DE69935445T2 - Attenuierte stabile tollwutvirusmutante und lebende impfstoffe - Google Patents
Attenuierte stabile tollwutvirusmutante und lebende impfstoffe Download PDFInfo
- Publication number
- DE69935445T2 DE69935445T2 DE69935445T DE69935445T DE69935445T2 DE 69935445 T2 DE69935445 T2 DE 69935445T2 DE 69935445 T DE69935445 T DE 69935445T DE 69935445 T DE69935445 T DE 69935445T DE 69935445 T2 DE69935445 T2 DE 69935445T2
- Authority
- DE
- Germany
- Prior art keywords
- mutant
- attenuated
- vaccine
- recombinant
- mutants
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Lifetime
Links
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 title claims description 23
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 title claims description 21
- 241000711798 Rabies lyssavirus Species 0.000 claims description 65
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 claims description 23
- 108091006027 G proteins Proteins 0.000 claims description 17
- 108091000058 GTP-Binding Proteins 0.000 claims description 17
- 102000030782 GTP binding Human genes 0.000 claims description 13
- 230000035772 mutation Effects 0.000 claims description 13
- 229960003127 rabies vaccine Drugs 0.000 claims description 10
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 claims description 8
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 claims description 7
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims 1
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 claims 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 claims 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 11
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 11
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 11
- 206010037742 Rabies Diseases 0.000 description 10
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 10
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 9
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 8
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 7
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 6
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 6
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 6
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 6
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 6
- 102000004389 Ribonucleoproteins Human genes 0.000 description 5
- 108010081734 Ribonucleoproteins Proteins 0.000 description 5
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 5
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 5
- 238000000034 method Methods 0.000 description 5
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 5
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 5
- 238000002741 site-directed mutagenesis Methods 0.000 description 5
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 4
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 4
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 4
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 4
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 4
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 101100162403 Arabidopsis thaliana ALEU gene Proteins 0.000 description 3
- 101100056797 Canis lupus familiaris SAG gene Proteins 0.000 description 3
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 3
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 3
- 101100532512 Saccharomyces cerevisiae (strain ATCC 204508 / S288c) SAG1 gene Proteins 0.000 description 3
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 3
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- 230000007918 pathogenicity Effects 0.000 description 3
- XKRFYHLGVUSROY-UHFFFAOYSA-N Argon Chemical compound [Ar] XKRFYHLGVUSROY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000282421 Canidae Species 0.000 description 2
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 2
- 108090001074 Nucleocapsid Proteins Proteins 0.000 description 2
- 241000700618 Vaccinia virus Species 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 2
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 description 2
- 241000894007 species Species 0.000 description 2
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 2
- RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L thimerosal Chemical compound [Na+].CC[Hg]SC1=CC=CC=C1C([O-])=O RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 2
- 235000013311 vegetables Nutrition 0.000 description 2
- 230000001018 virulence Effects 0.000 description 2
- 102000040650 (ribonucleotides)n+m Human genes 0.000 description 1
- 108010042708 Acetylmuramyl-Alanyl-Isoglutamine Proteins 0.000 description 1
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 1
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- 239000004375 Dextrin Substances 0.000 description 1
- 229920001353 Dextrin Polymers 0.000 description 1
- 101001065501 Escherichia phage MS2 Lysis protein Proteins 0.000 description 1
- CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N Gentamicin Chemical compound O1[C@H](C(C)NC)CC[C@@H](N)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](NC)[C@@](C)(O)CO2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N 0.000 description 1
- 229930182566 Gentamicin Natural products 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- 241000266847 Mephitidae Species 0.000 description 1
- 108060004795 Methyltransferase Proteins 0.000 description 1
- 238000011785 NMRI mouse Methods 0.000 description 1
- 101710141454 Nucleoprotein Proteins 0.000 description 1
- 102000011931 Nucleoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108010061100 Nucleoproteins Proteins 0.000 description 1
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 1
- 101710181008 P protein Proteins 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 101710177166 Phosphoprotein Proteins 0.000 description 1
- 102000007982 Phosphoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108010089430 Phosphoproteins Proteins 0.000 description 1
- 241000282335 Procyon Species 0.000 description 1
- 229940096437 Protein S Drugs 0.000 description 1
- 238000010240 RT-PCR analysis Methods 0.000 description 1
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 1
- 241000711931 Rhabdoviridae Species 0.000 description 1
- 238000012300 Sequence Analysis Methods 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229920002125 Sokalan® Polymers 0.000 description 1
- 101710198474 Spike protein Proteins 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- 101710137500 T7 RNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- RTAQQCXQSZGOHL-UHFFFAOYSA-N Titanium Chemical compound [Ti] RTAQQCXQSZGOHL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100023935 Transmembrane glycoprotein NMB Human genes 0.000 description 1
- 230000010530 Virus Neutralization Effects 0.000 description 1
- UZQJVUCHXGYFLQ-AYDHOLPZSA-N [(2s,3r,4s,5r,6r)-4-[(2s,3r,4s,5r,6r)-4-[(2r,3r,4s,5r,6r)-4-[(2s,3r,4s,5r,6r)-3,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)-4-[(2s,3r,4s,5s,6r)-3,4,5-trihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxyoxan-2-yl]oxy-3,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxy-3,5-dihydroxy-6-(hy Chemical compound O([C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]([C@@H]1O)O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]([C@@H]1O)O[C@H]1CC[C@]2(C)[C@H]3CC=C4[C@@]([C@@]3(CC[C@H]2[C@@]1(C=O)C)C)(C)CC(O)[C@]1(CCC(CC14)(C)C)C(=O)O[C@H]1[C@@H]([C@@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O[C@H]4[C@@H]([C@@H](O[C@H]5[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O5)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O4)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O3)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1)O)[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O UZQJVUCHXGYFLQ-AYDHOLPZSA-N 0.000 description 1
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 1
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 1
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 239000003513 alkali Substances 0.000 description 1
- 229910000318 alkali metal phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- AZDRQVAHHNSJOQ-UHFFFAOYSA-N alumane Chemical class [AlH3] AZDRQVAHHNSJOQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 235000006708 antioxidants Nutrition 0.000 description 1
- 229910052786 argon Inorganic materials 0.000 description 1
- 229940031567 attenuated vaccine Drugs 0.000 description 1
- 229920001400 block copolymer Polymers 0.000 description 1
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 1
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 1
- 230000007910 cell fusion Effects 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 235000019425 dextrin Nutrition 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 210000001840 diploid cell Anatomy 0.000 description 1
- 241001493065 dsRNA viruses Species 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 235000001727 glucose Nutrition 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 238000010166 immunofluorescence Methods 0.000 description 1
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 238000011005 laboratory method Methods 0.000 description 1
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 1
- GZQKNULLWNGMCW-PWQABINMSA-N lipid A (E. coli) Chemical compound O1[C@H](CO)[C@@H](OP(O)(O)=O)[C@H](OC(=O)C[C@@H](CCCCCCCCCCC)OC(=O)CCCCCCCCCCCCC)[C@@H](NC(=O)C[C@@H](CCCCCCCCCCC)OC(=O)CCCCCCCCCCC)[C@@H]1OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](OC(=O)C[C@H](O)CCCCCCCCCCC)[C@@H](NC(=O)C[C@H](O)CCCCCCCCCCC)[C@@H](OP(O)(O)=O)O1 GZQKNULLWNGMCW-PWQABINMSA-N 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 230000005923 long-lasting effect Effects 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 230000034217 membrane fusion Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- BSOQXXWZTUDTEL-ZUYCGGNHSA-N muramyl dipeptide Chemical compound OC(=O)CC[C@H](C(N)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](C)O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H](O)[C@@H]1NC(C)=O BSOQXXWZTUDTEL-ZUYCGGNHSA-N 0.000 description 1
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- 235000021317 phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 150000003013 phosphoric acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 229920005862 polyol Polymers 0.000 description 1
- 150000003077 polyols Chemical class 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 229930182490 saponin Natural products 0.000 description 1
- 150000007949 saponins Chemical class 0.000 description 1
- 235000017709 saponins Nutrition 0.000 description 1
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 1
- 235000010356 sorbitol Nutrition 0.000 description 1
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 1
- 101150038671 strat gene Proteins 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 229940033663 thimerosal Drugs 0.000 description 1
- 229930003799 tocopherol Natural products 0.000 description 1
- 239000011732 tocopherol Substances 0.000 description 1
- 125000002640 tocopherol group Chemical class 0.000 description 1
- 235000019149 tocopherols Nutrition 0.000 description 1
- 108091007466 transmembrane glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 210000002845 virion Anatomy 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
- C12N2760/00011—Details
- C12N2760/20011—Rhabdoviridae
- C12N2760/20111—Lyssavirus, e.g. rabies virus
- C12N2760/20122—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
- C12N2760/00011—Details
- C12N2760/20011—Rhabdoviridae
- C12N2760/20111—Lyssavirus, e.g. rabies virus
- C12N2760/20161—Methods of inactivation or attenuation
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Virology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Immunology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Oncology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Description
- Die vorliegende Erfindung betrifft attenuierte Tollwutvirus-Mutanten und lebende attenuierte Anti-Tollwut-Impfstoffe, umfassend diese Mutanten.
- Tollwut ist eine Krankheit, die bei allen warmblütigen Arten auftreten kann, und wird durch den Tollwutvirus (RV) hervorgerufen. Die Infektion mit Tollwut, gefolgt von dem Ausbruch der klinischen Symptome, führt in nahezu allen Fällen zum Tod der infizierten Arten. In Europa, in den USA und in Kanada existiert die Wild-Tollwut immer noch, und ist ein wesentlicher Faktor für die meisten menschlichen Tollwut-Fälle, die auftreten. Auf der anderen Seite bildet Tollwut im Siedlungsraum, so genannte urbane Tollwut, einen Hauptgrund für den Menschen betreffende Tollwut in Entwicklungslängern.
- Das Tollwutvirus (RV) ist ein nicht segmentiertes, negativsträngiges RNS-Virus der Rhabdoviridae-Familie. RV-Virionen bestehen aus zwei hauptsächlichen strukturellen Komponenten: ein Nukleokapsid oder Ribonukleoprotein (RNP), und eine Hülle in Form einer zweischichtigen Membrane, die den RNP-Kern umgibt. Die infektiöse Komponente von allen Rhabdoviren ist der RNP-Kern, der aus dem RNS-Genom besteht, welches durch das Nukleokapsid (N) Protein in Kombination mit zwei weiteren Proteinen enkapsidiert ist, d.h. RNS-abhängige RNS-Polymerase (L) und Phosphoprotein (P). Die Membrane, die den RNP-Kern umgibt, besteht aus zwei Proteinen: einem trans-membranen Glykoprotein (G) und einem Matrix (M) Protein, welches am inneren Ort der Membrane angeordnet ist.
- Das G-Protein, auch als Spike-Protein bezeichnet, ist verantwortlich für die Anhaftung an der Zelle und der Membran-Fusion in RV und ist zusätzlich das Hauptziel für das Immunsystem des Wirts. Der Aminosäuren-Bereich an der Position 330–340 (Als antiger Ort III bezeichnet) des G-Proteins ist als verantwortlich für die Virulenz des Virus identifiziert worden, insbesondere das Arg Residuum an der Position 333. Alle RV-Stämme haben diesen virulenz-bestimmenden antigenen Ort III gemeinsam.
- Ein effizienter Weg, um Tollwut zu kontrollieren, ist die Impfung mit inaktiviertem RV oder mit attenuierten Impfstämmen von RV. Im Allgemeinen werden attenuierte lebende Anti-Tollwut Impfungen bevorzugt, weil sie häufiger eine lang anhaltende Immunantwort erzeugen, die üblicherweise auf sowohl humoralen als auch zellulären Reaktionen beruht. Derzeitig verfügbare attenuierte Lebend-Antitollwut-Impfstoffe basieren auf attenuierten RV-Impfstoff-Stämmen, die den SAD Bern Stamm oder den SAD B19 Stamm umfassen, auch wenn diese immer noch eine unerwünschte residuelle Pathogenizität aufweisen.
- Verschiedene Versuche sind gemacht worden, nicht pathogene RV-Stämme für die Verwendung in einem Lebendimpfstoff zu erhalten. Das europäische Patent
EP 0 350 398 beschreibt eine avirulente RV-Mutante SAG1, die aus dem Bern SAD Stamm des RV abgeleitet worden ist, bei dem das Glykoprotein Ser statt Arg an der Position 333 aufweist. Die avirulente Mutante SAG1 ist unter Selektions-Druck aus spezifischen monoklonalen Antikörpern des SAD Bern Stammes erhalten worden. Bei erwachsenen Mäusen ist SAG1 als nicht pathogen befunden worden. Pathogene Rückbildungen der attenuierten Viren treten mit einer Frequenz 1:10.000 auf (Lafay et al., Vaccine 12, Seiten 317-320, 1994). Die genetische Instabilität dieser Mutante macht sie ungeeignet für eine sichere Impfung. - Die europäische Patentanmeldung
EP 0 583 998 beschreibt eine andere attenuierte RV-Mutante, SAG2, bei der Arg an der Position 333 durch Glu in dem Glykoprotein ersetzt worden ist. SAG2 ist nicht pathogen bei erwachsenen Mäusen, wenn es über verschiedene Wege verabreicht wird. SAG2 wird derzeit für die orale Impfung von Füchsen, insbesondere in Frankreich, eingesetzt. Weil diese Mutante auch das Potential hat, in den pathogenen Elternstamm zurückzukehren, wird dieser Impfstoff in Gegenwart von spezifischen monoklonalen Antikörpern hergestellt, um die Reversion zu verhindern. (Blancou und Meslin, 1996; in Laboratory techniques in rabies, Seiten 324–337). Da diese spezifischen monoklonalen Antikörper nicht in inokulierten Tieren auftreten, hat die Impfung mit solch einer Mutante immer noch das Risiko, dass die Mutante die Virulenz in dem inokulierten Tier wiedergewinnt, was in Krankheitsausbrüchen in den inokulierten Tieren und einer möglichen Verbreitung des Pathogens zu anderen Tieren resultieren kann. - Es besteht daher ein weitergehender Bedarf für attenuierte Lebend-Antitollwut-Impfstoffe, welche nicht die residuelle Pathogenizität oder das Potential haben, zur pathogenen Variante zurückzukehren. Die vorliegende Erfindung liefert solche Impfstoffe.
- Gemäss der vorliegenden Erfindung ist befunden worden, dass stabile, attenuierte RV-Mutanten erhalten werden konnten durch Mutation des G-Protein Gens des viralen Genoms, wobei die besagte Mutation die Substitution des Arg333 Kodons mit einem GAC Triplett oder einem CAC Triplett umfasst. Zu diesem Zweck der Erfindung ist der Begriff „Arg333" Kodon definiert als das Kodon, in dem G-Protein Gen des viralen Genoms, das Arg333 in dem G-Protein kodiert. Der Begriff „Arg333" wird definiert als das Arg- Residuum an der Position 333 RV G Proteins. In dem RV-Stamm SAD und den Stämmen, die davon abgeleitet worden sind, ist das Arg333 Kodon AGA und die Mutation dieses Kodons in ein Kodon, bei dem sich alle drei Nukleotide von dem Arg333 Kodon unterscheiden, resultierte in stabilen und attenuierten RV-Mutanten. Vorzugsweise ist das Arg333 Kodon in GAC oder CAC mutiert. Ähnliche Mutationen können mit anderen RV-Stämmen ausgeführt werden, um stabile attenuierte Mutanten zu erhalten. Mutationen gemäss der Erfindung sind als stabil befunden worden, und die sich ergebenden RV-Mutanten sind attenuiert worden und kehrten nicht zur Pathogenizität zurück. Diese stabilen attenuierten RV-Mutanten sind für einen Einsatz in einem Impfstoff sehr geeignet. Ein grosser Vorteil der Erfindung liegt ferner darin, dass Impfstoffe, die die RV-Mutanten gemäss der Erfindung umfassen, ohne spezifische monoklonale Antikörper hergestellt werden können. Daher wird die Impfstoff-Produktion vereinfacht und ist einfacher auszuführen.
- Daher liefert die vorliegende Erfindung gemäss einem ersten Aspekt rekombinante RV-Mutanten, die eine Mutation in dem viralen Genom umfassen, wobei die besagte Mutation mindestens eine Substitution des Arg333 Kodons mit einem GAC Triplet oder einem CAC Triplet umfasst. Vorzugsweise sind diese Mutanten Mutanten eines RV-Stammes, bei dem das Arg333 Kodon ein AGA Triplet ist. Bevorzugter sind die Mutanten gemäss der Erfindung Mutanten des RV-Stammes SAD und seiner Derivate, insbesondere des RV-Stammes SAD B19.
- Besonders bevorzugt sind rekombinante RV-Mutanten Stämme SAD D29 und SAD H31, bei denen das Arg333 Kodon in dem Genom des RV-Stammes SAD B19 mit einem GAC Triplet oder einem CAC Triplet ersetzt worden sind.
- Somit liefert die vorliegende Erfindung stabile attenuierte re kombinante RV-Mutanten, bei denen das G-Protein der besagten Mutanten eine Aminosäure an der Position 333 umfasst, die durch ein Kodon kodiert wird, welches sich in allen 3 Nukleotiden von dem Arg333 Kodon des parentalen Virus unterscheidet. Es ist befunden worden, dass die rekombinanten RV-Mutanten gemäss der Erfindung in immun-kompetenten Tieren nicht pathogen sind und als hochstabil befunden worden sind. Überraschenderweise sind selbst nach 25 Passage-Experimenten in Zellkulturen keine Veränderungen beobachtet worden. Alle Zellkultur-Passagen sind ausgeführt worden in Abwesenheit von monoklonalen Antikörpern. Darüber hinaus verblieb die Mutante nicht pathogen für erwachsene Mäuse, selbst nach einer Passage bei säugenden Mäusen. Die Substitutionen an der Position 333 des G-Proteins beeinflusste in keiner Weise die Wachstumsrate des Virus in BSR-Zellen, und der finale Titer war ähnlich zu dem parentalen Stamm. Dies macht die rekombinanten Mutanten gemäss der Erfindung sehr geeignet für die Verwendung in einem lebenden Antitollwut-Impfstoff.
- Zusätzlich zur Substitution des Arg-Kodons an der Aminosäure-Position 333 in dem G-Protein können die rekombinanten RV-Mutanten gemäss der vorliegenden Erfindung andere Substitutionen umfassen, welche die Aminosäuren des antigenen Ortes III des Glyko-Proteins beeinträchtigen. Insbesondere können diese Substitutionen in den Kodonen gemacht werden, die die Aminosäuren des antigenen Ortes III des Glykoproteins codieren, bevorzugterweise in den Kodonen, welche der Aminosäure-Position 330 und/oder 336 in dem G-Protein entsprechen. Die rekombinanten RV-Mutanten gemäss der vorliegenden Erfindung können weiterhin andere Mutationen oder Modifikationen umfassen, die heterologe Gene umfassen, beispielsweise ein Gen, welches ein G-Protein eines anderen RV-Stammes kodiert.
- Die rekombinanten RV-Mutanten gemäss der Erfindung können unter Einsatz von rekombinanter DNS-Technologie und ortspezifischer Mutagenese erhalten werden, um die gewünschten Mutationen zu erhalten, im Gegensatz zu den beim Stand der Technik eingebrachten Veränderungen durch Zufall unter Einsatz von monoklonalen Antikörpern. Direkte genetische Manipulation des RV kann durch reverse genetische Systeme ausgeführt werden, wie sie in Schnell et al., 1994; EMBO J. Band 13, Nr. 18, Seiten 4195–4203 und in der europäischen Patentanmeldung
EP 0 702 085 beschrieben worden sind, welche beide hier durch Referenznahme einbezogen sind. Die ortsgerichtete Mutagenese kann gemäss dem Verfahren ausgeführt werden, welches durch Kunkel, T.A., Roberts, J.D. und Zakour, R.A., (1987): Rapid and efficient site-specific mutagenesis without phenotypic selection in Methods Enzymology, Band 154, Seiten 376–382, beschrieben worden ist. Ein Volllängen cDNS Klon des Impfstammes SAD B19, welcher in Schnell et al., siehe oben, beschrieben worden ist, ist als Basis eingesetzt worden, um Kodone, die sich von dem Arg-Triplet des parentalen Stammes in allen drei Nukleotiden unterscheiden, zur Erzeugung von rekombinanten RV-Mutanten gemäss der Erfindung einzuführen. RV-Mutanten gemäss der Erfindung können erhalten werden durch a) Einführung der gewünschten Mutation in den RV Volllängen cDNS Klon, oder b) simultane Exprimierung eines Volllängen antigenomen RV RNS aus der modifizierten cDNS und RV N, P, und L Proteinen aus Plasmiden, die in T7-RNS Polymerase exprimierenden Zellen transfektiert worden sind, und 3) Isolieren der RV mutanten Viren, die aus diesen Zellen produziert worden sind. - Die rekombinanten RV-Mutanten gemäss der Erfindung können auf einer Zellkultur gewachsen werden, die beispielsweise aus BHK Zellen oder menschlichen Diploid-Zellen stammt. Die so gewachsenen Viren können durch Sammeln der Gewebe-Zellkultur Flüssigkeit und/oder Zellen geerntet werden.
- Gemäss einem weiteren Aspekt liefert die vorliegende Erfindung attenuierte lebende Antitollwut-Impfstoffe, die eine oder mehrere rekombinante RV-Mutanten gemäss der Erfindung umfassen. Vorzugsweise umfasst ein attenuierter lebender Antitollwut-Impfstoff gemäss der Erfindung eine rekombinante RV-Mutante, die aus dem RV-Stamm SAD B19 abgeleitet worden ist. Attenuierte lebende Antitollwut-Impfstoffe gemäss der Erfindung, die insbesondere bevorzugt sind, umfassen rekombinante RV mutante Stämme, in denen das Arg333 Kodon in dem viralen Genom durch ein GAC Triplett beziehungsweise durch ein CAC Triplett ersetzt worden ist. Insbesondere umfasst der Impfstoff gemäss der Erfindung einen rekombinanten RV mutanten Stamm, bei dem das Arg333 Kodon in dem viralen Genom ersetzt worden ist durch das Triplet GAC, was in dem Ersatz von Arg mit Asp an der Position 333 des G-Proteins übereinstimmt. Insbesondere bevorzugt sind Impfstoffe, die den rekombinanten RV mutanten Stamm SAD D29 umfassen. Der Impfstoff gemäss der Erfindung hat den grossen Vorteil, dass er in Abwesenheit von spezifischen monoklonalen Antikörpern hergestellt werden kann.
- Der Impfstoff gemäss der Erfindung kann hergestellt werden unter Einsatz von Standard-Techniken, die aus dem Stand der Technik verfügbar sind. Im Allgemeinen wird der Impfstoff durch Mischen der attenuierten rekombinanten RV-Mutanten gemäss der Erfindung mit einem pharmazeutisch verträglichen Träger oder mit einem Verdünnungsmittel gemischt.
- Pharmazeutisch verträgliche Träger oder Verdünnungsmittel, die eingesetzt werden können, um einen Impfstoff gemäss der vorliegenden Erfindung zu formulieren, sind steril und physiologisch kompatibel mit beispielsweise sterilem Wasser, Salzlösung, wasserbasierten Puffern wie Alkali-Metall-Phosphate (beispielsweise PBS), Alkohole, Polyole und ähnliche. Zusätzlich kann der Impf stoff gemäss der Erfindung andere Additive wie Adjuvantien, Stabilisierungsmittel, Antioxidanzmittel, Konservierungsmittel und andere Stoffe enthalten.
- Geeignete Adjuvantien umfassen, sind aber nicht begrenzt auf, Aluminiumsalze oder Gele, Carbomere, nicht ionische Block-Copolymere, Tocopherole, Monophospheryl Lipid A, Muramyl Dipeptid, Öl-Emulsionen (Wasser/Öl oder Öl/Wasser), Zytokine und Saponine wie Quil A. Die Menge des hinzugefügten Adjuvans hängt von der Natur des Adjuvans ab.
- Geeignete Stabilisierungsmittel zum Einsatz in einem Impfstoff gemäss der Erfindung sind beispielsweise Kohlenhydrate wie Sorbitol, Mannitol, Stärke, Saccharose, Dextrin und Glukose, Proteine wie Albumin oder Casein und Puffer wie Alkali-Phosphate.
- Geeignete Konservierungsstoffe umfassen unter anderem Thimerosal, Merthiolat und Gentamycin.
- Die attenuierten lebenden Antitollwut-Impfstoffe gemäss der Erfindung können warmblütigen Säugetieren verabreicht werden, umfassend Menschen, Hunde, Füchse, Waschbären und Stinktiere, über Injektion (intramuskulär, intradermal, oder subkutan), Sprays oder Aerosol (intranasal), oder auf dem oralen Weg. Vorzugsweise wird der Impfstoff den Subjekten oral verabreicht, insbesondere bei Wildtieren oder entlaufenen Hunden. Für die orale Verabreichung wird der Impfstoff mit einem geeigneten Träger gemischt, beispielsweise Proteinen oder Ölen von pflanzlicher oder tierischer Herkunft. Für die orale Verabreichung kann die Impfstoff-Formulierung weiter mit Ködern verkapselt werden, die aus verdaubaren Substanzen von tierischer oder pflanzlicher Herkunft hergestellt worden sind.
- Die nützliche Dosismenge, die zu verabreichen ist, hängt von dem Typ des warmblütigen zu impfenden Säugetieres ab, dessen Gewicht, dessen Alter und dessen Verabreichungsweg. Im Allgemeinen ist dies eine geeignete Dosismenge zwischen 102 und 108 TCID50 Säugetier.
- Die folgenden Beispiele werden die Erfindung erläutern, ohne deren Umfang zu begrenzen.
- Verfahren und Material
- Herstellung der cDNS Klonez
- Ortsgerichtete Mutagenese durch das Verfahren von Kunkel et al, 1987; Rapid and efficient site-specific mutagenesis without phenotypic selection, Methods Enzymology, Band 154, Seiten 376–382, ist mit 21-mer Oligonukleotiden durchgeführt worden, um drei Nukleotide des T7T-G auszutauschen (Conzelmann und Schnell, 1994; J. Virology, Band 68, Nr. 2, Seiten 713–719). Die sich ergebenden Plasmide kodierten modifiziertes RV Glykoprotein (G-Protein), bei dem Arg an der Position 333 (SAD B19), Position 4370–4372) des reifen RV G-Proteins ersetzt worden war mit unterschiedlichen Aminosäuren (siehe Tabelle 1). Um die eingeführten Mutationen in einem Volllängen RV cDNS Klon (pSAD L 16) einzubinden, ist ein StullPpuMI cDNS Fragment, welches die SAD B19 Nukleotide 4015–4470 umfasst, ausgetauscht werden. Tabelle I: RV cDNS Klone und die Kodone, die für die Aminosäuren-Residuen an dem antigenen Ort III des Glykoproteins des sich ergebenden rekombinanten RV mutanten Virus codieren.
- *) Vergleichsbeispiele: RV cDNS Klone, bei denen das Kodon sich nur in zwei Nukleotiden von dem Arg Kodon unterscheidet.
- Wiedergewinnung und Ausbreitung der antigenen Ort III Mutanten
- Transfektions-Experimente sind wie oben beschrieben ausgeführt worden (Conzelmann und Schnell, 1994; J. Virology, Band 68, Seiten 713–719). Ungefähr 106 BSR-Zellen sind mit dem rekombinanten Vaccinia Virus vTF7-3 (Fuerst et al., 1986) infiziert worden und dann mit einer Plasmid-Mischung, welche 5 μg des pT7T-N, 2.5 μg des pT7T-P, 2.5 μg des pT7T-L enthalten hat, und mit 4 μg eines Plasmids, welches das Volllängen antigenome RNS kodiert, unter Einsatz des Stratgene Säugetier-Transfektions-Kits (CaPO4 Protokoll) transfektiert worden. Die Isolation des transfektanten Virus und die Entfernung des Vaccinia Virus ist ausgeführt worden wie in Schnell et al., 1994, Zitat wie oben, beschrieben. Die Infektion von Zellen ist durch direkte Immuno-Fluoreszenz mit einem Anti-RV Nukleoprotein Konjugat (Centocor) überwacht worden und die rekombinanten RV's sind weiter passagiert worden, bis die Infektion der gesamten Monoschicht erreicht worden war. Die sich ergebenden Virusmengen sind bis zur Endpunkt-Verdünnung titriert worden. Fünfundzwanzig serielle Passagen in BSR-Zellkulturen sind mit einer Multiplizität der Infektion (moi) von 0.01 ausgeführt worden.
- RT-PCR und Sequenz-Aaalyse
- Um die Stabilität der rekombinanten Viren zu bestimmen, sind 25 aufeinander folgende Passagen in BSR-Zellen durchgeführt worden. RT-PCR ist ausgeführt worden auf 1 μg von Gesamt-RNS, isoliert aus infizierten Zellen, unter Einsatz des „Titan One Tube RT-PCR Systems", gemäss den Instruktionen des Lieferanten (Boehringer, Mannheim). Die PCR-Produkte sind analysiert worden auf 1%-igen Agarose-Gels und direkt für die Sequenzierung verwendet worden.
- Mäuse-Inokulation und Virus-Neutralisierung
- Gruppen von 3 Wochen alten NMRI Mäusen sind intracerebral (ic) mit 0.03 ml einer viralen Suspension (3'000 bis 9'000'000 ffu/Maus) inokuliert worden und auf Tollwut-Symptome hin überwacht worden. Um festzustellen, ob pathogene Rückbildungen nach dem Passagieren in säugenden Mäusen erscheinen, sind rekombinante Viren intercerebral in zwei Tage alte Mäuse inokuliert worden. Eine 20%-ige Gehirn-Suspension ist von den toten Mäusen hergestellt worden und in 3 Wochen alte Mäuse inokuliert worden. Serumproben sind von den überlebenden Mäusen 21 Tage nach der Infektion gesammelt worden. Um die neutralisierende Aktivität der Maus-Seren zu bestimmen, sind 5-fach seriell diluierte Seren mit 40 ffu des CVS-Stammes inkubiert worden. Nach 1 Stunde sind BHK-Zellen in die Virus-Serum Mischung hinzugefügt worden, für 24 Stunden inkubiert und durch direkte Fluoreszenz beobachtet worden. Für die Daten siehe Tabelle II. Tabelle II: Antigene Ort III Mutanten; Mutanten entsprechen den cDNS Klonen der Tabelle 1 (rec = rekombinant; RV = Tollwut-Virus; PBE = Plaque bildende Einheiten; ic = intercerebral; ffu = Fokus ausbildende Einheiten; W = entwurmte Mäuse, 3 Wochen alt; S = säugende Mäuse, 2 Tage alt; Ab = Antikörper; ND = nicht ausgeführt)
Claims (6)
- Rekombinante Tollwutvirusmutante, umfassend eine Mutation in dem G-Protein Gen des viralen Genoms, wobei diese Mutation mindestens eine Substitution des Codons in dem G-Protein Gen des viralen Genoms umfasst, welches Arg333 in dem G-Protein mit einem GAC-Triplett oder einem CAC-Triplett kodiert.
- Mutante nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass die besagte Mutante eine Mutante des SAD-Stammes ist.
- Mutante nach Anspruch 2, dadurch gekennzeichnet, dass die Mutante der rekombinante Tollwutvirusmutantenstamm SAD D29 ist.
- Rekombinante Tollwutvirusmutante nach einem der Ansprüche 1 bis 3 zur Verwendung als ein therapeutisches oder prophylaktisches Agens.
- Rekombinante Tollwutvirusmutante nach einem der Ansprüche 1 bis 3 zur Verwendung in einem Impfstoff.
- Lebender attenuierter Anti-Tollwut-Impfstoff, dadurch gekennzeichnet, dass der besagte Impfstoff eine rekombinante Tollwutvirusmutante gemäss einem der Ansprüche 1 bis 3 und einen pharmazeutisch verträglichen Träger umfasst.
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| EP98204001 | 1998-11-27 | ||
| EP98204001 | 1998-11-27 | ||
| PCT/EP1999/009101 WO2000032755A1 (en) | 1998-11-27 | 1999-11-19 | Stable, attenuated rabies virus mutants and live vaccines thereof |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| DE69935445D1 DE69935445D1 (de) | 2007-04-19 |
| DE69935445T2 true DE69935445T2 (de) | 2007-11-29 |
Family
ID=8234392
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| DE69935445T Expired - Lifetime DE69935445T2 (de) | 1998-11-27 | 1999-11-19 | Attenuierte stabile tollwutvirusmutante und lebende impfstoffe |
Country Status (16)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US6719981B1 (de) |
| EP (1) | EP1131414B1 (de) |
| AR (1) | AR021406A1 (de) |
| AT (1) | ATE356202T1 (de) |
| AU (1) | AU1386100A (de) |
| BR (1) | BR9915703B1 (de) |
| CA (1) | CA2352231C (de) |
| CY (1) | CY1106570T1 (de) |
| DE (1) | DE69935445T2 (de) |
| DK (1) | DK1131414T3 (de) |
| ES (1) | ES2283150T3 (de) |
| ID (1) | ID28968A (de) |
| IL (2) | IL143149A0 (de) |
| PT (1) | PT1131414E (de) |
| TR (1) | TR200101445T2 (de) |
| WO (1) | WO2000032755A1 (de) |
Families Citing this family (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| ES2257505T3 (es) * | 2001-04-23 | 2006-08-01 | Akzo Nobel N.V. | Mutantes de virus de la rabia atenuados y vacunas vivas correspondientes. |
| AU2002365029A1 (en) * | 2001-07-20 | 2003-06-10 | The University Of Georgia Research Foundation, Inc. | Attenuated rabies virus with nucleoprotein mutation at the phosphorylation site for vaccination against rabies |
| US7863041B2 (en) | 2005-10-14 | 2011-01-04 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services, Centers For Disease Control And Prevention | Rabies virus vector systems and compositions and methods thereof |
| US7785874B2 (en) * | 2007-01-11 | 2010-08-31 | The Salk Institute For Biological Studies | Compositions and methods for monosynaptic transport |
| TW200907058A (en) | 2007-05-30 | 2009-02-16 | Wyeth Corp | Raccoon poxvirus expressing rabies glycoproteins |
| WO2012106490A1 (en) | 2011-02-03 | 2012-08-09 | The Government Of The U.S.A., As Represented By The Secretary, Department Of Health & Human Services | Multivalent vaccines for rabies virus and filoviruses |
| CN103865889B (zh) * | 2014-04-03 | 2015-02-25 | 深圳市卫光生物制品股份有限公司 | 狂犬病病毒ctn鸡胚细胞适应株 |
| US11041170B2 (en) | 2016-04-04 | 2021-06-22 | Thomas Jefferson University | Multivalent vaccines for rabies virus and coronaviruses |
Family Cites Families (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR2580176B1 (fr) * | 1985-04-12 | 1988-02-26 | Centre Nat Rech Scient | Vaccin antirabique avirulent |
| FR2633832B1 (fr) * | 1988-07-05 | 1991-05-31 | Virbac | Vaccin antirabique avirulent |
| FR2693655B1 (fr) * | 1992-07-20 | 1994-10-14 | Virbac | Vaccin antirabique avirulent. |
| SE0002498D0 (sv) | 2000-07-03 | 2000-07-03 | Stefan Schwartz | Papillomavirus vaccine |
| AU2002360311A1 (en) | 2001-12-10 | 2003-06-23 | Donaldson Company, Inc. | Exhaust treatment control system for an internal combustion engine |
| DE102004009653A1 (de) | 2004-02-27 | 2005-09-22 | Cycos Ag | Kommunikationsserver und Verfahren zum Aufbau und Betrieb einer Konferenz-Kommunikationsverbindung |
-
1999
- 1999-11-19 EP EP99973064A patent/EP1131414B1/de not_active Expired - Lifetime
- 1999-11-19 AU AU13861/00A patent/AU1386100A/en not_active Abandoned
- 1999-11-19 IL IL14314999A patent/IL143149A0/xx active IP Right Grant
- 1999-11-19 TR TR2001/01445T patent/TR200101445T2/xx unknown
- 1999-11-19 ES ES99973064T patent/ES2283150T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1999-11-19 ID IDW00200101139A patent/ID28968A/id unknown
- 1999-11-19 CA CA2352231A patent/CA2352231C/en not_active Expired - Fee Related
- 1999-11-19 AT AT99973064T patent/ATE356202T1/de active
- 1999-11-19 PT PT99973064T patent/PT1131414E/pt unknown
- 1999-11-19 DK DK99973064T patent/DK1131414T3/da active
- 1999-11-19 BR BRPI9915703-9A patent/BR9915703B1/pt not_active IP Right Cessation
- 1999-11-19 DE DE69935445T patent/DE69935445T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1999-11-19 US US09/856,653 patent/US6719981B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1999-11-19 WO PCT/EP1999/009101 patent/WO2000032755A1/en active IP Right Grant
- 1999-11-26 AR ARP990106028A patent/AR021406A1/es not_active Application Discontinuation
-
2001
- 2001-05-14 IL IL143149A patent/IL143149A/en not_active IP Right Cessation
-
2007
- 2007-05-09 CY CY20071100622T patent/CY1106570T1/el unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CY1106570T1 (el) | 2012-01-25 |
| WO2000032755A1 (en) | 2000-06-08 |
| EP1131414B1 (de) | 2007-03-07 |
| TR200101445T2 (tr) | 2001-10-22 |
| US6719981B1 (en) | 2004-04-13 |
| DK1131414T3 (da) | 2007-06-18 |
| AR021406A1 (es) | 2002-07-17 |
| EP1131414A1 (de) | 2001-09-12 |
| BR9915703B1 (pt) | 2012-09-04 |
| IL143149A0 (en) | 2002-04-21 |
| BR9915703A (pt) | 2001-08-14 |
| PT1131414E (pt) | 2007-04-30 |
| AU1386100A (en) | 2000-06-19 |
| CA2352231A1 (en) | 2000-06-08 |
| ID28968A (id) | 2001-07-19 |
| ES2283150T3 (es) | 2007-10-16 |
| IL143149A (en) | 2007-12-03 |
| CA2352231C (en) | 2010-06-01 |
| DE69935445D1 (de) | 2007-04-19 |
| ATE356202T1 (de) | 2007-03-15 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| DE69225471T2 (de) | Abgeschwächtes, gentechnologisch hergestelltes pseudorabies virus s-prv-155 und seine verwendungen | |
| DE69734284T2 (de) | Zusammensetzung eines polynukleotidvakzins zur behandlung von atemwegs- und fortpflanzungsbezogenen erkrankungen des schweins | |
| AT408549B (de) | Virushältiger impfstoff, rekombinantes virus und verfahren zum exprimieren eines genproduktes | |
| DE69532369T2 (de) | Rekombinantes infektiöses nicht-in-Segmente-geteiltes, negativ-Strange-RNS-Virus | |
| DE69534354T2 (de) | CHIMÄRE cDNA-KLONE DES VIRUS DER INFEKTIÖSEN BURSAL-KRANKHEIT, EXPRESSIONSPRODUKTE UND DARAUF BASIERENDE IMPFSTOFFE | |
| DE69730839T2 (de) | Hühner polynukleotide impfstoff-formulierung | |
| DE69731309T2 (de) | Impfstofformel auf polynukleotidbasis zur behandlung von hundekrankheiten, insbesondere solcher des atmungs- und verdauungstraktes | |
| DE60314823T3 (de) | Modifizierte variante des vaccinia ankara virus als impfstoff für neugeborene | |
| DE69837390T2 (de) | Rekombinanter schweine adenovirus vektor | |
| EP0804232A1 (de) | Vakzin zur prävention von respirations- und reproduktionserkrankungen des schweines, die parainfluenzaviren enthält | |
| DE69935136T2 (de) | DNS Pferdeimpfstoffe adjuviert mit Acryl- oder Methacrylpolymersäuren oder EMA (R) | |
| DE69233270T2 (de) | Subeinheits-Impfstoff gegen Hundecoronavirus | |
| DE69534993T2 (de) | Impfstoff aus abgeschwächten hundeparvoviren | |
| DE69935445T2 (de) | Attenuierte stabile tollwutvirusmutante und lebende impfstoffe | |
| DE69333751T2 (de) | Nicht-verbreitendes lebendes herpesvirusvakzin | |
| DE69625356T2 (de) | cDNA KLON FÜR DEN SÜDAFRIKANISCHEN ARBOVIRUS NO.86 | |
| DE69123970T2 (de) | Ehv-4 glykoprotein vazin | |
| DE69034218T2 (de) | Impfstoff und Diagnostikum für den Schweine-Cholera-Virus | |
| DE69534922T2 (de) | Interleukin-12 als adjuvans für paramyoxviridae impfstoffe | |
| DE69323130T2 (de) | Avirulenter Tollwut-Impfstoff | |
| DE60208854T2 (de) | Attenuierte rekombinante stabile Tollwutvirusmutanten und Lebendimpfstoffe | |
| DE3752182T2 (de) | Abgeschwächte herpesviren, herpesviren, die eine für aminosäuresequenzen kodierende fremd-dns enthalten, sowie impfstoffe, die diese enthalten | |
| DE69635825T2 (de) | Rekombinante virale pseudopartikel und deren verwendung als impfstoff oder als antitumorale wirkstoffe | |
| DE68924478T2 (de) | Prototypische FeLV-Isolate für die Verwendung als Krankheitsmuster oder Impfstoffe. | |
| DE69523055T2 (de) | T-zellen stimulierendes protein von pestivirus |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| 8364 | No opposition during term of opposition |