DK157688B - Fremgangsmaade til fremstilling af vandoploeselige glycoproteiner med immunostimulerende virkning ekstraheret af klebsiella pneumoniae - Google Patents

Fremgangsmaade til fremstilling af vandoploeselige glycoproteiner med immunostimulerende virkning ekstraheret af klebsiella pneumoniae Download PDF

Info

Publication number
DK157688B
DK157688B DK414981A DK414981A DK157688B DK 157688 B DK157688 B DK 157688B DK 414981 A DK414981 A DK 414981A DK 414981 A DK414981 A DK 414981A DK 157688 B DK157688 B DK 157688B
Authority
DK
Denmark
Prior art keywords
glycoproteins
molecular weight
galactose
extracted
pneumoniae
Prior art date
Application number
DK414981A
Other languages
English (en)
Other versions
DK157688C (da
DK414981A (da
Inventor
Rene Zalisz
Marie-France Salles
Original Assignee
Roussel Uclaf
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Roussel Uclaf filed Critical Roussel Uclaf
Publication of DK414981A publication Critical patent/DK414981A/da
Publication of DK157688B publication Critical patent/DK157688B/da
Application granted granted Critical
Publication of DK157688C publication Critical patent/DK157688C/da

Links

Classifications

    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C07ORGANIC CHEMISTRY
    • C07KPEPTIDES
    • C07K14/00Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/195Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria
    • C07K14/24Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria from Enterobacteriaceae (F), e.g. Citrobacter, Serratia, Proteus, Providencia, Morganella, Yersinia
    • C07K14/26Klebsiella (G)
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02Immunomodulators
    • A61P37/04Immunostimulants
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00Medicinal preparations containing peptides
    • YGENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10STECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S435/00Chemistry: molecular biology and microbiology
    • Y10S435/8215Microorganisms
    • Y10S435/822Microorganisms using bacteria or actinomycetales
    • Y10S435/852Klebsiella
    • YGENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10STECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S530/00Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
    • Y10S530/806Antigenic peptides or proteins
    • YGENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10STECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S530/00Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
    • Y10S530/82Proteins from microorganisms
    • Y10S530/825Bacteria

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Medicines Containing Plant Substances (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Exhaust Silencers (AREA)

Description

- i -
DK 157688B
Opfindelsen angår en fremgangsmåde til fremstilling af hidtil ukendte vandopløselige immunostimulerende glyco-proteiner ekstraheret af Klebsiella pneumoniae som nærmere ^ angivet i krav l's indledning.
Et vist antal franske patentskrifter har allerede beskrevet glycoproteiner ekstraheret af Klebsiella pneumoniae. Det gælder således f.eks. de franske patentskrifter 1Q nr. 2.043.475, 2.088.112 og 2.171.907.
Den foreliggende opfindelse angår fremstillingen af glycoproteiner af Klebsiella pneumoniae med udgang fra glycoproteiner, som er fremstillet som anvist i de nævnte patentskrifter.
Det har vist sig, at man opnår hidtil ukendte vand-opløselige glycoproteiner med, som det vil fremgå af eksemplerne, bemærkelsesværdige betændelseshæmmende og 2g immunostimulerende egenskaber og med en god tolerance ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen, som er ejendommelig ved det i krav l's kendetegnende del anførte.
Det skal bemærkes, at fransk patentskrift 2.396.020 angår acetylerede glycopeptider, hvilket ikke gælder de her 25 omhandlede.
Som neutrale monosaccharider betegner man især neutrale hexoser såsom glucose, mannose og galactose.
30
Molekylvægten af de ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen fremstillede glycoproteiner bestemmes ved ultracentrifu-gering.
^ De omhandlede glycoproteiner kan ekstraheres af forskellige stammer af Klebsiella pneumoniae. Især skal dog fremhæves sådanne, som hidrører fra den stamme, som er deponeret i
DK 157688B
- 2 -
Pasteur-instituttet under nr. 52.145.
Undersøgelse af strukturen af disse glycoproteiner ved hjælp af forskellig kemisk teknik, navnlig reduktion af ^ uronsyregrupperne ved hjælp af carbodiimid, permethylering, uronsyrenedbrydning og oxidation med periodsyre eller med chromoxid, har gjort det muligt at præcisere deres sammensætning og struktur.
De foretrukne glycoproteiner, som fås ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen, er sådanne, hvor proteindelen er sammensat af ca. 30% sure aminosyrer. Ved sure aminosyrer forstås sådanne aminosyrer som asparaginsyre eller glutaminsyre.
15
Man kan benytte forskellige opløsninger af glycoproteiner ved fremgangsmådens start, og disse opløsninger fås ved diafiltrering af lysater af kulturer af Klebsiella pneumoniae på porøse kalibrerede membraner, som er i stand til 20 at tilbageholde molekyler med en molekylvægt, som er lig med eller større end en given molekylvægt, som er en konstant for disse membraner.
De benyttede membraner er f.eks. sådanne, som sælges under 7 S
J registreret varemærke Amicon XM 300, idet disse membraner gør det muligt at tilbageholde de molekyler, hvis molekylvægt er over 300.000 dalton.
Diafiltreringen gør det muligt i opløsning at udvælge de 30 molekyler, hvis molekylvægt er større end en given molekylvægt som nævnt ovenfor ved valget af membranen i afhængighed af den ønskede tilbageholdelsestærskel.
Forud for denne udvælgelsesoperation kan lysatet med meget 35 stor fordel befries for lipider og nucleinsyrer.
Under særlig foretrukne udførelsesbetingelser for frem-
DK 157688B
- 3 - gangsmåden ifølge opfindelsen fås udgangsglycoprotein-opløsningen efter den fremgangsmåde, som er beskrevet i det andet til leegscertifikat nr. 2.171.907 til fransk patent nr. 2.043.475. I dette tillægscertifikat bestemmes glyco- 5 proteinernes molekylvægt ved geleksklusionsteknikken.
Den kvaternære ammoniumforbindelse, som man benytter til behandling af udgangsglycoproteinopløsningen, kan f.eks. være pyridylcetylammoniumchlorid, men navnlig trimethyl-^ cetylammoniumbromid (Cetavlon, indregistreret varemærke).
Efter behandling med kvaternær ammoniumforbindelse kan den opnåede udfældning skilles fra den overliggende væske ved klassiske processer ved klassiske metoder såsom dekantering 15 eller filtrering, men man foretrækker adskillelse ved centrifugering .
Den opnåede opløsning behandles derpå i kulden ved ca. 4°C ved hjælp af en alkanol med lav molekylvægt såsom methanol, 20 ethanol, n-propanol eller isopropanol.
Man benytter fortrinsvis ethanol.
De mest interessante resultater fås ved anvendelse af 6 3 rumfang ethanol for hvert rumfang saltopløsning natten over ved en temperatur på 4°C.
Udfældningen genopløses i vand og dialyseres med henblik på rensning. Dialysen udføres ved hjælp af celler af klassisk type, som er lukket med membraner, f.eks. af collodium eller cellulose. Især skal nævnes celler, hvis membran er af regenereret cellulose med en gennemsnitsdiameter af porerne på ca. 24 Å, og som tilbageholder de stoffer, hvis molekylvægt er større end 12-14.000 dalton.
ηρ ( R ) •J·3 Blandt dialysecellerne skal navnlig nævnes Visking -rør.
Denne dialyse gør det muligt fra opløsningen af glyco- - 4 -
DK 157688B
proteiner at fjerne urenheder med lille molekylvægt, som er blevet tilbage, f.eks. spor af alkanol.
Inddampningen til tørhed kan foretages ved en klassisk 5 teknik, f.eks. ved forstøvning eller lyofilisering.
Lyofilisering udføres på klassisk måde, f.eks. i fryser-sublimator-enheder af middelstørrelse som modellerne SMU^^ eller SMRG^^ fra firmaet Usifroid, lyofilisatorer 10 af stor størrelse som f.eks. et arrangement dannet af en (R) fryser CA1 og en sublimator SMIRS , begge fra Usifroid.
De mindre laboratoriemodeller kan også benyttes tillige med sådanne fra andre firmaer såsom firmaet Serail.
15
Lyofiliseringstrinene er valgfrie, men foretrækkes dog.
Filtreringen på gel kan udføres direkte efter opløsningen af lyofilisatet i vand eller også under udnyttelse af den 20 vandige opløsning af glycoproteiner. Man foretrækker imidlertid at stødpudebehandle den opløsning, som skal filtreres, og at udføre elueringen med samme stødpude. Stødpuden udgøres med fordel af ammoniumcarbonat, så at glyco-proteinopløsningen, som skal filtreres, har en koncen-25 tration på 0,1 M i stødpude.
De benyttede geler er f.eks. sådanne med det indregistrerede varemærke Sephadex. Man foretrækker at benytte sådanne, som forhandles under navnet Sephacryl S 300 eller 30 Ultragel ACA34, navnlig sidstnævnte.
Filtreringen kan følges ved hjælp af den klassiske fremgangsmåde, især ved anvendelse af U.V. spektrofotometri ved 238 nm.
Under foretrukne betingelser for iværksættelsen af fremgangsmåden ifølge opfindelsen gælder følgende: 35
DK 157688 B
- 5 - - Den benyttede kvaternære ammoniumforbindelse er cetyl-trimethylammoniumbromid.
- Man isolerer den overliggende væske ved centrifugering.
5 - Alkanolen med lav molekylvægt er ethanol.
- Den benyttede gel er U1trage1 ACA34.
- Den eluerede fraktion inddampes til tørhed ved lyofili-sering.
De ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen opnåede glyco-proteiner har meget interessante farmakologiske egenskaber.
15
De har især bemærkelsesværdige immunostimulerende egenskaber samt meget god tolerance.
Disse egenskaber er illustreret nedenfor i den eksperimentelle del.
20
Disse egenskaber retfærdiggør anvendelsen af de omhandlede glycoproteiner som medikamenter.
Disse medikamenter finder f.eks. anvendelse i behandlingen 25 eller forebyggelsen af infektionssygdomme hos mennesker og. dyr, som fremkaldes af bakterier eller virus, i behandlingen af parasitsygdomme, toksiinfektioner, i behandlingen af infektioner efter hospitalsophold og operationer.
30 Den normale dosis, som varierer efter den benyttede forbindelse, den behandlede patient og den behandlede lidelse, kan f.eks. hos mennesker være fra 1 mg til 15 mg pr. dag ad oral vej, fra 1 til 15 mg pr. dag ad rektal vej og 0,25 - 5 mg pr. dag ad parenteral vej.
De hidtil ukendte glycoproteiner, som fås ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen, kan altså benyttes til frem- 35
DK 157688B
- 6 - stilling af farmaceutiske præparater, der indeholder dem som aktiv bestanddel»
Som medikamenter kan de omhandlede glycoproteiner indgives 5 ad fordøjelsesvejen, parenteralt eller lokalt.
De tilsvarende farmaceutiske præparater kan f.eks. være faste eller flydende og foreligge i de i den humane medicin gængs benyttede farmaceutiske former såsom f.eks. uover-10 sukrede eller oversukrede tabletter, gelatinekapsler, granulater, opløsninger, sirup, stikpiller eventuelt lyofiliserede injektionspræparater, ovuler, creme, pomade, lotioner, dråber, øjendråber og aerosoler. De kan fremstilles efter de gængse metoder. Den eller de aktive 15 bestanddele kan inkorporeres deri sammen med i disse farmaceutiske præparater normalt benyttede tilsætningsstoffer såsom talkum, gummi arabieum, lactose, stivelse, magnesiumstearat, kakaosmør, vandige eller ikke-vandige bærestoffer, fedtstoffer af animalsk eller vegetabilsk 20 oprindelse, paraffinderivater, glycoler og diverse fugte-, dispergerings- eller emulgeringsmidler samt konserveringsmidler.
Nedenstående eksempler illustrerer fremgangsmåden ifølge 25 opfindelsen.
Eksempel 1.
20 g forbindelse opnået i eksempel 1 i fransk patentskrift 30 nr. 2.171.907 opløses i 2 liter afmineraliseret vand.
Man tilsætter langsomt ca. 1,6 liter 3%'s Cetavlon, og det hele omrøres i 1 time og centrifugeres derpå ved 10.000 omdrejninger pr. minut i 15 minutter. Man eliminerer udfæld-35 ningen, og til den isolerede overliggende væske sætter man 3 liter 95%'s ethanol i løbet af 15 minutter. Efter 1 times omrøring centrifugerer man ved 10.000 omdrejninger pr.
- 7 -
DK 157688 B
minut i 15 minutter, den således opnåede overliggende væske elimineres, og udfældningen genopløses i 1 liter vand og (R) dialyseres derefter i 48 timer i Visking -rør mod afmine- raliseret vand ved 4°C. Efter afslutningen af denne dialyse 5 lyofiliseres opløsningen. Der fås 6,2 g glycoproteiner, hvoraf man opløser 1 g i 10 ml 0,1 M ammoniumcarbonat. Opløsningen sættes på en søjle med 2,5 cm diameter indeholdende 1 liter Ultragel ACA34 (elueringsmiddel: 0,1 M) ammoniumcarbonatopløsning, fraktionerne svarende til den ^ første elueringstop (detektering med U.V. ved 280 nm) samles og lyofiliseres, og man får 0,51 g af det ønskede protein i ren tilstand.
Eksempel 2.
15 20 g forbindelse som opnået i eksempel 1 i fransk patentskrift nr. 2.171.907 opløses i 1 liter afmineraliseret vand. Man tilsætter under omrøring 0,800 liter 3%'s Cetavlon. Efter 1 times omrøring centrifugerer man ved 20 10.000 omdrejninger pr. minut i 15 minutter. Man eliminerer udfældningen og sætter 1,5 liter 95%'s ethanol til den isolerede overliggende væske. Efter 1 times omrøring centrifugerer man i 15 minutter ved 10.000 omdrejninger pr.
minut. Den overliggende væske elimineres, og udfældningen 25 ...
optages i 0,500 liter vand og dialyseres i 48 timer i (R)
Visking -rør mod afmineraliseret vand ved 4°C.
Ved afslutningen af denne dialyse lyofiliserer man opløsningen og får 6,5 g af de ønskede glycoproteiner, som man o n renser ved passage på Ultragel ACA34 efter den teknik, som er beskrevet i eksempel 1, og man får 3,28 g af de ønskede glycoproteiner.
35
DK 157688B
- 8 -
Eksempel 3.
Man fremstiller tabletter efter recepten: - glycoproteiner ifølge eksempel 1 5 mg - tilsætningsstof til dannelse af 1 tablet på 100 mg (enkeltheder vedrørende tilsætningsstof: lactose, stivelse, talkum, magnesiumstearat).
Eksempel 4.
Man fremstiller en pomade efter recepten: - glycoproteiner ifølge eksempel 2 200 mg - tilsætningsstof ad 100 g 15
Farmakologisk undersøgelse.
A) Immunostimulerende og mitogen aktivitet.
På hold på 10 mus administrerer man ad intraplantær vej ^ 40 pg af den forbindelse, som skal undersøges, og 40 jag okseserumalbumin pr. dyr. Man administrerer 10 dage senere ad intravenøs vej en ikke-letal og ikke-chokerende dosis af serumalbumin (100 jag pr. dyr). Kontroldyr modtager kun serumalbumin under den første indsprøjtning.
25
Man maler den immunostimulerende aktivitet ved forøgelsen af reaktionen på det anafylaktiske chok af serumalbumin, og man måler den mitogene aktivitet ved forøgelsen af vægten af ganglierne, som fører fra indsprøjtningsstedet.
30 1) Immunostimulerende aktivitet:
Man konstaterer antallet af dyr i choktilstand (dyspnoe med cyanose af snuden, som kan gå helt til lammelse af bagpartiet, konvulsioner og død) samt dødeligheden 2 timer 35 efter intravenøs indsprøjtning af serumalbumin.
DK 157688B
- 9 -
Resultater:
Forbindelse ifølge eksempel_ % dyr i choktilstand % døde 1 60 40 5 2 100 50 kontrol 0 0 2) Mitogen aktivitet: 10 Man afliver de overlevende 2'timer efter intravenøs ind sprøjtning af serumalbumin, udtager de poplitiske ganglier, som fører bort fra det sted på poten, hvor indsprøjtningen har fundet sted, og vejer dem.
15 Den mitogene aktivitet udtrykkes ved hjælp af et indeks svarende til forholdet mellem gennemsnitsvægten af ganglierne på de dyr, som er blevet behandlet med den forbindelse, som skal undersøges, og gennemsnitsvægten af ganglierne på kontroldyrene, som kun har modtaget serum- 20 albumin.
Resultater:
Forbindelse ifølge eksempel Indeks 1 9,1 25 2 7,2
Forbindelserne ifølge eksempel 1 og 2 har altså meget god immunostimulerende og mitogen aktivitet.
30 B) Stimulering af ikke-specifikke forsvarsmekanismer.
Denne stimulering er blevet undersøgt i prøven for "clearance" af carbon på mus på basis af en teknik ifølge Halpern, som består i, at man i dyrets okulære sinus ind-35 sprøjter en suspension af colloidt carbon, og at man i afhængighed af tiden vurderer kinetikken for carbonets forsvinden i blodet, idet man foretager målinger af den »
DK 157688B
- 10 - optiske tæthed.
Forbindelserne indgives på dyret ad intraperitoneal vej 24 og 48 timer før prøven. Resultaterne udtrykkes i % eliminering af carbonpartikler i forhold til kontroldyr, som kun har modtaget indsprøjtningen af colloidt carbon og svarende til 100% af antallet af carbonpartikler.
Forbindelse ifølge % aktivitet i forhold ^ eksempel_ Dosis_ til kontrol_ 8 minutter 30 minutter efter ind- efter indsprøjtning sprøjtning 1 0,25 mg/kg 50% 70% 15 2 0,25 mg/kg 50% 70%
Undersøgelse af disse resultater gør det muligt at konstatere den kraftige stimulering, som fremkaldes af disse to forbindelser på organismens forsvarsmekanismer.
20 C) Akut toksicitet.
Den letale dosis 50 (DL 50) ad intraperitoneal vej på mus bestemmes ved metoden ifølge Behrens og Karber.
25
Den ligger på 30 mg/kg for glycoproteinerne ifølge eksempel 1 og 2.
D) Tolerance.
30
Subkutan indsprøjtning af 0,2 ml af en vandig opløsning af glycoproteinerne ifølge eksempel 1 og 2 i en dosis på 1000 p.g/kg på mus fremkalder ingen lokal eller generel intolerance.
35

Claims (4)

1. Fremgangsmåde til fremstilling af vandopløselige immuno-stimulerende glycoproteiner, på hvis proteinkæde der er 5 anbragt en polysaccharidfraktion, som indeholder ca. 1 molekyle glucose pr. 4 molekyler galactose og navnlig har følgende struktur: 10 --/-^galactose-^--galactose---glucose--- \ r J “ hvor m er et helt tal 3,4 eller 5, hvilke glycoproteiner er ekstraheret af Klebsiella pneumoniae og efter vægt indeholder 30-45% proteiner, 30-40% neutrale monosaccharider, mindre end 4% glucuronsyre, 2-5% monosaccharidaminer og med en molekylvægt på ca. 350.000 dalton, kendetegnet ved, at man behandler en opløsning af glycoproteiner frem-20 kommet ved diafiltrering af en ekstrakt af lysat af kulturer af Klebsiella pneumoniae med en kvaternær ammoniumforbindelse, at man isolerer den overliggende væske ved eliminering af den opnåede udfældning, at man behandler den overliggende væske svarende til en saltopløsning af 25 glycoproteinerne i kulden med en alkanol med lav molekylvægt, og at man således får en ny udfældning, som man genopløser i vand, dialyserer, lyofiliserer, atter bringer i opløsning og filtrerer på gel, hvorpå man samler den første eluerede fraktion, inddamper den og om ønsket foretager 20 denne inddampning til tørhed.
2. Fremgangsmåde ifølge krav 1, kendetegnet ved, - at den benyttede kvaternære ammoniumforbindelse er cetyltrimethylammoniumbromid, 35. at man isolerer den overliggende væske ved centri fugering, - at alkanolen med lav molekylvægt er ethanol, * DK 157688 B - 12 - t - at den benyttede gel er Ultragel ACA34, og — at den eluerede fraktion inddampes til tørhed ved lyofilisering.
,'* 3. Fremgangsmåde ifølge krav 1-2, kendetegnet ved, at glycoproteinerne ekstraheret fra den stamme, som er deponeret i Pasteur-instituttet under nr. 52.145.
4. Fremgangsmåde ifølge krav 1-3, kendetegnet ^ ved, at proteinfraktionen består af ca. 30% sure aminosyrer. 15 20 25 30 35
DK414981A 1980-09-19 1981-09-18 Fremgangsmaade til fremstilling af vandoploeselige glycoproteiner med immunostimulerende virkning ekstraheret af klebsiella pneumoniae DK157688C (da)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
FR8020188A FR2490496A1 (fr) 1980-09-19 1980-09-19 Nouvelles glycoproteines immunostimulantes extraites de klebsiella pneumoniae, leur procede d'obtention, leur application a titre de medicaments et les compositions les renfermant
FR8020188 1980-09-19

Publications (3)

Publication Number Publication Date
DK414981A DK414981A (da) 1982-03-20
DK157688B true DK157688B (da) 1990-02-05
DK157688C DK157688C (da) 1990-07-09

Family

ID=9246091

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
DK414981A DK157688C (da) 1980-09-19 1981-09-18 Fremgangsmaade til fremstilling af vandoploeselige glycoproteiner med immunostimulerende virkning ekstraheret af klebsiella pneumoniae

Country Status (16)

Country Link
US (2) US4412946A (da)
EP (1) EP0049182B1 (da)
JP (1) JPS5782322A (da)
AT (1) ATE6739T1 (da)
AU (1) AU546495B2 (da)
CA (1) CA1151544A (da)
DE (1) DE3162817D1 (da)
DK (1) DK157688C (da)
ES (1) ES8206186A1 (da)
FI (1) FI74474C (da)
FR (1) FR2490496A1 (da)
HU (1) HU185314B (da)
IE (1) IE51590B1 (da)
IL (1) IL63681A0 (da)
PT (1) PT73706B (da)
ZA (1) ZA816463B (da)

Families Citing this family (18)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR2540136A1 (fr) * 1983-01-28 1984-08-03 Roussel Uclaf Nouveau procede de preparation d'acylglycoproteines immunostimulantes extraites de klebsiella pneumoniae, compositions pharmaceutiques et procede de lutte contre les maladies allergiques
US4870053A (en) * 1980-09-19 1989-09-26 Roussel Uclaf Novel compositions and processes
FR2490496A1 (fr) * 1980-09-19 1982-03-26 Roussel Uclaf Nouvelles glycoproteines immunostimulantes extraites de klebsiella pneumoniae, leur procede d'obtention, leur application a titre de medicaments et les compositions les renfermant
FR2523154A1 (fr) * 1982-03-09 1983-09-16 Fabre Sa Pierre Procede de preparation de proteoglycanes immunostimulants inducteurs d'interferon, proteoglycanes obtenus et medicaments les contenant
FR2570081B1 (fr) * 1984-09-10 1987-01-09 Pf Medicament Polysaccharides membranaires utiles notamment comme medicament et procede pour leur preparation
FR2574429B1 (fr) * 1984-12-06 1987-12-11 Roussel Uclaf Acylglycannes extraits de klebsiella, leur procede d'obtention, leur application a titre de medicaments et les compositions les renfermant
JP2522945B2 (ja) * 1987-06-18 1996-08-07 呉羽化学工業株式会社 抗レトロウィルス剤
DE19836339B4 (de) * 1998-08-11 2011-12-22 N.V. Nutricia Kohlenhydratmischung
FR2842208B1 (fr) * 2002-07-10 2004-10-22 Lco Sante Extraits membranaires de klebsiella presentant des proprietes avantageuses, et procede de production de ces extraits
ATE373963T1 (de) * 2002-08-30 2007-10-15 Campina Bv Schäumender bestandteil und diesen bestandteil enthaltende produkte
ES2309901T3 (es) * 2003-10-24 2008-12-16 N.V. Nutricia Oligosacaridos inmunomoduladores.
EP1597978A1 (en) * 2004-05-17 2005-11-23 Nutricia N.V. Synergism of GOS and polyfructose
US8252769B2 (en) 2004-06-22 2012-08-28 N. V. Nutricia Intestinal barrier integrity
EP1723951A1 (en) * 2005-04-21 2006-11-22 N.V. Nutricia Nutritional supplement with oligosaccharides for a category of HIV patients
MXPA06015071A (es) * 2004-06-22 2007-08-06 Nutricia Nv Mejoramiento de la integridad de barrera con acidos grasos en pacientes con vih.
EP1721611A1 (en) * 2005-04-21 2006-11-15 N.V. Nutricia Nutritional supplement with oligosaccharides for a category of HIV patients
AU2006237738B2 (en) * 2005-04-21 2011-09-29 N.V. Nutricia Nutritional supplement for HIV patients
WO2009096772A1 (en) * 2008-02-01 2009-08-06 N.V. Nutricia Composition for stimulating natural killer cell activity

Family Cites Families (19)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3408440A (en) * 1966-09-26 1968-10-29 Procter & Gamble Method of preparing substantially cell-free somatic antigens
NL174267B (nl) * 1969-05-20 Roussel Uclaf Verbetering van de werkwijze voor de bereiding van een somatisch antigeen volgens het nederlandse octrooischrift 169754 en werkwijze ter bereiding van een farmaceutisch preparaat.
US3929994A (en) * 1969-05-20 1975-12-30 Roussel Uclaf Anti-inflammatory glycoprotein compositions and method of use
US3855197A (en) * 1969-05-20 1974-12-17 Cassenne Lab Sa Glycoproteins extracted from microorganisms
FR2088112B2 (da) * 1970-05-20 1975-01-10 Cassenne Lab Sa
BE795417A (fr) * 1972-02-15 1973-08-14 Roussel Uclaf Nouveaux composes d'origine-bacterienne et procede d'obtention
NL7308450A (da) * 1972-06-20 1973-12-27
US4001395A (en) * 1972-06-20 1977-01-04 Agence Nationale De Valorisation De La Recherche (Anvar) Hydrosoluble extracts of mycobacteria
FR2253499B1 (da) * 1973-12-10 1977-11-04 Fabre Sa Pierre
AR207237A1 (es) * 1974-02-25 1976-09-22 Thomas A Procedimiento para obtener extractos biologicos estables liofilizados solubles constituidos por complejos proteicos termorresistentes
FR2269961B1 (da) * 1974-05-06 1978-03-24 Anvar
FR2378855A1 (fr) * 1977-01-27 1978-08-25 Cassenne Lab Sa Nouvelles glycoproteines isolees d'hafnia, procede de preparation et application a titre de medicaments
FR2396020A1 (fr) * 1977-07-01 1979-01-26 Cassenne Lab Sa Nouveaux glycopeptides acetyles hydrosolubles extraits de corps microbiens lyses d'hafnia, d'aerobacter cloacae et de klebsiella pneumoniae, procede de preparation et application a titre de medicaments de ces produits
FR2444464A1 (fr) * 1978-12-19 1980-07-18 Fabre Sa Pierre Proteoglycanes bacteriens purifies, procede pour leur preparation et vaccin les contenant
US4203970A (en) * 1979-03-05 1980-05-20 Merck & Co., Inc. Swine atropic rhinitis vaccine
FR2462477A1 (fr) * 1979-07-31 1981-02-13 Cassenne Lab Sa Nouvelles glycoproteines de klebsiella pneumoniae, procede d'obtention, application a titre de medicaments et compositions les renfermant
FR2490495A1 (fr) * 1980-09-19 1982-03-26 Roussel Uclaf Nouvelles glycoproteines hydrosolubles immunostimulantes extraites de klebsiella pneumoniae, leur procede d'obtention, leur application a titre de medicaments et les compositions les renfermant
FR2490496A1 (fr) * 1980-09-19 1982-03-26 Roussel Uclaf Nouvelles glycoproteines immunostimulantes extraites de klebsiella pneumoniae, leur procede d'obtention, leur application a titre de medicaments et les compositions les renfermant
FR2523154A1 (fr) * 1982-03-09 1983-09-16 Fabre Sa Pierre Procede de preparation de proteoglycanes immunostimulants inducteurs d'interferon, proteoglycanes obtenus et medicaments les contenant

Also Published As

Publication number Publication date
ES505595A0 (es) 1982-08-16
PT73706A (fr) 1981-10-01
JPH0143760B2 (da) 1989-09-22
IE51590B1 (en) 1987-01-21
HU185314B (en) 1985-01-28
IE812178L (en) 1982-03-19
US4412946A (en) 1983-11-01
FR2490496B1 (da) 1983-05-27
ATE6739T1 (de) 1984-04-15
CA1151544A (fr) 1983-08-09
FI74474B (fi) 1987-10-30
FR2490496A1 (fr) 1982-03-26
EP0049182A1 (fr) 1982-04-07
DK157688C (da) 1990-07-09
US4596709A (en) 1986-06-24
AU7545181A (en) 1982-03-25
IL63681A0 (en) 1981-11-30
DE3162817D1 (en) 1984-04-26
FI812923L (fi) 1982-03-20
EP0049182B1 (fr) 1984-03-21
ES8206186A1 (es) 1982-08-16
ZA816463B (en) 1982-09-29
DK414981A (da) 1982-03-20
PT73706B (fr) 1983-10-19
JPS5782322A (en) 1982-05-22
AU546495B2 (en) 1985-09-05
FI74474C (fi) 1988-02-08

Similar Documents

Publication Publication Date Title
DK157688B (da) Fremgangsmaade til fremstilling af vandoploeselige glycoproteiner med immunostimulerende virkning ekstraheret af klebsiella pneumoniae
Gottschalk The chemistry and biology of sialic acids and related substances
JPH05503952A (ja) 可溶性グルカン類の製造方法
DK157687B (da) Fremgangsmaade til fremstilling af vandoploeselige glycoproteiner med immunostimulerende virkning ekstraheret af klebsiella pneumoniae
JPH0539305A (ja) アストラガルス・メンブラナセウスから抽出した免疫 変調性多糖類及びこれらを含有する薬剤組成物
US4501693A (en) Method of preparing immunostimulant proteoglycans which induce production of interferon, proteoglycans obtained and pharmaceutical compositions containing them
JP2011522911A (ja) 免疫調節特性を有するクロレラ抽出物から得られる組成物
US4870053A (en) Novel compositions and processes
DK150497B (da) Fremgangsmaade til fremstilling af vandoplaeselige glycoproteiner med betaendelseshaemmende og immunostimulerende virkning
US5151498A (en) Glycoprotein from avena sativa, process for its preparation, and pharmaceutical compositions containing same
DE3029111C2 (da)
CH657989A5 (de) Biologisch aktive substanz, verfahren zur herstellung der substanz, sowie die substanz enthaltende, immunoaktive zusammensetzung.
FI78304B (fi) Nytt foerfarande foer framstaellning av klebsiella pneumonia extraherade immunsystemet stimulerande acylglykoproteiner.
JPH0379602A (ja) 免疫刺激・抗増殖作用を有する多糖類、その製造方法及びこの物質を含有した薬剤
RU2276157C2 (ru) Полисахарид с иммуностимулирующей активностью, способ его получения и применение
US3655875A (en) Clam extract effective against sarcoma 180 and krebs-2 carcinoma in mice
JP2964352B2 (ja) 抗hiv剤
JPS61251623A (ja) 細胞付着阻害剤の製造法、このようにして得た抗アドヘツシン、およびこれを含有する薬物および食物
Stacey V. Conjugated proteins (nucleo-and muco-proteins). Conjugated proteins
JPS62198693A (ja) 新規ポリサツカライド
JPS6058921A (ja) 抗腫瘍性物質及びその製造法
JPH0261481B2 (da)
Suganuma Studies on the Toxins of Hemolytic Streptococci Primary Report. On the Protein of Bacterial Bodies
HU210351A9 (hu) Glikoproteinek, melyek zabból (Avena sativa) állíthatók elő, eljárás előállításukra és azokat tartalmazó gyógyászati készítmény Az átmeneti oltalom a(z) 1. és 11. igénypontra vonatkozik.
JPS6070087A (ja) 生理活性物質sν−5884,その製造法及び制癌剤