseolat (forbindelse nr. 76).

25 2 1 28,6 g O -benzoylgriseolsyre (fremstillet som beskrevet i eksempel 14) blev suspenderet i 500 ml methanol, og 41,2 ml benzoylchlorid blev tildryppet i løbet af 15 minutter under isafkøling og omrøring. Blandingen blev omrørt i 1 time under 30 de samme betingelser, og derpå omrørt i yderligere 26 timer ved stuetemperatur. Opløsningsmidlet blev derefter afdestilleret, og resten blev opløst i en blanding af ethylacetat med en 20% vægt/volumen vandig opløsning af natriumbicarbonat.

Det organiske lag blev derpå skilt fra, vasket med vand og 3 5 tørret over vandfrit magnesiumsulfat, og opløsningsmidlet blev afdestilleret. Resten blev opløst i ethylacetat og ethanol, og opløsningsmidlerne blev afdestilleret, hvorpå

DK 166323 B

145 krystaller blev udfældet. Disse krystaller blev filtreret fra i et udbytte på 13,8 g. Moderluden blev yderligere kondenseret til ca. 100 ml og blev hældt i 1 liter hexan under omrøring. Det udfældede pulver blev filtreret fra og renset 5 ved hjælp af silicagel-søjlekromatografi til opnåelse af 12,5 g af titelforbindelsen (samlet udbytte 82,5%).

Ultraviolet absorptionsspektrum (E^O) 10 VxnmU): 229,5 (19300), 256,5 (17400).

Kernemagnetisk resonansspektrum (hexadeuteret dimethylsulf= 15 oxid) δ ppm: 4,65 (IH, singlet), 5,25 (IH, doublet, J = 3,0Hz), 5,86 (IH, doublet, J = 6,0Hz), 20 6,40 (IH, doublet af doubletter, J = 3,0 & 6,0Hz), 7,02 (IH, singlet), 8,30 (IH, singlet), 8,41 (IH, singlet).

25 Eksempel 90 2' 7'

Dimethyl-0 -benzoyl-0 -(tetrahydropyran-2-yl)-qriseolat (forbindelse nr. 246).

q n 2' 25,6 g dimethyl-0 -benzoylgriseolat (fremstillet som beskrevet i eksempel 89) blev suspenderet i 250 ml dioxan, og 10,5 g p-toluensulfonsyre blev tilsat til suspensionen til dannelse af en klar gul opløsning. 137 ml 2,3-dihydropyran blev sat til denne klare opløsning, og blandingen blev omrørt i 2,5 35 time ved stuetemperatur. 4,2 g vandfrit kaliumcarbonat blev derpå tilsat til reaktionsblandingen, og opløsningsmidlet blev afdestilleret. Resten blev opløst i en blanding af ethyl=

DK 166323 B

146 acetat med en mættet vandig opløsning af natriumbicarbonat.

Det organiske lag blev skilt fra, vasket med vand og tørret over vandfrit magnesiumsulfat. Tørremidlet blev filtreret fra, hvorefter opløsningsmidlet blev afdestilleret. Hexan blev sat til resten, og supernatanten blev fjernet. Den re-5 sterende opløsning blev renset ved hjælp af silicagel-søjle- kromatografi til opnåelse af 26,1 g (87,6%) af titelforbindelsen.

Ultraviolet absorptionsspektrum (H20) 10 λ „ nm (ε): max 230 (18100), 257 (17000).

15 Kernemagnetisk resonansspektrum (hexadeuteret dimethylsulf= oxid) 6 ppm: 4,54 & 4,81 (IH, singlet), 5,19 & 5,36 (IH, doublet, J = 3,0Hz), 20 5,84 (IH, doublet, J = 6,0Hz), 6,41 (IH, doublet af doubletter, J = 3,0 & 6,0Hz), 7,07 (IH, singlet), 8,28 (IH, singlet), 8,40 (IH, singlet).

25

Eksempel 91.

7'

Dimethyl-0 -(tetrahydropyran-2-yl)griseolat (forbindelse nr. 101).

30 2' 7 1 20 g dimethyl-0 -benzoyl-0 -(tetrahydropyran-2-yl)griseo= lat (fremstillet som beskrevet i eksempel 90) blev opløst i 150 ml vandfri methanol, og 16,8 ml IN natriummethoxid i methanol blev tilsat under isafkøling. Blandingen blev omrørt i2 timer. Eddikesyre blev derpå tilsat til reaktionsblandingen, og blandingens pH-værdi blev indstillet på en værdi

DK 166323 B

147 på ca. 8. Opløsningsmidlet blev derefter afdestilleret. Ethylacetat og vand blev sat til resten, og det organiske lag blev skilt fra, vasket med vand og derefter tørret over vandfrit magnesiumsulfat. Tørremidlet blev derpå filtreret 5 fra, og opløsningsmidlet blev destilleret fra filtratet, som derefter blev renset ved hjælp af silicagel-søjlekromatografi til opnåelse af 16,3 g (98,6%) af titelforbindelsen.

Ultraviolet absorptionsspektrum (H20) 10 λ nm (ε): max 257 (16000).

15 Kernemagnetisk resonansspektrum (hexadeuteret dimethylsulf= oxid) 6 ppm: 4,65 (IH, doublet, J = 6,0Hz), 4,81 (IH, singlet), 20 5,17 (IH, doublet, J = 3,0Hz), 6,17 (IH, doublet af doubletter, J = 3,0 & 6,OHz), 6,59 (IH, singlet), 8,28 (IH, singlet), 8,41 (IH, singlet).

25

Eksempel 92.

7' 2'

Dimethyl-0 -(tetrahydropyran-2-yl)-O -trifluormethansulfonyl= griseolat (forbindelse nr. 105).

30 7 1 16,3 g dimethyl-0 -(tetrahydropyran-2-yl)-griseolat (fremstillet som beskrevet i eksempel 91) og 8,1 g 4-(dimethyl= amino)pyridin blev opløst i 300 ml tørt methylenchlorid.

7,04 ml trifluormethansulfonylchlorid blev derpå tilsat under 35 nitrogengasstrøm og med afkøling ved hjælp af tøris/acetone.

Blandingen blev omrørt i 3 timer med isafkøling. Is-vand blev

DK 166323B

148 tilsat til reaktionsblandingen, og det organiske lag blev skilt fra og vasket føst med is-vand, derpå med en mættet vandig opløsning af natriumbicarbonat og til slut med en mættet vandig opløsning af natriumchlorid. Det blev derpå tør-5 ret over vandfrit magnesiumsulfat, og tørremidlet derefter fjernet ved filtrering. Opløsningsmidlet blev derefter afdestil-leret, og resten blev renset ved hjælp af silicagel-søjlekromatografi til opnåelse af 14,8 g (71,6%) af titelforbindelsen.

10 Ultraviolet absorptionsspektrum (H20) λ nm (ε): max 257 (16200).

15

Kernemagnetisk resonansspektrum (hexadeuteret dimethylsulf= oxid) δ ppm: 4,15 (IH, singlet), 20 5,29 & 5,50 (IH, doublet, J = 3,0Hz), 6.05 (IH, doublet, J = 6,:Hz), 6,45 (IH, doublet af doubletter, J = 3,0 & 6,0Hz), 7,36 (IH, singlet), 8,28 (IH, singlet), 25 8,40 (IH, singlet).

Eksempel 93.

7 1

Dibenzhydryl-0 -(tetrahydropyran-2-yl)griseolat (forbindelse 30 nr. 102).

17.5 ml methanol og 175 ml af en IN vandig opløsning af na= . 2' 71 trijmhydroxid blev sat til 26,1 g dimethyl-0 -benzoyl-0 -(tetrahydropyran-2-yl)griseolat (fremstillet som beskrevet 35 i eksempel 90), og blandingen blev omsat i ca. 20 timer under omrøring ved stuetemperatur. Opløsningsmidlet blev derpå af-

DK 166323B

149 destilleret ved en temperatur under 30°C, og resten blev opløst i 500 - 700 ml acetone og 100 - 150 ml vand. 3 ækvivalenter diphenyldiazomethan blev sat til denne opløsning, medens den blev beskyttet mod lys. Blandingens pH-værdi blev 5 justeret til en værdi på 1,5 med 3N saltsyre og omrøringen blev fortsat (pH-værdien steg gradvis til 3). Efter 2,5 -4 timers forløb blev en 20% vægt/volumen vandig opløsning af natriumbicarbonat sat til reaktionsblandingen, og blandingens pH-værdi blev justeret til en værdi på 8 - 9. Opløsningsmid-10 let blev derpå destilleret fra blandingen. Resten blev opløst i en blanding af ethylacetat og vand. Det organiske lag blev skilt fra, vasket med vand og tørret over vandfrit magnesium= sulfat. Tørremidlet blev filtreret fra,og resten blev renset ved silicagel-kromatografi til opnåelse af 16,0 g (46%) af 15 titelforbindelsen.

Ultraviolet absorptionsspektrum (H^O) λ nm (ε): max 20 257 (17000).

Kernemagnetisk resonansspektrum (hexadeuteret dimethylsulf= oxid) 5 ppm: 25 4,67 (IH, doublet, J = 6,0Hz), 4,83 & 5,00 (IH, singlet), 5,20 & 5,30 (IH, doublet, J = 3,0Hz), 6,3 - 6,5 (IH, bred multiplet), 30 6,55 (IH, singlet), 8,17 (IH, singlet), 8,36 (IH, singlet).

Eksempel 94.

7 1 2 1

Dibenzhydryl-0 -(tetrahydropyran-2-yl)-0 -trifluormethan= sulfonylgriseolat (forbindelse nr. 106).

35

DK 166323 B

150 7' 12,8 g dibenzhydryl-0 -(tetrahydropyran-2-yl)-griseolat (fremstillet som beskrevet i eksempel 93) og 5,9 g 4-(dime= thylamino)pyridin blev opløst i 300 ml tørt methylenchlorid.

5,17 ml trifluormethansulfonylchlorid blev tilsat til opløs-5 ningen under en nitrogengasstrøm og under afkøling med tør- is/acetone. Blandingen blev derpå omrørt ved stuetemperatur i 2 - 2,5 time, hvorefter is-vand blev sat til reaktionsblandingen. Det organiske lag blev skilt fra og vasket først med en mættet vandig opløsning af natriumbicarbonat og derpå med 10 en mættet vandig opløsning af natriumchlorid og tørret over vandfrit magnesiumsulfat. Tørremidlet blev filtreret fra,og opløsningsmidlet blev afdestilleret. Resten blev renset ved hjælp af silicagel-søjlekromatografi og derpå lyofiliseret fra benzen til opnåelse af 10,54 g (71,5%) af titelforbind-15 elsen.

Ultraviolet absorptionsspektrum (^0) λ nm (ε): max 20 257,5 (17300).

Kernemagnetisk resonansspektrum (hexadeuteret dimethylsulf= oxid) δ ppm: 25 4,90 (IH, singlet), 5,29 & 5,53 (IH, doublet, J = 3,0Hz), 6,10 (IH, doublet, J = 6,0Hz), 6,7-6,9 (overlapning med benzhydryl H), 30 7,1-7,8 (overlapning med benzen), 8,13 (lH, singlet), 8,40 (IH, singlet).

Eksempel 95.

2'(S)-chlor-2'-deoxygriseolsyre (forbindelse nr. 142).

35

DK 166323 B

151 7' 2 ' 2 g dimethyl-0 -(tetrahydropyran-2-yl)-0 -trifluormethansul= fonylgriseolat (fremstillet som beskrevet i eksempel 92) blev sat til 20 ml dimethylformamid efterfulgt af 1,4 g vandfrit lithiumchlorid, og blandingen blev omrørt ved 60°C (med opvarm-5 ning) i 4 timer- Opløsningsmidlet blev derpå afdestilleret, og resten blev opløst i en blanding af ethylacetat og vand.

Den resulterende blandings pH-værdi blev indstillet på 4,5 -6, og opløsningen blev derpå ekstraheret med ethylacetat. Ekstrakten blev tørret over vandfrit magnesiumsulfat, og tør- 10 remidlet blev filtreret fra. Opløsningsmidlet blev destilleret . 7' fra resten til opnåelse af dimethyl-2'(S)-chlor-2'-deoxy-0 (tetrahydropyran-2-yl)-griseolat.

Denne forbindelse blev i form af et karamellignende stof op-15 løst i en 80% volumen/volumen vandig opløsning af eddikesyre, og opløsningen blev tilbagesvalet i 1 time. Opløsningsmidlet blev derpå destilleret fra reaktionsproduktet til opnåelse af dimethyl-2'(S)-chlor-2'-deoxygriseolat, som derpå blev opløst i en IN vandig opløsning af natriumhydroxid. Opløs-20 ningen blev omrørt i 4 timer ved stuetemperatur. Reaktions produktets pH-værdi blev derpå indstillet på 2 med koncentreret saltsyre, og opløsningen blev renset ved kromatografi gennem en Rp-8 forudpakket kolonne (Merck), elueret med en 5% volumen/volumen vandig opløsning af acetonitril indeholdende 25 0,02% volumen/volumen eddikesyre til opnåelse af 0,18 g (14,2%) af titelforbindelsen.

Ultraviolet absorptionsspektrum (methanol) 30 λ. nm (ε): max 257 (15000).

Kernemagnetisk resonansspektrum (hexadeuteret dimethylsulf= 25 oxid) 6 ppm:

DK 166323 B

152 4,54 (IH, singlet), 5.21 (IH, triplet, J = 8,3Hz), 5.22 (IH, doublet, J = 3,0Hz), 6,25 (IH, doublet af doubletter, J = 3,0 & 9,6Hz), 5 7,14 (IH, doublet, J = 8,3Hz), 8.22 (IH, singlet), 8.36 (IH, singlet).

Eksempel 96.

10 21(S)-brom-2'-deoxyqriseolsyre (forbindelse nr. 143).

De i eksempel 95 beskrevne fremgangsmåder blev gentaget, bortset fra, at vandfrit lithiumbromid blev anvendt i stedet for chloridet, og reagenserne blev opvarmet til 60°C i kun 30 -50 minutter til dannelse af titelforbindelsen.

Ultraviolet absorptionsspektrum (methanol) 20 λ nm (ε): max 257,5 (15400).

Kernemagnetisk resonansspektrum (hexadeuteret dimethylsulf= 25 oxid) δ ppm: 4,52 (IH, singlet), 5,17 (IH, triplet, J = 8,3Hz), 5,21 (IH, doublet, J * 3,0Hz), 30 6,30 (IH, doublet af doubletter, J = 3,0 & 9,6Hz), 7,39 (IH, doublet, J = 8,3Hz), 8.23 (IH, singlet), 8.36 (IH, singlet).

35

DK 166323 B

153

Eksempel 97.

21-deoxygriseolsyre (forbindelse nr. 144).

7 ' 2 1 5 2,5 g dibenzhydryl-0 -(tetrahydropyran-2-yl)-0 -trifluor= methansulfonylgriseolat (fremstillet som beskrevet i eksempel 94) blev opløst i 12 ml hexamethylphosphortriamid, hvorefter vandfrit lithiumbromid blev tilsat. Blandingen blev omsat i 4 - 5 timer på en ultralydvasker (op til 35°C). Reaktions- 10 produktet blev derpå omrørt natten over ved stuetemperatur.

Det blev derpå langsomt hældt i is-vand indeholdende natrium= chlorid. Bundfaldet blev filtreret fra og vasket med is-vand og derpå med hexan. Det blev derpå opløst i ethylacetat,og opløsningen blev tørret over vandfrit magnesiumsulfat. Tør- 15 remidlet blev filtreret fra, og filtratet blev lyofiliseret 7' fra benzen til dannelse af dibenzhydryl-2,-brom-2'-deoxy-0 -(tetrahydropyran-2-yl)griseolat, som derpå blev opløst i 5 ml methylenchlorid. 15 - 20 ml ethanol og 0,73 g pyridin-p-toluensulfonat blev sat til denne opløsning, og blandingen 20 fik lov til at reagere ved 60°C i 10 - 12 timer. Opløsnings midlet blev derpå filtreret fra blandingen, og resten blev opløst i methylenchlorid. Opløsningen blev vasket med vand og tørret over vandfrit magnesiumsulfat. Tørremidlet blev filtreret fra, og opløsningsmidlet blev afdestilleret. Resten 25 blev renset ved hjælp af silicagel-søjlekromatografi til opnåelse af 0,9 g dibenzhydryl-2'-brom-2'-deoxygriseolat.

0,83 g af denne forbindelse og ca. 10 mg azobisisobutyroni= tril blev opløst i 20 ml benzen, og 0,7 ml tributyltinhydrid 50 blev derpå tilsat under en nitrogengasstrøm. Blandingen blev derpå tilbagesvalet i 45 minutter. Opløsningsmidlet blev derefter destilleret fra reaktionsproduktet, og resten blev renset ved silicagel-søjlekromatografi til opnåelse af 0,72 g di= benzhydryl-2'-deoxygriseolat.

Denne forbindelse blev opløst i 5 ml anisol, og 5 ml trifluor-eddikesyre blev derpå tilsat under is-afkøking. Blandingen 35

DK 166323 B

154 blev henstillet i 15 minutter, hvorefter tørt toulen blev tilsat og opløsningsmidlet blev afdestilleret. Acetone og toluen blev sat til resten og blev derpå afdestilleret. Denne proces blev gentaget, hvorefter resten blev suspenderet 5 i en ringe mængde acetone. Hexan blev sat til suspensionen til omdannelse af det faste stof til pulver. Dette pulver blev filtreret fra og opløst i en mættet vandig opløsning af natriumbicarbonat. Opløsningens pH-værdi blev indstillet på 2,3 med 3N saltsyre, og opløsningen blev renset ved kro-10 matografi gennem en Rp-8 forudpakket kolonne (Merck) til op nåelse af 0,237 g af titelforbindelsen ved eluering med en 3% volumen/volumen vandig opløsning af acetonitril indeholdende 0,02% volumen/volumen eddikesyre.

15 Ultraviolet absorptionsspektrum (methanol) λ nm (ε): max 257.5 (15800).

20

Kernemagnetisk resonansspektrum (hexadeuteret dimethylsulf= oxid) 5 ppm: 2,76 (IH, bred multiplet), ^ 4,5 (IH, singlet), 4,94 (IH, doublet, J = 3,0Hz), 6.05 (IH, bred multiplet), 6,90 (IH, bred multiplet), 8,24 (IH, singlet), 30 8,40 (IH, singlet).

Eksempel 98.

21(S)-azido-2'-deoxygriseolsyre (forbindelse nr. 247).

7 1 2' 2 g dibenzhydryl-0 -(tetrahydropyran-2-yl)-0 -tnfluorme= thansulfonylgriseolat (fremstillet som beskrevet i eksempel 35

DK 166323B

155 94) blev opløst i 8 ml hexamethylphosphortriamid. 0,28 g na= triumacid blev sat til opløsningen, og blandingen blev omrørt i 3 timer ved stuetemperatur. Reaktionsproduktet blev hældt i is-vand indeholdende natriumchlorid. Bundfaldet blev 5 filtreret fra og vasket med vand og derpå opløst i ethylace= tat og tørret over vandfrit magnesiumsulfat. Opløsningsmidlet blev afdestilleret, og resten blev renset ved hjælp af silicagel-kromatografi til opnåelse af 0,86 g dibenzhydryl- 7 1 2'(S)-azido-2'-deoxy-0 -(tetrahydropyran-2-yl)griseolat.

10 0,86 g af denne forbindelse og 0,13 g pyridin-p-toluensulfonat blev opløst i 1 ml methylenchlorid og 5 ml ethanol, og blandingen blev opvarmet til 50°C i 12 timer. Yderligere 0,13 g pyridin-p-toluensulfonat blev derpå tilsat, og blandingen 15 blev omsat i yderligere 17 timer ved 60°C. Opløsningsmidlet blev afdestilleret, og resten blev opløst i methylenchlorid.

Den resulterende opløsning blev vasket med vand og tørret over vandfrit magnesiumsulfat. Opløsningsmidlet blev destilleret fra reaktionsproduktet, og resten blev renset ved hjælp 2 0 af silicagel-kromatografi til opnåelse af 0,36 g dibenzhy= dryl-21(S)-azido-2'-deoxy-griseolat.

0,36 g af denne forbindelse blev opløst i 3 ml anisol, hvorefter 3 ml trifluoreddikesyre blev tilsat under isafkøling.

25 Blandingen blev henstillet i 15 minutter, hvorefter der blev tilsat tør toluen, og opløsningsmidlet blev afdestilleret fra blandingen.

Acetone-toluen blev tilsat, og opløsningsmidlet blev afdestil-20 leret. Denne proces blev gentaget 2 gange. Resten blev op løst i en ringe mængde acetone, hvortil der blev tilsat hexan til omdannelse af det faste stof til et pulver. Dette pulver blev filtreret fra og blev opløst i en mættet vandig opløsning af natriumbicarbonat. Denne opløsnings pH-værdi blev 3 5 indstillet på 2,4, og opløsningen blev derpå renset ved kromatografi gennem en Rp-8 forudpakket kolonne (Merck), elueret med en 5% volumen/volumen vandig opløsning af acetonitril

DK 166323 B

156 indeholdende 0,02% volumen/volumen eddikesyre til opnåelse af 0,14 g af titelforbindelsen.

Ultraviolet absorptionsspektrum (methanol) 5 λ nm (ε): max 257 (15800).

10 Kernemagnetisk resonansspektrum (hexadeuteret dimethylsulf= oxid) δ ppm: 4,51 (IH, singlet), 5,01 (IH, triplet, J = 8,3Hz), 15 5,13 (IH, doublet, J = 3,0Hz), 6,08 (IH, doublet af doubletter, J = 3,0 & 9,6Hz), 7,06 (IH, doublet, J = 8,3Hz), 8,20 (IH, singlet), 8,29 (IH, singlet).

20

Eksempel 99.

21(S)-amino-2'-deoxyqriseolsyre (forbindelse nr. 248).

25 1,5 ml vand og 6 ml pyridm blev sat til 0,1 g 2f(S)-azido-2' -deoxygriseolsyre (fremstillet som beskrevet i eksempel 98). Luften i kolben blev erstattet med nitrogengas, og opløsningen blev derpå mættet med hydrogensulfid ved stuetemperatur. Beholderen blev lukket tæt og henstillet ved stuetemperatur i 7 - 8 timer og derpå henstillet ved 5°C natten over. Opløsningsmidlet blev afdestilleret, og vand blev sat til resten og derpå afdestilleret. Denne proces blev gentaget, og resten blev opløst i 0,1N satsyre. Det uopløselige stof blev filtreret fra, og filtratets pH-værdi blev indstillet på 2,3 35 med en mættet vandig opløsning af natriumbicarbonat. Opløsningen blev derpå renset ved kromatografi gennem en Rp-8 for-udpakket kolonne (Merck), elueret med en 3% volumen/volumen

DK 166323 B

157 vandig opløsning af acetonitril indeholdende 0,02¾ volumen/ volumen eddikesyre til opnåelse af 93 mg af titelforbindelsen.

Ultraviolet absorptionsspektrum (methanol) 5 nm (£): max 256,5 (15600).

10 Kernemagnetisk resonansspektrum (hexadeuteret dimethylsulf= oxid) 6 ppm: 3,7-4,44 (overlapning med H^O), 4,44 (IH, singlet), 15 4,95 (IH, doublet, J = 3,0Hz), 5,86 (IH, bred multiplet), 6,76 (IH, bred doublet), 8,20 (IH, singlet), 8,24 (IH, singlet).

20

Eksempel 100.

2 '-deoxy^' (S)-iodoqriseolsyre (forbindelse nr. 249).

1,37 g dibenzhydryl-0 -(tetrahydropyran-2-yl)-0 -trifluor= methansulfonylgriseolat (fremstillet som beskrevet i eksempel 94) blev opløst i 4 ml hexamethylphosphortriamid, hvorpå 0,8 g vandfrit lithiumjodid blev tilsat. Blandingen blev henstillet i 5 - 6 timer ved stuetemperatur. Yderligere 1 ml hexa= 30 methylphosphortriamid blev sat til reaktionsblandingen, og blandingen fik lov til at reagere i 6 - 7 timer på en ultralydvasker (indtil 40°C). Reaktionsproduktet blev derpå hældt i is-vand. Bundfaldet blev filtreret fra, vasket med vand, opløst i ethylacetat og tørret over vandfrit magnesiumsul= 35 fat. Opløsningsmidlet blev afdestilleret, og resten blev renset ved hjælp af silicagel-kromatografi til opnåelse af 0,5 g

DK 166323B

158 7 1 dibenzhydryl-2'-deoxy-21(S)-jodo-0 -(tetrahydropyran-2-yl)= griseolat.

En portion på 0,5 g af denne forbindelse blev opløst i 1 ml 5 methylenchlorid, og 0,14 g pyridin-p-toluensulfonat og 10 ml ethanol blev sat til opløsningen. Blandingen blev opvarmet til 60°C i 8 timer. Opløsningsmidlet blev destilleret fra reaktionsblandingen,og resten blev opløst i en blanding af ethylacetat og vand. Det organiske lag blev skilt fra og tør-10 ret over vandfrit magnesiumsulfat. Opløsningsmidlet blev der på destilleret fra reaktionsproduktet, og resten blev renset ved hjælp af silicagel-kromatografi til opnåelse af 0,35 g dibenzhydryl-2'-deoxy-2'(S)-jodogriseolat.

15 En portion på 0,32 g af denne forbindelse blev opløst i 3 ml anisol, hvorefter 3 ml trifluoreddikesyre blev tilsat under isafkøling. Blandingen blev henstillet i 30 minutter. Tør toluen blev derefter tilsat, og opløsningsmidlet blev destilleret fra reaktionsproduktet. Acetone og toluen blev sat til 20 resten og derpå afdestilleret. Denne proces blev gentaget 2 gange. Resten blev suspenderet i en ringe mængde acetone, som der var tilsat hexan til. Det resulterende bundfald blev filtreret fra. Dette bundfald blev opløst i en mættet vandig opløsning af natriumbicarbonat, og det uopløselige stof blev 25 fjernet. Restens pH-værdi blev indstillet på 2,4 med 3N salt syre, og bundfaldet blev filtreret fra, vasket med vand og tørret til opnåelse af 160 mg af titelforbindelsen. Moderluden blev renset ved kromatografi gennem en Rp-8 forudpakket kolonne (Merck), elueret med en 5% volumen/volumen vandig 30 opløsning af acetonitril indeholdende 0,02% volumen/volumen eddikesyre, og fraktionen, som indeholdt titelforbindelsen, lyofiliseret til opnåelse af yderligere 0,01 g af titelforbindelsen.

O C

Ultraviolet absorptionsspektrum (methanol)

DK 166323 B

159 \nax nm (ε): 258 (15900).

5 Kernemagnetisk resonansspektrum (hexadeuteret dimethylsulf= oxid) δ ppm: 4,52 (IH, singlet), 5,00 (IH, triplet, J = 8,3Hz), 10 5,18 (IH, doublet, J = 3,0Hz), 6,29 (IH, doublet af doubletter, J = 3,0 & 9,6Hz), 6,96 (IH, doublet, J = 8,3Hz), 8,22 (IH, singlet), 8,34 (IH, singlet).

15

Eksempel 101.

2' 7'

Dimethyl-4'ff-acetoxy-O ,0 -diacetyl-5'-hydrogengriseolat (forbindelse nr. 170).

20 2' 7 ' 2,45 g dimethyl-O ,0 -diacetylgriseolat (fremstillet som beskrevet i eksempel 11) blev suspenderet i vandfri eddikesyre indeholdende 5% vægt/volumen hydrogenbromidsyre. Blandingen blev opvarmet under omrøring til 50°C i 20 minutter, 25 medens den blev beskyttet mod fugtighed. Opløsningsmidlet blev derpå afdestilleret. Acetone og toluen blev sat til resten og derpå afdestilleret. Dette skete 3 gange. Resten blev opløst i en blanding af 50 ml ethylacetat og 30 ml af en vandig opløsning af natriumbicarbonat.

30

Den organiske fase blev skilt fra og vasket, først med 30 ml af en 5% vægt/volumen vandig opløsning af natriumbicar= bonat,derpå med 30 ml vand og til slut med 30 ml af en mættet vandig opløsning af natriumchlorid. Den blev derpå tør-35 ret over vandfrit magnesiumsulfat,og opløsningsmidlet blev afdestilleret under reduceret tryk. Den karamellignende rest blev renset ved hjælp af silicagel-søjlekromatografi, elueret med en blanding af 3% volumen/volumen vandig methanol og me=

DK 166323 B

160 thylenchlorid. De ultraviolette absorptionsspektre af de resulterende fraktioner blev overvåget, og der blev således fra de første fraktioner opnået 210 mg af titelforbindelsen.

5 Ultraviolet absorptionsspektrum (methanol).

λ nm (ε): max 259 (16600).

10

Kernemagnetisk resonansspektrum (hexadeuteret dimethylsulf= oxid) δ ppm: 2,83 (IH, doublet, J = 15,0Hz), 15 3,20 (IH, doublet, J = 15,0Hz), 5,07 (IH, doublet, J = 4,2Hz), 5,62 (IH, singlet), 6,18 (IH, kvartet, J = 4,2 & 6,6Hz), 6,52 (IH, doublet, J = 6,6Hz), 20 8,29 (IH, singlet), 8,46 (IH, singlet).

Eksempel 102.

2' 7' 25 Dimethyl-0 ,0 -diacetyl-41 j3-brom-51 -hydroqengriseolat (forbindelse nr. 171).

Fra de fraktioner, som følger de fraktioner, der blev opsamlet i eksempel 101, blev der opnået 1,06 g af titelforbindelsen.

30

Ultraviolet absorptionsspektrum (methanol) λ nm (ε): max 35 258 (15300).

Kernemagnetisk resonansspektrum (hexadeuteret dimethylsulf= oxid) δ ppm:

DK 166323 B

161 2,98 (IH, doublet, J = 15,0Hz), 3,45 (IH, doublet, J = 15,0Hz), 5,38 (IH, doublet, J = 3,9Hz), 5.57 (IH, singlet), 5 6,40 (IH, kvartet, J = 3,9 & 6,0Hz), 6.58 (IH, doublet, J = 6,0Hz), 8,27 (IH, singlet), 8,51 (IH, singlet).

10 Eksempel 103.

2 · 7 >

Dimethyl-O ,0 -diacetyl-4' /3,5 1-dihydrogengriseolat (forbindelse nr. 172).

15 572 g dimethyl-0 ,0 -diacetyl-4'je-brom-5'-hydrogengriseolat (fremstillet som beskrevet i eksempel 102) blev opløst i 10 ml acetone. 10 ml 80% volumen/volumen vandig eddikesyre og 690 mg zinkpulver tilsat, og blandingen blev omrørt ved stuetemperatur i 4 timer og 20 minutter. Efter dette tidsrum blev 20 opløsningsmidlet afdestilleret, og resten blev opløst i en blanding af 10 ml vand og 20 ml ethylacetat. Opløsningens pH-værdi blev indstillet på 1 ved tilsætning af IN saltsyre# og urenhederne blev filtreret fra. Den organiske fase blev vasket, først med 20 ml af en mættet vandig opløsning af na= 25 triumchlorid og derpå med 20 ml af en 5% vandig opløsning af natriumdbicarbonat og tørret over vandfrit magnesiumsul= fat. Opløsningsmidlet blev afdestilleret under reduceret tryk, og resten blev renset ved kromatografi gennem en Rp-8 forud-pakket silicagel-kolonne (Merck), elueret med en blanding 20 af 3% volumen/volumen vandig methanol og methylenchlorid til opnåelse af 129 mg af titelforbindelsen i form af et farveløst karamellignende stof.

Ultraviolet absorptionsspektrum (methanol) 35

Vk (ε):

DK 166323 B

162 258 (13700).

Kernemagnetisk resonansspektrum (hexadeuteret dimethylsulf= oxid) δ ppm: 5 3,4-3,6 (multiplet), 5,00 (IH, multiplet), 5,63 (IH, singlet), 5,97 (IH, kvartet, J = 3,3 & 6,6Hz), 10 6,40 (IH, doublet, J = 6,6Hz), 8,23 (IH, singlet), 8,53 (IH, singlet).

Eksempel 104.

15 4'0,51-dihydrogenqriseolsyre (forbindelse nr. 173).

2' 7' 80 mg dimethyl-0 ,0 -diacetyl-4'j6,5'-dihydrogengriseolat (fremstillet som beskrevet i eksempel 103) blev sat til en 20 0,2N vandig opløsning af natriumhydroxid, og blandingen blev omdannet til en opløsning ved ultralydvibration i ca. 10 minutter. Opløsningen fik lov til at henstå i 2 timer, hvorefter dens pH-værdi blev indstillet på 2,3 ved tilsætning af IN saltsyre. Reaktionsblandingen blev derpå renset ved kroma-2^ tografi gennem en Rp-8 forudpakket kolonne (Merck), elueret med 10% volumen/volumen vandig acetonitril til opnåelse af 57 mg af titelforbindelsen i form af et hvidt pulver.

Ultraviolet absorptions spektrum (Η,,Ο) 30

Nnax ““ (ε,: 258 (13600).

35

Kernemagnetisk resonansspektrum (hexadeuteret dimethylsulf= oxid) 6 ppm:

DK 166323 B

163 4,40 (lH, singlet), 4,6-5,2 (3H, multiplet), 6,83 (IH, doublet, J = 6,9Hz), 8,22 (IH, singlet), 5 8,37 (IH, singlet).

Eksempel 105.

2 ' 7'

Dimethyl-4'g-acetoxy-O ,0 -diacetyl-6-desamino-51-hydro-6-10 hydroxyqriseolat (forbindelse nr. 174).

(i) 4 g dimethyl-0 ,0 -diacetyl-6-desamino-6-hydroxygriseo= lat (fremstillet som beskrevet i eksempel 50) blev anbragt i en tohalset kolbe forsynet med en svaler, og kolben blev 15 derpå renset med nitrogengas. 40 ml 4% vægt/volumen hydrogen= chlorid i ethylacetat blev tilsat, og blandingen blev opvarmet til 80°C i 2 timer. Derefter blev opløsningsmidlet afdestilleret under reduceret tryk. Resten blev opløst i en blanding af toluen og methylenchlorid,og destillationen blev gennemført 20 3 gange, idet toluen- og methylenchlorid blev tilsat før hver destillation. Resten blev ekstraheret med methylenchlorid og derpå vasket 3 gange med en mættet vandig opløsning af natriumbicarbonat. Ekstrakten blev tørret over vandfrit magnesiumsulfat og derpå inddampet til tørhed under reduceret 25 tryk. Resten blev renset ved hjælp af silicagel-søjlekroma- tografi, elueret med 1% volumen/volumen methanol i methylen= chlorid, hvilket giver 270 mg af titelforbindelsen.

2 1 7' (ii) 600 mg dimethyl-0 ,0 -diacetyl-6-desamino-6-hydroxy= 30 griseolat (fremstillet som beskrevet i eksempel 50) blev under kastet en Parr-katalytisk reduktion ved stuetemperatur og ved 3,4 bar i 6 timer under anvendelse af 70 ml eddikesyre og 600 mg platinoxid. Derefter blev reaktionsbeholderen renset med hydrogengas, og reaktionsblandingen blev filtreret. Vand 35 blev sat til reaktionsblandingen, som derpå blev ekstraheret 3 gange med methylenchlorid. Ekstrakterne blev opsamlet, tørret over vandfrit magnesiumsulfat og inddampet til tørhed

DK 166323 B

164 under reduceret tryk. Resten blev renset ved silicagel-søjlekromatografi, elueret med 3% volumen/volumeh methanol i me= thylenchlorid til opnåelse af 28 mg af titelforbindelsen.

2» 7« 5 (iii) 500 mg dimethyl-0 ,0 -diacetyl-6-desamino-6-hydroxy= griseolat (fremstillet som beskrevet i eksempel 50) blev anbragt i en tohalset kolbe, som derpå blev renset med nitrogengas. 100 ml blanding af 4 volumendele eddikesyre og 1 volumendel eddikesyreanhydrid blev tilsat til fremstilling af en 10 opløsning, hvorefter 2 ml trifluormethansulfonsyre blev tilsat under isafkøling. Blandingen blev omrørt ved stuetemperatur i 2 dage, og efter dette tidspunkt blev der tilsat 20 g na= triumacetat,og blandingen blev inddampet til tørhed. 100 ml methylenchlorid blev sat til resten,og opløsningen blev vasket 15 med en mættet vandig opløsning af natriumbicarbonat. Den van dige fase blev ekstraheret med 100 ml methylenchlorid, og den organiske fase blev blandet med ekstrakten og tørret over vandfrit magnesiumsulfat. Opløsningsmidlet blev derpå afdestilleret under reduceret tryk. Resten blev underkastet sili-20 cagel-søjlekromatografi. Eluering med methylenchlorid gav et sukkerderivat dannet ved spaltning af griseolsyreskelettet. Herefter blev elueringen fortsat under anvendelse af 1% vo-lumen/volumen methanol i methylenchlorid, og derefter 5% vo-lumen/volumen methanol i methylenchlorid til opnåelse af 129 25 mg af titelforbindelsen.

Ultraviolet absorptionsspektrum (50% volumen/volumen vandig methanol) λ nm (ε): max 30 248,5 (10200).

Kernemagnetisk resonansspektrum (CDCl^) δ ppm: 2,82 (lH, doublet, J = 16,5Hz), 35 3,34 (IH, doublet, J = 16,5Hz), 5,17 (IH, doublet, J = 4,3Hz), 5,87 (IH, singlet), 6,08 (IH, doublet af doubletter, J = 4,3 & 7,3Hz),

DK 166323B

165 6,64 (IH, doublet, J = 7,3Hz), 8,18 (IH, singlet), 8,40 (IH, singlet).

5 Eksempel 106.

2' 7'

Dimethyl-4'q-acetoxy-0 ,0 -diacetyl-6-desamino-51-hydro-6-hydroxygriseolat (forbindelse nr. 175).

Den i eksempel 105 (iii) beskrevne fremgangsmåde blev gentaget. Reaktionsblandingen blev renset ved hjælp af silicagel-søjlekromatografi, idet der først blev elueret med 1% volumen/ volumen methanol i methylenchlorid, og derpå med 5% volumen/ volumen methanol i methylenchlorid til opnåelse af 64 mg af 15 titelforbindelsen.

Ultraviolet absorptionsspektrum (50% volumen/volumen vandig methanol) λ nm (ε): max 20 248,5 (10200).

Kernemagnetisk resonansspektrum (CDCl^) δ ppm: 3,03 (IH, doublet, J = 15,1Hz), ^ 3,50 (IH, doublet, J = 15,1Hz), 5,13 (IH, doublet af doubletter), 5,67 (IH, doublet), 5.71 (IH, singlet), 6.72 (IH, doublet, J = 5,4Hz), 8,02 (IH, singlet), 8,61 (IH, singlet).

Eksempel 107.

·> c , 2' 71

Dimethyl-0 ,0 -diacetyl-4'g-chlor-e-desammo-S'-hydro-6-hydroxyqriseolat (forbindelse nr. 176).

Den i eksempel 105 (i) beskrevne fremgangsmåde blev gentaget.

DK 166323 B

166

Reaktionsblandingen blev renset ved hjælp af silicagel-søjle-kromatografi, elueret med 4% volumen/volumen methanol i me= thylenchlorid, til opnåelse af 2,0 g af titelforbindelsen.

5 Ultraviolet absorptionsspektrum (50% volumen/volumen van dig methanol) λ nm (ε): max 248 (9500).

10 Kernemagnetisk resonansspektrum (en blanding af lige volumen dele D2O og hexadeuteret dimethylsulfoxid) 5 ppm: 3,32 (IH, doublet, J = 15,0Hz), 3,75 (IH, doublet, J = 15,0Hz), 15 5,28 (IH, doublet, J = 4,5Hz), 6,00 (IH, singlet), 6,28 (IH, doublet af doubletter, J = 4,5 & 5,9Hz), 6,55 (IH, doublet, J = 5,9Hz), 8,18 (IH, singlet), 20 8,47 (IH, singlet).

Eksempel 108.

2' 71

Dimethyl-O ,0 -diacetyl-4 lj3-brom-6-desamino-5 * -hydro-6-25 hydroxygriseolat (forbindelse nr. 177).

2' 7 1 500 mg dimethyl-0 ,0 -diacetyl-6-desamino-6-hydroxygnseo= lat (fremstillet som beskrevet i eksempel 50) blev sat til 10% vægt/volumen hydrogenbromidsyre i eddikesyre, og blandingen 30 blev opløst ved ultralydvibration i 30 minutter.

Opløsningen fik lov til at henså i 64 timer ved stuetemperatur, hvorefter opløsningsmidlet blev afdestilleret under reduceret tryk. Der blev destilleret tre gange, idet der hver gang 35 først til resten blev tilsat acetone og toluen. 30 ml ethyl= acetat blev sat til resten, og blandingen blev underkastet ultralyd.vibration. Uopløseligt stof blev filtreret fra og

DK 166323 B

167 opløst i 30 ml ethylacetat og en 5% vægt/volumen vandig opløsning af natriumbicarbonat. Den organiske fase blev vasket med 20 ml af en mættet vandig opløsning af natriumchlorid og tørret over vandfrit magnesiumsulfat. Opløsningsmidlet 5 blev afdestilleret under reduceret tryk, og resten blev renset ved hjælp af silicagel-søjlekromatografi og derpå lyofiliseret fra benzen til opnåelse af 60 mg af titelforbindelsen i form af et hvidt pulver.

10 Ultraviolet absorptionsspektrum (methanol)

Vx nm U): 244 (14200), 249 skulder (13800), 270 skulder (6000).

15

Kernemagnetisk resonansspektrum (hexadeuteret dimethylsulf= oxid) δ ppm: 2,98 (IH, doublet, J = 15,6Hz), 20 3,47 (IH, doublet, J = 15,6Hz), 5,35 (IH, doublet, J = 4,2Hz), 5,57 (IH, singlet), 6,32 (IH, kvartet, J = 4,2 & 6,6Hz), 6,53 (IH, doublet, J = 6,6Hz), 25 8,17 (IH, singlet), 8,47 (IH, singlet).

Eksempel 109.

2 · 7» 30 Dimethyl-0 ,0 -diacetyl-6-desamino-4*0,5'-dihydro-6-hy= droxygriseolat (forbindelse nr. 178).

21 7 1 (i) 500 mg dimethyl-0 ,0 -diacetyl-4'/3-chlor-6-desamino- 5'-hydro-6-hydroxygriseolat (fremstillet som beskrevet i 35 eksempel 107), 10 mg 2,21-azobisisobutyronitril, 20 ml benzen og 3,1 ml tributyltinhydrid blev tilsat i nævnte rækkefølge til en reaktionsbeholder, og blandingen blev tilbagesvalet

DK 166323 B

168 under omrøring under nitrogenatmosfære i 2 timer. Opløsningsmidlet blev derpå afdestilleret,og resten blev renset ved silicagel-søjlekromatografi, elueret med 3% volumen/volumen methanol i methylenchlorid, til opnåelse af 350 mg af titel-5 forbindelsen.

21 7' (ii) 600 mg dimethyl-0 ,0 -diacetyl-6-desamino-6-hydroxy= griseolat {fremstillet som beskrevet i eksempel 50) blev underkastet Parr-katalytisk reduktion ved stuetemperatur og 10 ved 50 psig i 6 timer under anvendelse af 70 ml eddikesyre og 600 mg platinoxid. Derefter blev beholderen renset med nitrogen, hvorefter reaktionsblandingen blev filtreret. Vand blev sat til filtratet, som blev ekstraheret tre gange, hver gang med 50 ml methylenchlorid. Den organiske fase blev skilt 15 fra, tørret over vandfrit magnesiumsulfat, og opløsningsmidlet blev afdestilleret under reduceret tryk. Resten blev renset ved silicagel-søjlekromatografi, elueret med 70% volumen/ volumen benzen i acetone, til opnåelse af 60 mg af titelforbindelsen.

20

Ultraviolet absorptionsspektrum (50% volumen/volumen vandig methanol) λ nm (ε): max 248,7 (10400).

25

Kernemagnetisk resonansspektrum (en blanding af lige volumendele D2O og CDCl^) δ ppm: 2,4-2,7 (multiplet), 30 5,00 (IH, doublet, J = 4,5Hz), 5,62 (IH, singlet), 5,88 (IH, doublet af doubletter, J = 4,5 & 7,5Hz), 6,48 (IH, doublet, J = 7,5Hz), 8,13 (IH, singlet), 35 8,48 (IH, singlet).

DK 166323 B

169

Eksempel 110.

6-desamino-41 g,51-dihydro-6-hydroxygriseolsyre (forbindelse nr. 179).

5 2 ' 7 ' 350 g dxmethyl-0 ,0 -dxacetyl-6-desamxno-5'-hydro-41j3,51-hydroxygriseolat (fremstillet som beskrevet i eksempel 109) blev under isafkøling opløst i 20 ml IN vandig natriumhydroxid, og opløsningen fik lov til at henstå ved stuetemperatur i 10 2 timer. Derefter blev reaktionsblandingens pH-værdi indstil let på 1 med saltsyre under isafkøling. Denne blanding blev underkastet Rp-18 omvendt fase-søjlekromatografi, elueret med en blanding af 3% volumen/volumen acetonitril, 0,3% vo-lumen/volumen eddikesyre og vand. Eluatet blev lyofiliseret 15 til opnåelse af 140 mg af titelforbindelsen.

Ultraviolet absorptionsspektrum (^0) W nm U): 20 248,5 (11800).

Kernemagnetisk resonansspektrum (en blanding af lige volumendele D2O og hexadeuteret dimethylsulfoxid) δ ppm: 25 2,46 (IH, doublet af doubletter, J = 7,5 & 14,3Hz), 2,58 (IH, doublet af doubletter, J = 2,3 & 14,3Hz), 4,32 (IH, singlet), 4,63 (IH, doublet af doubletter), 30 4,77 (IH, doublet af doubletter), 6,00 (IH, doublet, J = 7,8Hz), 8,06 (IH, singlet), 8,28 (IH, singlet).

35 Eksempel 111.

* 21 71

Dxmethyl-0 ,0' -diacetyl-51g-chlor-6-desamino-6-hydroxy-4'ff-methoxygriseolat (forbindelse nr. 180).

DK 166323 B

170 2 1 7' 500 mg dimethyl-0 ,0 -diacetyl-6-desamino-6-hydroxygriseo= lat (fremstillet som beskrevet i eksempel 50) blev opløst i vandfri methanol og opløsningen blev isafkølet. 1 ml (ca.

1,56 mmol) carbontetrachlorid indeholdende 11,05% vægt/vægt 5 chlor blev tilsat, og blandingen blev under isafkøling omsat i 2 timer. Derefter blev det resterende chlor dekomponeret med natriumhydrogensulfit,og opløsningsmidlet blev afdestilleret under reduceret tryk. Resten blev renset ved hjælp af silica-gel-søjlekromatografi, elueret med en 1% volumen/volumen op-løsning af methanol i methylenchlorid, til opnåelse af 412 mg af titelforbindelsen.

Ultraviolet absorptionsspektrum (50% volumen/volumen vandig methanol) λ nm (ε): max 15 248.5 (9300).

Kernemagnetisk resonansspektrum (en blanding af lige volumendele D2O og CDClg) 6 ppm: 20 3,41 (IH, singlet), 4,72 (IH, doublet, J = 6,3Hz), 5,64 (IH, doublet af doubletter, J = 4,5 & 6,3Hz), 5,88 (IH, singlet), 25 5,94 (IH, doublet, J = 4,5Hz), 8.05 (IH, singlet), 8,37 (IH, singlet).

Eksempel 112.

30 2' 7'

Dimethyl-0 ,0 -diacetyl-51g-brom-6-desamino-6-hydroxy-41β-methoxygriseolat (forbindelse nr. 181).

2« 7» 300 mg dimethyl-0 ,0 -diacetyl-6-desamino-6-hydroxygriseolat 35 (fremstillet som beskrevet i eksempel 50) blev opløst i 30 ml methanol,og under isafkøling blev der tilsat 600 mg N-bromsuccinimid. Blandingen blev omrørt ved stuetemperatur

DK 166323 B

171 i 10 minutter. Derefter blev en vandig opløsning af natrium= hydrogensulfit tilsat indtil reaktionsblandingen blev farveløs. Opløsningsmidlet blev afdestilleret under reduceret tryk, og resten blev ekstraheret tre gange, hver gang med 30 ml 5 af en mættet vandig opløsning af natriumbicarbonat og 30 ml methylenchlorid. Den organiske fase blev opsamlet og tørret over vandfrit magnesiumsulfat, og opløsningsmidlet blev afdestilleret under reduceret tryk. Resten blev renset ved hjælp af silicagel-søjlekromatografi, elueret med en 3% volumen/ 10 volumen opløsning af methanol i methylenchlorid, til opnåelse af 130 mg af titelforbindelsen.

Ultraviolet absorptionsspektrum (50% volumen/volumen vandig methanol) λ nm (ε): max 15 248.5 (11600).

Kernemagnetisk resonansspektrum (en blanding af lige volumendele D2O og hexadeuteret dimethylsulfoxid) δ ppm: 20 3,50 (IH, singlet), 5,20 (IH, doublet, J = 9,9Hz), 5,81 (IH, doublet af doubletter, J = 2,4 & 9,9Hz), • 5,90 (IH, singlet), 25 5,97 (IH, doublet, J = 2,4Hz), 8,01 (IH, singlet), 8,32 (IH, singlet).

Eksempel 113.

30 41,7'-anhydro-5'g-brom-6-desamino-4 * g,6-dihydroxygriseolsyre (forbindelse nr. 182).

1.5 g 6-desamino-6-hydroxygriseolsyre (fremstillet som be- 35 skrevet i eksempel 36) blev opløst i 2N vandig natriumhydroxid, og under isafkøling blev der tilsat 258 ml af en mættet vandig opløsning af brom.

DK 166323 B

172

Blandingen blev omrørt ved 0°C i 40 minutter og derefter blev det resterende brom dekomponeret ved tilsætning af en vandig opløsning af natriumhydrogensulfit. Reaktionsblandingen blev indstillet til neutral pH-værdi med en mættet vandig opløsning 5 af natriumbicarbonat og derpå lyofiliseret. Resten blev op løst i vand, og opløsningens pH-værdi blev indstillet på 1 med IN saltsyre. Opløsningen blev underkastet omvendt fasesø jlekromatografi gennem en Rp-8 kolonne, elueret først med vand til fjernelse af salte og derpå med en 5% volumen/vo-10 lumen vandig methanol. Eluatet blev lyofiliseret til opnå else af 2 g af titelforbindelsen.

Ultraviolet absorptions spektrum (^0) 15 λ nm (ε): max 248,5 (10100).

Kernemagnetisk resonansspektrum (en blanding af lige volumen-20 dele D2O og hexadeuteret dimethylsulfoxid) δ ppm: 4,67 (IH, doublet, J = 6,9Hz), 4,99 (IH, singlet), 5,31 (IH, singlet), 25 5,90 (IH, doublet, J = 6,9Hz), 6,70 (IH, singlet), 8,12 (IH, singlet), 8,33 (IH, singlet).

30 Eksempel 114.

4 ', 7 1 -anhydro-5 ' cc-chlor-41 ct-hydroxyqriseolsyre (forbindelse nr. 183).

35 50 mg griseolsyre blev opløst i 2N vandig natriumhydroxid og opløsningen blev isafkølet. 50 ml af en mættet vandig opløsning af chlor blev tilsat under isafkøling og omrøring i løbet af 3 timer. Derefter blev opløsningsmidlet afdestil-

DK 166323 B

173 leret/og resten blev indstillet til neutral pH-værdi med en mættet vandig opløsning af natriumbicarbonat og derpå lyo-filiseret. Resten blev opløst i vand, og opløsningens pH-værdi blev indstillet på 1 med IN saltsyre.

5

Denne opløsning blev underkastet omvendt fase-søjlekromato-grafi gennem en Rp-8 kolonne, elueret med en blanding af 2% vægt/volumen acetonitril, 0,3% vægt/volumen vandig eddikesyre og 97,7% vand. Eluatet blev lyofiliseret til opnåelse 10 af 10 mg af titelforbindelsen.

Ultraviolet absorptionsspektrum (H20) λ nm(s): max 15 258 (14600).

Kernemagnetisk resonansspektrum (en blanding af lige volumendele D20 og hexadeuteret dimethylsulfoxid) δ ppm: 20 4,56 (IH, doublet, J = 6,9Hz), 4,71 (IH, singlet), 4,98 (IH, singlet), 5,62 (IH, doublet, J = 6,9Hz), 25 6,60 (IH, singlet), 8,14 (IH, singlet), 8,30 (IH, singlet).

Eksempel 115.

30 4^71 -anhydro-51 ct-brom-4 1 oc-hydroxyqriseolsyre (forbindelse nr. 184).

2,27 g griseolsyre blev opløst i 60 ml 2N vandig natriumhy= 35 droxid, og under isafkøling blev der i løbet af en periode på 5 minutter tildryppet 112 ml af en mættet vandig bromopløsning. Blandingen blev omrørt i 30 minutter, og derefter

DK 166323B

174 blev bromoverskuddet dekomponeret ved tilsætning af 20 ml af en 5 molær vandig opløsning af natriumhydrogensulfit. Blandingens pH-værdi blev indstillet på 2,3 med koncentreret saltsyre, hvorefter blandingen fik lov til at henstå i køle-5 skab natten over. De udfældede krystaller blev filtreret fra til opnåelse af 1,6 g af titelforbindelsen i form af gule nåle.

Ultraviolet absorptionsspektrum (^0) 10 nm (ε): max 257,5 (15500).

15 Kernemagnetisk resonansspektrum (hexadeuteret dimethylsulf= oxid) δ ppm: 4,73 (IH, doublet, J = 6,6Hz), 4,93 (IH, singlet), 20 5,27 (IH, singlet), 5,98 (IH, doublet, J = S,6Hz), 6,72 (IH, singlet), 8,21 (IH, singlet), 8,39 (IH, singlet).

25 λ

Eksempel 116.

4', 71 -anhydro-41 ot-hydroxy-51 et-jodogriseolsyre (forbindelse nr. (185).

30 10 g griseolsyre blev opløst i 264 ml 2N vandig natriumhy= droxid, og under isafkøling blev der tildryppet en opløsning indeholdende 0,5 mol jod i methanol. Krystaller begyndte at fælde ud efter tilsætning af ca. 2/3 af jodopløsningen. Efter 3 5 3,5 times forløb blev der tilsat 700 ml vand og derpå 27,5 g natrimhydrogensulfit, og opløsningens pH-værdi blev indstillet på 2,3 med en mættet vandig opløsning af natriumbicarbonat.

DK 166323 B

175

Reaktionsblandingen fik lov til at henstå natten over ved 5°C. De udfældede krystaller blev filtreret fra, vasket med vand og derpå hexan og derefter tørret til opnåelse af 13,0 g af titelforbindelsen, 5

Ultraviolet absorptionsspektrum (E^O) λ nm (ε): max 10 258 (12300).

Kernemagnetisk resonansspektrum (hexadeuteret dimethylsulf= oxid) δ ppm: 15 4,77 (IH, doublet, J = 6,9Hz), 4,96 (IH, singlet), 5,11 (IH, singlet), 6,07 (IH, doublet, J = 6,9Hz), 6,73 (IH, singlet), 20 8,23 (IH, singlet), 8,40 (IH, singlet).

Eksempel 117.

25 4',7'-anhydro-51oc,8-dibrom-4'g-hydroxyqriseolsyre (forbindelse nr. 187).

2,85 g 4',7'-anhydro-5'a-brom-4'a-hydroxygriseolsyre (fremstillet som beskrevet i eksempel 115) blev under opvarmning 50 opløst i 150 ml af en 1 molær acetatpufferopløsning (pH 4,0).

Opløsningen blev afkølet til stuetemperatur og 120 ml af en mættet vandig bromopløsning til tildryppet. Blandingen fik lov til at henstå i 6 timer. Derefter blev udgangsforbindelsens forsvinding bekræftet ved hjælp af tyndtlagskromatografi.

o c

Bromoverskuddet blev dekomponeret ved tilsætning af 2,67 g natriumhydrogensulfit, og blandingens pH-værdi blev indstillet på 2,3 ved tilsætning af koncentreret saltsyre.

DK 166323 B

176

Opløsningsmidlet blev afdestilleret og resten blev opløst i den mindst mulige vandmængde. Opløsningens pH-værdi blev igen indstillet på 2,3 og opløsningen fik lov til at henstå natten over i et køleskab. Det resulterende faste stof blev 5 filtreret fra og omkrystalliseret fra vand til opnåelse af 2.2 g af titelforbindelsen.

Ultraviolet absorptionsspektrum O^O) 10 λ nm (ε): max 264 (15300)

Kernemagnetisk resonansspektrum (hexadeuteret dimethylsulf= 15 oxid) δ ppm: 4,99 (IH, singlet), 5.03 (IH, doublet, J = 6,9Hz), 5,32 (IH, singlet), 20 6,15 (IH, doublet, J = 6,9Hz), 6,49 (IH, singlet), 8,20 (IH, singlet).

Eksempel 118.

25 4^71 -anhydro-8-brom-41 cc-hydroxy-5 1 g-jodogrisolsyre (forbindelse nr. 188).

4.04 g 41,71-anhydro-4'a-hydroxy-51a-jodogriseolsyre (frem- 30 stillet som beskrevet i eksempel 116) blev suspenderet i 48,6 ml af en 1 molær acetatpufferopløsning (pH 4,0), og under isafkøling blev der tilsat 160 ml af en mættet vandig bromopløsning. Reaktionsblandingens pH-værdi blev langsomt indstillet på 4,0 ved tilsætning af en mættet vandig opløsning 35 af natriumbicarbonat, og blandingen fik lov til at henstå ved stuetemperatur i 17 timer. Opløsningsmidlet blev afdestilleret under reduceret tryk og destillationen blev gentaget

DK 166323 B

177 indtil lugten af eddikesyre var forsvundet, hver gang under tilsætning af ethanol. Den resulterende rest blev opløst i 50 ml vand, og opløsningens pH-værdi blev indstillet på 2,3 med 3N saltsyre under isafkøling. Blandingen fik lov til at 5 henstå under isafkøling i 3 timer, og de udfældede krystal ler blev filtreret fra og tørret til opnåelse af 1,9 g af titelforbindelsen.

Ultraviolet absorptionsspektrum (^0) 10 nm (ε): max 265 (14100).

15 Kernemagnetisk resonansspektrum (hexadeuteret dimethylsulf= oxid) 6 ppm: 4,84 (IH, singlet), 4,96 (IH, doublet, J = 6,9Hz), 20 5,04 (lH, singlet), 6,15 (IH, doublet, J = 6,9Hz), 6,43 (IH, singlet), 8,18 (IH, singlet).

25 Eksempel 119.

Dibenzhydryl-41,71-anhydro-51 g,8-dibrom-41g-hydroxyqriseo= lat (forbindelse nr. 189).

30 300 mg 4 ',7'-anhydro-5'a,8-dibrom-4'a-hydroxygriseolsyre (fremstillet som beskrevet i eksempel 117) blev opløst i 6 ml dimethylformamid, hvorefter der blev tilsat en opløsning af 419 mg diphenyldiazomethan i 2 ml ethanol.

35 Blandingen blev omrørt ved stuetemperatur i 3 timer, og derefter blev udgangsforbindelsens forsvinden bekræftet ved hjælp af tyndtlagskromatografi. Overskud af diphenyldiazomethan

DK 166323 B

178 blev dekomponeret ved tilsætningen af eddikesyre. Opløsningsmidlet blev afdestilleret under reduceret tryk, og resten blev sønderdelt med diethylether til dannelse af et pulver.

5 Dette blev filtreret fra og omrystalliseret fra ethanol til opnåelse af 380 mg af titelforbindelsen i form af et lysegule krystaller.

Ultraviolet absorptionsspektrum (methanol) 10 λ„„ nm (ε): max 262 (15900).

15 Kernemagnetisk resonansspektrum (hexadeuteret dimethylsulf= oxid) δ ppm: 5,05 (IH, doublet af doubletter, J = 6,9 & 11,4Hz), 5,63 (IH, singlet), 20 5,83 (IH, singlet), 6,25 (IH, doublet, J = 6,9Hz), 6,53 (IH, singlet), 8,17 (IH, singlet).

25 Eksempel 120,-

Dibenzhydryl-41,7 ' -anhydro-5 ' cc-brom-4 1 a-hydroxy-8-mercapto= qriseolat (forbindelse nr. 190).

30 1,97 g dibenzhydryl-4',71-anhydro-5'a,8-dibrom-4'a-hydroxy= griseolat (fremstillet som beskrevet i eksempel 119) blev anbragt i en tohalset kolbe. 20 ml pyridin blev derpå tilsat under en nitrogenstrøm. Efter nitrogengastilførsel i 5 35

DK 166323 B

179 minutter blev der indført hydrogensulfid under isafkøling i 30 minutter. Kolben blev derpå renset med nitrogengas, lukket og henstillet ved stuetemperatur i 30 timer. Derpå blev der indført mere nitrogengas til reaktionsblandingen ved stue-5 temperatur i 1 time for at fjerne hydrogensulfidoverskuddet.

Opløsningsmidlet blev afdestilleret under reduceret tryk, og destillationen blev gentaget, hver gang under tilsætning af ethanol til resten. Resten blev opløst i 30 ml ethylacetat og 20 ml vand.

10

Den organiske fase blev skilt fra og vasket, først med 20 ml 0,1N saltsyre, 20 ml af en 5% vægt/volumen vandig opløsning af natriumbicarbonat og 20 ml af en mættet vandig opløsning af natriumchlorid. Blandingen blev derpå tørret over 15 vandfrit magnesiumsulfat, og opløsningsmidlet blev afdestil leret under reduceret tryk til opnåelse af 1,69 g af en rest. Denne blev renset gennem en forudpakket silicagelkolonne (Merck), elueret med en 2% volumen/volumen opløsning af me= thanol i methylenchlorid. Eluatet blev lyofiliseret fra benzen 20 til opnåelse af 1,20 g af titelforbindelsen.

Ultraviolet absorptionsspektrum (methanol) nm (ε): max 25 301,5 (28100), 308,5 (29000).

Kernemagnetisk resonansspektrum (hexadeuteret dimethylsulf= oxid) 6 ppm: 30 4.80 (IH, doublet af doubletter), 5,62 (IH, singlet), 5.80 (IH, singlet), 6,32 (IH, doublet, J = 6,9Hz), 35 8,15 (IH, singlet).

Eksempel 121.

DK 166323 B

180

Dibenzhydryl-8-mercaptogriseolat (forbindelse nr. 191).

1,69 g dibenzhydryl-41,7'-anhydro-5'a-brom-4'a-hydroxy-8-mercaptogriseolat (fremstillet som beskrevet i eksempel 120) 5 blev opløst i 20 ml acetone. 20 ml 80% vægt/volumen vandig eddikesyre og 1,3 g zinkpulver blev tilsat og blandingen blev omrystet kraftigt ved stuetemperatur. Efter 5 timers forløb blev der tilsat yderligere 1,3 g zinkpulver og omrøringen blev fortsat i 24 timer. Derpå blev opløsningsmidlet 10 afdestilleret og resten blev opløst i 30 ml ethylacetat og 20 ml 0,1N saltsyre. Urenheder blev filtreret fra, og den organiske fase blev vasket, først med 20 ml vand derpå med 20 ml 5% vægt/volumen vandig opløsning af natriumbicarbonat og endelig med 20 ml af en mættet vandig opløsning af natrium= 15 chlorid.

Denne opløsning blev tørret over vandfrit magnesiumsulfat, og opløsningsmidlet blev afdestilleret. Resten blev renset ved hjælp af silicagel-søjlekromatografi gennem en Rp-8 for-20 udpakket kolonne, elueret med en 3% volumen/volumen opløsning af methanol i methylenchlorid, til opnåelse af 173 mg af titelforbindelsen.

Ultraviolet absorptionsspektrum (methanol) 25

Vx ™ (ε): 302 (27500), 308,5 (28400).

30 Kernemagnetisk resonansspektrum (hexadeuteret dimethylsulf= oxid) 6 ppm: 4,62 (IH, triplet, J = 4,5 & 6,0Hz), 4,90 (IH, doublet, J = 9,0Hz), 35 5,26 (IH, doublet, J = 2,7Hz), 6,46 (IH, kvartet, J = 2,7 & 6,0Hz), 6,89 (IH, singlet), 8,15 (IH, singlet).

DK 166323 B

181

Eksempel 122.

8-mercaptogriseolsyre (forbindelse nr. 192).

5 130 mg dibenzhydryl-8-mercaptogriseolat (fremstillet som be skrevet i eksempel 121) blev suspenderet i 1 ml anisol, og under isafkøling blev der tilsat 1 ml trifluoreddikesyre til dannelse af en opløsning. Opløsningen blev henstillet i 30 minutter, hvorefter der blev tilsat toluen, og opløs-ningsmidlet blev afdestilleret. Destillationen blev gentaget, hver gang med tilsætning af acetone og toluen til resten. Resten blev opløst i en ringe mængde acetone^og opløsningen blev under omrøring hældt i hexan til dannelse af et pulver. Dette blev opløst i en mættet vandig opløsning af natrium= 15 bicarbonat, og opløsningens pH-værdi blev indstillet på 2,3 med IN saltsyre. Opløsningen blev derpå renset ved omvendt fase-søjlekromatografi gennem en Rp-8 forudpakket kolonne og lyofiliseret til dannelse af 50 mg af titelforbindelsen.

20 Ultraviolet absorptionsspektrum (^0) λ nm (ε): max 298 (18200), 305 skulder (17400).

25

Kernemagnetisk resonansspektrum (hexadeuteret dimethylsulf= oxid) 5 ppm: 4,50 (IH, singlet), 30 4,58 (IH, doublet, J = 5,4Hz), 5,10 (IH, doublet, J = 2,4Hz), 6,24 (IH, doublet af doubletter, J = 2,4 & 5,4Hz), 6,80 (IH, singlet), 8,20 (IH, singlet).

35

DK 166323 B

182

Eksempel 123.

Dibenzhydryl-41,7 1 -anhydro-5 1 oc-brom-4 1 oc-hydroxy- 8-methoxy= griseolat (forbindelse nr. 193).

5 999 mg 4 ', 7 ' -anhydro-5 ' a, 8-dibrom-4 ' a-hydroxygriseolsyre (fremstillet som beskrevet i eksempel 117) blev suspenderet i 36 ml pyridin, hvorefter der blev tilsat 3,6 ml af en 2N opløsning af natriummethoxid i methanol. Blandingen fik lov 10 til at reagere ved stuetemperatur i ca. 4 timer, idet der blev omrørt ved hjælp af ultralydvibration.

Opløsningsmidlet blev afdestilleret og resten blev opløst i IN saltsyre og natriumbicarbonat blev tilsat til opnåelse 15 af en pH-værdi på 1,5 i opløsningen. Det samme volumen ace tone blev tilsat efterfulgt af diphenyldiazomethan under omrøring indtil boblingen ophørte. Diphenyldiazomethanoverskud-det blev dekomponeret ved tilsætning af eddikesyre. Opløsningsmidlet blev afdestilleret under reduceret tryk, og resten 20 blev opløst i 30 ml ethylacetat og 20 ml vand. Den organiske fase blev vasket med 20 ml 0,1N saltsyre, 20 ml vand, 20 ml af en 5% vægt/volumen vandig opløsning af natriumbicarbonat og 20 ml af en mættet vandig opløsning af natriumchlorid.

Den organiske fase blev tørret over vandfrit magnesiumsulfat, 25 og opløsningsmidlet blev afdestilleret. Resten blev renset ved hjælp af silicagel-søjlekromatografi gennem en forudpak-ket kolonne (Merck), elueret med en 3% volumen/volumen opløsning af methanol i methylenchlorid, til opnåelse af 750 mg af titelforbindelsen.

30

Ultraviolet absorptionsspektrum (methanol) w ίε):

Kernemagnetisk resonansspektrum (hexadeuteret dimethylsulf= oxid) δ ppm: 35 257,2.

DK 166323 B

183 4,78 (IH, kvartet), 5,61 (IH, singlet), 5,81 (IH, singlet), 5,99 (IH, doublet, J = 6,6Hz), 6,47 (IH, singlet), 5 8,09 (IH, singlet).

Eksempel 124.

Dibenzhydryl-8~methoxyqriseolat (forbindelse nr. 194).

10 410 mg dibenzhydryl-4',7'-anhydro-51a-brom-41a-hydroxy-8-methoxygriseolat (fremstillet som beskrevet i eksempel 123) blev opløst i 80% vægt/volumen vandig eddikesyre. 0,6 g zinkpulver blev tilsat, og blandingen blev omrørt kraftigt ved ^ stuetemperatur. Efter 3 timers forløb blev der tilsat yder ligere 0,6 g zinkpulver, og blandingen blev omrørt i yderligere 3 timer. Opløsningsmidlet blev afdestilleret under reduceret tryk, og resten blev opløst i 30 ml ethylacetat og 20 ml 0,1N saltsyre. Urenheder blev filtreret fra, og den 20 organiske fase blev vasket først med 20 ml vand, derpå med 20 ml 5% vægt/volumen vandig opløsning af natriumbicarbonat og til slut med 20 ml af en mættet vandig opløsning af na= triumchlorid og derpå tørret over vandfrit magnesiumsulfat.

25

Opløsningsmidlet blev fjernet ved afdampning under reduceret tryk og resten blev renset ved silicagel-søjlekromatografi gennem en forudpakket kolonne (Merck), elueret med en 5% volumen/volumen opløsning af methanol i methylenchlorid, til opnåelse af 85 mg af titelforbindelsen.

30

Ultraviolet absorptionsspektrum (methanol) λ nm (ε): max 35 256,5 (13600).

DK 166323 B

184

Kernemagnetisk resonansspektrum (hexadeuteret dimethylsulf= oxid) 5 ppm: 4,73 (IH, doublet, J = 5,4Hz), 5 4,91 (IH, singlet), 5,23 (IH, doublet, J = 2,4Hz), 6,27 (IH, singlet), 6,30 (IH, kvartet, J = 2,4 & 5,4Hz), 8,08 (IH, singlet).

10

Eksempel 125.

8-methoxyqriseolsyre (forbindelse nr. 195), 15 32 mg dibehzhydryl-8-methoxygriseolat (fremstillet som be skrevet i eksempel 124) blev opløst i 0,3 ml anisol, og under isafkøling blev der tilsat 0,3 ml trifluoreddikesyre og blandingen fik lov til at reagere ved stuetemperatur i 10 minutter. Til reaktionsblandingen blev der tilsat toluen, og opløs-20 ningsmidlerne blev afdestilleret.

Destillationen blev gentaget, hver gang under tilsætning af acetone og toluen. Resten blev suspenderet i en ringe mængde acetoe og sønderdelt med hexan til dannelse af et pulver.

25 Dette blev opløst i en mættet vandig opløsning af natrium= bicarbonat og opløsningens pH-værdi blev indstillet på 2,3 med IN saltsyre. Opløsningen blev derpå renset ved omvendt fase-søjlekromatografi gennem en Rp-8 forudpakket kolonne, elueret med vand og derpå lyofiliseret, til opnåelse af 18 30 mg af titelforbindelsen.

Ultraviolet absorptionsspektrum (methanol) λ___ nm (ε): max 259.

35

DK 166323 B

185

Kernemagnetisk resonansspektrum (hexadeuteret dimethylsulf= oxid) δ ppm: 4,43 (IH, singlet), 5 4,64 (IH, doublet, J = 5,13Hz), 5,03 (IH, doublet, J = 2,44Hz), 6,02 (IH, doublet af doubletter, J = 2,44 & 5,13), 6,14 (IH, singlet), 8,07 (IH, singlet).

10

Eksempel 126.

8-bromqriseolsyre (forbindelse nr. 196).

15 1,75 g 4 ', 7 ' -anhydro-8-brom-4 ' oc-hydroxy-5 ' a- jodogriseolsyre (fremstillet som beskrevet i eksempel 118) blev suspenderet i 60 ml IN saltsyre. 624 mg natriumhydrogensulfit og 2,49 g kaliumjodid blev tilsat, og blandingen blev omrørt. Derefter blev blandingen underkastet ultralydvibration under 20 isafkøling i 3 timer. Reaktionsblandingens pH-værdi blev der på indstillet på 2,2 med natriumbicarbonat og holdt i et køleskab natten over.

Det udfældede faste stof blev filtreret fra og omkrystalli-25 seret fra vand til opnåelse af 0,63 g af titelforbindelsen i form af gulligt-hvide krystaller.

Ultraviolet absorptionsspektrum (H^O) 30 λ nm : max 264.

Kernemagnetisk resonansspektrum (hexadeuteret dimethylsulf= 35 oxid) δ ppm:

DK 166323B

186 4,45 (IH, singlet), 4,86 (IH, doublet, J = 5,4Hz), 5,08 (IH, doublet, J = 2,4 Hz), 6.20 (IH, kvartet, J = 2,4 & 5,4Hz), 5 6,25 (IH, singlet), 8.20 (IH, singlet).

Eksempel 127.

10 8-brom-6-desamino-6-hydroxyqriseolsyre (forbindelse nr. 197).

229 mg 8-bromgriseolsyre (fremstillet som beskrevet i eksempel 126) blev suspenderet i 13 ml vand og derpå opløst ved tilsætning af 2 ml IN vandig natriumhydroxid. 0,3 ml eddike-15 syre blev tilsat, og derefter under nitrogenstrøm 345 mg na= triumnitrit. Blandingen blev holdt i et køleskab i 20 timer, isoleret fra den udvendige atmosfære. Derefter blev der tilsat yderligere 345 mg natriumnitrit,og blandingen fik lov til at henstå i yderligere 27 timer. Derefter blev der tilsat ^0 yderligere 345 mg natriumnitrit; og blandingen fik lov til at henstå i 17 timer.

Opløsningsmidlet blev fjernet ved afdampning under reduceret tryk og resten blev opløst i vand. Opløsningens pH-værdi blev indstillet på 1,0 og derpå renset gennem en forudpakket kolonne Rp-8 (Merck), elueret med 10% volumen/volumen vandig aceto-nitril. Eluatet fra hovedspidsen blev lyofiliseret til opnåelse af 78 mg af titelforbindelsen.

50 Ultraviolet absorptionsspektrum (H20) λ nm (ε): max 255 (12900).

Kernemagnetisk resonansspektrum (hexadeuteret dimethylsulf= oxid) 6 ppm: 35

DK 166323 B

187 4,50 (IH, singlet), 4,80 (IH, doublet, J = 6,0Hz), 5.17 (IH, doublet, J = 2,4Hz), 6,04 (IH, kvartet, J = 2,4 & 6,0Hz), 5 6,24 (IH, singlet), 8.17 (IH, singlet).

Eksempel 128.

Dibenzhydryl-8-bromqriseolat (forbindelse nr. 198).

459 mg 8-bromgriseolsyre (fremstillet som beskrevet i eksempel 126) blev opløst i 50 ml vandig acetone og opløsningens pH-værdi blev indstillet på 1 - 2 med 3N saltsyre. En opløs-15 ning af diphenyldiazomethan i acetone blev tilsat indtil op løsningens farve ikke længere forsvandt, og blandingen blev omrørt. Opløsningsmidlet blev afdestilleret,og ethylacetat og en mættet vandig opløsning af natriumbicarbonat blev sat til resten. Den organiske fase blev skilt fra, vasket med 20 vand og tørret over vandfrit magnesiumsulfat. Opløsningsmidlet blev afdestilleret. Resten blev omkrystalliseret fra acetone til opnåelse af 720 mg af titelforbindelsen.

Ultraviolet absorptionsspektrum (methanol) 25 nm (ε): max 263 (16600).

Kernemagnetisk resonansspektrum (en blanding af lige volumendele D£0 og hexadeuteret dimethylsulfoxid) δ ppm: 4.94 (IH, doublet, J = 5,4Hz), 4.94 (IH, singlet), ^ 5,32 (IH, doublet, J = 2,4Hz), 6,36 (IH, singlet),

DK 166323 B

188 6,48 (IH, doublet af doubletter, J = 2,4 & 5,4Hz), 8,16 (IH, singlet).

Eksempel 129.

5

Dibenzhydryl-8-azidoqriseolat (forbindelse nr. 199).

720 mg dibenzhydryl-8-bromgriseolat (fremstillet som beskrevet i eksempel 128) blev opløst i dimethylformamid, og 142 mg 10 natriumacid blev sat til opløsningen. Blandingen blev opvarmet til 80°C i 7 timer. Derpå blev opløsningsmidlet afdestillér et, og resten blev opløst i ethylacetat og vand.

Den organiske fase blev skilt fra, vasket med vand og tørret 15 over vandfrit magnesiumsulfat. Opløsningsmidlet blev afde stilleret. Resten blev renset ved hjælp af silicagel-søjlekromatografi og krystalliseret med methylenchlorid, hvilket giver 176 mg af titelforbindelsen.

20 Ultraviolet absorptionsspektrum (methanol) λ nm (ε): max 281 (13300).

25

Kernemagnetisk resonansspektrum (en blanding af lige volumendele D2O og hexadeuteret dimethy1sulfoxid) δ ppm: 4,71 (IH, doublet, J = 5,4Hz), 30 4,90 (IH, singlet), 5,25 (IH, doublet, J = 2,4Hz), 6,18 (IH, singlet), 6,37 (IH, doublet af doubletter, J = 2,4 & 5,4Hz), 8,09 (IH, singlet).

35

DK 166323 B

189

Eksempel 130.

Dibenzhydryl-8-aminogriseolat (forbindelse nr, 200).

5 1 ml vand blev sat til 150 ml dibenzhydryl-8-azidogriseolat (fremstillet som beskrevet i ekempel 129) og derpå blev der under indføring af nitrogengas tilsat 10 ml pyridin indeholden ca. 1 mol hydrogensulfid. Blandingen fik lov til at henstå natten over ved stuetemperatur, isoleret fra den udvendige 10 atmosfære. Opløsningsmidlet blev afdestilleret og resten blev renset ved hjælp af silicagel-søjlekromatografi, hvilket giver 110 mg af titelforbindelsen.

Ultraviolet absorptionsspektrum (methanol) 15 λ nm (ε): max 268 (16400).

20 Kernemagnetisk resonansspektrum (hexadeuteret dimethylsulf= oxid) 6 ppm: 4,77-4,81 (IH, multiplet), 4,85-4,87 (IH, multiplet), 25 5,21 (IH, doublet, J = 2,74Hz), 6,38 (IH, singlet), 6,41 (IH, doublet af doubletter, J = 2,74 & 5,48Hz), 7,91 (IH, singlet).

^ Eksempel 131.

8-aminogriseolsyre (forbindelse nr. 201).

1 ml trifluoreddikesyre blev tilsat under isafkøling til en 35 opløsning af 100 mg dibenzhydryl-8-aminogriseolat (fremstillet som beskrevet i eksempel 130) i 1 ml anisol, og blandingen fik lov til at henstå ved stuetemperatur i 10 minutter. Tolu-

DK 166323 B

190 en blev tilsat, og opløsningsmidlerne blev afdestilleret. Destillationen blev gentaget, idet der hver gang blev tilsat acetone og toluen. Resten blev suspenderet i acetone og suspensionen blev hældt i hexan under omrøring til dannelse 5 af et pulver. Dette blev opløst i en mættet vandig opløsning af natriumbicarbonat, og opløsningens pH-værdi blev indstillet på 3 med IN saltsyre. Opløsningen blev derpå ledt gennem en forudpakket omvendt fase-kromatografisøjle Rp-8, elueret med vand. Eluatet blev lyofiliseret til dannelse af 44 mg 10 af titelforbindelsen.

Ultraviolet absorptions spektrum (^0) λ nm (ε): max 15 272 (16400).

Kernemagnetisk resonansspektrum (hexadeuteret dimethylsulf= oxid) δ ppm: 20 4,43 (IH, doublet), 4,79 (IH, doublet, J = 4,88Hz), 4,99 (IH, doublet, J = 1,96Hz), 6,21 (IH, doublet af doubletter, J = 1,96 & 4,88Hz), 25 6,31 (IH, singlet), 7,92 (IH, singlet).

Eksempel 132.

30 Dibenzhydryl-41,71-anhydro-51g-brom-41a-hydroxyqriseolat (for bindelse nr. 202).

En suspension af 3,3 g 4 ', 7 ' -anhydro-5 ' cc-brom-4 ' cc-hydroxy= griseolsyre (fremstillet som beskrevet i eksempel 115) i 100 35 ml acetone og 20 ml vand blev justeret til en pH-værdi på ca. 1, hvorefter der blev tilsat en opløsning af diphenyldi= azomethan i acetone. Blandingen blev omrørt ved stuetemperatur. Acetonen blev afdestilleret/og resten blev opløst i

DK 166323 B

191 ethylacetat og en mættet vandig opløsning af natriumbicarbo= nat- Den organiske fase blev skilt fra, vasket med vand og tørret over vandfrit magnesiumsulfat. Opløsningsmidlet blev afdestilleret. Resten blev opløst i en ringe mængde acetone, 5 og opløsningen blev sat til hexan under omrøring til dannelse af et pulver. Dette blev filtreret fra og omkrystalliseret fra benzen/methanol til dannelse af 3,75 g af titelforbindelsen.

10 Ultraviolet absorptionsspektrum (methanol) λ nm (ε): max 256,8 (16000).

15

Kernemagnetisk resonansspektrum (en blanding af lige volumendele DjO og hexadeuteret dimethylsulfoxid) δ ppm: 4.83 (IH, doublet, J = 6,6Hz), 20 5,66 (IH, singlet), 5,79 (IH, singlet), 6,26 (IH, doublet, J = 6,6Hz), 6.84 (IH, singlet), 8,24 (IH, singlet), 25 8,41 (IH, singlet).

Eksempel 133.

Dibenzhydryl-4 *,71-anhydro-4'g-hydroxy-51 g-jodogriseolat 30 (forbindelse nr. 204).

Man gentog i alt væsentligt den i eksempel 132 beskrevne fremgangsmåde, men under anvendelse af 505 mg 4',7'-anhydro-4 'a-hydro-5 'oc-jodogriseolsyre (fremstillet som beskrevet i 35 eksempel 116). Der blev opnået 805 mg af titelforbindelsen.

DK 166323 B

192

Ultraviolet absorptionsspektrum (mehanol) \»ax ™ <ε,: 5 257 (16500).

Kernemagnetisk resonansspektrum (en blanding af lige volumendele D2O og hexadeuteret dimethylsulfoxid) δ ppm: 10 4,79 (IH, doublet, J = 6,6Hz), 5,50 (IH, singlet), 5,59 (IH, singlet), 6.24 (IH, doublet, J = 6,6Hz), 6,77 (IH, singlet), 8.24 (IH, singlet), 8,34 (IH, singlet).

Eksempel 134.

20

Dimethyl-41,71-anhydro-51g-brom-4'g-hydroxyqriseolat (forbindelse nr. 250).

3,1 g l-methyl-3-p-tolyltriazen efterfulgt af 10 ml vand blev tilsat til en suspension af 1 g 4',7'-anhydro-5'a-brom-41a-25 hydroxygriseolsyre (fremstillet som beskrevet i eksempel 115) i 40 ml tetrahydrofuran. Suspensionen blev omdannet til en opløsning efter ca. 10 minutters forløb. Efter 3 timers forløb blev der tilsat 1,1 g p-toluensulfonsyre, og blandingen fik lov til at reagere ved stuetemperatur i 4 timer. Reaktions ^ blandingen fik derpå lov til at henstå natten over ved 5°C. Opløsningsmidlet blev afdestilleret/og resten blev opløst i ethylacetat og vand. Den organiske fase blev skilt fra, vasket med vand og tørret over vandfrit magnesiumsulfat. Opløsningsmidlet blev afdestilleret til dannelse af krystaller. 35

Disse krystaller blev filtreret fra til opnåelse af 0,46 g af titelforbindelsen.

*

DK 166323 B

193

Moderluden blev koncentreret, opløst i en ringe mængde acetone og hældt i hexan under omrøring til dannelse af yderligere 0,24 g af forbindelsen i form af et pulver.

5 Ultraviolet absorptionsspektrum (methanol) λ nm (ε): max 257 (14200).

10

Kernemagnetisk resonansspektrum (hexadeuteret dimethylsulf= oxid) 6 ppm: 4,83 (IH, doublet, J = 6,6Hz), 15 5,28 (IH, singlet), 5,49 (IH, singlet), 6,15 (IH, doublet, J = 6,6Hz), 6,79 (IH, singlet), 8,21 (IH, singlet), 20 8,39 (IH, singlet).

Eksempel 135.

Dimethyl-4 1,71 -anhydro-41 cx-hydroxy-51 g-jodogriseolat (for-25 bindelse nr. 203).

Man gentog i alt væsentligt den samme fremgangsmåde som er beskrevet i eksempel 134, men anvendte 2,0 g 4’,7'-anhydro-4'a-hydroxy-5'a-jodogriseolsyre (fremstillet som beskrevet ^0 i eksempel 116). Der blev opnået 1,1 g af titelforbindelsen.

Ultraviolet absorptionsspektrum (methanol) nm (ε)ϊ _ Π13.Χ 3 5 256,2 (15000).

DK 166323B

194

Kernemagnetisk resonansspektrum (hexadeuteret dimethylsulf= oxid) δ ppm: 4,80 (IH, doublet, J = 6,6Hz), 5 5,23 (IH, singlet), 5,26 (IH, singlet), 6,20 (IH, doublet, J = 6,6Hz), 6,79 (IH, singlet), 8,24 (IH, singlet), 10 8,40 (IH, singlet).

Eksempel 136.

Dibenzhydryl-4',71-anhydro-5 * g-brom-6-desamino-4'g,6-dihy= ^ droxygriseolat (forbindelse nr. 205.).

1 g 4',7'-anhydro-51a-brom-6-desamino-41a,6-dihydroxygriseol-syre (fremstillet som beskrevet i eksempel 113) blev opløst i 100 ml tetrahydrofuran og 25 ml vand, og opløsningens pH-^ værdi blev indstillet på 1 med IN saltsyre. Diphenyldiazome= than blev sat til opløsningen under omrøring indtil den røde farve ikke længere forsvandt. Omrøringen blev fortsat ved stuetemperatur i 3 timer, og derefter blev opløsningsmidlet afdestilleret under reduceret tryk. Resten blev renset ved

2 S

hjælp af silicagel-søjlekromatografi, elueret med en 3% vo-lumen/volumen opløsning af methanol i methylenchlorid, til dannelse af 970 mg af titelforbindelsen.

Ultraviolet absorptionsspektrum (methanol) 30 λ nm (ε): max 243,5 (10600).

1 S

Kernemagnetisk resonansspektrum (en blanding af lige volumen dele D2O og CDCl^) δ ppm:

DK 166323 B

195 4,75 (IH, doublet, J = 7,5Hz), 5,29 (IH, singlet), 5,50 (IH, singlet), 6,03 (IH, doublet, J = 7,5Hz), 5 6,80 (IH, singlet), 8,15 (IH, singlet), 8,34 (IH, singlet).

Eksempel 137.

10

Dimethyl-4',71-anhydro-5'g-brom-6-desamino-41 g,6-dihydroxy= qriseolat (forbindelse nr. 206).

13 g 41,71 -anhydro-51 oc-brom-6-desamino-4' a, 6-dihydroxygriseol-15 syre (fremstillet som beskrevet i eksempel 113) blev opløst i 800 ml tetrahydrofuran og 200 ml vand, og opløsningens pH-værdi blev indstillet på 1 med IN saltsyre, l-methyl-31-p-tolyltriazen blev sat til opløsningen lidt efter lidt, hvorpå opløsningen boblede kraftigt. Tilsætningen fortsatte ind-20 til der var blevet tilsat ialt 75 g. Reaktionsblandingens pH-værdi blev derpå langsomt indstillet på 1 med IN saltsyre.

Opløsningsmidlet blev afdestilleret under reduceret tryk, 25 og resten blev opløst i 500 ml methlenchlorid. Den resulterende opløsning blev vasket to gange, hver gang med 300 ml IN saltsyre. Den vandige fase blev modekstraheret med 300 ml methylen= chlorid, og det organiske lag blev tørret over vandfrit magnesiumsulfat. Opløsningsmidlet blev derpå afdestilleret.

30 Resten blev renset ved hjælp af silicagel-søjlekromatografi, elueret med en 3% volumen/volumen opløsning af methanol i methylenchlorid, til opnåelse af 6,3 g af titelforbindelsen.

Ultraviolet absorptionsspektrum (methanol) 35 λ nm (ε:. max 252,5 (9700).

DK 166323 B

196

Kernemagnetisk resonansspektrum (en blanding af lige volumendele D2O og hexadeuteret dimethylsulfoxid) 6 ppm: 4,66 (IH, doublet, J = 7,5Hz), 5 4,78 (IH, singlet), 5,17 (IH, singlet), 6,01 (IH, doublet, J = 7,5Hz), 6,53 (IH, singlet), 7,77 (IH, singlet), 10 7,87 (IH, singlet).

Eksempel 138.

fi fi ? 1

Dimethyl-41,71-anhydro-N ,N ,O -tribenzoyl-51g-brom-41a-15 hydroxyqriseolat (forbindelse nr. 207).

0,6 g dimethyl-41,7'-anhydro-5'cc-brom-41a-hydroxygriseolat (fremstillet som beskrevet i eksempel 134) blev suspenderet i 20 ml pyridin. Suspensionen blev klar ved tilsætning under 20 isafkøling af 1,48 ml benzoylchlorid. Opløsningen blev omrørt ved stuetemperatur natten over. Opløsningsmidlet blev afdestilleret, vand blev tilsat og destillationen blev gennemført igen. Resten blev opløst i ethylacetat og en mættet vandig opløsning af natriumbicarbonat. Den organiske fase 25 blev vasket med vand og tørret over vandfrit magnesiumsul fat, og opløsningsmidlet blev afdampet. Resten blev omkrystalliseret fra en ringe mængde ethylacetat og ethanol, hvilket giver 0,58 g af titelforbindelsen.

30 Ultraviolet absorptionsspektrum (methanol) >w (s)! 233 (30100), 250 skulder (26600), 273 (20800).

35

Kernemagnetisk resonansspektrum (hexadeuteret dimethylsulf= oxid) δ ppm:

DK 166323B

197 5,25 (IH, singlet), 5,50 (IH, singlet), 5,91 (IH, doublet, J = 6,6Hz), 6,40 (IH, doublet, J = 6,6Hz), 5 7,32 (IH, singlet), 8,80 (IH, singlet), 8,87 (IH, singlet).

Eksempel 139.

10 6 6 21

Dimethyl-4 *,71-anhydro-N ,N ,O -tribenzoyl-41g-hydroxy-5'g-jodogriseolat (forbindelse nr. 208).

3,2 g dimethyl-4',7'-anhydro-4 ' cc-hydroxy-5'cc-jodogriseolat 15 (fremstillet som beskrevet i eksempel 135) blev suspenderet i 150 ml pyridin, hvorefter der under isafkøling blev tilsat 6,98 ml benzoylchlorid. Blandingen blev omrørt ved stuetemperatur natten over. Opløsningsmidlet blev afdestilleret, hvorefter der blev tilsat vand og destillationen blev gen-20 nemført igen.

Resten blev opløst i ethylacetat og en mættet vandig opløsning af natriumbicarbonat. Den organiske fase blev vasket med vand, tørret over vandfrit magnesiumsulfat, og opløsningsmidlet

2 S

blev afdestilleret. Resten blev opløst i en ringe mængde ethyl= acetat, og ved tilsætning af ethanol blev der opnået 3,24 g af titelforbindelse i form af krystaller.

Ultraviolet absorptionsspektrum (methanol) 30 λ nm (ε): max 235 (30700), 250 skulder (27400), 271 (20900).

Kernemagnetisk resonansspektrum (hexadeuteret dimethylsulf= oxid) δ ppm: 35

DK 166323 B

198 5,23 (IH, singlet); 5,33 (IH, singlet); 5,96 (IH, doublet, J = 6,6Hz); 6,50 (IH, doublet, J = 6,6Hz); 5 7,36 {IH, singlet); 8,84 (IH, singlet); 8,92 (IH, singlet);

Eksempel 140.

10

Bis(1-pivalovloxvethvl)qriseolat.

Der findes intet eksempel herpå, men derimod et eksempel vedrørende den tilsvarende methylforbindelse, 8 ' , 9 '-di-pi valoy1-15 oxymethylgriseol at.

1 g griseolsyre blev opløst i 100 ml acetonitril, hvorpå 1,21 ml l,8-diazabicyklo[5,4,0]-7-undecen blev tilsat under en nitrogenstrøm samt omrøring. Derpå blev 2,56 g jodmethylpivalat 20 sat til den resulterende blanding under isafkøling. Blandingen omrørtes ved stuetemperatur i en time. Opløsningsmidlet fjernedes ved fordampning under formindsket tryk, og resten blev opløst i 60 ml ethylacetat og 30 ml fortyndet saltsyre. Det organiske lag blev fraskilt og i rækkefølge vasket med fortyn-25 det saltsyre, en 5% vægt/vol vandig natriumbicarbonatopløsning og en mættet vandig natriumchloridopløsning i den nævnte orden samt tørret over vandfrit magnesiumsulfat. Opløsningsmidlet fjernedes ved destillation under formindsket tryk, og resten blev renset ved hjælp af si 1icagel-søjlekromatografi (under 30 eluering med en 2:1 opløsning af ethylacetat og acetonitril). Fraktioner indeholdende den ønskede forbindelse blev kombineret og lyofiliseret til opnåelse af 970 mg (udbytte 60,5%) af titel forbi ndel sen.

35 Kernemagnetisk resonansspektrum (hexadeutereret dimethylsulf-oxid) δ ppm:

DK 166323 B

199 8,30 (IH, singlet); 8,17 (IH, singlet); 6,54 (IH, singlet); 6.08 (IH, dublet af dubletter, J = 2,4 og 4,9 Hz); 5 5,07 (IH, dublet, J = 2,0 Hz); 4,63 (2H, multiplet); 7,39 (2H, bred singlet); 6,20 (IH, dublet, J = 4,4 Hz); 5,68-5,77 (5H, multiplet); 10 1,17 (3H, singlet); 1.09 (3H, singlet).

Eksempel 141.

15 Bis(5-methv1-2-oxo-l,3-dioxo1en-4-vlmethvl)gri seolat.

3 g griseolsyre blev opløst i 30 ml dimethylsulfoxid, og til denne reaktionsblanding sattes 2,4 ml l,8-diazabicyklo[5,4,0]~ 7-undecen under en nitrogenstrøm efterfulgt af 7,6 g (5-meth-20 yl-2-oxo-l,3-dioxolen-4-yl)methyljodid under isafkøling. Man lod blandingen reagere ved stuetemperatur i 4 timer. Ved af-sl utni ngen af dette tidsrum blev 300 ml ethyl acetat og 300 ml vand sat til reaktionsblandingen. Det organiske lag blev fraskilt, vasket to gange med vand og tørret over vandfrit mag-25 nes iumsu1fat. Efter behandling med aktivt carbon fjernedes opløsningsmidlet ved destillation under formindsket tryk. Resten blev renset ved hjælp af silicagel-søjlekromatograf i (under eluering med en 4% vol/vol ethanol i methylenchlorid) . Fraktioner indeholdende den ønskede forbindelse blev kombineret og 30 krystalliseret fra methylenchlorid til opnåelse af 715 mg (udbytte 15,0%) af titelforbindelsen.

Kernemagnetisk resonansspektrum (hexadeutereret dimethylsulfoxid) δ ppm: 8,33 (IH, singlet); 8,17 (IH, singlet); 35

DK 166323 B

200 6,52 (IH, singlet); 6,10 (IH, dublet af dubletter, J = 2,4 og 5,4 Hz); 5,12 (IH, dublet, J = 2,4 Hz); 4,59 (IH, triplet, J = 4,4 Hz); 5 4,64 (IH, dublet, J = 9,3 Hz); 7,40 (2H, bred singlet); 6.28 (IH, dublet, J = 4,4 Hz); 5,64 (IH, dublet, J = 9,3 Hz); 5,03 (2H, singlet); 10 4,95 (2H, singlet); 2,18 (3H, singlet); 2.17 (3H, singlet).

Eksempel 142.

15 71-desoxy-8 *,91-di-pivalovloxvmethylgr i seolat 450 mg 7-desoxygriseolsyre blev opløst i 2,5 ml dimethylsulf-oxid. Til denne blanding sattes 0,22 ml 1,8 diazabicyklo-20 [5,4,0]-7-undecen og 2 ml acetonitril under en nitrogenstrøm.

410 mg jodmethylpi val at blev sat til den resulterende blanding under isafkøling. Derpå lod man blandingen reagere ved stuetemperatur i 3 timer og ved 5°C i yderligere 16 timer. Ved afslutningen af dette tidsrum blev acetonitri 1 en fjernet ved 25 afdampning under formindsket tryk, og resten opløstes i 50 ml ethylacetat og 50 ml af en 3% vandig natriumbicarbonatopløs-ning. Det organiske lag blev derpå fraskilt. Det vandige lag ekstraheredes med 20 ml ethylacetat. De organiske lag blev kombineret, tørret over vandfrit magnesiumsulfat, behandlet 30 med aktivt carbon samt inddampet under formindsket tryk. Resten lyofi 1iseredes til opnåelse af 290 mg (udbytte 40,2%) af titelforbindelsen.

Kernemagnetisk resonansspektrum (hexadeutereret dimethyl sulf-35 oxid) δ ppm: 8.29 (IH, singlet); 8.18 (IH, singlet);

Claims (8)

1. 201 DK 166323 B 5,46 (IH, singlet); 6»°3 (ih, dublet af dubletter, J = 2,4 og 4,9 Hz); 5/03 (ih, dublet, J = 2,4 Hz); 4,59 (IH, triplet, J = 4,4 og 4,9 Hz); 5 2,90 (IH, dublet, J = 17,1 Hz); 3130 (IH, dublet, 0 = 17,1 Hz); 7/39 (2H, bred singlet); 5,99 (IH, dublet, J = 3,9 Hz); 5,66-5,80 (4H, multiplet). 10 Patentkrav.
2. 1. Griseolsyrederivater, kendetegnet ved formlen 15 (I): R4· H R3 „ a “yvyl “ ” "““VS •'i V hvori A betegner en gruppe med formlen: 25 r5 ? NH 0c>- ·“" UC.V! I I R1, R2, R5 og R6 er ens eller forskellige og hver betegner et 35 hydrogen- eller halogenatom, en azidogruppe eller en gruppe med formlen -OR9, -NR1°rH eller -SR9; DK 166323B 202 R3 betegner et hydrogen- eller halogenatom eller en C-j-Cg-a-cyloxy- eller Cj-Cg-alkoxygruppe; r4 betegner et hydrogen- eller halogenatom, eller 5 r3 0g r4 sammen betegner en ekstra carbon-carbon-binding mellem carbonatomerne, hvortil de er bundet, eller R3 og R2 sammen betegner et oxygenatom, som forbinder carbon-atomerne, hvortil de er bundet; r7 betegner en eventuelt substitueret C^-Cg-alkyl-, C^-Cg-al-kenyl- eller aral kyl gruppe (hvori alkyldelen har fra 1 til 6 carbonatomer), idet substituenterne er valgt blandt halcgen-15 atomer, Cj-C^alkoxygrupper, (Ci-C4-alkoxy}carbonylgrupper og (når R? er substitueret aralkyl) Cj-C^alkylgrupper; R9 betegner et hydrogenatom, en C^-Cg-alkylgruppe, en tetrahy-dropyranylgruppe, en alkylsulfonylgruppe, en halogenalkylsul-20 fonylgruppe, en ary1su1fony1 gruppe, en usubsti tueret C i-C20 alifatisk acylgruppe eller en substitueret eller usubstitueret aromatisk acylgruppe; rIO 0g pli er ens eller forskellige og hver betegner et hydro-25 genatom, en C^-Cg-alkylgruppe, en C*-Cg-hydroxyalkyl gruppe, en C^-Cg-aminoalkylgruppe, en aral kyl gruppe, en arylgruppe, en C^-Cg-alkoxygruppe, en aminogruppe, en usubstitueret C1-C20 alifatisk acylgruppe eller en substitueret eller usubstitueret aromatisk acylgruppe; eller rIO og RU sammen med nitrogenato-3Q met, hvortil de er bundet, betegner en piperidinogruppe eller morpholinogruppe; og farmaceutisk acceptable salte og estere; 35 men ikke 71(R)-griseolsyre selv og salte deraf. DK 166323 B 203
3. 2. Griseolsyrederivater ifølge krav 1, kendetegnet ved, at Ri betegner et hydrogen- eller halogenatom, en azido-gruppe eller nævnte gruppe med formlen -OR9; 5 r2 betegner et hydrogenatom eller nævnte gruppe med formlen -OR9; R3 og R4 sammen betegner nævnte ekstra binding; 10 r5 betegner en hydroxy-, amino-, (^-Ce-alkyl ami no-, acylamino-eller mercaptogruppe, og r6 betegner et hydrogenatom.
4. 3. Griseolsyrederivater ifølge krav 1, k e n d e t e g n e t ved, at Ri betegner et hydrogen- eller halogenatom eller nævnte gruppe med formlen -OR9; 20 r2 betegner hydrogenatomet eller nævnte gruppe med formlen -OR9; R3 og R4 sammen betegner nævnte ekstra binding; 25 r5 betegner en aminogruppe, og R6 betegner et halogenatom, en mercapto- eller Ci-Cg-alkoxy-gruppe eller nævnte gruppe med formlen -NR1°r11.
5. 4. Griseolsyrederivater ifølge krav 1, kendetegnet ved, at Ri betegner en hydroxygruppe; 35 r4 betegner et halogenatom, R3 og r2 sammen betegner nævnte oxygenatom, DK 166323B 204 R5 betegner en aminogruppe, og R6 betegner et hydrogenatom.
6. 5. Griseolsyrederivater ifølge ethvert af kravene 1-4, kendetegnet ved, at R7 betegner nævnte eventuelt substituerede aral kyl gruppe.
7. 6. Griseolsyrederivat ifølge krav 1, kendetegnet ved, at det er dibenzhydryl-N5,02,,01-tripropionylgriseolat, dinatrium-N6,02’,07,-tribenzoylgriseolat,
8. 15 N6-methylgriseolsyre, N6-benzoylgriseolsyre, O21-benzoyl gri seolsyre, O71-be nzoy1 gr i seolsyre, 6-desami no-6-hydroxygr iseolsyre, 20 6-desami no-6-mercaptogri seolsyre, N6,02',07'-tribenzoylgriseolsyre, 7'-deoxygriseolsyre, 6-desamino-7 *-deoxy-6-hydroxygriseolsyre, 2'(S)-chlor-2'-deoxygriseolsyre, 25 2'(S)-brom-2'-deoxygriseolsyre, 21-deoxygriseolsyre, bis(5-methyl-2-oxo-l,3-dioxolen-4-ylmethyl)gri seolat, 71-deoxy-7'(S)-hydroxygri seolsyre, 8-mercaptogriseolsyre, 30 8-methoxygriseolsyre, 8-bromgriseolsyre, 8-aminogriseolsyre, 7'(S)-acetoxy-7'-deoxygriseolsyre, di benzhydryl-41,7'-anhydro-5’a-brom-4'a-hydroxygr i seo lat, eller 35 2'(S)-azido-2'-deoxygriseolsyre. Farmaceutisk middel omfattende mindst én aktiv forbindelse i blanding med en farmaceutisk acceptabel bærer eller et far- 5 DK 166323 B 205 maceutisk acceptabelt fortyndingsmiddel, kendeteg net ved, at den aktive forbindelse er et gr i seolsyreder ivat ifølge ethvert af kravene 1-6. 10 15 20 25 30 35