FI58943B - Foerfarande foer samtidig eller enskild bestaemning av laktatdehydrogenasernas isoenzymer - Google Patents
Foerfarande foer samtidig eller enskild bestaemning av laktatdehydrogenasernas isoenzymer Download PDFInfo
- Publication number
- FI58943B FI58943B FI752550A FI752550A FI58943B FI 58943 B FI58943 B FI 58943B FI 752550 A FI752550 A FI 752550A FI 752550 A FI752550 A FI 752550A FI 58943 B FI58943 B FI 58943B
- Authority
- FI
- Finland
- Prior art keywords
- lactate
- buffer
- ldh
- tampon
- nad
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 15
- 108010044467 Isoenzymes Proteins 0.000 claims description 28
- 102000003855 L-lactate dehydrogenase Human genes 0.000 claims description 24
- 108700023483 L-lactate dehydrogenases Proteins 0.000 claims description 24
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 20
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims description 16
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-M Lactate Chemical compound CC(O)C([O-])=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 13
- BAWFJGJZGIEFAR-NNYOXOHSSA-N NAD zwitterion Chemical compound NC(=O)C1=CC=C[N+]([C@H]2[C@@H]([C@H](O)[C@@H](COP([O-])(=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]3[C@H]([C@@H](O)[C@@H](O3)N3C4=NC=NC(N)=C4N=C3)O)O2)O)=C1 BAWFJGJZGIEFAR-NNYOXOHSSA-N 0.000 claims description 13
- RXGJTUSBYWCRBK-UHFFFAOYSA-M 5-methylphenazinium methyl sulfate Chemical compound COS([O-])(=O)=O.C1=CC=C2[N+](C)=C(C=CC=C3)C3=NC2=C1 RXGJTUSBYWCRBK-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 12
- 229950006238 nadide Drugs 0.000 claims description 11
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M sodium hydroxide Inorganic materials [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 10
- 238000003556 assay Methods 0.000 claims description 9
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims description 8
- 229930027945 nicotinamide-adenine dinucleotide Natural products 0.000 claims description 8
- 238000010186 staining Methods 0.000 claims description 8
- 108010088350 Lactate Dehydrogenase 5 Proteins 0.000 claims description 6
- 108010088351 lactate dehydrogenase 4 Proteins 0.000 claims description 5
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 5
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 3
- 125000003831 tetrazolyl group Chemical group 0.000 claims description 3
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 claims description 2
- 230000028327 secretion Effects 0.000 claims description 2
- 159000000000 sodium salts Chemical class 0.000 claims description 2
- FSVCQIDHPKZJSO-UHFFFAOYSA-L nitro blue tetrazolium dichloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].COC1=CC(C=2C=C(OC)C(=CC=2)[N+]=2N(N=C(N=2)C=2C=CC=CC=2)C=2C=CC(=CC=2)[N+]([O-])=O)=CC=C1[N+]1=NC(C=2C=CC=CC=2)=NN1C1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 FSVCQIDHPKZJSO-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims 3
- GSEJCLTVZPLZKY-UHFFFAOYSA-N Triethanolamine Chemical compound OCCN(CCO)CCO GSEJCLTVZPLZKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- 229940101270 nicotinamide adenine dinucleotide (nad) Drugs 0.000 claims 2
- 108010020056 Hydrogenase Proteins 0.000 claims 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 claims 1
- 210000003756 cervix mucus Anatomy 0.000 claims 1
- 108010088074 lactate dehydrogenase 3 Proteins 0.000 claims 1
- 229960000448 lactic acid Drugs 0.000 claims 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 29
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 12
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 9
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 8
- 239000011888 foil Substances 0.000 description 8
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 7
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 description 7
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- LCTONWCANYUPML-UHFFFAOYSA-M Pyruvate Chemical compound CC(=O)C([O-])=O LCTONWCANYUPML-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 210000001215 vagina Anatomy 0.000 description 6
- BOPGDPNILDQYTO-NNYOXOHSSA-N nicotinamide-adenine dinucleotide Chemical compound C1=CCC(C(=O)N)=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]2[C@H]([C@@H](O)[C@@H](O2)N2C3=NC=NC(N)=C3N=C2)O)O1 BOPGDPNILDQYTO-NNYOXOHSSA-N 0.000 description 5
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 5
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 4
- RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 1,4-Dioxane Chemical compound C1COCCO1 RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- ZWEHNKRNPOVVGH-UHFFFAOYSA-N 2-Butanone Chemical compound CCC(C)=O ZWEHNKRNPOVVGH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- BAWFJGJZGIEFAR-NNYOXOHSSA-O NAD(+) Chemical compound NC(=O)C1=CC=C[N+]([C@H]2[C@@H]([C@H](O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]3[C@H]([C@@H](O)[C@@H](O3)N3C4=NC=NC(N)=C4N=C3)O)O2)O)=C1 BAWFJGJZGIEFAR-NNYOXOHSSA-O 0.000 description 3
- YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N Toluene Chemical compound CC1=CC=CC=C1 YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229960000583 acetic acid Drugs 0.000 description 3
- 239000005515 coenzyme Substances 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 3
- 230000036285 pathological change Effects 0.000 description 3
- 231100000915 pathological change Toxicity 0.000 description 3
- 201000009030 Carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JVTAAEKCZFNVCJ-REOHCLBHSA-N L-lactic acid Chemical compound C[C@H](O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 2
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 2
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 2
- 229920002301 cellulose acetate Polymers 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 210000004392 genitalia Anatomy 0.000 description 2
- 239000012362 glacial acetic acid Substances 0.000 description 2
- RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N glutathione Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(=O)N[C@@H](CS)C(=O)NCC(O)=O RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N 0.000 description 2
- 238000007654 immersion Methods 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- ZXEKIIBDNHEJCQ-UHFFFAOYSA-N isobutanol Chemical compound CC(C)CO ZXEKIIBDNHEJCQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012464 large buffer Substances 0.000 description 2
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 2
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 2
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 2
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 239000012085 test solution Substances 0.000 description 2
- CYTCTRAEJYIZRX-UHFFFAOYSA-N (9a-hydroxy-3,5a-dimethyl-9-methylidene-2-oxo-3,3a,4,5,6,7,8,9b-octahydrobenzo[g][1]benzofuran-6-yl) acetate Chemical compound C1CC2(C)C(OC(C)=O)CCC(=C)C2(O)C2C1C(C)C(=O)O2 CYTCTRAEJYIZRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QLAJNZSPVITUCQ-UHFFFAOYSA-N 1,3,2-dioxathietane 2,2-dioxide Chemical compound O=S1(=O)OCO1 QLAJNZSPVITUCQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PKDBCJSWQUOKDO-UHFFFAOYSA-M 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride Chemical compound [Cl-].C1=CC=CC=C1C(N=[N+]1C=2C=CC=CC=2)=NN1C1=CC=CC=C1 PKDBCJSWQUOKDO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 208000009458 Carcinoma in Situ Diseases 0.000 description 1
- 229920000742 Cotton Polymers 0.000 description 1
- 108010024636 Glutathione Proteins 0.000 description 1
- 231100000416 LDH assay Toxicity 0.000 description 1
- 108010029485 Protein Isoforms Proteins 0.000 description 1
- 102000001708 Protein Isoforms Human genes 0.000 description 1
- 102000007562 Serum Albumin Human genes 0.000 description 1
- 108010071390 Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 239000002250 absorbent Substances 0.000 description 1
- 230000002745 absorbent Effects 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 239000000853 adhesive Substances 0.000 description 1
- 230000001070 adhesive effect Effects 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 239000006172 buffering agent Substances 0.000 description 1
- 230000003139 buffering effect Effects 0.000 description 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000011340 continuous therapy Methods 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 238000002845 discoloration Methods 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 229960003180 glutathione Drugs 0.000 description 1
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 201000004933 in situ carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 238000000099 in vitro assay Methods 0.000 description 1
- 238000011005 laboratory method Methods 0.000 description 1
- 108010087599 lactate dehydrogenase 1 Proteins 0.000 description 1
- 238000002843 lactate dehydrogenase assay Methods 0.000 description 1
- 150000003893 lactate salts Chemical class 0.000 description 1
- 101150095787 ldh2 gene Proteins 0.000 description 1
- 101150100271 ldhb gene Proteins 0.000 description 1
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- VMGAPWLDMVPYIA-HIDZBRGKSA-N n'-amino-n-iminomethanimidamide Chemical compound N\N=C\N=N VMGAPWLDMVPYIA-HIDZBRGKSA-N 0.000 description 1
- 238000010979 pH adjustment Methods 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 238000003672 processing method Methods 0.000 description 1
- 239000012429 reaction media Substances 0.000 description 1
- BOLDJAUMGUJJKM-LSDHHAIUSA-N renifolin D Natural products CC(=C)[C@@H]1Cc2c(O)c(O)ccc2[C@H]1CC(=O)c3ccc(O)cc3O BOLDJAUMGUJJKM-LSDHHAIUSA-N 0.000 description 1
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 238000005507 spraying Methods 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 230000008467 tissue growth Effects 0.000 description 1
- 210000004291 uterus Anatomy 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/26—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving oxidoreductase
- C12Q1/32—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving oxidoreductase involving dehydrogenase
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/805—Test papers
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/81—Packaged device or kit
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S604/00—Surgery
- Y10S604/904—Tampons
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Description
Γ-"1 Γ.η Μ1. KU U LUTUSJ ULKAISU ,-ΟΛ,-, jjSΓ« (11^ UTLÄGGNI NGSSKRIFT 5 8 9 4 3 C ί4- Patmttl ayönriL Uy 11 05 1901 ' ' latent meddelat ^ ^ (S1) Kv.Hc?/ii*t.a3 c 12 Q 1/32 SUOMI-FINLAND (21) PatMttlh>k«nu« — PatanCMMeiming 752550 <22, n.09.75 * ' (23) AlkupUvI—Glklghutadag 11.09*75 (41) Tullut JulklMkil — Whrtt affantlig 13.03.76 *tafitti.ja rakisterihmllltu* (44) NihtMUCp™ j. kuuLjuHu»™ pvm._ och r*gitt*rttyrdMn ' Antektn uttagd och utl.ikrtfc*n publkerad 30.01. Oi (32)(33)(31) Pyydetty •cuolkuut-euHH prtoritut 12.09.7^
Saksein Liittotasavalta-Förbundsrepubliken Tyskland(DE) P 21+1+37^1.0-52 (71) Koramanditgesellschaft Schwarzhaupt, Sachsenring 37-^7, D-5 Köln 1,
Saksan Liittotasavalta-Förbundsrepubliken Tyskland(DE) (72) Walther Lamprecht, Isernhagen, Saksan Liittotasavalta-Förbundsrepubliken Tyskland(DE) (7I+) Berggren Oy Ab (5I+) Menetelmä laktaattidehydrogenaasin isoentsyymien 1+ ja 5 samanaikaiseksi tai erilliseksi määrittämiseksi - Förfarande för samtidig eller enskild bestämning av laktatdebydrogenasernas isoenzymer
Esillä oleva keksintö koskee menetelmää laktaattidehydrogenaasin (LDH) isoentsyymien samanaikaiseksi määrittämiseksi saattamalla lak-taatti ja nikotiiniamidi-adeniini-dinukleotidi (NAD+) reagoimaan keskenään pyruvaatiksi.
On tunnettua, että laktaattidehydrogenaasi, jota tavallisesti nimitetään nimellä LDH, esiintyy viitenä isomuotona. Erillisten isoentsyymien aktiviteettimäärityksissä ovat erilaiset substraatti- ja pH-opti-mit tärkeitä tunnusmerkkejä, jotka eivät kuitenkaan yksittäisten iso-entsyymien suhteen ole toistaiseksi täysin tunnettuja.
Kaikkien isoentsyymien määrittämiseksi on tähän asti joko isoentsyymit erotettu elektroforeettisesti (vertaa esim. "Die Isoenzyme der Lactatdehydrogenase", sarja Biochemie und Klinik, S.L. Kowalewski, G. Thieme Verlag, Stuttgart 1972, sivu 29), tai koko LDH-määrä pidetty liuoksessa, LDH-2 - LDH-5 sidottu ja määritetty yleisimmin esiintyvä LDH-1. Katsaus senaikaisiin standardi käsittelymenetelmiin on esitetty
S
58943 mm. kirjassa "Enzymatische Analyse", osa I, Verlag Chemie, Weinheim 1970, sivu 557. Sen mukaisesti ehdotetaan käytettäväksi laktaatin muuttamiseksi pyruvaatiksi sellaista pH-optimia, joka on välillä 8,3 ja 8,9. Tosiasiallisesti käytetään kaikissa tunnetuissa määräysmene-telmissä emäksistä tai korkeintaan noin neutraalia pH-aluetta, jotta määritys käsittäisi isoentsyymit mahdollisimman täydellisesti.
Lamprecht ym. (Cardiology 56: 371-375 (1971/72) ja Fortschritte der Klinische Chemie, Enzyme und Hormone, Verlag der Wiener medizinischen Akademie 1972, s. 277-283» toteavat, että erilliset isoentsyymit voivat muuttua toisiksi pH-arvon muutoksen johdosta, so. tapahtuu kon-formaatiomuutos.
Esillä olevan keksinnön tarkoituksena on poistaa tunnetuissa menetelmissä esiintyvät monimutkaiset erotusvaiheet ja jatkuvasti esiintyvät kokonaismäärityksen epätarkkuudet ja aikaansaada optimaalinen LDH-isoentsyymien yhteismääritys, erikoisesti isoentsyymien 4 ja/tai 5, mutta myös isoentsyymin 3 määritys. Keksintö koskee edelleen reagenssi-yhdistelmää ja menetelmän spesifisiä käyttömahdollisuuksia.
Olemme todenneet, että pH-arvon alentaminen neutraalipisteen alapuolelle sinänsä tunnetussa laktaatin ja NAD:n reaktiossa pyruvaatiksi, aikaansaa optimaalisen kaikkien LDH-isoentsyymien toteamisen, mutta varsinkin isoentsyymin 4 ja 5 toteamisen. Tällöin on ennen kaikkea mielenkiintoista se, että ainoastaan suoritettaessa mittaus happamal-la pH-alueella voidaan LDH 4 ja 5 todeta täydellisesti. Tällöin optimoidaan LDH:n todettujen isoentsyymien kokonaismäärä suorittamalla mittaus happamalla alueella ja on mahdollista todeta täydellisesti LDH 4 tai 5 erikseen tai seoksena toistensa kanssa tai myös täydellisesti muiden LDH-isoentsyymien kanssa.
Keksinnön kohteena on täten menetelmä laktaattidehydrogenaasin (LDH) useampien tai kaikkien isoentsyymien samanaikaiseksi määritykseksi, erikoisesti isoentsyymien 4 ja 5 sekä pelkästään isoentsyymin 5 määrittämiseksi, saattamalla laktaatti ja nikotiiniamidi-adeniini-dinukleo-tidi (NAD+) reagoimaan keskenään pyruvaatiksi, jolle menetelmälle on tunnusomaista, mitä päävaatimuksessa esitetään.
Reaktiossa riittää vähäinen nestemäärä, :mutta se toteutetaan κuiteakin tarkoituksenmukaisesti juoksevassa väliaineessa.
5 58943
Edelleen on nimittäin todettu, että useampien isoentsyymien yhteis-määrityksen optimi riippuu myös puskurista. Useimpia puskureita käytettäessä on tämä optimi pH-alueella noin 6-6,5· Fosfaattipuskuria käytettäessä on sitävastoin esim. isoentsyymin 5 optimi pH-arvossa 7,9. Hapan pH-arvo soveltuu kuitenkin huomattavasti paremmin useampien isoentsyymien yhteismääritykseen. Erikoisesti soveltuu pH-alue 6,3-6,4 LDH 4 ja LDH 5 yhteismääritykseen, jotka voivat esiintyä esim. vaginaalinesteessä.
Reaktioväliaineeseen aikaansaadaan edullisesti suuri puskurikapasi-teetti. Tällä on se etu, että tutkittaessa kehon nesteitä käyttäen huomattavasti pH-arvosta 6 poikkeavaa pH-arvoa ei optimi pH-arvoa reaktion avulla aliteta eikä ylitetä.
Reaktio tapahtuu sinänsä tunnetulla tavalla lämpötilassa noin 37°C. Tällöin säädetään koentsyymimäärät siten, että ne riittävät optimaalisesti kaikille esiintyville isoentsyymeille, mikä riittävyys voidaan, seuraavassa esiintulevat seikat huomioonottaen, määrittää muutamien rutiinikokeiden avulla.
LDH-määritys on erittäin tärkeä erikoisesti kehon nesteitä tutkittaessa. Kun näitä isoentsyymejä voidaan todeta terveillä ihmisillä pääasiallisesti kudoksissa, esiintyy niitä epänormaalissa kudoskasvussa tai leukemiassa tai sentapaisissa sairauksissa huomattavissa väkevyyksissä seerumissa tai muissa kehon nesteissä. Erikoisesti voidaan todeta, että patologisissa muutoksissa niitä sisältyy emätinnestee-seen naisten alemmissa sukupuolielimissä.
Keksinnön mukainen määritysmenetelmä soveltuu käytettäväksi kaikissa kehon nesteissä. . Tutkittavan näytteen pH-arvon säätö riippuu näytteen omasta pH-arvosta. Joka tapauksessa tulee itse reaktiota varten pH-arvon olla alueella 6,3-6,4 ja erikoisesti noin 6,3· Rea-genssin koostumus määrityksen suorittamiseksi on säädettävä tämän mukaisesti .
Kun tavanomaisissa menetelmissä (vertaa Enzymatische Analyse, osa I edellä) pH-arvon optimiksi on esitetty arvoa välillä 8,3 ja 8,9, poiketaan keksinnön mukaisesti tietoisesti tästä pH-alueesta. Edellä kuvatun emäksisen pH-alueen toteamisen perusteena on katsottava olevan sen, että reaktiossa + LDH +
Laktaatti + NAD v ·Λ pyruvaatti + NADH + H
14 58943 syntyy yksi protoni stökiömetrisessä suhteessa laktaatti-reaktioon nähden, LDH:n tämän tasapainon siirtämiseksi oikealle toimitaan al-kalisella alueella.
Keksinnön mukaisesti sitävastoin puskuroidaan esim. määritettäessä seerumista tai plasmasta saatu tutkittava näyte trietanoliamiini-NaOH:n avulla pH-arvoon 6,3-6,4 ja myös tutkimuksessa käytettävä tut-kimusyhdistelmä (tutkimusreagenssi) säädetään tähän arvoon. Yleisesti sanoen suoritetaan säätö pH-arvoon 6,0-6,5 ja puskuroidaan siten, että itse määräyksessä esiintyy pH-arvo 6,3-6,4. Seerumialbumiiniin lisätään sinänsä tunnetulla tavalla glutationia.
Laktaattidehydrogenaasin isoentsyymit voidaan todeta optimaalisesti pH-arvossa 6,3-6,4 kun pidetään huolta siitä, että reaktiotasapaino, jolla on kaava
LDH
Laktaatti + NAD+ --------» pyruvaatti + NADH + H+ siirtyy peräkkäisten reaktioiden kautta oikealle. Tämän aikaansaamiseksi lisätään fenatsiinimetosulfaattia, jonka avulla koentsyymi NADH hapetetaan jatkuvasti uudelleen. Mittaus pH-alueella 6,0-6,5 tarjoaa ensimmäisen kerran mahdollisuuden todeta LDH 5 täydellisesti. Tämä on ennen kaikkea mielenkiintoista sen johdosta, koska LDH 5:n esiintyminen on indiisio syövän esiintymisestä ja täten sen tarkka ja herkkä mittaus mahdollistaa syövän varhaistoteamisen.
Määrättyjä kehon nesteitä käytettäessä ovat kuitenkin edellä kuvatut suhteet sikäli toisenlaisia, että niillä on huomattavasti pH-aluees-ta 6,3-6,4 poikkeava oma pH-arvo. Tällainen kehon neste on erikoisesti emätinneste, jonka pH-arvo on noin 4. Tällöin on säädettävä käytetyn koeyhdistelmän avulla reaktiolle optimaalinen pH-arvo, mikä merkitsee sitä, että koeyhdistelmällä on suurempi pH-arvo, joka sitten on säädettävä emätinnesteen pH-arvon avulla alueelle noin 6-6,5· Täten keksintö koskee keksinnön erään toisen toteuttamismuodon mukaisesti sellaista koeyhdistelmää, jonka muodostavat laktaatti, niko-tiiniamidi-adeniini-dinukleotidi (NAD+) ja tetratsoliumsuola entsy-maattisen NAD-reaktion tekemiseksi näkyväksi, joka yhdistelmä on puskuroitu sellaiseen pH-arvoon, että varsinaisessa reaktiossa esiintyy tutkittavassa kehon nesteessä puskurispesifinen pH-arvo 6,3-6,4, esim.
5 58943 käytettäessä trietanoliamiini-NaOH-puskuria tai muita happamalla alueella säädettäviä puskureita fosfaattipuskuria lukuunottamatta. Kuivapreparaattia käytettäessä on täten tämän pH-arvon esiinnyttävä preparaatin liuottamisen jälkeen. Sellainen pH-arvo, joka on noin 6,0-6,5, on suuruudeltaan sopiva.
Siinä erikoistapauksessa, että tutkitaan emätinnestettä, jonka alkuperäistä pH-arvoa ei ole muutettu, soveltuu erikoisesti sellainen määritys, jossa käytetään trietanoliamiini-NaOH-puskuria, jolloin koe-yhdistelmä säädetään pH-arvoon 7*0, kun taas pH-arvoon 6,3-6,¾ säädetyissä koenäytteissä myös koeyhdistelmä säädetään tähän arvoon.
Täten keksintö koskee edelleen keksinnön mukaisen menetelmän ja keksinnön mukaisen koeyhdistelmän käyttöä siinä erikoistapauksessa, että tutkitaan emätinnestettä emättimessä koemateriaalin avulla mahdollisen patologisen muutoksen toteamiseksi naisten alemmissa sukupuolielimissä, jolloin koeyhdistelmä on sovitettu sopivalle kantajalle, erikoisesti tamponille tai myös koeliuskalle, ja kastamalla emättimeen reaktio aikaansaadaan emättimessä olevien LDH-isoentsyymien kanssa pH-alueella noin 6,0-6,5, varsinkin 6,3-6,¾.
Koeyhdistelmän muodostaa liuos, jolla on seuraava koostumus.
Edullinen Alempi ja koeaine- ylempi määrä raj a-alue_
pH 7 g 5,0 mM 1,0 ~ 150 mM
Na-laktaatti (D,L-maitohapon 67,5 mM 20 350 mM
natriumsuola)
Penatsiinimetosulfaatti (PMS) 0,1 mM 0,01 - 1,0 mM
Nikotiiniamidi-adeniini-dinukleo-
tidi (NAD+) 1,5 mM 0,1 - 10 mM
Nitro-sini-tetratsoliumkloridi (NBT) 0,3 mM 0,01 - 1,5 mM
Tämä koeyhdistelmä suojataan valolta ja levitetään sopivalle kantajalle, erikoisesti tamponille, ja tätä säilytetään valolta suojaten käyttöhetkeen saakka.
LDH:n esiintyminen emätinnesteessä osoitetaan siten, että noin 5-10 minuutin kuluessa tamponi saa sinisen värin. Tällöin tapahtuvat seuraavat reaktiot: 6 58943 1. Laktaatti + NAD* 1,011 *· pyruvaatti + NADH + H* 2. NADH + fenatsiinimetosulfaatti + H+ -^ NAD+ + pelk. fenatsiinimetosulfaatti 3· Pelk. fenatsiinimetosulfaatti + nitro-sini-tetratsolium-kloridi -V formatsaani + fenatsiinimetosulfaatti.
Koska toinen ja myös kolmas laktaattisuolan muodostamiseksi kytketty reaktio aikaansaa muodostunutta, pelkistynyttä ko-entsyymiä, samoin kuin ensimmäinen reaktio, so. laktaattireaktion tasapaino siirtyy täten vielä voimakkaammin oikealle, tapahtuu puskuroitaessa koeliuos pH-arvoon 7,0 tamponin sovittamisen jälkeen tosiasiallinen reaktio pH-arvossa noin 6, erikoisesti 6,3-6,4. Tällöin osaa ottavat siihen optimaalisesti isoentsyymit, erikoisesti LDH-4 ja LDH-5, joita voi esiintyä emätinnesteen epänormaalisten muutosten johdosta.
Sellaisissa koeyhdistelmissä, joita on käytettävä emättimessä, on valittava puskuri, joka on stabiili ja kudosystävällinen. Tähän soveltuu erikoisesti trietanoliamiini-NaOH-puskuri.
Koeyhdistelmä voidaan sovittaa käytetylle kantajalle, erikoisesti tamponille, millä hyvänsä sopivalla tavalla. On tunnettua, että tällaisten koeyhdistelmien käsittelyn on tapahduttava valolta suojaten ja koeyhdistelmällä varustettua kantajaa on säilytettävä mahdollisimman tarkkaan valolta suojaten aina käyttöhetkeen saakka. Kaksi edullista koeyhdistelmän lisäämismenetelmää tamponiin muodostaa edullisen koeyhdistelmän noin 2 ml:n määrän ruiskuttaminen tai tamponin pään kyllästäminen noin 3/4 cm:n matkalta myös noin 2 ml:11a koeyh-distelmää ja tämän jälkeen seuraava tamponin kuivaaminen, erikoisesti jäähdytyskuivaaminen. Koeyhdistelmä voidaan kuitenkin myös lisätä ainoastaan vetonaruun, joka voidaan helposti poistaa myöhemmin tarpeen mukaan tamponista. Erittäin edullinen on myös koeyhdistelmän lisääminen nauha- tai kudosmuotoiseen puuvillatuotteeseen, joka on sovitettu tamponin sisään.
Koska käytettäessä patologisen muutoksen pikamääräystä naisten sukupuolielinten alaosassa sovittamalla emättimeen koekappale, ei luonnollisestikaan tiedetä, kuinka paljon läsnä on emätinnestettä, ja :-:oska tämä määrä vaihtelee, samoin kuin emätinnesteen pH-arvo, ta-pauksorta toiseen, on koeyhdistelmälle aikaansaatava suuri puskuri- 7 58943 kapasiteetti niin, että varsinaisessa määräyksessä reaktiokohdassa aikaansaadaan pH-arvo 6-6,5» erikoisesti noin 6,3-6,4. Koska vetona-russa olevan koeyhdistelmän puskurikapasiteetti ei usein tällöin käytännössä ole riittävä, on tarkoituksenmukaista tällaisessa tapauksessa lisätä tamponiin suurempi määrä puskuriainetta niin, että riittävä puskuroimiskyky aikaansaadaan joka tapauksessa vetonarua lähinnä olevassa tamponin osassa.
Tällaista koeyhdistelmällä varustettua kantajaa ei ole välttämätöntä käyttää lääkärin toimesta, vaan jokainen nainen voi toteuttaa sen käytön itse. Siniseksi värjäytyminen 15-30 minuutin pituisen tamponin viipymisajan jälkeen emättimessä osoittaa patologisen muutosvaaran ja on varoitusmerkki lääkärintutkimusta varten.
Jos käytetty tamponi tai vetonaru tai nyöri varastoidaan, mikä erikoisesti silloin, kun lääkäri suorittaa tutkimuksen, voi olla tarpeen, tai silloin kun potilas haluaa lähettää tamponin lääkärille, on suoritettava käytetyn tamponin jälkikäsittely, ja erikoisesti hajuprob-leemien välttämiseksi on tamponi desinfioitava ja aikaansaatava värjäyksen stabiloituminen, jotta se kestäisi pidempiä varastoimisaikoja. Edelleen on todettu, että tämä jälkikäsittely voidaan toteuttaa kastamalla tutkimukseen käytetty tamponi 20 itseen "Paraloidi-liuokseen" (Paraloidia valmistaa toiminimi Merck, 20 imen toluoliliuos).
Kun tähänastiset menetelmät LDH-määritysten. suorittamiseksi ovat olleet monimutkaisia laboratoriomenetelmiä, joilla on sitäpaitsi edellä kuvatut haitat, on täten aikaansaatu mahdollisuus suorittaa nopea ja riittävä kvantitatiivinen määritys määrätyissä käyttötarkoituksissa esim. käyttäen emätinnestettä kouluttamattoman käyttäjän toimesta.
Tämä on erittäin tärkeätä kasvainpotilaiden kysymyksessä ollessa. Suurelta lukumäärältä kasvainpotilaita on kirjallisuuden perusteella tähän asti tutkittu 26 entsyymiä. LDHrlla on suurin diagnostinen herkkyys; seerumissa (ei eritteissä) on todettu 40-90 %:n suuruinen kasvu. Kasvaimen kysymyksessä ollessa soveltuu LDH:n sarjamääritys seerumissa jatkuvaan terapiavalvontaan. LDH:n kasvu ei tosin ole millään lailla tuumorispesifinen. Se osoittaa kuitenkin aina vakavan sairauden ja on yhdessä muiden tunnusmerkkien kanssa sopiva tukemaan oletettua tuumorin diagnoosia.
Esillä oleva edullinen koeyhdistelmä tamponeihin lisättynä kokeiltiin sarjatutkimusta käyttäen noin 100 terveellä naisella ja sellaisilla 8 58943 potilailla, joilla oli sairautena Carsinoma colli uteri, Carcinoma corporis ja Carcinoma in situ. Parhaiden tulosten aikaansaamiseksi pidetään tamponia paikoillaan koetta suoritettaessa 15-30 min. Poistamisen jälkeen voidaan välittömästi todeta seuraavat muutokset: ei värjäytymistä negatiivinen sinipunainen värjäytyminen vielä negatiivinen kirkkaansininen, jossa violetti värisävy + sininen ++ tummansininen +++
Jos tapahtui sininen (++) tai tummansininen (+++) värjäytyminen, esiintyi kaikissa tapauksissa karsinooma, joka vastasi aiha patologisia löytöjä. Tummansinisen värjääntymisen tapahtuessa voitiin melkein poikkeuksetta diganoosissa todeta muutosvyöhyke. Sinipunainen värjäytyminen esiintyi ainoastaan terveillä naisilla (myös raskailla naisilla aina 15· vuorokauteen saakka).
Määräysmenetelmä in vitro, myös esim. seerumin ja plasman tutkimus, suoritetaan sinänsä tunnetulla tavalla. Ainoa tarpeellinen muutos on puskurispesifisen pH-arvon säätö, esim. noin 6-6,5, tähän asti käytettyihin verrattuna, jotka ovat olleet voimakkaasti emäksisiä pH-arvoja niin, että tämän tarkempi kuvaaminen ei ole välttämätöntä. Absoluuttisen määräyksen toteuttamiseksi voidaan suorittaa värin muutoksen kalibrointi tavanomaisen LDH-kokeen yhteydessä. Kalibroin-tinäyte voidaan, samoin kuin tamponin säilömisen yhteydessä on esitetty, säilöä värin suhteen jonkin aikaa.
Seuraavat esimerkit esittävät vielä kaksi mahdollisuutta lisätä koeyhdistelmä tamponille.
a) Kastamismenetelmä
Tavallisten hygienisten tamponien (esim. "o.b.", toiminimi Dr. Karl Hahn) ympärille kiedotaan tiiviisti 1 cm:n leveä Tesa-nauha niiden keskikohdalle vyömäisesti kerran tai kaksi kertaa. Tamponin vaippa avataan tamponin vastakkaiselta puolelta, jossa ulosvetolanka sijaitsee. Tällöin on tamponin sylinteripinta vapaana. Tavanomaisista rea-genssilaseista, joiden tilavuus on 18 ml (DIN-muoto; Schott, Mainz) poistetaan pohjakansi. Täten saatuihin lasiputkiin sovitetaan tamponi siten, että toiselta puolen aukaistu tamponi nojaa pinnoiltaan ta- 9 58943 somaisesti putkenpäiden suhteen. Poistolanka kiinnitetään putken toiseen päähän kiinnelaastarilla, Tesa-nauhalla tai senkaltaisella. Putken sivut avattuine tamponipäällysteineen kastetaan kohdassa 1) mainittuun liuokseen. Tamponia kohden annetaan imeytyä 2,0 ml liuosta. Liuoksen lisääminen ja kaikki kuvatut toimenpiteet, jotka tapahtuvat yhdessä koeliuosseoksen käytön kanssa, on toteutettava pimeässä monokromaattista valoa käyttäen (punaisella alueella oleva valo, "punavalo" ).
Tällä tavoin valmistettu tamponi sekä lasiputket jäähdytyskuivataan (lyofilisoidaan) pimeässä. Kuivatut tamponit poistetaan putkista esim. poistonarun avulla ja niitä säilytetään jatkuvasti pimeässä pakattuina valoa läpäisemättömään paperiin tai folioon tai värjättyyn paperiin .
b) Injektiomenetelmät
Seuraavat toimenpiteet suoritetaan pimeässä kammiossa. 2 ml:n suihkun avulla injektoidaan 2,0 ml koekombinaatioliuosta 1) tamponiin. Tamponin vastakkaisella puolella, jossa sijaitsee vetonaru, pistetään injektioneula vaipan lävitse tamponiin ja neula johdetaan samalla hitaasti suihkuttaen pituussuunnassa aina tamponin toiseen päähän saakka. Näin on aikaansaatu se, että tamponi on kostutettu tasaisesti. Tämän jälkeen tamponit jäähdytyskuivataan ja pakataan kohdassa a) kuvatulla tavalla ja varastoidaan.
Reagenssiseos voidaan periaatteessa sovittaa mille hyvänsä imukykyi-selle kantajalle. Emätinnesteen määräämiseksi tai näytteen ottamiseksi emättimestä ovat läpinäkyvät foliot osoittautuneet erittäin tarkoituksenmukaisiksi, esim. selluloosa-asetaattifoliot, jollaisia käytetään elektroforeesis-tarkoituksissa, tai myös tuote "Parafilm M" (American Chemcompany). Sellaisissa kohdissa, joissa foliot joutuvat kosketuksiin LDH:n kanssa koetta suoritettaessa, tapahtuu värjäytyminen siniseksi. Tällaisilla folioilla on etuna se, että ne ovat mekaanisesti lujempia kuin suodatinpaperi ja voidaan lisäksi tehdä stabiloimista tai varastoimista varten täysin läpinäkyviksi. Tällöin pysyy värin voimakkuus täysin muuttumattomana. .
Selluloosa-asetaattifolioiden läpinäkyväksi tekevinä kylpyinä voidaan käyttää seuraavia: 10 58943 a) metanol::jääetikka suhteessa 85=15* b) isobutanoli:dioksaani suhteessa 1:1 - 3=7, c) metyylietyyliketoni:dioksaani suhteessa 3=2, d) etikkaesteri:dioksaani suhteessa 3=2, e) metanoli:jääetikka:glyseriini suhteessa 87=12:1.
Parafilmifolioita varten soveltuu lyhyt kastaminen 7,5 ?=seen etikka-happo liuokseen .
Voidaan myös suorittaa öljykäsittely. Tällöin soveltuvat käytettäviksi "Whitemore-0il 120” tai ”0ndino-0il 17" (Shell).
2 Näitä folioita, joiden pinta on 1,5-2,0 cm , voidaan tarkoituksenmukaisesti käyttää lääkärin toimesta oletetun limakalvon muutoksen kol-poskooppiseen tutkimukseen emättimessä. Sellaisissa paikoissa, j'oissa esiintyy solupintoja, j'oissa on tuumori, tapahtuu paikoittaisesti värjäytyminen samalla tavoin kuin tamponissa.
Claims (5)
1. Menetelmä laktaattidehydrogenaasiaktiivisuuden määrittämiseksi emättimen eritteessä kantajan, edullisesti tamponin, avulla, johon on pantu koostumusta, joka sisältää laktaatti NAD:tä (niko-tiiniamidi-adeniini-dinukleotidi), PMS:a (fenatsiinimetosulfaatti), tetratsoliumsuolaa ja puskuria, tunnettu siitä, että puskuria käytetään sellaisessa määrin, että se kykenee muuttamaan kantajan absorboiman eritemäärän pH:n 6-6,5 :ksi, edullisesti 6,3-6,4 :ksi, jolla tavalla isoentsyymien, erityisesti LDH-4:n ja LDH-5:n ja jossain määrin LDH-3:n aktiivisuus rekisteröidään kantajan siniseksi värjäytymisen muodossa.
2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että määritys toteutetaan trietanoliamiini-NaOH-puskuri-järjestelmässä pH-arvossa 6-6,5, erikoisesti 6,3-6,4.
3. Kantajalle, edullisesti tamponille, tuotu reagenssi kaikkien tai useiden laktaattidehydrogenaasin isoentsyymien määrittämiseksi patenttivaatimuksen 1 mukaisesti, tunnettu siitä, että se koostuu laktaatista, nikotiiniamidi-adeniini-dinukleotidista, PMS: stä, ja tetratsoliumsuolasta, joka tekee entsymaattisen NAD-pelkis-tyksen näkyväksi, sekä puskurista, joka varmistaa, että reaktio laktaattihydrogenaasin kanssa tapahtuu pH-arvossa 6-6,5, edullisesti arvossa 6,3-6,4.
4. Patenttivaatimuksen 3 mukainen reagenssi, tunnettu siitä, että se sisältää puskurina trietanoliamiini-NaOH:ta.
5. Patenttivaatimuksen 4 mukainen reagenssi, tunnettu siitä, että se sisältää 1,0-150 mM trietanoliamiinipuskuria, pH 7,0, 20-350 mM Na-laktaattia (DL-maitohapon natriumsuola), 0,01-1,0 mM fenatsiinimetosulfaattia (PMS), 0,1-10 mM nikotiiniamidi-adeniini-dinukleotidia (NAD ), ja 0,01-1,5 mM nitro-sininen-tetratsoliumkloridia (NBT). 1 Patenttivaatimuksen 5 mukainen reagenssi, tunnettu siitä, että se sisältää 5,0 mM trietanoliamiinipuskuria, pH 7,0, 67,5 mM Na-laktaattia, 12 58943 0,1 mM fenatsiinimetosulfaattia (PMS), 1,5 mM nikotiiniamidi-adeniini-dinukleotidia (NAD ), ja 0. 3.mM nitro-sininen-tetratsolium-kloridia (NBT).
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE19742443741 DE2443741C3 (de) | 1974-09-12 | Verfahren zur gemeinsamen Bestimmung der Isoenzyme 4 und 5 der LDH | |
| DE2443741 | 1974-09-12 |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| FI752550A FI752550A (fi) | 1976-03-13 |
| FI58943B true FI58943B (fi) | 1981-01-30 |
| FI58943C FI58943C (fi) | 1981-05-11 |
Family
ID=5925603
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| FI752550A FI58943C (fi) | 1974-09-12 | 1975-09-11 | Foerfarande foer samtidig eller enskild bestaemning av laktatdehydrogenasernas isoenzymer |
Country Status (31)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US4003795A (fi) |
| JP (2) | JPS5512239B2 (fi) |
| AR (1) | AR211523A1 (fi) |
| AT (1) | AT351173B (fi) |
| AU (1) | AU503460B2 (fi) |
| BE (1) | BE833348A (fi) |
| BR (1) | BR7505850A (fi) |
| CA (1) | CA1076010A (fi) |
| CH (1) | CH631209A5 (fi) |
| CS (1) | CS251752B2 (fi) |
| DD (1) | DD120296A1 (fi) |
| DK (1) | DK144659C (fi) |
| ES (1) | ES440870A1 (fi) |
| FI (1) | FI58943C (fi) |
| FR (1) | FR2284882A1 (fi) |
| GB (1) | GB1527243A (fi) |
| HK (1) | HK79879A (fi) |
| HU (1) | HU171962B (fi) |
| IE (1) | IE41901B1 (fi) |
| IL (1) | IL48071A (fi) |
| IN (1) | IN142896B (fi) |
| IT (1) | IT1155451B (fi) |
| NL (1) | NL178086C (fi) |
| NO (1) | NO144929C (fi) |
| PL (1) | PL98619B1 (fi) |
| RO (1) | RO68447A (fi) |
| SE (1) | SE417109B (fi) |
| SU (2) | SU663329A3 (fi) |
| TR (1) | TR19139A (fi) |
| YU (1) | YU218175A (fi) |
| ZA (1) | ZA755704B (fi) |
Families Citing this family (20)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4311791A (en) * | 1978-06-05 | 1982-01-19 | Bernstein Larry H | Automated kinetic determination of lactate dehydrogenase isoenzymes in serum |
| US4309184A (en) * | 1980-05-08 | 1982-01-05 | Majid Ali | Method of determining food or chemical allergy and intolerance |
| US4543327A (en) * | 1980-06-10 | 1985-09-24 | Bernstein Larry H | Malate dehydrogenase method |
| DE3231288C2 (de) * | 1982-08-23 | 1984-06-28 | MEDI-PHARMA Vertriebsgesellschaft mbH, 5000 Köln | Diagnostische Vorrichtung und ihre Verwendung |
| DE3231287C2 (de) * | 1982-08-23 | 1984-09-06 | MEDI-PHARMA Vertriebsgesellschaft mbH, 5000 Köln | Verfahren zum Herstellen einer diagnostischen Vorrichtung |
| GB2147415B (en) * | 1983-08-05 | 1987-02-11 | Powell & Scholefield Limited | Device and method for antibiotic sensitivity testing |
| DK427784A (da) * | 1984-09-06 | 1986-03-07 | Forenede Bryggerier As | Fremgangsmaade og apparat til bestemmelse af vitalitet i froe |
| US4849347A (en) * | 1984-11-29 | 1989-07-18 | Hoffmann-La Roche Inc. | Colorimetric biological assay |
| US5141853A (en) * | 1988-07-22 | 1992-08-25 | Abbott Laboratories | Determination of ammonia levels in a sample |
| EP0401641B1 (en) * | 1989-06-09 | 1995-01-25 | Abbott Laboratories | Method for assaying isoenzymes |
| US5468236A (en) * | 1993-06-09 | 1995-11-21 | Kimberly-Clark Corporation | Disposable absorbent product incorporating chemically reactive substance |
| US7947467B2 (en) * | 2001-07-19 | 2011-05-24 | Common Sense Ltd. | Methods for monitoring pathological conditions in a female subject |
| US20070134740A1 (en) * | 2005-12-12 | 2007-06-14 | David Brusilovsky | Compositions and articles for detection of analytes exceeding a pre-set threshold |
| US7083569B2 (en) * | 2001-08-03 | 2006-08-01 | Zassi Medical Evolutions, Inc. | Ostomy cartridge |
| US20070031914A1 (en) * | 2005-08-05 | 2007-02-08 | Wei Zhu | Devices for analyte assays and methods of use |
| US8053625B2 (en) * | 2006-12-14 | 2011-11-08 | Kimberly-Clark Worldwide, Inc. | Absorbent articles including a body fluid signaling device |
| CN109613177B (zh) | 2014-07-01 | 2021-08-20 | 科蒙森斯公司 | 用于鉴定羊水的诊断组合物 |
| EP3914163A4 (en) * | 2019-01-23 | 2022-04-13 | Gina-Life Diagnostics Ltd. | CANCER DIAGNOSTIC AND MONITORING APPARATUS, SYSTEMS AND METHODS |
| WO2020170977A1 (ja) | 2019-02-19 | 2020-08-27 | 日東電工株式会社 | 二次元材料積層体の製造方法及び積層体 |
| US20230054322A1 (en) * | 2021-08-23 | 2023-02-23 | Leslie P. Taylor | Urine indication pad with inbuilt diagnostics for training and indication of potential disease |
Family Cites Families (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US2905169A (en) * | 1955-03-10 | 1959-09-22 | Herbert E Nieburgs | Device for cancer detection |
| US2999052A (en) | 1959-03-16 | 1961-09-05 | Miles Lab | Composition for colorimetric test for serum enzymes |
| US3326777A (en) * | 1964-12-10 | 1967-06-20 | Warner Lambert Pharmaceutical | Process for differentiating the isoenzymes of lactic dehydrogenase |
| US3388044A (en) * | 1965-12-07 | 1968-06-11 | Warner Lambert Pharmaceutical | Process for differentiating the isoenzymes of lactic dehydrogenase |
| DE1959410C3 (de) * | 1969-11-26 | 1974-02-28 | Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim | Indikator zur Bestimmung der reduzierten Pyridincöenzyme |
| US3663374A (en) * | 1970-08-14 | 1972-05-16 | Geomet | Method and apparatus for quantitating enzyme activity |
| DE2061984C3 (de) | 1970-12-16 | 1974-04-11 | Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim | Reagens zur Bestimmung der Lactat-Dehydrogenase im Farbtest |
| US3862010A (en) * | 1972-06-09 | 1975-01-21 | Technicon Instr | Method of heat fractionating ldh into isoenzyme components |
| US3867258A (en) * | 1973-11-08 | 1975-02-18 | American Cyanamid Co | Lactate dehydrogenase test material |
| US4046634A (en) * | 1974-05-28 | 1977-09-06 | Mercer Donald W | Assay of isoenzymes by ion exchange chromatography |
| US4080263A (en) * | 1976-08-11 | 1978-03-21 | Boehringer Mannheim Gmbh | Process and reagent for the rapid quantitative determination of lactate or alanine |
-
1975
- 1975-08-27 YU YU02181/75A patent/YU218175A/xx unknown
- 1975-08-29 AT AT667075A patent/AT351173B/de not_active IP Right Cessation
- 1975-09-01 NL NLAANVRAGE7510277,A patent/NL178086C/xx not_active IP Right Cessation
- 1975-09-03 GB GB36351/75A patent/GB1527243A/en not_active Expired
- 1975-09-05 ZA ZA00755704A patent/ZA755704B/xx unknown
- 1975-09-09 IT IT69244/75A patent/IT1155451B/it active
- 1975-09-10 IL IL48071A patent/IL48071A/xx unknown
- 1975-09-10 DD DD188274A patent/DD120296A1/xx unknown
- 1975-09-10 RO RO7583353A patent/RO68447A/ro unknown
- 1975-09-11 CH CH1178775A patent/CH631209A5/de not_active IP Right Cessation
- 1975-09-11 SE SE7510130A patent/SE417109B/xx not_active IP Right Cessation
- 1975-09-11 DK DK406475A patent/DK144659C/da not_active IP Right Cessation
- 1975-09-11 BR BR7505850*A patent/BR7505850A/pt unknown
- 1975-09-11 AU AU84720/75A patent/AU503460B2/en not_active Expired
- 1975-09-11 CA CA235,284A patent/CA1076010A/en not_active Expired
- 1975-09-11 FI FI752550A patent/FI58943C/fi not_active IP Right Cessation
- 1975-09-11 ES ES440870A patent/ES440870A1/es not_active Expired
- 1975-09-12 TR TR19139A patent/TR19139A/xx unknown
- 1975-09-12 US US05/612,633 patent/US4003795A/en not_active Expired - Lifetime
- 1975-09-12 FR FR7528099A patent/FR2284882A1/fr active Granted
- 1975-09-12 HU HU75SCHA170A patent/HU171962B/hu unknown
- 1975-09-12 SU SU752171403A patent/SU663329A3/ru active
- 1975-09-12 BE BE159982A patent/BE833348A/xx not_active IP Right Cessation
- 1975-09-12 PL PL1975183289A patent/PL98619B1/pl unknown
- 1975-09-12 JP JP11079975A patent/JPS5512239B2/ja not_active Expired
- 1975-09-12 NO NO753119A patent/NO144929C/no unknown
- 1975-09-12 AR AR260373A patent/AR211523A1/es active
- 1975-09-12 CS CS756214A patent/CS251752B2/cs unknown
- 1975-09-12 IE IE2000/75A patent/IE41901B1/en unknown
- 1975-10-09 IN IN1960/CAL/1975A patent/IN142896B/en unknown
-
1976
- 1976-09-09 SU SU762405873A patent/SU657732A3/ru active
-
1978
- 1978-07-10 US US05/923,641 patent/US4266022A/en not_active Expired - Lifetime
-
1979
- 1979-11-15 HK HK798/79A patent/HK79879A/xx unknown
- 1979-11-22 JP JP54150822A patent/JPS5850720B2/ja not_active Expired
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| FI58943B (fi) | Foerfarande foer samtidig eller enskild bestaemning av laktatdehydrogenasernas isoenzymer | |
| FI76379C (fi) | Medel och foerfarande foer snabb diagnos av tandkaries medelst ett icke-vaotfoerfarande. | |
| US8906693B2 (en) | Materials and methods for measuring nitric oxide levels in biological fluids | |
| KR101821002B1 (ko) | 양호한 건강의 바이오마커를 검출하기 위한 질 표시기 | |
| Meulemans et al. | Micro carbon electrode for intracellular voltammetry | |
| WO2016058511A1 (zh) | 一种血清岩藻糖苷酶检测试剂盒 | |
| JPS6035118B2 (ja) | 液体試験試料中グルコ−ス測定用の試験組成物、試験具及びそれらを用いた測定方法 | |
| JPS60230065A (ja) | 血糖値全日プロフイル作成用テスト・ストリツプおよびその製造方法 | |
| Peterson et al. | Plasma 5-S-cysteinyldopa differentiates patients with primary and metastatic melanoma from patients with dysplastic nevus syndrome and normal subjects | |
| Zhang et al. | A novel quinoline-based fluorescent probe for real-time monitoring of Cys in glioma | |
| Elhilali et al. | Lactate dehydrogenase isoenzymes in hyperplasia and carcinoma of the prostate: a clinical study | |
| JPS5955199A (ja) | 診断具 | |
| CN112485246A (zh) | 一种单项上皮组织肿瘤细胞渗液游离血红素显色液及制备方法 | |
| Liu et al. | A self-immobilizing NIR probe for non-invasive imaging of senescence | |
| EP0028644A1 (en) | Impending ovulation test | |
| RU2517541C1 (ru) | Способ прогнозирования возникновения рецидива рака вульвы | |
| US4157279A (en) | Process for the determination of at least one of the isoenzymes of lactatedehydrogenase | |
| Dernroth et al. | Pheomelanin-related benzothiazole isomers in the urine of patients with diffuse melanosis of melanoma | |
| CN110343099B (zh) | 一种基于双光子荧光团的有机化合物及应用 | |
| CN107132218B (zh) | 一种人体细胞瓦博格效应简易检测试剂及其制备方法和应用 | |
| Toates | The forensic identification of semen by isoelectric focusing of seminal acid phosphatase | |
| CN111575341B (zh) | 一种利用巯丙基琼脂糖球负载尿酸酶和过氧化氢酶检测尿酸的方法 | |
| WO1980002800A1 (en) | Specific impending ovulation indicator | |
| CN117804876B (zh) | 一种叶酸受体介导上皮组织细胞染色液及其制备方法 | |
| RU2111495C1 (ru) | Способ диагностики злокачественной опухоли |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM | Patent lapsed |
Owner name: ESAI CO. LTD. |