DE69635656T2

DE69635656T2 - 5-fluoro-2',3'-ungesättigte pyrimidinnucleoside

Info

Publication number: DE69635656T2
Application number: DE69635656T
Authority: DE
Inventors: F. Raymond SCHINAZI; C. Dennis LIOTTA
Original assignee: Emory University
Current assignee: Emory University
Priority date: 1995-01-27
Filing date: 1996-01-29
Publication date: 2006-09-21
Anticipated expiration: 2016-01-30
Also published as: JP2005325128A; ATE314077T1; DK0805683T3; EP1361227A3; US6680303B2; DE69635656D1; US20020198173A1; EP0805683A4; US5703058A; US20080293668A1; US6232300B1; JPH10512887A; WO1996022778A1; CA2211612A1; EP0805683A1; US5905070A; AU717580B2; US7419966B2; AU4705696A; US20040167140A1

Description

Die Erfindung betrifft eine Zusammensetzung, die ein spezielles β-D-2',3'-Didehydro-2',3'-dideoxy-5-fluorcytidin in Kombination mit einer zweiten Verbindung, die ein antivirales Mittel ist, umfasst. Die Verwendung von β-D-2',3'-Didehydro-2',3'-dideoxy-5-fluorcytidin bei der Herstellung eines Medikaments zur Behandlung der HIV-Infektion ist ebenfalls beschrieben. Weiterhin ist die Verwendung von β-D-2',3'-Didehydro-2',3'-dideoxy-5-fluorcytidin in Kombination mit einer zweiten Verbindung bei der Herstellung eines Medikaments zur gleichzeitigen oder sequentiellen Verabreichung bei der Behandlung von HIV- oder HBV-Infektion offenbart.
1981 wurde das Acquired Immune Deficiency Syndrome (AIDS) als eine Krankheit identifiziert, die das menschliche Immunsystem schwer beeinträchtigt und die fast ausnahmslos zum Tode führt. 1983 wurde das Human Immunodeficiency Virus (HIV) als ätiologische Ursache für AIDS bestimmt. Die Weltgesundheitsorganisation schätzt, dass derzeit 13 Millionen Menschen weltweit mit HIV infiziert sind und dass im Jahre 2000 40 Millionen Menschen infiziert sein werden. Jeden Tag infizieren sich etwa 5000 Menschen neu.
1985 wurde berichtet, dass das synthetische Nucleosid 3'-Azido-3'-deoxythymidin (AZT) die Replikation eines menschlichen Immundefizienz-Virus hemmt. Seit damals haben sich eine Anzahl von anderen synthetischen Nucleosiden, einschließlich 2',3'-Dideoxyinosin (DDI), 2',3'-Dideoxycytidin (DDC) und 2',3'-Dideoxy-2',3'-didehydrothymidin (D4T) gegen HIV als wirksam erwiesen. Nach der zellulären Phosphorylierung zu dem 5'-Triphosphat durch zelluläre Kinasen werden diese synthetischen Nucleoside in einen wachsenden Strang der viralen DNA eingebaut und führen aufgrund des Fehlens der 3'-Hydroxylgruppe zur Kettentermination. Sie können auch das Virus-Enzym reverse Transkriptase hemmen.
Der Erfolg von verschiedenen synthetischen Nucleosiden bei der Hemmung der Replikation von HIV in vivo oder in vitro hat eine Anzahl von Forschern dazu veranlasst, Nucleoside, bei denen das Kohlenstoffatom an der 3'-Position des Nucleosids durch ein Heteroatom ersetzt ist, zu entwerfen und zu testen. Norbeck et al. offenbarten, dass (±)-1-[(2β,4β)-2-(Hydroxymethyl)-4-dioxolanyl]thymin (als (±)-Dioxolan-T bezeichnet) gegen HIV (EC₅₀ von 20 μM in ATH8-Zellen) eine moderate Aktivität zeigt und gegenüber nicht infizierter Kontrollzellen bei einer Konzentration von 200 μM nicht toxisch ist. Tetrahedron Letters 30 (46), 6246, (1989), europäische Patentanmeldung mit der Veröffentlichungsnummer 0 337 713 und die US-Patentschrift Nr. 5,041,449, der Firma BioChem Pharma, Inc. zugesprochen, offenbaren racemische 2-substituierte-4-substituierte 1,3-Dioxolane, die antivirale Aktivität zeigen.
Die US-Patentschrift Nr. 5,047,407 und die europäische Patentanmeldung mit der Veröffentlichungsnummer 0 382 526, die ebenfalls der Firma Bio-Chem Pharma, Inc. zugesprochen sind, offenbaren, dass eine Anzahl von racemischen 2-substituierten-5-substituierten 1,3-Oxathiolannucleosiden antivirale Aktivität aufweisen, und berichten insbesondere, dass das racemische Gemisch von 2-Hydroxymethyl-5-(cytosin-1-yl)-1,3-oxathiolan (nachstehend als BCH-189 bezeichnet) gegen HIV ungefähr die gleiche Aktivität wie AZT und eine geringe Toxizität aufweist. Es wurde auch festgestellt, dass BCH-189 die Replikation von AZT-resistenten HIV-Isolaten aus den Patien ten, die länger als 36 Wochen mit AZT behandelt wurden, in vitro hemmt. Das (-)-Enantiomer des β-Isomers von BCH-189, das als 3TC bekannt ist, das gegen HIV hoch wirksam ist und eine geringe Toxizität aufweist, wurde von der U.S. Food and Drug Administration in Kombination mit AZT zur Behandlung von HIV beim Menschen genehmigt.
Es wurde ebenfalls offenbart, dass cis-2-Hydroxymethyl-5-(5-fluorcytosin-1-yl)-1,3-oxathiolan ("FTC") eine sehr wirksame HIV-Aktivität aufweist. Schinazi et al., "Selective Inhibition of Human Immunodeficiency Viruses by Racemates and Enantiomers of cis-5-Fluoro-1-(2-(Hydroxymethyl)-1,3-Oxathiolane-5-yl]Cytosine", Antimicrobial Agents and Chemotherapy, November 1992, Seiten 2423-2431. Siehe auch US-Patentschrift Nr. 5,210,085; US-Patentschrift Nr. 5,204,446, WO 91/11186 und WO 92/14743.
Ein anderes Virus, das ein gravierendes Problem für die menschliche Gesundheit darstellt, ist das Hepatitis-B-Virus (nachstehend als "HBV" bezeichnet). HBV wird als Krebsursache bei Menschen nur noch von Tabak übertroffen. Der Mechanismus, durch den HBV Krebs auslöst, ist unbekannt. Es wird postuliert, dass es die Tumorentwicklung direkt oder indirekt über chronische Entzündung, Zirrhose und Zelldegeneration in Verbindung mit der Infektion auslösen kann.
Nach einer zwei- bis sechsmonatigen Inkubationsdauer, während der der Wirt nichts von der Infektion ahnt, kann die HBV-Infektion zu akuter Hepatitis und zu Leberschäden führen, die Abdominalschmerz, Gelbsucht und erhöhte Blutspiegel an bestimmten Enzymen verursachen kann. HBV kann eine plötzlich ausbrechende Hepatitis, eine schnell fortschreitende, oft letale Form dieser Krankheit bewirken, wobei große Bereiche der Leber zerstört werden.
Typischerweise erholen sich die Patienten von einer akuten Hepatitis. Bei einigen Patienten dauern allerdings hohe Spiegel von Virusantigen im Blut für eine ausgedehnte oder unbestimmte Zeitdauer an und führen zu einer chronischen Infektion. Chronische Infektionen können zu einer chronisch persistenten Hepatitis führen. Patienten, die mit chronisch persistenter HBV infiziert sind, leben besonders häufig in Entwicklungsländern. Mitte des Jahres 1991 gab es allein in Asien etwa 225 Millionen chronische Träger von HBV und weltweit fast 300 Millionen Träger. Die chronisch persistente Hepatitis kann Müdigkeit, Leberzirrhose und Leberzellenkarzinom, ein primärer Leberkrebs, hervorrufen.
In den westlichen Industrieländern schließen die Hochrisikogruppen für eine HBV-Infektion diejenigen ein, die mit HBV-Trägern oder ihren Blutproben Kontakt haben. Die Epidemiologie von HBV ist derjenigen des Acquired Immune Deficiency Syndrome sehr ähnlich, was dafür verantwortlich ist, dass die HBV-Infektion bei Patienten mit AIDS oder mit dem AIDS verwandten Komplex häufig ist. Allerdings ist HBV ansteckender als HIV.
Sowohl FTC als auch 3TC zeigen Aktivität gegen HBV. Furman et al., "The Anti-Hepatitis B Virus Activities, Cytotoxicities, and Anabolic Profiles of the (–) and (+) Enantiomers of cis-5-Fluoro-1-[2-(Hydroxymethyl)-1,3-Oxathiolane-5-yl]Cytosine", Antimicrobial Agents and Chemotherapy, Dezember 1992, Seiten 2686-2692 und Cheng et al., Journal of Biological Chemistry, Band 267 (20), Seiten 13938-13942 (1992).
Ein aus menschlichem Serum stammender Impfstoff wurde bereits zur Immunisierung von Patienten gegenüber HBV entwickelt. Obgleich er als wirksam befunden wurde, ist die Produktion des Impfstoffs aufwändig, da die Bereitstellung des menschlichen Serums aus chronischen Trägern begrenzt und das Reinigungsverfahren lang und kostenaufwändig ist. Außerdem muss jede aus einem unterschiedlichen Serum hergestellte Charge des Impfstoffs an Schimpansen getestet werden, um Sicherheit zu gewährleisten. Impfstoffe wurden auch gentechnisch hergestellt. Tägliche Behandlungen mit a- Interferon, einem gentechnisch hergestellten Protein, haben sich ebenfalls als viel versprechend erwiesen.
EP-A-O 409 227 offenbart β-D-2',3'-Didehydro-2',3'-dideoxy-5-fluorcytosin und deren Derivate zur Herstellung von pharmazeutischen Zubereitungen zur Behandlung von HBV-Infektionen.
Angesichts der Tatsache, dass das Acquired Immune Deficiency Syndrome, der mit AIDS verwandte Komplex, und das Hepatitis-B-Virus weltweit epidemische Ausmaße erreicht und tragische Auswirkungen für den infizierten Patienten haben, besteht zur Behandlung dieser Krankheiten immer noch eine starke Nachfrage nach der Bereitstellung von neuen wirksamen pharmazeutischen Mitteln, die gegenüber dem Wirt wenig Toxizität aufweisen.
Es ist darum ein Gegenstand der vorliegenden Erfindung, eine Zusammensetzung zur Behandlung von menschlichen, mit HfV infizierten Patienten bereitzustellen.
Eine weitere Aufgabe der Erfindung ist die Bereitstellung einer Zusammensetzung zur Behandlung von menschlichen Patienten oder anderen Wirtstieren, die mit HBV infiziert sind.
Zusammenfassung der Erfindung
Die vorliegende Erfindung stellt eine Zusammensetzung bereit, die ein β-D-Nucleosid der Formel (I):
wobei R H, C(O)(C₁-C₆-Alkyl), Monophosphat, Diphosphat oder Triphosphat ist, oder ein pharmazeutisch verträgliches Salz davon in Kombination mit einer zweiten Verbindung, die aus der Gruppe ausgewählt ist, bestehend aus dem (-)-Enantiomer von 2-Hydroxymethyl-5-(5-fluorocytosin-1-yl)-1,3-oxathiolan (FTC), 9-(4-(Hydroxymethyl)-2-cyclopenten-1-yl)-guanin (Carbovir), 9-((2-Hydroxyethoxy)methyl)-guanin (Acyclovir), Interferon, Diacetyl-6-deoxy-9-(4-hydroxy-3-hydroxymethyl-but-1-yl)-guanin (Famciclovir), 9-(4-Hydroxy-3-(hydroxymethyl)butyl)-guanin (Penciclovir), 3'-Deoxy-3'-azidothymidin (AZT), 2',3'-Dideoxyinosin (DDI), (-)-2'-Fluor-5-mehtyl-β-L-arabinofuranosyluridin (L-(-)-FMAU) und 2',3'-Didehydro-2'-Y-dideoxythymidin (D4T), umfasst.
Die Erfindung stellt auch die Verwendung eines β-D-Nucleosids der Formel (I):
wobei R H, C(O)(C₁-C₆-Alkyl), Monophosphat, Diphosphat oder Triphosphat ist, oder eines pharmazeutisch verträglichen Salzes davon gegebenenfalls in Kombination mit einem pharmazeutisch verträglichen Träger zur Herstellung eines Medikaments zur Behandlung der HIV-Infektion bereit.
Die Erfindung stellt auch die Verwendung eines β-D-Nucleosids der Formel (I):
wobei R H, C(O)(C1-C6-Alkyl), Monophosphat, Diphosphat oder Triphosphat ist, oder eines pharmazeutisch verträglichen Salzes davon und einer zweiten Verbindung, die aus der Gruppe ausgewählt ist, bestehend aus dem (-)-Enantiomer von 2-Hydroxymethyl-5-(5-fluorcytosin-1-yl)-1,3-oxathiolan (FTC), 9-(4-(Hydroxymethyl)-2-cyclopenten-1-yl)-guanin (Carbovir), 9-((2-Hydroxyethoxy)methyl)-guanin (Acyclovir), Interferon, Diacetyl-6-deoxy-9-(4-hydroxy-3-hydroxymethyl-but-1-yl)-guanin (Famciclovir), 9-(4-Hydroxy-3-(hydroxymethyl)butyl)-guanin (Penciclovir), 3'-Deoxy-3'-azidothymidin (AZT), 2',3'-Dideoxyinosin (DDI), (-)-2'-Fluor-5-methyl-β-L-arabinofuranosyluridin (L-(-)-FMAU) und 2',3'-Didehydro-2'-Y-dideoxythymidin (D4T), gegebenenfalls in Kombination mit einem pharmazeutisch verträglichen Träger, zur Herstellung eines Medikaments zur gleichzeitigen oder sequenziellen Verabreichung bei der Behandlung einer HIV- oder HBV-Infektion bereit.
Vorzugsweise ist die Verbindung β-D-2',3'-Didehydro-2',3'-dideoxy-5-fluorcytidin.
Die wirksame Verbindung oder ihr Derivat oder Salz wird in Kombination mit einem anderen antiviralen Mittel, wie einem Anti-HIV-Mittel oder einem Anti-HBV-Mittel, einschließlich der vorstehend beschriebenen, verabreicht. Im Allgemeinen wird während der alternierenden Therapie eine wirksame Dosis von jedem Mittel seriell verabreicht, wohingegen bei der Kombinationstherapie eine wirksame Dosis von zwei oder mehreren Mitteln zusammen verabreicht wird. Die Dosierungen hängen von der Absorptions-, Inaktivierungs- und Exkretionsgeschwindigkeit des Arzneimittels sowie von anderen, den Fachleuten bekannten Faktoren ab. Es ist festzustellen, dass die Dosierungswerte auch mit der Schwere des zu lindernden Zustandes schwanken. Es ist weiterhin selbstverständlich, dass für jedes bestimmte Individuum spezielle Dosierungsvorgaben und Dosierungspläne je nach individuellem Bedürfnis und fachlicher Bewertung der verabreichenden oder die Verabreichung der Zusammensetzungen überwachenden Person zeitlich eingestellt werden sollten.
Nicht einschränkende Beispiele für antivirale Mittel, die in Kombination mit den hier offenbarten Verbindungen verwendet werden können, umfassen 2-Hydroxymethyl-5-(5-fluorcytosin-1-yl)-1,3-oxathiolan (FTC); das (-)-Enantiomer von 2-Hydroxymethyl-5-(cytosin-1-yl)-1,3-oxathiolan (3TC); Carbovir, Acyclovir, Interferon, Famciclovir, Penciclovir, AZT, DDI, DDC, D4T, L-(-)-FMAU, CS-92 (3'-Azido-2',3'-dideoxy-5-methyl-cytidin) und β-D-Dioxolannucleoside, wie β-D-Dioxolanyl-guanin (DG), β-D-Dioxolanyl-2,6-diaminopurin (DAPD) und β-D-Dioxolanyl-6-chlorpurin (ACP).
Die Verbindungen können auch zur Behandlung des infektiösen Pferde-Anämie-Virus (EIAV), des Katzen-Immundefizienz-Virus und des Affen-Immundefizienz-Virus verwendet werden. (Wang S., Montefaro R., Schinazi R.F., Jagerski B. und Mellors J.W.: Activity of nucleoside and non-nucleoside reverse transcriptase inhibitors (NNRTI) against equine infectious anemia virus (EIAV). First National Conference on Human Retroviruses and Related Infections, Washington, D.C., 12. bis 16. Dezember 1993; Sellon D.C., Equine Infectious Anemia, Vet. Clin. North Am. Equine Pract. United States, 9: Seiten 321-336, 1993; Philpott M.S., Ebner J.P., Hoover E.A., Evaluation of 9-(2-phosphonylmethoxyethyl) adenine therapy for feline immunodeficiency virus using a quantative polymerase chain reaction, Vet. Immunol. Immunopathol. 35: Seiten 155-166, 1992.)
Ausführliche Beschreibung der Erfindung
Wie hier verwendet, bezieht sich der Begriff "enantiomerisch angereichertes Nucleosid" auf eine Nucleosidzusammensetzung, die mindestens 95% bis 98% oder stärker bevorzugt 99% bis 100% eines einzigen Enantiomers des Nucleosids umfasst.
Der Begriff C₁-C₆-Alkyl umfasst Methyl, Ethyl, Propyl, Isopropyl, Butyl, Isobutyl, tert.-Butyl, Pentyl, Cyclopentyl, Isopentyl, Neopentyl, Hexyl, Isohexyl, Cyclohexyl, Cyclohexylmethyl, 3-Methylpentyl, 2,2-Dimethylbutyl und 2,3-Dimethylbutyl.
Die erfindungsgemäßen Verbindungen besitzen entweder antivirale Aktivität, wie Anti-HIV-1-, Anti-HIV-2- und Anti-HBV- und Anti-Affen-Immundefizienz-Virus- (Anti-SIV)-Aktivität an sich oder werden zu einer Verbindung metabolisiert, die antivirale Aktivität aufweist.
Die offenbarten Verbindungen oder ihre pharmazeutische verträglichen Derivate oder Salze oder pharmazeutisch verträgliche Formulierungen, die diese Verbindungen enthalten, sind bei der Prävention und Behandlung von HIV-Infektionen und anderen verwandten Zuständen brauchbar, wie AIDS-verwandter Komplex (ARC), persistente generalisierte Lymphadenopathie (PGL), AIDS-verwandte neurologische Zustände, Anti-HIV-Antikörper- positive und HIV-positive Zustände, Kaposi-Sarkom, Thrombocytopenie purpurea und opportunistische Infektionen. Zusätzlich können diese Verbindungen oder Formulierungen prophylaktisch angewandt werden, um das Fortschreiten der klinischen Erkrankung bei Individuen zu verhindern oder zu verlangsamen, die Anti-HIV-Antikörper- oder HIV-Antigen-positiv sind oder die HIV-exponiert waren.
Die Verbindung oder ihre pharmazeutisch verträglichen Derivate oder ihr pharmazeutisch verträgliches Salz oder pharmazeutisch verträgliche Formulierungen, die die Verbindung oder ihre Derivate oder ihr Salz enthalten, sind auch bei der Prävention und Behandlung von HIV-Infektionen und anderen verwandten Zuständen geeignet, wie Anti-HBV-Antikörper-positive und HBV-positive Zustände, durch HBV verursachte chronische Leberentzündung, Zirrhose, akute Hepatitis, plötzlich ausbrechende Hepatitis, chronische persistente Hepatitis und Ermüdung. Die Verbindungen oder Formulierungen können auch prophylaktisch angewandt werden, um das Fortschreiten der klinischen Erkrankung bei Individuen, die Anti-HBV-Antikörper- oder HBV-Antigen-positiv sind oder die gegenüber HBV exponiert waren, zu verhindern oder zu verzögern.
Die Verbindung kann durch Umsetzung mit einem entsprechenden Veresterungsmittel, beispielsweise einem Säurehalogenid oder Säureanhydrid, in einen pharmazeutisch verträglichen Ester übergeführt werden. Die Verbindung oder ihr pharmazeutisch verträgliches Derivat kann auf herkömmliche Weise, beispielsweise durch Behandlung mit einer entsprechenden Base, in ein pharmazeutisch verträgliches Salz davon übergeführt werden. Der Ester oder das Salz der Verbindung kann, beispielsweise durch Hydrolyse, in die Stammverbindung übergeführt werden.
I. Wirksame Verbindung und physiologisch verträgliche Derivate und Salze davon
Die hier offenbarten antiviral wirksamen Verbindungen sind β-D-Nucleoside der Formel (I).
Die wirksame Verbindung kann als beliebiges Derivat verabreicht werden, das bei Verabreichung an den Empfänger in der Lage ist, direkt oder indirekt die Stammverbindung bereitzustellen, oder das selbst Wirksamkeit zeigt. Nicht einschränkende Beispiele sind die pharmazeutisch verträglichen Salze (alternativ als "physiologisch verträgliche Salze" bezeichnet) und die 5'- und N⁴-acylierten oder -alkylierten Derivate der wirksamen Verbindung (alternativ als "physiologisch wirksame Derivate" bezeichnet). Bei einer Ausführungsform ist die Acylgruppe ein Carboxylsäureester, wobei die Nichtcarbonylgruppierung der Estergruppe aus geradkettigem, verzweigtem oder cyclischem Alkyl, Alkoxyalkyl, einschließlich Methoxymethyl, Aralkyl, einschließlich Benzyl, Aryloxyalkyl, wie Phenoxymethyl, Aryl, einschließlich Phenyl, gegebenenfalls substituiert mit Halogen, C₁-C₄-Alkyl oder C₁-C₄-Alkoxy, Sulfonatester, wie Alkyl- oder Aralkylsulfonyl, einschließlich Methansulfonyl, der Mono-, Di- oder Triphosphatester, Trityl oder Monomethoxytrityl, substituiertem Benzyl, Trialkylsilyl (z.B. Dimethyl-tert.-butylsilyl) oder Diphenylmethylsilyl ausgewählt ist. Arylgruppen in den Estern umfassen optimalerweise eine Phenylgruppe. Der Begriff Alkyl, wie hier verwendet, bezieht sich, wenn nicht anderweitig angegeben, auf einen gesättigten geradkettigen, verzweigten oder cyclischen, primären, sekundären oder tertiären C₁-C₁₈-Kohlenwasserstoff und umfasst speziell Methyl, Ethyl, Propyl, Isopropyl, Butyl, Isobutyl, tert.-Butyl, Peetyl, Cyclopentyl, Isopentyl, Neopentyl, Hexyl, Isohexyl, Cyclohexyl, Cyclohexylmethyl, 3-Methylpentyl, 2,2-Dimethylbutyl und 2,3-Dimethylbutyl. Modifikationen der wirksamen Verbindung, insbesondere an der N⁴- und 5'-O-Position können die Bioverfügbarkeit und Metabolisierungsgeschwindigkeit der wirksamen Spezies beeinflussen und somit Kon trolle über die Abgabe der wirksamen Spezies bereitstellen. Außerdem können die Modifikationen die antivirale Aktivität der Verbindung beeinflussen und in einigen Fällen die Aktivität gegenüber der Stammverbindung erhöhen. Dies kann leicht durch Herstellung des Derivats und durch Testung seiner antiviralen Aktivität nach den hier beschriebenen Verfahren oder nach einem anderen den Fachleuten bekannten Verfahren bewertet werden.
Da die 1'- und 4'-Kohlenstoffe des Kohlehydrats des Nucleosids (nachstehend allgemein als die Zuckergruppierung der Nucleoside bezeichnet) chiral sind, können ihre Nicht-Wasserstoff-Substituenten (die Pyrimidin- oder Purinbase bzw. die CHOR-Gruppen) entweder cis (auf der gleichen Seite) oder trans (auf gegenüberliegenden Seiten) bezüglich des Zuckerringsystems sein. Darum werden die vier optischen Isomere durch die folgenden Konfigurationen dargestellt (bei Orientierung der Zuckergruppierung in einer horizontalen Ebene, derart, dass der Y-Substituent hinten ist): cis (beide Gruppen "nach oben", was der Konfiguration der natürlich vorkommenden Nucleoside entspricht), cis (beide Gruppen "nach unten", was eine nicht natürlich vorkommende Konfiguration darstellt), trans (der C2'-Substituent "nach oben" und der C4'-Substituent "nach unten") und trans (der C2'-Substitent "nach unten" und der C4'-Substituent "nach oben"). Die "D-Nucleoside" sind cis-Nucleoside in einer natürlichen Konfiguration, und die "L-Nucleoside" sind cis-Nucleoside in der nicht natürlich vorkommenden Konfiguration.
II. Herstellung der wirksamen Verbindungen
Die hier zur Behandlung von HIV- und HBV-Infektionen in einem Wutorganismus offenbarten Nucleoside können nach veröffentlichten Verfahren hergestellt werden.
β-D-Dioxolannucleoside können, wie im Einzelnen in PCT/US91/09124 offenbart, hergestellt werden. Das Verfahren umfasst die anfängliche Herstel lung von (2R,4R)- und (2R,4S)-4-Acetoxy-2-(geschütztem Oxymethyl)-dioxolan aus 1,6-Anhydromannose, ein Zucker, der die gesamte notwendige Stereochemie für das enantiomerisch reine Endprodukt einschließlich der korrekten diastereoisomeren Konfiguration in der 1-Position des Zuckers (die in dem später gebildeten Nucleosid zu der 4'-Position wird) enthält. Das (2R,4R)- und (2R,4S)-4-Acetoxy-2-(geschützte Oxymethyl)-dioxolan wird mit einer gewünschten heterocyclischen Base in Gegenwart von SnCl₄, einer anderen Lewis-Säure, oder Trimethylsilyltriflat in einem organischen Lösungsmittel, wie Dichlorethan, Acetonitril oder Methylenchlorid, unter Bereitstellung des stereochemisch reinen Dioxolannucleosids kondensiert.
Enzymatische Verfahren zur Trennung der D- und L-Enantiomere von cis-Nucleosiden sind beispielsweise in Nucleosides and Nucleotides, 12 (2), Seiten 225-236 (1993); und in den PCT-Veröffentlichungen Nr. WO 91/11186, WO 92/14729 und WO 92/14743, eingereicht von Emory University offenbart.
Die Trennung des acylierten oder alkylierten racemischen Gemisches der D- und L-Enantiomere der cis-Nucleoside kann durch Hochdruckflüssigkeitschromatographie mit ausgewählten chiralen stationären Phasen erreicht werden, wie beispielsweise in der PCT-Veröffentlichung Nr. WO 92/14729 offenbart.
Die Mono-, Di- und Triphosphatderivate der aktiven Nucleoside können, wie nach den veröffentlichten Verfahren beschrieben, hergestellt werden. Das Monophosphat kann nach dem Verfahren von Imai et al., J. Org. Chem., 34 (6), Seiten 1547-1550 (Juni 1969) hergestellt werden. Das Diphosphat kann nach dem Verfahren von Davisson et al., J. Org. Chem., 52 (9), Seiten 1794-1801 (1987) hergestellt werden. Das Triphosphat kann nach dem Verfahren von Hoard et al., J. Am. Chem. Soc., 87 (8), Seiten 1785-1788 (1965) hergestellt werden.
Weitere Druckschriften, die geeignete Verfahren offenbaren, die zur Herstellung der aktiven Verbindungen angewandt oder übernommen werden können, umfassen Hutchinson D.W., "New Approaches to the Synthesis of Antiviral Nucleosides", TIBTECH, 1990, 8, Seite 348; Agrofoglio L. et al., "Synthesis of Carbocyclic Nucleosides", Tetrahedron, 1994, 50, Seite 10611; Dueholm K.L.; Pederson E.B., Synthesis, 1994, 1; Wilson L.J., Choi W.-B., Spurling T., Schinazi R.F., Cannon D., Painter G.R., St.Clair M. und Furman P.A., The Synthesis and Anti-HIV Activity of Pyrimidine Dioxanyl Nucleoside Analogues, Bio. Med. Chem. Lett., 1993, 3, Seiten 169-174; Hoong L.K., Strange L.E., Liotta D.C., Koszalka G.W., Burns C.L., Schinazi R.F., Enzyme-mediated enantioselective preparation of the antiviral agent 2',3'-dideoxy-5-fluoro-3'-thiacytidine [(-)-FTC] and related compounds, J. Ora. Chem, 1992, 57, Seiten 5563-5565; Choi W.-B., Wilson L.J., Yeola S., Liotta D.C., Schinazi F.R., In situ complexation directs the stereochemistry of N-glycosylation in the synthesis of oxathiolanyl and dioxolanyl nucleoside analogues, J. Amer. Chem. Soc., 1991, 113, Seiten 9377-9379; Choi W.-B., Yeola S., Liotta D.C., Schinazi R.F., Painter G.R., Davis M., St.Clair M., Furman P. A., The Synthesis, Anti-HIV and Anti-HBV Activity of Pyrimidine Oxathiolane Nucleoside Analogues, Bio. Med. Chem. Lett., 1993, 3, Seiten 693-696; Wilson J.E., Martin J.L., Borrota-Esoda K., Hopkins S.E., Painter G.R., Liotta D.C., Furman P.A., The 5'-Triphosphates of the (-)- and (+)-Enantiomers of cis-5-Fluoro-1-(2-(hydroxymethyl)-1,3'-Oxathioan-5-yl]-Cytosine Equally Inhibit Human Immunodeficiency Virus Type-1 Reverse Transcriptase, Antimicrob. Agents Chemother., 1993, 37, Seiten 1720-1722.
Die Schmelzpunkte wurden auf einem digitalen Electrothermal IA 8100 Schmelzpunktbestimmungsgerät bestimmt und sind unkorrigiert. Die ¹H- und ¹³C-NMR-Spektren wurden auf einem General Electric QE-300 (300 MHz) Spektrometer aufgezeichnet; die chemischen Verschiebungen sind in parts per million (δ) aufgezeichnet, und die Signale sind als s (Singulett), d (Dublett), t (Triplett) oder m (Multiplett) bezeichnet. Die UV-Spektren wurden auf einem Shimadzu UV-2101PC Spektralphotometer aufgenommen, und die FTIR-Spektren wurden auf einem Nicolet Impact 400 Spektralphotometer aufgenommen. Die Massenspektrometrie wurde mit einem JEOL (JMS-SX102/SX102A/E) Spektrometer durchgeführt. Die Experimente wurden unter Verwendung der TLC-Analyse überwacht, die auf Kodak-Chromatographiepapier, die mit Kieselgel und einem Fluoreszenzindikator vorbeschichtet waren, durchgeführt wurde. Die Säulenchromatographie unter Anwendung von Silicagel (60-200 Mesh; Fisher Scientific, Fair Lawn, NJ) wurde zur Reinigung der Produkte verwendet. Tetrakis(triphenylphosphin)palladium(0) und andere Chemikalien wurden von der Firma Aldrich Chemical Company (Milwaukee, WI) bezogen. Die Mikroanalysen wurden bei Atlantic Microlab Inc. (Norcross, GA) durchgeführt. Die Enzyme wurden von der Firma Amano International Enzyme Co. (Troy, VA) käuflich erworben.
Beispiel 1 Herstellung von 2',3'-Didehydro-2',3'-dideoxy-pyrimidinnucleosiden
Schema 1, nachstehend, stellt ein allgemeines Verfahren zur Herstellung von 2',3'-Didehydro-2',3'-dideoxy-pyrimidinnucleosiden bereit. Das Verfahren kann für eine breite Vielzahl von Basen angepasst und zur Bereitstellung entweder des β-D- oder des β-L-Isomers, wie gewünscht, angewandt werden. β-D-2',3'-Didehydro-2',3'-dideoxy-5-fluorcytidin fällt in den Umfang der Erfindung.
IV. Fähigkeit von 5-Fluor-2',3'-dideoxy-2',3'-didehydro-pyrimidinnucleosid zur Hemmung der Replikation von HIV und HBV
Die Fähigkeit von Nucleosiden, HIV zu hemmen, kann durch verschiedene experimentelle Techniken gemessen werden. Die hier angewandte und nachstehend ausführlich beschriebene Technik misst die Hemmung der Virusreplikation in Phytohämagglutinin-(PHA)-stimulierten menschlichen peri pheren mononukleären Blut-(PBM)-Zellen, die mit HIV-1 (Stamm LAV) infiziert wurden. Die Menge an produziertem Virus wird durch Messen des Virus-codierten Enzyms reverse Transkriptase bestimmt. Die Menge an produziertem Enzym ist zu der Menge des produzierten Virus proportional.
3 Tage alte Phytohämagglutinin-stimulierte PBM-Zellen (10⁶ Zellen/ml) aus Hepatitis-B- und HIV-1-seronegativen gesunden Spendern wurden mit HIV-1 (Stamm LAV) in einer Konzentration von etwa dem 100-Fachen der 50%igen Gewebekultur-infektiösen Dosis (TICD 50) pro ml infiziert und in Gegenwart und Abwesenheit von verschiedenen Konzentrationen von antiviralen Verbindungen kultiviert.
Etwa 1 Stunde nach der Infektion wurde das Medium mit der zu testenden Verbindung (2-fache Endkonzentration im Medium) oder ohne Verbindung den Kolben (5 ml; Endvolumen 10 ml) zugesetzt. AZT wurde als positive Kontrolle verwendet.
Die Zellen wurden gegenüber dem Virus (etwa 2 × 10⁵ dpm/ml, wie durch den Reverse-Transkriptase-Test bestimmt) exponiert und anschließend in einen CO₂-Inkubator verbracht. HIV-1 (Stamm LAV) wurde vom Center for Disease Control, Atlanta, Georgia, erhalten. Die Verfahren, die zur Kultivierung der PBM-Zellen, zum Ernten des Virus und zur Bestimmung der Reverse-Transkriptase-Aktivität angewandt wurde, waren diejenigen, die von McDougal et al. (J. Immun. Meth. 76, Seiten 171-183, 1985) und Spira et al. (J. Clin. Meth. 25, Seiten 97 bis 99, 1987) beschrieben wurden, mit der Ausnahme, dass in dem Medium kein Fungizon eingeschlossen war (siehe Schinazi et al., Antimicrob. Agents Chemother. 32, Seiten 1784-1787 (1988; Id., 34: Seiten 1061-1067 (1990)).
Am 6. Tag wurden Zellen und Überstand in ein 15-ml-Röhrchen übergeführt und bei etwa 900 g 10 min zentrifugiert. 5 ml Überstand wurde entnommen, und das Virus wurde durch Zentrifugation bei 40000 U/min 30 min (Beckman 70 I Ti-Rotor) konzentriert. Das solubilisierte Viruspellet wurde zur Bestimmung der Spiegel an reverser Transkriptase verarbeitet. Die Ergebnisse sind in dpm/ml des überprüften Überstands ausgedrückt. Das Virus aus kleineren Volumina des Überstands (1 ml) kann ebenfalls durch Zentrifugation vor der Solubilisierung und Bestimmung der Reverse-Transkriptase-Spiegel konzentriert werden.
Die mittlere wirksame (EC₅₀) Konzentration wurde durch das Verfahren der mittleren Wirkung (Antimicrob. Agents Chemother. 30, Seiten 491-498 (1986)) bestimmt. Kurz gesagt, wurde die prozentuale Hemmung des Virus, wie aus den Messungen der reversen Transkriptase bestimmt, gegen die mikromolare Konzentration der Verbindung aufgetragen. EC₅₀ ist die Konzentration an Verbindung, bei der eine 50%ige Hemmung des Viruswachstums vorliegt.
Mitogen-stimulierte, nicht infizierte menschliche PBM-Zellen (3,8 × 105 Zellen/ml) wurden in Gegenwart und Abwesenheit von Arzneimittel unter ähnlichen Bedingungen, wie diejenigen, die für den vorstehend beschriebenen antiviralen Test angewandt wurden, kultiviert. Die Zellen wurden nach 6 Tagen unter Verwendung eines Haemacytometers und des Trypanblau-Ausschlussverfahrens, wie von Schinazi et al., Antimicrobial Agents and Chemotherapy, 22 (3), Seite 499 (1982) beschrieben, gezählt. Die IC₅₀ ist die Konzentration der Verbindung, die 50% des normalen Zellwachstums hemmt.
Die Fähigkeit der wirksamen Verbindung zur Hemmung des Virus-Wachstums in 2.2.15-Zellkulturen (HepG2-Zellen, transformiert mit Hepatitisvirion) kann bewertet werden, wie nachstehend ausführlich beschrieben.
Eine Zusammenfassung und Beschreibung des Tests der antiviralen Wirkungen in diesem Kultursystem und der Analyse von HBV-DNA wurde beschrieben (Korba und Milman, 1991, Antiviral Res. 15, Seite 217). Die antiviralen Bewertungen wurden an zwei getrennten Durchgängen von Zellen durchgeführt. Sämtliche Vertiefungen in sämtlichen Platten wurden mit der gleichen Dichte und zur gleichen Zeit mit Zellen befüllt.
Aufgrund der natürlichen Schwankungen in den Konzentrationen sowohl von intrazellulärer als auch extrazellulärer HBV-DNA werden nur Absenkungen von mehr als 3,5 (für die HBV-Virion-DNA) oder 3,0 (für HBV-DNA-Replikationszwischenstufen) von den durchschnittlichen Konzentrationen für diese HBV-DNA-Formen in unbehandelten Zellen als statistisch signifikant betrachtet (P < 0,05). Die Konzentrationen an eingeschleuster HBV-DNA in jeder zellulären DNA-Präparation (die bei diesen Experimenten auf einer Basis pro Zelle konstant bleiben) wurde zur Berechnung der Konzentration der intrazellulären HBV-DNA-Formen verwendet, wodurch sichergestellt ist, dass zwischen getrennten Proben gleiche Mengen von zellulärer DNA verglichen wurden.
Typische Werte für extrazelluläre HBV-Virion-DNA in unbehandelten Zellen reichen von 50 bis 150 pg/ml Kulturmedium (Mittelwert von etwa 76 pg/ml). Die intrazellulären HBV-DNA-Replikationszwischenstufen in unbehandelten Zellen reichen von 50 bis 100 μg/pg Zell-DNA (Mittelwert etwa 74 pg/μg Zell-DNA). Im Allgemeinen sind die Absenkungen in den Konzentrationen von intrazellulärer HBV-DNA aufgrund der Behandlung mit antiviralen Verbindungen weniger ausgeprägt und treten langsamer ein, als die Absenkungen in den Konzentrationen von HBV-Virion-DNA (Korba und Milman, 1991, Antiviral Res. 15, Seite 217).
Die Art und Weise, auf die die Hybridisierungsanalysen für diese Experimente durchgeführt wurden, führte dazu, dass etwa 1,0 pg intrazelluläre HBV- DNA 2-3 genomischen Kopien pro Zelle und 1,0 pg/ml extrazelluläre HBV-DNA 3 × 10⁵ viralen Teilchen/ml entsprachen.
Die Toxizitätsanalysen wurden durchgeführt, um zu bewerten, ob die festgestellten antiviralen Wirkungen auf einer allgemeinen Wirkung auf die Zellüberlebensfähigkeit beruhten. Das hier angewandte Verfahren bestand in der Messung der Aufnahme von Neutralrot-Farbstoff, ein standardmäßiger und breit angewandter Test für die Zellüberlebensfähigkeit bei einer Vielzahl von Virus-Wirt-Systemen, einschließlich HSV und HIV. Die Toxizitätsanalysen wurden in flachbödigen 96-Well-Gewebekulturplatten durchgeführt. Die Zellen für die Toxizitätsanalysen wurden kultiviert und mit Testverbindungen nach dem gleichen Prinzip, wie nachstehend für die antiviralen Bewertungen beschrieben, behandelt. Jede Verbindung wurde jeweils in dreifach ausgeführten Kulturen (Vertiefungen "A", "B" und "C") in 4 Konzentrationen getestet. Die Aufnahme von Neutralrot-Farbstoff wurde angewandt, um das relative Toxizitätsniveau zu bestimmen. Die Extinktion des verinnerlichten Farbstoffs bei 510 nm (A_sin) wurde zur quantitativen Analyse verwendet. Die Werte sind als Prozentsatz der gemittelten A_sin-Werte in 9 getrennten Kulturen von unbehandelten Zellen dargestellt, die wie die Testverbindungen auf der gleichen 96-Well-Platte gehalten wurden. Die Farbstoffaufnahme in den 9 Kontrollkulturen auf Platte 5 reichte von 91,6% bis 110,4% und auf Platte 6 von 96,6% bis 109%.
Beispiel 6 Anti-HIV-Aktivität von 2',3'-Didehydro-2',3'-dideoxypyrimidinnucleosiden
Tabelle 3 stellt die EC₅₀-Werte (Konzentration an Nucleosid, die die Replikation von HIV-1 und HIV-2 in PBM-Zellen um 50% hemmt, geschätzter Irrtumsfaktor 10%) und die IC₅₀-Werte (Konzentration an Nucleosid, das 50% des Wachstums von Mitogen-stimulierten nicht infizierten menschlichen PBM-Zellen, CEM-Zellen und Vero-Zellen hemmt) für β-L-2',3'-Didehydro- 2',3'-dideoxy-cytidin und β-2',3'-Didehydro-2',3'-dideoxy-5-fluor-cytidin bereit. Wie angegeben, zeigen beide Verbindungen eine nennenswerte Aktivität gegen HIV und sind relativ nicht toxisch.
Beispiel 7 Anti-HBV-Aktivität von 2',3'-Didehydro-2',3'-dideoxypyrimidinnucleosiden
Tabelle 4 stellt die Wirkung von DDC-Derivaten gegen das Hepatitis-B-Virus (HBV) in transfizierten HEPG-2(2.2.15)-Zellen am Tag 9 bereit.
III. Herstellung von pharmazeutischen Zubereitungen
Menschen, die an durch HIV- oder HBV-Infektion verursachten Krankheiten leiden, können durch Verabreichung einer wirksamen Menge von [5-Fluor]-2',3'-dideoxy-2',3'-didehydro-pyrimidin-nucleosid oder einem pharmazeutisch verträglichen Derivat oder Salz davon in Gegenwart eines pharmazeutisch verträglichen Trägers oder Verdünnungsmittels an den Patienten behandelt werden. Die aktiven Materialien können auf jedem geeigneten Weg, z.B. oral, parenteral, intravenös, intradermal, subkutan oder topisch, in flüssiger oder fester Form, verabreicht werden.
Die aktive Verbindung wird in den pharmazeutisch verträglichen Träger oder Verdünnungsmittel in einer Menge eingeschlossen, die ausreicht, um an einen Patienten eine therapeutisch wirksame Menge der Verbindung abzugeben, um die Virus-Replikation in vivo, insbesondere die HIV- und HBV-Replikation, zu hemmen, ohne bei dem behandelten Patienten gravierende toxische Wirkungen hervorzurufen. "Inhibitorische Menge" bedeutet eine Menge eines Wirkstoffs, die ausreicht, um eine inhibitorische Wirkung auszuüben, wie beispielsweise durch einen Test gemessen, wie diejenigen, die hier beschrieben sind.
Eine bevorzugte Dosis der Verbindung für alle oben erwähnten Bedingungen liegt im Bereich von etwa 1 bis etwa 50 mg/kg, vorzugsweise von 1 bis 20 mg/kg Körpergewicht pro Tag, allgemeiner von 0,1 bis etwa 100 mg/kg Körpergewicht des Empfängers pro Tag. Der wirksame Dosisbereich der pharmazeutisch verträglichen Derivate kann auf der Grundlage des Gewichts des zu verabreichenden Stamm-Nucleosids berechnet werden. Wenn das Derivat an sich Aktivität zeigt, kann die wirksame Dosis wie vorstehend unter Verwendung des Gewichts des Derivats oder durch andere, den Fachleuten bekannte Mittel abgeschätzt werden.
Zweckmäßigerweise wird die Verbindung in jeder zweckmäßigen Darreichungsform verabreicht, einschließlich einer, die 7 bis 3000 mg, vorzugsweise 70 bis 1400 mg Wirkstoff pro Dosierungseinheitsform enthält, jedoch nicht darauf beschränkt ist. In der Regel ist eine orale Dosierung von 50 bis 1000 mg zweckmäßig.
Idealerweise sollte der Wirkstoff verabreicht werden, um Plasma-Peak-Konzentrationen der aktiven Verbindung von etwa 0,2 bis 70 pM, vorzugsweise von etwa 1,0 bis 10 μM, zu erreichen. Dies kann beispielsweise durch die intravenöse Injektion von einer 0,1%igen bis 5%igen Lösung des Wirkstoffs, gegebenenfalls in Salzlösung oder durch Verabreichung des Wirkstoffs als Bolus erreicht werden.
Die Konzentration der wirksamen Verbindung in der Arzneimittelzusammensetzung hängt von der Absorptions-, Inaktivierungs- und Ausscheidungsgeschwindigkeit des Arzneimittels sowie von anderen Faktoren, die den Fachleuten bekannten sind, ab. Anzumerken ist, dass die Dosierungsgrößen ebenfalls mit der Schwere des zu lindernden Zustands variieren. Es ist ferner selbstverständlich, dass für jedes bestimmte Individuum spezielle Dosierungsvorgaben je nach individuellem Bedürfnis und fachlicher Bewertung der verabreichenden Person oder der die Verabreichung der Zubereitungen überwachenden Person zeitlich eingestellt werden sollten und dass die hier angegebenen Konzentrationsbereiche nur beispielhaft sind und nicht den Umfang oder die Praxis der beanspruchten Zubereitung einschränken sollen. Der Wirkstoff kann auf einmal verabreicht werden oder kann in eine Anzahl von kleineren Dosen, die in verschiedenen Zeitintervallen verabreicht werden, aufgeteilt sein.
Eine bevorzugte Verabreichungsweise der wirksamen Verbindung ist oral. Orale Zusammensetzungen umfassen im Allgemeinen ein inertes Verdünnungsmittel oder einen essbaren Träger. Sie können in Gelatinekapseln ein geschlossen oder zu Tabletten verdichtet sein. Für den Zweck der oralen therapeutischen Verabreichung kann die wirksame Verbindung in Exzipientien eingearbeitet sein und in Form von Tabletten, Lutschbonbons oder Kapseln verwendet werden. Pharmazeutisch kompatible Bindemittel und/oder Hilfsmaterialien können als Teil der Zubereitung eingeschlossen sein.
Die Tabletten, Pillen, Kapseln, Lutschbonbons und dergleichen können jeden der folgenden Bestandteile oder Verbindungen von ähnlicher Natur enthalten: ein Bindemittel, wie mikrokristalline Cellulose, Tragacanth oder Gelatine; ein Exzipiens, wie Stärke oder Lactose, eine Zerfallshilfe, wie Alginsäure, Primogel oder Maisstärke; ein Gleitmittel, wie Magnesiumstearat oder Stero- te; ein Gleitmittel, wie kolloidales Siliciumdioxid; ein Süßungsmittel, wie Saccharose oder Saccharin; oder einen Aromastoff, wie Pfefferminze, Methylsalicylat oder Orangenaroma. Wenn die Darreichungsform eine Kapsel ist, kann sie zusätzlich zu dem Material des obigen Typs einen flüssigen Träger, wie ein Fettsäureöl, enthalten. Zusätzlich können die Darreichungsformen verschiedene andere Materialien enthalten, die die physikalische Form der Darreichungsform modifiziert, beispielsweise Überzüge aus Zucker, Shellac oder anderen magensaftresistenten Mitteln.
Die Verbindung kann als Bestandteil eines Elixiers, einer Suspension, eines Sirups, einer Waffel oder eines Kaugummis oder dergleichen verabreicht werden. Ein Sirup kann zusätzlich zu den wirksamen Verbindungen Saccharose als Süßungsmittel und bestimmte Konservierungsstoffe, Farbstoffe, Farbmittel und Aromastoffe enthalten.
Die Verbindung oder ein pharmazeutisch verträgliches Derivat oder Salze davon können auch mit anderen wirksamen Materialien, die die gewünschte Wirkung nicht beeinträchtigen, oder mit Materialien, die die gewünschte Wirkung ergänzen, wie Antibiotika, Fungizide, Entzündungshemmer oder andere antivirale Mittel, einschließlich anderer Anti-HIV-Nucleosidverbindungen, ge mischt werden. Die Lösungen oder Suspensionen, die zur parenteralen, intradermalen, subkutanen oder topischen Anwendung verwendet werden, können die folgenden Bestandteile enthalten: ein steriles Verdünnungsmittel, wie Wasser zur Injektion, Salzlösung, nichtflüssige Öle, Polyethylenglycole, Glycerin, Propylenglycol oder andere synthetische Lösungsmittel; antibakterielle Mittel, wie Benzylalkohol oder Methylparabene; Antioxidantien, wie Ascorbinsäure oder Natriumbisulfit; Chelatbildner, wie Ethylendiamintetraessigsäure; Puffer, wie Acetate, Citrate oder Phosphate; und Mittel zum Einstellen der Tonizität, wie Natriumchlorid oder Dextrose. Die parenterale Präparation kann in Ampullen, Einmalspritzen oder in aus Glas oder Kunststoff hergestellten Mehrdosis-Röhrchen eingeschlossen sein.
Bei intravenöser Verabreichung sind physiologische Salzlösung oder phosphatgepufferte Salzlösung (PBS) bevorzugte Träger.
Bei einer bevorzugten Ausführungsform werden die wirksamen Verbindungen mit Trägern hergestellt, die die Verbindung gegen schnelles Ausscheidung aus dem Körper schützen, wie eine kontrolliert freisetzende Formulierung, einschließlich von Implantaten und mikroverkapselten Abgabesystemen. Es können biologisch abbaubare, biokompatible Polymere verwendet werden, wie Ethylenvinylacetat, Polyanhydride, Polyglycolsäure, Collagen, Polyorthoester und Polymilchsäure. Verfahren zur Herstellung solcher Formulierungen sind den Fachleuten bekannt. Die Materialien können auch von der Firma Alza Corporation im Handel bezogen werden.
Liposomen-Suspensionen (einschließlich von Liposomen, die auf infizierte Zellen ausgerichtet sind, mit monoklonalen Antikörpern gegen virale Antigene) sind ebenfalls als pharmazeutisch verträgliche Träger bevorzugt. Diese können nach den den Fachleuten bekannten Verfahren hergestellt werden, beispielsweise wie in der US-Patentschrift Nr. 4,522,811 (die hier durch Bezugnahme in ihrer Gesamtheit eingeschlossen ist) beschrieben ist. Bei spielsweise können Liposomen-Formulierungen durch Auflösen entsprechender Lipid(e) (wie Stearoylphosphatidylethanolamin, Stearoylphosphatidylcholin, Arachadoylphosphatidylcholin und Cholesterin) in einem anorganischen Lösungsmittel hergestellt werden, das dann verdampft wird, wobei ein dünner Film des getrockneten Lipids auf der Oberfläche des Behälters zurückbleibt. Anschließend wird eine wässrige Lösung der wirksamen Verbindung oder ihres Monophosphat-, Diphosphat- und/oder Triphosphatderivats in den Behälter eingebracht. Der Behälter wird sodann per Hand geschwenkt, um Lipidmaterial von den Seiten des Behälters freizusetzen und die Lipidaggregate zu dispergieren, wobei sich Liposomen-Suspension bildet.
Die Erfindung wurde unter Bezugnahme auf ihre bevorzugten Ausführungsformen beschrieben. Variationen und Modifikationen der Erfindung werden den Fachleuten aus der vorgenannten ausführlichen Beschreibung der Erfindung klar. Selbstverständlich sind alle diese Variationen und Modifikationen im Umfang der beigefügten Ansprüche eingeschlossen.

Claims

Zusammensetzung, die ein β-D-Nucleosid der Formel (I) umfasst:
wobei R H, C(O)(C₁-C₆-Alkyl), Monophosphat, Diphosphat oder Triphosphat ist, oder ein pharmazeutisch verträgliches Salz davon in Kombination mit einer zweiten Verbindung, die aus der Gruppe ausgewählt ist, die besteht aus dem (-)-Enantiomer von 2-Hydroxymethyl-5-(5-fluorocytosin-1-yl)-1,3-oxathiolan (FTC), 9-(4-(Hydroxymethyl)-2-cyclopenten-1-yl)-guanin (Carbovir), 9-((2-Hydroxyethoxy)methyl)-guanin (Acyclovir), Interferon, Diacetyl-6-deoxy-9-(4-hydroxy-3-hydroxymethyl-but-1-yl)-guanin (Famciclovir), 9-(4-Hydroxy-3-(hydroxymethyl)butyl)-guanin (Penciclovir), 3'-Deoxy-3'-azidothymidin (AZT), 2',3'-Dideoxyinosin (DDI), (-)-2'-Fluor-5-mehtyl-β-L-arabinofuranosyluridin (L-(-)-FMAU) und 2',3'-Didehydro-2'-Y-dideoxythymidin (D4T).
Zusammensetzung nach Anspruch 1, wobei die Kombination gegen HIV- oder HBV-Infektionen wirksam ist.
Zusammensetzung nach Anspruch 1, wobei R Wasserstoff ist.
Zusammensetzung nach Anspruch 1, wobei R Monophosphat ist.
Zusammensetzung nach Anspruch 1, wobei R aus der Gruppe ausgewählt ist, die aus Diphosphat und Triphosphat besteht.
Zusammensetzung nach Anspruch 1, wobei R Diphosphat ist.
Zusammensetzung nach Anspruch 1 oder 2 zur Verwendung als Medikament.
Zusammensetzung nach einem der vorhergehenden Ansprüche, die das Nucleosid in Kombination mit der zweiten Verbindung umfasst.
Zusammensetzung nach einem der vorherigen Ansprüche, die das Nucleosid und die zweite Verbindung als Kombinationspräparat zur gleichzeitigen oder sequenziellen Verwendung als Medikament umfasst.
Zusammensetzung nach einem der vorhergehenden Ansprüche, die das Nucleosid und die zweite Verbindung in einer Präparation zur sequenziellen Verwendung als Medikament umfasst.
Verwendung eines β-D-Nucleotids der Formel (I):
wobei R H, C(O)(C₁-C₆-Alkyl), Monophosphat, Diphosphat oder Triphosphat ist, oder ein pharmazeutisch verträgliches Salz davon gegebenenfalls in Kombination mit einem pharmazeutisch verträglichen Träger zur Herstellung eines Medikaments zur Behandlung der HIV-Infektion.
Verwendung nach Anspruch 11, wobei R Wasserstoff ist.
Verwendung nach Anspruch 10, wobei R C(O)(C₁-C₆-Alkyl) ist.
Verwendung nach Anspruch 11, wobei R Monophosphat ist.
Verwendung nach Anspruch 11, wobei R Diphosphat ist.
Verwendung nach Anspruch 11, wobei R Triphosphat ist.
Verwendung nach Anspruch 11, wobei das β-D-Nucleosid ein pharmazeutisch verträgliches Salz ist.
Verwendung nach Anspruch 11, wobei das β-D-Nucleosid in Kombination mit einem pharmazeutisch verträglichen Träger zur oralen Verabreichung vorliegt.
Verwendung nach Anspruch 18, wobei das β-D-Nucleosid in Kombination mit einem pharmazeutisch verträglichen Träger zur oralen Verabreichung in Form einer Tablette, Pille, Kapsel oder Lutschpastille vorliegt.
Verwendung nach Anspruch 19, wobei der Träger ein Bindemittel, ein Excipiens, eine Zerfallshilfe, ein Gleitmittel, ein Süßungsmittel oder ein Aromastoff umfasst.
Verwendung nach Anspruch 18, wobei das β-D-Nucleosid in Kombination mit einem pharmazeutisch verträglichen Träger zur oralen Verabreichung in Form eines Elixiers, einer Suspension, eines Sirups, eines Wafers oder eines Gummis vorliegt.
Verwendung nach Anspruch 11, wobei das β-D-Nucleosid in Kombination mit einem pharmazeutisch verträglichen Träger zur intravenösen Verabreichung vorliegt.
Verwendung eines β-D-Nucleosids der Formel (I):
wobei R H, C(O)(C1-C6-Alkyl), Monophosphat, Diphosphat oder Triphosphat ist, oder ein pharmazeutisch verträgliches Salz davon, und eine zweite Verbindung, die aus der Gruppe ausgewählt ist, bestehend aus dem (-)-Enantiomer von 2-Hydroxymethyl-5-(5-fluorcytosin-1-yl)-1,3-oxathiolan (FTC), 9-(4-(Hydroxymethyl)-2-cyclopenten-1-yl)-guanin (Carbovir), 9-((2-Hydroxyethoxy)methyl)-guanin (Acyclovir), Interferon, Diacetyl-6-deoxy-9-(4-hydroxy-3-hydroxymethyl-but-1-yl)-guanin (Famciclovir), 9-(4-Hydroxy-3-(hydroxymethyl)butyl)-guanin (Penciclovir), 3'-Deoxy-3'-azidothymidin (AZT), 2',3'-Dideoxyinosin (DDI), (-)-2'-Fluor-5-methyl-β-L-arabinofuranosyluridin (L-(-)-FMAU) und 2',3'-Didehydro-2'-Y-dideoxythymidin (D4T), gegebenenfalls in Kombination mit einem pharmazeutisch ver träglichen Träger, zur Herstellung eines Medikaments zur gleichzeitigen oder sequenziellen Verabreichung bei der Behandlung von HIV- oder HBV-Infektionen.
Zusammensetzung nach einem der Ansprüche 1 bis 10 oder Verwendung nach Anspruch 23, wobei die zweite Verbindung FTC ist.
Zusammensetzung nach einem der Ansprüche 1 bis 10 oder Verwendung nach Anspruch 23, wobei die zweite Verbindung Carbovir ist.
Zusammensetzung nach einem der Ansprüche 1 bis 10 oder Verwendung nach Anspruch 23, wobei die zweite Verbindung Acyclovir ist.
Zusammensetzung nach einem der Ansprüche 1 bis 10 oder Verwendung nach Anspruch 23, wobei die zweite Verbindung Interferon ist.
Zusammensetzung nach einem der Ansprüche 1 bis 10 oder Verwendung nach Anspruch 23, wobei die zweite Verbindung Famciclovir ist.
Zusammensetzung nach einem der Ansprüche 1 bis 10 oder Verwendung nach Anspruch 23, wobei die zweite Verbindung AZT ist.
Zusammensetzung nach einem der Ansprüche 1 bis 10 oder Verwendung nach Anspruch 23, wobei die zweite Verbindung DDI ist.
Zusammensetzung nach einem der Ansprüche 1 bis 10 oder Verwendung nach Anspruch 23, wobei die zweite Verbindung L-(-)-FMAU ist.
Zusammensetzung nach einem der Ansprüche 1 bis 10 oder Verwendung nach Anspruch 23, wobei die zweite Verbindung D4T ist.
Zusammensetzung zur Verwendung nach einem der vorhergehenden Ansprüche, wobei der pharmazeutisch verträgliche Träger zur oralen, parenteralen, intravenösen, intradermalen, subkutanen oder topischen Verabreichung geeignet ist.
Zusammensetzung oder Verwendung nach einem der vorhergehenden Ansprüche, wobei die Zusammensetzung oder das Medikament in Form einer Tablette vorliegt.