DK154769B - Monoklonalt antistof, fremstilling heraf, hybridomacellelinie til anvendelse ved fremstilling heraf samt fremgangsmaader til anvendelse heraf - Google Patents

Monoklonalt antistof, fremstilling heraf, hybridomacellelinie til anvendelse ved fremstilling heraf samt fremgangsmaader til anvendelse heraf Download PDF

Info

Publication number
DK154769B
DK154769B DK180380AA DK180380A DK154769B DK 154769 B DK154769 B DK 154769B DK 180380A A DK180380A A DK 180380AA DK 180380 A DK180380 A DK 180380A DK 154769 B DK154769 B DK 154769B
Authority
DK
Denmark
Prior art keywords
cells
antibody
cell
cell line
monoclonal antibody
Prior art date
Application number
DK180380AA
Other languages
English (en)
Other versions
DK180380A (da
DK154769C (da
Inventor
Patrick Chung-Shu Kung
Gideon Goldstein
Original Assignee
Ortho Pharma Corp
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=21871750&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=DK154769(B) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Ortho Pharma Corp filed Critical Ortho Pharma Corp
Publication of DK180380A publication Critical patent/DK180380A/da
Publication of DK154769B publication Critical patent/DK154769B/da
Application granted granted Critical
Publication of DK154769C publication Critical patent/DK154769C/da

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C07K16/2809—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against the T-cell receptor (TcR)-CD3 complex
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
    • G01N33/57407—Specifically defined cancers
    • G01N33/57426—Specifically defined cancers leukemia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
    • Y10S435/8215—Microorganisms
    • Y10S435/948—Microorganisms using viruses or cell lines
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
    • Y10S530/806—Antigenic peptides or proteins
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
    • Y10S530/808—Materials and products related to genetic engineering or hybrid or fused cell technology, e.g. hybridoma, monoclonal products
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
    • Y10S530/808—Materials and products related to genetic engineering or hybrid or fused cell technology, e.g. hybridoma, monoclonal products
    • Y10S530/809—Fused cells, e.g. hybridoma

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Hybrid Cells (AREA)

Description

i
DK 1 54769 B
Den foreliggende opfindelse angår et monoklonalt antistof, fremstilling heraf, en hybridomacellelinie til anvendelse ved fremstillingen heraf samt fremgangsmåder til anvendelse heraf.
Fusionen af muse-myeloma-celler til milt-celler fra immunicerede 5 mus af Kohier og Milstein i 1975 (Nature 256, 495-497 (1975)) viste for første gang, at det var muligt at opnå en kontinuert celle-linie, der fremstiller homogent (såkaldt "monoklonalt") antistof. Siden dette grundlæggende arbejde har der været udfoldet store anstrengelser på at fremstille forskellige hybride celler (kaldet "hybridomas") og 10 på at anvende det ved hjælp af disse hybridomas fremstillede antistof til forskellige videnskabelige undersøgelser. Der henvises fx. til Current Topics in Microbiology and Immunology, bind 81 - "Lymphocyte Hybridomas", F. Melchers, M. Potter og N. Warner, Editors, Springer-Verlag, 1978 og de deri angivne referencer, C.J. Barnstable, 15 et al., Cell, 14, 9-20 (maj 1978), P. Parham og W.F. Bodmer, Nature 276, 397-399 (november 1978), Handbook of Experimental Immunology, 3. udgave, bind 2, D.M. Wier, Editor, Blackwell, 1978, kapitel 25, og Chemical and Engineering News, 1. januar 1979, 15-17. Disse referencer indikerer samtidig belønningerne og komplikationerne ved at 20 forsøge at fremstille monoklonalt antistof ud fra hybridomas. Selvom den almene teknik forstås principielt godt, mødes mange vanskeligheder og variationer kræves for hvert specifikt tilfælde. I virkeligheden er der ingen sikkerhed, forud for forsøget på at fremstille et givet hybridoma, for at det ønskede hybridoma vil blive opnået, at 25 det, hvis opnået, vil producere antistof eller at det således fremstillede antistof vil have den ønskede specificitet. Graden af success påvirkes principalt af den anvendte antigen-type og den til isolering af det ønskede hybridoma anvendte udvælgelsesteknik.
Den tilstræbte fremstilling af monoklonalt antistof for humane lym-30 focyt celle-overflade antigener er kun blevet rapporteret i nogle få tilfælde. Se fx. Current Topics in Microbiology and Immunology, ibid, 66-69 og 164-169. De i disse rapporterede forsøg anvendte antigener var dyrkede humane lymfoblastoide leukæmia og humane kroniske lymfocytiske leukæmia celle-linier. Mange opnåede hybridomas syntes 35 at danne antistof over for forskellige antigener på alle humane celler.
Ingen af disse hybridomas dannede antistof over for en forud defineret klasse af humane lymfocyter.
Det bør forstås, at der findes to principielle klasser af lymfo-
DK 154769 B
2 cyter, som er involveret i immunsystemet hos mennesker og dyr.
Den første af disse (den thymus-afledte celle eller T-celle) differentieres i thymus fra hæmopoietiske stam-celler. Mens de befinder sig i thymus, kaldes de differentierende celler for "thymocyter". De mod-5 ne T-celler forlader thymus og cirkulerer mellem væv, lymfekar og blodbaner. Disse T-celler udgør en stor andel af mængden af recirku-lerende små lymfocyter. De har immunologisk specificitet og er direkte involveret i celle-medierede immun-reaktioner (såsom transplantationsafvisning) som effektor-celler. Selvom T-celler ikke sekreterer 10 humorale antistoffer, kræves de under tiden for udskillelsen af disse antistoffer af den nedenfor omtalte anden klasse af lymfocyter. Nogle typer af T-celler har en regulerende funktion ved andre aspekter af immun-systemet. Mekanismen for denne proces ved celle-samvirke forstås endnu ikke fuldt ud.
15 Den anden klasse af lymfocyter (de benmarvs-afledte celler eller B-celler) er de som udskiller antistof. De dannes også fra hæmopoietiske stam-celler, men deres differentiering bestemmes ikke af thymus.
I fugle differentieres de i et med thymus analogt organ, kaldet Bursa Fabricii. I pattedyr har man imidlertid ikke oplevet et ækvivalent 20 organ og det antages, at disse B-celler differentierer i benmarven.
Det anerkendes nu, at T-celler kan opdeles i mindst adskillige undertyper, kaldet "hjælpe", "suppressor", og "dræbe" T-celler, der har den funktion (hhv.) at fremme en reaktion, undertrykke en reaktion eller dræbe (lysere) fremmede celler. Disse underklasser 25 forstås godt inden for musefamilien, men er kun for nyligt blevet beskrevet for humane systemer. Se fx. R.L. Evans, et al., Journal of Experimental Medicine, bind 145, 221-232, 1977 og L. Chess og S.F. Schlossman - "Functional Analysis of Distinct Human T-Cell Subsets Bearing Unique Differentiation Antigens", i "Contemporary 30 Topics in Immunobiology", 0. Stutman, Editor, Plenum Press, 1977, bind 7, 363-379.
Evnen til at identificere klasser eller underklasser af T-celler er vigtig for diagnosen af forskellige immuno-regulatoriske uregelmæssigheder eller tilstande.
35 Fx. har visse leukæmityper og lymfomas forskellig prognose i afhængighed af, om de er af B-celle eller T-celle oprindelse. Således afhænger vurderingen af sygdomsprognosen af, at man kan skelne mellem disse to klasser af lymfocyter. Se fx. A.C. Aisenberg og J.C.
3
DK 1 54769 B
Long, The American Journal of Medicine, 58:300 (marts 1975), D.
Belpomme, et al., i "Immunological Diagnosis of Leukemias and Lymphomas", S. Thierfelder, et al., eds, Springer, Heidelberg, 1977, 33-45, og D. Belpomme, et al., British Journal of Haematology, 1978, 5 38, 85. Visse sygdomstilstande (fx. juvenil rheumatoid arthritis og visse leukæmityper) hænger sammen med en ubalance af T-celle underklasser. Det er blevet foreslået, at autoimmune sygdomme i almindelighed hænger sammen med et overskud af "hjælpe" T-celler eller mangel på visse "suppressor" T-celler, mens maligne tilfælde i almin-10 delighed hænger sammen med et overskud af "suppressor" T-celler.
I visse leukæmi typer produceres overskud af T-celler på et hæmmet udviklingsstade. Diagnosen kan derfor afhænge af muligheden for at påvise sådan ubalance eller overskud. Se. fx. J. Kersey, et al., "Surface Markers Define Human Lymphoid Malignancies with Differing 15 Prognoses" i Haematology and Blood Transfusion, bind 20, Springer-Verlag, 1977, 17-24 og de deri anførte referencer.
Identifikationen og undertrykkelsen af humane T-celle klasser og underklasser er tidligere sket ved anvendelse af spontane autoantistoffer eller selektive antisera for humane T-celler opnået ved immu-20 nisering af dyr med humane T-celler, tapning af dyrene til opnåelse af serum og adsorption af antiserum med (fx.) autologe, men ikke allogene B-celler til fjernelse af antistoffer med uønskede reaktiviteter. Fremstillingen af disse antisera er særdeles vanskelig, især i adsorptions-og rensningstrinnene. De adsorberede og rensede antise-25 ra kan endog indeholde mange urenheder foruden det ønskede antistof, af adskillige grunde. For det første indeholder serum millioner af antistof-molekyler, selv før T-celle-immuniceringen. For det andet bevirker immuniceringen dannelse af antistoffer mod en lang række antigener, som findes på alle injicerede humane T-celler. Der er in-30 gen selektiv dannelse af antistof over for et enkelt antigen. For det tredje er titeren af specifikt antistof opnået ved sådanne metoder sædvanligvis meget lav (fx. inaktiv ved fortyndinger på mere end 1:100) og forholdet mellem specifikt og non-specifikt antistof er mindre end 1/106, se fx. den ovenfor omtalte artikel af Chess og Schlossman 35 (side 365 og følgende) og den ovenfor omtalte artikel i Chemical and Engineering News, hvor manglerne ved hidtil kendte antisera og fordelene ved monoklonalt antistof er beskrevet.
Der er nu fundet en ny hybridomacellelinie, som er i
DK 154769B
4 stand til at producere hidtil ukendt komplement-fikserende monoklonalt antistof over for et antigen, som findes på i det væsentlige alle normale humane perifere T-celler og kutane T-lymphoma-celler. Det således dannede antistof er monospecifikt for en enkelt determinant på 5 normale, humane T-celler og kutane T-lymphoma-celler og indeholder i det væsentlige ingen anden antihuman immungi obul in, i modsætning til tidligere kendte antisera (som nødvendigvis er kontamineret med antistof, der er reaktivt over for talrige humane antigener) og til hidtil kendte monoklonale antistoffer (der ikke er monospecifikke for 10 et humant T-celle antigen). Endvidere kan denne hybridomacellelinie dyrkes til fremstilling af antistof uden nødvendigheden af at immunicere og dræbe dyr, efterfulgt af de trivielle adsorptions- og rensningstrin, som er nødvendig for at opnå blot de urene antisera ifølge den kendte teknik.
15 En prøve af det omhandlede hybridoma deponeredes hos American
Type Culture Collection, 12301 Parklawn Drive, Rockville, MD, 20852 d. 26. april 1979 og har fået tildelt ATCC nummer CRL 8001.
Det monoklonale antistof ifølge opfindelsen af klasse IgG er i overensstemmelse hermed ejendommeligt ved, at det er identisk med det 20 monoklonale antistof, der fremstilles af hybridomacel!el inien ATCC nr.
8001 og at det a) reagerer med i det væsentlige alle normale humane perifere T-celler og kutane T-lymphoma-celler, men ikke med normale humane perifere B-celler, nul-celler eller makrofager, 25 b) reagerer med ca. 5% til ca. 10% af normale humane thy-mocyter, c) reagerer med leukæmi ske celler fra mennesker med T-celle kronisk lymfoblastisk leukæmi a, men ikke med leukæmi ske celler fra mennesker med T-celle akut lymfoblastisk leukæ- 30 mia, nul-celle akut lymfoblastisk leukæmi eller B-celle kro nisk lymfatisk leukæmi, d) ikke reagerer med human T-celle-linie CEM (ATCC nr. CCL 119), e) ikke reagerer med Epstein-Barr vi rus-transformeret human B-celle-linie SB (ATCC nr. CCL 120), og 35 f) fikserer kompliment.
Hybridomacellelinien ifølge opfindelsen til anvendelse ved fremstilling af nævnte monoklonale antistof er ejendommelig ved, at det er cellelinien ATCC nr. CRL 8001.
DK 154769 B
5
Fremgangsmåden ifølge opfindelsen til fremstilling af det omhandlede monoklonale antistof er ejendommelig ved, at man dyrker hybridoma-cellelinien ATCC nr. CRL 8001 in vitro i et egnet medium eller indfører den intraperitonealt til mus, og udvinder antistoffet fra supernatanten 5 fra in vitro dyrkningen eller fra maligne ascites eller serum fra musene.
Fremgangsmåden ifølge opfindelsen til bekræftelse af tilstedeværelsen af kutan Tcelle lymphoma i et individ er ejendommelig ved, at man blander et lymphoma T-celle-præparat fra individet med det om-10 handlede antistof i en mængde, som er effektiv til at bevirke en reaktion mellem eventuelle kutane T-lymphoma-celler og antistoffet.
Fremgangsmåden ifølge opfindelsen til bestemmelse i et individ af andelen af cirkulerende lymfocyter, som er T-celler, er ejendommelig ved, at man blander det omhandlede antistof med et lymfocyt-15 præparat fra det pågældende individ og bestemmer mængden af lymfocyter, som reagerer med antistoffet og derfor er T-celler.
Den omhandlede hidtil ukendte hybridomacellelinie ATCC nr.
CRL 8001 er blevet fremstillet under anvendelse af fremgangsmåden ifølge Milstein og Kohier. Efter immunisering af mus med normale 20 E-roset positive humane T-celler, fusioneredes de immunicerede mus' milt-celler med celler fra en muse-myeloma-linie og de resulterende hybridomas screenedes for sådanne med supernatanter indeholdende antistof, som gav selektiv binding til normale E-roset positive humane T-celler. De ønskede hybridomas blev derefter klonet og karakteriseret.
25 Som resultat opnåedes hybridomacellelinie ATCC nr. CRL 8001, som danner antistof (kaldet 0KT3) over for et antigen på i det væsentlige alle normale humane T-celler. Dette antistof reagerer ikke alene med i det væsentlige alle normale humane perifere T-celler, men reagerer heller ikke med andre normale perifere blod-lymfoide celler. Endvidere 30 påvises det celle-overfladeantigen, som erkendes af dette antistof, kun på modne thymocyter og mangler fuldstændigt på mere end 90% af normale humane thymocyter.
I betragtning af de anførte vanskeligheder ved den kendte teknik og manglen på succes, som er rapporteret ved anvendelse af 35 maligne celle-linier som antigen, var det, selvom hybridomacellelinien er opnået på i og for sig kendt måde, ikke til at forudsige, om det var muligt at tilvejebringe det ønskede hybridoma. Det skal understreges, at den uforudsigelige natur af hybrid-celle fremstilling
DK 154769B
6 ikke gør det muligt at ekstrapolere fra et antigen eller celle system til et andet. Det har endda i forbindelse med den foreliggende opfindelse vist sig, at anvendelse af en T-celle malign celle-linie som antigen bevirkede dannelse af hybridomas, som ikke dannede det ønskede 5 antistof. Forsøg på at anvende rensede antigener adskilt fra celleoverfladerne, var også uden gunstigt resultat.
Fremstillingen og karakteriseringen af det omhandlede hybridoma og det resulterende antistof vil blive nærmere forklaret i det følgende.
10
Fremgangsmåden til fremstilling af det omhandlede hybridoma omfatter følgende trin: A. Man immunicerer mus med E-roset positive rensede, normale, 15 humane, perifere T-celler.
B. Miltene fjernes fra de immunicerede mus og der fremstilles en milt-suspension i et passende medium.
20 C. De suspenderede milt-celler fusioneres med muse-myeloma- celler fra en passende celle-linie ved anvendelse af en passende fusionspromoter.
D. Man fortynder og dyrker i separate beholdere blandingen 25 af ufusionerede milt-celler, ufusionerede myeloma-celler og fusionerede celler i et selektivt medium, som ikke nærer de ufusionerede myeloma-celler, i et tidsrum, som er tilstrækkelig til at de ufusionerede celler dør.
30 E. Man vurderer supernatanten i hver beholder (fordybning), som indeholder et hybridoma, for tilstedeværelsen af antistof mod E-roset positive rensede humane T-celler.
F. Man udvælger (fx. ved begrænsningsfortynding) og kloner 35 hybridomas, som producerer det ønskede antistof.
Det monoklonale antistof kan produceres på én af to måder. Det reneste monoklonale antistof dannes ved in vitro dyrkning af det omhand-
DK 154769 B
7 lede hybridoma i et egnet medium i et passende tidsrum efterfulgt af udvinding af det ønskede antistof fra supernatanten. Det egnede medium og den egnede dyrkningstid kendes eller kan let bestemmes.
Denne in vitro metode danner i det væsentlige monospecifikt mono-5 klonalt antistof, der er i det væsentlige frit for andet specifikt anti-human immun-globulin. Der er en lille smule andet immun-globulin til stede eftersom mediet indeholder xenogent serum (fx. foetalt kalveserum). Denne in vitro metode kan imidlertid ikke producere en tilstrækkelig mængde eller koncentration af antistof til visse formål, 10 eftersom koncentrationen af monoklonalt antistof kun er ca. 50 øg/ml.
Til fremstilling af en meget større koncentration af en smule mindre rent monoklonalt antistof kan det omhandlede hybridoma injiceres i mus, fortrinsvis syngeni ske eller semi-syngeni ske mus. Hybridoma-et vil bevirke dannelse af antistof-producerende tumorer efter en 15 passende inkubationstid, som vil resultere i en høj koncentration af det ønskede antistof (ca. 5-20 mg/ml) i blodbanerne og peritonealt exudat (ascites) hos værtsmusene. Selvom disse værtsmus også har normale antistoffer i deres blod og ascites, er koncentrationen af disse normale antistoffer kun ca. 5% af den monoklonale antistof-koncen-20 tration. Da disse normale antistoffer endvidere er ikke antihumane med hensyn til deres specificitet, er det fra udvundet ascites eller fra serum opnåede monoklonale antistof i det væsentlige fri for noget forurenende antihumant immun-globulin. Dette monoklonale antistof har høj titer (aktiv ved fortyndinger på 1:100.000 eller mere) og 25 højt forhold mellem specifikt og non-specifikt immun-globulin (ca.
1/20). Immun-globulin produceret under inkorporering af de såkaldte "k light" myeloma-kæder er non-specifikke "nonsens" peptider, som blot fortynder det monoklonale antistof uden at nedsætte dets specificitet.
30
Eksempel 1
Fremstilling af monoklonalt antistof A. Immunicerina oa somatisk ceHe-hvbridicerina 35 CAF,-mus af hunkøn (Jackson Laboratories, 6-8 uger gamle) 1 7 immuniceredes intraperitonealt med 2 x 10 E-roset rensede T-celler i 0,2 ml fosfat-forpufret saltopløsning med 14 dages intervaller. Fire dage efter den tredje immunicering fjernedes miltet fra musene og
DK 154769 B
8 en enkelt celle-suspension fremstilledes ved at presse vævet gennem et rustfrit stål net.
Celle-fusion foretoges iht. den af Kohier og Milstein udviklede
O
metode. 1 x 10 splenocyter fusioneredes i 0,5 ml fusionsmedium inde-5 holdende 35% polyethylenglycol (PEG 1000) og 5% dimethyl sulfoxid i "RPMI 1640" medium (Gibco, Grand Island, NY) med 2 x 10^ P3X63Ag8Ul myeloma-celler leveret af Dr. M. Scharff, Albert Einstein College of Medicine, Bronx. NY. Disse myeloma-celler sekreterer IgGj k light kæder.
10 B. Udvælgelse og vækst af hvbridoma
Efter celle-fusion dyrkedes celler i HAT medium (hypoxanthin, aminopterin og thymidin) ved 37°C med 5% CO^ i en fugtig atmosfære.
Adskillige uger senere tilsattes 40 til 100 /il supernatant fra kulturer
C
15 indeholdende hybridomas til en tablet af 10 perifere lymfocyter adskilt i E-roset positiv (E+) og E-roset negativ (E") populationer, som var fremstillet ud fra blod af sunde humane donorer som beskrevet af Mendes (J. Immunol. 111:860, 1973). Påvisning af muse-hybri-doma-antistoffer, som binder til disse celler, bestemtes ved radioimmu- 20 noundersøgelse og/eller indirekte immunofluorescens. Ved den første 125 metode omsattes cellerne først med 100 /il affinitets-renset I gede-anti-muse IgG (106 cpm//ig, 500 /ig//il). (Detaljer vedrørende i odering af gede-anti-mus blev beskrevet af Kung, et al., J. Biol. Chem.
251(8): 2399, 1976). Alternativt stænkedes celler inkuberet med dyrk-25 nings-supernatenter med et fluoresceret gede-anti-muse IgG (G/M FITC) (Meloy Laboratories, Springfield, VA, F/p = 2,5) og de fluorescerende antistof-belagte celler analyseredes dernæst på cytofluoro-graf "FC200/4800A" (Ortho Instruments, Westwood, MA) som beskrevet i eksempel 2. Hybridoma-kul turer indeholdende antistoffer, der 30 reagerede specifikt med E+ lymfocyter (T-celler) udvalgtes og klone-des. Derefter overførtes klonerne intraperitonealt ved injektion af 1 x 10^ celler af en given klon (0,2 ml volumen) i CAF^-mus, der var forbehandlet med 2,6,10,14-tetramethylpentadecan leveret af Aldrich Chemical Company under navnet "Pristine". De maligne ascites fra 35 disse mus anvendtes dernæst til karakterisering af lymfocyter som beskrevet nedenfor i eksempel 2. Det pågældende hybrid-antistof 0KT3 blev ved standardteknik påvist at være af IgGg underklasse og at fiksere komplement.
DK 154769 B
9
Eksempel 2
Karakterisering af 0KT3 reaktivitet 5 A. Isolering af 1yrnfocvt-populationer
Humane perifere blod-mononukleære celler i soleredes fra raske frivillige donorer (alder 15-40) ved hjælp af "Ficoll-Hypaque" densi-tets-gradient-centrifugering (Pharmacia Fine Chemicals, Piscataway, NJ) efterfulgt af teknikken beskrevet af Boyum i Scand. J. Cl in.
10 Lab. Invest. 21 (Suppl. 97):77, (1968). Ufraktionerede mononukleære celler opdeltes i overflade Ig+ (B) og Ig" (T plus nul) populationer ved hjælp af "Sephadex G-200" anti-F(ab'),, søjlekromatografi som tidligere beskrevet af Chess, et al., J. Immunol. 113:1113 (1974).
T-celler blev vundet ved E-rosettering af Ig’ populationen med 5% 15 fåre-erythrocyter (Microbiological Associates, Bethesda, MD). Den rosetterede blanding lagdeltes over Picoll-Hypaque og den vundne E+-tablet behandlet med 0,155M NH^Cl (10 ml per 10** celler). Den således opnåede T-celle population var mindre end 2% EAC-roset positiv og mere end 95% E-roset positiv bestemt ved standardmetoder.
20 Endvidere blev den non-rosetterende Ig’ (nul-celle) population udvundet fra Ficoll-interfladen. Denne sidstnævnte population var mindre end 5% E+ og mindre end eller lig 2% slg+. Overflade Ig+ (B) populationen opnåedes fra "Sephadex G-200" kolonnen efter eluering med normal human gamma-globulin som tidligere beskrevet. Denne popula-25 ti on var mere end 95% overflade IG+ og mindre end 5% E+.
Normale humane makrofager opnåedes fra den mononukleære population ved vedhæftning til polystyren. Således resuspenderedes mononukleære celler i slut-kulturmedier (RPMI 1640, 2,5 mM HEPES [4-(2-hydroxyethyl)-l-piperazinpropan-sulfonsyre] puffer, 0,5% natri-30 umbicarbonat, 200 mM L-glutamin og 1% penicillin-streptomycin, tilsat 20% varme-inaktiveret humant AB serum) ved en koncentration på 2 x 10® celler og inkuberedes i formstof-petriskåle (100 x 20 mm) (Falcon Tissue Culture Dish, Falcon, Oxnard, CA) ved 37°C natten over.
Efter grundig udvaskning til fjernelse af ikke vedhæftende celler, 35 frigjordes den vedhæftende population ved rigelig udvaskning med koldt serum-frit medium indeholdende 2,5 mM EDTA og lejlighedsvis skrabning med gummi-spidsen af stemplet for en éngangs-sprøjte.
Mere end 85% af celle-populationen var i stand til at indtage latex-
DK 154769 B
10 partikler og havde monocytes-morfologiske egenskaber ved Wright-Giemsa pletning.
B. Normal thvmus 5 Normal human thymus-kirtel opnåedes fra patienter med en alder mellem 2 måneder og 14 år, som var under korrektiv kardial-kirurgi.
Frisk opnåede portioner af thymus-kirtlen anbragtes straks i 5% foetal t kalve-serum i medium "199” (Gibco) fint parteret med forceps og saks, og tildannedes derefter til enkeltcelle-suspensioner ved 10 presning gennem trådnet. Cellerne lagdeltes dernæst over Ficoll-Hypaque og spunnet og vasket som beskrevet i afsnit A ovenfor. De således opnåede thymocyter var mere end 95% levende og mere end eller lig 90% E-roset positiv.
15 C. Celle-linier
Epstein-Barr Virus (EBV) transformeret B-celle-linie SB (ATCC nr.
CCL 120) fremstilledes som tidligere beskrevet. T-celle-linien CEM, (ATCC nr. CCL 119) fra leukemi-patienter leveredes af Dr. H. Lazarus,
Sidney Farber Cancer Institute, Boston, MA.
20 D. T akut Ivmfoblastisk leukæmia fT-ALLl celler οα T kronisk lymfatisk leukæmi a (T-CLL) celler
Leukæmia-celler opnåedes fra 12 patienter med T-ALL. Disse individers celler var forud bestemt af hver af T-celle-linie ved deres 25 spontane roset-dannelse af fåre-erythorcyter (mere end 20% E+) og reaktivitet med T-celle specifikke hetero-antisera, anti-HTL (anti-B.K.) og A99, som tidligere beskrevet af Schlossman, et al., Proc.
Nat. Acad. Sci. 73:1288 (1976). Tumor-celler fra tre individer var reaktive (TH2+) med kanin- og/eller heste-anti-TH2, mens celler fra 30 de resterende ni var non-reaktive (TH2~). Leukæmiske celler fra to patienter med TH2” T-CLL anvendtes også. Både akute og kroniske T-celle leukæmia-celler kryopræserveredes i -196°C dampfase flydende nitrogen i 10% dimethyl sulfoxid og 20% AB humant serum indtil tidspunktet for overfladekarakterisering. De analyserede tumor-popu-35 lationer var mere end 90% biastomer ved Wright-Giemsa morfologi i alle tilfælde.
Cvtof1uoroarafi sk analvse
DK 154769 B
11
Cytofluorografisk analyse af alle celle-populationer foretoges ved indirekte immunofluorescens med fluorescein-konjugeret gede-anti-muse IgG (G/M FITC) (Meloy Laboratories) på en cytof1uorograf "FC200/4800A" (Ortho Instruments). I korte træk behandledes 1-2 x 5 106 celler med 0,15 ml 0KT3 ved 1:1000 fortynding, inkuberedes ved 4°C i 30 minutter og vaskedes to gange. Cellerne reagerede dernæst med 0,15 ml af en 1:40 fortynding G/M FITC ved 4°C i 30 minutter, centrifugeredes og vaskedes 3 gange. Disse celler analyseredes dernæst på cytof1uorografen og fluorescens-intensiteten per celle 10 registreredes på en impulshøjde-analysator. Et tilsvarende reaktivitetsmønster iagttoges ved en fortynding på 1:100.000, men yderligere fortynding bevirkede tab af reaktivitet. Baggrundspietning opnåedes ved at substituere en 0,15 ml portion 1:1000 ascites fra en Balb/cJ mus, der var intraperitonealt immuniceret med en non-producerende 15 hybrid klon.
Der henvises i det følgende til tegningen.
Figur 1 viser det på cytof1uorografen opnåede fluoreseens-mønster efter reaktion af normale humane, perifere T-celler med 0KT3 ved 1:1000 fortynding og G/M FITC. Til sammenligning er resultater 20 med monoklonale antistoffer 0KT1 og OKT4 vist under ækvivalente betingelser i figur 1-5.
Figur 2 viser det på cytof1uorografen opnåede fluorescens-mønster efter reaktion af humane thymocyter med 0KT3 og G/M FITC.
Figur 3 viser det på cytof1uorografen opnåede fluorescens-møn-25 ster efter reaktion af leukæmi ske celler fra patienter med B-celle kronisk lymfoplastisk leukæmi, med 0KT3 og G/M FITC.
Figur 4 viser det på cytofluorografen opnåede fluorescens-mønster efter reaktion af den humane T-celle-linie HJD-1 med 0KT3 og G/M FITC.
30 Figur 5 viser det på cytof1uorografen opnåede fluorescens-mønster efter reaktion af den humane T-cel1e-1inie CEM med 0KT3 og G/M FITC.
Resultaterne i figur 1-5 plus yderligere data for 0KT3 (samt 0KT1 og 0KT4) er sammenfattet i tabel I.
35 Som vist i figur 1 er hele den humane perifere blod T-celle population hos et givet normalt individ reaktiv med 0KT3, mens alle B-celle, nul-celle og makrofag populationerne isoleret fra samme individ, er ureaktive med 0KT3. Tilsvarende resultater opnåedes på
DK 154769 B
12 populationer af lymfocyter fra 15 andre normale individer. Det mono-klonale antistof er således karakteriseret ved, at det er reaktivt med et antigen indeholdt på overfladen af i det væsentlige alle normale humane perifere T-celler, mens det er ikke reaktivt med antigener 5 på overfladen af de andre tre celle-typer nævnt ovenfor. Denne differentielle reaktivitet udgør én test ved hjælp af hvilken det omhandlede antistof 0KT3 kan påvises og skelnes fra andre antistoffer.
Som vist i figur 2, er langt den overvejende del af normale humane thymocyter fra et 6 måneder gammelt barn fuldstændig ikke-10 reaktive med 0KT3, mens ca. 5 til 10% af thymocyterne er reaktive.
Man kan heraf udlede, at thymocyterne, under den differentieringsproces, ved hvilken stam-celler omdannes til modne T-celler, på et vist stade opnår det samme overfladeantigen som findes på T-celler og som er reaktivt med 0KT3. Det antages, at disse thymocyter be-15 finder sig i de senere differentieringsstader lige før afgangen fra thymus til blodbanerne. Tilsvarende resultater (5 til 10% reaktivitet) opnåedes ved anvendelse af seks yderligere thymus-prøver fra normale individer af en alder på 2 måneder til 19 år. Reaktivitetsmønsteret i figur 2 giver en anden fremgangsmåde til påvisning af det omhand-20 lede antistof 0KT3 og til at skelne det fra andre antistoffer.
Det pågældende antistof er også værdifuldt til bestemmelse af den andel af cirkulerende lymfocyter, som er T-celler. Som vist i tabel I, reagerer mere end eller lig 95% af alle T-celler med OKT3 antistof.
25 En yderligere karakterisering af det pågældende antistof 0KT3 er vist ved reaktiviten over for forskellige humane T-celle-linier belyst i figur 4 og 5. Som det kan ses, var reaktiviteten af det pågældende antigen over for humane T-celle-linier heterogen, nemlig svag for linien HJD-1 og ikke til stede for linierne CEM, Laz 191 og 30 HM1. Denne differentielle reaktivitet af 0KT3 over for forskellige let tilgængelige humane T-celle-linier tilvejebringer yderligere en metode til at karakterisere og beskrive det pågældende antistof.
Den manglende reaktion af 0KT3 med den humane B-celle-linie SB er vist i tabel I. Dette understøtter yderligere den manglende 35 reaktivitet af 0KT3 med B-celler opnået fra det perifere blod af en normal human population og tilvejebringer endnu en fremgangsmåde til karakterisering og skelnen af det pågældende antistof 0KT3.
Den specifikke reaktion af 0KT3 antistof med et antigen på ku-
DK 154769B
13 tane T-celle lymphomatyper er belyst i tabel II, hvor forskellen fra 0KT1 og 0KT4 er vist. Det foreliggende antistof tilvejebringer således et reagens til at bekræfte en diagnose af kutan T-celle lymphoma i en patient, som formodes at have denne sygdom.
5 Det blev påvist, at det omhandlede antistof 0KT3 hører til underklassen IgG2» som er én af de fire underklasser af murin IgG. Disse underklasser af immunoglobulin G afviger fra hinanden i de såkaldte "fikserede" områder, idet dog et antistof for et specifikt antigen vil have et såkaldt "variabelt" område, som er funktionelt identisk uanset 10 hvilken underklasse af immunglobulin G det tilhører.
DK 154769 B
14
Tabel I
Monoklonalt antistof reaktivitet oa egenskaber
Honoklonale antistoffer 5 0KT1 0KT3 0KT4 % reaktivitet med: perifere T-celler (10 prøver) >95% >95% 55% perifere B-celler (10 prøver) < 2% < 2% < 2% perifere nul-celler (10 prøver) < 2% < 2% < 2% 10 thymocyter* (8 prøver) 5-10% 5-10% 80% reaktivitet med: T-kronisk lymfatisk leukæmi (3 tilfælde) + +(1);-(2) T-akut lymfatisk leukæmi (8 tilfælde) - - 15 nul-akut lymfatisk leukæmi (15 tilfælde) - - - B-kronisk lymfatisk leukæmi (6 tilfælde) +(4);-(2) -B-celle-linier+ (4) ...
T-celle-linier+ HJD-1 + (+) CEM + - + 20 Laz 191 + - - HM1 + - -
IgG underklasse IgGj IgG2 IgG2 komplement fiksering - + + 25 * Fra patienter med en alder fra 2 måneder til 18 år + Opnået fra Dr. H. Lazarus, Sidney Farber Cancer Center. B-celle-linier Laz 256, 156, 007 og SB opnået fra Epstein-Barr virus-transformation af humane perifere B-celler og HJD-1, CEM, Laz 191 og 30 HM1 tilført fra leukæmi-patienter.
DK 154769 B
15
Tabel II
Kutan T-celle-lymphoma Monoklonale antistof prøver 5
Patients navn Diagnose 0KT1 0KT3 0KT4 E.McBride Sezary Blast + +
10 Crisis; PBL
C.O. Okley Mycosis Fungoides; + +
Knude 15 Odom Mycosis Fungoides; + +
Knude
Montal bono ? + + +
Knude 20
Celle-kilde: PBL = perifere bl od-lymfocyter Knude = lymfeknude

Claims (6)

1. Monoklonalt antistof af klasse IgG, KENDETEGNET ved, at det er identisk med det monoklonale antistof, der fremstilles af hybridomacellelinien ATCC nr. CRL 8001, og at det 5 a) reagerer med i det væsentlige alle normale humane perifere T-celler og kutane T-lymphoma-celler, men ikke med normale humane perifere B-celler, nul-celler eller makrofager, b) reagerer med fra ca. 5% til ca. 10% af normale humane thy-mocyter, 10 c) reagerer med leukæmi ske celler fra mennesker med T-celle kronisk lymfohlastisk leukæmi a, men ikke med leukæmi ske celler fra mennesker med T-celle akut lymfoblastisk leukæmia, nul-celle akut lymfoblastisk leukæmi eller B-celle kronisk lymfatisk leukæmi, 15 d) ikke reagerer med human T-celle-linie CEM (ATCC nr. CCL 119), e) ikke reagerer med Epstein-Barr virus-transformeret human B-celle-linie SB (ATCC nr. CCL 120), og f) fikserer komplement.
2. Hybridomacellelinie til anvendelse ved fremstillingen af 20 det monoklonale antistof ifølge krav 1, KENDETEGENET ved, at det er cellelinien ATCC nr. CRL 8001.
3. Fremgangsmåde til fremstilling af det monoklonale antistof ifølge krav 1, KENDETEGNET ved, at man dyrker hybridomacellelinien ATCC nr. CRL 8001 in vitro i et egnet medium eller indførerden 25 intraperitonealt til mus og udvinder antistoffet fra supernatanten fra in vitro dyrkningen eller fra maligne ascites eller serum fra musene.
4. Fremgangsmåde ifølge krav 3, KENDETEGNET ved, at musene er af stamme CAFj.
5. Fremgangsmåde til bekræftelse af tilstedeværelsen af kutan T-celle lymphoma i et individ, KENDETEGNET ved, at man blander et lymphoma T-celle-præparat fra individet med antistoffet ifølge krav 1 i en mængde, som er effektiv til at bevirke en reaktion mellem eventuelle kutane T-lymphoma-celler og antistoffet.
6. Fremgangsmåde til bestemmelse i et individ af andelen af cirku lerende lymfocyter, som er T-celler, KENDETEGNET ved, at man blander antistoffet ifølge krav 1 med et lymfocytpræparat fra det pågældende individ og bestemmer mængden af lymfocyter, som reagerer med DK 154769 B antistoffet og derfor er T-celler. 5 10 15
DK180380A 1979-04-26 1980-04-25 Monoklonalt antistof, fremstilling heraf, hybridomacellelinie til anvendelse ved fremstilling heraf samt fremgangsmaader til anvendelse heraf DK154769C (da)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US3366979 1979-04-26
US06/033,669 US4361549A (en) 1979-04-26 1979-04-26 Complement-fixing monoclonal antibody to human T cells, and methods of preparing same

Publications (3)

Publication Number Publication Date
DK180380A DK180380A (da) 1980-10-27
DK154769B true DK154769B (da) 1988-12-19
DK154769C DK154769C (da) 1989-06-19

Family

ID=21871750

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
DK180380A DK154769C (da) 1979-04-26 1980-04-25 Monoklonalt antistof, fremstilling heraf, hybridomacellelinie til anvendelse ved fremstilling heraf samt fremgangsmaader til anvendelse heraf

Country Status (22)

Country Link
US (1) US4361549A (da)
EP (1) EP0018795B2 (da)
JP (2) JPS55145617A (da)
AT (1) ATE14023T1 (da)
AU (1) AU544791B2 (da)
CA (1) CA1182406A (da)
DE (2) DE18795T1 (da)
DK (1) DK154769C (da)
ES (1) ES8105152A1 (da)
FI (1) FI75183C (da)
HK (1) HK23886A (da)
IE (1) IE50422B1 (da)
IL (1) IL59917A (da)
MY (1) MY8600514A (da)
NL (1) NL930131I2 (da)
NO (1) NO159221C (da)
NZ (1) NZ193469A (da)
PH (1) PH16642A (da)
PT (1) PT71147B (da)
SG (1) SG6686G (da)
YU (1) YU48442B (da)
ZA (1) ZA802525B (da)

Families Citing this family (100)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4582797A (en) * 1980-09-25 1986-04-15 The Salk Institute For Biological Studies Monoclonal antibodies specific for human hematopoietic cell surface glycoproteins
DE3105150A1 (de) * 1981-02-12 1982-08-19 Dr. Eduard Fresenius, Chemisch-pharmazeutische Industrie KG, 6380 Bad Homburg Herstellung von anti-t-lymphozyten-globulin.
US4474893A (en) * 1981-07-01 1984-10-02 The University of Texas System Cancer Center Recombinant monoclonal antibodies
US4471056A (en) * 1982-04-02 1984-09-11 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Method for HLA-DR typing of total human lymphocyte sample
US4657852A (en) * 1982-04-02 1987-04-14 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Method for B cell typing of total human lymphocyte sample
US4511662A (en) * 1982-06-18 1985-04-16 Bio-Rad Laboratories, Inc. Simultaneous assay for T and B lymphocyte populations and subpopulations
US4443427A (en) * 1982-06-21 1984-04-17 Sidney Farber Cancer Institute, Inc. Monoclonal antibody
US4500637A (en) * 1982-07-19 1985-02-19 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Prevention of graft versus host disease following bone marrow transplantation
US4714613A (en) * 1982-09-30 1987-12-22 The Albert Einstein College Of Medicine Of Yeshiva University Method of suppressing cell growth by immunotherapy
US4550086A (en) * 1983-02-16 1985-10-29 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Monoclonal antibodies that recognize human T cells
US4579827A (en) * 1983-03-11 1986-04-01 Sloan-Kettering Institute For Cancer Research Monoclonal antibodies to human gastrointestinal cancers and hybridoma method of production of the monoclonal antibodies
US4797475A (en) * 1983-05-20 1989-01-10 The Regents Of The University Of California Method and composition for isolating white cell elements
US4645738A (en) * 1983-09-30 1987-02-24 Memorial Sloan-Kettering Institute Cancer Center Method for differential diagnosis of T cell leukemias using monoclonal antibodies
US4468346A (en) * 1983-10-27 1984-08-28 The United States Of America As Represented By The Secretary Of Agriculture Monoclonal antibodies to porcine immunoglobulins
JPS60231699A (ja) * 1983-11-09 1985-11-18 Aichiken 正常及び悪性ヒト造血器細胞に対するモノクローナル抗体
US4672044A (en) * 1984-08-24 1987-06-09 Scripps Clinic & Research Foundation Murine monoclonal antibody combining site to human C3b receptor (CR1)
US4661446A (en) * 1985-02-19 1987-04-28 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Monoclonal antibodies and method of immunizing therewith
US5431897A (en) * 1985-04-19 1995-07-11 Sloan-Kettering Institute For Cancer Research Method of imaging colorectal carcinoma lesion and composition for use therein
US5091178A (en) * 1986-02-21 1992-02-25 Oncogen Tumor therapy with biologically active anti-tumor antibodies
US4970299A (en) * 1986-07-03 1990-11-13 Sloan-Kettering Institute For Cancer Research Monoclonal antibodies selective for prostate cancer
EP0395669A4 (en) * 1987-10-16 1991-01-16 Biomedical Systems Limited Mouse monoclonal antibodies raised to the t-cell line hsb-2 and t-cell chronic lymphocytic leukemia (t-cll) cells react with normal human t and b lymphocytes and monocytes
US5601819A (en) * 1988-08-11 1997-02-11 The General Hospital Corporation Bispecific antibodies for selective immune regulation and for selective immune cell binding
IL92382A (en) * 1988-11-23 1994-12-29 Univ Michigan Use of a ligand specific for CD28 in the manufacture of medicament
JPH0291833U (da) * 1988-12-29 1990-07-20
JPH0277212U (da) * 1989-01-25 1990-06-13
AU6642390A (en) * 1989-10-27 1991-05-31 Arch Development Corporation Methods and compositions for promoting immunopotentiation
US6406696B1 (en) 1989-10-27 2002-06-18 Tolerance Therapeutics, Inc. Methods of stimulating the immune system with anti-CD3 antibodies
JPH0420550U (da) * 1990-06-11 1992-02-20
US5444155A (en) * 1991-09-10 1995-08-22 The Scripps Research Institute Molecules with antibody combining sites that induce asymmetry
US5250426A (en) * 1991-10-22 1993-10-05 The Scripps Research Institute Molecules with antibody combining sites that induce asymmetry
US6491916B1 (en) 1994-06-01 2002-12-10 Tolerance Therapeutics, Inc. Methods and materials for modulation of the immunosuppresive activity and toxicity of monoclonal antibodies
US20030108548A1 (en) * 1993-06-01 2003-06-12 Bluestone Jeffrey A. Methods and materials for modulation of the immunosuppressive activity and toxicity of monoclonal antibodies
AU721927B2 (en) 1995-12-22 2000-07-20 Immunomedics Inc. Use of immunoconjugates to enhance the efficacy of multi-stage cascade boosting vaccines
CA2264548A1 (en) 1996-08-30 1998-03-05 Human Genome Sciences, Inc. Interleukin-19
AU1539699A (en) 1997-11-24 1999-06-15 Johnson T. Wong Methods for treatment of hiv or other infections using a t cell or viral activator and anti-retroviral combination therapy
GB9815909D0 (en) 1998-07-21 1998-09-16 Btg Int Ltd Antibody preparation
US7678836B2 (en) * 1999-11-04 2010-03-16 Fxs Ventures, Llc Method for rendering a contact lens wettable
US8557868B2 (en) * 2000-11-04 2013-10-15 Fxs Ventures, Llc Ophthalmic and contact lens solutions using low molecular weight amines
US9492582B2 (en) * 2000-11-08 2016-11-15 Fxs Ventures, Llc Ophthalmic and contact lens solutions containing simple saccharides as preservative enhancers
US20070104744A1 (en) * 2000-11-08 2007-05-10 Fxs Ventures, Llc Ophthalmic and contact lens solutions containing forms of vitamin b
US20070110782A1 (en) * 2000-11-08 2007-05-17 Fxs Ventures, Llc L-histidine in ophthalmic solutions
US9308264B2 (en) 2000-11-08 2016-04-12 Fxs Ventures, Llc Ophthalmic contact lens solutions containing forms of vitamin B
US20060148665A1 (en) * 2000-11-08 2006-07-06 Bioconcept Laboratories Ophthalmic and contact lens solutions containing forms of vitamin b
DE60140007D1 (de) * 2000-11-08 2009-11-05 Fxs Ventures Llc Verbesserte ophthalmische und kontaktlinsenlösungen mit einfachen sacchariden als konservierungsverbesserer
EP1339414B1 (en) * 2000-11-08 2010-01-06 FXS Ventures, LLC L-histidine in ophthalmic solutions
US20060127496A1 (en) * 2000-11-08 2006-06-15 Bioconcept Laboratories L-histidine in ophthalmic solutions
WO2004091438A2 (en) * 2003-04-15 2004-10-28 Fxs Ventures, Llc Improved ophthalmic and contact lens solutions containing peptides as representative enhancers
WO2005040220A1 (en) * 2003-10-16 2005-05-06 Micromet Ag Multispecific deimmunized cd3-binders
US7883703B2 (en) 2003-11-14 2011-02-08 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Methods of modulating immunity
SG177944A1 (en) * 2005-07-11 2012-02-28 Macrogenics Inc Methods for the treatment of autoimmune disorders using immunosuppressive monoclonal antibodies with reduced toxicity
US9056906B2 (en) * 2006-06-14 2015-06-16 Macrogenics, Inc. Methods for the treatment of autoimmune disorders using immunosuppressive monoclonal antibodies with reduced toxicity
WO2008079713A2 (en) * 2006-12-21 2008-07-03 Macrogenics Inc. Methods for the treatment of lada and other adult-onset autoimmune diabetes using immunosuppressive monoclonal antibodies with reduced toxicity
DK3156485T3 (da) 2009-07-17 2019-01-07 Bioatla Llc Samtidig, integreret udvælgelse og udvikling af antistof/protein-ydelser og eksprimering i produktionsværter
CN103038256A (zh) 2010-04-29 2013-04-10 纳斯瓦克斯有限公司 用抗cd3免疫分子疗法治疗肝炎的方法及组合物
ES2741175T3 (es) 2010-07-16 2020-02-10 Bioatla Llc Nuevos métodos de evolución de proteínas
WO2012066058A1 (en) 2010-11-16 2012-05-24 Boehringer Ingelheim International Gmbh Agents and methods for treating diseases that correlate with bcma expression
EP2658970B1 (en) 2010-12-31 2016-09-28 Bioatla LLC Express humanization of antibodies
WO2012092376A2 (en) 2010-12-31 2012-07-05 Short Jay M Comprehensive monoclonal antibody generation
EP3553089A1 (en) 2012-05-10 2019-10-16 Bioatla, LLC Multi-specific monoclonal antibodies
JOP20200236A1 (ar) 2012-09-21 2017-06-16 Regeneron Pharma الأجسام المضادة لمضاد cd3 وجزيئات ربط الأنتيجين ثنائية التحديد التي تربط cd3 وcd20 واستخداماتها
DK3447493T3 (da) 2014-01-07 2020-08-17 Bioatla Llc Proteinrettede ortologer
TWI701042B (zh) 2014-03-19 2020-08-11 美商再生元醫藥公司 用於腫瘤治療之方法及抗體組成物
JP6696969B2 (ja) 2014-04-16 2020-05-20 ユノ・セラピューティクス・ゲーエムベーハーＪｕｎｏ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ Ｇｍｂｈ 細胞の集団を拡大する方法、キット、及び装置
CA2955947A1 (en) 2014-07-25 2016-01-28 Cytomx Therapeutics, Inc. Anti-cd3 antibodies, activatable anti-cd3 antibodies, multispecific anti-cd3 antibodies, multispecific activatable anti-cd3 antibodies, and methods of using the same
WO2016059220A1 (en) 2014-10-16 2016-04-21 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Tcr-activating agents for use in the treatment of t-all
KR102614189B1 (ko) 2014-11-17 2023-12-18 리제너론 파아마슈티컬스, 인크. Cd3xcd20 이특이적 항체를 이용한 종양의 치료 방법
CN114230667A (zh) 2015-01-23 2022-03-25 赛诺菲 抗cd3抗体、抗cd123抗体和与cd3和/或cd123特异性结合的双特异性抗体
WO2016166568A1 (en) 2015-04-16 2016-10-20 Juno Therapeutics Gmbh Methods, kits and apparatus for expanding a population of cells
MA45489A (fr) 2015-10-22 2018-08-29 Juno Therapeutics Gmbh Procédés de culture de cellules, kits et appareil associés
CN116875635A (zh) 2015-10-22 2023-10-13 朱诺治疗学有限公司 用于转导的方法、反应剂盒、反应剂和设备
MA45488A (fr) 2015-10-22 2018-08-29 Juno Therapeutics Gmbh Procédés, kits et appareil de culture de cellules
US11702477B2 (en) 2015-11-06 2023-07-18 Orionis Biosciences BV Bi-functional chimeric proteins and uses thereof
CN116813799A (zh) 2016-02-05 2023-09-29 奥里尼斯生物科学私人有限公司 Clec9a结合剂及其用途
TWI790206B (zh) 2016-07-18 2023-01-21 法商賽諾菲公司 特異性結合至ｃｄ３和ｃｄ１２３的雙特異性抗體樣結合蛋白
WO2018144999A1 (en) 2017-02-06 2018-08-09 Orionis Biosciences, Inc. Targeted engineered interferon and uses thereof
CN111032850A (zh) 2017-04-27 2020-04-17 朱诺治疗学有限公司 寡聚粒子试剂及其使用方法
EP3874024A1 (en) 2018-10-31 2021-09-08 Juno Therapeutics GmbH Methods for selection and stimulation of cells and apparatus for same
MX2021005021A (es) 2018-11-06 2021-08-11 Juno Therapeutics Inc Proceso para producir celulas t geneticamente modificadas.
WO2021064069A1 (en) 2019-10-02 2021-04-08 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods for the treatment of adult t-cell leukemia/lymphoma
JP2023500318A (ja) 2019-10-30 2023-01-05 ジュノ セラピューティクス ゲーエムベーハー 細胞選択および／または細胞刺激デバイスならびに使用方法
US20230190798A1 (en) 2020-02-12 2023-06-22 Juno Therapeutics, Inc. Cd19-directed chimeric antigen receptor t cell compositions and methods and uses thereof
MX2022009830A (es) 2020-02-12 2022-10-28 Juno Therapeutics Inc Composiciones de celulas t que expresan receptores de antigenos quimericos dirigidos a bcma y metodos y usos de las mismas.
CA3169827A1 (en) 2020-03-10 2021-09-16 Kunwar Shailubhai Compositions of il-6/il-6r antibodies and methods of use thereof
JP2023526278A (ja) 2020-05-13 2023-06-21 ジュノー セラピューティクス インコーポレイテッド 組み換え受容体を発現しているドナーバッチ細胞を産生するための方法
EP4168537A1 (en) 2020-06-17 2023-04-26 Tiziana Life Sciences PLC Compositions and methods for augmenting chimeric antigen receptor (car) t cell therapies
WO2022023566A2 (en) 2020-07-30 2022-02-03 Tiziana Life Sciences Plc Cd-3 antibodies for the treatment of coronavirus
WO2022221767A1 (en) 2021-04-16 2022-10-20 Tiziana Life Sciences Plc Subcutaneous administration of antibodies for the treatment of disease
EP4334341A2 (en) 2021-05-06 2024-03-13 Juno Therapeutics GmbH Methods for stimulating and transducing t cells
AU2022365121A1 (en) 2021-10-14 2024-04-18 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Methods of suppressing microglial activation
WO2023133595A2 (en) 2022-01-10 2023-07-13 Sana Biotechnology, Inc. Methods of ex vivo dosing and administration of lipid particles or viral vectors and related systems and uses
WO2023147331A1 (en) 2022-01-26 2023-08-03 Mabswitch Inc. Bispecific molecule with tunable affinity to a targetted antigen
WO2023147510A1 (en) 2022-01-28 2023-08-03 Juno Therapeutics, Inc. Chromatography arrays and related methods and kits
WO2023150518A1 (en) 2022-02-01 2023-08-10 Sana Biotechnology, Inc. Cd3-targeted lentiviral vectors and uses thereof
WO2023193015A1 (en) 2022-04-01 2023-10-05 Sana Biotechnology, Inc. Cytokine receptor agonist and viral vector combination therapies
WO2023213969A1 (en) 2022-05-05 2023-11-09 Juno Therapeutics Gmbh Viral-binding protein and related reagents, articles, and methods of use
WO2023230581A1 (en) 2022-05-25 2023-11-30 Celgene Corporation Methods of manufacturing t cell therapies
WO2024044655A1 (en) 2022-08-24 2024-02-29 Sana Biotechnology, Inc. Delivery of heterologous proteins
WO2024100604A1 (en) 2022-11-09 2024-05-16 Juno Therapeutics Gmbh Methods for manufacturing engineered immune cells
WO2024119157A1 (en) 2022-12-02 2024-06-06 Sana Biotechnology, Inc. Lipid particles with cofusogens and methods of producing and using the same
WO2024124132A1 (en) 2022-12-09 2024-06-13 Juno Therapeutics, Inc. Machine learning methods for predicting cell phenotype using holographic imaging

Family Cites Families (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR956062A (da) * 1950-01-24
GB824492A (en) * 1955-10-07 1959-12-02 Frederick William Beinlich Process and apparatus for the generation of power
US3988895A (en) * 1974-01-11 1976-11-02 Itzhak Sheinbaum Power generation from hot brines
US3986362A (en) * 1975-06-13 1976-10-19 Petru Baciu Geothermal power plant with intermediate superheating and simultaneous generation of thermal and electrical energy
US4089175A (en) * 1975-06-23 1978-05-16 Occidental Petroleum Corporation Process and system for recovery of energy from geothermal brines and other water containing sources by direct contact with a working fluid below the critical pressure
US4196265A (en) * 1977-06-15 1980-04-01 The Wistar Institute Method of producing antibodies
US4172124A (en) * 1978-04-28 1979-10-23 The Wistar Institute Method of producing tumor antibodies
BE875277A (fr) * 1979-04-02 1979-10-02 Jourdain Leon J Machine motrice
US4284412A (en) * 1979-07-13 1981-08-18 Ortho Diagnostics, Inc. Method and apparatus for automated identification and enumeration of specified blood cell subclasses

Also Published As

Publication number Publication date
IL59917A (en) 1983-12-30
EP0018795B1 (en) 1985-06-26
DE3070803D1 (en) 1985-08-01
EP0018795A3 (en) 1981-01-07
ES490944A0 (es) 1981-05-16
IE800840L (en) 1980-10-24
NZ193469A (en) 1984-07-06
DE18795T1 (de) 1984-07-19
IE50422B1 (en) 1986-04-16
PH16642A (en) 1983-12-06
CA1182406A (en) 1985-02-12
NO801214L (no) 1980-10-27
FI75183C (fi) 1988-05-09
JPS6362520B2 (da) 1988-12-02
JPH0159868B2 (da) 1989-12-20
MY8600514A (en) 1986-12-31
YU48442B (sh) 1998-07-10
FI801342A (fi) 1980-10-27
AU544791B2 (en) 1985-06-13
DK180380A (da) 1980-10-27
HK23886A (en) 1986-04-11
IL59917A0 (en) 1980-06-30
NO159221B (no) 1988-08-29
ZA802525B (en) 1981-12-30
DK154769C (da) 1989-06-19
AU5775780A (en) 1980-10-30
EP0018795B2 (en) 1999-04-07
JPH0198478A (ja) 1989-04-17
JPS55145617A (en) 1980-11-13
NO159221C (no) 1988-12-07
YU114680A (en) 1984-02-29
PT71147B (en) 1981-08-11
SG6686G (en) 1986-08-01
PT71147A (en) 1980-05-01
EP0018795A2 (en) 1980-11-12
NL930131I1 (nl) 1993-11-01
ES8105152A1 (es) 1981-05-16
ATE14023T1 (de) 1985-07-15
US4361549A (en) 1982-11-30
FI75183B (fi) 1988-01-29
NL930131I2 (nl) 1998-07-01

Similar Documents

Publication Publication Date Title
DK154769B (da) Monoklonalt antistof, fremstilling heraf, hybridomacellelinie til anvendelse ved fremstilling heraf samt fremgangsmaader til anvendelse heraf
US4515893A (en) Hybrid cell line for producing complement-fixing monoclonal antibody to human T cells
US4657760A (en) Methods and compositions using monoclonal antibody to human T cells
EP0018794B1 (en) Monoclonal antibody to human helper t cells, method of preparing it, hybrid cell line producing it, its diagnostic and therapeutic uses and diagnostic and therapeutic compositions comprising it
DK154092B (da) Fremgangsmaade til fremstilling af et monoklonalt antistof, hybridomacellelinie til anvendelse ved fremgangsmaaden samt fremgangsmaade til diagnose og diagnostisk praeparat med det fremstillede monoklonale antistof
US4658019A (en) Complement-fixing monoclonal antibody to human T cells
DK153954B (da) Fremgangsmaade til fremstilling af et monoklonalt antistof, hybridomacellelinie til anvendelse ved fremgangsmaaden samt fremgangsmaade til diagnose og diagnostisk praeparat med det fremstillede monoklonale antistof
EP0017381B1 (en) Monoclonal antibody to human t cells, method for preparing it, hybrid cell line producing it, therapeutic composition comprising it and diagnostic method using it
FI75600C (fi) Foerfarande foer framstaellning av en monoklonal antikropp mot en maensklig monocytantigen medelst en ny hybridcellinje.
DK154091B (da) Fremgangsmaade til fremstilling af et monoklonalt antistof samt fremgangsmaade til diagnose hermed og diagnostisk praeparat indeholdende antistoffet
DK153891B (da) Fremgangsmaade til fremstilling af et monoklonalt antistof, hybridomacellelinie til anvendelse ved fremgangsmaaden samt fremgangsmaade til diagnose og diagnostisk praeparat med det fremstillede monoklonale antistof
US4654210A (en) Methods and compositions using complement fixing monoclonal antibody to human T cells
DK154566B (da) Monoklonalt antistof og fremgangsmaade til fremstilling heraf
DK154090B (da) Fremgangsmaade til fremstilling af et monoklonalt antistof, hybridomacellelinie til anvendelse ved fremgangsmaaden samt fremgangsmaade til diagnose under anvendelse af det fremstillede monoklonale antistof
US4652447A (en) Methods and compositions using monoclonal antibody to human helper T cells
FI75229B (fi) Diagnostiskt foerfarande, vid vilket man anvaender en ny monoklonal antikropp specifik mot maenniskans t-celler.
HRP940823A2 (en) Hybrid cell line for producing monoclonal antibody to a human early thymocite antigen, antibody and method of preparation of this antibody
HRP940809A2 (en) Hybrid cell line for producing complement-fixing monoclonal antibody to human t cells, antibody and methods
HRP940824A2 (en) Hybrid cell line for producing monoclonal antibody to a human prothymocyte antigen, antibody, and methods
HRP940831A2 (en) Hybrid cell line for producing monoclonal antibody to a human monocyte antigen, natibody, and methods
HRP940790A2 (en) Hybrid cell line for producing monoclonal antibody to a human thymocyte antigen, antibody and method of preparation thereof

Legal Events

Date Code Title Description
PUP Patent expired