JPH0198478A - ＩｇＧモノクローナル抗体−生産性ハイブリドマ - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、広義には、新規な交雑細胞ライン（ｈｙｂｒ
ｉｄ　ｃｅｌｌ　１ｉｎｅ）５らに詳しくはすべての正
常なヒｌ−Ｔ細胞および皮膚Ｔリンパ腫細胞に見い出さ
れるある抗原に対する補体固定性モノクローナル（ｃｏ
ｍｐｌｅｍｅｎｔ−ｆｉｘｉｎｇ　ｍｏｎｏｃｌｏｎａ
ｌ）抗体の生成のための交雑細胞ラインに関する。

１９７５年におけるＫｏｈｌｅｒおよびＭｉｌｓＬｅｉ
ｎによる免疫されたマウスからの脾細胞へのマウスの骨
髄腫の融合（ｆｕｓｉｏｎ）　［Ｎａｔｕｒｅ　　２５
６．４９５−４９７（１９７５）］　は、均質な（いわ
ゆる「モノクローナル」）抗体をつくる連続な細胞ライ
ンを得ることができることを初めて証明した。

この基本の研究以来、種々の交雑細胞［いわゆる［ハイ
ブリドマ類（ｈｙｂｒ　ｉｄｏｍａｓ）］の生成および
これらのハイブリドマ類によりつくられた抗体の植種の
科学的研究への使用について多くの努力が向けられてき
た。たとえば、次の文献を参照：Ｃｕｒｒｅｎｔ　Ｔｏ
ｐｉｃｓ　ｉｎ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ　ａｎｄ　
Ｉ　ｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、　Ｖｏｌｕｍｅ　８１−“Ｌ
　ｙｍｐｈｏｃｙｔｅ　Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ”　、　
　Ｆ、　Ｍｅｌｃｈｅｒｓ、　Ｍ、　Ｐｏｔｔｅｒ、お
よびＮ。

Ｗａｒｎｅｒ、　Ｅｄｉｔｏｒｓ、　Ｓｐｒｉｎｇｅｒ
−Ｖｅｒｌａｇ、　　ｌ　９７８、およびそこに含まれ
る参考文献、Ｃ，Ｊ。

Ｂａｒｎｓｔａｂｌｅ、　ｅｔ　ａｔ、、　Ｃｅ１ｌ、
　　ｌ　４．９−２９−２０（、ｌ　９７８）；　Ｐ、
　ＰａｒｈａｍおよびＷ、Ｆ。

Ｂｏｄｍｅｒ、　Ｎａｒｕｒｅ　２７６．３９７−３９
９（Ｎｏｖｅｍｂｅｒ、　　ｌ　９７８　）　；　Ｈａ
ｎｄｂｏｏｋ　ｏｆ　Ｅ　ｘｐｅｒｉｍ６ｎｔａｌ　　
Ｉ　ｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、　Ｔｈ１ｒｄ　Ｅｄｉｔｉｏ
ｎ　Ｖｏｌｕｍｅ２　、　Ｄ　、　Ｍ、　Ｗｉｅｒ、　
Ｅｄｉｔｏｒ、　Ｂ　ｌａｃｈｗｅｌｌ、　　ｌ　９７
８、Ｃｈａｐｔｅｒ　２５　；およびＣｈｅｍｉｃａｌ
　ａｎｄＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ　　Ｎｅｗｓ、　　Ｊ
ａｎｕａｒｙ　　ｌ　、　　ｌ　　９７９．１５−１７
゜これらの文献は同時にハイブリドマ類からモノクロー
ナル抗体を生成する試みによって得られる利益および複
雑さを示している。一般的技術は概念的によく理解され
ているが、各特定の場合に多くの困難に出合い、そして
変更が要求される。事実、一定のハイブリドマを生成し
ようと試みる前には、所望のハイブリドマが得られるか
、得られた場合抗体を生成するか、あるいはそのように
生成された抗体が所望の特異性をもつか、を確めること
ができない。成功の程度は、主として、使用する抗原の
タイプおよび所望のハイブリドマを単離するために使用
する選択技術によって影響を受ける。

人間のリンパ球細胞表面の抗原に対するモノクローナル
抗体を生成する試みは、数例報告されているだけである
。たとえば、Ｃｕｒｒｅｎｔ　Ｔ　ｏｐｉｃｓｉｎ　Ｍ
ｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ　ａｎｄ　Ｉ　ｍｍｕｎｏｌｏ
ｇｙ、　１ｂｉｄ、　６６−６９および１６４−１６９
参照。これらの報告された実験において使用されている
抗原は、培養したリンパ芽様性白血病およびヒトの慢性
リンパ球性白血病の細胞ラインであった。得られｔ；多
くのハイブリドマ類は、すべてのヒト細胞の種々の抗原
に対して抗体を生成するように思われた。ハイブリドマ
類はいずれも、ヒトのリンパ球の前もって定めた群に対
して抗体を生成しなかった。

人間および動物の免疫系に含まれるリンパ球に２つの主
な群が存在することを理解すべきである。

これらのうちの第１群（胸腺誘導細胞、すなわち、Ｔ細
胞）は、ヘモポイエチン幹細胞から胸腺において分化さ
れている。胸腺内にある間、分化する細胞は「胸腺細胞
」と名づけられる。成熟したＴ細胞は胸腺から出、そし
て組織、リンパ管、および血流の間を循環する。これら
のＴ細胞は、再循環する小さいリンパ球の貯留（ｐｏｏ
ｌ）の大きい比率を形成する。それらは免疫学的特異性
を有し、そして細胞介在免疫応答（組織移植注入のよう
な）においてエフェクター（ｅｆｆｅｃｔｏｒ）細胞と
して直接関与する。Ｔ細胞は液性抗体を分泌しないが、
後述するリンパ球の第２群によるこれらの抗体の分泌に
時々要求される。Ｔ細胞のいくつかの型は免疫系の他の
面において調節機能をはたす。この細胞共働の過程の機
構はまだ完全には理解されていない。

リンパ球の第２群（骨髄誘導細胞、すなわち、Ｂ細胞）
は、抗体を分泌するものである。それらもまたへモポイ
エチン幹細胞から発生するが、それらの分化は胸腺によ
って決定されない。鳥類において、それらはファブリキ
ウス嚢（Ｂｕｒｓａ　ｏｆＦ　ａｂｒｉｃｉｕｓ）と呼
ばれる胸腺に類似する器官において分化されている。し
かし、哺乳動物においては、同等の器官は発見されてお
らず、そしてこれらのＢ細胞は骨髄内で分化すると考え
られる。

ここで、Ｔ細胞は「ヘルパー（ｈｅｌｐｅｒ）Ｊ、「抑
制体（Ａ　ｕｐｐｒｅｓｓｏｒ）Ｊおよび「キラー（ｋ
ｉｌｌｅｒ）ＪＴ細胞と呼ばれる、少なくともいくつか
のサブタイプに分けられ、それらは（それぞれ）反応を
促進し、反応を抑制し、あるいは異種細胞を殺す（分離
する）機能を有することが認められた。これらのサブク
ラスはネズミの系統についてよく理解されているが、そ
れらは人間の系についてわずかに最近記載されただけで
ある。たとえば、次の文献を参照：　Ｒ、Ｌ　、　Ｅｖ
ａｎｓ、　ａｔ　ａｌ、、　　Ｊ　ｏｕｒｎａｌ　ｏｆ
Ｅｘｐｅｒｉｍｅｔａｌ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、　Ｖｏｌ
ｕｍｅ　ｌ　４５．２２１−２３２，１９７７；および
り、ＣｈｅｓｓおよびＳ　、　Ｆ　、　Ｓ　ｃｈｌｏｓ
ｓｍａｎ−“Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ　Ａｎａｌｙｓｉｓ
ｏｒ　Ｄｉｓｔｉｎｃｔ　Ｈｕｍａｎ　Ｔ−Ｃｅｌｌ　
５ｕｂｓｅｔｓ　Ｂｅａｒｉｎｇ　Ｕｎｉｑｕｅ　Ｄ　
１Ｈｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ　Ａｎｔｉｑｅｎｓ”“Ｃ
ｏｎｔｅｍｐｏｒａｒｙ　Ｔｏｐｉｃｓ　ｉｎ　Ｉ　ｍ
ｍｕｎｏｂｉｏｌｇｙ”、０、　Ｓｔｕｔｍａｎ、　Ｅ
ｄｉｔｏｒ、　Ｐｌｅｎｕｍ　Ｐｒｅｓｓ、　　Ｉ　９
７７、Ｖｏｌｕｍｅ　　７．３６３−３７９゜Ｔ細胞の
クラスまたはサブクラスを同定または抑制することがで
きることは、種々の免疫調節の不調または状態の診断ま
たは処置にとって重要である。

たとえば、ある種の白血病およびリンパ腫は、それらが
Ｂ細胞またはＴ細胞のいずれを源とするかによって、異
なる予後を有する。こうして、病気の予後の評価はこれ
らのリンパ球の２つのクラスを区別することに依存する
。たとえば、次の文献を参照：　Ａ　、　Ｃ、Ａ　１ｓ
ｅｎｂｅｒｙおよびＪ、Ｃ。

Ｌｏｎｇ、　Ｔｈｅ　　Ａｍｅｒｉｃａｎ　Ｊ　ｏｕｒ
ｎａｌ　ｏｆ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ。

５８　：　３００（Ｍａｒｃｈ、　　１９７５）；　Ｄ
、Ｂｅｌｐｏｍｍｅ。

ｅｔ　ａｌ、、　　Ｉ　ｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｄ
ｉａｇｎｏｓｉｓ　ｏｆ　Ｌｅｕｋｅｍｉａｓ　ａｎｄ
　Ｌｙｍｐｈｏｍａｓ、　Ｓ　、　Ｔｈ１ｅｒｆｅｌｄ
ｅｒ、　ａｔ　ａｌ、。

Ｅｄｉｔｏｒｓ、　Ｓｐｒｉｎｇｅｒ、　Ｈｅｉｄｅｌ
ｂｅｒｇ、　　ｌ　９７７．３３−４５；およびＤ　、
　Ｂｅｌｐｏｍｍｅ、　ａｔ　ａｌ、。

Ｂ　ｒｉｔｉｓｈ　Ｊ　ｏｕｒｎａｌ　ｏｆＨａｅｍａ
ｔｏｌｏｇｙ＋　　１９７８．３８．８５゜ある種の病
気の状態（たとえば、老年性リウマトイド関節炎および
ある種の白血病）は、Ｔ細胞のサブクラスの不釣合いに
関連する。

自己免疫の病気は一般に「ヘルパー」Ｔ細胞の過剰また
はある種の「抑制体」Ｔ細胞の欠乏に関連するが、悪性
の病気は一般に「抑制体」Ｔ細胞の過剰に関連すること
が示唆された。ある種の白血病において、過剰のＴ細胞
は発育の停止した状態において生成される。診断はこう
してこの不釣合い、すなわち、過剰を検知することがで
きることに依存しえるであろう。たとえば、次の文献を
参照毛Ｊ　、　Ｋｅｒｓｅｙ、　ｅｔ　ａｌ、、　　”
５ｕｒｆａｃｅ　ＭａｒｋａｒｓＤｅｆｉｎｅ　　Ｈｕ
ｍａｎ　　Ｌｙｍｐｈｏｉｄ　　Ｍａｌｉｇｎａｎｃｉ
ｅｓ　　ｗｉｔｈＤ　ｉｆｆｅｒｉｎｇ　　Ｐ　ｒｏｇ
ｎｎｏｓｅｓ”　　、Ｈａｅｍａｔｏｌｏｇｙ　ａｎｄ
Ｂ　ｆｏｏｄ　　Ｔｒａｎｓｆｕｓｉｏｎ、Ｖｏｌｕｍ
ｅ２０　、Ｓｐｒｉｎｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ、　　ｌ　９
７７．１７−２４、およびその中に含まれる参考文献。

治療サイドにおいて、まだ明確に証明されていなか、Ｔ
細胞のサブタイプに対する抗体を過剰量で投与すること
は自己免疫の病気または悪性の病気において治療上有益
であるという、いくらかの示唆がある。ヒトＴ細胞の全
クラス（いわゆる抗ヒト胸腺細胞のグロブリン、すなわ
ち、ＡＴＧ）に対する抗血清は、移植組織を受ける患者
において治療上有用であると報告されている。細胞介在
免疫応答（移植組織を拒否する機構）はＴ細胞に依存す
るので、Ｔ細胞に対する抗体を投与すると、この拒否の
過程を防止または遅延する。たとえば、次の文献を参照
：　Ｃｏ５１ｍ１．　ｅｔ　ａｌ、、　　“Ｒａｎｄｏ
ｍｉｚａｄ　　Ｃ１１ｎｉｃａｌ　　Ｔｒｉａｌ　　ｏ
ｆ　　ＡＴＧ　　　ｉｎ　　ＣａｄａｖｅｒＲｅｎａｌ
　Ａ　ｌｌｇｒａｆｔ　Ｒｅｃｉｐｉｅｎｔｓ　：　Ｉ
　ｍｐｏｒｔａｎｃｅ　ｏｆＴ　　Ｃａ１ｌ　　Ｍｏｎ
ｉｔｏｒｉｎｇ”　、　　Ｓｕｒｇｅｒｙ　　４０　　
：　　ｌ　　５５−１６３（１９７６）およびその中に
含まれる参考文献。

ヒトＴ細胞クラスおよびサブクラスの同定および抑制は
、従来、動物をヒトＴ細胞で免疫し、その動物を出血さ
せて血清を取り、そしてこの抗血清を（たとえば）地元
（ａｕｔｏｌｏｇｏｕｓ）であるが、異種ではないＢ細
胞で吸着して望まない反応性をもつ抗体を除去すること
によって得た、ヒトＴ細胞のための自発性自己抗体また
は選択的抗血清を使用することによって達成された。こ
れらの抗血清の製造は、とくに吸着および精製の工程に
おいて、きわめて困難である。吸着され且つ精製された
抗血清でさえ、所望の抗体に加えて、いくつかの理由で
、多くの不純物を含有する。第１に、血清はＴ細胞で免
疫する前に数百刃の抗体分子を含有する。第２に、この
免疫法は注入したすべてのヒトＴ細胞について見い出さ
れる種々の抗原に対する抗体を生成させる。単一の抗原
に対する抗体は選択的に生成されない。第３に、このよ
うな方法で得られた特異性抗体の力価は通常極めて低く
（たとえば、ｌ　：　１００より大きい希釈度において
不活性）そして非特異性抗体に対する比はｌ／１０’よ
り小である。

たとえば、前述のＣｈｅｓｓおよびＳ　ｃｈｌｏｓｓｍ
ａｎの文献（３６５ページ以降参照）および前述のＣｈ
ｅｍｉｃａｌ　ａｎｄ　Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ　Ｎｅ
ｗｓを参照。ここには先行技術の抗血清の欠点および単
分枝系抗体の利点が記載されている。

今回、本質的にすべての正常なヒト末梢Ｔ細胞および皮
膚Ｔリンパ腫細胞にについて見い出される抗原に対する
新規なモノクローナル抗体を生成できる新規な補体固定
性ハイブリドマ（ＯＫＴ３と標示する）が見出された。

そのように生成された抗体は正常なヒトＴ細胞および皮
膚Ｔリンパ腫細胞腫についての単一の決定因子に対して
単一特異性（ｍｏｎｏｓｐｅｃｉｆｉｃ）であり、そし
て他の抗ヒト免疫グロブリンを本質的に含有しないが、
これと対照的に先行技術の抗血清は多数のヒト抗原に対
して反応性の抗体で本来汚染されており、そして先行技
術のモノクローナル抗体はヒトＴ細胞の抗原について単
一特異性ではない。その上、このハイブリドマは培養し
て抗体を生成することができる。

この場合動物を免疫し、殺し、次いで先行技術の不純の
抗血清を得るときにさえ、必要な長たらしい吸着および
精製の工程を実施することを要しない。

したがって、本発明の１つの目的は、本質的にすべての
正常なヒトＴ細胞および皮膚リンパ腫細胞腫について見
い出される抗原に対する抗体を生成するハイブリドマ類
を提供することである。

本発明のさらに別の面において、これらのハイブリドマ
類を製造する方法を提供する。

本発明の他の目的は、本質的にすべての正常なヒトＴ細
胞および皮膚Ｔリンパ腫細胞について見い出される抗原
に対する本質的に均質な抗体を提供することである。

さらに他の目的は、これらの抗体を用いる病気の処置ま
たは診断の方法を提供することである。

本発明のその他の目的および利益は、本発明の開示を検
討すると明らかになるであろう。

前述の目的および利益は達成するために、本発明によれ
ば、本質的にすべての正常なヒトＴ細胞および皮膚リン
パ腫細胞について見い出される抗原に対する新規な抗体
を生成する新規なハイブリドマ、この抗体それ自体、お
よびこの抗体を用いる診断および治療の方法が提供され
る。該ハイブリドマはＭｉｌｓｔｅｉｎおよびＫｏｈｌ
ｅｒの方法に一般に従って製造される。正常のＥロゼツ
ト（ｒｏｓｅｔｔｅ）陽性のヒトＴ細胞でマウスを免疫
した後、免疫したマウスの脾細胞をマウスの骨髄腫ライ
ンからの細胞と融合し、そして得られたハイブリドマ類
を正常のＥロゼツト陽性のヒトＴ細胞に選択的に結合す
る抗体を含有する上澄液を用いてそれらについて選別し
た。所望のハイブリドマ類を引き続いてクローニングし
、特性づけた。その結果、本質的にすべての正常なヒト
Ｔ細胞についての抗原に対する抗（ｔ（ＯＫ　Ｔ　３と
表示する）を生成するハイブリドマが得られる。この抗
体は本質的にすべての正常なヒト末梢Ｔ細胞と反応する
が、他の正常な末梢の血液のリンパ様細胞と反応しない
。更に、この抗体により認識される細胞表面の抗原は成
熟した胸腺細胞についてのみ検出され、そして正常なヒ
ト胸腺細胞の９０％より多くはこの抗原を完全に欠いて
いる。

先行技術において示された困難および抗原として悪性の
細胞ラインを用いて報告された成功の不足を見ると、本
発明の方法が所望のハイブリドマを提供したことは驚く
べきことであった。交雑細胞のこの予測されえない性質
は１つの抗原または細胞ラインから他のものへの補外（
ｅｘｔｒａｐｏｌａｔｅ）を許さないことに注意すべき
である。事実、本発明者らは、抗原としてＴ細胞の悪性
細胞ラインを用いると、所望の抗体を生成しないハイブ
リドマ類が形成することを見い出した。細胞表面から分
離した精製した抗原を使用する試みも不成功に終つｔこ
。

主題のハイブリドマおよびそれによって製造された抗体
の両方はここでは標示ｒＯＫＴ３」で識別し、該特定の
物質は本明細書から明らかである。

このハイブリドマおよび生ずる抗体の製造および特性は
、以下の説明および実施例から一層理解できるであろう
。

ハイブリドマを製造する方法は一般に次の工程からなる
： Ａ、Ｅロゼツト陽性の精製した正常なヒト末梢Ｔ細胞で
マウスを免疫する。メスのＣＡＦ、マウス（Ｂａｌｂ／
ｃＪマウスとＡ／Ｊマウスとの間の第１代の交雑）が好
ましいことがわかったが、他のマウスの系統を使用でき
ると考えられる。免疫スケジュールおよびＴ細胞の濃度
は、有効量の適当に準備した牌細胞を生成するようなも
のであるべきである。０．２ｍｆｆのリン酸塩緩衝食塩
溶液中の２×１０７細胞／マウス／注射を用いて、１４
日の間隔で、３回免疫を行うことは有効であることがわ
かった。

Ｂ、免疫したマウスから肺臓を除去し、適当な媒体中の
牌懸濁液を調製する。約１　ｍＱ／牌臓肺臓体で十分で
ある。これらの実験の技術はよく知られている。

Ｃ１懸濁した牌細胞を適当な細胞ラインからのマウスの
骨髄腫の細胞と、適当な融合媒体の使用により融合する
。牌細胞対骨髄腫細胞の好ましい比は約５＝１である。

約１０８個の牌細胞について合計的０．５〜１．０ｍＱ
の融合媒体は適当である。

多くのマウスの骨髄腫の細胞は知られており、そして一
般に学問的共同体のメンバーまたは種々の寄託機関、た
とえば、ザ・ソータ・インスチチュート・セル・ディス
トリビューション・センター（ｔｈｅ　５ａｌｋ　　Ｉ
　ｎ５ｔｉｔｕｔｅ　Ｃｅ１ｌ　Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉ
ｏｎＣｅｎｔｅｒ、　Ｌａ　Ｊ　ｏｌｌａ、　ＣＡ）か
ら入手できる。使用する細胞ラインは好ましくはいわゆ
る「薬物抵抗性」型であって、未融合の骨髄腫細胞が選
択した媒体中で生存せず、一方交雑細胞が生存するよう
にすべきである。最も普通のクラスは８−アザグアニン
抵抗性の細胞ラインであり、これは酵素ヒポキサンチン
・グアニン・ホホリポシル・トランスフェラーゼ（ｐｈ
ｏｐｈｏｒｉｂｏｓｙｌ　ｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ）を
欠き、それゆえＨＡＴ（ヒポキサンチン、アミノプテリ
ン、およびチミジン）媒体により支持されない。また、
使用する骨髄腫細胞ラインはいわゆる「非分泌」型であ
る、すなわち、それはそれ自体抗体を生成しないことが
一般に好ましいが、分泌型を使用できる。しかしながら
、ある場合において、分泌する骨髄腫ラインは好ましい
ことがある。好ましい融合促進剤は平均分子量が約１０
００〜約４０００であるポリエチレングリコール（商業
的にＰＥＧ１００Ｏなどとして入手できる）が好ましい
が、この分野において知られている他の融合促進剤を使
用できる。

Ｄ、別の容器内において、未融合の牌細胞、未融合の骨
髄腫細胞、および融合した細胞の混合物を、未融合の骨
髄腫細胞を支持しない選択的媒体中で希釈し、未融合の
細胞を死亡させるのに十分な時間（約１時間）培養する
。この希釈は限定されたものの型であることができ、こ
の希釈において希釈剤の体積は統計的に計算して各別々
の容器［たとえば、マイクロタイタープレートの各ウェ
ル］中である数の細胞（たとえば、１〜４）を単離する
。

媒体は薬物抵抗性（たとえば、８−アザグアニン抵抗性
）で未融合の骨髄腫細胞ラインを支持しないもの（たと
えば、ＨＡＴ媒体）である。それゆえ、これらのこれら
の骨髄腫細胞は死ぬ。未融合の牌細胞は非悪性であるの
で、有限の数の世代をもつだけである。こうして、ある
期間（約１週間）後、これらの未融合の牌細胞は再生し
ない。融合した細胞は、これに対して、骨髄腫の親の悪
性をもち、そして牌細胞の親の選択的媒体中で生存でき
るので、再生し続ける。

Ｅ、ハイブリドマを含有する各容器（ウェル）中の上澄
液を、Ｅロゼツト陽性の精製したヒトＴ細胞に対する抗
体について評価する。

Ｆ、所望の抗体を生成するハイブリドマを選択しくたと
えば、限定希釈により）そしてクローニングする。

いったん所望のハイブリドマを選択し、クローニングす
ると、終結の抗体は２つの方法の１つで生成させること
ができる。最も純粋なモノクローナル抗体は、所望のハ
イブリドマを適当な媒体中で適当な長さの時間試験内で
培養し、次いで所望の抗体を上澄液から回収することに
よって生成されるる。適当な媒体および適当な培養時間
の長さは、既知であるか、あるいは決定容易である。こ
の試験管内技術は、他の特異性の抗ヒト免疫グロブリン
を本質的に含まない、単一特異性モノクローナル抗体を
本質的に生成する。媒体は外因性血清Ｃｆ−とえば、胎
児の子牛の血清）を含有するので、少量の他の免疫グロ
ブリンが存在する。しかしながら、この試験管内の方法
は、モノクローナル抗体の濃度がわずかに約５０μｇ／
ｍＱであるので、十分な量または濃度を生成できない。

非常に大きい濃度のわずかに純度に劣るモノクローナル
抗体を生成寄せるため、所望のハイブリドマをマウス、
好ましくは先天性または生先天性のマウスに注射できる
。ハイブリドマは適当な潜伏時間後抗体生成の腫瘍を形
成させ、その結果宿主マウスの血流および腹膜滲出液（
腹水）中に高濃度の所望とする抗体（約５〜２０　ｍｇ
／　ｍｆｆ）が生ずる。

これらの宿主マウスも正常の抗体を血流および腹水の中
に有するが、これらの正常な抗体の濃度はモノクローナ
ル抗体濃度のわずかに約５％であるにすぎない。その上
、これらの正常の抗体は特異性が抗ヒトでないので、収
穫した腹水または血清から得たモノクローナル抗体は汚
染する抗ヒト免疫グロブリンを本質的に含有しない。こ
のモノクローナル抗体は力価が高＜（１：　３０，００
０以上の希釈で活性である）そして特異性免疫グロブリ
ン対非特異性免疫グロブリンの比が高い（約１／２０）
。Ｋ軽量の骨髄腫鎖を組込んだ生成した免疫グロブリン
は非特異性の「無意味な」ペプチド類であり、これらは
モノクローナル抗体をその特異性を減じないで単に希釈
するだけである。

実施例１ メスのＣＡ　Ｆ　ｌマウス（Ｊ　ａｃｋｓｏｎ研究所；
生まれてから６週間）を、０．２ｍＱのリン酸塩緩衝食
塩溶液中の２Ｘ１０’のＥロゼツト精製したＴ細胞で腹
膜内的に１４日の間隔で免疫した。第３回目の免疫後、
牌をマウスから取り出し、そしてステンレス鋼の網に組
織を通すことによって単一細胞の懸濁液をつくった。

細胞の融合をＫｏｈｌｅｒおよびＭｉｌｓＬｅｉｎの方
法に従って実施しｔ；。ｌＸｌ０’の牌細胞を、ＲＰＭ
Ｉ１６４０媒体（Ｇ　１ｂｃｏ、　Ｇ　ｒａｎｄ　Ｉ　
５ｌａｎｄｌ、　Ｎ　Ｙ　）中の３５％のポリエチレン
グリコール（ＰＥＧＩｏｏｏ）と５％のジメチルスルホ
キシドとからなる融合媒体の９．５ｍ（２中において、
２ＸＩＯ’のＰ３Ｘ６３Ａｇ８Ｕｌ骨髄腫細胞（Ｂｒ、
　Ｍ、　５ｃｈａｒｆｆ、　Ａ　１ｂｅｒＬ　Ｅ　１ｎ
ｓｔｅｉｎ　ＣｏｌＣｏ１１ｅ　ｏｆ　Ｍｅｄｉｃｉｎ
ｅ。

Ｂｒｏｎｘ、ＮＹにより供給）と融合した。これらの骨
髄腫細胞はＩ　ｇ　Ｇ　Ｉ　ＡＣＬ鎖（ｌｉｇｈｔ　ｃ
ｈａｉｎｓ）を分泌する。

Ｂ、ハイブリドマの選択および成長 細胞の融合後、細胞をＨＡＴ媒体（ハイポキサンチン、
アミノブチリン、およびチミジン）中で３７℃において
５％のｃｏ、を使用して湿った雰囲気中で培養した。数
週間後、ハイブリドマ類を含有する培養液から４０〜１
００μＱの上澄液を、Ｍｅｎｄｅｓ（Ｊ、　　Ｉｍｍｕ
ｎｏｌ、　　ｌ　１１　：　８６０．　１９７３）が記
載するように健康なヒトの供与者の血液から調製した、
Ｅロゼツト陽性（Ｅ　”）ｉ体群とＥロゼツト陰性（Ｅ
−）個体群とに分けた１０＠の末梢リンパ球のペレット
に加えＩ；。これらの細胞へ結合するマウスのハイブリ
ドマ抗体の検出は、ラジオイムノアセイおよび／または
間接免疫蛍光法により決定した。第１の方法において、
細胞は初め１００μａの親和性精製したＩＦＪ山羊の抗
マウス夏　ｇＧ（ｌ　　Ｏ’ｃｐｍ／　μｇ；　　５０
０　　μｇ／　μＱ）　の　１００μＱと反応させた（
山羊の抗マウスのヨウ素化の詳細はＫｕｎｇ、　ａｔ　
ａｌ、、　　Ｊ　、　Ｂ　ｉｏｌ、　Ｃｈｅｍ、　２５
１（８）：２３９９．１９７６に記載されている）。

別法として、培養液の上澄液で培養した細胞を蛍光を付
与した山羊の抗マウスＩｇＧ（Ｇ／Ｍ　　ＦＩ　Ｔ　Ｃ
ＸＭｅｌｏｙ研究所、Ｓｐｒｉｎｇｆｉｅｌｄ、　ＶＡ
　；　Ｆ／Ｐ−２，５）で染色し、この蛍光性抗体被覆
細胞を引き統いてシトフルオログラフ（Ｃｙｔｏｆ　Ｉ
ｕｏｒｏｇｒａｆ）Ｆｅ２００／４８００Ａ（Ｏｒｔｈ
ｏ　Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ、　Ｗｅｓｔｖｏｏｄ、　
Ｍ　Ａ　）について実施例■に記載するように分析した
。Ｅ＋リンパ球（Ｔ細胞）と特異的に反応する抗体を含
有するハイブリドマ培養液を選択し、クローニングした
。引き続いて、分校系を２．６，１０．１４−テトラメ
チルペンタデカン（Ａ　１ｄｒｉｃｈ　Ｃｈｅｍｉｃａ
ｌ　　Ｃｏｍｐａｎｙから商品名Ｐｒ１ｓｔｉｎｅで市
販されている）で準備したＣＡＦ、マウスに一定の分校
系のｌＸｌ０’細胞（０，２ｍ１２の体積）を注射する
ことによって、腹膜内に移植した。

次いでこれらのマウスからの悪性腹水を使用して、実施
例■において後述するように、リンパ球を特性づけた。

主題の交雑抗体０ＫＴ３は、標準の技術によりサブクラ
スＩ　ｇＧ２であり、補体を固定すると証明された。

実施例■ 人間の末梢血液の単核細胞を、健康な志願者の提供者（
１５〜４０才）から、１３０ｙＨ１，５ｃａｎｄ、　Ｊ
　。

Ｃｌ１ｎ、　Ｌａｂ、　　Ｉｎｖｅｓｔ、　２１（Ｓｕ
ｐｐｌ、　９７）：　７７．１９６８の技術に従い、フ
ィコール−ハイバック（Ｆ　１ｃｏｌｌ−Ｈｙｐａｑｕ
ｅ）密度勾配遠心分離（Ｐｈａｒｍａｃｉａ　　Ｆ　ｉ
ｎｅ　　Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ、Ｐ　ｉｓｃａｔａｗａｙ
、Ｎ　Ｊ　）により単離した。分別しない単核細胞を、
Ｃｈｅｓｓ。

ｅｔａｌ、、　Ｊ、　　Ｉｍｍｕｎｏｌ、　　１１３：
　ｌ　１１３（１９７４）にすでに記載されているよう
に、Ｓ　ｅｐｈａｄｅｘＧ−２００抗−Ｆ　（ａｂ’）
、カラムク０？トゲラフイーにより、表１ｇ”（Ｂ）お
よびＩｇ−（ＴプラスＮｕ１１）の個体群に分離した。

Ｔ細胞はＩｇ−個体群を５％の羊の赤血球（Ｍ　ｉｃｒ
ｏｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　Ａ　５ｓｏｃｉａｔｅｓ、　
Ｂ　ｅｔｈｅｓｄａ、　Ｍ　Ｄ　）でＥロゼツト化する
ことによって回収した。ロゼツト化した混合物をフィコ
ール−ハイバック（Ｆ　１ｃｏｌｌ−Ｈｙｐａｑｕｅ）
上で層状にし、回収したＥ＋ペレットを０．１５５モル
のＮ　ＨａＣ（１（１０ｍＱ／　１０　’細胞）で処理
した。このよういして得られたＴ細胞の個体群は、標準
法により決定して、く２％ＥＡＣロゼツト陽性および〉
９５％Ｅロゼツト陽性であった。さらに、非ロゼツトＩ
　ｇ−（Ｎｕｌｌ細胞）個体群をフィコール表面から収
穫した。この後者の個体群はく５％Ｅ＋およびく２％ｓ
１ｇ＋であった。表面Ｉｇ”（Ｂ）個体群は、前述のよ
うにＳ　ｅｐｈａｄｅｘ　Ｇ　−２００カラムクロマト
グラフイーおよび引き続く正常なヒト・ガンマグロブリ
ンによる溶離から得られた。この個体群は〉９５％表面
１ｇ＋および〈５％Ｅ＋であつ　ｔこ　。

正常なヒト大食細胞は、ポリスチレンへの付着により、
単核個体群から得た。こうして、単核細胞を最終培地（
ＲＰＭＩ　　１６４０．２．５ミリモルのＨＥＰＥＳ　
［４−（２−ヒドロキシエチル）−１＝ピペラジンプロ
パンスルホン酸］緩衝剤、０．５％の重炭酸ナトリウム
、２ｃｏｌｌモルのし一グルタミン、および１％ペニシ
リン−ストレプトマイシンからなり、２０％の熱失活し
たヒトＡＢ血清を補足した）中に２Ｘ１０’細胞濃度で
再懸濁し、プラスチックのペトリ皿（１００Ｘ　２０ｍ
ｍＸＦａｌｃｏｎ　Ｔ　１ｓｓｕｅ　Ｃｕ１Ｌｕｒｅ　
Ｄ　ｉｓｈ　；　Ｆ　ａｌｃｏｎ、　０ｘｎａｒｄ。

ＣＡ）中で３７°Ｃにおいて一夜培養した。よく洗って
非付着性細胞を除去した後、２．５ミリモルのＥＤＴＡ
を含有する冷たい血清不含媒体で強く洗い、時々使い捨
て注射器のプランジャーのゴムの先端で引っかいて、付
着した個体群を脱着した。

８５％より多い細胞個体群は、ラテックス粒子を摂取す
ることができ、そしてライトーギエムサ（Ｗｒｉｇｈｔ
　−Ｇ　ｉｅｍｓａ）染色により半球の形態学的特性を
有した。

Ｂ、正常な胸腺 正常人の胸腺を２ケ月〜１４才の年令の患者から、心臓
の矯正手術のもとに得ｔ；。胸腺の新しく得た部分を媒
体１９９　（Ｇ　１ｂｃｏ）中の５％胎児の子牛の血清
中に直ちに入れ、鉗子とはさみで小さく切り、引き続い
て金網を通してプレスすることによって単細胞の懸濁液
にした。細胞を次に前節Ａで説明したように、フイルコ
ールーノ＼イパックで層状にし、回し、洗浄した。この
ようにして得られた胸腺細胞は〉９５％生活力があり、
そして≧−９０ロゼツト陽性であった。

Ｃ９細胞ライン（Ｃｅｌｌ　１ｉｎｅｓ）正常な４個体
（ＬａｚＯ０７、Ｌａｚ１５６、Ｌａｚ２５６およびＳ
Ｂ）からエプスタイン−パールウィルス（Ｅ　ｐｓｔｅ
ｉｎ−Ｂ　ａｒｒ　Ｖ　１ｒｕｓ）（Ｅ　Ｂ　Ｖ　）変
形した細胞ラインを前述のように調製した。白血病から
確立したＴ細胞ラインヘルツ、ＨＪＤ−１、Ｌａｚ１９
１．およびＨＭＩは、Ｄｒ、　Ｈ，Ｌａｚａｒｕｓ（Ｓ
　１ｄｎｅｙ　Ｆ　ａｒｂｅｒ　Ｃａｎｃｅｒ　１　ｎ
５ｔｉｔｕｔｅ、　Ｂｏｓｔｏｎ、ＭＡ）により提供さ
れた。

上記細胞を調製するに当って、確立したリンパ芽球細胞
ラインへのヒトリンパ球の形質転換は、エプスタイン−
バールウィルスの生物学的性質としてよく知られている
。このような細胞の形質転換は、度々文献に記載され、
例えばジエイ・エイチ・ポペ、エム・ケイ・ホーンおよ
びダブリュ・スエットがインタナショナル・ジャーナル
・オブ・カンチー３号８５７−８６７頁［Ｐｏｐｅ、　
Ｊ、　Ｈ，。

Ｍ、　Ｋ、　Ｈｏｒｎｅ　ａｎｄ　Ｗ、　５ｃｏｔｔ　
ｉｎ　Ｉ　ｎｔ、　Ｊ　。

Ｃａｎｃｅｒ、　３　；　８５７−８６７、　（１９６
８）］における“ヘルペス様ウィルスを含有するヒト白
血病細胞ラインから０別したものによる試験管内におい
てヒト胎児リンパ球の形質転換＃［Ｔ　ｒａｎｓｆｏｒ
ｍａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｆ　ｅｔａｌ　Ｈｕｍａｎ　Ｌｙ
ｍｐｈｐｏｃｙｔｅｓ　Ｉ　ｎ−Ｖ　１ｔｒｏ　Ｂｙ　
Ｆ　１ｌｔｒａｔｅｓ　ｏｆ　ａ　Ｈｕｍａｎ　Ｌｅｕ
ｋｅｍｉｉｃ　Ｃｅ１ｌ　Ｌ　ｉｎｅ　Ｃｏｎｔａｉｎ
ｉｎｇ　Ｈｅｒｐｅｒｓ−Ｌ　１ｋｅＶ　１ｒｕｓ”　
］　という表題の論文に詳細に説明されている。

白血病細胞は１２人のＴ−ＡＬＬの患者から得た。これ
らの個体の細胞は、Ｓｃｈｌｏｓｓｍａｎ、　ｅｔ　ａ
ｌ。

Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、　７３　
：　１２８８（１９７６）によりすでに記載されている
ように、羊の赤血球との自発ロゼツト形成（〉２０％Ｅ
ａ、およびＴ細胞特異性異質抗血清、抗ＨＴＬ（抗−Ｂ
。

Ｋ、）およびＡ９９との反応性によりりＴ細胞結合をも
つとすでに決定された。３個体からの腫瘍細胞はウサギ
および／または馬の抗ＴＨ２と反応性（ＴＨ２＋）であ
ったが、残る９個体からの細胞は非反応性であった（Ｔ
Ｈ２つ。Ｔ　Ｈ２−Ｔ　−ＣＬ　Ｌの２人の患者からの
白血病細胞も使用した。

ウサギおよび／または馬抗ＴＨ，は、特有の機能特性゛
ＴＨ２＋”を有する、Ｔ細胞個体群の特殊なサブセット
と結合するウサギまたは馬から誘導された異種抗血清の
ことである。このことは下記の文献に述べられている。

イー・エル・エヌ・ラインヘルツとニス・エフ春シュロ
スマン［Ｒｅ１ｎｈｅｌｚ、　Ｅ　、　Ｌ　、　Ｎ、、
　Ｓｃｈｌｏｓｓｍａｎｎ、　Ｓ　、　Ｆ　、１のＪ　
ｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　　Ｉ　ｍｍｕｎｏｌｏｇｙ　１２
２．１３３５−１３４１（１９７９）。両方の急性およ
び慢性の白血病細胞を１０％のジメチルスルホキシドお
よび２０％のＡＢヒト血清中の一１９６°Ｃの蒸気相液
体窒素中で、表面特性づけの時間まで、凍結保存した。

分析した腫瘍個体群は、すべての場合においてライトー
ギュムサ（Ｗｒｉｇｈｔ−Ｇ　ｉｅｍｓａ）形態学によ
り〉９０％芽細胞であった。

実施例■ シトフルオログラフ（ｃｙｔｏｆ　ｌｕｏｒｏｇｒａｐ
ｈｉｃ）分析すべての細胞個体群のシトフルオログラフ
分析を、シトフルオログラフ（Ｃｙｔｏｆｌｕｏｒｏｇ
ｒａｆ）Ｆ　Ｃ２００／　４８００　Ａ（Ｏｒｔｈｏ　
Ｉ　ｎｓｔｒｕｍｓｎｔｓ）で蛍光共役したヤギの抗マ
ウスｉ　ｇ　Ｇ（Ｇ／Ｍ　　Ｆ　Ｉ　ＴＣＸＭｅｌｏｙ
　Ｌ　ａｂｏｒａＬｏｒｉｅｓ）を用いて間接免疫蛍光
法により実施した。要約すると、１〜２ＸＩＯ’細胞を
Ｏ−１５ｍＱの０ＫＴ３でｌ：１０００希釈においで処
理し、４°Ｃで３０分間培養し、２回洗浄した。次いで
細胞をＯ，１５ｍ（２の１：４０希釈のＧ／Ｍ　　ＦＩ
ＴＣで４°Ｃにおいて３０分間反応させ、遠心分離し、
３回洗浄した。次いでこれらの細胞をシトフルオログラ
フで分析し、蛍光の強さ／細胞をパルス高さ分析器に記
録した。同様な反応性のパターンは１：１０，０００の
希釈で観察されたが、これよりさらに希釈すると反応性
は失なわれた。バックグラウンドの染色歯、非生成性交
雑クローンで腹膜的に免疫したＢ　ａｌｂ／ｃ　Ｊマウ
スからのｌ　：　１０００腹水の０．１５ｍＱ部分を代
わりに使用することによって得た。

第１〜５図中のデータと０ＫＴ３（ならびに０ＫＴＩお
よび０ＫＴ４）についての追加のデータとは表Ｉに要約
されている。

ハイブリドマの生成、および生ずるモノクローナル抗体
の生成および特性づけは、上の実施例におけるように実
施した。大量の主題の抗体を、主題のハイブリドマのマ
ウスへの腹膜内注射および悪性腹水の収穫により調製し
たが、ハイブリドマは試験管内でこの分野においてよく
知られた技術により培養し、抗体を上澄液から取り出す
ことができることは、明らかに考えられる。

主題のハイブリドマの試料は、アメリカン・ライン・カ
ルチャー・コレクション（１２３０１Ｐａｒｋｌａｖｎ
　Ｄｒｉｖｅ、　Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ、　ＭＤ　、　２
０８５２）に１９７９年４月２６にちに寄託され、ＡＴ
ＣＣ番号ＣＲＬ８００１が付された。

第１図に示すように、一定の正常な個体の全ヒト末梢血
液Ｔ細胞の個体群は０ＫＴ３と反応性であるが、これに
対して同じ個体から単離された全Ｂ細胞、無特徴細胞お
よび大食細胞の個体群は０ＫＴ３と非反応性である。他
の正常な１５個体からのリンパ球の個体群について同様
な結果が得られた。こうしてモノクローナル抗体は、本
質的にすべての正常なヒト末梢Ｔ細胞の表面上に含有さ
れる抗原と反応性であるが、前述の他の３つの細胞の型
の表面上の抗原と非反応性であると、特性づけられ。こ
の特異の反応性は、主題の抗体０ＫＴ３を検出でき、そ
して他の抗体と区別できる１つの試験である。

第２図に示すように、６力月の乳児からの正常なヒト胸
腺細胞のほとんど大部分は０ＫＴ３と完全に非反応性で
あるが、胸腺細胞の約５〜１０％は反応性である。この
発見の意味は、幹細胞が成熟したＴ細胞に変わる分化過
程の間、胸腺細胞がある段階で、０ＫＴ３と反応性であ
る、Ｔ細胞上に見い出される同じ表面の抗原を獲得する
ということにある。これらの胸腺細胞は、胸腺から血流
中へ出る直前の分化の後の段階にあると信じられる。２
力月〜１９才の年令の正常な個体からの６つの追加の胸
腺の試料を用いて、同様な結果（５〜１０％の反応性）
が得られた。第２図における反応性のパターンは、主題
の抗体０ＫＴ３を検出し、それを他の抗体と区別する第
２の方法を提供する。

主題の抗体はＴ細胞である循環リンパ球の比率の決定に
も有用である。表■に示すように、すべてのＴ細胞のΣ
９５％は０ＫＴ３抗体と反応する。

こうして本発明は０ＫＴ３抗体を個体からのリンパ球細
胞と混合し、モしてＯＫ　Ｔ　３　＋、こうしてＴ細胞
であるリンパ球の比率を決定することからなる、個体に
おいてＴ細胞である循環リンパ球の比率を決定する方法
を包含する。

主題の抗体○ＫＴ３のほかの特性づけは、第４および５
図に図解される種々のヒトＴ細胞ラインに対する反応に
よって示される。この図かられかるように、主題の抗原
のヒトＴ細胞ラインに対する反応性は不均質であり、ラ
インＨＪＤ−１について弱く、ライン、Ｌａｚ１９１、
およびＨＭＩについて不存在である。この０ＫＴ３の種
々の入手容易なヒトＴ細胞ラインに対する特異の反応性
は、主題の抗体を特性づけかつ説明する。なお他の方法
を提供する。

０ＫＴ３とヒトのＢ細胞ラインＬａｚ００７、Ｌａｚ１
５６、Ｌａｚ２５６およびＳＢとの反応の不存在は表Ｉ
に示されている。これは、さらに、０ＫＴ３と、正常の
ヒトの個体群の末梢血液かもえられたＢ細胞との反応の
不存在を裏書きし、そしてしかも主題の抗体０ＫＴ３を
特性づけかつ区別する他の方法を提供する。

０ＫＴ３抗体と皮膚Ｔ細胞リンパ腫上の抗原との特異反
応は表■に示されており、ここで０ＫＴｌ（バイブリド
？　　ＡＴＣＣＮｏ、ＣＲＬ８０００）および０ＫＴ４
（ハイブリドマ　ＡＴＣＣＮｏ、　ＣＲＬ８０００２）
からの区別が示される。本発明ノ抗体は、従って、病気
の患者における皮膚Ｔ細胞リンパ腫の診断を確認するた
めの試薬を提供する。治療学的に有効量の０ＫＴ３抗体
を投与することによる皮膚Ｔ細胞リンパ腫の処置は、ま
た本発明の一部として考えられる。

本発明によれば、本質的にすべての正常なヒトＴ細胞お
よび皮膚Ｔリンパ腫細胞上に見い出される抗原に対する
抗体を生成できる／１イブリドマ、このハイブリドマを
生成する方法。本質的にすべてのヒトＴ細胞上に見い出
される抗原に対するモノクローナル抗体、この抗体を生
成する方法、およびこの抗体を用いる病気の処置または
診断の方法が提供される。

ヒトＴ細胞の抗原に対する単一のモノクローナル抗体を
生成する単一のハイブリドマだけを説明してきたが、本
発明はここに説明する特性を示すすべてのモノクローナ
ル抗体を包含すると考えられる。主題の抗体０ＫＴ３は
ねずみのＩｇＧの４つのサブクラスの１つであるサブク
ラスＩｇＧ。

に属することが決定された。免疫グロブリンＧのこれら
のサブクラスは互いにいわゆる「固定された」領域にお
いて異なるが、特定の抗原に対する抗体はいわゆる「可
変の」領域をもち、この領域は免疫グロブリンＧのどの
サブクラスがそれに属するから無関係に機能的に同一で
ある。すなわち、ここに説明した特性を示す半分枝糸抗
体はサブクラスＩｇ　Ｇ　１％　　Ｉ　ｇ　Ｇ１３％　
　Ｉ　ｇＧ２ＥｌｓまたはＩｇＧ、、あるいはり５スＩ
　ｇＭｌ　ｒ　ｇＡ、あるいは他の既知のクラスＩｇで
あることができる。

これらのクラスまたはサブクラスの間の差異は抗体の反
応パターンの選択性に影響を及ぼさないが、抗体と他の
物質、たとえば、相補的抗体または抗マウス抗体とのほ
かの反応に影響を及ぼすことがあるであろう。主題の抗
体はＩｇＧ、に特定しｔ；が、ここに例示した反応性の
パターンを有する抗体類はそれらが属する免疫グロブリ
ンのクラスまたはサブクラスに無関係に本発明の範囲内
に包含されると考えられる。

さらに、本発明の範囲内に、ここに例示したハイブリド
マの技術を用いて前述のモノクローナル抗体を生成する
方法が包含される。ハイブリドマのただ１つの例をここ
に記載したが、当業者はここに提供した免疫法、融合法
および選択法に従い、ここに説明した反応性の特性を有
する抗体類を生成しうる他のハイブリドマ類を得ること
ができると考えられる。マウスの既知の種からの既知の
骨髄腫細胞系統から生成した個々のハイブリドマはこの
ハイブリドマにより生成された抗体を参照する以外それ
以上同定できないので、前述の反応性の特性を有する抗
体を生成するすべてのハイブリドマ類は本発明の範囲内
に包含され、これらのハイブリドマを用いるこの抗体を
つくる方法も同様に包含されると、考えられる。

本発明のほかの面は、モノクローナル抗体０ＫＴ３また
はここに明らかにした反応性のパターンを示す他のモノ
クローナル抗体を用いて病気を処理または診断する方法
である。前述のように、主題の抗原は、ある種のＴ細胞
の慢性リンパ芽性白血病をもつ患者を、治療上有効量の
それを投与することにより、処置することを可能とする
。器官移植を行なう個体の患者に治療上有効量の０ＫＴ
３を投与すると、この移植物の拒否は減少または排除さ
れるであろう。また、主題の抗体は、個体からのリンパ
層下細胞組成物を診断的に有効量の０ＫＴ３抗体と混合
することにより、皮膚Ｔ細胞リンパ腫の検知を可能とす
る。反応の存在は、病気の同定を保証する。皮膚Ｔ細胞
リンパ腫は、処置を必要とする個体に治療上有効量の０
ＫＴ３抗体を投与することによって処置できる。この抗
体はＴリンパ腫細胞と反応し、その量を減少し、こうし
て病気を軽減する。これらの診断法および治療法の観点
において、本発明はさらに（それぞれ）診断学的または
治療学的に有効量の０ＫＴ３抗体を診断学的または製薬
学的に許容できる担体との混合物として含有する診断学
的組成物および治療学的組成物を包含する。

表ｌ ０ＫＴＩ　　０ＫＴ３　０ＫＴ４ 次の細胞との反応性％： 末梢Ｔ−細胞（１０試料）　　　〉９５％　〉９５％　
　　５５％末梢Ｂ−細胞（１０試料）　　　く　２％　
く　２％　く　２％末末梢無機微細胞１０試料）　　く
　２％　く　２％　く　２％胸腺細胞＊（８試料）５−
１ｏ％　　５−１Ｏ％　　８０％次の細胞との反応性： Ｔ−慢性リンパ性白血病（３例）　　　＋　　　＋（１
）；　　　　　−Ｔ−急性リンパ性白血病（８例）−ｍ
−Ｂ−細胞ライン＋（４）　　　　　　　　−−−Ｔ−
細胞ライン＋ＨＪＤ−１＋　　　　　（±）　　　　−
ＣＥＭ　　　　　　　　　　＋　　　　　　　　−＋Ｌ
ａｚ１９１　　　　　　＋　　　　　　　−−ＨＭＩ　
　　　　　　　；　　　　十　　　　　　　　−−サブ
クラスＩｇＧ　　　　　　　Ｉ　ｇＧ＋　　　Ｉ　ｇＧ
＊　　　Ｉ　ｇＧ２補体の固定　　　　　　　　　　　
−＋　　　　　＋＊　２力月〜１８才の患者から ＋　　Ｄｒ、　Ｈ，Ｌａｚａｒｕｓ（Ｓｉｄｎｅｙ　Ｆ
ａｒｂｅｒＣｅｎｔｅｒ　Ｃｅｎｔｅｒ）から入手した
。ラインＬａｚ２５６．１５６．００７およびＳＢはヒ
トの末梢Ｂ細胞のエプスタイン−バールのウィルス変形
から得、そしてＨＪＤ−ｉ　ＣＥＭ。

Ｌａｚ１９１およびＨＭＩは白血病の患者から確立した
。

髭１ Ｃｒｉｓｉｓ）　；　Ｐ　Ｂ　Ｌ Ｃ，Ｏ，Ｏ菌状息肉症節　　　　　　−＋　　　十０、
　　　　　菌状息肉症節　　　　　　＋　　　　十　　
　　−Ｍ、　　　　　７節　　　　　　　　　＋　　　
十　　　子細胞源：　ＰＢＬ＝末梢血液リンパ球 Ｎｏｄｅ　＝リンパ節

【図面の簡単な説明】

第１図は、正常のヒト末梢Ｔ細胞をｌ　：　１０００の
希釈で０ＫＴ３、および０７Ｍ　　ＦＩＴＣと反応させ
た後、シトフルオログラフで得た蛍光パターンを示す。 比較のため、モノクローナル抗体０ＫＴＩおよび０ＫＴ
４を用いて得られた結果を同じ条件下で第１〜５図に示
す。 第２図は、ヒト胸腺細胞を０ＫＴ３および０７Ｍ　　Ｆ
ＩＴＣと反応させた後、シトフルオログラフで得られた
蛍光パターンを示す。 第３図は、Ｂ細胞慢性リンパ芽球性白血病患者からの白
血病細胞を０ＫＴ３およびＧ／ＭＦＩＴＣと反応させた
後、シトフルオログラフで得た蛍光パターンである。 第４図は、ヒトＴ細胞ラインＨＪＤ−１を０ＫＴ３およ
び０７Ｍ　　ＦＩＴＣと反応させた後、シトフルオログ
ラフで得た蛍光パターンを示す。 第５図は、ヒトＴ細胞ラインＣＥＭを０ＫＴ３および０
７Ｍ　　ＦＩＴＣと反応させた後、シトフルオログラフ
で得た蛍光パターンを示す。 特許出願人　オーツ・ファーマシューチカルΦコーポレ
ーション 手続補正書Ｇ式） 昭和６３年１１月２１日 特許庁長官　　吉　１）文　毅　　殿 １、事件の表示 昭和６３年特許願第１０１４９８号 ２、発明の名称 ＩｇＧモノクローナル抗体−生産性ハイブリドマ３、補
正をする者 事件との関係　　　　特許出願人 名称　オーツ・ファーマシューチカル・コーポレーショ
ン ４、代理人　〒１０７ ５、補正命令の日付　昭和６３年１０月２５日（発送臼
）６、補正の対象 図面

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、ヒトＴ細胞で前もつて免疫されたマウスから脾細胞
   とマウスの骨髄腫ラインからの細胞との融合により形成
   されたＩｇＧモノクローナル抗体−生産性ハイブリドマ
   であつて、該抗体が ａ）本質的にすべての正常なヒト末梢Ｔ細胞および皮膚
   Ｔリンパ腫細胞と反応するが、正常なヒト末梢Ｂ細胞、
   無特徴細胞または大食細胞とは反応せず、 ｂ）正常ヒト胸腺細胞の約５％〜約１０％と反応し、 ｃ）Ｔ細胞慢性リンパ芽球性白血病をもつヒトからの白
   血病細胞と反応するが、Ｔ細胞急性リンパ芽球性白血病
   、無特徴細胞急性リンパ芽球性白血病、またはＢ細胞慢
   性リンパ芽球性白血病をもつヒトからの白血病細胞とは
   反応せず、そして ｄ）補体を固定する、 ことを特徴とする前記ＩｇＧモノクローナル抗体−生産
   性ハイブリドマ。 ２、生成する抗体がサブクラスＩｇＧ＿２である特許請
   求の範囲第１項記載のハイブリドマ。 ３、Ｐ３Ｘ６３Ａｇ８Ｕｌ骨髄腫細胞とＥロゼット精製
   したヒトＴ細胞で前もつて免疫したＣＡＦ＿１マウスか
   らの脾細胞との融合により形成された特許請求の範囲第
   １項記載のハイブリドマ。 ４、ＯＫＴ３の同定特性をもつ特許請求の範囲第１項記
   載のハイブリドマ。