DE69923338T2

DE69923338T2 - Kombinationstherapie zur behandlung von hepatitis b infektionen

Info

Publication number: DE69923338T2
Application number: DE69923338T
Authority: DE
Inventors: A. Phillip FURMAN; R. George PAINTER; David Barry; Franck Rousseau
Original assignee: Gilead Sciences Inc
Current assignee: Gilead Sciences Inc
Priority date: 1998-11-02
Filing date: 1999-11-02
Publication date: 2006-04-06
Anticipated expiration: 2019-11-03
Also published as: EP1124562A1; DE69939604D1; IL142910A; KR100632520B1; IL193148A; PT1382343E; DK1382343T3; PT1380303E; ID29471A; ATE457734T1; HK1062146A1; KR20010082282A; ES2314157T3; ES2237189T3; US20090247487A1; EP1124562B1; ATE408410T1; CN1329497A; US6528515B1; EP1380303B1

Description

Die Erfindung liegt in dem Gebiet von Verfahren zur Behandlung von Hepatitis-B-Virus (auch als "HBV") bezeichnet, welche an einen Wirt, der diese benötigt, die Verabreichung einer wirksamen Kombination von Nucleosiden einschließen, welche als Anti-Hepatitis-B-Aktivität habend bekannt sind.
HBV ist gleich hinter Tabak eine Ursache für menschlichen Krebs. Der Mechanismus, der durch welchen HBV Krebs induziert, ist unbekannt, obwohl postuliert wird, dass er direkt Tumorentwicklung erwecken kann oder indirekt Tumorentwicklung über chronische Entzündung, Zirrhose und Zellregenerierung, verbunden mit der Infektion, auslösen kann.
Hepatitis-B-Virus hat Epidemieniveaus weltweit erreicht. Nach zwei bis drei Monaten Inkubationszeit, in welcher der Wirt sich nicht der Infektion bewusst ist, kann HBV zu akuter Hepatitis und Leberschädigung führen, welche Bauchschmerzen, Gelbsucht und erhöhte Blutgehalte bestimmter Enzyme hervorruft. HBV kann fulminante Hepatitis verursachen, eine schnell fortschreitende, oft fatale Form der Krankheit, in welcher massive Bereiche der Leber zerstört werden.
Patienten erholen sich typischerweise von akuter Hepatitis. In einigen Patienten hingegen führen hohe Gehalte an viralem Antigen, die im Blut für eine längere oder unbestimmte Periode vorherrschen zu einer chronischen Infektion. Chronische Infektionen können zu chronischer persistenter Hepatitis führen. Mit chronischer persistenter HBV infizierte Patienten sind in Entwicklungsländern am verbreitetsten. Mitte 1991 gab es annähernd 225 Millionen chronische Träger von HBV allein in Asien und weltweit etwa 300 Millionen Träger. Chronische persistente Hepatitis kann Müdigkeit, Leberzirrhose und hepatozelluläres Karzinom und primär Leberkrebs verursachen.
In westlichen industrialisierten Ländern schließen hohe Risikogruppen für HBV-Infektionen jene in Kontakt mit HBV-Trägern oder deren Blutproben ein. Die Epidemiologie von HBV ist sehr ähnlich zu AIDS, was die Ursache dafür ist, warum HBV-Infektion verbreitet unter Patienten mit AIDS oder AIDS bezogenem Komplex ist. Hingegen ist HBV ansteckender als HIV.
Dennoch sind kürzlich Impfstoffe genetisch erzeugt worden und werden derzeit breit verwendet. Unglücklicherweise können Impfstoffe nicht jenen helfen, die bereits mit HBV infiziert sind. Tägliche Behandlungen mit α-Interferon, einem genetisch erzeugten Protein, haben sich auch als vielversprechend erwiesen aber diese Therapie ist nur erfolgreich in etwa einem Drittel der behandelten Patienten. Weiterhin kann Interferon nicht oral verabreicht werden.
Eine Anzahl synthetischer Nucleoside ist identifiziert worden, welche Aktivität gegen HBV zeigen. Das (–)-Enantiomer von BCH-189, bekannt als 3TC und beansprucht in U.S. Patent 5,539,116 auf Liotta, et al. ist zugelassen worden von der U.S. Nahrungs- und Arzneimittelverwaltung (Food and Drug Administration) zur Behandlung von Hepatitis B; siehe auch EP-A 494 119 A1 eingereicht von BioChem Pharma, Inc.
β-2-Hydroxymethyl-5-(5-Fluorcytosin-1-yl)-1,3-Oxathiolan ("FTC"), beansprucht in U.S. Patent Nrn. 5,814,639 und 5,914,331 auf Liotta, et al., zeigt Aktivität gegen HBV; siehe Furman, et al., "The Anti-Hepatitis B Virus Activities, Cytotoxicities, and Anabolic Profiles of the (–) and (+) Enantiomers of cis-5-Fluor-1-[2-(Hydroxymethyl)-1,3-Oxathiolan-5-yl]-Cytosin", Antimicrobial Agents and Chemotherapy, Dezember 1992, S. 2686–2692; und Cheng, et al., Journal of Biological Chemistry, Vol. 267 (20), 13938–13942 (1992).
Penciclovir (2-Amino-1,9-Dihydro-9-[4-Hydroxy-3-(Hydroxymethyl)Butyl]-6H-Purin-6-on; PCV) hat Aktivität gegen Hepatitis B etabliert; siehe U.S. Patent Nrn. 5,075,445 und 5,684,153.
Adefovir (9-[2-(Phosphonomethoxy)Ethyl]-Adenin, auch bezeichnet als PMEA oder [2-(6-Amino-9H-Purin-9-yl)-Ethoxy]-Methylphosphonsäure), hat auch Aktivität gegen Hepatitis B etabliert. Siehe z.B. U.S. Patent Nrn. 5,641,763 und 5,142,051.
Es ist anerkannt worden, dass medikamentresistente Varianten von HBV nach langer Behandlung mit antiviralem Reagens auftreten können. Medikamentresistenz tritt am typischsten durch Mutation eines Gens auf, das für ein Enzym codiert, das in dem Viruslebenszyklus verwendet wird, und am typischsten in dem Fall von HBV DNA-Polymerase. Kürzlich ist gezeigt worden, dass die Effizienz eines Medikaments gegen HBV-Infektion erhöht werden kann durch Verabreichung der Verbindung in Kombination mit einer zweiten und vielleicht dritten antiviralen Verbindung, welche eine unterschiedliche Mutation von jener hervorruft, die durch das Hauptmedikament verursacht wird. Alternativ können die Pharmakokinetiken, Bioverteilungen oder andere Parameter des Medikaments durch solch eine Kombinationstherapie verändert werden. Im Allgemeinen umfasst die Kombinationstherapie mehrere ähnliche Stresssituationen auf den Virus.
U.S. Patent Nr. 5,808,040 offenbart, dass L-FMAU in Kombination mit FTC, 3TC, Carbovir, Acyclovir, Interferon, AZT, DDI (2',3'-Dideoxyinosin), DDC (2',3'-Dideoxycytidin), L-DDC, L-F-DDC, und D4T verabreicht werden kann.
U.S. Patent Nr. 5,674,849 offenbart die Verwendung eines Nucleosids in Kombination mit einem Oligonucleotid für die Behandlung einer viralen Krankheit.
WO 98/23285 offenbart ein Verfahren zur Behandlung oder Prophylaxe von Hepatitis-B-Virusinfektionen in einem Mensch- oder Tierpatient, welches die Verabreichung an dem Patienten einer wirksamen Menge oder prophylaktischer Mengen von Penciclovir (oder eines Biovorläufers davon wie Famciclovir) und Alpha-Interferon umfasst.
Im Lichte der Tatsache, dass Hepatitis-B-Virus weltweit Epidemieniveaus erreicht hat und oft tragische Wirkungen auf den infizierten Patienten hat, bleibt ein starker Bedarf, neue effektive Behandlungen für Menschen bereitzustellen, die mit dem Virus infiziert sind, die geringe Toxizität gegen den Wirt haben.
Es ist daher eine Aufgabe der vorliegenden Erfindung, neue Verfahren für die Behandlung von menschlichen Patienten oder anderen Wirten bereitzustellen, die mit Hepatitis-B-Virus infiziert sind und diesbezüglich Bedingungen, die das Verabreichen einer synergetisch wirksamen Menge oder einer Kombination von Anti-HBV-Reagenzien umfassen.
Zusammenfassung der Erfindung
Es ist entdeckt worden, dass bestimmte Kombinationen von Reagenzien mit Hepatitis-B-Aktivität synergistisch sind und daher verstärkte Zuträglichkeiten für den Patienten ergeben können, wenn sie in einer effektiven Kombination oder Dosierungsänderungsmuster verabreicht werden.
In einer bevorzugten Ausführung der vorliegenden Erfindung wird ein Verfahren zur Behandlung von HBV-Infektion und diesbezüglichen Zuständen in Menschen offenbart, umfassend die Verabreichung einer synergistisch effektiven Menge von β-2-Hydroxymethyl-5-(5-fluorocytosin-1-yl)-1,3-oxathiolan (FTC), vorzugsweise in der Form des optischen (–)-Isomers oder eines pharmazeutisch verträglichen Salzes, Esters oder Vorläufermedikaments davon mit Penciclovir (2-Amino-1,9-Dihydro-9-[4-Hydroxy-3-(Hydroxymethyl)Butyl]-6H-Purin-6-on, auch bezeichnet als "PCV"). Famciclovir oder jeder andere Biovorläufer von Penciclovir kann anstelle von Penciclovir in jeder Ausführung dieser Erfindung verwendet werden.
Eine andere bevorzugte Ausführung der vorliegenden Erfindung ist ein Verfahren zur Behandlung von HBV-Infektion und damit verbundenen Zustände in Menschen, umfassend die Verabreichung in Kombination oder Veränderung einer synergistisch wirksamen Menge von β-2-Hydroxymethyl-5-(5-Fluorcytosin-1-yl)-1,3-Oxathiolan (FTC), bevorzugt im wesentlichen in Form des optischen (–)-Isomers, oder eines pharmazeutisch verträglichen Salzes, Esters oder Vorläufermedikaments davon mit 9-[2(Phosphonomethoxy)-Ethyl]-Adenin (PMEA, unten auch als Bis-POM-PMEA oder BP-PMEA bezeichnet), oder ein pharmazeutisch verträgliches Salz, Ester oder Vorläufermedikament davon, optional in einem pharmazeutisch verträglichen Träger.
Detaillierte Beschreibung der Erfindung
Wie hierin verwendet bedeutet der Ausdruck "isoliertes Enantiomer" eine Nucleosidzusammensetzung, die annähernd 95% bis 100% oder bevorzugter über 97% eines einzelnen Enantiomers dieses Nucleosids umfasst.
Die Ausdrücke "im Wesentlichen reine Form" oder im Wesentlichen frei von seinem entgegengesetzten Enantiomer beziehen sich auf eine Nucleosidzusammensetzung von einem Enantiomer, das in nicht mehr als etwa 5% des anderen Enantiomers, bevorzugter nicht mehr als 2% und am bevorzugtesten weniger als 1% vorliegt.
Die synergistische Kombination von Verbindungen oder deren pharmazeutisch verträgliche Ester oder Salze sind bei der Vorbeugung und Behandlung von HBV-Infektionen und anderen damit verbundenen Zuständen wie Anti-HBV-antikörperpositive und HBV-positive Zustände, chronische Leberentzündung hervorgerufen durch HBV, Zirrhose, akutes Hepatitis, fulminante Hepatitis, chronisch vorherrschende Hepatitis und Müdigkeit. Diese synergistischen Formulierungen können auch prophylaktisch verwendet werden, um das Fortschreiten klinischer Krankheit in Individuen zu verhindern oder zu verzögern, welche Anti-HBV-Antikörper oder HBV-Antigenpositiv sind oder welche HBV ausgesetzt waren.
Die aktive Verbindung kann in einen pharmazeutisch verträglichen Ester durch Reaktion mit einem geeigneten Veresterungsreagens umgewandelt werden, zum Beispiel einer Halidsäure oder Anhydrid. Die Verbindung oder ihr pharmazeutisch verträgliches Derivat kann in ein pharmazeutisch verträgliches Salz davon in konventioneller Weise umgewandelt werden, zum Beispiel durch Behandlung mit einer geeigneten Base. Der Ester oder das Salz der Verbindung können in die gegenwärtige Verbindung zum Beispiel durch Hydrolyse umgewandelt werden.
Der Ausdruck "synergistische Kombination" betrifft eine Kombination von Medikamenten, welche eine synergistische Wirkung in vivo oder alternativ in vitro erzeugen, wie durch hierin beschriebene Verfahren gemessen.
1. Aktive Verbindungen und physiologisch verträgliche Salze davon
Die hier offenbarten aktiven Verbindungen sind therapeutische Nucleoside oder cyclische oder acyclische Nucleosidanaloga mit bekannter Aktivität gegen Hepatitis B. Es ist entdeckt worden, dass bestimmte Kombinationen von Nucleosiden einen Vorteil gegenüber Monotherapie oder anderen Kombinationen ergeben. Nicht alle Kombinationen von bekannten Anti-HBV-Medikamenten ergeben einen Vorteil; es ist oft der Fall, dass die Medikamente antagonistisch wirken.
Die wirksame Verbindung kann als jedes Derivat verabreicht werden, das bei Verabreichung an den Empfänger in der Lage ist, direkt oder indirekt die Stammverbindung zu ergeben oder selbst Wirkung zeigt. Nicht begrenzende Beispiele sind pharmazeutisch verträgliche Salze (alternativ bezeichnet als "physiologisch verträgliche Salze") und die 5'- und N⁴-Cytosinyl- oder N⁶-Adeninyl- acteylierten (veresterten) Derivate der wirksamen Verbindung (alternativ bezeichnet als "physiologisch wirksame Derivate"). In einer Ausführungsform ist die Acylgruppe ein Carboxylsäureester, in welchem die Nicht-Carbonyleinheit der Estergruppe gewählt wird aus geradverzweigten oder cyclischen Alkyl oder Niederalkyl, Alkoxyalkyl, einschließlich Methoxymethyl, Aralkyl, einschließlich Benzyl, Aryloxyalkyl wie Phenoxymethyl, Aryl, einschließlich Phenyl, optional substituiert mit Halogen, C₁- bis C₄-Alkyl oder C₁- bis C₄-Alkoxy oder ein Sulfonatester wie Alkyl oder Aralkylsulfonyl, einschließlich Methansulfonyl, Phosphat, einschließlich aber nicht begrenzt auf Mono-, Di- oder Triphosphatester, Trityl oder Monomethoxytrityl, substituiertes Benzyl, Trialkylsilyl (z.B. Dimethyl-5-butylsilyl) oder Diphenylmethylsilyl. Arlygruppen in den Estern umfassen optional eine Phenylgruppe.
Modifikationen der wirksamen Verbindung und insbesondere an dem N⁴-Cytosinyl oder N⁶-Adeniyl- und 5'-O-Positionen können die Bioverfügbarkeit und Metabolismusgeschwindigkeit der wirksamen Spezies beeinträchtigen und so Kontrolle über die Abgabe der aktiven Spezies ergeben. Weiterhin können Modifikationen die antivirale Aktivität der Verbindung in einigen Fällen beeinträchtigen, welche die Aktivität gegenüber der Stammverbindung vergrößern. Dies kann leicht durch Herstellen des Derivats und Testens einer antiviralen Aktivität gemäß den hier beschriebenen Verfahren oder anderen Fachleuten wohlbekannten Verfahren eingeschätzt werden.
Vorläufermedikamente
Jedes der Anti-Hepatitis-B-Reagenzien, die hierin beschrieben sind, kann als ein Vorläufermedikament verabreicht werden, um die Aktivität, Bioverfügbarkeit, Stabilität zu vergrößern oder anderenfalls die Eigenschaften des Nucleosids zu verändern. Eine Anzahl von hydroxylgebundenen Vorläufermedikamentliganden ist bekannt. Allgemein wird die Alkylierung, Acylierung oder lipophile Modifizierung von Hydroxy-, Mono-, Di- oder Triphosphat des Nucleosids die Stabilität des Nukleotids erhöhen. Beispiele von Substituentengruppen, die einen oder mehrere Wasserstoffe an dem Hydroxyl oder Phosphateinheit ersetzen können, sind Alkyl, Aryl, Steroide, Kohlenhydrate, einschließlich Zucker, 1,2-Diacylglycerol und Alkohole. Viele von ihnen sind beschrieben in R. Jones und N. Bischofberger, Antiviral Research, 27 (1995) 1–17. Jede von diesen kann in Kombination mit den offenbarten Nucleosiden verwendet werden, um die gewünschte Wirkung zu erreichen.
Nicht begrenzende Beispiele von U.S.-Patenten, die geeignete lipophile Substituenten offenbaren, welche kovalently in das Nucleoside einverleibt werden können, bevorzugt beim 5'-OH des Nucleosids oder Hydroxyl von den acyclischen Nucleosidanaloga (wie PMEA oder Penciclovir), umfassen U.S.-Patent-Nrn. 5,149,794 (22. Sep. 1992, Yatvin, et al.); 5,194,654 (16. März 1993, Hostetler, et al.); 5,223,263 (29 Juni 1993, Hostetler, et al.); 5,256,641 (26 Oct. 1993, Yatvin, et al.); 5,411,947 (2. Mai 1995, Hostetler, et al.); 5,463,092 (31 Oct. 1995, Hostetler, et al.); 5,543,389 (6 Aug. 1996, Yatvin, et al.); 5,543,390 (6 Aug. 1996, Yatvin, et al.); 5,543,391 (6 Aug. 1996, Yatvin, et al.); und 5,554,728 (10 Sep. 1996, Basava, et al.).
Ausländische Patentanmeldungen, die lipophile Substituenten offenbaren, welche an die aktiven Verbindungen der vorliegenden Erfindung angeheftet werden können oder lipophile Ansätze umfassen WO 89/02733, WO 90/00555, WO 91/16920, WO 91/18914, WO 93/00910, WO 94/26273, WO/15132, EP 0 350 287 , EP 93917054.4 , und WO 91/19721.
II. Herstellung der aktiven Verbindungen
Die therapeutischen Nucleoside, die in den synergistischen Zusammensetzungen der vorliegenden Erfindung verwendet werden und Verfahren zu deren Herstellung sind im Stand der Technik bekannt.
p-2-Hydroxymethyl-5-(5-Fluorcytosin-1-yl)-1,3-Oxathiolan (FTC), und seine Enantiomere können durch die in U.S.-Patent-Nrn. 5,204,466, 5,700,937,5,728,575 und 5,827,727 offenbarten Verfahren hergestellt werden.
Pencyclovir kann hergestellt werden durch die in U.S.-Patent-Nrn. 5,075,445 und 5,684,153 offenbarten Verfahren.
PMEA kann hergestellt werden durch die in U.S.-Patent-Nrn. 5,641,763 und 5,142,051 offenbarten Verfahren.
Mono-, Di-, und Triphosphatderivate der aktiven Nucleoside können wie beschrieben nach veröffentlichten Verfahren hergestellt werden. Das Monophosphat kann gemäß dem Verfahren von Imai, et al., J. Org. Chem., 34 (6), 1547–1550 (Juni 1969) hergestellt werden. Das Diphosphat kann hergestellt werden nach dem Verfahren von Davisson, et al., J. Org. Chem., 52 (9), 1794–1801 (1987). Das Triphosphate kann hergestellt werden nach dem Verfahren von Hoard, et al., J. Am. Chem. Soc., 87 (8), 1785–1788 (1965).
III. Kombinationstherapie
Es ist anerkannt worden, dass medikamentresistente Varianten von HBV nach längerer Behandlung mit antiviralem Reagens auftreten können. Medikamentresistenz tritt am typischsten durch Mutation eines Gens auf, das ein Enzym codiert, das im viralen Lebenszyklus verwendet wird und am typischsten im Falle von HBV-DNA-Polymerase. Kürzlich ist gezeigt worden, dass die Effizienz eines Medikaments gegen HBV-Infektion verlängert, erhöht oder wiederhergestellt werden kann durch Verabreichung der Verbindung in Kombination oder Veränderung mit einer zweiten und vielleicht dritten antiviralen Verbindung, welche eine unterschiedliche Mutation enthält von jener, die durch das Hauptmedikament verursacht wird. Alternativ können Pharmakokinetiken, Bioverteilung oder andere Parameter des Medikaments durch solch eine Kombinationstherapie verändert werden. Allgemein umfasst die Kombinationstherapie mehrere simultane Beanspruchungen auf den Virus.
Beispiel 1

Testverbindungen: DAPD, DXG, (–)-β-FTC, L-FMAU
DMVI-Testkontrollen: unbehandelte Zellen, 3TC (Lamivudin), Penciclovir (PCV)

Details der Testmethodik können gefunden werden in Korba und Gerin, Antiviral Res. 19: 55–70 (1992) und Korba, Antiviral Res. 29: 49–52 (1996). Die antiviralen Bewertungen wurden auf sechs getrennten Kulturen für jede der vier Testkonzentrationen durchgeführt. Alle Löcher in allen Platten wurden mit derselben Dichte und zur selben Zeit besät.
Aufgrund der inhärenten Variationen der Gehalte von sowohl intrazellulärer als auch extrazellulärer HBV-DNA werden nur Unterdrückungen größer 3,0-fach für HBV-Virus-DNA von Durchschnittsgehalten dieser HBV-DNA-Formen in unbehandelten Zellen allgemein als statistisch signifikant betrachtet [P < 0,05] (Korba und Gerin, Antiviral Res. 19: 55–70, 1992). Typische Werte für extrazelluläre HBV-Virus-DNA in unbehandelten Zellen reichen von 80 bis 150 pg/ml Kulturmedium (durchschnittlich etwa 92 pg/ml).
Als Referenz ergibt die Art, in welcher Hybridisierungsanalysen für diese Experimente durchgeführt wurden, Ergebnisse in einer Äquivalenz von annähernd 1,0 pg extrazellulärer HBV-DNA/ml Kulturmedium für 3 × 10⁵ Virenteilchen/ml.
Toxizitätsanalysen wurden durchgeführt, um einzuschätzen, ob jeder der antiviralen Effekte aufgrund eines allgemeinen Effekts auf die Zelllebensfähigkeit beobachtet wird. Das verwendete Verfahren war Aufnahme von Neutralrotfarbstoff, einem Standard und weit verwendeten Test für Zelllebensfähigkeit in einer Vielzahl von Virus-Gastsystemen, einschließlich HSV und HIV. Details des Verfahrens werden in Toxizitätstabellenlegenden angegeben.
EXPERIMENTALPARAMETER
Die Testverbindungen wurden als festes Material bei Raumtemperatur in gutem Verpackungszustand empfangen. Die Testverbindungen wurden in 100% Gewebekulturgrad DMSO solubilisiert (Sigma, Corp.) bei 100 mM (DAPD, FTC, L-FMAU) oder 50 mM (DXG). Tägliche Portionen von Testverbindungen wurden in individuellen Röhren gemacht und bei –20°C gelagert. An jedem Tag der Behandlung wurden tägliche Portionen der Testverbindungen in Kulturmedium bei Raumtemperatur suspendiert und unmittelbar zu den Zellkulturen zugegeben.
Für die antiviralen Testanalysen wurden zusammenfließende Kulturen auf 96-Loch-Flachbodengewebekulturplatten gehalten. Zweit getrennte (Replikat)-Platten wurden für jede Medikamentbehandlung verwendet. Eine Gesamtzahl von 3 Kulturen auf jeder Platte wurde mit den Verdünnungen der Antivirusreagenzien (6 Kulturen pro Verdünnung) behandelt. Kulturen wurden in 9 aufeinanderfolgenden täglichen Dosen dieser Testverbindungen behandelt. Das Medium wurde täglich mit frischen Testverbindungen gewechselt. Nur extrazelluläre (Viren) HBV-DNA-Gehalte wurden verfolgt.
Toxizitätsanalysen wurden auf 96-Loch-Flachbodengewebekulturplatten ausgeführt. Die Zellen zur Toxizitätsanalyse wurden kultiviert und mit Testverbindungen mit demselben Zeitplan unter identischen Kulturbedingungen wie für die Antiviralbewertungen behandelt. Jede Verbindung wurde bei 4 Konzentrationen getestet, jede in Triplikatkulturen. Die Aufnahme von Neutralrotfarbstoff wurde verwendet, um relative Gehalte von Toxizität 24 Stunden nachfolgend an die letzte Behandlung zu bestimmen. Die Absorbanz von internalisiertem Farbstoff bei 510 nm (A₅₁₀) wurde zur quantitativen Analyse verwendet. Die Werte sind als Prozent der durchschnittlichen A₅₁₀-Werte (±Standardabweichungen) in 9 getrennten Kulturen von unbehandelten Zellen, gehalten auf der gleichen 96-Lochplatte wie die Testverbindungen gezeigt.
Kombinationsbehandlungen wurden durchgeführt unter Verwendung von Primäranalyseformat, außer dass 6 Reihen 3-Fachverdünnungen für jede Medikamentkombination und eine Gesamtzahl von 8 getrennten Kulturen für jede Verdünnung der Kombinationen verwendet wurde. Die Verbindungen wurden bei Molverhältnissen vermischt, die geplant sind, um annähernd äquipotente Antivirenwirkungen basierend auf den EC₉₀-Werten zu ergeben. Drei verschiedene Molverhältnisse wurden für jede Kombination verwendet, um Variabilität bei den Einschätzungen der relativen Wirksamkeit zu ermöglichen. Diese Molverhältnisse wurden über die Verdünnungsreihen hinweg gehalten. Die entsprechenden Monotherapien wurden parallel zu den Kombinationsbehandlungen unter Verwendung des primären Standardtestformates durchgeführt.
Für Berichtszwecke wurden die SI-, EC₅₀-, EC₉₀- und CC₅₀-Werte für die Kombinationsbehandlungen angegeben als solche der ersten Verbindung, aufgelistet für das Kombinationsgemisch. Die Konzentrationen und SI-, EC₅₀-, EC₉₀- und CC₅₀-Werte der zweiten Verbindung in dem Gemisch können berechnet werden unter Verwendung des durch das spezielle Gemisch bezeichneten Molverhältnisses. Weitere Details für die Planung von Kombinationsanalysen wie durchgeführt für diesen Bericht können gefunden werden in BE Korba (1996) Antiviral Res. 29: 49.
Analyse von Synergismus, Additivität oder Antagonismus wurden bestimmt durch Analyse der Daten unter Verwendung von dem CalcuSyn^TM Programm (Biosoft, Inc.). Dieses Programm bewertet Medikamentwechselwirkungen unter Verwendung von breit akzeptierten Verfahren von Chou und Talalay, kombiniert mit einer statistischen Auswertung unter Verwendung der Monte Carlo Statistikpackung. Die Daten werden einigen unterschiedlichen Formaten angezeigt, einschließlich Mittelwirkungs- und Dosiswirkungauftragungen, Isobologramme und Kombinationsindex [CI] Auftragungen mit Standardabweichungen. Für die letztere Analyse zeigt ein CI größer 1,0 Antagonismus und ein CI kleiner 1,0 Synergismus an.
Für die Toxizitätsanalysen, verbunden mit den Kombinationsbehandlungen wurde die Experimentplanung begrenzt durch entweder/oder die Toxizität von der toxischeren Verbindung im Gemisch mit Stammkonzentrationen (z.B. bezogen auf das Gesamtvolumen von DMSO, welches zu den Kulturen ohne Induzieren von Toxizität aufgrund von DMSO zugegeben werden könnte und nicht den anderen Testverbindungen).
Antivirale Bewertungen
TESTKONTROLLEN: Mit normalen Variationen verblieben Gehalte an extrazellulären HBV (Virus-)DNA konstant in unbehandelten Zellen über dem betrachteten Zeitraum. Die Positivbehandlungskontrollen 3TC (Lamivudin) [((–)β,L,2',3'-Dideoxy-3'-Thiacytidin] und Penciclovir [PCV] (gekauft von Moraveck Biochemicals, La Brea, CA), induzierten signifikante Unterdrückungen von HBV-DNA-Replikation bei den verwendeten Konzentrationen. Die für 3TC in diesen Analysen beobachteten Aktivitäten waren konsistent mit vorherigen Experimenten, wo annähernd 0,15 bis 0,2 μM 3TC eine 90%-Unterdrückung von HBV-Virus-DNA in Bezug zu Durchschnittsgehalten in unbehandelten Zellen nach 9 Tagen kontinuierlicher Behandlung von 2.2.15-Zellen [EC₉₀] induzierten (siehe zum Beispiel Korba und Boyd, Antimicrob. Agents Chemother. (1996) 40: 1282–1284). Die Aktivitäten, beobachtet für PCV in diesen Analysen, waren höher als vorher berichtet (EC₉₀ von annähernd 0,7 bis 0,9 μM, Korba und Boyd, Antimicrob. Agents Chemother. (1996) 40: 1282–1284). Hingegen erzeugte die Herstellung von PCV, das für diese Experimente verwendet wurde, konsistent Anti-HBV-Aktivitäten in dem Bereich, der hier in mehreren anderen unabhängigen Experimenten berichtet wird.
TESTVERBINDUNGEN: Die Testverbindung DAPD, FTC, DXG und L-FMAU induzierten signifikant und selektiv Unterdrückungen bei extrazellulären (Virus-)HBV-DNA-Gehalten, erzeugt von 2.2.15-Zellen.
Die Antivirenaktivität von DAPD wurde verstärkt durch Zusammenbehandlung mit FTC. Die Antivirenaktivität von DAPD war synergistisch bei einem 3:1 oder einem 1:1 Molverhältnis bei allen außer den höchsten getesteten Konzentrationen. Da die relative Konzentration von FTC sich vergrößerte, erniedrigten sich die kooperativen Wirkungen der beiden Reagenzien. Bei 1:3 Molverhältnis schienen die beiden Reagenzien antagonistisch zu sein.
DAPD und PCV schienen antagonistisch zu sein bei allen drei Molverhältnissen und bei allen Konzentrationen.
Bei 1:10 und 1:1 Molverhältnissen schienen DAPD und L-FMAU antagonistisch zu sein. Bei 1:3 Molverhältnis (nahezu äquipotente Wirksamkeiten, basierend auf den EC₉₀) waren die Wechselwirkungen der beiden Reagenzien komplexer. DAPD und L-FMAU zeigten moderate synergistische bis additive Wechselwirkungen bei niedrigeren Konzentrationen, welche auf wachsend mehr antagonistische Wechselwirkungen bei höheren Konzentrationen fortschritten. Nachfolgendes Testen hingegen zeigte an, dass DAPD synergistisch mit L-FMAU ist.
Die Antivirenaktivität von L-FMAU wurde erhöht durch Zusammenbehandlung mit FTC. Die Antivirenaktivität von DAPD und FTC war moderat synergistisch bei einem 3:1 oder einem 10:1 Molverhältnis bei allen außer den höchsten getesteten Konzentrationen. Da die relative Konzentration von FTC sich erhöhte, erniedrigten sich die kooperativen Wirkungen der beiden Reagenzien. Bei 1:1 Molverhältnis schienen die beiden Reagenzien antagonistisch zu sein.
Die Antivirenaktivität von L-FMAU wurde durch Zusammenbehandlung mit PCV verstärkt. Die Antivirenaktivität von DAPD und PCV war schwach synergistisch bei einem 1:1 oder einem 1:3 Molverhältnis bei allen getesteten Konzentrationen. Wenn die relative Konzentration von PCV anstieg, verminderten sich die kooperativen Wirkungen der beiden Reagenzien. Bei dem 1:10 Molverhältnis schienen die beiden Reagenzien antagonistisch zu sein.
Toxizitätsbewertungen
Keine signifikante Toxizität (größer als 50% Unterdrückung der Farbstoffaufnahmegehalte beobachtet in unbehandelten Zellen) wurde beobachtet für 3TC, PCV oder jede der Testverbindungen bei Konzentrationen, die für Antiviralbewertungen verwendet wurden.
Keine der Kombinationbehandlungen schien die Toxizitätsprofile von keinem der Reagenzien in verschiedenen Gemischen zu verstärken. Die Toxizitätsprofile von einigen der Gemischkombinationen war anscheinend höher als die entsprechenden Monotherapien, da die Werte als ein Faktor der Konzentration angegeben sind und die erste für jedes Gemisch aufgelistete Verbindung. Dies ist speziell bemerkenswert für PCV enthaltende Gemische. Hingegen enthüllte die Rückrechnung der Toxizitätsprofile auf Basis der zweiten Verbindung (z.B. PCV) in Gemischen, dass die scheinbaren Toxizitäten der toxischeren Verbindung zuzuschreiben war und dass keine verstärkte Toxizität in diesen Kombinationen vorlag.
Beispiel 2

Bereitgestellte Testverbindungen: (–)-β-FTC
DMVI-Testkontrollen: unbehandelte Zellen, 3TC (Lamivudin), Penciclovir (PCV)

Details der Testmethodik waren wie oben angegeben. Die Testverbindungen wurden als festes Material bei Raumtemperatur in gutem Verpackungszustand empfangen. Die Testverbindungen wurden in 100% Gewebekulturgrad DMSO solubilisiert (Sigma, Corp.) bei 100 mM. Tägliche Portionen von Testverbindungen wurden in individuellen Röhren gemacht und bei –20°C gelagert.
TESTVERBINDUNGEN: Die Testverbindung FTC induzierte signifikant und selektiv Unterdrückungen bei extrazellulären (Virus-)HBV-DNA-Gehalten, erzeugt von 2.2.15-Zellen.
Die Antivirenaktivität von FTC wurde verstärkt durch Zusammenbehandlung mit PCV. Die Antivirenaktivität der Kombinationstherapie war synergistisch bei allen getesteten Molverhältnissen. Wenn die relative Konzentration von PCV sich vergrößerte, erniedrigten sich die kooperativen Wirkungen der beiden Reagenzien.
Toxizitätsbewertungen
Keine signifikante Toxizität (größer als 50% Unterdrückung der Farbstoffaufnahmegehalte beobachtet in unbehandelten Zellen) wurde beobachtet für 3TC, PCV, FTC oder jede der Testverbindungen bei Konzentrationen, die für Antiviralbewertungen verwendet wurden (Tabellen S1, T1).
Keine der Kombinationbehandlungen schien die Toxizitätsprofile von keinem der Reagenzien in verschiedenen Gemischen zu verstärken. Die Toxizitätsprofile von einigen der Gemischkombinationen war anscheinend höher als die entsprechenden Monotherapien, da die Werte als ein Faktor der Konzentration angegeben sind und die erste für jedes Gemisch aufgelistete Verbindung.
Beispiel 3 Kombinationstherapie mit PMEA

Bereitgestellte Testverbindungen: PMEA, (–)-β-FTC, DAPD, L-FMAU
DMVI-Testkontrollen: unbehandelte Zellen, 3TC (Lamivudin)

Details der Testmethodik waren wie oben angegeben. Die Testverbindungen (außer für bis-POM-PMEA) wurden als festes Material bei Raumtemperatur in gutem Verpackungszustand empfangen und bei –20°C gelagert. Die Testverbindung bis-POM-PMEA wurde als 100 mM-Lösung in DMSO empfangen. Tägliche Portionen von Testverbindungen wurden in individuellen Röhren gemacht und bei –20°C gelagert. An jedem Tag der Behandlung wurden tägliche Portionen der Testverbindungen in Kulturmedium bei Raumtemperatur suspendiert und unmittelbar zu den Zellkulturen zugegeben.
TESTVERBINDUNGEN (PRIMÄRANALYSEN): Die Testverbindung FTC induzierte signifikant und selektiv Unterdrückungen bei extrazellulären (Virus-)HBV-DNA-Gehalten, erzeugt von 2.215-Zellen. Hingegen waren die Wirksamkeiten der Testverbindungen (–)-β-FTC, DAPD und L-FMAU niedriger als jene bei früheren Analysen beobachteten. Dies war am offensichtlichsten für DAPD und L-FMAU.
Bis-POM-PMEA (BP-PMEA) + FTC. Das Gemisch von BP-PMEA und FTC erzeugte eine Anti-HBV-Aktivität, die insgesamt moderat synergistisch war. Die Wirksamkeit der Gemische vergrößerte sich, wenn der relative Anteil an FTC abnahm. Hingegen traten die günstigsten Gesamtwechselwirkungen dort auf, wo die FTC-Konzentration proportional niedriger lag. Derselbe relative Synergismusgrad wurde allgemein bei allen Konzentrationen des 30:1 Gemisches beobachtet. Relativ mehr synergistische Wechselwirkungen wurden bei niedrigeren Konzentrationen von dem 10:1 und 3:1 Gemisch beobachtet und moderater bis starker Antagonismus wurde bei den höchsten Konzentrationen des 3:1 Gemischs beobachtet.
BP-PMEA + DAPD. Das Gemisch von BP-PMEA und DAPD erzeugte eine Anti-HBV-Aktivität, welche moderat bis schwach synergistisch bei niedrigeren relativen Konzentrationen von DAPD war und moderat bis stark antagonistisch bei höheren relativen Konzentrationen von DAPD. Die Wirksamkeit der Gemische nahm auch ab, wenn der relative Anteil von DAPD anstieg. Relativ mehr synergistische Wechselwirkungen wurden bei niedrigeren Konzentrationen der verschiedenen Gemische beobachtet.
BP-PMEA + L-FMAU. Das Gemisch von BP-PMEA und L-FMAU erzeugte eine Anti-HBV-Aktivität, die moderat synergistisch bei niedrigeren relativen Konzentrationen von L-FMAU war und additiv bis schwach antagonistisch bei höheren relativen Konzentrationen von L-FMA. Die Wirksamkeit der Gemische war am niedrigsten bei der höchsten Relativkonzentration von L-FMAU (1:1 Molverhältnis). Die günstigsten Gesamtwechselwirkungen wurden bei 3:1 Molverhältnis der beiden Verbindungen beobachtet. Relativ mehr synergistische Wechselwirkungen wurden bei niedrigeren Konzentrationen der unterschiedlichen Gemische beobachtet.
Toxizitätsbewertungen
Keine signifikante Toxizität (größer als 50% Unterdrückung der Farbstoffaufnahmegehalte beobachtet in unbehandelten Zellen) wurde beobachtet für 3TC, jede der Testverbindungen oder jedes der Verbindungsgemische bei Konzentrationen, die für Antiviralbewertungen verwendet wurden. Keines der Verbindungsgemische schien die Toxizität signifikant zu erhöhen. Die beobachteten Toxizitätsprofile für die Verbindungsgemische waren ähnlich zu und konsistent mit jenen für die Monotherapien beobachteten.
IV. Herstellung von pharmazeutischen Zusammensetzungen
Menschen, die unter hierin beschriebenen Krankheiten leiden, die aus HBV-Infektion herrühren, können durch Verabreichung an den Patienten einer wirksamen Menge der bezeichneten synergistischen Anti-HBV-Reagenzien in Kombination oder unabhängiger Dosierungsform für Kombinations- oder Abänderungstherapie behandelt werden, optional in einem pharmazeutisch verträglichen Träger oder Verdünnungsmittel. Die aktiven Materialien können durch jeden geeigneten Weg verabreicht werden, zum Beispiel oral, parenteral, intravenös, intradermal, subkutan oder topical in flüssiger oder fester Form.
Die aktiven Verbindungen sind in den pharmazeutisch verträglichen Trägern oder Verdünnungsmitteln in Mengen eingeschlossen, die ausreichen, um einem Patienten eine therapeutisch wirksame Menge von Verbindung abzugeben, um Virenreplikation in vivo zu behindern, insbesondere HBV-Replikation ohne Verursachen von ernsten toxischen Wirkungen in dem behandelten Patienten. Unter "inhibierender Menge" wird eine Menge von wirksamen Inhaltsstoffe verstanden, die ausreichend ist, um eine inhibitorische Wirkung wie z.B. gemessen durch einen Test wie den hier beschriebenen auszuüben.
Eine bevorzugte Dosis der Verbindung für alle oben genannten Bedingungen wird im Bereich von etwa 1 bis 50 mg/kg, bevorzugter 1 bis 20 mg/kg, an Körpergewicht pro Tag, allgemeiner 0,1 bis etwa 100 mg pro Kilogramm Körpergewicht des Empfängers pro Tag sein. Der effektive Dosisbereich von pharmazeutisch verträglichen Derivaten kann berechnet werden basierend auf dem Gewicht von Stammnucleosid, das abzugeben ist. Das Derivat zeigt Aktivität in sich selbst, wirksame Dosierung kann wie oben unter Verwendung des Gewichts des Derivats oder andere den Fachleuten bekannte Mittel eingeschätzt werden.
Die Verbindung wird praktischerweise in Einheiten oder jeder geeigneten Dosierungsform verabreicht, einschließend aber nicht begrenzt auf eine, welche 7 bis 3000 mg, vorzugsweise 70 bis 1400 mg Wirkstoff pro Einheitsdosierungsform enthält. Eine orale Dosierung von 50 bis 1000 mg ist normalerweise passend, typischer 50–300 mg.
Ideal sollte der Wirkstoff verabreicht werden, um Spitzenplasmakonzentrationen der aktiven Verbindung von etwa 0,2 bis 70 μM, vorzugsweise etwa 1,0 bis 10 μM zu erzielen. Dies kann zum Beispiel durch intravenöse Injektion einer 0,1 bis 5% Lösung des aktiven Inhaltsstoffes, optional in Salzlösung oder verabreicht als eine große Pille des aktiven Inhaltsstoffes erzielt werden.
Die Konzentration der wirksamen Verbindung in der Medikamentzusammensetzung wird von Absorption, Inaktivierung und Ausscheidungsgeschwindigkeiten des Medikaments als auch anderen Faktoren abhängen, die Fachleuten bekannt sind. Es ist anzumerken, dass Dosierungswerte auch mit der Strenge der zu lindernden Zustände variieren werden. Es wird weiter verstanden, dass für jedes spezielle Subjekt spezifische Dosisdiäten über die Zeit gemäß dem individuellen Bedarf und der professionellen Einschätzung der verabreichenden oder überwachenden Person für die Verabreichung der Zusammensetzungen eingestellt werden sollte und dass die hier dargelegten Konzentrationsbereiche nur exemplarisch sind und nicht dazu gedacht, die Reichweite oder Praxis der beanspruchten Zusammensetzung zu beschränken. Der Wirkstoff kann auf einmal verabreicht werden oder kann in eine Anzahl kleinerer Dosen geteilt werden, die bei verschiedenen Zeitintervallen zu verabreichen sind.
Eine bevorzugte Verabreichungsform der aktiven Verbindung ist oral. Orale Zusammensetzungen werden allgemein ein inertes Verdünnungsmittel oder einen essbaren Träger einschließen. Sie können in Gelatinekapseln eingeschlossen oder in Tabletten gepresst sein. Für Zwecke oraler therapeutischer Zusammensetzung kann die aktive Verbindung mit Hilfsstoffen einverleibt werden und in Form von Tabletten, Dragees oder Kapseln verwendet werden. Pharmazeutisch verträgliche Bindereagenzien und/oder Adjuvansmaterialien können als Teil der Zusammensetzung eingeschlossen sein.
Die Tabletten, Pillen, Kapseln, Dragees und dergleichen können einen der folgenden Inhaltsstoffe oder Verbindungen ähnlicher Natur enthalten: ein Bindemittel wie mikrokristalline Cellulose, Gummi, Tragacanth oder Gelatine; ein Hilfsstoff wie Stärke oder Lactose, Trennmittel wie Algininsäure, Primogel oder Kornstärke; ein Gleitmittel wie Magnesiumstearat oder Sterote; ein Gleitmittel wie kolloidales Silicondioxid, ein Süßungsmittel wie Sucrose oder Saccharin; oder ein Geschmacksreagens wie Pfefferminz, Methylsalicylat oder Orangengeschmack. Wenn die Dosierungseinheitsform eine Kapsel ist, kann sie zusätzlich zum Material obigen Typs einen Flüssigträger wie ein Fettöl enthalten. Zusätzlich können die Dosierungseinheitsformen verschiedener anderer Materialien enthalten, welche die physikalische Form der Dosierungseinheit modifizieren, zum Beispiel Beschichtungen von Zucker, Schellack, oder anderen enterischen Mitteln.
Die Verbindung kann als Verbindung eines Elixirs, Suspension, Sirup, Scheibe, Kaugummi oder dergleichen verabreicht werden. Ein Sirup kann zusätzlich zu wirksamen Verbindungen Sucrosen als Süßungsreagens und bestimmte Konservierungsmittel, Farbstoffe und Färbungen und Geschmacke enthalten.
Die Verbindung oder ein pharmazeutisch verträgliches Salz oder Derivat davon können auch mit anderen wirksamen Materialien vermischt werden, die die gewünschte Wirkung nicht beeinträchtigen oder mit Materialien, welche die gewünschte Wirkung ergänzen wie Antibiotika, Antipilzmittel, Antientzündungsmittel, Proteaseinhibitoren oder andere Nucleosid- oder Nicht-Nucleosid-Antivirenreagenzien wie oben detaillierter diskutiert. Lösungen oder Suspensionen, die für parenterale, intradermale, subkutane oder topische Anwendung verabreicht werden, können die folgenden Bestandteile einschließen: ein steriles Verdünnungsmittel wie Wasser zur Injektion, Salzlösung, fixierte Öle, Polyethylenglykole, Glycerin, Propylenglykol oder synthetische Lösungsmittel; antibakterielle Reagenzien wie Benzylalkohol oder Methylparabene; Antioxidationsmittel wie Ascorbinsäure oder Natriumbisulfit; chelatierende Reagenzien wie Ethylendiamintetraessigsäure; Puffer wie Acetate, Zitrate oder Phosphate und Reagenzien zum Einstellen von Tonizität wie Natriumchlorid oder Dextrose. Der Stammansatz kann in Ampullen, wegwerfbaren Spritzen oder Mehrdosisgefäßen aus Glas oder Plastik eingeschlossen sein.
Wenn intravenös verabreicht, sind bevorzugte Träger für biologische Salzlösungen oder phosphatgepufferte Salzlösungen (PBS).
In einer bevorzugten Ausführung werden die wirksamen Verbindungen mit Trägern hergestellt, welche die Verbindung gegen schnelle Entfernung aus dem Körper wie kontrollierte Freisetzung der Formulierung, einschließlich Implantate, mikroverkapselter Abgabesysteme schützen. Bioabbaubare, bioverträgliche Polymere können verwendet werden, so wie Ethylenvinylacetat, Polyanhydride, Polyglykolsäure, Collagen, Polyorthoester und Polyessigsäure. Verfahren zur Herstellung solcher Formulierungen werden Fachleuten offensichtlich sein. Die Materialien können kommerziell von Alza Corporation erhalten werden.
Liposomsuspensionen (einschließlich zu den infizierten Zellen zielgesteuerte Liposomen mit monoklonalen Antikörpern gegen Virenantigene) werden als pharmazeutisch verträgliche Träger bevorzugt. Diese können gemäß den Fachleuten bekannten Verfahren hergestellt werden, zum Beispiel wie beschrieben in US Patent Nr. 4,522,811. Zum Beispiel können Liposomformulierungen durch. Auflösen geeigneter Lipide wie Stearoylphosphatidylethanolamin, Stearoylphosphatidylcholin, Arachadoylphosphatidylcholin und Cholesterol in einem anorganischen Lösungsmittel hergestellt werden, welches dann verdampft wird unter Zurücklassen eines dünnen Films von getrocknetem Lipid an der Oberfläche des Behälters. Eine wässrige Lösung der aktiven Verbindung oder ihrer Monosphosphat-, Diphosphat- und/oder Triphosphatderivate wird dann in dem Behälter eingeführt. Der Behälter wird dann von Hand geschüttelt, um Lipidmaterial von den Seiten des Behälters freizusetzen und Lipidaggregate zu dispergieren, wobei die Liposomensuspension gebildet wird.

Claims

Verwendung einer synergistisch effektiven Menge von β-2-Hydroymethyl-5-(5-fluorocytosin-1-yl)-1,3-oxathiolan (β-FTC) oder eines seiner pharmazeutisch akzeptablen Salze, Ester oder Propharmaka mit einer effektiven Menge eines zweiten Anti-Hepatitis-B-Mittels ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Penciclovir, Famciclovir und Bis-POM-PMEA in der Herstellung eines Medikamentes für die simultane, separate oder sequentielle Verabreichung in der Behandlung von Hepatitis B Viren in einem Menschen.
Verwendung nach Anspruch 1, wobei β-FTC in der Form des (–)-optischen Isomers vorliegt.
Verwendung nach Anspruch 2, wobei das zweite Anti-Hepatitis-B-Mittel Penciclovir ist.
Verwendung nach Anspruch 2, wobei das zweite Anti-Hepatitis-B-Mittel Famciclovir ist.
Verwendung nach Anspruch 2, wobei das zweite Anti-Hepatitis-B-Mittel Bis-POM-PMEA ist.
Eine pharmazeutische Zusammensetzung umfassend eine synergistisch wirksame Menge von β-2-Hydroymethyl-5-(5-fluorocytosin-1-yl)-1,3-oxathiolan (β-FTC) oder eines seiner pharmazeutisch akzeptablen Salze, Ester oder Propharmakon mit einer effektiven Menge eines zweiten Anti-Hepatitis-B-Mittels ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Penciclovir, Famciclovir und Bis-POM-PMEA als ein kombiniertes Präparat zur simultanen, separaten oder sequentiellen Verwendung in der Behandlung von Hepatitis B Viren in einem Menschen.
Verwendung nach Anspruch 6, wobei das zweite Anti-Hepatitis-B-Mittel Penciclovir ist.
Verwendung nach Anspruch 6, wobei das zweite Anti-Hepatitis-B-Mittel Famciclovir ist.
Verwendung nach Anspruch 6, wobei das zweite Anti-Hepatitis-B-Mittel Bis-POM-PMEA ist.