DE69918447T2

DE69918447T2 - Antivirale kombinationen von lamivudin und adefovir

Info

Publication number: DE69918447T2
Application number: DE69918447T
Authority: DE
Inventors: A. Nathaniel BROWN; D. Lynn CONDREAY; Fraser Douglas Greenford GRAY; Marc Rubin
Original assignee: Glaxo Group Ltd
Current assignee: Glaxo Group Ltd
Priority date: 1998-09-18
Filing date: 1999-09-17
Publication date: 2005-08-04
Anticipated expiration: 2019-09-18
Also published as: IL141844A0; BR9913791A; DE69918447D1; JP2002526441A; AU755633B2; EP1113802A2; AU6085199A; NO20011358L; PL358988A1; CN1326349A; ES2223183T3; WO2000016755A3; TW555559B; KR100413312B1; WO2000016755A2; HUP0103858A2; CN1178660C; AR023661A1; HU227677B1; NO20011358D0

Description

Die vorliegende Erfindung betrifft therapeutische Kombinationen, die (2R,cis)-4-Amino-1-(2-hydroxymethyl-1,3-oxathiolan-5-yl)-pyrimidin-2-on (Lamivudin) und ein zweites Therapeutikum, Bis(pivaloyloxymethyl)(9-[(R)-2-(phosphonomethoxy)ethyl]adenin [der orale Prodrug von PMEA ((9-[(R)-2-(Phosphonomethoxy)ethyl]adenin oder Adefovir), Adefovir-Dipivoxil], umfassen. Die vorliegende Erfindung betrifft ebenfalls pharmazeutische Zusammensetzungen, die Kombinationen enthalten, die (2R,cis)-4-Amino-1-(2-hydroxymethyl-1,3-oxathiolan-5-yl)-pyrimidin-2-on und ein zweites Therapeutikum umfassen, das aus (9-[(R)-2-(Phosphonomethoxy)ethyl]adenin und Bis(pivaloyloxymethyl)(9-[(R)-2-(phosphonomethoxy)ethyl]adenin ausgewählt ist, und ihre Verwendung zur Herstellung eines Medikaments zur Behandlung von HBV-Infektionen, einschließlich Infektionen mit HBV-Mutanten, die resistent gegen nukleosidische und oder nicht-nukleosidische Inhibitoren der Vermehrung des Hepatitis-B-Virus sind.
Hepatitis B ist eine Viruskrankheit, die oral oder parenteral durch kontaminiertes Material, wie Blut oder Blutprodukte, kontaminierte Nadeln, geschlechtlich und vertikal aus infizierten oder Trägermüttern auf ihre Nachkommen übertragen wird. In denjenigen Gebieten der Welt, in denen die Krankheit verbreitet ist, führt die vertikale Übertragung in einem frühen Alter zu einem hohen Anteil von infizierten Personen, die chronische Träger von Hepatitis B werden. Geschätzte 350 Millionen Menschen weltweit sind chronisch mit Hepatitis B infiziert, und bis zu 150 Millionen mögen an einer Lebererkrankung in Abwesenheit einer Intervention sterben.
Derzeit ist der einzige etablierte Ansatz zur Behandlung von Hepatitis B die wiederholte Injektion von Interferon, was mit unangenehmen Nebenwirkungen verbunden sein kann und eine langandauernde Reaktion nur in einem Drittel oder weniger der behandelten Personen erzeugt. Interferon ist ein Immunmodulator, der zur Verstärkung der Fähigkeit des Immunsystems zur Bekämpfung der Krankheit entwickelt ist.
Es wurde berichtet, daß Lamivudin in einer zweijährigen Studie wirksam gegen HBV war, wobei gezeigt wurde, daß die meisten Patienten wesentlich reduzierte Grade der viralen Vermehrung zeigten, wobei 52% nicht nachweisbare Virusmengen bis zum Ende des zweiten Jahres beibehielten.
Es wurde berichtet, daß Adefovir eine Anti-HBV-Aktivität in vitro besitzt, und es wurde gezeigt, daß der orale Prodrug von Adefovir, Adefovir-Dipivoxil, aktiv gegen die HBV-Vermehrung in vivo ist, und er befindet sich derzeit in klinischen Studien der Phase II mit Patienten, die eine chronische Hepatitis B-Virusinfektion aufweisen.
Es gibt einen Bericht, wonach es einen Mangel an Kreuzresistenz gegen PMEA für humane Hepatitis B-DNA-Polymerase gibt, die Lamivudin-Codonen exprimiert, X. Xiong et al., Hepatology, Bd. 26, Nr. 4, Seite 2, 1997, Zusammenfassung Nr. 1211.
Mulato et al. (Antiviral Research, 36, 1997, 91–97) beschreiben die Anti-HIV-Aktivität von PMEA in Kombination mit antiretroviralen Verbindungen wie d4T, ddC, AZT, ddI, Lamivudin (3TC), Nelfinavir, Ritonavir, Indinavir und Saquinavir. Es wurde festgestellt, daß die Kombination aus PMEA mit Lamivudin eine additive Inhibierung der HIV-Vermehrung aufweist.
Die Verwendung der Kombinationen der Erfindung kann zu einer äquivalenten antiviralen Wirkung mit reduzierter Toxizität oder zu einer Erhöhung der Wirkstoffeffizienz führen, weil zwischen den Verbindungen ein Synergismus auftritt. Ebenfalls werden niedrigere Gesamtwirkstoffdosen möglicherweise die Häufigkeit des Auftretens von wirkstoffresistenten Varianten von HBV reduzieren.
Wir haben festgestellt, daß Lamivudin unerwartete Vorteile aufweist, wenn es in Kombination mit Adefovir verwendet wird. Insbesondere zeigt die Kombination eine statistische signifikante synergistische Anti-HBV-Wirkung. Frühe Ergebnisse haben gezeigt, daß die Kombination von Lamivudin und Adefovir-Dipivoxil ebenfalls eine synergistische Anti-HBV-Wirkung aufweist. Es ist ein Merkmal dieser Erfindung, daß die Verwendung dieser Wirkstoffkombinationen synergistische antivirale Wirkungen, eine vollständigere virale Suppression und eine virale Suppression über längere Zeiträume bereitstellen und das Auftreten von wirkstoffresistenten HBV-Mutanten beschränken und eine bessere Behandlung von wirkstoffbezogenen Toxizitäten erlauben wird. Die Verwendung dieser Wirkstoffkombinationen kann ebenfalls zu einer Verringerung der Anzahl von z. B. täglich verabreichten Tabletten führen, wodurch die Therapietreue der Patienten zunehmen kann.
Wie die Fachleute einsehen werden, erstrecken sich hier Verweise auf die Behandlung auch auf die Prophylaxe sowie auf die Behandlung etablierter Infektionen und Symptome.
Pharmazeutisch akzeptable Salze von Lamivudin, Adefovir oder Adefovir-Dipivoxil schließen diejenigen ein, die aus pharmazeutisch akzeptablen anorganischen und organischen Säuren stammen. Beispiele für geeignete Säuren schließen Chlorwasserstoffsäure, Bromwasserstoffsäure, Schwefelsäure, Salpetersäure, Perchlorsäure, Fumarsäure, Maleinsäure, Phosphorsäure, Glykolsäure, Milchsäure, Salicylsäure, Bernsteinsäure, Toluol-p-sulfonsäure, Weinsäure, Essigsäure, Zitronensäure, Methansulfonsäure, Ameisensäure, Benzoesäure, Malonsäure, Naphthalin-2-sulfonsäure und Benzolsulfonsäure ein. Andere Säuren wie Oxalsäure, obwohl sie selbst nicht pharmazeutisch akzeptabel sein mögen, können in der Herstellung von Salzen nützlich sein, die nützlich als Zwischenstufen zum Erhalt von Verbindungen der Erfindung und ihrer pharmazeutisch akzeptablen Säureadditionssalze sind.
Aus geeigneten Basen stammende Salze schließen Alkalimetall- (z. B. Natrium), Erdalkalimetall- (z. B. Magnesium), Ammonium- und NR₄ ⁺- (worin R C_1-4-Alkyl ist) -Salze ein.
Bevorzugte Ester von Lamivudin, Adefovir oder Adefovir-Dipivoxil werden unabhängig auch aus der folgenden Gruppe ausgewählt: (1) Carbonsäureester, in denen die Nicht-Carbonyl-Einheit des Carbonsäure-Teils der Ester-Gruppierung aus gerad- oder verzweigtkettigem Alkyl (z. B. Methyl, n-Propyl, t-Butyl oder n-Butyl), Cycloalkyl, Alkoxyalkyl (z. B. Methoxymethyl), Aralkyl (z. B. Benzyl), Aryloxyalkyl (z. B. Phenoxymethyl), Aryl (z. B. Phenyl, das gegebenenfalls mit z. B. Halogen, C_1-4-Alkyl oder C_1-4-Alkoxy substituiert ist) oder Amino ausgewählt ist; (2) Sulfonatester, wie Alkyl- oder Aralkylsulfonyl (z. B. Methansulfonyl); (3) Aminosäureester (z. B. L-Valyl oder L-Isoleucyl); und (4) Phosphonatester. In solchen Estern kann, wenn nichts anderes angegeben ist, jede vorhandene Alkyl-Einheit vorteilhaft 1 bis 18 Kohlenstoffatome enthalten, insbesondere 1 bis 6 Kohlenstoffatome, ganz besonders 1 bis 4 Kohlenstoffatome. Jede in solchen Estern vorhandene Cycloalkyl-Einheit enthält vorteilhaft 3 bis 6 Kohlenstoffatome. Jede in solchen Estern vorhandene Aryl-Einheit umfaßt vorteilhaft eine Phenyl-Gruppe. Jeder Verweis auf eine der obigen Verbindungen schließt ebenfalls einen Verweis auf ein physiologisch akzeptables Salz davon ein.
Besonders bevorzugte Ester sind die Mono-, Di- und Triphosphatester von Lamivudin (die gegebenenfalls geblockt sein können) oder jede andere Verbindung, die bei Verabreichung an einen menschlichen Patienten den Mono-, Di- oder Triphosphatester (direkt oder indirekt) bereitstellen kann.
So stellt die vorliegende Erfindung gemäß einem Aspekt eine Kombination bereit, die (2R,cis)-4-Amino-1-(2-hydroxymethyl-1,3-oxathiolan-5-yl)-pyrimidin-2-on oder ein pharmazeutisch akzeptables Derivat davon und ein zweites Therapeutikum, Bis(pivaloyloxymethyl)(9-[(R)-2-(phosphonomethoxy)ethyl]adenin oder ein pharmazeutisch akzeptables Derivat davon, umfaßt, worin (2R,cis)-4-Amino-1-(2-hydroxymethyl-1,3-oxathiolan-5-yl)-pyrimidin-2-on und das zweite Therapeutikum im Gewichtsbereich von 40 : 1 bis 1 : 1 vorhanden sind.
Kombinationen wie oben beschrieben können nachfolgend als erfindungsgemäße Kombinationen bezeichnet werden.
Wie hier verwendet, schließt ein "pharmazeutisch akzeptables Derivat" jedes (jeden) pharmazeutisch akzeptable(n) Salz, Ester oder Salz eines solchen Esters von Lamivudin, Adefovir oder Adefovir-Dipivoxil oder jede andere Verbindung ein, die bei Verabreichung an den Empfänger eine solche Verbindung oder einen antiviral aktiven Metaboliten oder Rest davon (direkt oder indirekt) bereitstellen kann.
Die vorliegende Erfindung stellt ferner erfindungsgemäße Kombinationen zur Verwendung in der Therapie bereit, insbesondere in der Behandlung einer HBV-Infektion, einschließlich Infektionen, die gegen nukleosidische oder nicht-nukleosidische Inhibitoren der Vermehrung des Hepatitis-B-Virus resistent sind.
Gemäß einem anderen Aspekt stellt die vorliegende Erfindung die Verwendung einer Kombination, die (2R,cis)-4-Amino-1-(2-hydroxymethyl-1,3-oxathiolan-5-yl)-pyrimidin-2-on oder ein pharmazeutisch akzeptables Derivat davon und ein zweites Therapeutikum umfaßt, das aus (9-[(R)-2-(Phosphonomethoxy)ethyl]adenin oder einem pharmazeutisch akzeptablen Derivat davon und Bis(pivaloyloxymethyl)(9-[(R)-2-(phosphonomethoxy)ethyl]adenin oder einem pharmazeutisch akzeptablen Derivat davon ausgewählt ist, worin (2R,cis)-4-Amino-1-(2-hydroxymethyl-1,3-oxathiolan-5-yl)-pyrimidin-2-on und das zweite Therapeutikum im Gewichtsbereich von 40 : 1 bis 1 : 1 vorhanden sind, zur Herstellung eines Medikaments zur Behandlung einer HBV-Infektion bereit.
Man wird einsehen, daß die Verbindungen der Kombination gleichzeitig, entweder in derselben oder einer unterschiedlichen pharmazeutischen Zusammensetzung, oder nacheinander verabreicht werden können. Falls es eine aufeinanderfolgende Verabreichung gibt, sollte die Verzögerung der Verabreichung des zweiten aktiven Bestandteils nicht derart sein, daß der Nutzen einer synergistischen therapeutischen Wirkung der Kombination der aktiven Bestandteile verlorengeht. Man wird ebenfalls verstehen, daß Lamivudin und Adefovir-Dipivoxil oder die pharmazeutisch akzeptablen Derivate davon oder Adefovir oder die pharmazeutische akzeptablen Derivate davon, ob gleichzeitig oder aufeinanderfolgend angeboten, individuell oder in jeder Kombination daraus verabreicht werden können. Lamivudin und Adefovir-Dipivoxil oder Adefovir werden bevorzugt gleichzeitig oder aufeinanderfolgend in getrennten pharmazeutischen Formulierungen verabreicht, am meisten bevorzugt gleichzeitig.
Bevorzugt wird die erfindungsgemäße Kombination als eine einzelne kombinierte Formulierung verabreicht.
Die vorliegende Erfindung stellt ebenfalls die Verwendung von Lamivudin zur Herstellung eines Medikaments zur gleichzeitigen oder aufeinanderfolgenden Verabreichung mit Adefovir oder Adefovir-Dipivoxil zur Behandlung von HBV-Infektionen bereit. Man wird einsehen, daß Lamivudin, Adefovir-Dipivoxil oder Adefovir oder jede Kombination daraus (ausschließlich Adefovir und Adefovir-Dipivoxil) in der Herstellung des obigen Medikaments verwendet werden kann.
Erfindungsgemäß liegen Lamivudin und Adefovir-Dipivoxil oder Adefovir in einem synergistischen Verhältnis vor.
Die synergistischen Wirkungen der Kombination aus Lamivudin und Adefovir-Dipivoxil oder Adefovir oder pharmazeutisch akzeptablen Derivaten davon werden über ein Verhältnis von 40 : 1 bis 1 : 1 (gewichtsbezogen) beobachtet, bevorzugt 25 : 1 bis 15 : 1 (gewichtsbezogen).
Zweckmäßig wird jede Verbindung in der Kombination in einer Menge eingesetzt werden, bei der sie eine Anti-HBV-Aktivität aufweist, wenn sie allein verwendet wird.
Die Menge einer Kombination aus Lamivudin, Adefovir oder Adefovir-Dipivoxil, die erforderlich ist, um als Anti-HBV-Mittel wirksam zu sein, wird natürlich variieren und liegt letztlich in der Verantwortung des praktischen Arztes. Die zu berücksichtigenden Faktoren schließen den Verabreichungsweg und die Natur der Formulierung, das Körpergewicht, Alter und den allgemeinen Zustand des Tieres und die Natur und Schwere der zu behandelnden Krankheit ein.
Allgemein wird für Lamivudin eine geeignete tägliche Dosis im Bereich von ca. 0,1 bis ca. 50 mg pro Kilogramm Körpergewicht des Empfängers pro Tag sein, bevorzugt im Bereich von 0,5 bis 20 mg pro Kilogramm Körpergewicht pro Tag, am meisten bevorzugt im Bereich von 0,5 bis 2 mg pro Kilogramm Körpergewicht pro Tag.
Die Verbindung wird zweckmäßig in einer Menge von ca. 100 mg pro Tag verabreicht.
Für Adefovir-Dipivoxil wird eine geeignete tägliche Dosis im Bereich von ca. 0,01 bis ca. 10 mg pro Kilogramm Körpergewicht des Empfängers pro Tag sein, bevorzugt im Bereich von 0,01 bis 1 mg pro Kilogramm Körpergewicht pro Tag, am meisten bevorzugt im Bereich von 0,01 bis 0,05 mg pro Kilogramm Körpergewicht pro Tag.
Zweckmäßig wird Adefovir-Dipivoxil in einer Menge von ca. 10 mg pro Tag verabreicht.
Für Adefovir wird eine geeignete tägliche Dosis im Bereich von ca. 0,01 bis ca. 10 mg pro Kilogramm Körpergewicht des Empfängers pro Tag sein, bevorzugt im Bereich von 0,01 bis 1 mg pro Kilogramm Körpergewicht pro Tag, am meisten bevorzugt im Bereich von 0,01 bis 0,05 mg pro Kilogramm Körpergewicht pro Tag.
Zweckmäßig wird Adefovir in einer Menge von ca. 10 mg pro Tag verabreicht.
Wenn nichts anderes angegeben wird, werden alle Massen der aktiven Bestandteile in bezug auf den Wirkstoff als solchen berechnet. Für den Fall eines pharmazeutisch akzeptablen Derivats von Lamivudin, Adefovir-Dipivoxil oder Adefovir oder eines Solvats von jedem davon würden die Zahlen proportional erhöht werden. Die gewünschte Dosis wird bevorzugt als zwei, drei, vier, fünf, sechs oder mehr Unterdosen angeboten, die in geeigneten Intervallen über den Tag verabreicht werden. Diese Unterdosen können in Einheitsarzneiformen verabreicht werden, die z. B. 1 bis 1500 mg, bevorzugt 5 bis 1000 mg, am meisten bevorzugt 5 bis 500 mg des aktiven Bestandteils pro Einheitsarzneiform enthalten. Alternativ kann die Dosis als kontinuierliche Infusion verabreicht werden, falls der Zustand des Empfängers dies erfordert.
Die Komponenten der Kombination, die als aktive Bestandteile bezeichnet werden können, können zur Therapie an ein Tier, z. B. ein Säugetier, einschließlich Mensch, in herkömmlicher Weise verabreicht werden.
Obwohl es möglich ist, die aktiven Bestandteile der Kombination als Rohchemikalie zu verabreichen, ist es bevorzugt, sie als pharmazeutische Zusammensetzung anzubieten. Erfindungsgemäße pharmazeutische Zusammensetzungen umfassen eine erfindungsgemäße Kombination in Verbindung mit einem oder mehreren pharmazeutisch akzeptablen Trägern oder Exzipienten und gegebenenfalls anderen Therapeutika. Der Träger (die Träger) muß (müssen) akzeptabel in dem Sinne sein, daß er (sie) mit den anderen Bestandteilen der Formulierung kompatibel und nicht nachteilig für den Empfänger ist (sind). Wenn die individuellen Komponenten der Kombination separat verabreicht werden, werden sie allgemein als pharmazeutische Zusammensetzung angeboten. Die nachfolgenden Verweise auf Zusammensetzungen beziehen sich, wenn nichts anderes angegeben ist, auf Zusammensetzungen, die entweder die Kombination oder eine Komponente davon enthalten.
Gemäß einem anderen Aspekt stellt die vorliegende Erfindung eine pharmazeutische Formulierung zur Verwendung in der Behandlung von HBV bereit, die (2R,cis)-4-Amino-1-(2-hydroxymethyl-1,3-oxathiolan-5-yl)-pyrimidin-2-on oder ein pharmazeutisch akzeptables Derivat davon und ein zweites Therapeutikum umfaßt, das aus (9-[(R)-2-(Phosphonomethoxy)ethyl]adenin oder einem pharmazeutisch akzeptablen Derivat davon und Bis(pivaloyloxymethyl)(9-[(R)-2-(phosphonomethoxy)ethyl]adenin oder einem pharmazeutisch akzeptablen Derivat davon ausgewählt ist, worin (2R,cis)-4-Amino-1-(2-hydroxymethyl-1,3-oxathiolan-5-yl)-pyrimidin-2-on und das zweite Therapeutikum im Gewichtsbereich von 40 : 1 bis 1 : 1 vorhanden sind.
Eine Kombination aus Lamivudin und Adefovir-Dipivoxil oder Adefovir oder pharmazeutisch akzeptablen Derivaten davon kann zweckmäßig als pharmazeutische Zusammensetzung mit einem oder mehreren pharmazeutisch akzeptablen Trägern in einer Einheitsarzneiform angeboten werden. Eine zweckmäßige Einheitsarzneiformulierung enthält die aktiven Bestandteile in Mengen von jeweils 1 mg bis 2 g, z. B. 2 bis 200 mg, wie z. B. 25 bis 150 mg, von Lamivudin und 5 bis 60 mg von Adefovir oder Adefovir-Dipivoxil.
Pharmazeutische Zusammensetzungen können ebenfalls für den Patienten in "Patientenpackungen" verschrieben werden, die den gesamten Behandlungsverlauf in einer einzelnen Packung enthalten, gewöhnlich einer Blisterpackung. Patientenpackungen besitzen einen Vorteil gegenüber herkömmlichen Verschreibungen, wenn ein Apotheker einen Patientenvorrat eines Pharmazeutikums aus einem Großvorrat aufteilt, indem der Patient immer Zugriff auf die Packungsbeilage hat, die in der Patientenpackung enthalten ist und normalerweise bei herkömmlichen Verschreibungen fehlt. Es wurde gezeigt, daß der Einschluß einer Packungsbeilage die Therapietreue des Patienten gegenüber den Anweisungen des Arztes verbessert.
Man wird verstehen, daß die Verabreichung der Kombination der Erfindung mittels einer einzelnen Patientenpackung oder mittels Patientenpackungen jeder Zusammensetzung, wobei eine Packungsbeilage den Patienten auf die richtige Verwendung der Erfindung hinweist, ein wünschenswertes zusätzliches Merkmal dieser Erfindung ist.
Die Patientenpackung kann wenigstens einen aktiven Bestandteil der erfindungsgemäßen Kombination und eine Informationsbeilage umfassen, die Anweisungen zur Verwendung der Kombination der Erfindung enthält.
Die Patientenpackung kann ebenfalls eine Doppelpackung umfassen, die in Verbindung zur getrennten Verabreichung Lamivudin und Adefovir-Dipivoxil oder Adefovir oder pharmazeutisch akzeptable Derivate davon umfaßt.
Zusammensetzungen schließen diejenigen ein, die zur oralen, rektalen, nasalen, topischen (einschließlich transdermalen, bukkalen und sublingualen), vaginalen oder parenteralen (einschließlich subkutanen, intramuskulären, intravenösen und intradermalen) Verabreichung geeignet sind. Die Zusammensetzungen können zweckmäßig in Einheitsarzneiform angeboten werden und können durch alle Verfahren hergestellt werden, die auf dem Gebiet der Pharmazie allgemein bekannt sind. Solche Verfahren stellen ein weiteres Merkmal der vorliegenden Erfindung dar und schließen den Schritt des Inverbindungbringens der aktiven Bestandteile mit dem Träger ein, der einen oder mehrere Nebenbestandteile ausmacht. Allgemein werden die Formulierungen durch gleichförmiges und inniges Inverbindungbringen der aktiven Bestandteile mit flüssigen Trägern oder feinverteilten festen Trägern oder beiden und, falls erforderlich, anschließende Formen des Produkts hergestellt.
Zusammensetzungen der vorliegenden Erfindung, die zur oralen Verabreichung geeignet sind, können als diskrete Einheiten angeboten werden, wie Kapseln, Kapletts, Cachets oder Tabletten, die jeweils eine vorher festgelegte Menge der aktiven Bestandteile enthalten; als Pulver oder Granalien; als Lösung oder Suspension in einer wäßrigen oder nichtwäßrigen Flüssigkeitp oder als flüssige Öl-in-Wasser-Emulsion oder flüssige Wasser-in-Öl-Emulsion. Der aktive Bestandteil kann ebenfalls als Bolus, Elektuarium oder Paste angeboten werden.
Eine Tablette kann durch Verpressen oder Formen hergestellt werden, gegebenenfalls mit einem oder mehreren Nebenbestandteilen. Verpreßte Tabletten können hergestellt werden durch Verpressen der aktiven Bestandteile in einer geeigneten Maschine in freifließender Form, wie als Pulver oder Granalien, gegebenenfalls vermischt mit einem Bindemittel (z. B. Povidon, Gelatine, Hydroxypropylmethylcellulose), Schmiermittel, inerten Verdünnungsmittel, Konservierungsmittel, Tablettensprengmittel (z. B. Natriumstärkeglykolat, vernetztes Povidon, vernetzte Natriumcarboxymethylcellulose), Tensid oder Dispergiermittel. Geformte Tabletten können hergestellt werden durch Formen einer Mischung der gepulverten und mit einem inerten flüssigen Verdünnungsmittel angefeuchteten Verbindung in einer geeigneten Maschine. Die Tabletten können gegebenenfalls überzogen oder gekerbt werden und können so formuliert werden, um eine langsame oder kontrollierte Freisetzung der aktiven Bestandteile darin bereitzustellen, wobei z. B. Hydroxypropylmethylcellulose in unterschiedlichen Anteilen verwendet wird, um das gewünschte Freisetzungsprofil zu liefern. Tabletten können gegebenenfalls mit einem enterischen Überzug versehen werden, um die Freisetzung in anderen Teilen der Eingeweide als dem Magen bereitzustellen.
Bevorzugt werden die erfindungsgemäßen Kombinationen oral verabreicht.
Zusammensetzungen, die zur topischen Verabreichung in den Mund geeignet sind, schließen Lutschtabletten ein, die die aktiven Bestandteile in einer aromatisierten Basis umfassen, gewöhnlich Saccharose und Gummi arabicum oder Traganthgummi; Pastillen, die den aktiven Bestandteil in einer inerten Basis wie Gelatine und Glycerin oder Saccharose und Gummi arabicum umfassen; und Mundspülungen, die den aktiven Bestandteil in einem geeigneten flüssigen Träger umfassen. Zusammensetzungen zur rektalen Verabreichung können als Suppositorium mit einer geeigneten Basis angeboten werden, die z. B. Kakaobutter oder ein Salicylat umfaßt.
Die topische Verabreichung kann ebenfalls mittels einer transdermalen iontophoretischen Vorrichtung erfolgen.
Formulierungen, die zur vaginalen Verabreichung geeignet sind, können als Pessare, Tampons, Cremes, Gele, Pasten, Schäume oder Sprühformulierungen angeboten werden, die zusätzlich zum aktiven Bestandteil solche Träger enthalten, wie sie als geeignet auf diesem Gebiet bekannt sind.
Pharmazeutische Formulierungen, die zur rektalen Verabreichung geeignet sind, worin der Träger ein Feststoff ist, werden am meisten bevorzugt als Einheitsdosissuppositorien angeboten. Geeignete Träger schließen Kakaobutter und andere Stoffe ein, die üblicherweise auf diesem Gebiet verwendet werden. Die Suppositorien können durch Vermischen der aktiven Kombination mit dem (den) erweichten oder geschmolzenen Träger(n) gefolgt von Abkühlen und Formen in Formen in herkömmlicher Weise gebildet werden.
Formulierungen, die zur parenteralen Verabreichung geeignet sind, schließen wäßrige und nicht-wäßrige isotonische sterile Injektionslösungen ein, die Antioxidantien, Puffer, Bakteriostatika und gelöste Stoffe enthalten können, die die Formulierung isotonisch zum Blut des beabsichtigten Empfängers machen; und wäßrige und nicht-wäßrige sterile Suspensionen, die Suspendiermittel und Verdickungsmittel einschließen können; und Liposomen oder andere mikroteilchenförmige Systeme, die geschaffen sind, um die Verbindung auf Blutkomponenten oder ein oder mehrere Organe zu richten. Die Formulierungen können in versiegelten Einzeldosis- oder Mehrfachdosisbehältern angeboten werden, z. B. Ampullen und Fläschchen, und können in einem gefriergetrockneten (lyophilisierten) Zustand gelagert werden, der nur die Zugabe des sterilen flüssigen Trägers, z. B. Wasser zur Injektion, unmittelbar vor der Verwendung erfordert. Unvorbereitete Injektionslösungen und Suspensionen können aus sterilen Pulvern, Granalien und Tabletten der zuvor beschriebenen Art hergestellt werden.
Bevorzugte Einheitsarzneiformulierungen sind diejenigen, die eine tägliche Dosis oder tägliche Unterdosis der aktiven Bestandteile wie hier zuvor angegeben oder einen entsprechenden Bruchteil davon enthalten.
Es sollte selbstverständlich sein, daß die Formulierungen dieser Erfindung zusätzlich zu den oben besonders genannten Bestandteilen andere Mittel einschließen können, die auf diesem Gebiet in bezug auf den fraglichen Typ der Formulierung herkömmlich sind, z. B. können diejenigen, die zur oralen Verabreichung geeignet sind, weitere Mittel wie Süßungsmittel, Verdicker und Geschmacksmittel einschließen.
Die Verbindungen der Kombination der vorliegenden Erfindung können in herkömmlicher Weise erhalten werden.
Verfahren zur Herstellung von Lamivudin werden in WO 91/17159 und WO 95/29174 beschrieben.
Verfahren zur Herstellung von Adefovir werden in EP-A-206459 beschrieben.
Verfahren zur Herstellung von Adefovir-Dipivoxil werden in EP-A-481214 beschrieben.
Die folgenden Beispiele sind nur zur Veranschaulichung gedacht und sind nicht zur Beschränkung des Umfangs der Erfindung in irgendeiner Weise gedacht. "Aktiver Bestandteil" bezeichnet Lamivudin, Adefovir-Dipivoxil oder Adefovir oder Mehrfache davon oder ein physiologisch funktionelles Derivat von jeder der zuvor genannten Verbindungen.
Beispiel 1: Tablettenformulierung
Die folgenden Formulierungen A, B und C werden durch Naßgranulierung der Bestandteile mit einer Lösung aus Povidon, gefolgt von Zugabe von Magnesiumstearat und Verpressen hergestellt. Formulierung A

mg/Tablette

Aktiver Bestandteil A 100

Aktiver Bestandteil B 30

Lactose B. P. 105

Povidon B. P. 7

Natriumstärkeglykolat 10

Magnesiumstearat 3

255

Formulierung B

mg/Tablette

Aktiver Bestandteil A 100

Aktiver Bestandteil B 30

Lactose B. P. 75

Avicel PH 101 30

Povidon B. P. 7

Natriumstärkeglykolat 10

Magnesiumstearat 3

255

Formulierung C

mg/Tablette

Aktiver Bestandteil A 100

Aktiver Bestandteil B 5

Lactose B. P. 100

Stärke 25

Povidon B. P. 2

Magnesiumstearat 2

234
Die folgenden Formulierungen D und E werden durch Direktverpressen der vermischten Bestandteile hergestellt. Die Lactose in Formulierung E ist vom Direktverpressungstyp (Dairy Crest – "Zeparox"). Formulierung D

mg/Tablette

Aktiver Bestandteil A 100

Aktiver Bestandteil B 30

Vorgequollene Stärke NF15 75

205

Formulierung E

mg/Tablette

Aktiver Bestandteil A 100

Aktiver Bestandteil B 5

Lactose B. P. 70

Avicel 50

225
Formulierung F (Formulierung mit kontrollierter Freisetzung)
Die Formulierung wird hergestellt durch Naßgranulierung der Bestandteile mit einer Povidon-Lösung, gefolgt von Zugabe von Magnesiumstearat und Verpressen.

mg/Tablette

Aktiver Bestandteil A 100

Aktiver Bestandteil B 30

Hydroxypropylmethylcellulose (Methocel K4M Premium) 28

Lactose B. P. 13

Povidon B. P. 7

Magnesiumstearat 2

180
Die Wirkstofffreisetzung erfolgt über einen Zeitraum von ca. 6–8 Stunden und ist nach 12 Stunden beendet.
Beispiel 2: Kapselformulierungen
Formulierung A
Eine Kapselformulierung wird hergestellt durch Vermischen der Bestandteile der Formulierung D im obigen Beispiel 1 und Einfüllen in eine zweiteilige Hartgelatinekapsel. Formulierung B (nachfolgend) wird in ähnlicher Weise hergestellt. Formulierung B

mg/Kapsel

Aktiver Bestandteil A 100

Aktiver Bestandteil B 5

Lactose B. P. 70

Natriumstärkeglykolat 10

Magnesiumstearat 1

186

Formulierung C

mg/Kapsel

Aktiver Bestandteil A 100

Aktiver Bestandteil B 30

Macrogel 4000 B. P. 170

300
Kapseln der Formulierung C werden durch Schmelzen des Macrogel 4000 B. P., Dispergieren des aktiven Bestandteils in der Schmelze und Einfüllen der Schmelze in eine zweiteilige Hartgelatinekapsel hergestellt. Formulierung D

mg/Kapsel

Aktiver Bestandteil A 100

Aktiver Bestandteil B 5

Lecithin 50

Erdnußöl 50

205
Kapseln der Formulierung D werden durch Dispergieren des aktiven Bestandteils im Lecithin und Erdnußöl und Einfüllen der Dispersion in weiche elastische Gelatinekapseln hergestellt.
Formulierung E (Kapsel mit kontrollierter Freisetzung)

Die folgende Kapselformulierung mit kontrollierter Freisetzung wird durch Extrudieren der Bestandteile a, b und c unter Verwendung eines Extruders, gefolgt von Sphäronisierung des Extrudats und Trocknen hergestellt. Die getrockneten Pellets werden dann mit einer die Freisetzung kontrollierenden Membran (d) überzogen und in zweiteilige Hartgelatinekapseln gefüllt.

	mg/Kapsel
(a) Aktiver Bestandteil A	100
Aktiver Bestandteil B	30
(b) Mikrokristalline Cellulose	60
(c) Lactose B. P.	60
(d) Ethylcellulose	6
	256

Beispiel 3: Injizierbare Formulierung Formulierung A

	mg
Aktiver Bestandteil A	100
Aktiver Bestandteil B	5
Salzsäure-Lösung 0,1 M oder Natriumhydroxid-Lösung 0,1 M in genügender Menge auf	pH 4,0 bis 7,0
Steriles Wasser in genügender Menge auf	10 ml

Der aktive Bestandteil wird im Großteil des Wassers (35–40°C) gelöst und der pH mit der Salzsäure oder dem Natriumhydroxid nach Bedarf auf 4,0 bis 7,0 eingestellt. Die Charge wird dann mit dem Wasser zum Volumen aufgefüllt und durch einen sterilen Mikroporenfilter in ein steriles 10 ml-Braunglasfläschchen (Typ 1) gefüllt und mit sterilen Verschlüssen und Übersiegeln versiegelt. Formulierung B

Aktiver Bestandteil A 125 mg

Steriler pyrogenfreier Phosphatpuffer pH 7, in genügender Menge auf 25 ml

Beispiel 4: Intramuskuläre Injektion

Aktiver Bestandteil A 100 mg

Aktiver Bestandteil B 30 mg

Benzylalkohol 0,067 g

Glycofurol 75 0,94 g

Wasser zur Injektion in genügender Menge auf 3,00 ml

Der aktive Bestandteil wird im Glycofurol gelöst. Der Benzylalkohol wird dann hinzugegeben und gelöst und Wasser auf 3 ml hinzugegeben. Die Mischung wird dann durch einen sterilen Mikroporenfilter filtriert und in sterilen 3 ml-Braunglasfläschchen (Typ 1) versiegelt. Beispiel 5: Sirup

Aktiver Bestandteil A	100 mg
Aktiver Bestandteil B	5 mg
Sorbit-Lösung	0,6 g
Glycerin	0,85 g
Natriumbenzoat	0,0025 g
Geschmacksstoff, Pfirsich 17.42.3169	0,0125 ml
Gereinigtes Wasser in genügender Menge auf	5,00 ml

Der aktive Bestandteil wird in einer Mischung aus dem Glycerin und dem Großteil des gereinigten Wassers gelöst. Eine wäßrige Lösung des Natriumbenzoats wird dann zur Lösung gegeben, gefolgt von der Zugabe der Sorbit-Lösung und schließlich des Geschmacksstoffs. Das Volumen wird mit gereinigtem Wasser aufgefüllt und gut vermischt. Beispiel 6: Suppositorium

mg/Kapsel Suppositorium

Aktiver Bestandteil A 100

Aktiver Bestandteil B 30

Hartfett, B. P. (Witepsol H15 – Dynamit Nobel) 1770

1900
Ein Fünftel des Witepsol H15 wird in einem Tiegel mit Dampfmantel bei maximal 45°C geschmolzen. Der aktive Bestandteil wird durch ein 200 μm-Sieb gesiebt und zur geschmolzenen Basis unter Vermischen und unter Verwendung eines mit einem Schneidkopf ausgerüsteten Silverson gegeben, bis eine glatte Dispersion erhalten wird. Unter Beibehaltung der Mischung auf 45°C wird das verbleibende Witepsol H15 zur Suspension gegeben und gerührt, um eine homogene Mischung sicherzustellen. Die gesamte Suspension wird durch ein 250 μm-Sieb aus rostfreiem Stahl geleitet und unter kontinuierlichem Rühren auf 40°C abkühlen gelassen. Bei einer Temperatur von 38 bis 40°C werden 2,02 g der Mischung in geeignete 2 ml-Plastikformen gefüllt. Man läßt die Suppositorien auf Raumtemperatur abkühlen. Beispiel 7: Pessare

mg/Pessar

Aktiver Bestandteil A 100

Aktiver Bestandteil B 5

Wasserfreie Dextrose 160

Kartoffelstärke 150

Magnesiumstearat 3

418
Die obigen Bestandteile werden direkt vermischt und Pessare durch Direktverpressung der resultierenden Mischung hergestellt.
Biologische Daten
Beispiel 8
Die humane Hepatoblastom-Zellinie (Hep-G2-2.2.15), die konstitutiv infektiöses HBV erzeugt, wurde in Mikrotiterplatten mit 96 Vertiefungen mit einer Dichte von 5 × 10³ Zellen pro Vertiefung übergeimpft. Diese Zellen wurden mit einer Kombination aus Lamivudin und PMEA auf dreifachen Platten behandelt. Kulturmedium, das Wirkstoffe enthielt, wurde jeden zweiten Tag für 9 Tage aufgefrischt, worauf die Überstände gesammelt und auf den HBV-Gehalt analysiert wurden.
Die Lamivudin/PMEA-Kombination wurde zweimal in dreifacher Ausführung matrixweise getestet. Experiment 1 verwendete einen Lamivudin-Bereich von 100 nM bis 0,14 nM (3-fache Verdünnungen in Spalten) und PMEA, 9-[(R)-2-(Phosphonomethoxy)ethyl]adenin (Adefovir), mit Konzentrationen von 1 μM bis 10 nM (3,16-fache Verdünnungen in Zeilen). Experiment 2 wurde mit Verdünnungen von Lamivudin im Bereich von 100 nM bis 0,045 nM durchgeführt (in 3-fachen Verdünnungen in Spalten) und mit einem PMEA-Bereich von 5 μM bis 0,16 nM (3,16-fache Verdünnungen in Zeilen). Beide Wirkstoffe wurden in einer separaten Mikrotiterplatte mit 96 Vertiefungen verdünnt und anschließend auf Platten überführt, die die Zell-Monoschichten enthielten. Die Zellen wurden in 150 μl RPMI 1640 gezüchtet, das mit 2 mM L-Glutamin und 10% fötalem Rinderserum ergänzt war. Vor der Übertragung des Wirkstoffs wurden 120 μl Medium von den Zellen entfernt, wobei 30 μl auf den Monoschichten zurückblieben, um ein Trocknen zu verhindern. 90 μl frisches Medium ohne Wirkstoff wurden hinzugegeben, gefolgt von der Zugabe von 30 μl von 5×-Wirkstoffverdünnungen. Lamivudin und PMEA wurden jeweils auf ihren jeweiligen Platten individuell mit den gleichen Konzentrationen getestet. Die Daten wurden auf Werte normalisiert, die mit nicht-wirkstoffbehandelten Zellen erhalten wurden, und als Prozent der Kontrolle zur Analyse ausgedrückt.
Das zur Detektion von HBV verwendete Verfahren wurde zuvor beschrieben (R. W. Jansen, L. C. Johnson, D. R. Averett, High-Capacity in vitro assessment of anti-hepatitis B virus compound selectivity by a virionspecific polymerase chain reaction assay. Antimicrob. Agents Chem. 1993; 37 (3): 441–447). Kurz gesagt wurde die HBV-Detektion durch "Einfangen" von Virus aus den Überständen auf Anti-HBsAg-beschichteten Platten, Waschen, Denaturieren zur Freisetzung von HBV-DNA, Durchführen von PCR mit biotinylierten Primern, Streptavidin-Einfangen von biotinylierten PCR-Produkten mit begleitender Sondenhybridisierung, Zugabe von Substrat und Auslesen optischer Dichten der kolorimetrischen Reaktion durchgeführt. Verdünnungen eines standardisierten HBV-haltigen Überstandes wurden auf jeder Platte eingeschlossen, und HBV-DNA-Konzentrationen der Testvertiefungen wurden aus der HBV-Standardkurve berechnet. Der nützliche Detektionsbereich beträgt wenigstens 0,045 bis 45 fg von HBV-DNA, wobei 30 Kopien des Genoms zuverlässig detektiert werden können. Proben wurden in Verbindung mit sowohl positiven (0,448 fg/μl Plasmid-DNA) als auch negativen Kontrollen (RPMI-Medium, ergänzt mit 2 mM L-Glutamin und 10% fötalem Kälberserum) getestet.
Der durchschnittliche IC₅₀-Wert und Standardfehler der IC₅₀-Werte für die dreifachen Platten wurden unter Verwendung einer nicht-linearen SAS-Regression berechnet, um die Daten an die Hill-Gleichung für jede Konzentrations-Reaktions-Kurve anzupassen. Wenn nur eine einzelne Bestimmung eines IC₅₀-Wertes für eine besondere Dosiskombination vorgenommen werden konnte, wurde der Durchschnitt der Standardfehler aus benachbarten Konzentrationen verwendet, um den Standardfehler abzuschätzen. Die fraktionellen inhibitorischen Konzentrationen (FIC50) wurden für jede Kombination berechnet und unter Verwendung der Isobologramm-Darstellung aufgetragen (M. C. Berenbaum (1985), The Expected Effect of a Combination of Agents: the General Solution. J. Theor. Biol. 114, 413–431). Zur Bewertung der statistischen Signifikanz von Synergie oder Antagonismus wurde ein ungepaarter t-Test verwendet, um jede Summe von gepaarten FIC50-Werten mit dem theoretischen Wert von 1 zu vergleichen. P-Werte von weniger als 0,05 wurden als statistisch signifikant betrachtet. Der Vergleich der P-Werte zwischen Experimenten muß mit großer Vorsicht interpretiert werden, da die Experimente unterschiedliche Testkonzentrationsbereiche verwendeten (oder Bereiche, die durch das Isobologramm-Verfahren verwendbar sind). In manchen Fällen konnten nicht alle getesteten Konzentrationen die Berechnung eines IC₅₀-Wertes stützen, da die Reaktion in einem Ausmaß von mehr als 50% der Kontrolle für alle Dosen gehemmt wurde.
1 zeigt ein einzelnes Isobologramm, das durch Kombinieren der Daten aus beiden Experimenten erzeugt wurde und einen statistisch signifikanten Synergismus zeigt.
Beispiel 9
Der IC₅₀-Wert für PMEA wurde gegen Wildtyp- (WT) und Lamivudinresistentes HBV bestimmt, das transient in einem Zellkultursystem wie nachfolgend beschrieben exprimiert wurde. HepG2-Zellen wurden transient mit Plasmid transfiziert, das das HBV-Genom enthielt, das die Wildtyp-Sequenz besaß oder die folgenden Lamivudin-resistenten Mutationen im reversen Transkriptase-Gen enthielt: M552I, M552V, L528M, L528MM552V. Es war zuvor bestimmt worden, daß nur die M552I- und L528MM552V-Mutationen bei HBV-infizierten Patienten beobachtet wurden, die eine Resistenz gegen die Lamivudin-Therapie entwickelten, obwohl die individuellen M552V- und L528M- Mutationen teilweise zum Verlust der Empfindlichkeit von Lamivudin gegen die HBV-Vermehrung in vitro beitrugen (M. I. Allen, M. Deslauriers, C. W. Andrews, G. A. Tipples, K. A. Walters, D. L. J. Tyrrell, N. Brown für die Lamivudine Clinical Investigation Group and L. D. Condreay, Identification and characterization of mutations in hepatitis B virus resistant to lamivudine. HEPATOLOGY 1998, 27: 1670–1677). HepG2-Zellen wurden in Costar-Platten mit 96 Vertiefungen mit 6300 Zellen pro Vertiefung in 150 μl HepG2-Medium geimpft (Dulbeccos modifiziertes Eagle-Medium (DMEM), das 10% fötales Rinderserum enthält) und über Nacht bei 37°C inkubiert. Für jede transfizierte Vertiefung wurden 75 ng Plasmid-DNA und 0,5 μl Lipofectamin (Gibco) zusammen für 30 Minuten bei Raumtemperatur in 12,5 μl OptiMem (Gibco) vor der Zugabe von DNA/Lipofectamin-Mischung zu den Zellen inkubiert. Jede Vertiefung wurde mit 150 μl von nicht-ergänztem DMEM gespült. Die DNA/Lipofectamin-Mischung wurde zu jeder Vertiefung in einem Gesamtvolumen von 150 μl OptiMem-Medium gegeben. Die Zellen wurden mit der DNA/Lipofectamin-Lösung für 5 Stunden bei 37°C inkubiert. Nach der Inkubation wurden 150 μl DMEM, das 20% Serum enthielt, zu jeder Vertiefung gegeben, und die Platten wurden über Nacht bei 37°C inkubiert. Das Medium wurde gegen 150 μl HepG2-Medium allein oder Medium, das PMEA enthielt, ausgetauscht.
2.2.15-Zellen wurden in Costar-Platten mit 96 Vertiefungen mit 2250 Zellen pro Vertiefung in 150 ml Komplettmedium geimpft (RPMI-Medium, das 10% fötales Rinderserum enthält) und wurden über Nacht bei 37°C inkubiert. Das Medium wurde gegen 150 μl Komplettmedium allein oder Medium ausgetauscht, das die gewünschte PMEA-Konzentration enthielt.
Transfizierte Zellen sowie 2.2.15-stabile HBV-Erzeugerzellen wurden mit wirkstofffreiem Kontrollmedium oder Medium, das PMEA enthielt, jeden zweiten Tag behandelt (Tag 1, 3 und 5). Endkonzentrationen von PMEA für die Zellbehandlung wurden mit 25, 5, 1, 0,2, 0,04 μM (für WT-Plasmidtransfizierte Kulturen und Kontroll-2.2.15-Zellen) oder 125, 25, 5, 1, 0,2 μM (für alle mit mutiertem Plasmid transfizierten Kulturen) verwendet.
HBV-DNA-Mengen wurden aus Medium quantifiziert, das aus Zellen am Tag 7 unter Verwendung der Verfahren geerntet wurde, die beschrieben werden in R. W. Jansen, L. C. Johnson, D. R. Averett, High-Capacity in vitro assessment of anti-hepatitis B virus compound selectivity by a virion-specific polymerase chain reaction assay. Antimicrob. Agents Chem. 1993; 37 (3): 441–447. Weitere Einzelheiten werden in Beispiel 8 angegeben.
Die Cytotoxizität aufgrund der Wirkstoffbehandlung wurde unter Verwendung der DNA-Anfärbung mit Bisbenzimid bestimmt (H33342 3HCl 4H₂O; Calbiochem Company, La Jolla, CA). Nachdem das Medium geerntet war, wurden die Zellen mit 70% Ethanol für 30 Minuten fixiert. Die Zellen wurden einmal mit serumfreiem Medium gespült und mit der DNA-Anfärbung mit Bisbenzimid (H33342 3HCl 3H₂O; Calbiochem Corporation, La Jolla, CA) mit 33 μg/ml für 1 Stunde bei 37°C in serumfreiem Medium inkubiert. Fluoreszenzwerte pro Vertiefung wurden mit einem Fluoreszenz-Plattenlesegerät Millipore Cytofluor 2350 bestimmt (Anregung 355 nm; Emission 460 nm; willkürliche Einheiten). CC₅₀-Werte für jede Verbindung (Konzentration der Verbindung, die für 50% der Zellen cytotoxisch ist) wurden aus der prozentualen Toxizität für jede Konzentration der Verbindung im Vergleich zu unbehandelten Zellen (kein Wirkstoff) unter Verwendung des nachfolgend beschriebenen Verfahrens bestimmt.
Aus jedem Konstrukt im transienten Transfektionsexperiment erzeugte Konzentrations-Reaktions-Kurven wurden an die Hill-Gleichung angepaßt (y = Vmax·(1 – (xⁿ/(kⁿ + xⁿ))), wobei eine nicht-lineare Regression zur Abschätzung des IC₅₀-Wertes (Konzentration des Wirkstoffs, die die HBV-DNA-Erzeugung um 50% vergleichen mit parallelen wirkstofffreien Kulturen hemmte) und des CC₅₀-Wertes von PMEA verwendet wurde. Der berechnete IC₅₀-Wert für jedes Konstrukt ist mit den 95% Konfidenzgrenzen für das geometrische Mittel für n Wiederholungen gezeigt. Das Programm JMP (SAS, Cary, NC) wurde verwendet, um eine Student-t-Test-Auswertung der Daten zur Bestimmung statistisch signifikanter Unterschiede zwischen den Behandlungsgruppen durchzuführen. Der IC₅₀-Wert von PMEA, erhalten gegen WT-HBV, das durch die 2.2.15-Zellen erzeugt wurde (0,43 μM), war ebenfalls vergleichbar mit dem IC₅₀-Wert (0,7 μM) unter Verwendung der gleichen Zellinie. (R. A. Heijtink, G. A. De Wilde, J. Kruining, L. Berk, J. Balzarini, E. De Clercq, A. Holy, S. W. Schalam, Inhibitory Effect of 9-(phosphonylmethoxyethyl)adenine (PMEA) on Human and Duck Hepatitis B Virus Infection. Antiviral Research 1993; 21 (2): 141–153).
Tabelle 1. Vergleich der IC₅₀-Werte von PMEA zwischen WT-HBV und HBV, das Lamivudin-resistente assoziierte Mutationen in vitro enthält
Für HepG2-Zellen war der cytotoxische IC₅₀-Wert für PMPA größer als 125 μM, der cytotoxische IC₅₀-Wert für PMEA variierte zwischen 25 und 40 μM.

Claims

Kombination, die (2R,cis)-4-Amino-1-(2-hydroxymethyl-1,3-oxathiolan-5-yl)-pyrimidin-2-on oder ein pharmazeutisch akzeptables Derivat davon und ein zweites Therapeutikum, Bis(pivaloyloxymethyl)(9-[(R)-2-(phosphonomethoxy)ethyl]adenin oder ein pharmazeutisch akzeptables Derivat davon, umfaßt, worin (2R,cis)-4-Amino-1-(2-hydroxymethyl-1,3-oxathiolan-5-yl)-pyrimidin-2-on und das zweite Therapeutikum im Gewichtsbereich von 40.1 bis 1 : 1 vorhanden sind.
Kombination gemäß Anspruch 1, worin das Gewichtsverhältnis der aktiven Bestandteile im Bereich von 25 : 1 bis 15 : 1 ist.
Kombination gemäß Anspruch 1 oder 2 zur Verwendung in der Medizin.
Pharmazeutische Formulierung, die eine Kombination gemäß einem der Ansprüche 1 bis 3 in Verbindung mit einem oder mehreren pharmazeutisch akzeptablen Trägern dafür umfaßt.
Pharmazeutische Formulierung zur Verwendung in der Behandlung von HBV, umfassend (2R,cis)-4-Amino-1-(2-hydroxymethyl-1,3-oxathiolan-5-yl)-pyrimidin-2-on oder ein pharmazeutisch akzeptables Derivat davon und ein zweites Therapeutikum, das aus (9-[(R)-2-(Phosphonomethoxy)ethyl]adenin oder einem pharmazeutisch akzeptablen Derivat davon und Bis(pivaloyloxymethyl)(9-[(R)-2-(phosphonomethoxy)ethyl]adenin oder einem pharmazeutisch akzeptablen Derivat davon ausgewählt ist, worin (2R,cis)-4-Amino-1-(2-hydroxymethyl-1,3-oxathiolan-5-yl)-pyrimidin-2-on und das zweite Therapeutikum im Gewichtsbereich von 40 : 1 bis 1 : 1 vorhanden sind.
Formulierung gemäß Anspruch 4 oder 5 in Einheitsarzneiform.
Formulierung gemäß einem der Ansprüche 4 bis 6, die zur oralen Verabreichung geeignet ist.
Formulierung gemäß einem der Ansprüche 5 bis 7, die 25 bis 150 mg (2R,cis)-4-Amino-1-(2-hydroxymethyl-1,3-oxathiolan-5-yl)-pyrimidin-2-on und 5 bis 60 mg Bis(pivaloyloxymethyl)(9-[(R)-2-(phosphonomethoxy)ethyl]adenin umfaßt.
Formulierung gemäß Anspruch 8, die 100 mg (2R,cis)-4-Amino-1-(2-hydroxymethyl-1,3-oxathiolan-5-yl)-pyrimidin-2-on und 10 mg Bis(pivaloyloxymethyl)(9-[(R)-2-(phosphonomethoxy)ethyl]adenin umfaßt.
Verwendung einer Kombination, die (2R,cis)-4-Amino-1-(2-hydroxymethyl-1,3-oxathiolan-5-yl)-pyrimidin-2-on oder ein pharmazeutisch akzeptables Derivat davon und ein zweites Therapeutikum, das aus (9-[(R)-2-(Phosphonomethoxy)ethyl]adenin oder einem pharmazeutisch akzeptablen Derivat davon und Bis(pivaloyloxymethyl)(9-[(R)-2-(phosphonomethoxy)ethyl]adenin oder einem pharmazeutisch akzeptablen Derivat davon ausgewählt ist, worin (2R,cis)-4-Amino-1-(2-hydroxymethyl-1,3-oxathiolan-5-yl)-pyrimidin-2-on und das zweite Therapeutikum im Gewichtsbereich von 40 : 1 bis 1 : 1 vorhanden sind, zur Herstellung eines Medikaments zu Behandlung einer HBV-Infektion.
Verwendung gemäß Anspruch 10, worin die Kombination wie in Anspruch 1 oder 2 beansprucht ist.
Verwendung gemäß Anspruch 10 oder 11 zur Behandlung einer HBV-Infektion, die gegen nukleosidische und/oder nicht-nukleosidische Inhibitoren der Vermehrung des Hepatitis B-Virus resistent ist.
Verwendung von (2R,cis)-4-Amino-1-(2-hydroxymethyl-1,3-oxathiolan-5-yl)-pyrimidin-2-on oder einem pharmazeutisch akzeptablen Derivat davon zur Herstellung eines Medikaments zur Verabreichung entweder gleichzeitig oder aufeinanderfolgend mit (9-[(R)-2-(Phosphonomethoxy)ethyl]adenin oder einem pharmazeutisch akzeptablen Derivat davon oder Bis(pivaloyloxymethyl)(9-[2-(phosphonomethoxy)ethyl]adenin oder einem pharmazeutisch akzeptablen Derivat davon, worin (2R,cis)-4-Amino-1-(2-hydroxymethyl-1,3-oxathiolan-5-yl)-pyrimidin-2-on und (9-[(R)-2-(Phosphonomethoxy)ethyl]adenin oder Bis(pivaloyloxymethyl)(9-[2-(phosphonomethoxy)ethyl]adenin im Gewichtsbereich von 40 : 1 bis 1 : 1 vorhanden sind, zur Behandlung einer HBV-Infektion.
Verwendung von (9-[(R)-2-(Phosphonomethoxy)ethyl]adenin oder einem pharmazeutisch akzeptablen Derivat davon oder Bis(pivaloyloxymethyl)(9-[2-(phosphonomethoxy)ethyl]adenin oder einem pharmazeutisch akzeptablen Derivat davon zur Herstellung eines Medikaments zur Verabreichung entweder gleichzeitig oder aufeinanderfolgend mit (2R,cis)-4-Amino-1-(2-hydroxymethyl-1,3-oxathiolan-5-yl)-(1H)-pyrimidin-2-on oder einem pharmazeutisch akzeptablen Derivat davon, worin (9-[(R)-2-(Phosphonomethoxy)ethyl]adenin oder Bis(pivaloyloxymethyl)(9-[2-(phosphonomethoxy)ethyl]adenin und (2R,cis)-4-Amino-1-(2-hydroxymethyl-1,3-oxathiolan-5-yl)-pyrimidin-2-on im Gewichtsbereich von 1 : 40 bis 1 : 1 vorhanden sind, zur Behandlung einer HBV-Infektion.
Produkt, das (2R,cis)-4-Amino-1-(2-hydroxymethyl-1,3-oxathiolan-5-yl)-pyrimidin-2-on oder ein pharmazeutisch akzeptables Derivat davon umfaßt, als Zubereitung zur gleichzeitigen, getrennten oder aufeinanderfolgenden Verwendung zusammen mit Bis(pivaloyloxymethyl)(9-[2-(phosphonomethoxy)ethyl]adenin oder einem pharmazeutisch akzeptablen Derivat davon in einem Gewichtsverhältnis von 40 : 1 bis 1 : 1 in der Behandlung einer HBV-Infektion.
Produkt, das Bis(pivaloyloxymethyl)(9-[2-(phosphonomethoxy)ethyl]adenin oder ein pharmazeutisch akzeptables Derivat davon umfaßt, als Zubereitung zur gleichzeitigen, getrennten oder aufeinanderfolgenden Verwendung zusammen mit (2R,cis)-4-Amino-1-(2-hydroxymethyl-1,3-oxathiolan-5-yl)-pyrimidin-2-on oder einem pharmazeutisch akzeptablen Derivat davon in einem Gewichtsverhältnis von 1 : 40 bis 1 : 1 in der Behandlung einer HBV-Infektion.
Produkt, das (2R,cis)-4-Amino-1-(2-hydroxymethyl-1,3-oxathiolan-5-yl)-pyrimidin-2-on oder ein pharmazeutisch akzeptables Derivat davon und Bis(pivaloyloxymethyl)(9-[2-(phosphonomethoxy)ethyl]adenin oder ein pharmazeutisch akzeptables Derivat davon in einem Gewichtsverhältnis von 40 : 1 bis 1 : 1 als kombinierte Zubereitung zur gleichzeitigen, getrennten oder aufeinanderfolgenden Verwendung in der Behandlung einer HBV-Infektion umfaßt.