DE884854C - Verfahren zur Darstellung von blutgerinnungsfoerdernden Praeparaten - Google Patents

Description

• Verfahren zur Darstellung von blutgerinnungsfördernden Präparaten Man hat bereits wirksame blutgerinnungsfördernde Präparate dadurch gewonnen., daß man Zitratplasma ;defibrinierte,diese fibrinogenfreie Lösung mit dem zofachen Volumen destillierten Wassers versetzte, durch Durchleiten von Kohlensäure die Euglobuline fällte, das abzentrifugierte Sediment in physiologischer Kochsalzlösung auflöste oder suspendierte. Calciumionen und Th.rombokinase zugab. Der Wirkstoff wurde mit Alkohol gefällt. Ein anderes bekanntes Verfahren zur Herstellung von blutgerinnungsfördernden Präparaten besteht,dari.n, .daß man Oxalatplasm.a mit io Teilen destillierten Wassers verdünnte, mit io/oiger Essigsäure ansäuerte, bis der isoelektrische Punkt für Globuline erreicht war, das Sediment abtrennte, im gleichen Volumen physiologischer Kochsalzlösung auflöste und schließlich mit Aceton fällte. Man hat auch schon Zitratplasma gegen destilliertes Wasser dialysiert und festgestellt, daß sämtliche an der Blutgerinnung beteiligten Stoffe in der hierbei erhaltenen Globulinfraktion zu suchen sind.
• Nach der Erfindung gelingt es, hochwirksame blutgerinnungsfördernde Präparate aus Blut, Blutserum oder Blutplasma durch Dialyse dadurch zu gewinnen, daß man nach der Dialyse in an sich bekannter Weise ansäuert, gegebenenfalls nach Verdünnung weitere Eiweißkörper ausfällt, die gesamten Niederschläge abtrennt, in Neutralsalzlösu.ngen löst, mit Erdalkaliionen behandelt und gegebenenfalls den Wirkstoff in festerForm abscheidet. Durch das Verfahren wird der gerin:nungsfördernde Stoff in guter Ausbeute erhalten.
• Das Plasma kann in üblicher Weise mit gerinnungshemmenden Substanzen, wie Natriumoxalat oder Natriumzitrat, versetzt sein. Die Dialyse muß nicht bis zur völligen Entfernung der Salze durchgeführt werden. In diesem Fall kann man durch Verdünnen der Innenflüssigkeit noch weitere Eiweißstoffe ausfällen. Einen weiteren Niederschlag erzielt man durch schwaches Ansäuern ,z. B-: ° mit Essigsäure oder Kohlensäure. Die gesamten Niederschläge werden abgetrennt, wobei es gleichgültig ist, ob man .die Abtrennung nach jeder einzelnen Stufe gesondert oder erst nach der letzten Stufe gemeinsam vornimmt. Man kann auch iso vorgehen, daß man zunächst dialysiert, dann ansäuert, die Niederschläge abtrennt und sich schließlich von der vollständigen Ausfällung überzeugt, indem man das Filtrat mit Wasser verdünnt und dabei, gegebenenfalls nach weiterem Ansäuern, auftretende Niederschläge ebenfalls sammelt.
• Die so gewonnenen Eiweißniederschläge, die in dieser Form keinen wesentlichen Einfluß auf die Blutgerinnung besitzen, werden: gelöst in Neutralsalzlösungen und mit Erdalkali.ionen versetzt. Dabei tritt nach einigem Stehen eine Ausfällung von Fibrin ein. Es ist zweckmäßig, die Ausscheidung .des Fibrins durch Zugabe von in an sich bekannter Weise, z. B. aus Gehirn oder Lunge gewonnenen Präparaten von Thromboleinase zu beschleunigen. Im Verlauf der Abscheidung ödes Fibrins werden aus den Bluteiweißstoffen hochwirksame blutgerinnungsfördernnde Substanzen gebildet, die zunächst vom Fibrin absorbiert werden. Im Verlauf der Alterung des Fibrins werden nach einigen Stunden @die blutgerinnungsfördernden Substanzen in Freiheit gesetzt und gelben wieder in Lösung. Diese Lösung kann man nach Abtrennen .des Fibrins und Entfernung des Calciums z. B. durch Dialyse gegen- Neutralsalzlösungen als -solche, z. B. zum Tränken von Verbandstoffen, verwenden.
• Man kann sie auch in schonender Weise z. B. durch Eindampfen im Vakuum oder durch- Ausfällung ihrer wirksamen Bestandteile mit mit Wasser mischbaren Lösemitteln zur Trockne bringen. Vorteilhafter ist es, die Lösung gegen Wasser zu dialysieren, wobei die Hauptmenge der wirksamen Substanz ausfällt und durch Abzentrifugieren und schonendes Trocknen in haltbarer, fester, leicht «nieder in Neutralsalzlösungen löslicher Form gewonnen. werden kann. Hierbei wird ein Wirksamkeitsverust vermieden, der bei' dem üblichen Ausfällen mit mit Wasser mischbaren Lösungsmitteln, wie Alkohol und Aceton, eintritt. Man kann auch so vorgehen, daß man den noch nicht gealterten Fibrin-Niederschlag sofort nach der Fällung abtrennt und z. B. mit Neutralsalzlösungen, wie physiologischer Kochsalzlösung, extrahiert. Es ist aber auch möglich, den sofort nach der Fällung abgetrennten Fibrin-Niederschlag nach schonender Trocknung als solchen zu verwenden. Beispiel i i 1 Rinder-Oxalatplasma wird in Cellöphanschläuchen gegen Wasserdialysiert. Ohne Rücksicht auf den ausgeschiedenen Niederschlag verdünnt man und leitet dann Kohlensäure ein. Dabei vermehrt sich der Niederschlag erheblich. Man zentrifugiert die ausgefallenen Eiweißstoffe ab, löst sie in 5oo ccm -o,5°/oiiger Kochsalzlösung und fügt 2,5 g Geh.irn-Acetöntrockenpulver zu. Man läßt etwa 15 Minuten bei 38° stehen und rührt die Flüssigkeit nach Zusatz von 25o mg Calciumch:lori.d, bis das Fibrin ausgefallen ist. Die Masse bleibt io Stunden im Eisschrank stehen. Dann wird das Fibrin .durch Zentrifugieren entfernt. Die überstehende Lösung wird gegen Wasser @dialysiert. Dabei fällt die Hauptmenge der wirksamen Sustanz aus. Man zentrifugiert diese ab und trocknet sie im Vakuum. Aus der- überstehenden Flüssigkeit kann man weitere Mengen durch Fällung mit Aceton gewinnen. Ausbeute: 1.2 g. Löst man io mg dieser Substanz in 2 ccm- o,9°/oiger Kochsalzlösung, so bringen o, 1,5 ccm dieser Lösung o, 15 ccm Hunde-Oxalatplasma unter Zusatz von in/4o Ca C12 Lösung in q. Sekunden zur Gerinnung.
• Beispi.el2 i 1 Schweineblut wird in Cellophanschläuchen gegen Wasser dialysiert. Den ausfallenden Niederschlag schleudert man ab. Die überstehendeFlüssigkeit wird mit io/oiggerEssigsäure bis zum maximalen Niederschlag versetzt, fder abzentrifugiert wird. Zur Entfernung,der Essigsäure dialysiert man kurz gegen Wasser und leitet dann in die Innenflüssigkeit C O., ein. Hierbei fällt eindritter Niederschlag .aus. Die .drei Niederschläge werden vereinigt, in zellfreiem Lungenextrakt, bereitet durch Extraktion von ?o g Lungengewebe mit 5o0 ccm o,9o/o'iger Kochsalzlösung, aufgelöst und mit 5oo mg Bariumnitrat versetzt. Nachdem das Fibrin ausgefallen ist, entfernt man es nach 2ostünd@igem Stehen im Eisschrank durch Zentrifugieren. Die überstehende Lösung wird gegen o,9o/oige Kochsalzlösung dialysiert. Man erhält so eine Lösung, die die Gerinnungsgeschwindigkeit des Blutes außerordentlich beschleunigt. o,i ccm d.ieser Lösung bringt unter den obengenannten Bedingungen o,i ccm Oxalatplasma schlagartig zur Gerinnung.

Claims (2)

1. PATENTANSPRÜCHE: i. Verfahren zur ' Darstellung von blutgerinnungsfördernden Präparaten aus Blut, Blutserum oder Blutplasma, :dadurch gekennzeichrnet, daß man die Ausgangsstoffe einer Dialyse unterwirft, ansäuert und gegebenenfalls zwecks Ausfällung weiterer Eiweißkörper verdünnt, die erhaltenen Fällungen abtrennt, in Neutralsalzlösungen löst und mit Erdalkaliionen behandelt, worauf der Wirkstoff gewünschtenfalls in fester Form abgeschieden werden kann.
2. 2. Verfahren nach Anspruch i, dadurch gekennzeichnet, @daß man .die Absehei.dung des blutgerinnungsfördernden Stoffes aus der mit Erdalkaliionen behandelten Neutralsalzlösung durch Dialyse gegen Wasser vornimmt.