KR100413312B1

KR100413312B1 - 항바이러스 복합약제

Info

Publication number: KR100413312B1
Application number: KR10-2001-7003481A
Authority: KR
Inventors: 나타니엘 에이. 브라운; 린 디. 콘드레이; 더글라스 프라서 그레이; 마크 루빈
Original assignee: 글락소 그룹 리미티드
Priority date: 1998-09-18
Filing date: 1999-09-17
Publication date: 2004-01-03
Also published as: HUP0103858A2; HU227677B1; WO2000016755A3; ATE270106T1; CZ2001977A3; BR9913791A; NZ510380A; AU6085199A; CN1178660C; AU755633B2; AR023661A1; TR200101486T2; CN1326349A; TW555559B; JP2002526441A; HK1035670A1; NO20011358L; PL358988A1; DE69918447T2; NO20011358D0

Abstract

본 발명은 항-B형 간염 바이러스(HBV) 활성이 있는 (2R,시스)-4-아미노-1-(2-히드록시메틸-1,3-옥사티올란-5-일)-피리미딘-2-온 (라미부딘), 및 (9-[(R)-2-(포스포노메톡시)에틸]아데닌 (PMEA 또는 아데포비르) 및 비스(피발로일옥시메틸)(9-[(R)-2-(포스포노메톡시)에틸]아데닌 [PMEA의 경구용 프로드러그, 아데포비르 디피복실]에서 선택된 제2 치료제를 포함하는 치료 복합약제에 관한 것이다. 본 발명은 또한 상기 복합약제를 포함하는 제약 조성물, 및 뉴클레오시드 및(또는) 비뉴클레오시드 억제제에 내성이 있는 HBV 돌연변이에 의한 감염을 포함하는 HBV 감염 치료에서 그의 용도에 관한 것이다.

Description

항바이러스 복합약제 {Antiviral Combinations}

B형 간염은 혈액 또는 혈액 제품과 같은 오염된 물질, 오염된 바늘에 의해 비경구로 또는 경구로 감염되거나, 감염되었거나 보균자인 엄마로부터 그의 자손에게로 수직으로, 그리고 성적으로 전염되는 바이러스 질병이다. 상기 질병이 흔한 세계의 여러 지역에서, 어린 나이에 수직으로 전염됨으로써 감염된 개체들 중 상당수가 B형 간염의 만성 보균자가 된다. 어림잡아 세계적으로 3억5천만명이 B형 간염에 만성적으로 감염되어 있으며, 1억5천만명이 중재 없이 간 질병으로 죽을 수 있다.

현재, B형 간염의 단 하나 정립된 치료법은 불쾌한 부작용과 연관될 수 있는 인터페론을 반복 주사하는 것이며, 치료받는 개체중 삼분의 일 미만 만이 장기간 지속되는 반응을 나타낼 뿐이다. 인터페론은 면역계가 질병과 싸우는 능력을 높이도록 고안된 면역 조절제이다.

라미부딘은 2년간의 연구 결과 2년이 경과할 때까지 바이러스가 검출되지 않는 수준을 유지하는 정도가 52%로 대부분의 환자가 실질적으로 감소된 바이러스 복제 수준을 나타낸 것으로 보여줌으로써 HBV에 대해 효과적인 것으로 보고되어 있다.

아데포비르는 시험관 내에서 항-HBV 활성을 갖고 있다고 보고되어 있고, 아데포비르의 경구용 프로드러그인 아데포비르 디피복실은 생체 내에서 HBV 복제에 대해 활성이 있다고 나타났으며, 현재 만성 B형 간염 바이러스에 감염된 환자로 임상 제2상 시험중이다.

라미부딘 코돈을 발현하는 사람 B형 간염 DNA 폴리머라제의 경우 PMEA에 교차내성이 없다고 보고되어 있다 [X, Xiong et al., Hepatology Vol 26, No. 4, Pt. 2, 1997, Abstract No., 1211].

본 발명은 (2R,시스)-4-아미노-1-(2-히드록시메틸-1,3-옥사티올란-5-일)-피리미딘-2-온 (라미부딘), 및 (9-[(R)-2-(포스포노메톡시)에틸]아데닌 (PMEA 또는 아데포비르(adefovir)) 및 비스(피발로일옥시메틸)(9-[(R)-2-(포스포노메톡시)에틸]아데닌 [PMEA의 경구용 프로드러그, 아데포비르 디피복실(adefovir dipivoxil)]에서 선택된 제2 치료제를 포함하는 치료 복합약제 (combination)에 관한 것이다. 본 발명은 또한 상기 복합약제를 포함하는 제약 조성물, 및 B형 간염 바이러스의 복제의 뉴클레오시드 및(또는) 비뉴클레오시드 억제제에 내성이 있는 HBV 돌연변이에 의한 감염을 포함하는 HBV 감염 치료에서 그의 용도에 관한 것이다.

본 발명의 복합약제를 사용하면 화합물들 사이에서 상승작용이 일어나기 때문에 약물 효능이 증가되거나, 또는 감소된 독성을 갖는 동등한 항바이러스 효과를 가져올 수 있다. 더 적은 약물 전체 투여량으로도 약물에 내성이 있는 HBV 변이체의 발생 빈도를 감소시키는 것이 가능할 것이다.

본 발명자들은 라미부딘이 아데포비르와 함께 사용될 경우 예상치 못한 잇점을 나타낸다는 것을 밝혀내었다. 특히, 이러한 복합약제는 통계학적으로 유의한 항-HBV 상승작용을 나타낸다. 초기 연구에서 라미부딘 및 아데포비르 디피복실의 복합약제도 항-HBV 상승작용을 나타낸다는 것을 보였다. 이들 약물의 조합을 사용하면 항바이러스 상승작용, 더 완전한 바이러스 억제, 더 장기간 동안의 바이러스 억제를 제공하고, 약물에 내성이 있는 HBV 돌연변이의 출현을 제한하며, 약물과 연관된 독성을 더 잘 조절할 것이란 점이 본 발명의 특징이다. 이들 약물의 조합를 사용하면 또한 예를 들어 하루 동안 투여되는 정제의 수를 감소시킬 수 있어, 환자의 복약이행도(compliance)를 증가시킬 수 있다.

본 명세서에서 치료라고 지칭하는 것은 입증된 감염 및 증상의 치료 뿐 아니라 예방까지 확장되는 개념이며, 이는 당분야의 숙련가에 의해 인정될 것이다.

라미부딘, 아데포비르, 또는 아데포비르 디피복실의 제약학상 허용되는 염에는 제약학상 허용되는 무기 및 유기 산으로부터 유도된 염이 포함된다. 적합한 산의 예로는 염산, 브롬화수소산, 황산, 질산, 과염소산, 푸마르산, 말레산, 인산, 글리콜산, 락트산, 살리실산, 숙신산, 톨루엔-p-술폰산, 타르타르산, 아세트산, 시트르산, 메탄술폰산, 포름산, 벤조산, 말론산, 나프탈렌-2-술폰산 및 벤젠술폰산이 있다. 옥살산과 같은 다른 산은 그자체로는 제약학상 허용되지 않으나, 본 발명의 화합물을 얻는데 중간체로서 유용한 염 및 제약학상 허용되는 산 부가염의 제조에 유용할 수도 있다.

적절한 염기로부터 유도된 염에는 알칼리 금속 (예, 나트륨), 알칼리 토금속(예, 마그네슘), 암모늄 및 NR₄₊(여기서, R은 C_1-4알킬임) 염이 있다.

라미부딘, 아데포비르 또는 아데포비르 디피복실의 바람직한 에스테르는 독립적으로 (1) 에스테르기의 카르복실산 부분의 비카르보닐 잔기가 직쇄 또는 분지쇄 알킬 (예를 들어, 메틸, n-프로필, t-부틸 또는 n-부틸), 시클로알킬, 알콕시알킬 (예, 메톡시메틸), 아르알킬 (예, 벤질), 아릴옥시알킬 (예, 페녹시메틸), 아릴 (예, 예를 들어, 임의로 할로겐, C_1-4알킬 또는 C_1-4알콕시에 의해 치환된 페닐) 또는 아미노에서 선택되는 카르복실산 에스테르; (2) 알킬- 또는 아르알킬술포닐과 같은 술포네이트 에스테르 (예, 메탄술포닐); (3) 아미노산 에스테르 (예, L-발릴 또는 L-이소류실); 및 (4) 포스포네이트 에스테르에서 선택된다. 다른 언급이 없는 한 이러한 에스테르에 존재하는 임의의 알킬 잔기는 이롭게는 탄소 원자 1 내지 18개, 특히 탄소원자 1 내지 6개, 더욱 특히 탄소 원자 1 내지 4개를 함유한다. 이러한 에스테르에 존재하는 임의의 시클로알킬 잔기는 이롭게는 탄소 원자 3 내지 6개를 함유한다. 이러한 에스테르에 존재하는 임의의 아릴 잔기는 이롭게는 페닐기를 함유한다. 또한, 상기 화합물을 언급하는 것에는 그의 생리학적으로 허용되는 염을 언급하는 것도 포함된다.

특히 바람직한 에스테르는 라미부딘의 모노-, 디- 및 트리포스페이트 에스테르 (임의로 블록킹될 수 있음) 또는 사람에게 투여시 상기 모노-, 디- 또는 트리포스페이트 에스테르를 (직접 또는 간적적으로) 제공할 수 있는 임의의 다른 화합물이다.

그러므로, 한 면에 따라 본 발명은 (2R,시스)-4-아미노-1-(2-히드록시메틸-1,3-옥사티올란-5-일)-피리미딘-2-온 또는 그의 제약학상 허용되는 유도체, 및 (9-[(R)-2-(포스포노메톡시)에틸]아데닌 또는 그의 제약학상 허용되는 유도체 및 비스(피발로일옥시메틸)(9-[(R)-2-(포스포노메톡시)에틸]아데닌 또는 그의 제약학상 허용되는 유도체에서 선택된 제2 치료제를 포함하는 복합약제를 제공한다.

바람직하게는, 제2 치료제는 비스(피발로일옥시메틸)(9-[(R)-2-(포스포노메톡시)에틸]아데닌 또는 그의 제약학상 허용되는 유도체이다.

상기 기재된 복합약제는 이후 본 발명에 따른 복합약제로서 언급될 수 있다.

본 발명에서 사용되는 "제약학상 허용되는 유도체"에는 라미부딘, 아데포비르 또는 아데포비르 디피복실의 제약학상 허용되는 염, 에스테르 또는 이러한 에스테르의 염, 또는 수용자에게 투여시 이러한 화합물 또는 그의 항바이러스 활성 대사물 또는 잔여물을 (직접 또는 간접적으로) 제공할 수 있는 임의의 기타 화합물이 포함된다.

또한, 본 발명은 치료요법, 특히 B형 간염 바이러스의 복제의 뉴클레오시드 및(또는) 비뉴클레오시드 억제제에 내성이 있는 감염을 포함하는 HBV 감염의 치료에 사용하기 위한 본 발명에 따른 복합약제를 제공한다.

다른 면에 따라, 본 발명은 본 발명에 따른 복합약제의 치료학적 유효량을 투여하는 것을 포함하는, HBV에 감염된 사람을 포함하는 포유 동물의 치료 방법을 제공한다.

복합약제의 화합물이 동일하거나 상이한 제약 조성물로 동시에 또는 순차적으로 투여될 수 있다는 것이 인정될 것이다. 순차적으로 투여되는 경우, 제2 활성 성분을 투여하는 시점이 활성 성분의 조합의 치료학적 상승작용의 잇점이 없어질 수 있을 정도로 늦어서는 안된다. 라미부딘 및 아데포비르 디피복실, 또는 그의 제약학상 허용되는 유도체 또는 아데포비르 또는 그의 제약학상 허용되는 유도체가 동시에 또는 순차적으로 제공되던지 간에, 각각 또는 그의 어떠한 조합으로라도 투여될 수 있는 것으로 또한 이해될 것이다. 라미부딘, 및 아데포비르 디피복실 또는 아데포비르는 바람직하게는 분리 제약 제형으로 동시에 또는 순차적으로, 가장 바람직하게는 동시에 투여된다.

본 발명에 따른 복합약제는 바람직하게는 단일 복합 제형으로서 투여된다.

본 발명은 또한 HBV 감염의 치료를 위해 아데포비르 또는 아데포비르 디피복실과 함께 동시에 또는 순차적으로 투여하기 위한 의약의 제조에서 라미부딘의 용도를 제공한다. 라미부딘, 아데포비르 디피복실 또는 아데포비르, 또는 그의 임의의 조합 (아데포비르 및 아데포비르 디피복실은 제외함)이 상기 의약의 제조에서 사용될 수 있다는 것이 인정될 것이다.

본 발명의 다른 면은 라미부딘 및 아데포비르 디피복실 또는 아데포비르가 상승작용의 비로 존재하는 본 발명에 따른 복합약제이다.

라미부딘 및 아데포비르 디피복실 또는 아데포비르 또는 그의 제약학상 허용되는 유도체의 복합약제의 상승작용은 40:1 내지 1:1, 바람직하게는 25:1 내지 15:1의 중량비에서 나타난다.

편리하게는, 각각의 화합물은 단독으로 사용되는 경우 항-HBV 활성을 나타내는 양으로 복합약제에서 사용될 것이다.

항-HBV 약제로서 요구되는 라미부딘, 아데포비르 또는 아데포비르 디피복실의 복합약제의 유효량은 물론 변할 수 있으며, 궁극적으로 의학 수행자의 판단에 따르게 된다. 고려되는 요인에는 투여 경로 및 제형의 성질, 동물의 체중, 나이 및 전신상태, 및 치료될 질병의 성질 및 심각도가 있다.

일반적으로, 라미부딘의 적합한 1일 투여량은 수용자의 체중 ㎏당 1일 약 0.1 내지 약 50 ㎎, 바람직하게는 체중 ㎏당 1일 0.5 내지 20 ㎎, 가장 바람직하게는 체중 ㎏당 1일 0.5 내지 2 ㎎의 범위일 것이다.

상기 화합물은 편리하게는 1일 약 100 ㎎의 수준으로 투여된다.

아데포비르 디피복실의 적합한 1일 투여량은 수용자의 체중 ㎏당 1일 약 0.01 내지 약 10 ㎎, 바람직하게는 체중 ㎏당 1일 0.01 내지 1 ㎎, 가장 바람직하게는 체중 ㎏당 1일 0.01 내지 0.05 ㎎의 범위일 것이다.

아데포비르 디피복실은 편리하게는 1일 약 10 ㎎의 수준으로 투여된다.

아데포비르의 적합한 1일 투여량은 수용자의 체중 ㎏당 1일 약 0.01 내지 약 10 ㎎, 바람직하게는 체중 ㎏당 1일 0.01 내지 1 ㎎, 가장 바람직하게는 체중 ㎏당 1일 0.01 내지 0.05 ㎎의 범위일 것이다.

아데포비르는 편리하게는 1일 약 10 ㎎의 수준으로 투여된다.

다른 언급이 없는 한 활성 성분의 모든 중량은 약물 그 자체로 계산된다. 라미부딘, 아데포비르 디피복실 또는 아데포비르의 제약학상 허용되는 유도체, 또는 그의 임의의 용매화물의 경우, 수량이 비례하게 증가할 것이다. 목적 투여량은바람직하게는 1일 동안 적절한 간격으로 2, 3, 4, 5, 6회 또는 그 이상의 분할 투여로 투여된다. 이렇게 분할 투여량을 투여하는 경우, 예를 들어, 단위 투여형당 활성 성분 1 내지 1500 ㎎, 바람직하게는 5 내지 1000 ㎎, 가장 바람직하게는 5 내지 500 ㎎을 포함하는 단위 투여형으로 투여될 수 있다. 이와는 달리, 수용자의 상태에 따라 연속 정주로 투여될 수 있다.

활성 성분으로서 언급될 수 있는 복합약제의 성분은 통상적 방법으로 동물, 예를 들어 사람을 포함하는 포유 동물에게 치료를 위해 투여될 수 있다.

복합약제의 활성 성분은 원료 화학물질로서 투여되는 것이 가능하지만 제약 조성물로서 제공되는 것이 바람직하다. 본 발명에 따른 제약 조성물은 1종 이상의 제약학상 허용되는 담체 또는 부형제, 및 임의로 다른 치료제와 함께 본 발명에 따른 복합약제를 포함한다. 담체(들)는 제형의 다른 성분들과 상용성의 면에서 허용되는 것이어야 하며, 그의 수용자에게 해롭지 않아야 한다. 복합약제의 각 성분들이 개별적으로 투여되는 경우, 일반적으로 각각 제약 조성물로서 제공된다. 다른 언급이 없는 한 이후 조성물에 대한 언급은 복합약제 또는 그의 성분을 포함하는 조성물을 말하는 것이다.

라미부딘 및 아데포비르 디피복실 또는 아데포비르 또는 그의 제약학상 허용되는 유도체의 복합약제는 편리하게는 단일 투여형으로 그의 1종 이상의 제약학상 허용되는 담체와 함께 제약 조성물로서 제공될 수 있다. 편리한 단일 투여 제형은 활성 성분을 각각 1 ㎎ 내지 2 g, 예를 들어 라미부딘 25 내지 150 ㎎, 및 아데포비르 또는 아데포비르 디피복실 5 내지 60 ㎎과 같이 2 내지 200 ㎎의 양으로 포함한다.

제약 조성물은 또한 대개 블리스터 팩 (blister pack)인 단일 포장으로 전체 치료 과정을 포함하는 "환자용 팩"으로 환자에게 처방될 수 있다. 환자용 팩은 환자가 보통은 종래의 처방에는 없는 환자용 팩중에 포함된 포장 삽입물을 항상 입수한다는 점에 있어서, 약사가 벌크 공급물로부터 제약 환자 공급분을 분할하는 종래의 처방에 비해 장점이 있다. 포장 내부의 삽입물이 의사의 처방에 따른 환자의 복약순응도를 개선시키는 것으로 나타났다.

환자가 본 발명을 정확하게 사용하도록 유도하는 포장 내부의 삽입물대로 단일 환자용 팩 또는 각 조성물의 환자용 팩의 수단에 의해 본 발명의 복합약제를 투여하는 것은 본 발명의 바람직한 추가 특징임을 이해하게 될 것이다.

본 발명의 추가의 면에 따르면, 본 발명에 따른 복합약제 중 1종 이상의 활성 성분, 및 본 발명의 복합약제의 사용에 관한 지시를 포함한 정보 삽입물을 포함하는 환자용 팩이 제공된다.

또다른 면에 따라, 본 발명은 라미부딘 및 아데포비르 디피복실 또는 아데포비르 또는 그의 제약학상 허용되는 유도체의 개별 투여와 관련하여 이들을 포함하는 2중 팩을 제공한다.

조성물에는 경구, 직장, 비강, 국소 (경피, 구강 및 설하를 포함함), 질 또는 비경구 (피하, 근육내, 정맥내 및 피내를 포함함) 투여에 적합한 것이 포함된다. 그 조성물은 편리하게는 단위 투여형으로 제공될 수 있고, 제약업계에 공지된 방법에 의해 제조될 수 있다. 이러한 방법은 본 발명의 추가 특징을 나타내며 1종 이상의 보조 성분을 구성하는 담체와 활성 성분을 혼합하는 단계를 포함한다. 일반적으로, 제형은 활성 성분과 액체 담체 또는 미분 고체 담체 또는 이 둘 모두를 균일하고 친밀하게 혼합함으로써 제조되고, 필요하다면 그 생산물을 성형한다.

경구 투여에 적합한 본 발명의 조성물은 활성 성분의 예정된 양을 포함하는 각각의 캡슐, 카플릿(caplet), 카세트(cachet) 또는 정제와 같은 별개의 단위로서; 산제 또는 과립제로서; 수성 또는 비수성 액체의 용액 또는 현탁액으로서; 또는 수중유 액체 에멀젼 또는 유중수 액체 에멀젼으로서 제공될 수 있다. 활성 성분은 또한 볼루스(bolus), 연약(electuary) 또는 페이스트로 제공될 수 있다.

정제는 임의로 1종 이상의 보조 성분과 함께 압축하거나 성형함으로써 제조될 수 있다. 압축된 정제는 산제 또는 과립제와 같은 자유-흐름 (free-flowing) 형태로, 임의로 결합제 (예, 포비돈, 젤라틴, 히드록시프로필메틸 셀룰로오스), 윤활제, 불활성 희석제, 방부제, 붕해제 (예, 글리콜산 전분 나트륨, 가교 포비돈, 가교 카르복시메틸 셀룰로오스 나트륨), 계면활성제 또는 분산제와 혼합된 활성 성분을 적합한 기계에서 압축하여 제조될 수 있다. 성형된 정제는 불활성의 액체 희석제로 습윤된 분말 화합물의 혼합물을 적합한 기계에서 성형하여 제조될 수 있다. 정제는 임의로 피복되든지 또는 새김눈이 만들어질 수 있고, 예를 들어, 원하는 방출 프로필을 제공하는 다양한 비율의 히드록시프로필메틸 셀룰로오스를 사용하여 그 안의 활성 성분의 서방 또는 제어 방출을 제공하도록 제형화될 수 있다. 정제에 임의로 장용피를 제공하여 정제가 위 외의 소화관 부분에서 방출하도록 할 수 있다.

바람직하게는, 본 발명에 따른 복합 제제는 경구로 투여된다.

구강의 국소 투여에 적합한 조성물에는 풍미성 기재, 대개는 수크로스 및 아카시아 또는 트라가칸트 중에 활성 성분을 포함하는 로젠지(lozenge); 젤라틴 및 글리세린, 또는 수크로스 및 아카시아와 같은 불활성 기재 중에 활성 성분을 포함하는 파스틸(pastill); 및 적합한 액체 담체중에 활성 성분을 포함하는 구강 세척제가 있다. 직장 투여용 조성물은 예를 들면 코코아 버터 또는 살리실레이트를 포함하는 적합한 기재를 함유하는 좌약으로서 제공될 수 있다.

또한, 경피 이온영동 기구에 의해 국소로 투여할 수 있다.

질 투여에 적합한 제형은 활성 성분 이외에 당 분야에 적절한 것으로 공지된 담체를 포함하는 페사리, 탐폰, 크림, 겔, 페이스트, 발포제 또는 분무 제형으로서 제공될 수 있다.

담체가 고체인 직장 투여에 적합한 제약 제형은 가장 바람직하게는 단위 투여 좌약으로서 제공된다. 적합한 담체에는 코코아 버터 및 당 분야에서 흔히 사용되는 다른 물질이 포함된다. 좌약은 유연화되거나 또는 용융된 담체(들)와 활성 복합약제를 혼합한 후, 냉각시키고 성형틀에서 성형함으로써 편리하게 형성될 수 있다.

비경구 투여에 적합한 제형에는 의도하는 수여자의 혈액과 등장성이 되게하는 산화방지제, 완충제, 정균제 및 용질을 포함할 수 있는 수성 및 비수성의 등장성 멸균 주사 용액; 현탁화제 및 증점제를 포함할 수 있는 수성 및 비수성의 멸균 현탁액; 혈액 성분 또는 1종 이상의 기관으로 화합물을 표적화하기 위해 고안된 리포좀 또는 다른 초미세입자계가 포함된다. 제형은 단일 투여량 또는 다투여량이 밀봉된 용기, 예를 들어 앰플 및 바이알로 제공될 수 있고, 사용하기 직전에 멸균 액체 담체, 예를 들어 주사용수를 가하는 것만을 필요로 하는 동결 건조 상태로 보관될 수 있다. 즉석의 주사 용액 및 현탁액은 상기 기재된 종류의 무균 산제, 과립제 및 정제로터 제조될 수 있다.

바람직한 단위 투여 제형은 본 명세서에서 인용된 바와 같이 활성 성분의 1일 투여량 또는 1일 분할 투여량을 포함하거나 그의 적절한 분획을 포함한다.

특히 위에서 언급된 성분외에 본 발명의 제형은 당해 제형에 관한 분야에서의 통상적인 다른 약제를 포함할 수 있는데, 예를 들어 경구 투여에 적합한 것들은 또한 감미제, 증점제 및 풍미제를 포함할 수 있다.

본 발명의 복합약제의 화합물은 통상적인 방법으로 입수할 수 있다.

라미부딘의 제조 방법은 본 명세서에서 참고 문헌으로 채택된 국제 특허 출원 제WO 91/17159호 및 제WO 95/29174호에 기재되어 있다.

아데포비르의 제조 방법은 본 명세서에서 참고 문헌으로 채택된 유럽 특허 제206459호에 기재되어 있다.

아데포비르 디피복실의 제조 방법은 본 명세서에서 참고 문헌으로 채택된 유럽 특허 제481214호에 기재되어 있다.

하기 실시예는 단지 설명하기 위한 것이며 어떤 방식으로든 발명의 범위를 제한하려는 것은 아니다. "활성 성분"은 라미부딘, 아데포비르 디피복실 또는 아데포비르, 또는 이들 중 다수 또는 전술한 화합물의 생리학적으로 기능성인 유도체를 의미한다.

<실시예 1 : 정제 제형>

포비돈 용액에 의해 성분들을 습식 과립화한 후, 스테아르산마그네슘을 가하고 압축하여 하기 제형 A, B 및 C를 제조하였다.

제형 A

	㎎/정제
활성 성분 A활성 성분 B락토오스 B.P.포비돈 B.P.글리콜산 전분 나트륨스테아르산마그네슘	100301057103255

제형 B

	㎎/정제
활성 성분 A활성 성분 B락토오스 B.P.아비셀 PH 101포비돈 B.P.글리콜산 전분 나트륨스테아르산마그네슘	1003075307103255

제형 C

	㎎/정제
활성 성분 A활성 성분 B락토오스 B.P.전분포비돈스테아르산마그네슘	10051002522234

혼합된 성분을 직접 압축하여 하기 제형 D 및 E를 제조하였다. 제형 E의 락토오스는 직접 압축형 (Dairy Crest-"Zeparox")이다.

제형 D

	㎎/정제
활성 성분 A활성 성분 B예비 젤라틴화 전분 NF 15	1003075205

제형 E

	㎎/정제
활성 성분 A활성 성분 B락토오스 B.P.아비셀	10057050225

제형 F (제어 방출 제형)

포비돈 용액에 의해 성분들을 습윤 과립화한 후, 스테아르산마그네슘을 가하고 압축하여 제형을 제조하였다.

	㎎/정제
활성 성분 A활성 성분 B히드록시프로필메틸셀룰로오스(Methocel K4M Premium)락토오스 B.P.포비돈 B.P.스테아르산마그네슘	10030281372180

약물 방출은 약 6-8 시간의 기간 동안 일어나며 12 시간 후 완결된다.

<실시예 2 : 캡슐 제형>

제형 A

실시예 1의 제형 D의 성분들을 혼합하고 양분된 경질 젤라틴 캡슐에 충전시켜 캡슐 제형을 제조하였다. 하기 제형 B를 유사한 방법으로 제조하였다.

제형 B

	㎎/캡슐
활성 성분 A활성 성분 B락토오스 B.P.글리콜산 전분 나트륨스테아르산마그네슘	100570101186

제형 C

	㎎/캡슐
활성 성분 A활성 성분 B마크로겔 4000 B.P.	10030170300

마크로겔 4000 B.P.를 용융시키고, 용융물 중에 활성 성분을 분산시키고, 양분된 경질 젤라틴 캡슐에 충전시켜 제형 C의 캡슐을 제조하였다.

제형 D

	㎎/캡슐
활성 성분 A활성 성분 B레시틴아라키스 오일	10055050205

레시틴 및 아라키스 오일 중에 활성 성분을 분산시키고 신축성 연질 젤라틴 캡슐에 분산물을 충전시켜 제형 D의 캡슐을 제조하였다.

제형 E (제어 방출 캡슐)

압출기를 이용하여 성분 a, b 및 c를 압출한 후, 압출물을 구형화하고 건조시켜 하기 제어 방출 캡슐 제형을 제조하였다. 건조된 펠렛을 방출 제어 막 (d)으로 피복한 뒤 양분된 경질 젤라틴 캡슐에 충전시켰다.

	㎎/캡슐
(a) 활성 성분 A활성 성분 B(b) 미세결정 셀룰로오스(c) 락토오스 B.P.(d) 에틸 셀룰로오스	1003060606256

<실시예 3 : 주사용 제형>

제형 A

	㎎
활성 성분 A활성 성분 B염산 용액 0.1M 또는수산화나트륨 용액 0.1M멸균수	1005pH가 4.0 내지 7.0이 되도록 적당량을 가함전체가 10 ㎖로 될 때까지 적당량을 가함

활성 성분을 대부분의 물 (35℃-40℃)에 용해시키고 염산 또는 수산화나트륨을 적절하게 사용하여 pH를 4.0과 7.0 사이로 조정하였다. 그 후, 배치의 부피를 물로 맞추고 멸균 마이크로포어 여과기를 통해 여과시켜 10 ㎖ 멸균 황색 유리 바이알 (유형 1)에 담고 멸균 마개 및 덧마개로 밀봉하였다.

제형 B

활성 성분 A	125 ㎎
멸균의 비발열성 pH 7의인산염 완충액	전체 용액의 부피가 25 ㎖로 될 때까지 적당량을 가함

<실시예 4 : 근육내 주사>

활성 성분 A활성 성분 B벤질 알코올글리코푸롤 75주사용수

100 ㎎30 ㎎0.067 g0.94 g전체 부피가 3.00 ㎖로 될 때까지 적당량을 가함

활성 성분을 글리코푸롤에 용해시켰다. 그 후, 벤질 알코올을 가하고 용해시키고 물을 가하여 3 ㎖가 되게 하였다. 그 다음, 이 혼합물을 멸균 마이크로포어 여과기를 통해 여과시키고 3 ㎖ 멸균 황색 유리 바이알 (유형 1)에 밀봉시켰다.

<실시예 5 : 시럽>

활성 성분 A활성 성분 B소르비톨 용액글리세롤벤조산나트륨복숭아향 17.42.3169정제수

100 ㎎5 ㎎0.6 g0.85 g0.0025 g0.0125 ㎖전체 부피가 5.00 ㎖로 될 때까지 적당량을 가함

활성 성분을 글리세롤과 대부분의 정제수의 혼합물에 용해시켰다. 그 후, 벤조산나트륨의 수용액을 상기 용액에 가한 다음, 소르비톨 용액을 가하고 마지막으로 풍미제를 가하였다. 부피를 정제수로 맞추고 잘 섞었다.

<실시예 6 : 좌약>

	㎎/캡슐 좌약
활성 성분 A활성 성분 B경화유지 B.P.(Witepsol H15-Dynamit Nobel)	1003017701900

Witepsol H15의 1/5을 최대 45 ℃의 스팀 쟈킷 팬에서 용융시켰다. 활성 성분을 200 μM 체로 체질하고 커팅 헤드가 장착된 실바선(Silverson)을 이용하여 고른 분산액이 완성될 때까지 혼합하면서 용융된 기재에 가하였다. 혼합물을 45 ℃로 유지하면서 남은 Witepsol H15를 현탁액에 가하고 균질한 혼합물을 확보하도록 섞어주었다. 전체 현탁액을 250 ㎛ 스테인레스 스틸 막을 통과시키고 계속 섞어주면서 40℃로 냉각시켰다. 38℃ 내지 40℃ 온도에서, 혼합물 2.02 g을 적합한 2 ㎖ 플라스틱 주형에 충전하였다. 좌약을 실온으로 냉각시켰다.

<실시예 7 : 페사리>

	㎎/페사리
활성 성분 A활성 성분 B무수 덱스트로스감자 전분스테아르산마그네슘	10051601503418

상기 성분들을 직접 혼합하고 생성된 혼합물을 직접 압축하여 페사리를 제조하였다.

생물학적 데이타

<실시예 8>

감염성 HBV를 항시적으로 (constitutively) 생산하는 사람 간모세포종 세포계(cell line) (Hep-G2-2.2.15)를 5×10³세포/웰의 밀도로 96 웰 마이크로타이터 플레이트에 넣었다. 이들 세포를 3중 플레이트에서 라미부딘 및 PMEA의 복합약제로 처리하였다. 약물을 함유하는 배양 매질을 9일 동안 격일로 새로 보충하였으며, 이 때 상등액을 수집하고 HBV 함량을 분석하였다.

라미부딘/PMEA 복합약제를 매트릭스 방법으로 3중으로 2회 시험하였다. 실험 1에서는 100 nM 내지 0.14 nM (세로로 3배 희석)의 범위의 라미부딘, 1 μM 내지 10 nM (가로로 3.16배 희석)의 농도의 PMEA, (9-[(R)-2-(포스포노메톡시)에틸]아데닌 (아데포비르)을 사용하였다. 실험 2는 100 nM 내지 0.045 nM (세로로 3배 희석)의 범위의 라미부딘, 5 μM 내지 0.16 nM (가로로 3.16배 희석)의 범위의 PMEA의 희석액으로 수행하였다. 두 약물 모두를 별개의 96 웰 마이크로타이터 플레이트에서 희석한 후, 세포 단층을 함유하는 플레이트로 옮겼다. 세포는 2 mM L-글루타민 및 10% 소태아 혈청으로 보충된 RPMI 1640 150 ㎕에서 성장한다. 약물을 옮기기 전에, 마르지 않도록 단층위의 매질 30 ㎕를 남기고 매질 120 ㎕를 세포로부터 제거하였다. 약물이 없는 새 매질 90 ㎕를 가한 후, 5배로 희석된 약물 희석액 30 ㎕를 가하였다. 라미부딘 및 PMEA를 각각의 플레이트 상에서 각각 동일한 농도에서 개별적으로 시험하였다. 데이타를 약물 비처리 세포로 얻은 값으로 표준화하고, 분석을 위한 대조군 %로서 표현하였다.

HBV 검출에 이용한 방법은 이전에 기재되어 있었다 [Jansen RW, Johnson LC, Averett, DR. High-Capacity in vitro assessment of anti-hepatitis B virus compound selectivity by a virion-specific polymerase chain reaction assay. Antimicrob Agents Chem 1993; 37 (3): 441-447]. 요약해서 말하면, 항-HBsAg로 코팅된 플레이트상의 상등액으로부터 바이러스를 "포획(capturing)"하고, 세척하고, 변성시켜 HBV DNA를 방출시키고, 비오티닐화된 프라이머에 의해 PCR을 수행하고, 공존 프로브 혼성화에 의해 비오티닐화된 PCR 생성물을 스트렙타비딘 포획하고, 기질을 가하고, 비색 반응의 광학 밀도를 판독함으로써 HBV 검출을 수행하였다. 표준화된 HBV-함유 상등액을 각 플레이트에서 희석하였으며, HBV 표준 곡선으로부터 시험 웰의 HBV DNA 농도를 계산하였다. 검출 범위는 HBV DNA 0.045 내지 45 fg가 유용하며, 이 범위에서 게놈 30 개의 복사물이 신뢰할 수 있을 정도로 검출될 수 있다. 양의 대조군 (플라스미드 DNA 0.448 fg/㎕) 및 음의 대조군 (2 mM L-글루타민 및 10% 소태아 혈청으로 보충된 RPMI 매질) 모두와 연관하여 샘플을 시험하였다.

데이타를 각각 농도 반응 곡선에 대하여 힐 방정식 (Hill equation)에 맞추어 SAS 비선형 회귀를 이용하여 3중 플레이트의 평균 IC50 및 IC50의 표준 편차를 계산하였다. 특정 투여량 복합약제에 대해 오직 한번 IC50를 결정하는 경우, 인접한 농도로부터 표준 오차의 평균을 이용하여 표준 오차를 추정하였다. 각 복합약제에 대해 분획 억제 농도 (FIC50)를 계산하고, 아이소볼로그램 표현 (isobologram representation)을 이용하여 플롯팅하였다 [Berenbaum, M.C. (1985) The Expected Effect of a Combination of Agents: the General Solution. J. Theor. Biol. 114, 413-431]. 상승작용 또는 길항작용의 통계학적 유의성을 평가하기 위해, t-단측검정을 이용하여 이론값 1과 FIC50 양측값의 각 합계를 비교하였다. 0.05 미만의 P 값을 통계적으로 유의하다고 간주하였다. 실험에서 상이한 시험 농도 범위 (또는 아이소볼로그램 방법에 의해 사용가능한 범위)가 사용되므로 실험간의 P 값의 비교를 상당한 주의를 기울여 해석해야만 한다. 몇몇의 경우에, 모든 투여량에 대해 대조군의 50% 이상으로 반응이 억제되기 때문에 시험된 모든 농도가 IC50 계산에 사용될 수는 없었다.

도 1은 통계적으로 유의한 상승작용을 나타내는 두 실험으로부터 데이타를 합함으로써 형성된 단일 아이소볼로그램을 나타낸다.

<실시예 9>

하기 기재된 바와 같이 세포 배양 시스템에서 일시적으로 발현된 라미부딘에 내성이 있는 HBV 및 야생형 (WT)에 대하여 PMEA에 대한 IC50을 결정하였다. 야생형 서열을 갖거나, 역전사효소 유전자에서 생긴 라미부딘에 내성이 있는 돌연변이인 M552I, M552V, L528M, L528MM552V를 포함하는 HBV 게놈 함유 플라스미드에 의해 HepG2 세포를 일시적으로 트랜스펙션시켰다. M552V 및 L528M 돌연변이 각각이 시험관 내에서 HBV 복제에 대한 라미부딘의 민감성을 소실시키는데 부분적으로 기여하는데도 불구하고 라미부딘 치료요법에 내성이 생긴 HBV에 감염된 환자에서 M552I 및 L528MM552V 돌연변이가 관찰되었다는 것이 이전에 결정되었다 [Allen MI, Deslauriers M, Andrews CW, Tipples GA, Walters KA, Tyrrell DLJ, Brown N for the Lamivudine Clinical Investigation Group, and Condreay LD. Identification and characterization of mutations in hepatitis B virus resistant to lamivudine. HEPATOLOGY 1998; 27: 1670-1677]. HepG2 매질 (10% 소태아 혈청을 함유하는 개질된 둘베코 이글 매질 (Dulbecco's Modified Eagle Medium, DMEM) 150 ㎕에 6300 세포/웰이 되도록 HepG2 세포를 96-웰 코스타 (Costar) 플레이트에 넣고, 밤새 37℃에서 배양하였다. 각 트랜스펙션된 웰에 대하여, 세포에 DNA/리포펙타민 혼합물을 가하기 전에 OptiMem (Gibco) 12.5 ㎕에서 플라스미드 DNA 75 ng 및 리포펙타민 (Gibco) 0.5 ㎕를 함께 30분 동안 실온에서 배양하였다. 보충하지 않은 DMEM 150 ㎕로 각 웰을 린스하였다. DNA/리포펙타민 혼합물을 각 웰에 OptiMem 매질 총 부피 150 ㎕로 가하였다. 세포를 DNA/리포펙타민 용액으로 5시간 동안 37℃에서 배양하였다. 배양 후, 20% 혈청 함유 DMEM 150 ㎕를 웰 각각에 가하고, 플레이트를 밤새 37℃에서 배양하였다. 매질을 HepG2 매질만으로 또는 PMEA 함유 매질 150 ㎕로 교체하였다.

2.2.15 세포를 완전 매질 (10% 소태아 혈청 함유 RPMI 매질) 150 ㎕에 2250 세포/웰이 되도록 96-웰 코스타 플레이트에 넣고, 밤새 37℃에서 배양하였다. 매질을 완전 매질만으로 또는 원하는 농도의 PMEA 함유 매질 150 ㎕로 교체하였다.

트랜스펙션된 세포 뿐 아니라 2.2.15 안정한 HBV-생산 세포를 약물이 없는대조군 매질 또는 PMEA 함유 매질로 격일마다 (1, 3 및 5일) 처리하였다. 세포 처리에 대한 PMEA의 최종 농도를 (WT 플라스미드 트랜스펙션된 배양액 및 대조군 2.2.15 세포에 대해) 25, 5, 1, 0.2, 0.04 μM 또는 (모든 돌연변이 플라스미드 트랜스펙션된 배양에 대해) 125, 25, 5, 1, 0.2 μM로 사용하였다. 문헌 [Jansen RW, Johnson LC, Averett, DR. High-Capacity in vitro assessment of anti-hepatitis B virus compound selectivity by a virion-specific polymerase chain reaction assay. Antimicrob Agents Chem 1993; 37 (3): 441-447]에 기재된 방법을 이용하여 7일째에 세포로부터 수집된 매질로부터 HBV DNA 수준을 정량하였다. 실시예 8에 더욱 자세히 설명되어 있다. DNA 염색 비스벤즈이미드 (H33342 3HCl 4H₂O; Calbiochem Company, 미국 캘리포니아주 라졸라 소재)를 이용하여 약물 처리에 의한 세포독성을 측정하였다. 매질을 모은 후, 세포를 70% 에탄올로 30분 동안 고정하였다. 세포를 혈청이 없는 매질로 1회 린스하고, DNA 염색 비스벤즈이미드 (H33342 3HCl 4H₂O; Calbiochem Company, 미국 캘리포니아주 라졸라 소재) 33 ㎍/㎖로 1시간 동안 37℃에서 혈청이 없는 매질에서 배양하였다. 밀리포어 사이토플루오르 2350 형광 플레이트 판독기 (355 nm에서 여기; 460 nm에서 방출; 임의의 단위)로 웰 당 형광값을 측정하였다. 하기 기재된 방법을 이용하여 비처리 (약물 없음) 세포와 비교하여 화합물의 각 농도에서의 독성%로부터 각 화합물의 CC₅₀값 (세포 50%에 대해 세포독성이 있는 화합물의 농도)을 결정하였다. PMEA의 IC₅₀(약물이 없는 평행 배양액과 비교하여 HBV DNA 생산을 50% 억제하는 약물의 농도) 및CC₅₀을 추정하기 위해, 일시적 트랜스펙션 실험에서 각각의 구조물로부터 생성된 농도 반응 곡선을 비선형 회귀를 이용하여 힐 방정식 ()에 맞추었다. 각 구조물에 대한 계산된 IC₅₀은 95% 신뢰 구간에서 n번 복제에 대한 기하 평균을 나타낸다. 처리 군 간에 통계적으로 유의한 상이점을 결정하기 위하여, 프로그램 JMP (SAS, Cary NC)를 이용하여 데이타를 student t-검정으로 평가하였다. 2.2.15 세포에 의해 생산된 WT HBV에 대해 얻은 PMEA의 IC₅₀(0.43 μM)은 또한 동일한 세포계를 이용한 IC₅₀값 (0.7 μM)과 비교할만 하였다 [Heijtink RA, De Wilde GA, Kruining J, Berk L, Balzarini J, De Clercq E, Holy A, Schalam SW. Inhibitory Effect of 9-(phosphonylmethoxyethyl)-adenine (PMEA) on Human and Duck Hepatitis B Virus Infection. Antiviral Research 1993; 21 (2): 141-153].

시험관 내에서 라미부딘 내성 관련 돌연변이를 포함하는 HBV 및 WT HBV 사이의 PMEA의 IC₅₀비교

HBV 구조물	IC50 PMEA (95% CI)	IC50에서 x배 변화
2.2.15	0.43 μM (0.3-0.7 μM)	-
WT	0.53 μM (0.34-0.8 μM)	-
L528M/M552V	1.3 μM (0.4-4.3 μM)⁺	2.5
M552I	7.5 μM (1.8-32 μM)^*	14
M552V	9.8 μM (3.1-31 μM)^*+	18
L528M	0.87 μM (0.4-2.0 μM)	1.6
^*돌연변이 HBV와 WT HBV 사이에서 화합물의 IC₅₀이 통계학적으로 상이함 (p<0.05).⁺IC₅₀이 통계학적으로 서로 상이함 (p<0.05).

HepG2 세포에 대하여 PMPA의 세포독성 IC₅₀은 125 μM 이상이었으며, PMEA의 세포독성 IC₅₀은 25 내지 40 μM로 다양하였다.

Claims

(2R,시스)-4-아미노-1-(2-히드록시메틸-1,3-옥사티올란-5-일)-피리미딘-2-온 (라미부딘) 또는 그의 제약학상 허용되는 염, 및 제2 치료제인 비스(피발로일옥시메틸)(9-[(R)-2-(포스포노메톡시)에틸]아데닌 (아데포비르 디피복실) 또는 그의 제약학상 허용되는 염을 포함하고, (2R,시스)-4-아미노-1-(2-히드록시메틸-1,3-옥사티올란-5-일)-피리미딘-2-온 및 제2 치료제가 40:1 내지 1:1 중량비의 범위로 존재하는 HBV 감염 치료용 복합약제.
제1항에 있어서, 라미부딘 및 아데포비르 디피복실이 25:1 내지 15:1의 중량비의 범위로 존재하는 복합약제.
삭제
제1 또는 2항에 따른 복합약제를 그를 위한 1종 이상의 제약학상 허용되는 담체와 함께 포함하는, HBV 감염의 치료에 사용하기 위한 제약 제형.
(2R,시스)-4-아미노-1-(2-히드록시메틸-1,3-옥사티올란-5-일)-피리미딘-2-온 (라미부딘) 또는 그의 제약학상 허용되는 염, 및 (9-[(R)-2-(포스포노메톡시)에틸]아데닌 (아데포비르) 또는 그의 제약학상 허용되는 염 및 비스(피발로일옥시메틸)(9-[(R)-2-(포스포노메톡시)에틸]아데닌 (아데포비르 디피복실) 또는 그의 제약학상 허용되는 염에서 선택된 제2 치료제를 포함하고, (2R,시스)-4-아미노-1-(2-히드록시메틸-1,3-옥사티올란-5-일)-피리미딘-2-온 및 제2 치료제가 40:1 내지 1:1 중량비의 범위로 존재하는 HBV 감염의 치료에 사용하기 위한 제약 제형.
제4 또는 5항에 있어서, 단위 투여형인 제형.
제4 또는 5항에 있어서, 경구로 투여하기에 적합한 제형.
제4 또는 5항에 있어서, 라미부딘 25 내지 150 ㎎ 및 아데포비르 디피복실 5 내지 60 ㎎을 포함하는 제형.
제8항에 있어서, 라미부딘 100 ㎎ 및 아데포비르 디피복실 10 ㎎을 포함하는 제형.
삭제
삭제
제1 또는 2항에 있어서, 동시에 투여되는 복합약제.
제1 또는 2항에 있어서, 순차적으로 투여되는 복합약제.
제1 또는 2항에 있어서, 단일 복합 제형으로서 투여되는 복합약제.
제1 또는 2항에 있어서, B형 간염 바이러스의 복제의 뉴클레오시드 및(또는) 비뉴클레오시드 억제제에 내성이 있는 HBV 감염 치료용 복합약제.
삭제
삭제
삭제
삭제
(2R,시스)-4-아미노-1-(2-히드록시메틸-1,3-옥사티올란-5-일)-피리미딘-2-온 또는 그의 제약학상 허용되는 염, 및 (9-[(R)-2-(포스포노메톡시)에틸]아데닌 또는 그의 제약학상 허용되는 염 또는 비스(피발로일옥시메틸)(9-[(R)-2-(포스포노메톡시)에틸]아데닌 또는 그의 제약학상 허용되는 염에서 선택된 제2 치료제를 포함하고, (2R,시스)-4-아미노-1-(2-히드록시메틸-1,3-옥사티올란-5-일)-피리미딘-2-온 및 제2 치료제가 40:1 내지 1:1 중량비의 범위로 존재하는, 뉴클레오시드 및(또는) 비뉴클레오시드 억제제에 내성이 있는 HBV 감염 치료용 복합약제.
삭제
제1항에 따른 복합약제, 및 라미부딘과 아데포비르 디피복실을 복합하여 사용하는 것에 관한 지시사항을 포함하는 정보 삽입물을 포함하는 환자용 팩.