FI75183C - Foerfarande foer framstaellning av en komplement-bindande monoklonal antikropp mot maenniskans t-celler genom anvaendning av en ny hybridcellinje. - Google Patents
Foerfarande foer framstaellning av en komplement-bindande monoklonal antikropp mot maenniskans t-celler genom anvaendning av en ny hybridcellinje. Download PDFInfo
- Publication number
- FI75183C FI75183C FI801342A FI801342A FI75183C FI 75183 C FI75183 C FI 75183C FI 801342 A FI801342 A FI 801342A FI 801342 A FI801342 A FI 801342A FI 75183 C FI75183 C FI 75183C
- Authority
- FI
- Finland
- Prior art keywords
- cells
- cell
- antibody
- reacts
- laz
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2803—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
- C07K16/2809—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against the T-cell receptor (TcR)-CD3 complex
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/575—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
- G01N33/57505—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer of the blood, e.g. leukaemia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/8215—Microorganisms
- Y10S435/948—Microorganisms using viruses or cell lines
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
- Y10S530/806—Antigenic peptides or proteins
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
- Y10S530/808—Materials and products related to genetic engineering or hybrid or fused cell technology, e.g. hybridoma, monoclonal products
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
- Y10S530/808—Materials and products related to genetic engineering or hybrid or fused cell technology, e.g. hybridoma, monoclonal products
- Y10S530/809—Fused cells, e.g. hybridoma
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Hematology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Hybrid Cells (AREA)
- Immobilizing And Processing Of Enzymes And Microorganisms (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Description
γγ755ΞΓΠ kuulutusjulkaisu η Γ „ η [Β] (1) UTLÄGGN,NGSSKR,FT 7 518 3 C 7 (51) Kv ik.VlntCl4 C 12 N 5/00, 15/00, C 12 P 1/00, A 61 K 39/395
SUOMI-FINLAND
(Fl) (21) Patenttihakemus - Patentansökning 8013^2 (22) Hakemispäivä - Ansökningsdag 25.0lt.80
Patentti-ja rekisterihallitus (23) Alkupäivä - Giltighetsdag 25.0lt.80
Patent- och registerstyrelsen (41 j xunut julkiseksi - Bhvit offentiig 27.10.80 (44) Nähtäväksipanon ja kuul.julkaisun pvm. - 29 0 1 88
Ansökan utlagd och utl.skriften publicerad 7 * (86) Kv. hakemus - Int ansökan (32)(33)(31) Pyydetty etuoikeus - Begärd prioritet 26.01». 79 USA(US) 33669 Toteennäytetty-Styrkt (71) Ortho Pharmaceutical Corporation, U.S. Route 202, Raritan, New Jersey, USA(US) (72) Patrick Chung-Shu Kung, Bridgewater, New Jersey,
Gideon Goldstein, Short Hills, New Jersey, USA(US) (71») Oy Kolster Ab (5A) Menetelmä komplementin sitovan monoklonaalisen vasta-aineen valmistamiseksi ihmisen T-soluille käyttäen uutta hybridisolulinjaa - Förfarande för fram-ställning av en kömpiement-bindade monoklonal antikropp mot människans T-celler genom användning av en ny hybridcel1inje
Keksintö kohdistuu menetelmään komplementin sitovan mono-klonaalisen vasta-aineen valmistamiseksi ihmisen T-soluille. Menetelmällä käytetään hyväksi uutta hybridisolulinjaa, jonka avulla voidaan valmistaa komplementin sitova monoklonaalinen ihmisen kaikkien normaalien T-solujen ja ihon T-imukudoskasvainsolujen pinnalta löydetylle antigeenille spesifinen vasta-aine. Tätä mo-noklonaalista vasta-ainetta voidaan käyttää terapeuttisiin tarkoituksiin.
Kohler ja Milstein yhdistivät vuonna 1975 hiiren myelooma-soluja immunisoitujen hiirien pernasoluihin (Nature 256 (1975) 495-497), jolloin ensimmäisen kerran havaittiin, että oli mahdollista valmistaa jatkuva solulinja homogeenisen (ns. "monoklonaali-sen") vasta-aineen tuottamiseksi. Tämän jälkeen erilaisten hybri- 2 75183 disolujen (ns. hybridomien) valmistamista on yritetty monin tavoin ja näiden hybridomien tuottamaa vasta-ainetta yritetty soveltaa tieteelliseen käyttöön. Katso esim. Current Topics in Microbiology and Immunology, volyymi 81 - "Lymphosyte Hybridomas", toimittajat F. Melchers, M. Potter ja N. Warner, Springer-Verlag 1978 ja julkaisun sisältämät kirjallisuusviitteet; C. J. Barnstable et al., Cell 14 (toukokuu 1978) 9-20; P. Parham ja W.F. Bodmer, Nature 276 (1978) 397-399; Handbook of Experimental Immunology, 3. painos, volyymi 2, toimittaja D. M. Wier, Blackwell 1978, kappale 25; ja Chemical and Engineering News, tammikuu 1 (1979) 15-17.
Näissä viitteissä on esitetty saavutetut tulokset ja esiintyneet vaikeudet yritettäessä valmistaa hybridomeista monoklonaalista vasta-ainetta. Vaikka valmistusmenetelmä periaatteessa tunnetaan hyvin, vaikeuksia esiintyy pajon ja jokainen tapaus on erilainen. Ei voida etukäteen taata, että yritettäessä valmistaa haluttua hybridomaa siinä onnistutaan ja että tässä onnistuttaessa hybridoma tuottaa vasta-ainetta tai että näin muodostuneella vasta-aineella on haluttu spesifisyys. Onnistuminen riippuu pääasiassa käytetystä antigeenilajista ja halutun hybridoman eristämisessä käytetystä selektiotekniikasta.
Monoklonaalista ihmisen lymfosyyttien pinta-antigeeneille spesifistä vasta-ainetta on yritetty valmistaa vain harvoissa tapauksissa. Katso esimerkiksi: Current Topics in Microbiology and Immunology, volyymi 81, 66-69 ja 164-169. Näissä kokeissa käytetyt antigeenit olivat viljeltyjä ihmisen lymfoblastoidileukemiasolulinjoja ja kroonisen lymfosyyt-tileukemian solulinjoja. Monet näin valmistetut hybridomat tuottivat vasta-ainetta, joka vaikutti kaikkien ihmisen solujen erilaisiin pinta-antigeeneihin. Mikään näistä hybridomeista ei tuottanut tietylle ihmisen lymfosyyttilajille spesifistä vasta-ainetta.
Ihmisen ja eläinten elimistön immunologisiin toimintoihin osallistuu kaksi lymfosyyttien pääryhmää. Näistä toinen (kateenkorvasta peräisin oleva solu eli T-solu) erilaistuu kateenkorvassa hemopoieettisista kantasoluista. Ka-teenkorvassa olevia erilaistuvia soluja nimitetään "tymo- li 3 75183 syyteiksi". Kypsät T-solut irtoavat kateenkorvasta ja joutuvat sen jälkeen verenkiertoon, kudoksiin ja imukudokseen. Nämä T-solut muodostavat suuren osan elimistössä kiertävistä pienistä lymfosyyteistä. Ne ovat immunologisesti spesifisiä ja osallistuvat efektorisoluina suoraan solujen välityksellä tapahtuviin immunologisiin reaktioihin (esim. elinsiirtojen yhteydessä esiintyvä hylkiminen). Vaikka T-solut eivät eritä vasta-aineita elimistön nesteisiin, toinen myöhemmin käsiteltävä lymfosyyttiryhmä tarvitsee eräissä tapauksissa T-soluja pystyäkseen itse erittämään vasta-aineita. Eräät T-solulajit toimivat toisissa immunologisissa toiminnoissa säätelevästi. Tämän solujen yhteistoimintamuodon mekanismia ei vielä täysin tunneta.
Toiseen lymfosyyttiryhmään (luuytimestä peräisin oleviin soluihin eli B-soluihin) kuuluvat ne, jotka erittävät vasta-aineita. Ne kehittyvät myös hemopoieettisista kanta-soluista, mutta kateenkorva ei säätele niiden erilaistumista. Linnuilla ne erilaistuvat kateenkorvalle analogisessa elimessä, joka on nimeltään "Bursa of Fabricius". Imettäväisistä ei kuitenkaan ole löydetty vastaavaa elintä ja täten B-solujen arvellaan erilaistuvan luuytimessä.
T-solut jakaantuvat ainakin kolmeen alalajiin, joita nimitetään "auttaja"-, "heikentäjä"- ja "tappaja"-T-soluik-si, nämä joko nopeuttavat tai hidastavat reaktiota tai tappavat (liuottavat) vieraita soluja. Nämä alaluokat ovat hyvin tunnettuja hiirien elimistössä, mutta vasta äskettäin niiden toimintaa on kuvattu ihmiselimistössä. Katso esimerkiksi: R.L. Evans et ai., Journal of Experimental Medicine 145 (1977) 221-232, ja L. Chess ja S.F. Schlossman -"Functional Analysis of Distinct Human T-cell Subsets Bearing Unique Differentiation Antigens", teoksessa "Contemporary Topics in Immunobiology", toimittaja 0.
Stutman, Plenum Press 1977, volyymi 7, 363-379.
Eri T-solulajien tai -alalajien identifiointi tai niiden heikentäminen on tärkeää erilaisten immunoregulato-risten häiriöiden diagnoosissa ja hoidossa.
4 75183
Esimerkiksi tiettyjen leukemia- ja imukudoskasvain-muotojen prognoosi on erilainen sen mukaan, ovatko ne lähtöisin B- tai T-soluista. Täten taudin prognoosia arvioitaessa on tärkeää, että nämä kaksi lymfosyyttiryhmää pystytään erottamaan toisistaan. Katso esim. A.C.Aisenberg ja D.C.Long, The American Journal of Medicine 58 (1975) 300; D.Belpomme et ai., teoksessa "Immunological Diagnosis of Leukemias and Lymphomas" toimittajat S.Thierfelder et al., Springer, Heidelberg, 1977, 33-45; ja D.Belpomme et ai., British Journal of Haematology 38 (1978) 85. Tietyissä tautitiloissa (esim. nuorten nivelreumassa ja tietyissä leukemiamuodoissa) T-solujen alaryhmät ovat joutuneet epätasapainoon. On mahdollista, että autoimmuunisissa sairauksissa yleensä "auttaja"-T-soluja esiintyy ylimäärin ja tietyistä "heikentäjä"-T-soluista on puutetta, kun taas pahanlaatuisissa tautitiloissa yleensä "heikentäjä"-T-soluja esiintyy ylimäärin. Tietyissä leukemiamuodoissa muodostuu ylimäärin pysähtyneessä kehitysvaiheessa olevia T-soluja. Diagnoosin onnistuminen voi täten riippua siitä, pystytäänkö tämä epätasapaino tai ylimäärä havaitsemaan.
Katso esim. J Kersey et ai., "Surface Markers Define Human Lymphoid Malignancies with Differing Prognoses", teoksessa "Haematology and Blood Transfusion", volyymi 20, Springer-Verlag 1977, 17-24 ja julkaisun sisältämät viitteet.
Terapeuttisella puolella on ehdotettu, että annettaessa ylimäärin esiintyvälle T-solujen alaryhmälle spesifisiä vasta-aineita autoimmuunisia tai pahanlaatuisia sairauksia poteville potilaille, nämä vaikuttavat sairauden kehitykseen edullisesti. Antiseerumit, jotka vaikuttavat ihmisen kaikkiin T-soluihin (ns. ihmisen vastainen tymo-syyttiglobuliini eli ATG),ovat osoittautuneet terapeuttisesti käyttökelpoisiksi hoidettaessa potilaita, joille on suoritettu elintensiirtoja. Koska T-solut vaikuttavat solujen välityksellä tapahtuviin immunologisiin reaktioihin (siirrettyjen elinten hylkimismekanismi), T-soluille spesifisen vasta-aineen saaminen estää tai hidastaa tätä hylkimispro-
II
5 75183 sessia. Katso esim. Cosimi et ai., "Randomized Clinical Trial of ATG in Cadaver Renal Allgraft Recipients: Importance of T Cell Monitoring" Surgery 40 (1976) 155-163, ja julkaisun sisältämät viitteet.
Ihmisen T-solulajien ja -alalajien identifiointiin ja heikentämiseen on tähän asti käytetty spontaaneja autovasta-aineita tai ihmisen T-soluille selektiivisiä anti-seerumeja, jotka on valmistettu immunoimalla eläimiä ihmisen T-soluille, poistamalla eläimistä veri seerumin saamiseksi ja adsorboimalla antiseerumi esimerkiksi autologi-silla ei-allogeenisilla B-soluilla vasta-aineiden poistamiseksi, joilla on ei-haluttu reaktiivisuus. Näiden antiseerumien valmistus on erittäin vaikeaa erikoisesti adsorptio-ja puhdistusvaiheessa. Adsorboidut ja puhdistetut anti-seerumitkin sisältävät halutun vasta-aineen lisäksi useista syistä monia epäpuhtauksia. Eräs syy on se, että seerumi sisältää miljoonia vasta-ainemolekyylejä jo ennen immunoin-tia T-soluilla. Toiseksi immunointi aiheuttaa vasta-aineiden muodostumisen useita antigeenilajeja vastaan, joita on löydetty kaikista injektoiduista ihmisen T-soluista. Ei pystytä selektiivisesti tuottamaan tietylle antigeenille spesifistä vasta-ainetta. Kolmanneksi näillä menetelmillä valmistetun spesifisen vasta-aineen tiitteri on tavallisesti melko alhainen (esim. laimennusten ollessa suurempia kuin 1:100 vasta-aine on inaktiivinen) ja spesifisen ja ei-spesifisen vasta-aineen suhde on pienempi kuin 1/10°.
Katso esim. Chessin ja Schlossmanin edellä mainittua artikkelia (sivulta 365 eteenpäin) sekä edellä mainittua artikkelia "The Chemical and Engineering News"-lehdessä, näissä on kuvattu tähän asti käytettyjen antiseerumien puutteellisuuksia ja monoklonaalisen vasta-aineen etuja.
Nyt on keksitty uusi hybridoma (nimeltään OKT3), joka pystyy tuottamaan uutta komplementin sitovaa mono-klonaalista vasta-ainetta, joka on spesifinen käytännöllisesti katsoen kaikista ihmisen normaaleista perifeerisistä T-soluista ja ihon T-imukudoskasvainsoluista löydetylle pinta-antigeenille. Näin muodostunut vasta-aine on mono- 6 75183 spesifinen yhdelle ainoalle ihmisen normaalien T-solujen ja ihon T-imukudoskasvainsolujen pinta-antigeenidetermi-nantille eikä se sisällä käytännöllisesti katsoen lainkaan muita ihmisen vastaisia immunoglobuliine ja, päinvastoin kuin tähän asti tunnetut antiseerumit (jotka sisältävät luonnostaan epäpuhtauksina vasta-aineita, jotka reagoivat hyvin monien ihmisen antigeenien kanssa) ja tähän asti tunnetut monoklonaaliset vasta-aineet (jotka eivät ole monospesi-fisiä yhdelle ainoalle ihmisen T-solun antigeenille). Lisäksi tätä hybridomaa voidaan viljellä vasta-aineen tuottamiseksi, jolloin eläinten käyttö vasta-aineen tuottamiseen ei ole välttämätöntä eikä myöskään tarvita monimutkaisia adsorptio- ja puhdistusvaiheita, jotka tähänastisissa epäpuhtaidenkin antiseerumien valmistusmenetelmissä ovat olleet välttämättömiä.
Sekä esilläolevasta hybridomasta että sen tuottamasta vasta-aineesta käytetään tässä yhteydessä nimitystä "0KT3", asiayhteydestä ilmenee, kumpaa kulloinkin tarkoitetaan. Esilläoleva hybridoma on talletettu 26.4.1979 laitokseen "The American Type Culture Collection", 12301 Parklawn Drive, Rockville, Maryland 20852, ja sille on annettu ATCC-talletusnumero CRL 8001.
Vasta-aineelle OKT3 on tunnusomaista, että se a) reagoi käytännöllisesti katsoen kaikkien ihmisen normaalien perifeeristen T-solujen ja ihon T-imukudoskasvainsolu jen kanssa, mutta ei reagoi ihmisen normaalien perifeeristen B-solujen, nollasolujen eikä makrofagien kanssa, b) reagoi noin 5-10 %:n kanssa ihmisen normaaleja tymosyytte j ä, c) reagoi T-solujen kroonista lymfoblastileukemiaa sairastavista potilaista saatujen leukemiasolujen kanssa, mutta ei reagoi leukemiasolujen kanssa, jotka on saatu T-solujen akuuttia lymfoblastileukemiaa, nollasolujen akuuttia lymfoblastileukemiaa tai B-solujen kroonista lymfaattista leukemiaa sairastavista potilaista, d) reagoi heikosti ihmisen T-solulinjan HJD-1 kanssa, mutta ei reagoi solulinjojen CEM, Laz 191 eikä HM1 kanssa,
II
7 75183 e) ei reagoi Epstein-Barr-viruksella transformoitujen ihmisen B-solulinjojen Laz 007, Laz 156, Laz 256 eikä SB kanssa, ja f) sitoo komplementin.
Vasta-aineen OKT3 valmistus hybridoman ATCC CRL 8001 avulla on kuvattu patenttivaatimuksissa 1 ja 2.
Hybridoma valmistettiin pääpiirteittäin Milsteinin ja Kohlerin esittämällä menetelmällä. Tässä immunisoitiin ensin hiiriä normaaleilla E-rosettipositiivisilla ihmisen T-soluilla, ja sen jälkeen immunisoitujen hiirten pernasolut yhdistettiin hiiren myeloomasolulinjän soluihin, ja viljelmän pintanestees-tä seulottiin ne hybridomat, jotka tuottivat ihmisen normaaleihin E-rosettipositiivisiin T-soluihin selektiivisesti sitoutuvaa vasta-ainetta. Halutut hybridomat kloonattiin ja karakterisoitiin. Tulokseksi saatiin hybridoma, joka tuottaa käytännöllisesti katsoen kaikista normaaleista ihmisen T-soluista löydetylle pinta-antigeenille spesifistä vasta-ainetta (nimeltään OKT3). Tämä vasta-aine reagoi käytännöllisesti katsoen kaikkien ihmisen terveiden perifeeristen T-solujen kanssa, mutta se ei reagoi muiden normaalien perifeeristen veren lym-foidisolujen kanssa. Lisäksi tämän vasta-aineen tunnistama solun pinta-antigeeni on löydetty ainoastaan täysin kehittyneistä tymosyyteistä, ja se puuttuu täydellisesti ainakin 90 %:lta ihmisen normaaleja tymosyyttejä.
Otettaessa huomioon tähän asti esiintyneet vaikeudet ja huonot tulokset käytettäessä pahanlaatuisten tautien solulin-joja antigeeninä on yllättävää, että esillä olevalla menetelmällä saatiin aikaan haluttu hybridoma. On korostettava, että hybridisolujen valmistuksessa esiintyvien arvaamattomien tekijöiden vuoksi ei pystytä tietyllä antigeeni-solu-yhdistelmällä saatujen tulosten perusteella ennustamaan jonkin muun antigee-ni-solu-yhdistelmän käyttäytymistä. On nimittäin havaittu, että käytettäessä pahanlaatuisen taudin T-solulinjoja antigeeninä muodostui hybridomeja, jotka eivät tuottaneet haluttua vasta-ainetta. Käytettäessä solujen pinnalta eristettyjä puhdistettuja antigeenejä ei myöskään saatu positiivisia tuloksia.
Hybridoman valmistusmenetelmä koostuu pääpiirteittäin seuraavista vaiheista: 751 83 s A. Hiiriä immunisoidaan E-rosettipositiivisilla puhdistetuilla normaaleilla ihmisen T-soluilla. Yleensä naaraspuoliset CAF^-hiiret (Balb/cJ-hiirestä ja A/J-hiirestä syntynyt ensimmäisen polven hydridi) on havaittu tähän parhaiten soveltuviksi, mutta myös muiden hiirikantojen käyttöä voidaan ajatella. Immu-nisointiaikataulun ja T-solupitoisuuden pitäisi olla sellainen, että saadaan käyttökelpoiset määrät sopivasti esikäsiteltyjä splenosyyttejä. Kolme immunisointia 2 x 10 solulla/hiiri/ruis-ke 0,2 ml:ssa fosfaatilla puskuroitua suolaliuosta neljäntoista päivän välein on havaittu tehokkaaksi.
B. Pernat poistetaan immunisoiduista hiiristä, ja valmistetaan pernasuspensio sopivaan väliaineeseen. Sopiva väliaine-määrä on yksi millilitra yhtä pernaa kohti. Nämä koemenetelmät ovat sinänsä tunnettuja.
C. Suspendoidut pernasolut yhdistetään sopivasta solulin-jasta saatuihin hiiren myeloomasoluihin sopivan katalysaattorin avulla. Edullinen suhde on noin viisi pernasolua yhtä myelooma- g solua kohti. Noin 10 splenosyytille sopiva yhdistämiseen käytetty väliaineen kokonaistilavuus on noin 0,5 - 1,0 ml. Monet hiiren myeloomasolulinjat ovat tunnettuja ja saatavissa yleensä akateemisista tutkimuslaitoksista tai erilaisista talletuspankeista, esimerkkinä mainittakoon the Salk Institute Distribution Center, La Jolla, Ca. Käytetyn solulinjan pitäisi edullisesti kuulua ns. lääkeaineille vastustuskykyiseen lajiin, jotta vapaat myeloomasolut eivät eläisi selektiivisessä väliaineessa, jossa hybridisolut puolestaan elävät. Yleisimpään lajiin kuuluvat 8-atsaguaniinille vastustuskykyiset solulinjat, joista puuttuu hypoksantiiniguaniinifosforibosyylitransferaasientsyymi, ja täten tämä laji ei elä HAT-väliaineessa (sisältää hypoksantiinia, aminopteriiniä ja tymidiiniä). On myös yleensä edullista, että käytetty myeloomasolulinja kuuluisi ns. "ei-erittävään lajiin, jolloin se ei itse tuota mitään vasta-ainetta, mutta myös vasta-aineita tuottavia lajeja voidaan käyttää. Kuitenkin eräissä tapauksissa vasta-aineita tuottavat myeloomasolulinjat voivat olla edullisia. Edullinen solujen yhdistämiseen käytettävä katalysaattori on polyetyleeniglykoli, jonka keskimääräinen mo-lekyylipaino on 1000 - 4000 (kaupallisesti saatavissa nimik-
II
9 75183 keellä PEG 100 jne.) mutta myös muita sinänsä tunnettuja yh-distämiskatalysaattoreita voidaan käyttää.
D. Vapaiden pernasolujen, vapaiden myeloomasolujen ja yhdistettyjen solujen seos laimennetaan, ja laimennuksia viljellään erillisillä alustoilla selektiivisessä väliaineessa, jossa vapaat mye-loomasolut kuolevat noin yhdessä viikossa. Laimennus voi olla ns. rajattu laimennus, jossa laimennukseen käytetyn nesteen tilavuus on tilastollisesti laskettu niin, että pystytään eristämään haluttu määrä soluja kullekin erilliselle alustalle (esim. mikrotit-rauslevyn kuhunkin syvennykseen). Väliaineena käytetään esim. HAT-väliainetta, jossa lääkeaineille (esim. 8-atsaguaniinille) vastustuskykyinen vapaa myeloomasolulinja tuhoutuu. Koska vapaat pernasolut eivät ole pahanlaatuisia, niiden lisääntymis-kyky on rajattu. Täten tietyn ajan kuluttua (noin yhdessä viikossa) vapaiden pernasolujen lisääntyminen lakkaa. Yhdistetyt solut sen sijaan lisääntyvät jatkuvasti, koska ne ovat toisaalta peräisin myeloomasoluista, jotka on eristetty pahanlaatuisesta kasvaimesta, ja toisaalta pernasoluista, jotka pystyvät elämään selektiivisessä väliaineessa.
E. Tarkastetaan, löytyykö eri kasvatusalustojen pintanestees-tä, joka sisältää hybridoman, E-rosettipositiivisille puhdistetuille ihmisen T-soluille spesifistä vasta-ainetta.
Kun haluttu hybridoma on eristetty ja kloonattu, muodostuvaa vasta-ainetta voidaan tuottaa eri tavoin. Puhtainta monokloo-nista vasta-ainetta saadaan viljelemällä haluttua hybridomaa in vitro sopivassa väliaineessa sopivan pituisen ajan, minkä jälkeen haluttu vasta-aine eristetään pintanesteestä. Sopiva väliaine ja viljelyäjän pituus ovat tunnettuja tai ne voidaan helposti määrittää. Tämä in vitro-menetelmä tuottaa käytännöllisesti katsoen monospe-sifistä monoklonaalista vasta-ainetta, joka ei sisällä käytännöllisesti katsoen lainkaan muita ihmisen vastaisia spesifisiä immuno-globuliineja. Muita immunoglobuliineja on mukana pieni määrä, koska väliaine sisältää ksenogeenistä seerumia (esim. vasikan sikiöseeru-mia). Tällä in vitro-menetelmällä ei kuitenkaan saada tiettyihin tarkoituksiin riittävää vasta-ainemäärää tai riittävän suurta vasta-ainepitoisuutta, koska monokloonisen vasta-aineen pitoisuus on vain noin 50 pg/ml.
75183
Haluttaessa valmistaa paljon suurempia pitoisuuksia hieman epäpuhtaampaa monoklonaalista vasta-ainetta haluttu hydridoma voidaan ruiskuttaa hiiriin, edullisesti syngeenisiin tai semisyngee-nisiin hiiriin. Hybridoma aiheuttaa vasta-ainetta tuottavien kasvainten muodostumisen hiiriin sopivan inkubaatioajän kuluttua, mikä johtaa halutun vasta-aineen pitoisuuden kohoamiseen hiiren veressä (noin 5-20 mg/1) ja peritoneaalisessa tulehdusnesteessä (vesivatsa). Vaikka näiden hiirten veressä ja vesivatsassa on myös tavallisia vasta-aineita, näiden pitoisuus on vain noin 5 % mono-klonaalisen vasta-aineen pitoisuudesta. Koska sitä paitsi nämä nor-lit vasta-aineet eivät ole ihmisenvastaisia spesifisyydeltään, eristetyistä vesivatsoista ja seerumista saatu monoklonaalinen vasta-aine ei sisällä käytännöllisesti katsoen lainkaan kontaminoivia ihmisen vastaisia immunoglobuliineja. Tämän monokloonisen vasta-aineen tiitteri on korkea (aktiivinen laimennuksissa 1:100 000 ja myös suuremmissa laimennuksissa), ja sen spesifisen ja ei-spesifi-sen immunoglobuliinin suhde on korkea (noin 1/20) . Sellaiset muodostuneet immunoglobuliinit, joiden rakenteessa on kevyitä K-myeloomaketjuja, ovat ei-spesifisiä, ei-vaikuttavia peptidejä, jotka pelkästään laimentavat monokloonista vasta-ainetta vaikuttamatta haitallisesti sen spesifisyyteen.
Esimerkki 1
Monoklonaalisten vasta-aineiden valmistus A. Immunisointi ja somaattisten solujen hybridisointi
Naaraspuoliset CAF.-hiiret (Jackson Laboratories, hiirien ikä 1 7 6-8 viikkoa) immunoitiin mtraperitoneaalisesti 2 x 10 E-rosetti-positiivisella puhdistetulla T-solulla 0,2ml:ssa fosfaatilla puskuroitua suolaliuosta 14 päivän välein. Neljän päivän kuluttua kolmannesta immunisointikerrasta hiiristä poistettiin pernat, ja näistä valmistettiin yhtä solulaatua sisältävä suspensio puristamalla kudos ruostumattomasta teräksestä valmistetun seulan lävitse.
Solujen yhdistäminen suoritettiin Kohlerin ja Milsteinin ke-
O
liittämällä menetelmällä. 1 x 10 splenosyyttiä yhdistettiin 0,5 ml:ssa yhdistämisväliainetta, joka koostui 35 %:sta polyetyleeni-glykolia (PEG 1000) ja 2 %:sta dimetyylisulfoksidia RPMI-1640- 7 väliaineessa (Gibco, Grand Island, NY), 2 x 10 P3X63Ag8Ul-mye-
II
11 75183 loomasoluun, jotka toimitti tohtori M. Scharff, Albert Einstein College of Medicine, Bronx, NY. Nämä myeloomasolut erittävät IgG^rn K-kevyitä ketjuja.
B. Hybridoman eristys ja kasvatus
Kun solut oli yhdistetty, niitä viljeltiin HAT-väliai-neessa (sisälsi hypoksantiinia, aminopteriiniä ja tymidiiniä) 37°C:ssa 5 % hiilidioksidia sisältävässä kosteassa atmosfäärissä. Useita viikkoja myöhemmin 40-100 ui viljelmien hybridomapi- ' g toista pintaliuosta siirrettiin pelletille, joka sisälsi 10 perifeeristä lymfosyyttiä, jotka oli jaettu E-rosettipositiivi-siin (E+) ja E-rosettinegatiivisiin (E ) populaatoihin, nämä oli valmistettu terveiden luovuttajien verestä Mendesin kuvaamalla menetelmällä (J. Immunol. Ill (1973) 860). Näihin soluihin sitoutuneet hiiren hybridoman tuottamat vasta-aineet todettiin radioimmunomäärityksellä ja/tai epäsuoralla immunofluoresenssi-menetelmällä. Ensimmäisessä menetelmässä solujen annettiin ensin reagoida 100 ul:n kanssa affiniteettikromatografisesti puh- 125 distettua vuohessa valmistettua I anti-hiiri-IgG-immunoglo-buliinia (10^ cpm/|ig, 500 jig/pl) . /Jodin liittämisen immunoglo-buliiniin ovat yksityiskohtaisesti kuvanneet Kung et ai., J.
Biol. Chem. 251 (1976) 23997. Vaihtoehtoisesti viljelmien pinta-liuoksilla inkuboidut solut värjättiin fluoresiinilla käsitellyllä vuohessa valmistetulla anti-hiiri IgG:llä (G/M FITC) (Meloy Laboratories, Spingfield, VA, F/p =2,5) ja fluoresoivat vasta-aineella päällystetyt solut analysoitiin sen jälkeen solufluoro-graafilla FC200/4800A (Ortho Instuments, Westwood, MA) esimerkissä III kuvatulla tavalla. Hybridomaviljelmät, jotka sisälsivät spesifisesti E+-lymfosyyttien (T-solujen) kanssa reagoivia vasta-aineita, valikoitiin ja kloonattiin. Sen jälkeen kloonit , 7 siirrettiin intrapentoneaalisesti ruiskuttamalla 1 x 10 tietyn kloonin solua (0,2 ml:n tilavuudessa) CAF^-hiiriin, jotka oli esikäsitelty 2,6,10,14-tetrametyylipentadekaanilla, jota toimittaa Aldrich Chemical Company kauppanimellä "Pristine". Näiden hiirien pahanlaatuisia vesivatsoja käytettiin sen jälkeen lymfosyyttien karakterisoimiseen esimerkissä 2 esitetyllä tavalla. Hybridivasta-aineen OKT3 todettiin standardimenetelmillä kuuluvan IgG2~alaluokkaan ja sitovan komplementin.
12 751 83
Esimerkki 2 0KT3-vasta-aineen reaktiivisuuden karakterisointi A. Lymfosyyttipopulaatioiden eristäminen
Terveiden vapaaehtoisten verenluovuttajien (ikä 15-40 vuotta) verestä erotettiin perifeeriset yksitumaiset verisolut Ficoll-Hypaque-tiheysgradienttisentrifugointimenetel-mällä (Pharmacia Fine Chemicals, Piscataway, NH) Boyumin esittämällä tavalla, Scand. J. Clin. Lab. Invest. 21 (suppl 97) (1968) 77. Fraktioimattomat yksitumaiset solut erotet tiin pinta-Ig+ (B)- ja pinta-Ig (T- ja nolla-solu)-populaatioiksi käyttämällä Sephadex G-200 anti-F(ab1)2-pylväs-kromatografiaa menetelmällä, jonka ovat aikaisemmin kuvanneet Chess et ai., J. Immunol. 113 (1974) 1113. T-solut otettiin talteen E-rosetoimalla Ig -populaatio 5%:11a lampaan punasoluja (Microbiological Associates, Bethesda, MD). Rosetoitu seos sentrifugoitiin Ficoll-Hypaque-sentrifugissa ja talteenotettu E+-pelletti käsiteltiin 0,155-m NH.Clrllä O ** (10 ml 10 solua kohti). Näin saatu T-solupopulaatio oli <2-%:isesti EAC-rosettipositiivinen ja >95-%:isesti E-roset-tipositiivinen standardimenetelmillä määritettynä. Lisäksi rosetteja muodostamaton Ig“ (nollasolu)-populaatio erotettiin Ficoll-rajapinnalta. Tämä jälkimmäinen populaatio oli <5-%risesti E-positiivinen ja <2-%risesti slg-positiivinen. Pinta-Ig+ (B)-populaatio erotettiin Sephadex-G-200-pylväästä eluoimalla normaalilla ihmisen gammaglobuliinilla, kuten aikaisemmin on kuvattu. Tämä populaatio oli >95-%risesti pinta-Ig-positiivinen ja <5-%risesti E-positiivinen.
Normaalit ihmisen makrofagit erotettiin yksitumaisesta populaatiosta kiinnittämällä ne polystyreeniin. Tällöin yksitumaiset solut suspendoitiin uudelleen lopulliseen vil-jelyväliaineeseen (RPMI 1640, 2,5 mM HEPES [A-(2-hydroksi-etyyli)-l-piperatsiinipropaanisulfonihappoj^puskuria, 200 mM L-glutamiinia ja penisilliini-streptomysiiniä sekä 20 % kuumentamalla inaktivoitua ihmisen AB-seerumia) solujen määrän ollessa 2x10^ solua ja niitä inkuboitiin muovisissa pet-rimaljoissa (100 x 20 mm) (Falcon Tissue Culture Dish, Falcon, Exnard, CA) 37°C:ssa yön yli. Petrimaljat pestiin il 13 751 83 huolellisesti kiinnittymättömien solujen poistamiseksi ja muoviin kiinnittynyt populaatio irrotettiin pesemällä voimakkaasti kylmällä 2,5mM EDTArta sisältävällä liuoksella, jossa ei ollut seerumia ja silloin tällöin raapimalla petrimaljaa kertakäyttöisen injektioruiskun kumikärjellä.
Yli 85% solupopulaatiosta pystyi käyttämään ravinnokseen lateksihiukkasia ja Wright-Giemsa-värjäyksellä niillä havaittiin morfologisesti olevan monosyyttien tunnusmerkit.
B. Normaali kateenkorva
Normaali ihmisen kateenkorvarauhanen saatiin potilailta, joille oli tehty korjaavia sydänleikkauksia ja joiden ikä vaihteli kahdesta kuukaudesta 14 vuoteen. Kateenkorvarauhanen paloiteltiin ja palaset asetettiin heti 199 (Gibco)-väliaineeseen, jossa oli 5 % vasikan sikiöseerumia, ne hienonnettiin huolellisesti pihdeillä ja saksilla ja sen jälkeen muodostettiin yhtä solulajia sisältävä suspensio puristamalla seos terässeulan läpi. Seuraavaksi solut sentri-fugoitiin Ficoll-Hypaque-sentrifugissa ja pestiin kohdassa A kuvatulla tavalla. Näin saadut tymosyytit olivat > 95-%risesti elinkykyisiä ja > 90-%:isesti E-rosettipositiivisia.
C. Solulinjat
Neljästä terveestä yksilöstä saatuja Epstein-Barr-viruksella (EBV) transformoituja B-solulinjoja (Laz 007,
Laz 156, Laz 256 ja SB) valmistettiin aikaisemmin kuvatulla tavalla.Leukemiapotilaista saadut T-solulinjat CEM, HJD-1, Laz 191 jaHM1, toimitti tohtori H. Lazarus, Sidney Farber Cancer Institute, Boston, MA.
D. T-solujen akuutin lymfoblastileukemian (T-ALL) solut ja T-solujen kroonisen lymfaattisen leukemian (T-CLL) solut
Leukemiasolut saatiin 12:lta akuuttia lymfoblasti-leukemiaa sairastavalta potilaalta. Näiden yksilöiden solujen oli aikaisempien kokeiden perusteella todettu olevan T-soluja, koska ne muodostivat spontaanisti rosetteja lampaan punasolujen kanssa (>20% E+) ja koska ne reagoivat T-soluille spesifisten heteroantiseerumien, anti-HTL (anti-B.K.)-ja A99-antiseerumin kanssa, kuten Schlossman et ai. ovat aikaisemmin kuvanneet, Proc. Nat. Acad.
14 751 83
Sei. 73 (1976) 1288. Kolmen yksilön kasvainsolut reagoivat aktiivisesti (TH+2) kaniinin ja/tai hevosen anti-TH2:n kanssa, mutta yhdeksän muun yksilön solut eivät näiden kanssa reagoineet. Käytettiin myös kahdesta TH2~T-CLL-leukemiaa sairastavasta potilaasta saatuja leukemiasoluja. Sekä akuutin että kroonisen T-solujen leukemian soluja kylmäsäilytettiin -196°C:ssa nestemäisen typen höyryfaasissa 10-%:isessa dimetyylisulfoksidissa ja 20-%:isessa ihmisen AB-seerumissa, kunnes ne karakterisoitiin pinnaltaan. Analysoidut kasvainpopulaatiot olivat >90-%:isesti blasteja Wright-Giemsa-morfologialtaan kaikissa tapauksissa.
Esimerkki 3
Solufluorografinen analyysi
Kaikkien solupopulaatioiden solufluorografinen analyysi suoritettiin epäsuoralla immunofluoresenssimene-telmällä, jossa solut värjättiin fluoresiiniin liitetyllä vuohessa valmistetulla anti-hiiri-IgG:llä (G/M FITC)(Meloy Laboratories), analyysiin käytettiin solufluorografia FC200/4800A (Ortho Instruments). Tällöin 1-2 x 10^ solua käsiteltiin 0,15 ml:11a vasta-ainetta OKT3 laimennuksen ollessa 1:1 000, soluja inkuboitiin 4°C:ssa 30 minuutin ajan ja pestiin kahdesti. Solujen annettiin sen jälkeen reagoida 0,15 ml:n kanssa G/M FITC (laimennus 1:40) 4°C:ssa 30 minuutin ajan, reaktiotuote sentrifugoitiin ja pestiin kolme kertaa. Nämä solut analysoitiin sen jälkeen solufluorografilla, jossa kunkin solun aiheuttama fluoresenssi-intensiteetti rekisteröitiin pulssinkorkeus-analysaattorilla. Reaktiivisuus oli samanlainen laimennuksella 1:100 000, mutta suuremmilla laimennuksilla reaktiota ei tapahtunut. Taustavärjäyksen intensiteetti määritettiin 0,15 ml:11a suhteessa 1:1 000 laimennettua vesi-vatsanestettä, joka oli saatu intraperitoneaalisesti ei-tuottavalla hybridikloonilla immunisoidusta Balb/cJ-hiirestä.
Il is 75183
Kuviossa 1 on esitetty solufluorografista saatu fluoresenssispektri ihmisen normaaleille perifeerisille T-soluille, joiden on annettu reagoida 0KT3:n (laimennus 1:1 000) ja G/M FITC:n kanssa.
Vertailun vuoksi samoissa olosuhteissa monoklonaa-lisia vasta-aineita OKTl ja OKT4 käyttämällä saadut tulokset on esitetty kuvioissa 1-5.
Kuviossa 2 on esitetty solufluorografista saatu fluo-resenssispektri ihmisen tymosyyteille, joiden on annettu reagoida OKT3:n ja G/M FITC:n kanssa.
Kuviossa 3 on esitetty solufluorografista saatu fluo-resenssispektri B-solujen kroonista lymfoblastileukemiaa sairastavista potilaista saaduille leukemiasoluille, joiden on annettu reagoida OKT3:n ja G/M FITC:n kanssa.
Kuviossa 4 on esitetty solufluorografista saatu fluo-resenssispektri ihmisen T-solulinjalle HJD-1, jonka on annettu reagoida 0KT3:n ja G/M FITCrn kanssa.
Kuviossa 5 on esitetty solufluorografista saatu fluo-resenssispektri ihmisen T-solulinjalle CEM, jonka on annettu reagoida OKT3:n ja G/M FITCrn kanssa.
Kuvioissa 1-5 esitetyt tulokset sekä lisätietoja OKT3:lle (myös OKTl:lie ja OKT4:lle) on koottu taulukkoon I.
Hybridoma ja sen tuottama monoklonaalinen vasta-aine valmistettiin ja karakterisoitiin edellä esitettyjen esimerkkien mukaan. Vaikka suuri määrä kyseistä vasta-ainetta valmistettiin ruiskuttamalla kyseistä hybridomaa intraperito-neaalisesti hiiriin ja erottamalla eläimistä pahanlaatuiset vesivatsat, on selvästi mahdollista, että hybridomaa voidaan viljellä myös alalla hyvin tunnetuilla in vitro-menetelmillä, jolloin vasta-aine eristetään viljelmien pintanesteestä.
Kuten kuviosta 1 ilmenee, normaalin yksikön kaikki perifeeriset T-verisolut reagoivat OKT3:n kanssa, mutta samasta yksiköstä eristetyt B-solut, nollasolut ja makrofagit eivät reagoi lainkaan OKT3:n kanssa. Samanlaiset tulokset saatiin 15 muusta normaalista yksiköstä eristetylle lymfo-syyttipopulaatiolle. Monoklonaaliselle vasta-aineelle on siten tunnusomaista, että se reagoi käytännöllisesti kaikkien ihmisen normaalien perifeeristen T-solujen pinnalta löydetyn 16 7 51 8 3 antigeenin kanssa, mutta se ei reagoi kolmen muun mainitun solutyypin minkään pinta-antigeenin kanssa. Tätä reaktiivisuus-eroa voidaan käyttää kyseisen vasta-aineen 0KT3 toteamiseen ja erottamaan se muista vasta-aineista.
Kuviosta 2 ilmenee, että suurin osa kuuden kuukauden ikäisen lapsen normaaleista tymosyyteistä ei reagoi lainkaan 0KT3:n kanssa, jolloin vain 5-10 % tymosyyteistä on reaktiivisia. Tästä voidaan tehdä se johtopäätös, että siinä erilais-tumisprosessissa, jossa kantasolut kehittyvät kypsiksi T-so-luiksi, tymosyytit saavat jossakin vaiheessa saman pinta-antigeenin, joka on löydetty T-soluista ja joka reagoi OKT3:n kanssa. On todennäköistä, että näitä tymosyyttejä esiintyy myöhemmissä erilaistumisvaiheissa juuri ennen kuin ne irtoavat ka-teenkorvasta verenkiertoon. Samanlaisia tuloksia (5-10 % aktiivisuus) saatiin käytettäessä kuutta muuta kateenkorvanäytet-tä, jotka oli saatu normaaleista yksilöistä, joiden ikä vaihte-li kahdesta kuukaudesta 19 vuoteen. Kuvion 2 reaktiivisuuskaa-van avulla on myös mahdollista todeta kyseinen vasta-aine OKT3 ja erottaa se muista vasta-aineista.
Esillä olevaa vasta-ainetta OKT3 voidaan edelleen karakterisoida sen perusteella, miten se reagoi erilaisten ihmisen T-solulinjojen kanssa, tätä on havainnollistettu kuvioissa 4 ja 5. Kuvioista nähdään, että kyseinen antigeenin reaktiivisuus ihmisen T-solulinjojen kanssa vaihteli, solulinjan HJD-1 kanssa reaktio oli heikko ja solulinjojen CEM, Laz 191 ja HMl:n kanssa reaktioita ei tapahtunut lainkaan. Tämän erilaisen reaktiivisuuden avulla on myös mahdollista karakterisoida OKT3.
Taulukosta I ilmenee, että ihmisen B-solulinjat Laz 007, Laz 156, Laz 256 ja SB eivät reagoi OKT3:n kanssa. Tämä tukee edelleen sitä käsitystä, että OKT3 ei reagoi ihmisen perifeerisestä verestä otettujen normaalien B-solujen kanssa, minkä avulla on edelleen mahdollista karakterisoida 0KT3 ja erottaa se muista vasta-aineista.
0KT3:n spesifistä reaktioita ihon T-soluimukudoskasvai-mien antigeenin kanssa on havainnollistettu taulukossa II, josta myös ilmenee, miten OKT3 eroaa tässä suhteessa OKTl:stä ja
II
17 751 8 3 0KT4:stä. Esillä olevaa vasta-ainetta voidaan käyttää ihon T-soluimukudoskasvaimien hoidossa antamalla potilaalle terapeuttisesti vaikuttava määrä 0KT3-vasta-ainetta.
Kyseisen vasta-aineen 0KT3 havaittiin kuuluvan IgG2~ alaluokkaan, joka on yksi hiiren IgG:n neljästä alaluokasta.
Nämä immunoglobuliini G:n alaluokat eroavat toisistaan ns. "kiinteiltä" alueiltaan, vaikkakin tietylle antigeenille spesifisen vasta-aineen rakenteessa on ns. "vaihtuva" alue, joka on toiminnallisesti samanlainen riippumatta siitä, mihin immunoglobuliini G:n alaluokkaan se kuuluu. Toisin sanoen monoklonaali-nen vasta-aine, jolla on edellä kuvatut tunnusmerkit, voi kuulua alaluokkiin IgG, IgG2a, IgG2b tai IgG^ tai luokkiin IgM tai IgA tai muihin Ig-luokkiin. Näiden luokkien tai alaluokkien erot eivät vaikuta vasta-aineen reaktiivisuuden selektiivisyy-teen, mutta ne voivat vaikuttaa siihen, miten vasta-aine reagoi myöhemmin muiden aineiden, esimerkiksi komplementin tai anti-hiiri-vasta-aineiden kanssa.
Kuten edellä on mainittu, esillä olevaa vasta-ainetta voidaan käyttää sellaisten potilaiden hoitamiseen, jotka sairastavat tiettyjä T-solujen kroonisen lymfoblastileukemian muotoja, antamalla potilaille terapeuttisesti vaikuttava määrä 0KT3-vas-ta-ainetta. Annettaessa terapeuttisesti vaikuttava määrä 0KT3-vasta-ainetta potilaille, joille suoritetaan elinten siirtoja, hylkimistaipumus vähenee tai häviää kokonaan. Vasta-ainetta 0KT3 voidaan sisällyttää terapeuttisiin koostumuksiin, jotka sisältävät terapeuttisesti vaikuttavan määrän 0KT3-vasta-ainet-ta terapeuttisesti hyväksyttävään kantaja-aineeseen sekoitettuna.
18 751 83
Taulukko I
Monoklonaalisten vasta-aineiden reaktiivisuus ja ominaisuudet
Monoklonaaliset vasta-aineet 5 Reaktiivisuus prosentteina 0KT1 0KT3 OKT4 seuraavien solutyyppien kanssa:
Perifeeriset T-solut (10 näytettä) >95% >95% 55%
Perifeeriset B-solut (10 näytettä) <2% <2% <2%
Perifeeriset nollasolut (10 näytettä) <2% <2% <2% 10 Tymosyytit x (8 näytettä) 5-10% 5-10% 30%
Reaktiivisuus seuraavien solujen ja solulinjojen kanssa T-solujen klooninen lymfaattinen leukenia (3 tapausta) + +(1)/-(2) T-solujen akuutti lymfaattinen leukemia ' 5 (8 tapausta) - "
Nollasolujen akuutti lymfaattinen leukemia (15 tapausta) - “ A-solujen krooninen lymfaattinen leukemia (6 tapausta) +(4):-(2) B-solulinjat + (4) - 20 + T-solulinjat HJD.l + Φ CEM + +
Laz 191 + HMl + ^ IgG-alaluokka I9G1 I(3G2 IgG2
Komplementin sitaniskyky ~ + + x Saatu potilailta, joiden ikä vaihteli 2 kuukaudesta 18 vuoteen.
+ Saatu tohtori H. Lazarukselta, Sidney, Farber Cancer Center. B-solulinjat Laz 256, 156, 007 ja SB saatu transformoimalla Epstein-Barr-viruksella, ihmisen perifeerisiä B-soluja ja T-solulinjat HJT>-1, CEM, Laz 191 ja HMl saatu leukemiaa sairastavista potilaista.
19 751 83 3 tn 'τ ME-· I + I +
G X 3 O
C ^ :<0 1) -n +> G <1) tn tn <u +> 3·ηό « -t-* 3 Ή -H EH >1 tn 3 0) + + + + ϊ*ι •h 3 G O «
> C -H O
•HÖH +1
•H rl | E
+> x m >» X o -n >-i
ro C U3 <H
(D O 3 E-< G
OSE>« +1 + + <U
O S-l 0) > tn :<Ö
O I -H
Ό ·Η W >1 3 -P ··. ·*. -H g
M en -H -H M -G
3 ro tn tn Q) >1 h e -h o o m ϋ H -H jQ O O <w 3 3 .* X -H «w
O Ή C >1 >1 WC
Λ:ο·^α>εε os M tn tn c -h -h di <—( 3 I G O ·Η Ό T3 f—I E-T -H O P Ή *H Ή
3 röG 3 tn O >i O >i >i II II
3 G > Cn 3 ·<Η E en E E
E-< O tn 3 N -H G .2 G _C £ iG
.G 3 -H φ P 3 >i 3 >i >i CQ>i
H ϋ Ω Ui x tn X tn X ^ X a S
JG
X
·· :3
U
Φ h a E =>
•H X
G Φ >i O Ή Ό (1) G 3
G -H r-H O
3 U X Λ G
3 m O Ή (U
i—i υ 3 ·π •h s · ε +» g
-P O O G rH
O · · Ό O O
λ ω u o S w
Claims (2)
1. Menetelmä monoklonaalisen vasta-aineen valmistamiseksi, joka a) reagoi käytännöllisesti katsoen kaikkien ihmisen normaalien perifeeristen T-solujen ja ihon T-imukudoskasvainsolujen kanssa, mutta ei reagoi ihmisen normaalien perifeeristen B-solu-jen, nollasolujen eikä makrofagien kanssa, b) reagoi noin 5-10 %:n kanssa ihmisen normaaleja tymo-syyttejä, c) reagoi T-solujen kroonista lymfoblastileukemiaa sairastavista potilaista saatujen leukemiasolujen kanssa, mutta ei reagoi leukemiasolujen kanssa, jotka on saatu T-solujen akuuttia lymfoblastileukemiaa, nollasolujen akuuttia lymfoblastileukemiaa tai B-solujen kroonista lymfaattista leukemiaa sairastavista potilaista , d) reagoi heikosti ihmisen T-solulinjan HJD-1 kanssa, mutta ei reagoi solulinjojen CEM, Laz 191 eikä HM1 kanssa, e) ei reagoi Epstein-Barr-viruksella transformoitujen ihmisen B-solulinjojen Laz 007, Laz 156, Laz 256 eikä SB kanssa,ja f) sitoo komplementin, tunnettu siitä, että menetelmään kuuluu seuraavat vaiheet: Δ) valmistetaan hybridooma ÄTCC CRL 8001 i) immunoimalla hiiriä puhdistetuilla E-rosettipositiivi-silla ihmisen T-soluilla, ii) poistamalla pernat immunisoiduista hiiristä ja valmistamalla pernasolususpensio, iii) yhdistämällä mainitut pernasolut hiiren myeloomaso-luihin yhdistämiskatalysaattorin läsnäollessa, iv) laimentamalla ja viljelemällä yhdistettyjä soluja erillisissä syvennyksissä väliaineessa, jossa vapaat myeloomasolut eivät kasva, v) arvioimalla kunkin syvennyksen hybridoomapitoinen pin-taneste sen suhteen, sisältääkö se E-rosettipositiivisille puhdistetuille T-soluille spesifistä vasta-ainetta, II 21 75183 vi) valikoimalla ja kloonaamalla hybridooma ATCC CRL 8001, joka tuottaa vasta-ainetta, joka sitoo komplementin ja reagoi käytännöllisesti katsoen kaikkien ihmisen normaalien perifeeristen T-solujen, mutta ei ihmisen normaalien perifeeristen B-solujen, nollasolujen eikä makrofagien kanssa, ja B) valmistetaan mononoklonaalinen vasta-aine vii) viljelemällä hybridoomaa ATCC CRL 8001 sopivassa väliaineessa , viii) ottamalla vasta-aine talteen hybridooman pintanes- teestä.
2. Menetelmä monoklonaalisen vasta-aineen valmistamiseksi, joka a) reagoi käytännöllisesti katsoen kaikkien ihmisen normaalien perifeeristen T-solujen ja ihon T-imukudoskasvainsolujen kanssa, mutta ei reagoi ihmisen normaalien perifeeristen B-solujen, nollasolujen eikä makrofagien kanssa, b) reagoi noin 5-10 %:n kanssa ihmisen normaaleja tymo-syyttejä, c) reagoi T-solujen kroonista lymfoblastileukemiaa sairastavista potilaista saatujen leukemiasolujen kanssa, mutta ei reagoi leukemiasolujen kanssa, jotka on saatu T-solujen akuuttia lymfoblastileukemiaa, nollasolujen akuuttia lymfoblastileukemiaa tai B-solujen kroonista lymfaattista leukemiaa sairastavista potilaista, d) reagoi heikosti ihmisen T-solulinjan HJD-1 kanssa, mutta ei reagoi solulinjojen CEM, Laz 191 eikä HM1 kanssa, e) ei reagoi Epstein-Barr-viruksella transformoitujen ihmisen B-solulinjojen Laz 007, Laz 156, Laz 256 eikä SB kanssa, ja f) sitoo komplementin, tunnettu siitä, että menetelmään kuuluu seuraavat vaiheet: A) valmistetaan hybridooma ATCC CRL 8001 i) immunoimalla hiiriä puhdistetuilla E-rosettipositii-visilla ihmisen T-soluilla, ii) poistamalla pernat immunisoiduista hiiristä ja valmistamalla pernasolusupensio, iii) yhdistämällä mainitut pernasolut hiiren myelooma- 22 751 8 3 soluihin yhdistämiskatalysaattorin läsnäollessa, iv) laimentamalla ja viljelemällä yhdistettyjä soluja erillisissä syvennyksissä väliaineessa, jossa vapaat myelooma-solut eivät kasva, v) arvioimalla kunkin syvennyksen hybridoomapitoinen pin-taneste sen suhteen, sisältääkö se E-rosettipositiivisille puhdistetuille T-soluille spesifistä vasta-ainetta, vi) valikoimalla ja kloonaamalla hybridooma ATCC CRL 0001 joka tuottaa vasta-ainetta, joka sitoo komplementin ja reagoi käytännöllisesti katsoen kaikkien ihmisen normaalien perifeeristen T-solujen, mutta ei ihmisen normaalien perifeeristen B-solujen, nollasolujen eikä makrofagien kanssa, B) valmistetaan monoklonaalinen vasta-aine vii) siirtämällä hybridooma ATCC CRL 8001 intraperitoneaa-lisesti hiiriin, ja viii) ottamalla vasta-aine talteen hiirien pahanlaatuisesta vesivatsasta tai seerumista. Il 23 751 83
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| FI844704A FI75058C (fi) | 1979-04-26 | 1984-11-29 | Diagnostiskt foerfarande foer bestaemning av proportionen av t-celler i cirkulerande lymfocyter samt foer paovisande av kutan-t-cellymfoma under anvaendning av en ny komplement-bindande monoklonal antikropp. |
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US3366979 | 1979-04-26 | ||
| US06/033,669 US4361549A (en) | 1979-04-26 | 1979-04-26 | Complement-fixing monoclonal antibody to human T cells, and methods of preparing same |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| FI801342A7 FI801342A7 (fi) | 1980-10-27 |
| FI75183B FI75183B (fi) | 1988-01-29 |
| FI75183C true FI75183C (fi) | 1988-05-09 |
Family
ID=21871750
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| FI801342A FI75183C (fi) | 1979-04-26 | 1980-04-25 | Foerfarande foer framstaellning av en komplement-bindande monoklonal antikropp mot maenniskans t-celler genom anvaendning av en ny hybridcellinje. |
Country Status (22)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4361549A (fi) |
| EP (1) | EP0018795B2 (fi) |
| JP (2) | JPS55145617A (fi) |
| AT (1) | ATE14023T1 (fi) |
| AU (1) | AU544791B2 (fi) |
| CA (1) | CA1182406A (fi) |
| DE (2) | DE18795T1 (fi) |
| DK (1) | DK154769C (fi) |
| ES (1) | ES8105152A1 (fi) |
| FI (1) | FI75183C (fi) |
| HK (1) | HK23886A (fi) |
| IE (1) | IE50422B1 (fi) |
| IL (1) | IL59917A (fi) |
| MY (1) | MY8600514A (fi) |
| NL (1) | NL930131I2 (fi) |
| NO (1) | NO159221C (fi) |
| NZ (1) | NZ193469A (fi) |
| PH (1) | PH16642A (fi) |
| PT (1) | PT71147B (fi) |
| SG (1) | SG6686G (fi) |
| YU (1) | YU48442B (fi) |
| ZA (1) | ZA802525B (fi) |
Families Citing this family (121)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4582797A (en) * | 1980-09-25 | 1986-04-15 | The Salk Institute For Biological Studies | Monoclonal antibodies specific for human hematopoietic cell surface glycoproteins |
| DE3105150A1 (de) * | 1981-02-12 | 1982-08-19 | Dr. Eduard Fresenius, Chemisch-pharmazeutische Industrie KG, 6380 Bad Homburg | Herstellung von anti-t-lymphozyten-globulin. |
| US4474893A (en) * | 1981-07-01 | 1984-10-02 | The University of Texas System Cancer Center | Recombinant monoclonal antibodies |
| US4471056A (en) * | 1982-04-02 | 1984-09-11 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Method for HLA-DR typing of total human lymphocyte sample |
| US4657852A (en) * | 1982-04-02 | 1987-04-14 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Method for B cell typing of total human lymphocyte sample |
| US4511662A (en) * | 1982-06-18 | 1985-04-16 | Bio-Rad Laboratories, Inc. | Simultaneous assay for T and B lymphocyte populations and subpopulations |
| US4443427A (en) * | 1982-06-21 | 1984-04-17 | Sidney Farber Cancer Institute, Inc. | Monoclonal antibody |
| US4500637A (en) * | 1982-07-19 | 1985-02-19 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Prevention of graft versus host disease following bone marrow transplantation |
| US4714613A (en) * | 1982-09-30 | 1987-12-22 | The Albert Einstein College Of Medicine Of Yeshiva University | Method of suppressing cell growth by immunotherapy |
| US4550086A (en) * | 1983-02-16 | 1985-10-29 | Dana-Farber Cancer Institute, Inc. | Monoclonal antibodies that recognize human T cells |
| US4579827A (en) * | 1983-03-11 | 1986-04-01 | Sloan-Kettering Institute For Cancer Research | Monoclonal antibodies to human gastrointestinal cancers and hybridoma method of production of the monoclonal antibodies |
| US4797475A (en) * | 1983-05-20 | 1989-01-10 | The Regents Of The University Of California | Method and composition for isolating white cell elements |
| US4645738A (en) * | 1983-09-30 | 1987-02-24 | Memorial Sloan-Kettering Institute Cancer Center | Method for differential diagnosis of T cell leukemias using monoclonal antibodies |
| US4468346A (en) * | 1983-10-27 | 1984-08-28 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of Agriculture | Monoclonal antibodies to porcine immunoglobulins |
| JPS60231699A (ja) * | 1983-11-09 | 1985-11-18 | Aichiken | 正常及び悪性ヒト造血器細胞に対するモノクローナル抗体 |
| US4672044A (en) * | 1984-08-24 | 1987-06-09 | Scripps Clinic & Research Foundation | Murine monoclonal antibody combining site to human C3b receptor (CR1) |
| US4661446A (en) * | 1985-02-19 | 1987-04-28 | Dana-Farber Cancer Institute, Inc. | Monoclonal antibodies and method of immunizing therewith |
| US5431897A (en) * | 1985-04-19 | 1995-07-11 | Sloan-Kettering Institute For Cancer Research | Method of imaging colorectal carcinoma lesion and composition for use therein |
| US5091178A (en) * | 1986-02-21 | 1992-02-25 | Oncogen | Tumor therapy with biologically active anti-tumor antibodies |
| US4970299A (en) * | 1986-07-03 | 1990-11-13 | Sloan-Kettering Institute For Cancer Research | Monoclonal antibodies selective for prostate cancer |
| CA1306430C (en) * | 1987-10-16 | 1992-08-18 | Kenneth Francis Bradstock | Monoclonal antibody |
| US5601819A (en) * | 1988-08-11 | 1997-02-11 | The General Hospital Corporation | Bispecific antibodies for selective immune regulation and for selective immune cell binding |
| CA2003455C (en) * | 1988-11-23 | 2000-02-22 | Craig B. Thompson | Immunotherapy involving cd28 stimulation |
| JPH0291833U (fi) * | 1988-12-29 | 1990-07-20 | ||
| JPH0277212U (fi) * | 1989-01-25 | 1990-06-13 | ||
| JP2546544B2 (ja) * | 1989-10-27 | 1996-10-23 | アーチ ディベラップメント コーポレイション | 免疫強化を促進するための方法と組成物 |
| US6406696B1 (en) | 1989-10-27 | 2002-06-18 | Tolerance Therapeutics, Inc. | Methods of stimulating the immune system with anti-CD3 antibodies |
| JPH0420550U (fi) * | 1990-06-11 | 1992-02-20 | ||
| US5444155A (en) * | 1991-09-10 | 1995-08-22 | The Scripps Research Institute | Molecules with antibody combining sites that induce asymmetry |
| US5250426A (en) * | 1991-10-22 | 1993-10-05 | The Scripps Research Institute | Molecules with antibody combining sites that induce asymmetry |
| US20030108548A1 (en) * | 1993-06-01 | 2003-06-12 | Bluestone Jeffrey A. | Methods and materials for modulation of the immunosuppressive activity and toxicity of monoclonal antibodies |
| US6491916B1 (en) | 1994-06-01 | 2002-12-10 | Tolerance Therapeutics, Inc. | Methods and materials for modulation of the immunosuppresive activity and toxicity of monoclonal antibodies |
| FI960566L (fi) * | 1993-09-03 | 1996-03-01 | Chugai Pharmaceutical Co Ltd | Monoklonaalinen vasta-aine, joka tunnistaa välisolun pinta-antigeenin |
| GB9513733D0 (en) * | 1995-07-05 | 1995-09-06 | Univ Bristol | Therapeutic agents |
| JP2000503003A (ja) | 1995-12-22 | 2000-03-14 | イムノメディクス，インコーポレイテッド | 多段階カスケード増強ワクチンの効果を高めるための免疫接合体の使用 |
| EP0963377B1 (en) | 1996-08-30 | 2009-03-04 | Human Genome Sciences, Inc. | Interleukin-19 |
| WO1999026658A1 (en) | 1997-11-24 | 1999-06-03 | Wong Johnson T | Methods for treatment of hiv or other infections using a t cell or viral activator and anti-retroviral combination therapy |
| GB9815909D0 (en) | 1998-07-21 | 1998-09-16 | Btg Int Ltd | Antibody preparation |
| US7678836B2 (en) * | 1999-11-04 | 2010-03-16 | Fxs Ventures, Llc | Method for rendering a contact lens wettable |
| US7572631B2 (en) | 2000-02-24 | 2009-08-11 | Invitrogen Corporation | Activation and expansion of T cells |
| US7541184B2 (en) | 2000-02-24 | 2009-06-02 | Invitrogen Corporation | Activation and expansion of cells |
| US8557868B2 (en) * | 2000-11-04 | 2013-10-15 | Fxs Ventures, Llc | Ophthalmic and contact lens solutions using low molecular weight amines |
| US20070110782A1 (en) * | 2000-11-08 | 2007-05-17 | Fxs Ventures, Llc | L-histidine in ophthalmic solutions |
| US20070104744A1 (en) * | 2000-11-08 | 2007-05-10 | Fxs Ventures, Llc | Ophthalmic and contact lens solutions containing forms of vitamin b |
| US20060127496A1 (en) * | 2000-11-08 | 2006-06-15 | Bioconcept Laboratories | L-histidine in ophthalmic solutions |
| US9492582B2 (en) * | 2000-11-08 | 2016-11-15 | Fxs Ventures, Llc | Ophthalmic and contact lens solutions containing simple saccharides as preservative enhancers |
| CA2434961C (en) * | 2000-11-08 | 2010-05-25 | Bio-Concept Laboratories | L-histidine in ophthalmic solutions |
| US20060148665A1 (en) * | 2000-11-08 | 2006-07-06 | Bioconcept Laboratories | Ophthalmic and contact lens solutions containing forms of vitamin b |
| US9492581B2 (en) | 2000-11-08 | 2016-11-15 | Fxs Ventures, Llc | Ophthalmic and contact lens solutions containing simple saccharides as preservative enhancers |
| US9308264B2 (en) | 2000-11-08 | 2016-04-12 | Fxs Ventures, Llc | Ophthalmic contact lens solutions containing forms of vitamin B |
| RU2179862C1 (ru) * | 2000-12-26 | 2002-02-27 | Общество с ограниченной ответственностью Научно-производственный центр "МедБиоСпектр" | Лекарственное средство для предотвращения отторжения трансплантата, моноклональное антитело к cd3-антигену т-лимфоцитов человека, гибридома и способ лечения больных, имеющих реакцию острого отторжения трансплантата после пересадки почки |
| WO2004091438A2 (en) * | 2003-04-15 | 2004-10-28 | Fxs Ventures, Llc | Improved ophthalmic and contact lens solutions containing peptides as representative enhancers |
| JP4948174B2 (ja) * | 2003-10-16 | 2012-06-06 | マイクロメット アクツィエン ゲゼルシャフト | 多重特異的脱免疫ｃｄ３−結合物質 |
| WO2005048935A2 (en) * | 2003-11-14 | 2005-06-02 | Brigham And Women's Hospital, Inc. | Methods of modulating immunity |
| CA2614640A1 (en) * | 2005-07-11 | 2007-01-18 | Macrogenics, Inc. | Methods for the treatment of autoimmune disorders using immunosuppressive monoclonal antibodies with reduced toxicity |
| SG10201504662WA (en) * | 2006-06-14 | 2015-07-30 | Macrogenics Inc | Methods For The Treatment Of Autoimmune Disorders Using Immunosuppressive Monoclonal Antibodies With Reduced Toxicity |
| WO2008079713A2 (en) * | 2006-12-21 | 2008-07-03 | Macrogenics Inc. | Methods for the treatment of lada and other adult-onset autoimmune diabetes using immunosuppressive monoclonal antibodies with reduced toxicity |
| KR20210013294A (ko) | 2009-07-17 | 2021-02-03 | 바이오아트라, 엘엘씨 | 생산 숙주에서 항체/단백질 성능과 발현을 동시에 통합 선택하고 진화시키는 방법 |
| JP2013525420A (ja) | 2010-04-29 | 2013-06-20 | ナスバックス リミテッド | 抗ｃｄ３免疫分子療法により肝炎を治療する方法および組成物 |
| CN105924499B (zh) | 2010-07-16 | 2020-09-15 | 生物蛋白有限公司 | 蛋白演化的新方法 |
| EP2640750A1 (en) | 2010-11-16 | 2013-09-25 | Boehringer Ingelheim International GmbH | Agents and methods for treating diseases that correlate with bcma expression |
| MX344595B (es) | 2010-12-31 | 2016-12-20 | Bioatla Llc | Humanizacion rapida de anticuerpos. |
| CN103620405B (zh) | 2010-12-31 | 2016-05-25 | 生物蛋白有限公司 | 全面单克隆抗体产生 |
| WO2013124474A2 (en) | 2012-02-23 | 2013-08-29 | Stage Cell Therapeutics Gmbh | Chromatographic isolation of cells and other complex biological materials |
| CA2872908C (en) | 2012-05-10 | 2023-11-14 | Gerhard Frey | Multi-specific monoclonal antibodies |
| JOP20200236A1 (ar) | 2012-09-21 | 2017-06-16 | Regeneron Pharma | الأجسام المضادة لمضاد cd3 وجزيئات ربط الأنتيجين ثنائية التحديد التي تربط cd3 وcd20 واستخداماتها |
| AU2015204840B2 (en) | 2014-01-07 | 2020-01-30 | Bioatla, Llc | Proteins targeting orthologs |
| TWI701042B (zh) | 2014-03-19 | 2020-08-11 | 美商再生元醫藥公司 | 用於腫瘤治療之方法及抗體組成物 |
| EP3132247B1 (en) | 2014-04-16 | 2021-08-18 | Juno Therapeutics GmbH | Methods, kits and apparatus for expanding a population of cells |
| ES2995052T3 (en) | 2014-04-23 | 2025-02-05 | Juno Therapeutics Inc | Methods for isolating, culturing, and genetically engineering immune cell populations for adoptive therapy |
| AU2015292406B2 (en) | 2014-07-25 | 2021-03-11 | Cytomx Therapeutics, Inc | Anti-CD3 antibodies, activatable anti-CD3 antibodies, multispecific anti-CD3 antibodies, multispecific activatable anti-CD3 antibodies, and methods of using the same |
| WO2016059220A1 (en) | 2014-10-16 | 2016-04-21 | INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) | Tcr-activating agents for use in the treatment of t-all |
| AU2015350075B2 (en) | 2014-11-17 | 2021-06-03 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Methods for tumor treatment using CD3xCD20 bispecific antibody |
| MY191964A (en) | 2015-01-23 | 2022-07-21 | Sanofi Sa | Anti-cd3 antibodies, anti-cd123 antibodies and bispecific antibodies specifically binding to cd3 and/or cd123 |
| WO2016166568A1 (en) | 2015-04-16 | 2016-10-20 | Juno Therapeutics Gmbh | Methods, kits and apparatus for expanding a population of cells |
| IL258844B2 (en) | 2015-10-22 | 2024-03-01 | Juno Therapeutics Gmbh | Methods for culturing cells and kits and apparatus for same |
| EP3365678A1 (en) | 2015-10-22 | 2018-08-29 | Juno Therapeutics GmbH | Methods for culturing cells and kits and apparatus for same |
| EP3365453A2 (en) | 2015-10-22 | 2018-08-29 | Juno Therapeutics GmbH | Methods, kits, agents and apparatuses for transduction |
| EP3371311B1 (en) | 2015-11-06 | 2021-07-21 | Orionis Biosciences BV | Bi-functional chimeric proteins and uses thereof |
| DK3411398T3 (da) | 2016-02-05 | 2024-06-24 | Orionis Biosciences BV | Målrettede terapeutiske midler og anvendelse heraf |
| TWI790206B (zh) | 2016-07-18 | 2023-01-21 | 法商賽諾菲公司 | 特異性結合至ｃｄ３和ｃｄ１２３的雙特異性抗體樣結合蛋白 |
| US10906985B2 (en) | 2017-02-06 | 2021-02-02 | Orionis Biosciences, Inc. | Targeted engineered interferon and uses thereof |
| EP4647493A3 (en) | 2017-04-27 | 2026-01-14 | Juno Therapeutics, Inc. | Oligomeric particle reagents and methods of use thereof |
| CA3108657A1 (en) | 2018-08-09 | 2020-02-13 | Juno Therapeutics, Inc. | Processes for generating engineered cells and compositions thereof |
| US12522660B2 (en) | 2018-10-31 | 2026-01-13 | C3S2 Gmbh | Methods for selection and stimulation of cells and apparatus for same |
| CA3117720A1 (en) | 2018-11-06 | 2020-05-14 | Juno Therapeutics, Inc. | Process for producing genetically engineered t cells |
| US20220348660A1 (en) | 2019-10-02 | 2022-11-03 | INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) | Methods for the treatment of adult t-cell leukemia/lymphoma |
| IL292319B2 (en) | 2019-10-30 | 2026-01-01 | C3S2 Gmbh | Cell selection and/or stimulation devices and methods of use |
| MX2022009830A (es) | 2020-02-12 | 2022-10-28 | Juno Therapeutics Inc | Composiciones de celulas t que expresan receptores de antigenos quimericos dirigidos a bcma y metodos y usos de las mismas. |
| IL295384A (en) | 2020-02-12 | 2022-10-01 | Juno Therapeutics Inc | Cd19-directed chimeric antigen receptor t cell compositions and methods and uses thereof |
| CN115697403A (zh) | 2020-03-10 | 2023-02-03 | 迪赞纳生命科学公开有限公司 | Il-6/il-6r抗体的组合物及其使用方法 |
| JP2023526278A (ja) | 2020-05-13 | 2023-06-21 | ジュノー セラピューティクス インコーポレイテッド | 組み換え受容体を発現しているドナーバッチ細胞を産生するための方法 |
| JP2023529853A (ja) | 2020-06-17 | 2023-07-12 | ティジアーナ ライフ サイエンシズ パブリック リミティド カンパニー | キメラ抗原受容体（ｃａｒ）ｔ細胞療法を増強するための組成物および方法 |
| WO2022023566A2 (en) | 2020-07-30 | 2022-02-03 | Tiziana Life Sciences Plc | Cd-3 antibodies for the treatment of coronavirus |
| EP4323404A1 (en) | 2021-04-16 | 2024-02-21 | Tiziana Life Sciences PLC | Subcutaneous administration of antibodies for the treatment of disease |
| KR20240018454A (ko) | 2021-05-06 | 2024-02-13 | 주노 테라퓨틱스 게엠베하 | T 세포의 자극 및 형질도입 방법 |
| MX2023013851A (es) | 2021-05-24 | 2023-12-08 | Provention Bio Inc | Metodos para el tratamiento de diabetes tipo 1. |
| USD994323S1 (en) * | 2021-09-23 | 2023-08-08 | The Ridge Wallet Llc | Key organizer |
| US20240425591A1 (en) | 2021-10-14 | 2024-12-26 | Tiziana Life Sciences Plc | Methods of suppressing microglial activation |
| EP4463135A2 (en) | 2022-01-10 | 2024-11-20 | Sana Biotechnology, Inc. | Methods of ex vivo dosing and administration of lipid particles or viral vectors and related systems and uses |
| EP4469478A1 (en) | 2022-01-26 | 2024-12-04 | Mabswitch Inc. | Bispecific molecule with tunable affinity to a targetted antigen |
| WO2023147510A1 (en) | 2022-01-28 | 2023-08-03 | Juno Therapeutics, Inc. | Chromatography arrays and related methods and kits |
| WO2023150518A1 (en) | 2022-02-01 | 2023-08-10 | Sana Biotechnology, Inc. | Cd3-targeted lentiviral vectors and uses thereof |
| WO2023193015A1 (en) | 2022-04-01 | 2023-10-05 | Sana Biotechnology, Inc. | Cytokine receptor agonist and viral vector combination therapies |
| US20250297282A1 (en) | 2022-05-05 | 2025-09-25 | Juno Therapeutics Gmbh | Viral-binding protein and related reagents, articles, and methods of use |
| WO2023230581A1 (en) | 2022-05-25 | 2023-11-30 | Celgene Corporation | Methods of manufacturing t cell therapies |
| US20260055146A1 (en) | 2022-08-24 | 2026-02-26 | Sana Biotechnology, Inc. | Delivery of heterologous proteins |
| EP4615960A1 (en) | 2022-11-09 | 2025-09-17 | C3S2 GmbH | Methods for manufacturing engineered immune cells |
| WO2024119157A1 (en) | 2022-12-02 | 2024-06-06 | Sana Biotechnology, Inc. | Lipid particles with cofusogens and methods of producing and using the same |
| JP2026501122A (ja) | 2022-12-09 | 2026-01-14 | ジュノー セラピューティクス インコーポレイテッド | ホログラフィックイメージングを使用して細胞表現型を予測するための機械学習方法 |
| CN121002052A (zh) | 2023-02-03 | 2025-11-21 | C3S2 有限公司 | 用于非病毒生产工程化免疫细胞的方法 |
| CN121127253A (zh) | 2023-02-28 | 2025-12-12 | 朱诺治疗学股份有限公司 | 治疗系统性自身免疫性疾病的细胞疗法 |
| WO2024243340A1 (en) | 2023-05-23 | 2024-11-28 | Sana Biotechnology, Inc. | Tandem fusogens and related lipid particles |
| WO2025049250A1 (en) | 2023-08-25 | 2025-03-06 | Juno Therapeutics, Inc. | 6,6-core silacycle based inhibitors of dna-dependent protein kinase and compositions and application in gene editing |
| WO2025049254A1 (en) | 2023-08-25 | 2025-03-06 | Juno Therapeutics, Inc. | Pyrazolopyridine based inhibitors of dna-dependent protein kinase and compositions and application in gene editing |
| WO2025049253A1 (en) | 2023-08-25 | 2025-03-06 | Juno Therapeutics, Inc. | Bridged cycle‑based inhibitors of dna‑dependent protein kinase and compositions and application in gene editing |
| WO2025049247A1 (en) | 2023-08-25 | 2025-03-06 | Juno Therapeutics, Inc. | 5,6-core silacycle based inhibitors of dna-dependent protein kinase and compositions and application in gene editing |
| WO2025083196A1 (en) | 2023-10-18 | 2025-04-24 | Tq Therapeutics Gmbh | A method of manufacturing a cellular therapy product and respective kits and devices |
| WO2025160395A1 (en) | 2024-01-25 | 2025-07-31 | Juno Therapeutics, Inc. | Use of bridged cycle-based inhibitors of dna-dependent protein kinase in combination of dna polymerase theta inhibitor and compositions and application in gene editing |
| WO2025179188A1 (en) | 2024-02-22 | 2025-08-28 | Juno Therapeutics, Inc. | Pyrazole-based inhibitors of dna-dependent protein kinase and compositions and applications in gene editing |
| WO2025184529A1 (en) | 2024-03-01 | 2025-09-04 | Sana Biotechnology, Inc. | Viral particles with fusogen display and related compositions and methods |
Family Cites Families (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR956062A (fi) * | 1950-01-24 | |||
| GB824492A (en) * | 1955-10-07 | 1959-12-02 | Frederick William Beinlich | Process and apparatus for the generation of power |
| US3988895A (en) * | 1974-01-11 | 1976-11-02 | Itzhak Sheinbaum | Power generation from hot brines |
| US3986362A (en) * | 1975-06-13 | 1976-10-19 | Petru Baciu | Geothermal power plant with intermediate superheating and simultaneous generation of thermal and electrical energy |
| US4089175A (en) * | 1975-06-23 | 1978-05-16 | Occidental Petroleum Corporation | Process and system for recovery of energy from geothermal brines and other water containing sources by direct contact with a working fluid below the critical pressure |
| US4196265A (en) * | 1977-06-15 | 1980-04-01 | The Wistar Institute | Method of producing antibodies |
| US4172124A (en) * | 1978-04-28 | 1979-10-23 | The Wistar Institute | Method of producing tumor antibodies |
| BE875277A (fr) * | 1979-04-02 | 1979-10-02 | Jourdain Leon J | Machine motrice |
| US4284412A (en) * | 1979-07-13 | 1981-08-18 | Ortho Diagnostics, Inc. | Method and apparatus for automated identification and enumeration of specified blood cell subclasses |
-
1979
- 1979-04-26 US US06/033,669 patent/US4361549A/en not_active Expired - Lifetime
-
1980
- 1980-04-01 CA CA000348978A patent/CA1182406A/en not_active Expired
- 1980-04-17 NZ NZ193469A patent/NZ193469A/en unknown
- 1980-04-24 IL IL59917A patent/IL59917A/xx unknown
- 1980-04-24 AU AU57757/80A patent/AU544791B2/en not_active Expired
- 1980-04-24 PT PT71147A patent/PT71147B/pt active IP Right Revival
- 1980-04-24 JP JP5369180A patent/JPS55145617A/ja active Granted
- 1980-04-25 FI FI801342A patent/FI75183C/fi not_active IP Right Cessation
- 1980-04-25 DE DE198080301357T patent/DE18795T1/de active Pending
- 1980-04-25 DE DE8080301357T patent/DE3070803D1/de not_active Expired
- 1980-04-25 EP EP80301357A patent/EP0018795B2/en not_active Expired - Lifetime
- 1980-04-25 NO NO801214A patent/NO159221C/no unknown
- 1980-04-25 PH PH23955A patent/PH16642A/en unknown
- 1980-04-25 AT AT80301357T patent/ATE14023T1/de not_active IP Right Cessation
- 1980-04-25 ES ES490944A patent/ES8105152A1/es not_active Expired
- 1980-04-25 IE IE840/80A patent/IE50422B1/en not_active IP Right Cessation
- 1980-04-25 YU YU114680A patent/YU48442B/sh unknown
- 1980-04-25 DK DK180380A patent/DK154769C/da not_active IP Right Cessation
- 1980-04-25 ZA ZA00802525A patent/ZA802525B/xx unknown
-
1986
- 1986-01-21 SG SG66/86A patent/SG6686G/en unknown
- 1986-04-03 HK HK238/86A patent/HK23886A/en not_active IP Right Cessation
- 1986-12-30 MY MY514/86A patent/MY8600514A/xx unknown
-
1988
- 1988-04-26 JP JP63101498A patent/JPH0198478A/ja active Granted
-
1993
- 1993-07-02 NL NL930131C patent/NL930131I2/nl unknown
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| FI75183C (fi) | Foerfarande foer framstaellning av en komplement-bindande monoklonal antikropp mot maenniskans t-celler genom anvaendning av en ny hybridcellinje. | |
| FI75184C (fi) | Foerfarande foer framstaellning av en monoklonal antikropp mot maenskliga t-cellers antigener med en ny hybridcellinje. | |
| FI75363C (fi) | Foerfarande foer framstaellning av en monoklonal antikropp mot maenniskans hjaelpar-t-celler, medelst en ny hybridcellinje. | |
| FI75365C (fi) | Foerfarande foer framstaellning av monoklonal antikropp till maensklig protymocytantigen medelst deras hybridcellinje. | |
| FI75362B (fi) | Foerfarande foer framstaellning av en monoklonal antikropp mot maenniskans t-celler, medelst en ny hybridcellinje. | |
| US4515893A (en) | Hybrid cell line for producing complement-fixing monoclonal antibody to human T cells | |
| FI75366C (fi) | Foerfarande foer framstaellning av en komplement-fixerande monoklonal antikropp mot maenskliga supressor-t-celler medelst en hybridcellinje. | |
| US4658019A (en) | Complement-fixing monoclonal antibody to human T cells | |
| FI75600C (fi) | Foerfarande foer framstaellning av en monoklonal antikropp mot en maensklig monocytantigen medelst en ny hybridcellinje. | |
| FI75364B (fi) | Foerfarande foer framstaellning av en monoklonal antikropp foer maenskliga cytotoxiska och suppressor-t-celler medelst en ny hybridcellinje. | |
| FI75598B (fi) | Foerfarande foer framstaellning av en monoklonal antikropp mot en maensklig tymocytantigen medelst en ny hybridcellinje. | |
| EP0030814A2 (en) | Hybrid cell line for producing monoclonal antibody to a human early thymocyte antigen, antibody, method of preparation of this antibody, diagnostic and therapeutic uses and pharmaceutical compositions comprising this antibody | |
| US4654210A (en) | Methods and compositions using complement fixing monoclonal antibody to human T cells | |
| FI75058C (fi) | Diagnostiskt foerfarande foer bestaemning av proportionen av t-celler i cirkulerande lymfocyter samt foer paovisande av kutan-t-cellymfoma under anvaendning av en ny komplement-bindande monoklonal antikropp. | |
| SI8011146A8 (sl) | Postopek za pridobivanje monoklonalnega protitelesa okt3 | |
| HRP940824A2 (en) | Hybrid cell line for producing monoclonal antibody to a human prothymocyte antigen, antibody, and methods |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MA | Patent expired |
Owner name: ORTHO PHARMACEUTICAL CORPORATION |