DK144659B - Fremgangsmaade og reagens til bestemmelse af isoenzymerne 4 eller 5 af lactatdehydrogenase og et diagnostisk middel indeholdende reagenset - Google Patents
Fremgangsmaade og reagens til bestemmelse af isoenzymerne 4 eller 5 af lactatdehydrogenase og et diagnostisk middel indeholdende reagenset Download PDFInfo
- Publication number
- DK144659B DK144659B DK406475AA DK406475A DK144659B DK 144659 B DK144659 B DK 144659B DK 406475A A DK406475A A DK 406475AA DK 406475 A DK406475 A DK 406475A DK 144659 B DK144659 B DK 144659B
- Authority
- DK
- Denmark
- Prior art keywords
- reagent
- ldh
- isoenzymes
- tampon
- lactate
- Prior art date
Links
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 title claims description 43
- 108010044467 Isoenzymes Proteins 0.000 title claims description 25
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 22
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-M Lactate Chemical compound CC(O)C([O-])=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 title claims description 14
- 229940039227 diagnostic agent Drugs 0.000 title description 5
- 239000000032 diagnostic agent Substances 0.000 title description 5
- 108010020056 Hydrogenase Proteins 0.000 title 1
- 102000003855 L-lactate dehydrogenase Human genes 0.000 claims description 30
- 108700023483 L-lactate dehydrogenases Proteins 0.000 claims description 30
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 21
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M sodium hydroxide Inorganic materials [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 16
- 239000012530 fluid Substances 0.000 claims description 12
- BAWFJGJZGIEFAR-NNYOXOHSSA-N NAD zwitterion Chemical compound NC(=O)C1=CC=C[N+]([C@H]2[C@@H]([C@H](O)[C@@H](COP([O-])(=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]3[C@H]([C@@H](O)[C@@H](O3)N3C4=NC=NC(N)=C4N=C3)O)O2)O)=C1 BAWFJGJZGIEFAR-NNYOXOHSSA-N 0.000 claims description 11
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims description 11
- 229950006238 nadide Drugs 0.000 claims description 11
- 229930027945 nicotinamide-adenine dinucleotide Natural products 0.000 claims description 9
- LCTONWCANYUPML-UHFFFAOYSA-M Pyruvate Chemical compound CC(=O)C([O-])=O LCTONWCANYUPML-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 8
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 claims description 8
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 claims description 8
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 6
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 claims description 4
- 230000009467 reduction Effects 0.000 claims description 2
- 125000003831 tetrazolyl group Chemical group 0.000 claims description 2
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 claims 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 8
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 7
- 210000001215 vagina Anatomy 0.000 description 7
- QLAJNZSPVITUCQ-UHFFFAOYSA-N 1,3,2-dioxathietane 2,2-dioxide Chemical compound O=S1(=O)OCO1 QLAJNZSPVITUCQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 6
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 5
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 5
- BOPGDPNILDQYTO-NNYOXOHSSA-N nicotinamide-adenine dinucleotide Chemical compound C1=CCC(C(=O)N)=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]2[C@H]([C@@H](O)[C@@H](O2)N2C3=NC=NC(N)=C3N=C2)O)O1 BOPGDPNILDQYTO-NNYOXOHSSA-N 0.000 description 5
- 230000036285 pathological change Effects 0.000 description 5
- 231100000915 pathological change Toxicity 0.000 description 5
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 5
- 201000009030 Carcinoma Diseases 0.000 description 4
- GSEJCLTVZPLZKY-UHFFFAOYSA-N Triethanolamine Chemical compound OCCN(CCO)CCO GSEJCLTVZPLZKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000008859 change Effects 0.000 description 4
- 108010088351 lactate dehydrogenase 4 Proteins 0.000 description 4
- RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 1,4-Dioxane Chemical compound C1COCCO1 RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- ZWEHNKRNPOVVGH-UHFFFAOYSA-N 2-Butanone Chemical compound CCC(C)=O ZWEHNKRNPOVVGH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010088350 Lactate Dehydrogenase 5 Proteins 0.000 description 3
- YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N Toluene Chemical compound CC1=CC=CC=C1 YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229960000583 acetic acid Drugs 0.000 description 3
- 230000003139 buffering effect Effects 0.000 description 3
- 239000005515 coenzyme Substances 0.000 description 3
- 239000011888 foil Substances 0.000 description 3
- 210000004392 genitalia Anatomy 0.000 description 3
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 3
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 3
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 3
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 3
- 229920000742 Cotton Polymers 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- BAWFJGJZGIEFAR-NNYOXOHSSA-O NAD(+) Chemical compound NC(=O)C1=CC=C[N+]([C@H]2[C@@H]([C@H](O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]3[C@H]([C@@H](O)[C@@H](O3)N3C4=NC=NC(N)=C4N=C3)O)O2)O)=C1 BAWFJGJZGIEFAR-NNYOXOHSSA-O 0.000 description 2
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 2
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 2
- 239000002390 adhesive tape Substances 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- 229920002301 cellulose acetate Polymers 0.000 description 2
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 2
- 239000012362 glacial acetic acid Substances 0.000 description 2
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 2
- RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N glutathione Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(=O)N[C@@H](CS)C(=O)NCC(O)=O RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N 0.000 description 2
- 238000007654 immersion Methods 0.000 description 2
- ZXEKIIBDNHEJCQ-UHFFFAOYSA-N isobutanol Chemical compound CC(C)CO ZXEKIIBDNHEJCQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 2
- 230000007306 turnover Effects 0.000 description 2
- 208000009458 Carcinoma in Situ Diseases 0.000 description 1
- 108010024636 Glutathione Proteins 0.000 description 1
- 108010029485 Protein Isoforms Proteins 0.000 description 1
- 102000001708 Protein Isoforms Human genes 0.000 description 1
- 108010071390 Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 102000007562 Serum Albumin Human genes 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 239000000853 adhesive Substances 0.000 description 1
- 230000001070 adhesive effect Effects 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 1
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 210000005002 female reproductive tract Anatomy 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 229960003180 glutathione Drugs 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 238000005470 impregnation Methods 0.000 description 1
- 201000004933 in situ carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000011005 laboratory method Methods 0.000 description 1
- 108010087599 lactate dehydrogenase 1 Proteins 0.000 description 1
- 108010088076 lactate dehydrogenase 2 Proteins 0.000 description 1
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 description 1
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000012464 large buffer Substances 0.000 description 1
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- VMGAPWLDMVPYIA-HIDZBRGKSA-N n'-amino-n-iminomethanimidamide Chemical compound N\N=C\N=N VMGAPWLDMVPYIA-HIDZBRGKSA-N 0.000 description 1
- FSVCQIDHPKZJSO-UHFFFAOYSA-L nitro blue tetrazolium dichloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].COC1=CC(C=2C=C(OC)C(=CC=2)[N+]=2N(N=C(N=2)C=2C=CC=CC=2)C=2C=CC(=CC=2)[N+]([O-])=O)=CC=C1[N+]1=NC(C=2C=CC=CC=2)=NN1C1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 FSVCQIDHPKZJSO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 238000006303 photolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000015843 photosynthesis, light reaction Effects 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 239000012429 reaction media Substances 0.000 description 1
- BOLDJAUMGUJJKM-LSDHHAIUSA-N renifolin D Natural products CC(=C)[C@@H]1Cc2c(O)c(O)ccc2[C@H]1CC(=O)c3ccc(O)cc3O BOLDJAUMGUJJKM-LSDHHAIUSA-N 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 159000000000 sodium salts Chemical class 0.000 description 1
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 1
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- MUUHXGOJWVMBDY-UHFFFAOYSA-L tetrazolium blue Chemical compound [Cl-].[Cl-].COC1=CC(C=2C=C(OC)C(=CC=2)[N+]=2N(N=C(N=2)C=2C=CC=CC=2)C=2C=CC=CC=2)=CC=C1[N+]1=NC(C=2C=CC=CC=2)=NN1C1=CC=CC=C1 MUUHXGOJWVMBDY-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 230000008467 tissue growth Effects 0.000 description 1
- 210000004291 uterus Anatomy 0.000 description 1
- 239000000052 vinegar Substances 0.000 description 1
- 235000021419 vinegar Nutrition 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/26—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving oxidoreductase
- C12Q1/32—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving oxidoreductase involving dehydrogenase
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/805—Test papers
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/81—Packaged device or kit
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S604/00—Surgery
- Y10S604/904—Tampons
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Description
(19) DANMARK vREfc> ® (12) FREMLÆGGELSESSKRIFT ud 144659 8
DIREKTORATET FOR PATENT- OG VAREMÆRKEVÆSENET
(21) Ansøgning nr. 4064/75 (51) lnt.CI.3 C 12 Q 1/32 (22) Indleveringsdag 11· sep. 1975 (24) Løbedag 11· sep. 1975 (41) Aim. tilgængelig 15· tnar. 1976 (44) Fremlagt 5· tnaj 1982 (86) International ansøgning nr. -(86) International indleveringsdag -(85) Videreførelsesdag -(62) Stamansøgning nr. -
(30) Prioritet 12. sep. 1974, 2445741, DE
(71) Ansøger KOMMANDITGESELLSCHåFT SCHWÅRZHAUPT, 5 Koeln 1, DE.
(72) Opfinder Walther Lamprecht, DE.
(74) Fuldmægtig Ingeniørfirmaet Hofman-Bang & Boutard.
(54) Fremgangsmåde og reagens til bestemmelse af isoenzymerne 4 eller 5 af lactatdehydro= genase og et diagnostisk mid= del indeholdende reagenset.
Opfindelsen angår en fremgangsmåde og et reagens til bestemmelse af isoenzymerne 4 eller 5 af lactatdehydrogenease (LDH) alene eller i blanding med hinanden eller med andre LDH-isoenzymer, ved omsætning af lactat og nicotinamid-adenin-dinucleotid (NAD+) ® til pyruvat. Opfindelsen angår endvidere et diagnostisk middel CT) lq indeholdende reagenset.
CD
-rt
Det er kendt, at lactatdehydrogenase, sædvanligvis betegnet LDH, optræder i fem isoformer. Ved aktivitetsbestemmelse af enkelte ^ isoenzymer er forskellige substrat- og pH-optima vigtige kende- O tegn, som hidtil ikke var fuldstændig kendt for de enkelte iso enzymer.
2
U665S
Til bestemmelse af alle isoenzymer har man hidtil enten adskilt isoenzymerne elektroforetisk (se f.eks. "Die Isoenzyme der Lactatdehydrogenase", Reihe Biochemie und Klinik af S.L. Kowalewski, udgivet af G. Thieme Verlag, Stuttgart 1972, side 29) eller holdt den samlede LDH i opløsning, bundet LDH-2 til -5 og bestemt det hyppigst forekommende LDH-1. En oversigt over den hidtidige standardarbejdsmetode findes f.eks. i bogen "Enzymatische Analyse", Band I, Verlag Chemie, Weinheim 1970, side 557. Ifølge denne foreskrives for omsætningen af lactat til pyruvat et pH-optimum mellem 8,3 og 8,9. Faktisk anvendes ved alle kendte bestemmelsesmetoder et basisk eller højst omkring neutralt pH-område for at omfatte isoenzymerne så fuldstændigt som muligt.
Af Lamprecht et al. (Cardiology 56: 371 - 375 (1971/72)) og i Fortschritte der klinischen Chemie, Enzyme tind Hormone, Verlag der Wiener medizinischen Akademie 1972, side 277 - 283, blev det fastslået, at enkelte isoenzymer ved pH-ændring kan overgå i hinanden, altså at der finder en konformationsændring sted.
Opfindelsens formål er at afskaffe de ved de kendte fremgangsmåder optrædende komplicerede adskillelsesprocedurer og de stadigt konstaterede unøjagtigheder ved den samlede bestemmelse og at tilvejebringe en fremgangsmåde til optimal bestemmelse af LDH-isoenzymerne 4 og/eller 5, eventuelt i blanding med andre LDH-isoenzymer. Endvidere er det opfindelsens formål at angive et reagens til anvendelse ved fremgangsmåden og et diagnostisk middel til konstatering af patologiske ændringer i det nedre kvindelige genitalområde .
Det har vist sig, at en sænkning af pH-værdien under neutralpunktet ved den i sig selv kendte omsætning af lactat og NAD til pyruvat fører til en optimal konstatering af den samlede mængde af LDH-isoenzymerne 4 og 5· Derved er det fremfor alt interessant, at LDH 4 og 5 kun konstateres fuldstændigt ved måling i surt pH-område. Derigennem optimeres den samlede mængde af alle konstaterede isoenzymer af LDH ved måling i surt område, og det er muligt at bestemme LDH 4 eller 5 fuldstændigt alene eller i blanding med hinanden, men også med andre LDH-iso-enzymer.
144659 3
Dette opnås ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen, som er ejendommelig ved, at omsætningen gennemføres ved en pH-værdi på 6 - 6,5. Por omsætningen er en ringe mængde væske tilstrækkelig, men den gennemføres hensigtsmæssigt i flydende medium.
Det har nemlig endvidere vist sig, at optimet for den fælles bestemmelse af flere isoenzymer også er pufferafhængigt. For de fleste puffere ligger dette optimum ved omkring pH 6-6,5, ved triethanolamin-NaOH-puffer ved en pH-værdi på 6,3-6,4. Hvis man vil arbejde i phosphatpuffer, kan man ganske vist endnu måle, men derved bestemmes kun en delmængde, f.eks. isoenzym 5 ved pH 7,9. En sur pH-værdi egner sig imidlertid væsentligt bedre til fælles bestemmelse af flere isoenzymer. En pH-værdi på 6,3-6,4 egner sig især til fælles bestemmelse af LDH 4 og 5, som f.eks. kan optræde i .vaginalvæsken.
Fortrinsvis tilvejebringes i reaktionsmediet en stor pufferkapacitet. Dette har den fordel, at der også ved undersøgelse af legemsvæsker med en pH-værdi, der afviger stærkt fra pH 6, hverken sker nogen under- eller overskridelse af den optimale pH-værdi ved omsætningen.
Omsætningen foregår på i sig selv kendt måde ved en temperatur på ca. 37°C. Derved indstilles coenzym-mængderne således, at de optimalt rækker til for alle foreliggende isoenzymer, hvad der under hensyntagen til de følgende angivelser kan bestemmes med få rutineforsøg.
Bestemmelsen af LDH er af stor vigtighed, især ved undersøgelsen af legemsvæsker. Medens disse isoenzymer hos sunde mennesker overvejende fastholdes i vævene, finder man dem ved unormal vævsvækst eller ved leukæmi eller andre sygdomme i betydelig koncentration i serummet eller andre legemsvæsker. Især kan man fastslå, at de findes i vaginalvæsken ved pathologiske ændringer i det nedre kvindelige genitalområde.
Fremgangsmåden ifølge opfindelsen kan anvendes på alle legemsvæsker. Indstillingen af pH-værdien af den prøve, som skal undersøges, afhænger af prøvens egen pH-værdi. I hvert fald skal for omsætnin 4 144659 gen selv foreligge en pH-værdi på 6,3-6,4, især omkring 6,3. I overensstemmelse hermed skal sammensætningen af reagenset til bestemmelsens gennemførelse indstilles.
Medens der ved standardmetoden (se Enzymatische Analyse, Band I, loc. cit.) foreskrives et pH-optimum mellem 8,3 og 8,9, afviges ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen bevidst fra dette pH-område. Grunden til fastlæggelsen af det ovennævnte basiske pH-område skal søges deri, at der ved reaktionen
LDH
lactat + NAD+ ^ pyruvat + NADH + H+ opstår en proton i det støkiometriske forhold til lactat-omsæt-ningen. For at drive denne ligevægt for LDH til højre, arbejder man i det alkaliske område.
Ifølge opfindelsen skal derimod, f.eks. ved bestemmelse i serum eller plasma, den prøve, som skal undersøges, pufres med tri-ethanolamin-NaOH til en pH-værdi på omkring 6,3-6,4 og også den til undersøgelsen anvendte testkombination (prøvereagens) indstilles på denne værdi. Til overslagsbestemmelser indstilles en pH-værdi på 6,0 - 6,5 og pufres således, at der ved selve bestemmelsen foreligger en pH-værdi på 6,3 - 6,4. Ved serumalbumin tilsættes på i sig selv kendt måde glutathion.
Isoenzymerne af lactatdehydrogenase bestemmes optimalt ved pH
6,3-6,4, når der er sørget for, at reaktionsligevægten
LDH
lactat + MAD ^ pyruvat + NADH + H+ ved følgereaktioner forskydes til højre. Til dette formål tilsættes phenacinmethosulfat, ved hjælp af hvilket coenzymet NADH stadig oxideres igen. Målingen ved pH mellem 6,0 og 6,5 frembyder for første gang muligheden af, at bestemme LDH 5 fuldstændigt.
Dette er fremfor alt interessant fordi forekomsten af LDH 5 er .et indicium for forekomsten af carcinomer.
p- U4659 5
Ved visse legemsvæsker er de ovenfor beskrevne forhold imidlertid anderledes, fordi de udviser en egen-pH-værdi, der udpræget afviger fra pH 6,3 - 6,4. En sådan legemsvæske er især vaginal-væsken, hvis pH-værdi ligger ved omkring 4. Her må den optimale pH-værdi ved omsætningen indstilles ved hjælp af den anvendte testkombination, hvilket betyder, at testkombinationen har en højere pH-værdi, som så af vaginalvæskens pH-værdi trækkes ned på omkring pH 6 - 6,5· I overensstemmelse hermed angår opfindelsen endvidere et reagens til anvendelse ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen, hvilket reagens indeholder lactat, nicotinamid-adenin-dinucleotid (NAD+), et tetrazoliumsalt til synliggørelse af den enzymatiske NAD-reduktion og en puffer og er ejendommeligt ved, at reagenset er pufret således, at der sammen med prøven opnås en pH-værdi på 6 - 6,5· • Ved anvendelse af et tørpræparat må således denne pH-værdi foreligge efter opløsning af dette.
For det specielle tilfælde, hvor der skal undersøges en vaginalvæske, som selv ikke er ændret i dens oprindelige pH-værdi, egner sig især anvendelsen af bestemmelsen med triethanolamin-NaOH-puffer, hvorved reagenset indstilles til pH 7,0, mens ved undersøgelsesprøver indstillet til pH 6,3 - 6,4 også reagenset indstilles til denne værdi.
I overensstemmelse hermed angår opfindelsen endvidere et diagnostisk middel til konstatering af patologiske ændringer i det nedre kvindelige genitalområde, hvilket middel er ejendommeligt ved, at det består af en tampon, som bærer et reagens ifølge opfindelsen. Reaktionen med de i vagina forekommende LDH-isoenzymer ved pH-omkring 6,0 - 6,5, især 6,3 - 6,4, fremkaldes ved indstikning af tamponen i vagina.
Reagenset består af en opløsning med følgende sammensætning: 6 144659 fortrinsvis nedre og øvre reagenssam- grænseområde mensætning _
Triethanolamin-NaOH-puffer, pH 7,0 5>0 mM 1,0 - 150 mM
Na-lactat (Natriumsalt af D,L-
mælkesyre) 67,5 mM 20 550 mM
Phenacinmethosulfat (EMS) 0,1 mM 0,01- 1,0 mM
Nicotinamid-adenin-dinucleotid
(NAD+) 1,5 mM 0,1 - 10 mM
Ni tro-blåt-tetrazoliumchlorid (NBT) 0,3 mM 0,01- 1,5 mM
Dette reagens påføres, medens det beskyttes mod lyset, en egnet bærer, især en tampon, og denne opbevares beskyttet mod lyset, indtil den skal anvendes.
Forekomsten af LDH i vaginalvæsken vises derved, at tamponen efter omkring 5-10 minutter antager en blå farve. Der finder følgende reaktionsforløb sted:
LDH
1. lactat + NAD+ ^ pyruvat + NADH + H+ 2. NADH + phenacinmetho sulfat + H+ -^ NAD+ + red. phenacinmetho sulfat 3. red. phenacinmethosulfat + nitro-blåt-tetrazoliumchlorid -^ formazan + phenacinmethosulfat.
Da den anden og også den tredje til lactatomsætningen koblede reaktion fjerner det dannede reducerede coenzym lige så meget som den første reaktion, d.v.s. at lactatomsætningens ligevægt derved forskydes endnu stærkere til højre, vil ved reagensblandingens . pufring til pH 7,0 den faktiske omsætning efter indlægning af tamponen forløbe ved en pH-værdi omkring 6, især 6,3-6,4. Derved bestemmes isoenzymerne LDH-4 og LDH-5, som kan forekomme ved 7 144659 unormale ændringer i vaginalvæsken, optimalt.
Ved de reagenser, som skal anvendes i vagina, skal der vælges en puffer, som er stabil og vævsvenlig. Hertil egner sig især triethanolamin-NaOH-puffer.
Reagenset kan påføres bæreren, især en tampon, på en hvilken som helst måde. Det er kendt, at håndteringen af sådanne reagenser skal foregå beskyttet mod lyset, og at den med reagenset forsynede bærer i vid udstrækning skal opbevares under udelukkelse af lys indtil dens anvendelse. To fordelagtige metoder til ind-bringning af reagenset i en tampon er en injektion af ca. 2 ml af det foretrukne reagens eller imprægnering af en tamponende i en længde på omkring 3/4 cm med ligeledes omkring 2 ml reagens og efterfølgende tørring, især frysetørring af tamponen. Men reagenset kan også f.eks. blot påføres en udtrækssnor, som senere efter behov let kan fjernes fra tamponen. Meget gunstig er også påføringen af reagenset på et bomuldsbånd eller en bomuldssnor, som indsættes i tamponen.
Da det ved anvendelse til hurtig bestemmelse af en pathologisk ændring i den nedre kvindelige genitalvej ved indføring i vagina naturligvis ikke vides, hvor megen vaginalvæske der findes, og mængden svinger fra tilfælde til tilfælde ligesom den mulige pH-værdi af vaginalvæsken, må der skabes en stor pufferkapacitet i reagenset, for at der ved den egentlige bestemmelse på reaktionsstedet opretholdes en pH-værdi på 6-6,5» især 6,3-6,4. Da pufferkapaciteten af den i udtrækssnoren foreliggende reagensmængde herved i praksis ofte ikke slår til, er det hensigtsmæssigt i dette tilfælde at anbringe en større mængde pufferstof i tamponen, således at der tilvejebringes en tilstrækkelig pufring, i hvert fald på den ved tamponen nærmestliggende del af udtrækssnoren.
Sådanne med reagenset forsynede bærere behøver ikke at anvendes af lægen, men enhver kvinde kan selv anvende dem. En blåfarvning efter 15-30 minutters ophold af tamponen i vagina angiver faren for en pathologisk ændring og er en advarsel om at opsøge lægen.
Men hvis den benyttede tampon eller udtrækssnor eller lignende f.eks, skal arkiveres, hvad der især kan være tilfældet ved an- 8 144659 vendelse h.os lægen, eller hvis patienten vil sende tamponen til lægen, skal der foregå en efterbehandling af den benyttede tampon for at fjerne den ubehagelige lugt, desinficere tamponen og stabilisere farvningen til opbevaring over længere tidsrum. Det har endvidere vist sig, at denne efterbehandling kan ske ved neddykning af den til undersøgelsen anvendte tampon i en 2Q% "Paraloidn-opløsning ("Paraloid" opløst i toluen).
Medens de hidtidige metoder til LDH-bestemmelse er udtalte laboratoriemetoder, som desuden har de tidligere beskrevne ulemper, medfører opfindelsen muligheden af en hurtig, tilstrækkelig kvantitativ bestemmelse til visse anvendelsesformål, især for vaginalvæske, af den utrænede bruger. Dette er især vigtigt ved svulstpatienter. Hos et stort antal svulstpatienter blev der ifølge litteraturen indtil i dag undersøgt 26 enzymer. LDH har den højeste diagnostiske følsomhed; i serum (ikke exkreter) fandtes en forhøjelse på mellem 40 og 90%. Ved påvist tumor har bestemmelsen af LDH i serummet vist sig egnet til forløbs- og terapikontrol. En LDH-forhøjelse er ganske vist på ingen måde tumorspecifik. Men den udgør altid en henvisning til en alvorlig sygdom og er i sammenhæng med andre kendetegn egnet til at støtte formodningsdiagnosen af en tumor.
Det foreliggende foretrukne reagens påført tamponer blev anvendt ved rækkeundersøgelser på ca. 100 sunde kvinder og på patienter med Carcinoma colli uteri, Carcinoma corporis og Carcinoma in situ. Til opnåelse af de bedste resultater indlægges tamponen i 15-30 minutter. Efter udtagning kunne følgende farvninger umiddelbart fastslås: ingen farvning negativ rosa farvning endnu negativ lyseblå med violet tone + blå ++ mørkeblå +++
Hvis der optrådte en blå (++) eller en mørkeblå (+++) farvning, så forelå der i alle tilfælde et carcinom, som altid stemte overens med de pathologiske konstateringer. Ved lyseblå farvning kunne 9 144659 næsten uden undtagelse fastslås diagnosen "omdannelseszone". En rosa farvning er hidtil kun fundet hos sunde kvinder (også hos svangre indtil den femtende dag).
Bestemmelsen in vitro, altså f.eks. undersøgelsen af serum eller plasma, gennemføres på i sig selv kendt måde. Den eneste nødvendige ændring er indstillingen af en pH-værdi på 6 - 6,5, i modsætning til den hidtil benyttede, stærkt basiske pH-værdi, således at der her ikke kræves nogen nærmere beskrivelse. Til absolut bestemmelse kan der foretages en justering af farveomslaget ved hjælp af en standard-LDH-prøve. Justerprøven kan farvekonser-veres i nogen tid, som det er beskrevet for konserveringen af tamponen.
De følgende eksempler viser endnu to muligheder for at påføre reagenset på en tampon.
a) Neddykningsmetode.
Sædvanlige hygiejnetaraponer omvikles en eller to gange stramt omkring midten med et 1 cm bredt klæbebånd. Tamponens hylster åbnes ved den modsatte ende af den, hvor udstrækssnoren befinder sig.
Dermed ligger tamponens cylinderflade fri. Pra kommercielle reagensglas med et indhold på 18 ml bortsprænges bundkuplen. I det således dannede glasrør indføres tamponen på en sådan måde, at den ved en side åbnede tampon med sin endeflade flugter med rørenden. Udtrækssnoren fastgøres ved rørets anden ende med hæfteplaster, klæbebånd eller lignende. Rørets ende med det åbnede tamponhylster neddykkes i en opløsning af reagenset ifølge opfindelsen. Pr. tampon opsuges 2,0 ml. Påføringen af opløsningen og samtlige her skildrede manipulationer, som foregår i forbindelse med reagensopløsningen, skal gennemføres i mørkekammer med mono-chromatisk lys (fotolampe i det røde område, "rødlys").
På denne måde præparerede tamponer samt glasrør frysetørres i mørke. De tørrede tamponer fjernes fra rørene, f.eks. ved hjælp af udtrækssnoren og emballeres i mørke eller i mørkekammeret ved fotolys med lystæt papir eller folier eller farvet papir og opbevares beskyttet mod lyset.
10 144659 t») Injektionsmetode
De følgende arbejder gennemføres i mørkekammer. Ved hjælp af en 2 ml sprøjte injiceres 2,0 ml af en opløsning af reagenset ifølge opfindelsen i tamponen. Ved den modsatte ende af tamponen af den, hvor udtrækssnoren befinder sig, stikker man injektionsnålen igennem hylsteret ind i tamponen og fører, mens man sprøjter langsomt, nålen igennem i længderetningen til den anden ende af tamponen. Således har man opnået, at tamponen er regelmæssigt gennem-fugtet. Derpå frysetørres tamponerne og emballeres og opbevares som under a).
Reagensblandingen kan påføres enhver porøs bærer. Til bestemmelse af vaginalvæske eller i vagina har transparente folier vist sig særlig hensigtsmæssige, f.eks. celluloseacétatfolie, som benyttes til elektrophoreseformål, eller produktet "Parafilm M". På det sted, hvor folien kommer i forbindelse med LDH ved pålægning, finder der en farvning sted i retning blå. Sådanne folier har den fordel, at de er mekanisk stærkere end f.eks. filterpapir og til stabilisering eller arkivering yderligere kan gøres fuldstændigt transparente. Derved forbliver farveintensiteten fuldstændig uforandret.
Som transparensbade for celluloseacetatfolier kan anvendes: a) methanol/iseddike i forholdet 85:15, b) isobutanol/dioxan i forholdet 1:1 til 3:7, c) methylethylketon/dioxan i forholdet 3:2, d) eddikeester/dioxan i forholdet 3:2, e) methanol/iseddike/glycerol i forholdet 87:12:1.
Til "Parafilm"-folien er en kort neddykning i 7,5% eddikesyreopløsning velegnet.
Der kan også foretages oliebehandling. Herved egner sig "Whitemore-Oil 120" eller "Ondino-Oil 17"*
Disse folier med en flade på 1,5-2,5 cm kan hensigtsmæssigt anvendes af speciallægen ved et kolposkopisk indgreb på en formodet slimhindeforandring i vagina. På det sted, hvor der befinder sig cellehobe, som er tumorøse, finder der punktformigt en farvning sted analogt med tamponen.
Claims (8)
1. Fremgangsmåde til bestemmelse af isoenzymerne 4 eller 5 af lactatdehydrogenase (LDH) alene eller i blanding med hinanden eller med andre LDH-isoenzymer, ved omsætning af lactat og nicotinamid-adenin-dinucleotid til pyruvat, kendetegnet ved, at omsætningen gennemføres ved en pH-værdi på 6 - 6,5.
2. Fremgangsmåde ifølge krav 1, kendetegnet ved, at omsætningen gennemføres i et triethanolamin-NaOH-puffersystem med pH 6 - 6,5j især 6,5 - 6,4.
3. Fremgangsmåde ifølge ethvert af de foranstående krav, kendetegnet ved, at såvel den legemsvæske, som skal undersøges, som det til undersøgelsen anvendte reagens indstilles til en pH-værdi på 6,3 - 6,4.
4. Fremgangsmåde ifølge ethvert af de foranstående krav, kendetegnet ved, at det til undersøgelsen anvendte reagens indstilles til en sådan pH-værdi, at der ved en fra pH 6 - 6,5 afvigende pH-værdi af den legemsvæske, der skal undersøges, foreligger en pH-værdi på 6 - 6,5, især 6,3 - 6,4 ved omsætningen af lactat og nicotinamid-adenin-dinucleotid til pyruvat.
5. Reagens til anvendelse ved fremgangsmåden ifølge ethvert af kravene 1-4 og indeholdende lactat, nicotinamid-adenin-dinucleotid, et tetrazoliumsalt til synliggørelse af den enzymatiske NAD-reduktion og en puffer, kendetegnet ved, at reagenset er pufret således, at der sammen med prøven opnås en pH-værdi på 6 - 6,5·
6. Reagens ifølge krav 6, kendet egnet ved, at det er pufret til en sådan pH-værdi, at der sammen med prøven opnås en pH-værdi på 6,3 - 6,4.
7. Reagens ifølge krav 6,kendetegnet ved, at det til undersøgelse af vaginalvæske er pufret til pH 7,0.
8. Reagens ifølge krav 6 eller 7* kendetegnet ved,
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE19742443741 DE2443741C3 (de) | 1974-09-12 | Verfahren zur gemeinsamen Bestimmung der Isoenzyme 4 und 5 der LDH | |
| DE2443741 | 1974-09-12 |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| DK406475A DK406475A (da) | 1976-03-13 |
| DK144659B true DK144659B (da) | 1982-05-03 |
| DK144659C DK144659C (da) | 1982-10-04 |
Family
ID=5925603
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| DK406475A DK144659C (da) | 1974-09-12 | 1975-09-11 | Fremgangsmaade og reagens til bestemmelse af isoenzymerne 4 eller 5 af lactatdehydrogenase og et diagnostisk middel indeholdende reagenset |
Country Status (31)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US4003795A (da) |
| JP (2) | JPS5512239B2 (da) |
| AR (1) | AR211523A1 (da) |
| AT (1) | AT351173B (da) |
| AU (1) | AU503460B2 (da) |
| BE (1) | BE833348A (da) |
| BR (1) | BR7505850A (da) |
| CA (1) | CA1076010A (da) |
| CH (1) | CH631209A5 (da) |
| CS (1) | CS251752B2 (da) |
| DD (1) | DD120296A1 (da) |
| DK (1) | DK144659C (da) |
| ES (1) | ES440870A1 (da) |
| FI (1) | FI58943C (da) |
| FR (1) | FR2284882A1 (da) |
| GB (1) | GB1527243A (da) |
| HK (1) | HK79879A (da) |
| HU (1) | HU171962B (da) |
| IE (1) | IE41901B1 (da) |
| IL (1) | IL48071A (da) |
| IN (1) | IN142896B (da) |
| IT (1) | IT1155451B (da) |
| NL (1) | NL178086C (da) |
| NO (1) | NO144929C (da) |
| PL (1) | PL98619B1 (da) |
| RO (1) | RO68447A (da) |
| SE (1) | SE417109B (da) |
| SU (2) | SU663329A3 (da) |
| TR (1) | TR19139A (da) |
| YU (1) | YU218175A (da) |
| ZA (1) | ZA755704B (da) |
Families Citing this family (20)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4311791A (en) * | 1978-06-05 | 1982-01-19 | Bernstein Larry H | Automated kinetic determination of lactate dehydrogenase isoenzymes in serum |
| US4309184A (en) * | 1980-05-08 | 1982-01-05 | Majid Ali | Method of determining food or chemical allergy and intolerance |
| US4543327A (en) * | 1980-06-10 | 1985-09-24 | Bernstein Larry H | Malate dehydrogenase method |
| DE3231288C2 (de) * | 1982-08-23 | 1984-06-28 | MEDI-PHARMA Vertriebsgesellschaft mbH, 5000 Köln | Diagnostische Vorrichtung und ihre Verwendung |
| DE3231287C2 (de) * | 1982-08-23 | 1984-09-06 | MEDI-PHARMA Vertriebsgesellschaft mbH, 5000 Köln | Verfahren zum Herstellen einer diagnostischen Vorrichtung |
| GB2147415B (en) * | 1983-08-05 | 1987-02-11 | Powell & Scholefield Limited | Device and method for antibiotic sensitivity testing |
| DK427784A (da) * | 1984-09-06 | 1986-03-07 | Forenede Bryggerier As | Fremgangsmaade og apparat til bestemmelse af vitalitet i froe |
| US4849347A (en) * | 1984-11-29 | 1989-07-18 | Hoffmann-La Roche Inc. | Colorimetric biological assay |
| US5141853A (en) * | 1988-07-22 | 1992-08-25 | Abbott Laboratories | Determination of ammonia levels in a sample |
| EP0401641B1 (en) * | 1989-06-09 | 1995-01-25 | Abbott Laboratories | Method for assaying isoenzymes |
| US5468236A (en) * | 1993-06-09 | 1995-11-21 | Kimberly-Clark Corporation | Disposable absorbent product incorporating chemically reactive substance |
| US7947467B2 (en) * | 2001-07-19 | 2011-05-24 | Common Sense Ltd. | Methods for monitoring pathological conditions in a female subject |
| US20070134740A1 (en) * | 2005-12-12 | 2007-06-14 | David Brusilovsky | Compositions and articles for detection of analytes exceeding a pre-set threshold |
| US7083569B2 (en) * | 2001-08-03 | 2006-08-01 | Zassi Medical Evolutions, Inc. | Ostomy cartridge |
| US20070031914A1 (en) * | 2005-08-05 | 2007-02-08 | Wei Zhu | Devices for analyte assays and methods of use |
| US8053625B2 (en) * | 2006-12-14 | 2011-11-08 | Kimberly-Clark Worldwide, Inc. | Absorbent articles including a body fluid signaling device |
| CN109613177B (zh) | 2014-07-01 | 2021-08-20 | 科蒙森斯公司 | 用于鉴定羊水的诊断组合物 |
| EP3914163A4 (en) * | 2019-01-23 | 2022-04-13 | Gina-Life Diagnostics Ltd. | CANCER DIAGNOSTIC AND MONITORING APPARATUS, SYSTEMS AND METHODS |
| WO2020170977A1 (ja) | 2019-02-19 | 2020-08-27 | 日東電工株式会社 | 二次元材料積層体の製造方法及び積層体 |
| US20230054322A1 (en) * | 2021-08-23 | 2023-02-23 | Leslie P. Taylor | Urine indication pad with inbuilt diagnostics for training and indication of potential disease |
Family Cites Families (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US2905169A (en) * | 1955-03-10 | 1959-09-22 | Herbert E Nieburgs | Device for cancer detection |
| US2999052A (en) | 1959-03-16 | 1961-09-05 | Miles Lab | Composition for colorimetric test for serum enzymes |
| US3326777A (en) * | 1964-12-10 | 1967-06-20 | Warner Lambert Pharmaceutical | Process for differentiating the isoenzymes of lactic dehydrogenase |
| US3388044A (en) * | 1965-12-07 | 1968-06-11 | Warner Lambert Pharmaceutical | Process for differentiating the isoenzymes of lactic dehydrogenase |
| DE1959410C3 (de) * | 1969-11-26 | 1974-02-28 | Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim | Indikator zur Bestimmung der reduzierten Pyridincöenzyme |
| US3663374A (en) * | 1970-08-14 | 1972-05-16 | Geomet | Method and apparatus for quantitating enzyme activity |
| DE2061984C3 (de) | 1970-12-16 | 1974-04-11 | Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim | Reagens zur Bestimmung der Lactat-Dehydrogenase im Farbtest |
| US3862010A (en) * | 1972-06-09 | 1975-01-21 | Technicon Instr | Method of heat fractionating ldh into isoenzyme components |
| US3867258A (en) * | 1973-11-08 | 1975-02-18 | American Cyanamid Co | Lactate dehydrogenase test material |
| US4046634A (en) * | 1974-05-28 | 1977-09-06 | Mercer Donald W | Assay of isoenzymes by ion exchange chromatography |
| US4080263A (en) * | 1976-08-11 | 1978-03-21 | Boehringer Mannheim Gmbh | Process and reagent for the rapid quantitative determination of lactate or alanine |
-
1975
- 1975-08-27 YU YU02181/75A patent/YU218175A/xx unknown
- 1975-08-29 AT AT667075A patent/AT351173B/de not_active IP Right Cessation
- 1975-09-01 NL NLAANVRAGE7510277,A patent/NL178086C/xx not_active IP Right Cessation
- 1975-09-03 GB GB36351/75A patent/GB1527243A/en not_active Expired
- 1975-09-05 ZA ZA00755704A patent/ZA755704B/xx unknown
- 1975-09-09 IT IT69244/75A patent/IT1155451B/it active
- 1975-09-10 IL IL48071A patent/IL48071A/xx unknown
- 1975-09-10 DD DD188274A patent/DD120296A1/xx unknown
- 1975-09-10 RO RO7583353A patent/RO68447A/ro unknown
- 1975-09-11 CH CH1178775A patent/CH631209A5/de not_active IP Right Cessation
- 1975-09-11 SE SE7510130A patent/SE417109B/xx not_active IP Right Cessation
- 1975-09-11 DK DK406475A patent/DK144659C/da not_active IP Right Cessation
- 1975-09-11 BR BR7505850*A patent/BR7505850A/pt unknown
- 1975-09-11 AU AU84720/75A patent/AU503460B2/en not_active Expired
- 1975-09-11 CA CA235,284A patent/CA1076010A/en not_active Expired
- 1975-09-11 FI FI752550A patent/FI58943C/fi not_active IP Right Cessation
- 1975-09-11 ES ES440870A patent/ES440870A1/es not_active Expired
- 1975-09-12 TR TR19139A patent/TR19139A/xx unknown
- 1975-09-12 US US05/612,633 patent/US4003795A/en not_active Expired - Lifetime
- 1975-09-12 FR FR7528099A patent/FR2284882A1/fr active Granted
- 1975-09-12 HU HU75SCHA170A patent/HU171962B/hu unknown
- 1975-09-12 SU SU752171403A patent/SU663329A3/ru active
- 1975-09-12 BE BE159982A patent/BE833348A/xx not_active IP Right Cessation
- 1975-09-12 PL PL1975183289A patent/PL98619B1/pl unknown
- 1975-09-12 JP JP11079975A patent/JPS5512239B2/ja not_active Expired
- 1975-09-12 NO NO753119A patent/NO144929C/no unknown
- 1975-09-12 AR AR260373A patent/AR211523A1/es active
- 1975-09-12 CS CS756214A patent/CS251752B2/cs unknown
- 1975-09-12 IE IE2000/75A patent/IE41901B1/en unknown
- 1975-10-09 IN IN1960/CAL/1975A patent/IN142896B/en unknown
-
1976
- 1976-09-09 SU SU762405873A patent/SU657732A3/ru active
-
1978
- 1978-07-10 US US05/923,641 patent/US4266022A/en not_active Expired - Lifetime
-
1979
- 1979-11-15 HK HK798/79A patent/HK79879A/xx unknown
- 1979-11-22 JP JP54150822A patent/JPS5850720B2/ja not_active Expired
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| DK144659B (da) | Fremgangsmaade og reagens til bestemmelse af isoenzymerne 4 eller 5 af lactatdehydrogenase og et diagnostisk middel indeholdende reagenset | |
| Winterbourn et al. | The estimation of red cell superoxide dismutase activity | |
| EP0058334B1 (en) | Improved system for the determination of glucose in fluids | |
| US3791988A (en) | Diagnostic test for glucose | |
| US4391905A (en) | System for the determination of glucose in fluids | |
| BR112013012460B1 (pt) | Kit de diagnóstico para biomarcadores de benefício de saúde vaginal e método para a detecção de biomarcadores de benefício de saúde vaginal | |
| CN109900689B (zh) | 抗干扰膜及肝功能联合测试条 | |
| EP0491936B1 (en) | Very rapid detection of fungal infections | |
| US3699005A (en) | Method and article for detecting the fertile period | |
| US4724204A (en) | Diagnostic device for the detection of increased dehydrogenase or oxidase and the use thereof | |
| EP0028644A1 (en) | Impending ovulation test | |
| Divall et al. | Lactate dehydrogenase isozymes in vaginal swab extracts: a problem for the identification of menstrual blood | |
| US4157279A (en) | Process for the determination of at least one of the isoenzymes of lactatedehydrogenase | |
| EP1027600A2 (en) | Method for diagnosing cancer by measuring the presence of creatine kinase inhibitor | |
| CA1252703A (en) | Diagnostic saliva test for detecting periodontal disease | |
| WO1980002800A1 (en) | Specific impending ovulation indicator | |
| Fujimura et al. | A New Mass Screening Method of Detecting UDP-Galactose-4-Epimerase DeficiencyS | |
| DK159173B (da) | Fremgangsmaade til paavisning af bloedningsblod i mavesaft og proevesaet og fremkalderoploesning til anvendelse ved fremgangsmaaden | |
| EP0205844A1 (en) | Diagnostic method for detecting periodontal disease | |
| JPS62285799A (ja) | 体液に含有される成分の測定方法およびそれに用いる試薬 | |
| JPH0679560B2 (ja) | 胆汁酸測定用試験紙の製造方法 | |
| Whitby | The Evolution of Diagnostic Enzymology | |
| JPH066072B2 (ja) | ポリアミンの測定方法 | |
| Ellul-Micallef et al. | Determination of serum zinc levels in normal Maltese adults by atomic absorption spectrophotometry | |
| JPH04166766A (ja) | 尿中ビトロネクチンの定量法及びそれに使用する尿サンプルの保存法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PBP | Patent lapsed |