CN103038256A - 用抗cd3免疫分子疗法治疗肝炎的方法及组合物 - Google Patents

Abstract

一种用于治疗受试者肝炎的包括抗CD3免疫分子的方法或组合物。

Description

用抗CD3免疫分子疗法治疗肝炎的方法及组合物

发明领域

本发明涉及用于治疗肝炎，并且具体是用于用抗CD3免疫分子（例如抗体）治疗肝炎的方法及组合物，该抗CD3免疫分子通过口服或粘膜给药。

发明背景

涉及通过抗原特异性T细胞受体（TCR）的抗体诱导的信号传导的免疫疗法策略已经显示出可以减轻自身免疫性疾病以及炎症性疾病，可能是通过调节对自身抗原的免疫应答反应。这种受体的一个实例是CD3（分化抗原簇3）。具体地，肠胃外给药的抗CD3单克隆抗体（mAb）疗法已被示出对NOD小鼠糖尿病发病的防止和扭转（Chatenoud（沙特努）等人,J.Immunol.（免疫学杂志）158:2947-2954(1997)；Belghith（贝尔吉特）等人,Nat.Med.（自然医学）9:1202-1208(2003)）以及对1型糖尿病患者的治疗（Herold（埃罗尔德）等人,N.Engl.J.Med.（新英格兰医学杂志）346(22):1692-1698(2002)）是有效的，并且用对第一型辅助性T细胞（Th1）的较优抑制效果来扭转Lewis大鼠中实验性变应性脑脊髓炎（EAE），该Th1参与细胞介导的免疫（Tran（特兰）等人,Intl.Immunol.（国际免疫学）13(9):1109-1120(2001)）。FDA批准通过静脉注射Orthoclone OKT3（莫罗单抗-CD3；OrthoBiotech公司产品，布里奇沃特（Bridgewater），新泽西州（NJ）），一种鼠抗CD3mAb来治疗移植后的移植排斥（Chatenoud（沙特努）,Nat.Rev.Immunol.（自然免疫学评论）3:123-132(2003)）。

如Howard（霍华德）Weiner（温纳）等人于美国专利号为7,883,703中所述（通过引用将其结合在此，正如在此充分阐明的），当口服或粘膜给药时，抗CD3抗体在治疗自身免疫疾病方面也是有用的。在不希望受一个单一的假设限制的情况下，这种口服或粘膜给药的成功归因于在粘膜免疫系统中激活了调节T细胞（Treg），这反过来导致不希望的免疫系统效应的改善或下调，从而减轻或者至少降低自身免疫性疾病和炎症性疾病的病理学。抗CD3mAb通过口服或粘膜给药途径优于全身给药途径的优点之一是能够避免严重的不良事件以及与全身给药相关的全身免疫抑制。这种给药途径还起到了增加了调节T细胞并且抑制了效应细胞的作用，因此减轻了炎症性疾病。

发明概述

本发明背景技术并未传授或提示用抗CD3口服或粘膜免疫分子疗法用于治疗肝炎的方法或组合物。

在本发明的至少一些实施方案中，通过提供抗CD3口服或粘膜免疫分子疗法进行肝炎治疗的方法和组合物，克服了背景技术的限制。如本文所用，该术语“治疗”肝炎同样涵盖防止肝炎的进展和/或延迟肝炎的发展。

“口服或粘膜免疫分子疗法”是指口服给予一种活性抗CD3免疫分子或将其给药至粘膜（或它们的一个组合）。这种抗CD3免疫分子可以任选的或优选的包括一种抗CD3抗体，例如（但不局限于）全抗体或其活性片段（例如F(ab')2或scFv等）。仅出于解释且不希望以任何方式被限制的目的，这里提及一种抗CD3抗体；应当理解的是，该提及可以指任何适于口服或粘膜给药的抗CD3免疫分子。

术语“肝炎”指任何肝脏的炎症。肝炎病因的非限制性实例包括传染因子（包括但不局限于病毒，例如甲、乙、丙、丁以及戊型肝炎；孢疹病毒，如单纯孢疹病毒（HSV）；巨细胞病毒；EB病毒；以及其他病毒，例如黄热病病毒、HIV（人免疫缺陷病毒）以及腺病毒；以及非病毒传染因子如弓形体、钩端螺旋体、Q热以及落基山斑疹热；或者导致肝炎的任何传染因子）；毒素类（包括任何毒性物质或任何过量摄入后对肝脏有毒性的物质，例如酒精或药物，例如由于任何药物相关肝损伤（DILI），包括醋氨酚或任何其他导致肝损伤的药物）；NSAH（非酒精性脂肪性肝炎），它由肥胖症或糖尿病或这两种病况的组合引起或加重；与炎症性肠病相关的肝病；高血脂症，无论是主要原因还是唯一原因，或者是与NSAH相关；以及作为于血管失调的结果；或其他病因的肝炎。

根据本发明中的至少一些实施方案，提供了通过口服或粘膜给药一种抗CD3免疫分子（例如一种抗CD3抗体）来治疗肝炎的一种方法，例如（但不局限于）经由肺部给药、口腔给药、鼻腔给药、鼻内给药、舌下给药、直肠给药或者阴道给药。该肝炎可以任选地由任何因素或多种因素的组合引起，如在此描述的那些。

任选地和优选地，该肝炎是由丙型肝炎病毒（HCV）或NASH引起的，使得在这些实施方案中，该方法的特征在于口服或粘膜给药一种抗CD3免疫分子来治疗由HCV或NASH引起的肝炎。

在至少一些实施方案中，本发明提供了适合口服或粘膜给药的用于治疗肝炎的药物组合物，包括一种抗CD3抗体（或任何其他抗CD3免疫分子）。在一些实施方案中，该药物组合物适合肺部给药、口腔给药、鼻腔给药、鼻内给药、舌下给药、直肠给药或者阴道给药。在一些实施方案中，该抗CD3抗体选择自下组，该组由以下各项组成：鼠mAb、人源化mAb、人mAb以及嵌合mAb。在一些实施方案中，该适合口服给药的组合物是按选自以下项的形式：液体口服剂型和固体口服剂型，例如，选自下组，该组由以下各项组成：片剂、胶囊、囊片、粉末、球剂、颗粒剂、袋装粉末、肠溶包衣片、肠溶包衣珠、封装粉末、封装球剂、封装颗粒剂以及肠溶软凝胶胶囊。在一些实施方案中，该口服剂型是一种控释口服配制品。

在一些实施方案中，该药物组合物进一步包括赋形剂和/或载体。在一些实施方案中，该药物组合物进一步包括额外的活性或非活性成分。

另外一方面，本发明提供了向受试者提供一种抗CD3抗体来治疗肝炎的一种方法。该用于肝炎治疗的方法可以包括给予受试者一种适合经由胃肠道递送一个剂量的抗CD3抗体的口服剂型，基于口服给药导致肝炎和炎症的改善。

在另外的方面，本发明提供了向受试者提供一种抗CD3抗体来治疗肝炎的一种方法。该方法包括给予受试者一种适合通过胃肠道递送一个剂量的抗CD3抗体的口服剂型，在不希望受一个单一假设限制的条件下，在口服给药时导致刺激Treg细胞的发育，结果是改善肝炎。

可替代地，这些用于治疗肝炎的方法可以包括给予受试者一种适合经由粘膜递送一种抗CD3抗体的粘膜剂型，在不希望受一个单一假设的限制下，在口服给药时刺激Treg细胞的发育，结果是改善肝炎。

，除了它对肝炎治疗的疗效，例如由一种病毒（例如HCV）引起的肝炎和/或NASH引起的肝炎和/或其他病因引起的肝炎，在本发明的至少一些实施方案中，提供了若干优点。在不希望被一个封闭的列表限定的情况下，这些优于已知治疗方法的优点包括以下内容。第一，口服或粘膜给药更容易实现，且与非肠道给药（例如静脉给药或通过注射给药）相比通常为大多数受试者所优选，这是由于不用与慢性治疗相关的针头和针棒，因此改进了受试者的顺应性。第二，口服或粘膜给药有利于抗体的长期用药。第三，口服或粘膜给药可以避免或减少负面副作用以及与非肠道给药相关的疼痛，包括注射部位疼痛。第四，口服或粘膜给药可以避免与抗体的非肠道给药相关的严重副作用，包括全身性免疫抑制以及细胞因子风暴。其他优点包括但不局限于降低成本，由于口服或粘膜给药不需要训练有素的人员，并且考虑到使用锋利针头的受试者以及医务人员这二者更不安全。在一些些情况下，但不希望由一个封闭列表来限制，与非肠道给药的抗CD3抗体相比，口服或粘膜给药的抗CD3抗体以更低剂量降低了炎症和/或自身免疫疾病。并且没有非肠道给药的副作用。

此外，口服或粘膜给药的抗体可以在疾病发展前、疾病的上升期以及疾病高峰期给药时仍然有效，同时非肠道给药的抗体一般被认为只有在疾病的开始后给药才有效。（Chatenoud（沙特努）等人,J.Immunol.（免疫学杂志）158:2947-2954(1997);Tran（特兰）等人,Int.Immunol.（国际免疫学）13:1109-1120(2001)）。

除非另外限定，在此所用的所有技术术语和科学术语均与本发明所属领域一个普通技术人员普遍理解的具有相同的含义。虽然类似或等同于在此所述的那些的方法和材料可用于本发明的实践或测试，但以下描述了适合的方法和材料。所有出版物、专利申请、专利以及其他在此提及的参考文献均通过引用其全文结合在此。在矛盾的情况下，本发明说明书，包括定义，将占据主导。此外，材料、方法和实例仅是示例性的而非旨在是限制性的。

本发明的其他特征以及优点通过以下详细描述以及权利要求将会变得清楚。

附图简要说明

本文仅为示例，而参考附图对本发明进行描述。现在具体详细参考附图，要强调的是，所示细节仅是为示例，并且为示例性讨论本发明优选的实施方案的目的，并且为了提供本发明的原理和概念方面用被认为最有用和最容易被理解的描述而展示。在这方面，没有试图以比本发明基本理解所必需的更具体地显示本发明的结构细节，随同附图的说明致使本发明的若干形式如何在实践中体现对于本领域那些技术人员来说是清楚的。

在附图中：

图1涉及平均血糖水平；

图2涉及葡糖耐量试验的AUC（曲线下面积）平均变化；

图3涉及AST（天冬氨酸转氨酶）水平；

图4涉及CD4⁺LAP⁺群的变化百分比；以及

图5涉及TGFβ水平的变化百分比。

详细说明

本发明在至少在一些实施方案中提供了经由抗CD3抗体的口服或粘膜给药治疗肝炎的方法，以及适合抗CD3抗体的口服或粘膜给药的组合物。

上文所述的肝炎是指任一种肝脏炎症。两个用于治疗肝炎病因NASH以及HCV的非限制性实施方案的更详细的描述提供于此。

NASH的特征在于肝内脂肪，伴随着炎症和损伤，而不是由于过量的酒精摄入。尽管如此，NASH仍可以是严重的且会导致肝硬化甚至肝纤维化。它是由肥胖或糖尿病引起的，并且在同时遭受着两种病况的患者身上加强。然而，NASH也可以发生在没有上述任何一种病况的患者身上。在不希望被一个单独的假设限定的情况下，NASH还可以是由胰岛素抗性、脂肪细胞的毒性炎症蛋白（细胞因子）的释放和/或肝细胞内部的氧化性应激（细胞的衰老）引起的。目前，尚无法有效治疗NASH。

丙型肝炎病毒（HCV）是肝炎病毒的一个类型（其他类型包括甲型、乙型、丁型以及戊型）。HCV是一种黄病毒科和肝炎病毒属的小型（直径为40-60纳米）包膜单链RNA病毒。由于病毒变异迅速，包膜蛋白的变化可以帮助其逃避免疫系统。HCV具有至少6种主要的基因型以及多于50种亚型。

HCV是美国慢性肝病的最重要的病因之一。它约占急性病毒性肝炎的15%、慢性肝炎的60%-70%，而占肝硬化、末期肝病以及肝癌的高达50%。疾病的这些后期的急性方面是由急性HCV感染后的慢性丙型肝炎引起的，这可引起肝硬化（导致纤维化）、肝功能衰竭以及肝癌。

如在此所述，可以通过一种抗CD3免疫分子疗法的口服或粘膜给药来治疗肝炎。该口服制剂的有用性要求该活性剂是可生物利用的。口服给药的药物的生物利用度受到很多因素的影响，如贯穿胃肠道的药物吸收、药物在胃肠道内的稳定性以及首过效应。因此，活性剂的有效口服递送要求该活性剂在经过胃以及肠道时具有足够的稳定性，以到达并穿过肠壁至固有层。然而，很多药物倾向于快速在肠道内降解或者在肠道内的吸收很差，因此口服给药对给予这种药物来说不是有效的方法。令人惊讶地，不仅抗CD3抗体可以口服给药，而且在一些方面，口服给药在积极的免疫调节活性上以及从实际的角度上优于肠胃外给药。

在免疫系统内，一系列在解剖学上不同的腔室可以被区分，每个都特异性的适应于对在一组具体的身体组织中存在的病原体的应答。一个腔室，即外周室，包括外周淋巴结和脾脏；该腔室对进入到组织或扩散到血液中的抗原进行应答。一个第二腔室，即粘膜免疫系统，位于粘膜表面附近，大多数病原体从此入侵。该粘膜免疫系统演变出一种抗原特异性免疫耐受机制来避免对食物抗原以及有益共生微生物（按与它们的寄主共生而存活）的有害的免疫反应，同时依旧检测并杀死那些通过肠道进入的病原微生物。一般来说，肠道相关淋巴组织（GALT）同其他地方的淋巴组织不同；GALT的刺激优先诱导调节性T细胞（Treg)。抗CD3免疫分子（例如抗CD3抗体）可被肠道相关淋巴组织快速吸收并诱导CD4+CD25-LAP+Tregs。来自肠道淋巴组织的细胞主要分泌TGF-β和IL-10，且刺激调节性细胞的机会和频率在肠道中更高。

在一个腔室中诱导的免疫反应大部分被限制在该具体的腔室中。淋巴细胞通过它们的归巢受体的表达被限制在具体的腔室，该归巢受体与被称为地址素的配体结合，该地址素在该腔室的组织内被特异性的表达。有趣的是，在粘膜腔室中诱导的耐受性同样适用于并且转移到外周室。例如，在摄食卵清蛋白（一种强肠外抗原）后存在一段延长的时间，在该时间内通过注射给予卵清蛋白，即便存在佐剂，也不会引发外周腔室亦或粘膜腔室的抗体反应。相比之下，口服耐受性是一种全身性的耐受性；虽然口服耐受性的诱导发生在肠道内，但也会导致外周的耐受性。

在不希望被一个单一的假设限制的情况下，口服给药的抗CD3免疫分子刺激粘膜免疫系统。如上所述，肠道是一个用于诱导耐受性的独特环境。与非肠道给药的抗体相比，诱导耐受性所需的口服给药的抗CD3抗体量更少，且在诱导耐受性的同时不刺激全身免疫抑制以及其他严重的副作用；此外，口服的抗体在疾病发展前、疾病的上升期这二者以及疾病高峰期给药时仍然有效，而非肠道给药的抗体只有在疾病的开始后给药才有效。

药物组合物

适合口服给药的药物组合物典型地是固体剂型（例如片剂）或液体制剂（例如溶液、悬浮液、乳液或酏剂）。

固体剂型是希望的，因为易于确定并给予限定剂量的活性成分，并且易于给药，特别是对于在家的受试者的给药。

液体剂型还允许受试者可以轻松地服用所需剂量的活性成分；液体制剂可被制备为饮料，或者通过例如一个鼻胃管给予。

液体口服药物组合物通常需要一个合适的溶剂或载体系统以在其中溶解或分散该活性剂，从而使该组合物能够给予受试者。一个合适的溶剂系统与该活性剂是相容的且对受试者无毒。典型地，液体口服配制品使用一种水基溶剂。

该口服组合物也可以被任选地配制以降低或避免活性剂被胃肠系统（例如通过胃中的胃液）降解、分解或灭活。例如，该组合物可以任选地被配制为在通过胃时不改变并且在肠内溶解，即作为肠溶包衣的组合物。

本技术领域的一个普通技术人员应很容易理解，在此所述的药物组合物可以通过应用已知的（如通过口服产品的长期应用历史确立的）药物制造工序来制备。这种配制品可以用药物领域中熟知的方法给予受试者。因此，除非另外指明，在本发明方法的实践中将采用药物科学中的传统技术，包括药物剂型设计、药物开发、药理学连同有机化学，包括聚合物化学。因此，这些技术在本领域的普通技术人员的能力范围内，并在文献中充分解释（一般的，例如参见《雷明顿：药学科学与实践》（Remington:TheScience and Practice of Pharmacy），第19版，Alfonso（阿方索）R.Gennaro（詹纳罗）编辑，麦克出版公司（Mack Publishing Co）出版，伊斯顿（Easton），宾夕法尼亚州（Pa.），（1995），下文中的雷明顿通过引用其全文结合在此。）

抗CD3免疫分子

一种抗CD3免疫分子例如可以任选地包括任何抗CD3抗体。该抗CD3抗体可以是任一种对CD3特异性的抗体。在此使用的术语“抗体”是指免疫球蛋白分子或其通过蛋白化学以及重组DNA工程中的已知技术很容易衍生的免疫学活性部分，即一个抗原结合部分。免疫球蛋白分子的免疫学活性部分的非限制性实例包括F(ab)和F(ab′)₂片段，他们保留着结合CD3的能力。这些片段可以通过购买或用现有技术中已知的方法获得。例如F(ab)₂片段可以通过用酶（例如胃蛋白酶（一种非特异性肽链内切酶，正常会产生一个F(ab)₂片段和数个Fc部分的小肽）处理抗体而产生。生成的F(ab)₂片段是由两个通过二硫键连接的Fab单元组成的。该Fc片段被广泛降解，并且可以通过透析、凝胶过滤或离子交换色谱与F(ab)₂分离。F(ab)片段可以使用木瓜蛋白酶（一种消化IgG分子的非特异性巯基肽链内切酶），在还原剂的存在下将IgG分子消化为大小相似3个的片段：两个Fab片段以及一个Fc片段而产生。当Fc片段是感兴趣的片段时，木瓜蛋白酶是选择的酶，因为它产生一个50,000道尔顿的Fc片段；为了分离F(ab)片段，可以除去Fc片段，例如通过使用蛋白A/G的亲和纯化。很多用于产生F(ab)片段的试剂盒是可商购的，包括ImmunoPure IgG1的Fab和F(ab')2制备试剂盒（皮尔斯生物技术（Pierce Biotechnology），罗克福德（Rockford），伊利诺伊州（IL））。此外，可以使用可商购的用于产生抗原结合片段的服务，如Bio Express公司,西黎巴嫩（West Lebanon），新罕布什尔州（NH）。

该抗体可以任选地为多克隆抗体、单克隆抗体、重组抗体，例如一种嵌合抗体、去免疫抗体或人源化抗体、完全人源抗体、非人源抗体，如鼠抗、或单链抗体。

在一些实施方案中，该抗体具有效应器功能且可以固定补体。在一些实施方案中，该抗体结合Fc受体的能力降低或没有该能力。例如，抗CD3抗体可以是同种型或亚型、片段或其他的突变体，它不支持结合Fc受体，例如，它具有一诱变的或删除的Fc受体结合区域。该抗体可被耦合到一个毒素上或显像剂上。

许多抗CD3抗体是已知的，包括（但不局限于）OKT3(鼠单克隆抗体/Orthoclone OKT3TM，Ortho Biotech公司，力登（Raritan），新泽西州（NJ）；美国专利号4,361，549）；hOKT3Y1（Herold（埃罗尔德）等人,N.E.J.M.（新英格兰医学杂志）346(22):1692-1698(2002)）；HuM291（NuvionTM，蛋白设计实验室（Protein Design Labs），Fremont（弗里蒙特），CA（加利福尼亚州）)；gOKT3-5（Alegre（阿列格雷）等人,J.Immunol.（免疫学杂志）148(11):3461-8(1992)）；1F4（Tanaka（田中）等人,J.Immunol.（免疫学杂志）142:2791-2795(1989)）；G4.18（Nicolls（尼科尔斯）等人,Transplantation（移植）55:459-468(1993)）；145-2C11(Davignon（达维农）等人,J.Immunol.（免疫学杂志）141(6):1848-54(1988)）；以及如Frenken等人，Transplantation（移植）51(4):881-7(1991)）上以及美国专利号6,491,9116、6,406,696和6,143,297中所述。然而，任何合适的抗CD3抗体都可以与本发明的方法及组合物一起使用。

制造这些抗体的方法也是已知的。一种全长CD3蛋白或者CD3的抗原性肽段可以用作免疫原，或者可被用来识别由其他免疫原制得的抗CD3抗体，例如细胞、膜制品、以及类似物，例描述于美国专利专利号4,361,549和4,654,210中的E花环阳性纯化的正常的人外周血T细胞。为保持功能性，抗CD3抗体可以结合任何结构域上的一个表位或CD3上的区域。

嵌合抗体包含两种不同抗体的部分，典型的是两种不同的物种。一般来讲，这些抗体包含人恒定区以及来自其他物种的可变区，如鼠可变区。例如，已经报道小鼠/人嵌合抗体显示出亲本小鼠抗体的结合特性，以及与人恒定区相关的效应器功能。如见Cabilly（加比利）等人的美国专利号4,816,567；Shoemaker（舒梅克）等人的美国专利号4,978,745；Beavers（比弗斯）等人的美国专利号4,975,369；以及Boss（波斯）等的美国专利号4,816,397，它们均通过引用结合于此。一般来说，这些嵌合抗体可以通过制备一个基因组基因文库构建，该基因组基因文库来自从现存的鼠杂交瘤中提取的DNA（Nishimura（西村）等人Cancer Research（癌症研究）,47:999(1987)）。然后利用该文库从呈现正确抗体片段重组模式的重链和轻链这中筛选可变区基因。可替代地，可以利用从杂交瘤提取的RNA制备并筛选cDNA文库，或者通过聚合酶链式反应获得可变区。然后这些克隆的可变区基因被连接到含有适当的重链或轻链人恒定区基因的克隆盒的表达载体上。然后这些嵌合基因可在一个选择的细胞系中表达，例如一个鼠骨髓瘤细胞系。这类嵌合抗体已经被用于人体治疗。

人源化的抗体在本领域中是已知的。典型地，“人源化”将导致一种更小免疫原性的抗体，该抗体完全保留了原始分子的抗原结合特性。为了保持原始抗体的所有抗原结合特性，其结合位点的结构需要如实地在“人源化”的版本中再造。这潜在地可通过将该非人源抗体的结合位点移植到一个人的框架上实现，不管是通过(a)将整个非人源可变域嫁接到人恒定区以产生一个嵌合抗体（Morrison（莫里森）等人,Proc.Natl.Acad.Sci.（美国科学院院刊）,USA 81:6801(1984)；Morrison（莫里森）和Oi（大井）,Adv.Immunol.（免疫学进展）44:65(1988)）（该方法保留了配体结合特性，但同时也保留了非人源可变域的免疫原性）；(b)仅将非人源CDR嫁接到人的框架上以及恒定区，保留或不保留关键的框架残留（Jones（琼斯）等人Nature（自然）,321:522(1986);Verhoeyen（沃尔霍因）等人,Science（科学）239:1539(1988)）；或者(c)通过移植整个非人源可变域（为了保留配体结合特性）但同时通过明智的替换暴露残基，用类似人的表面使其“隐身”（以便降低抗原性）（Padlan（帕德兰）,Molec.Immunol.（分子免疫学）28:489(1991)）。

然而，给定使用根据本发明中的至少一些实施方案中的抗体的口服或粘膜递送途径，这种人源化或降低免疫原性可以是不必要的。

抗CD3抗体也可以是一个单链抗体。单链抗体（scFV）可被工程化（例如，见Colcher（科尔切）等人,Ann.N.Y.Acad.Sci.（纽约科学学术年报）880:263-80(1999)以及Reiter（瑞特）,Clin.Cancer Res.（临床癌症研究）2:245-52(1996)）。该单链抗体可被二聚化或多聚化以产生对相同目标CD3蛋白的不同表位具有特异性的多价抗体。在一些是实施方案中，该抗体是单价的，例如想在Abbs（阿博斯）等人,Ther.Immunol.（治疗免疫学）1(6):325-31(1994)中所述，并通过引用结合于此。

具有抗CD3抗体的药物组合物

在此所述的抗CD3抗体可被结合到一种药物组合物中，该药物组合物适合口服或粘膜给药，例如通过吞食、吸入或吸附，例如通过鼻腔给药、鼻内给药、肺部给药、口腔给药、舌下给药、直肠给药或阴道给药。这种组合物可以包括一种惰性稀释剂或一种可食性载体。为了达到口服治疗给药的目的，该活性化合物（例如一种抗CD3抗体）可通过与赋形剂一起制备并且以固体形式或液体形式（包括凝胶）使用。也可以使用一种赋形剂制备口服抗CD3抗体组合物。药物相容性的结合剂可作为该组合物的一部分包括于内。提供了包括抗CD3抗体的口服剂型，其中在口服给药时，该剂型向受试者提供了一个治疗有效的粘膜水平的抗CD3抗体。还提供了包括抗CD3抗体的粘膜剂型，其中在粘膜给药时，该剂型向受试者提供了一个治疗有效的粘膜水平的抗CD3抗体。为了达到粘膜治疗给药的目的，该活性化合物（例如一种抗CD3抗体）可以与适合通过吸入或吸附给药的赋形剂或载体结合，例如经由鼻腔喷雾或液滴，或者直肠或阴道栓剂。

固体口服剂型包括但不局限于片剂（例如可咀嚼片剂）、胶囊、囊片、粉末、球剂、颗粒剂、袋装粉末、肠溶包衣片剂、肠溶包衣珠以及肠溶包衣软凝胶胶囊。还包括多层的片剂，其中不同的层可包含不同的药物。固体剂型还包括封装粉末、封装球剂以及封装颗粒。这些粉末、球剂以及颗粒可被包膜，例如用一种合适的聚合物或一种传统的包膜材料包以达到下述目的，例如，在胃肠道中有更大的稳定性，或是达到一种希望的释放速率。

此外，包括粉末、球剂以及颗粒的胶囊可以进一步被包被。可以在片剂或囊片上划痕，以利于分割，用于方便的根据需要调整剂量。

本发明中的剂型可以是单位剂型，其中该剂型旨在每次给药递送一个治疗剂量，例如一片药片等于一个剂量。这类剂型可通过本领域那些技术人员熟知的药学方法制备（见《雷明顿的药物科学》（Remington'sPharmaceutical Sciences），第18版，麦克出版社（Mack Publishing），伊斯顿（Easton），宾夕法尼亚州（Pa））。

典型的口服剂型可根据常规的药物混合技术，通过将一个紧密掺合物中的活性成分与至少一种赋形剂结合而制备。赋形剂可以采用多种多样的形式，取决于对于给药所希望的制剂的形式。例如，适用于固体口服剂型（例如粉末、片剂、胶囊以及囊片）中的赋形剂包括（但不局限于）淀粉、糖类、微晶纤维素、稀释剂、造粒剂、润滑剂、粘合剂以及崩解剂。适用于口服液体剂型的赋形剂的实例包括（但不局限于）水、二醇类、油类、醇类、调味剂、防腐剂以及着色剂。

片剂和胶囊代表了方便的药物组合物和口服剂型，在这种情况下采用固体赋形剂。如果希望的话，片剂可通过标准水性或非水性技术来包覆。这类剂型可通过任何制药学方法来制备。总体而言，通过将这种或这些活性成分与液体载体、细粉状固体载体或这两种载体均匀并且紧密地混合，并且然后必要时将产物成形为所希望的呈现形式来制备药用组合物和剂型。

作为一个实例，片剂可以通过压缩或模塑制备。压缩片剂可被制备，如通过压缩，在一个合适的机器中，活性成分（例如一种抗CD3抗体）处于一种自由流动的形式，例如粉末或颗粒，任选地与一种赋形剂混合。模塑片剂可以通过例如模塑制备，在一个合适的机器中将一种粉末化的抗CD3抗体复合物弄湿，例如用一种惰性液体稀释剂。

可用于本发明的口服剂型的赋形剂包括（但不局限于）粘合剂、填充剂、崩解剂以及润滑剂。适用于药物组合物和剂型的粘合剂包括（但不局限于）玉米淀粉、马铃薯淀粉、或者其他淀粉、黄芪树胶或明胶、天然的和合成的树胶（例如阿拉伯胶）、海藻酸钠、海藻酸、其他海藻酸盐、粉末化的黄芪胶、瓜尔胶、纤维素及其衍生物（例如乙基纤维素、乙酸纤维素、羧甲基纤维素钙、羧甲基纤维素钠）、聚乙烯吡咯烷酮、甲基纤维素、预凝胶化淀粉、羟丙基甲基纤维素（例如Nos.2008、2906、2910）、微晶纤维素以及其混合物。

微晶纤维素的合适形式包括（但不局限于）作为AVICEL-PH-101、AVICEL-PH-103、AVICELRC-581以及AVICEL-PH105（可得自FMC公司，美国维斯高丝分部，Avicel销售部，马库斯胡克市（Marcus Hook），宾夕法尼亚州（Pa））出售的材料，及其混合物。一种特异性的粘结剂是微晶纤维素和的羧甲基纤维素钠的混合物，作为AVICEO RC-581出售。合适的无水或低水分赋形剂或添加剂包括AVICEL PH-103和淀粉1500。

适用于在此披露的药用组合物和剂型的填充剂的实例包括（但不局限于）滑石、碳酸钙（例如颗粒或粉末）、微晶纤维素、粉末状纤维素、葡萄糖结合剂、高岭土、甘露糖醇、硅酸、山梨糖醇、淀粉、预凝胶化淀粉、以及其混合物。本发明的药用组合物和剂型中的粘合剂或填充剂典型地以药用组合物或剂型的从约50到约99重量百分比存在。

崩解剂可以用于本发明中的药物组合物以及口服或粘膜剂型，从而提供当暴露于水环境中时崩解的片剂。含有太多崩解剂的片剂在储存时可能发生崩解，而那些含崩解剂太少的片剂则可能不会以希望的速度或在希望的条件下崩解。

因此，应使用足够量（即不是过多也不会少到有害地改变活性成分的释放）的崩解剂来形成在此所述的药物组合物以及固体口服剂型。崩解剂的量基于配制品的类型而改变，并且对于本领域的那些技术人员来说是容易辨别的。典型的，药物组合物和剂型包括从约0.5到约15（重量百分比）的崩解剂，优选从约1到约5（重量百分比）的崩解剂。

可用于本发明的药物组合物以及口服或粘膜剂型的崩解剂包括（但不局限于）琼脂，海藻酸，碳酸钙，Primogel，微晶纤维素，交联羧甲纤维素钠，交聚维酮，波拉克林钾，羟基乙酸（glycolat）淀粉钠，玉米、马铃薯或木薯淀粉，其他淀粉，预凝胶化淀粉、黏土、其他藻胶、其他纤维素、树胶、及其混合物。

可用于本发明的药用组合物和剂型的润滑剂包括（但不局限于）硬脂酸钙、硬脂酸镁或Sterotes、矿物油、轻质矿物油、甘油、山梨糖醇、甘露糖醇、聚乙二醇、其他二醇、硬脂酸、十二烷基硫酸钠、滑石、氢化植物油（例如花生油、棉籽油、向日葵油、芝麻油、橄榄油、玉米油以及大豆油）、硬脂酸锌、油酸乙酯、月桂酸乙酯、琼脂，以及其混合物。额外的润滑剂包括例如syloid硅胶（AEROSILe 200，由W.R.格雷斯公司（W.R.Grace Co.），巴尔的摩（Baltimore），马里兰州（Md.）制造）、合成二氧化硅的凝结气雾剂（由德固赛公司（Degussa Co.），皮阿诺市（Piano）,Tex.（德克萨斯州）销售）、CAB-O-SIL（由卡博特公司（Cabot Co.），波士顿（Boston），马萨诸塞州,（Mass.）出售的火成二氧化硅产品）、以及其混合物。如果完全使用，那么润滑剂的用量典型地小于它们所并入的这些药用组合物或剂型的约1重量百分比。也可以使用助流剂，例如胶体二氧化硅。

这些药物组合物和口服或粘膜剂型可以进一步包括一种或多种用于降低活性成分将分解的速率的化合物。这样在此描述的口服剂型可以被加工成立即释放型的或持续释放型的剂型。立即释放型的剂型可以在相当短的时间内释放抗CD3抗体，例如，在几分钟至几小时内。持续释放型的制剂可以在若干小时的时段内释放抗CD3抗体，例如如果希望的话，高达24小时或更长。在任一种情况下，在递送时段，该递送能够被基本上控制在某一预定的速度上。在一些实施方案中，该固体口服剂型可以用一种聚合物或其他已知的包膜材料包被，来达到如下目的，例如提高在货架上或在胃肠道中的稳定性，尤其是对于穿过胃中的酸性pH，或以达到控制药物释放的目的。在此使用的包膜技术和材料在本领域中是熟知的。在此被称为“稳定剂”的这类化合物包括（但不局限于）抗氧化剂，例如抗坏血酸以及盐缓冲液。例如邻苯二甲酸乙酸纤维素、邻苯二甲酸聚乙酸乙烯酯、羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯、甲基丙烯酸-甲基丙烯酸酯共聚物、乙酸纤维素偏苯三酸、羧甲基纤维素以及羟丙基甲基纤维素乙酸酯琥珀酸酯，在其他中，可以用于实现肠溶包衣。可以使用蜡、虫胶、玉米素、乙基纤维素、丙烯酸树脂、乙酸纤维素、有机硅弹性体的混合物来实现持续释放包膜。例如参见上文提到的雷明顿第93章中其他类型的包衣、技术以及设备。

用于口服或粘膜给药的液体剂型代表另一种方便的剂型，在这种情况下可以使用一种溶剂。在一些实施方案中，该溶剂是一种缓冲液体，例如磷酸盐缓冲盐水（PBS）。可以通过将活性成分结合到一个适合的溶剂中，以形成在液体中的活性成分的溶液、悬浮液、糖浆、乳液或酏剂，从而制备液体口服剂型。这些溶液、悬浮液、糖浆、乳液以及酏剂可以任选地包括其他添加剂，包括（但不局限于）甘油、山梨醇、丙二醇、糖类或其他的甜味剂、调味剂以及稳定剂。调味剂包括（但不局限于）薄荷、水杨酸甲酯或橙味剂。

甜味剂可以包括糖类、阿斯巴甜、乙酰磺胺酸-K、糖精、甜蜜素和木糖醇。

为了降低口服的抗CD3抗体在被治疗的受试者胃中由于酸性pH引起的失活的程度，可以与免疫球蛋白一起同时给予抗酸剂，它可以中和肠道否则是酸性的特征。因此在一些实施方案中，抗CD3抗体可以同一种抗酸剂一起口服，例如氢氧化铝或氢氧化镁，例如MAALOX抗酸剂或MYLANTA抗酸剂，或一种H2阻滞剂，例如西眯替丁或雷尼替丁，或质子泵抑制剂，例如苯并咪唑家族的一个成员，例如奥美拉唑。在本技术领域的一个技术人员将会理解，结合抗CD3抗体给予的抗酸剂的剂量取决于所使用的具体抗酸剂。当抗酸剂是液体形式的MYLANTA抗酸剂时，可以给予在15和30ml之间，例如约15ml。当使用西眯替丁H2作为阻滞剂时，每天可以使用约400和800mg之间。当使用质子泵抑制剂时，每天可以使用约10和40mg。之间

在此所述的试剂盒可以包括一种口服的抗CD3抗体组合物，作为一种已经制备好的液体剂型准备好用于给药，或者，可替代地，可以包括一种抗CD3抗体组合物，作为一种固体药物组合物，该固体药物组合物可以用一种溶剂重构从而提供一种液体口服剂型。当该试剂盒包括一种作为固体药物组合物的抗CD3抗体，该组合物且可以用一种溶剂重构从而提供一种液体剂型时（例如为了口服或鼻内给药），该试剂盒可以任选地包括一种重构溶剂。在这种情况下，这种构成的溶剂或重构的溶剂与活性成分结合从而提供一种活性成分的液体口服剂型。典型地，活性成分在溶剂中是可溶的并形成一种溶液。该溶剂可以是，例如水、一种非水溶液，或一种非水组分和一种水组分的组合。合适的非水组分包括（但不局限于）油类、醇类（例如乙醇）、甘油以及二醇类（例如聚乙二醇以及丙二醇）。在一些实施方案中，该溶剂是PBS。

为了通过吸入给药，该粘膜抗CD3抗体化合物可以从包含一种合适的推进剂（例如一种气体，例如二氧化碳，或一种喷雾剂）的加压容器或分配器中或以气雾喷雾的形式递送。这些方法包括在美国专利号为6,468,798中描述的那些。

该抗CD3抗体化合物也可以制备成栓剂形式（例如，用常规的栓剂基质，例如可可脂和其他甘油酯）或用于直肠或阴道递送的保留灌肠剂，或者用于鼻腔或肺部给药的喷雾剂。

在一个实施方案中，口服或粘膜的抗CD3抗体的组合物可与载体一起制备，该载体将保护抗CD3抗体免于从体内快速消除，例如作为一种控释配制品，包括植入物以及微囊包封的递送系统。可以使用可生物降解的、生物相容的聚合物，例如乙烯-乙酸乙烯酯、聚酐、聚乙醇酸、胶原、聚原酸酯、以及聚乳酸。这类配制品可以使用标准技术制备。这些材料可以从阿尔扎（Alza Corporation）公司和诺维信生物有限公司（NovaPharmaceuticals.Inc）购得。脂质体悬浮液（包括用病毒抗原的单克隆抗体靶向到感染细胞的脂质体）也可以用作药学上可接受的载体。这些可以根据本领域那些技术人员已知的方法制备，例如美国专利号4,522,811中所描述。

这种抗CD3抗体组合物的剂量、毒性以及疗效可以通过标准制药程序在细胞培养（例如，取自粘膜给药抗CD3抗体后的动物的细胞）或实验性动物中确定，例如用于确定LD50（使研究组的50%致死的剂量）以及ED50（对研究组的50%治疗有效的剂量）。毒性和疗效之间的剂量比为疗效指数，并且它可以被表示为比率LD50/ED50。优选那些表现出高的疗效指数的组合物。尽管可以使用表现出毒副作用的抗CD3抗体组合物，但应当注意设计一种递送系统，该递送系统将这类化合物靶向到受影响的组织的部位，从而使潜在的损伤降到最小，并且由此减少副作用。

从细胞培养（例如，从一种通过粘膜给药抗CD3抗体后的动物取得的细胞）以及动物研究中获得的数据可以用于制定用于人类的剂量水平的范围。抗CD3抗体的组合物的剂量优选的在一个粘膜可用浓度范围内，该粘膜可用浓度范围包括具有很小或没有毒性的ED50。该剂量取决于所采用的剂型以及利用的给药途径，在该范围内变化。对于在这里表述的方法中使用的口服或粘膜抗CD3抗体组合物，治疗有效剂量可以初步从细胞培养试验中估测（例如，从粘膜给药抗CD3抗体后的动物取得的细胞）。也可以基于合适的动物模型中的疗效，在动物研究中制定剂量。这些信息可以用来更准确地确定人类中有用的剂量。

如在此定义，抗CD3抗体的治疗有效量（即一个有效剂量）取决于所选择的抗体、递送模式以及待治疗的病况。例如，可以给予的单剂量在在约1μg/kg到1000μg/kg的范围内；在一些实施方案中，可以给予约5、10、50、100或500μg/kg。在一些实施方案中，例如，对小儿受试者，可以给予约1-100μg/kg，例如约25或50μg/kg的抗CD3抗体。抗CD3抗体组合物可以从每天一次或多次给药到每周一次或多次给药，包括，例如每天一次。可以给予该口服或粘膜抗CD3抗体的组合物例如约10至14天或更长。本领域技术人员将理解，某些因素可以影响有效治疗一个受试者的所需的剂量和时间安排，包括（但不局限于)疾病或病症的严重性、疾病或病症的类型、之前的治疗、受试者的总体健康和/或年龄、其他存在的疾病、以及疗效的持久性。

此外，用治疗有效剂量的该化合物治疗一个受试者可以任选地包括单一治疗或者可以任选地包括一系列治疗。

口服或粘膜抗CD3抗体组合物还可以包括一种或多种对治疗肝炎有用的治疗剂。这些治疗剂可以包括，例如其他抗体、抗病毒剂或其他适用于治疗在此所述的感染的抗感染剂，例如干扰素α-2b；以及任何适用于治疗糖尿病的药剂，包括（但不局限于）胰岛素、磺酰脲类（例如氯茴苯酸类和那格列奈）、双胍类、噻唑烷二酮类以及α-葡萄糖苷酶抑制剂，尤其连同饮食的调整和锻炼计划。

这些药物组合物可同给药说明一起包括在一个容器、包装或分配器中。

治疗方法

根据本发明中不同的实施方案，在此描述的口服或粘膜抗CD3抗体组合物可被给药至一个受试者来治疗（如前文所述，还包括防止肝炎相关病症的进展和/或延缓其发展）肝炎相关病症，包括（但不局限于）传染因子（包括但不局限于病毒，例如甲、乙、丙、丁以及戊型肝炎；其他孢疹病毒，例如单纯疮疹病毒（HSV）；巨细胞病毒（CMV）；EB病毒；其他病毒，例如黄热病毒；HIV（人类免疫缺陷病毒）以及腺病毒；以及非病毒传染因子，例如弓形体、钩端螺旋体、Q热以及落基山斑疹热；或任何可以引起肝炎的传染因子）；毒素类（包括任何毒性物质或任何过量摄入后有毒性的物质，例如酒精或药物，例如由任何药物相关肝损伤（DILI）引起的，包括醋氨酚或者任何其他可以导致肝损伤的药物）；非酒精性脂肪性肝炎或由于肥胖或糖尿病或这两者的组合导致的NASH（非酒精性脂肪性肝炎）；与炎症性肠病相关的肝炎；高血脂症，无论是主要原因还是唯一原因，或与NASH相关；以及作为血管失调的结果；或其他病因的肝炎。

在一些实施方案中，这些方法包括给予足以产生一种或多种肝炎的临床标志物的改进的一种口服或粘膜抗CD3组合物；例如，降低或减轻，或者至少降低或去除肝脏的硬化和/或纤维化的进展。

不期待在肠胃外给予抗CD3抗体后已经观察到的细胞因子释放综合征（CRS）与给予与口服给予抗CD3抗体相关，但是这些方法可以包括监测受试者的CRS的迹象和症状，特别是在头几个剂量后，而且在伴随恢复治疗的中断治疗后；这类方法在确定抗CD3抗体的口服或粘膜给药的安全性上是特别有用的。CRS与关节痛、肌肉痛、发烧、发冷、缺氧、恶心以及呕吐有关；严重的CRS可以引起肺水肿和窒息。在一些实施方案中，这些方法包括在给予任何剂量的抗CD3抗体组合物之前降低受试者的体温至小于约37.8°C（100°F）。

在一些实施方案中，这些方法包括筛选受试者的体液过载、未控制的高血压、或无偿心脏衰竭等临床证据。在一些实施方案中，这些方法包括对于具有体液过载、未控制的高血压、或无偿心脏衰竭中任一个的证据的受试者不给予该口服或粘膜抗CD3抗体。在一些实施方案中，这些方法包括评价受试者的肺机能以及对于胸透不清楚的受试者不给予抗CD3抗体。在一些实施方案中，这些方法包括监测CD3+T细胞的清除和/或抗CD3抗体的血浆水平，并且因此调整口服或者粘膜抗CD3组合物的剂量。

在一些实施方案中，这些方法包括给予受试者甲泼尼龙琥珀酸钠8.0mg/kg，例如，在给予口服或粘膜抗CD3抗体组合物前1-4小时内通过静脉给药。在一些实施方案中，这些方法可以包括在给予服或粘膜抗CD3抗体组合物之前、同时或之后给予受试者一种抗炎剂，例如醋氨酚或抗组胺剂。

在一些实施方案中，这些方法包括评价和/或检测受试者的抗-抗CD3抗体，并且如果受试者具有抗-抗CD3抗体大于约1:1000的效价，则停止给予口服或粘膜抗CD3抗体组合物。

在一些实施方案中，这些口服或粘膜抗CD3抗体组合物同时与在此所述的一种或多种第二治疗形式一起给予。

在一些实施方案中，以上治疗方法还可以任选地涵盖在治疗前、治疗中和/或治疗后监测受试者的肝功能。肝功能可以任选地根据任何已知试验或检测进行评定，包括（但不局限于）血液测试（包括但不局限于一种用于检测丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天冬氨酸转氨酶（AST）或γ-谷胺酰转肽酶（GGT）中的一种或多种和/或其任一比率的测试）和/或肝脏活体组织检查（例如任选地作为一种穿刺活检）。

在一些实施方案中，受试者可以任选地并未患有自身免疫性疾病和/或任选地并未患有糖尿病。

实例

本发明的一些实施方案在以下实例中进一步描述，但并不限制在权利要求中描述的发明范围。

实例1

NASH的治疗-临床前评价

在本非限制性实例中，一种抗CD3抗体（aCD3），在ob/ob小鼠中证明，口服抗CD3免疫分子的有效性，发现在给予抗CD3抗体后，该ob/ob小鼠的脂肪性肝炎（脂肪肝）减轻（Yaron（亚龙）Ilan（伊兰）等人;"Inductionof regulatory T cells decreases adipose inflammation and alleviates insulinresistance in ob/ob mice（在ob/ob小鼠中，调节T细胞的诱导降低脂肪炎症并且减轻胰岛素抗性）";PNAS（美国科学院院刊）,2010年5月25日;107(21):9765-70,010年5月5日）电子出版物。

方法

小鼠。C57BL/6（B6），ob/ob，或CD1d-/-小鼠，年龄8-10周，购于杰克逊实验室（Jackson Laboratory）（巴尔港（Bar Harbor）,ME（缅因州），美国）这些小鼠被关在无病原体的动物设备里。

抗体和试剂。仓鼠抗小鼠CD3抗体（克隆145-2C11）和大鼠抗TGF-β，购买自BIO X CELL公司（West Lebanon（西黎巴嫩）,NH（新罕布什尔州））以及对照组仓鼠IgG购买自杰克逊免疫研究实验室（JacksonImmunoResearch Laboratories,PA（宾夕法尼亚州）,美国）。用于体外刺激的抗CD3（克隆145-2C11）以及用于FACS染色的试剂购于BDPharMingen公司（BD PharMingen,CA（加利福尼亚州）,美国)：CD16/CD32(FcBlock)；FITC、PE或APC结合的抗CD4（L3T4)；以及PE结合的抗CD25（PC61）。亲和纯化的生物素化的山羊抗-LAP多克隆抗体以及链霉菌-抗生物素蛋白-APC（Strep-Avidin APC）购自R＆D Systems公司（R&D Systems,MN（明尼苏达州）,美国）。用于死细胞染色的7-AAD购自Sigma-Aldrich公司（Sigma-Aldrich,MO（密苏里州），美国）。

口服给药和注射。小鼠用带有一个18号不锈钢喂食针（托马斯科技（Thomas Scientific），新泽西（NJ），美国）的一个胃插管喂食，喂食总体积为0.2毫升。这些小鼠，用磷酸盐缓冲盐水（PBS），仓鼠同型对照（IC，5mg/每次喂食），亦或溶解于乙醇中以及乳化于PBS中的抗CD3抗体（5mg/每次喂食）每天喂食一次，连续5天。

组织学。从对照组或处理组小鼠中移除肝脏、胰脏以及肌肉，并将它们放到4%的福尔马林中，然后用石蜡包埋。从各个器官中制备5个切片。这些组织用苏木精曙红进行染色，且肝脏切片额外用油红O染色。所有切片均由一个病理学家进行盲目性实验评分。

脂肪组织、肝酶、胆固醇以及血糖的分析。这些小鼠（4个/每组）连续5天喂食PBS或抗CD3（5μg)。在最后一次喂食72小时后收集性腺周围的白色脂肪，并且脂肪石蜡切片用H&E染色。在×40放大下拍摄照片。而且，在最后一次喂食（6个小鼠/每组）72小时后，使用在肠系膜淋巴结附近或周围的白色脂肪分离脂肪细胞。用荧光抗体对脂肪细胞染色，染色到CD11b和F4/80或CD4，然后固定、透膜以及用抗体染色到Foxp3。从性腺周围的脂肪中分离出的脂肪细胞的RNA，用于逆转录聚合酶链式反应（RTPCR），进行IL-10、TNF-α以及TGF-β的细胞因子表达。从用PBS或抗CD3喂养的小鼠的脾脏中负选择出CD4+T细胞，并且以1:1的比率与来自对照组小鼠的脂肪细胞共同培养5天。通过正选择将CD4+T细胞从共培养物种去除，留下用于RNA提取的脂肪细胞，该RNA用于RTPCR，进行细胞因子表达。伯明翰的临床生物化学实验室以及妇女医院（Clinical Biochemistry Lab at Brigham and Women’s hospital）使用Seralyzer系统，以一种结合-折叠的方式，测量肝酶AST和ALT以及胆固醇。根据生产者方案（Fisher Scientific），利用Diastix试剂条测量血糖水平。

统计分析。统计显著性通过双尾学生T检验进行评估。

当进行两组以上的比较时，使用单因素方差分析（one-way ANOVA）分析差异。当P值<0.05时被认为是显著的。

结果

口服抗CD3降低了ob/ob小鼠体内的葡萄糖、肝酶以及胆固醇。每天喂食ob/ob小鼠5μg抗CD3，连续5天，并且在喂食十天后测量血糖水平、肝酶水平以及脂肪水平。这些剂量基于先前在动物模型中抗CD3的研究（未示出数据）。如表1所示，与喂食PBS的对照组动物相比（367mg%），用抗CD3处理的动物中观察到血糖下降（316mg%）。

表1-口服抗CD3降低葡萄糖及肝酶在ob/ob鼠中的水平。

	PBS	抗CD3
			葡萄糖（mg%)	367+62	316+48
AST（U/l）	416+58	296+44

胆固醇（mg%)

218+39

219+37

每天喂食ob/ob小鼠（5个/组）5μg抗CD3，持续5天，并且在喂食十天后测量血糖水平、肝酶水平以及脂肪水平。

与对照组动物相比（416U/l），在喂食抗CD3的动物（296U/l）中观察到血清天冬氨酸转氨酶（AST）水平下降。与喂食PBS的小鼠相比（218mg%)，用抗CD3喂食的小鼠的血清胆固醇水平更低（219mg%）。与对照组相比，抗CD3组的动物没有观察到体重变化。如上文所述，当给予抗CD3的一种同型对照抗体时未观察到任何效果。

口服抗CD3降低了肝脏脂肪的积累以及胰腺增生。

观察这些代谢效果后，口服抗CD3在ob/ob小鼠中的效果通过对胰腺、肝脏以及肌肉的病理学分析进行测量。结果证明胰腺增生和肝脏脂肪积累均降低。

实例2

NASH的治疗-临床试验

抗CD3口服免疫分子疗法（aCD3)的安全性、功效以及免疫调节通过对患有非酒精脂肪肝炎（NASH）以及葡萄糖代谢改变的患者的临床试验进行评估。NASH患者在一个月时段接受日剂量的aCD3MAb，剂量水平为0（安慰剂组）以及0.2、1.0或5.0mg。应当注意的是，其他的给药间隔（长于1个月）以及频率（如半周一次、每周一次）以及剂量水平对于治疗或者防止NASH的进展和/或延迟NASH的发展可以是有用的。

方法

aCD3的安全性通过监测受试者的报告的不良事件（AE）以及解读各种实验室安全性检测的结果来评估，它包括普通血液化学、肝脏和肾脏功能、免疫安全标志物（包括CD3、CD4以及CD8）的水平、以及全血计数（CBC）（包括白细胞计数（WBC）差别），连同比较aCD3处理组中的AE与安慰剂组的那些的频率和模式。免疫调节变化通过T细胞分泌的细胞因子水平的变化以及Treg的细胞表面标志物以及其他免疫系统标志物的水平来监测。功效是基于：一种或多种功效生物标志物，在患NASH的患者中，已知其中每一个都偏离正常，并且它包括以下项：葡萄糖耐量试验（GTT）、稳态模型评估（HOMA评分）、丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天冬氨酸转氨酶（AST）、γ谷胺酰转肽酶（GGT）、总胆固醇、低密度脂蛋白（LDL）以及甘油三酯。应当注意的是，除了肝脏活体组织检查是通过穿剌活检完成外，所有这些其他的免疫调节以及功效评估都是使用已经建立的以及可用的技术对来自aCD3治疗过程中或治疗后的患者的血液样品迅速进行的。

每个受试者的免疫调节和功效评估是通过比较在aCD3治疗前的功效参数值和那些在aCD3治疗中或治疗后的值，连同通过与安慰剂组相比，比较三个aCD3治疗组中的一个或多个组中免疫调节和功效参数的整体变化来确定。通过组分析比较手段，通过t检验对每个治疗组对比安慰剂组进行统计学评估，连同通过个别分析，通过t检验比较在每个治疗组中和安慰剂组中，在具体参数上具有≥10%的增加的改进的受试者个数。

结果

安全性：通过血液学、化学以及一般体征测量，发现该免疫疗法非常安全且耐受性好，3个剂量组中的任一个均未出现与药物相关的副作用或全身性主诉（systemic complaint）。在免疫治疗期间并且与安慰剂组相比，CD3阳性细胞或CD4阳性细胞或CD8阳性细胞均无血液水平的变化，这些都是免疫学安全性的指标。一些受试者具有增加水平的针对MAb的血清抗体。安全性数据与健康的受试者中口服抗CD3免疫疗法的1期安全性数据一致。

功效生物标志物：接受口服抗CD3的组中，免疫治疗导致临床参数上的正趋势，但是在安慰剂组中不是这样——尽管这些组的规模小，但这些趋势中的一些仍统计上显著。这些在功效上的正趋势是：两种肝酶（ALT、AST）的降低的血液水平，以及改进的在GTT中的葡萄糖代谢，这些都是对患有NASH或代谢综合征以及对患有2型糖尿病或葡萄糖代谢改变的患者而言有利的结果。若干正功效趋势在第30天停止免疫治疗后持续到第60天。

免疫调节标志物：该免疫治疗诱导LAP+调节T细胞，这在一些患者中一般持续到第60天。在接受mAb的组中的受试者表现出这类标志物的增加，同时接受安慰剂的那些则没有显示这类增加。其他的免疫调节效应包括诱导细胞因子（影响免疫系统的天然分子）的趋势，特别是TGFβ，在一些临床前研究中示出，在口服抗CD3免疫治疗中，TGFβ是诱导LAP+Tregs所需的。

功效生物标志物的改善以及免疫调节（nodulation）的实例示出在图1-5中，它们涉及患者从治疗前（第0天）到治疗后（第30天）的变化。图1涉及平均血糖水平，在接受免疫治疗的患者中它更低（因此更多地被控制）。图2涉及在血糖耐受性试验中AUC（曲线下面积）的平均变化；再次在接受免疫治疗的患者中发现结果更好。图3涉及AST水平，再次接受免疫治疗的患者中发现结果更好。图4涉及CD4⁺LAP⁺群水平变化百分比，同时图5涉及TGFβ水平的变化百分比；再次在接受免疫治疗的患者中发现更好的结果。

实例3

丙型肝炎的治疗

aCD3的功效通过患者的临床试验进行评估，其中这些患者患有由丙型肝炎病毒（HCV）引起的慢性肝感染。慢性HCV患者可以接受干扰素（IFn）治疗，它是一种批准的慢性HCV产品。受试者不断接受IFn治疗，或者可替代地已经IFn治疗失败，由于缺乏功效亦或耐受性差导致从IFn治疗退出。临床试验在接受IFn治疗的亦或从IFn治疗退出的慢性HCV患者中进行。慢性HCV患者在一个给药频率（例如每天或每周）、以一定的剂量水平（例如0（安慰剂组）、0.2、1.0或5.0mg）接受一个时段（例如1至6个月的间隔或更长）的aCD3剂量。应当注意的是，其他的给药间隔以及频率以及剂量水平可以对于治疗或者防止疾病或病况的进展和/或延迟其发展是有用的。aCD3的安全性通过监测受试者的报告的不良事件（AE）以及解读不同实验室安全性测试的结果来评估，它可以包括一般血液化学、肝脏和肾脏功能、以及全血计数（CBC）（包括白细胞计（WBC）差别），连同比较aCD3处理组中的AE与安慰剂组的AE的频率和模式。功效是基于以下参数中的一个或多个的改进，在患慢性HCV的患者中，已知其每个参数都偏离正常：HCV核糖核酸（RNA）水平、ALT水平、AST水平、GGT水平以及肝脏活体组织检查。应当注意的是，所有的功效评估，除了肝脏活体组织检查是通过穿剌活检完成的，其他的都是在aCD3治疗的过程中或治疗后，在来自患者的血液样品上迅速进行的。每个受试者的功效评估是通过比较在aCD3治疗前的功效参数值和那些在aCD3治疗中或治疗后的值，连同通过与安慰剂组相比，比较三个aCD3治疗组中的一个或多个组中功效参数的整体变化来确定。

其他实施方案

应当理解的是，虽然已经结合其详细描述，对本发明进行了描述，但前面的描述旨在说明而非限制由所附的权利要求的范围限定的本发明的范围。。任选地，可以结合任一个或多个实施方案、子实施方案和/或任一实施方案中的部分。其他的方面、优点以及改动都在以下权利要求的范围内。

Claims (18)

1.一种用于治疗和/或防止受试者肝炎进展和/或延迟肝炎发展的方法，包括通过口服或粘膜给予受试者一种抗CD3免疫分子。

2.用于口服或粘膜给药至受试者，以治疗和/或防止肝炎进展和/或延迟肝炎发展的一种抗CD3免疫分子的用途。

3.一种药物组合物，该药物组合物包括一种适合口服或粘膜给药的抗CD3免疫分子，它的剂量适合治疗和/或防止肝炎的进展和/或延迟肝炎的发展。

4.如上述任何一个权利要求中所述的方法、用途或组合物，其中该肝炎包括肝脏的炎症。

5.如权利要求4中所述的方法、用途或组合物，其中所述肝炎具有一个选自下组的病因，该组由以下各项组成：一种传染因子；毒素类；任何与肥胖或糖尿病相关的或者因肥胖或糖尿病恶化的肝病；与炎症性肠病相关的肝病；与血管失调相关的肝病。

6.如权利要求5中所述的方法、用途或组合物，其中所述肝炎具有一个选自下组的病因，该组由以下各项组成：一种病毒性或非病毒性传染因子。

7.如权利要求6中所述的方法、用途或组合物，其中所述肝炎具有一个选自下组的病因，该组由以下各项组成：甲型肝炎、乙型肝炎、丙型肝炎、丁型肝炎和戊型肝炎；孢疹病毒；巨细胞病毒；EB病毒；黄热病病毒，HIV病毒（人类免疫缺陷性病毒），以及腺病毒。

8.如权利要求7中所述的方法、用途或组合物，其中所述肝炎是由丙型病毒性肝炎引起的。

9.如权利要求6中所述的方法、用途或组合物，其中所述肝炎具有一个选自下组的病因，该组由以下各项组成：弓形体、钩端螺旋体、Q热以及落基山斑疹热。

10.如权利要求6中所述的方法、用途或组合物，其中所述肝炎具有一个选自下组的病因，该组由以下各项组成：酒精或药物，或者与任何药物相关肝损伤（DILI）相关。

11.如权利要求6中所述的方法、用途或组合物，其中所述肝炎具有一个与肥胖或糖尿病或这两种病况的组合相关的病因。

12.如权利要求11中所述的方法、用途或组合物，其中所述肝炎是由非酒精性脂肪性肝炎（NASH）或高血脂中的一种或多种引发的，无论是作为首要的或唯一的病因，或与NASH相关。

13.如权利要求12中所述的方法、用途或组合物,其中所述肝炎是由NASH引起的。

14.如权利要求13中所述的方法、用途或组合物，其中，用所述抗CD3免疫分子的治疗减轻了与NASH相关的参数，该参数根据选自下组的一个试验测量，该组由以下各项组成：葡萄糖耐量试验（GTT）、稳态模型评估（HOMA评分）、丙氨酸氨基转移酶（ALT）水平、天冬氨酸转氨酶（AST）水平、γ谷胺酰转肽酶（GGT）水平、总胆固醇水平、低密度脂蛋白（LDL）水平或LDL与HDL（高密度脂蛋白）的比率、甘油三酯水平以及经肝脏活体组织检查评估的脂肪性肝炎。

15.如上述任何一个权利要求中所述的方法、用途或组合物，其中口服或粘膜给药包括肺部给药、口腔给药、鼻腔给药、鼻内给药，舌下给药、直肠给药、或阴道给药的一种或多种。

16.如上述任何一个权利要求中所述的方法、用途或组合物，其中所述抗CD3免疫分子包括一种抗CD3抗体。

17.如权利要求16中所述的方法、用途或组合物，其中所述抗CD3抗体包括一种选自下组的分子，该组由一个全抗体或其活性片段组成。

18.如权利要求17所述的方法、用途或组合物，其中该抗CD3抗体选自下组，该组由以下各项组成：一种鼠mAb、一种人源化mAb，一种人mAb、以及一种嵌合mAb。

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