DE69919953T2 - Funktionelle zusammensetzungen - Google Patents
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Description
- Die vorliegende Erfindung betrifft eine Zusammensetzung, umfassend eine unbehandelte oder behandelte Kultur von Milchsäurebakterien, vermischt mit einer Hefe, und ein funktionelles Nahrungsmittel, umfassend die Zusammensetzung.
- Stand der Technik
- Fermentierte Nahrungsmittel, umfassend Milchsäurebakterien, sollten Erkrankungen von Erwachsenen verhindern und die Gesundheit unterstützen können. Solche Nahrungsmittel werden durch fermentierte Milch (Joghurt) beispielhaft dargestellt; zusätzlich durch Getränke mit Milchsäurebakterien und Sauermilch, die weit verbreitet verwendet werden.
- Viele Berichte wurden im Hinblick auf physiologische Aktivitäten von Milchsäurebakterien und fermentierten Nahrungsmitteln durchgeführt; daher wird angenommen, dass sie als gesunde Nahrungsmittel verwendbar sind.
- In den meisten Braunahrungsmitteln, einschließlich Sake, Bohnenpaste (Miso) und Sojasoße, war es bekannt, dass der einzigartige Geruch und Geschmack und Bestandteile durch symbiotische oder antagonistische Wirkungen zwischen unterschiedlichen Mikroorganismen, die in den Medien cokultiviert werden, erzeugt werden. Wenige Milchsäurebakterien oder fermentierte Nahrungsmittel daraus werden jedoch durch sogenannte Co-Kultivierung erzeugt, und physiologische Aktivitäten der Bakterien waren nicht bekannt.
- JP-A-9075066 offenbart Mischungen von Saccharomyces cerevisiae mit Lactobacillus casei, spp. casei und L. brevis, L. plantarum und L. alimentarius.
- Offenbarung der Erfindung
- Es ist eine Aufgabe der vorliegenden Erfindung, eine Zusammensetzung bereitzustellen, umfassend eine unbehandelte oder behandelte Kultur von Milchsäurebakterien, vermischt mit einer Hefe, und ein funktionelles Nahrungsmittel, umfassend die Zusammensetzung.
- Die gegenwärtigen Erfinder haben große Bemühungen unternommen, um das oben erwähnte Problem zu lösen und festgestellt, dass eine Kultur von Milchsäurebakterien, vermischt mit einer Hefe oder ein Behandlungsmaterial davon, verschiedene Funktionen ausübt. So wurde die vorliegende Erfindung vervollständigt.
- Dementsprechend stellt die vorliegende Erfindung eine Zusammensetzung bereit, umfassend eine unbehandelte oder behandelte Kultur von mindestens drei Milchsäurebakterien, ausgewählt aus der Gruppe, bestehend aus Lactobacillus delbrueckii, Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus plantarum, Lactobacillus fermentum, Lactobacillus casei, Lactobacillus rhamnosus, Lactococcus lactis und Streptococcus thermophilus, die mit Saccharomyces cerevisiae vermischt sind. Die in der vorliegenden Erfindung verwendeten gemischten Mikroorganismen beinhalten Lactobacillus delbrueckii, Lactobacillus casei, Lactococcus lactis und Saccharomyces cerevisiae; Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus rhamnosus, Lactococcus lactis und Saccharomyces cerevisiae; Lactobacillus plantarum, lactobacillus casei, Streptococcus thermophilus und Saccharomyces cerevisiae; sowie Lactobacillus fermentum, Lactobacillus rhamnosus, Streptococcus thermophilus und Saccharomyces cerevisiae.
- Weiterhin stellt die vorliegende Erfindung ein funktionelles Nahrungsmittel bereit, umfassend die Zusammensetzung.
- Die Beschreibung beinhaltet einen Teil oder den gesamten Inhalt, wie er in der Beschreibung und/oder den Zeichnungen der japanischen Patentanmeldung Nr. JP 98/24892 offenbart ist, wobei es sich um das Prioritätsdokument der vorliegenden Anmeldung handelt.
- Hiernach wird die vorliegende Erfindung im Detail beschrieben.
- Die Zusammensetzung der vorliegenden Erfindung umfasst eine Kultur, erhalten durch Kultivierung (Co-Kultivierung) eines gemischten Mikroorganismus, umfassend Milchsäurebakterien und Hefe, oder eines behandelten Materials davon.
- Milchsäurebakterien beinhalten diejenigen, die zu der Gattung Lactobacillus, Lactococcus oder Streptococcus gehören, wie z.B. Lactobacillus delbrueckii, Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus plantarum, Lactobacillus fermentum, Lactobacillus casei, Lactobacillus rhamnosus, Lactococcus lactis und Streptococcus thermophilus.
- Hefe beinhaltet Saccharomyces cerevisiae.
- Die verwendeten Mikroorganismen können allgemein kommerziell erhältlich sein; sie sind nicht auf bestimmte Stämme der Mikroorganismen begrenzt, unter der Voraussetzung, dass eine unbehandelte oder behandelte Co-Kultur dieser Mikroorganismen als funktionelles Nahrungsmittel verwendbar ist. Milchsäurebakterien, die z.B. zur Gattung Lactobacillus gehören, beinhalten Lactobacillus delbrueckii-Stamm ALAL007, Lactobacillus acidophilus-Stamm ALAL005, Lactobacillus plantarum-Stamm ALAL006, Lactobacillus fermentum-Stämme ALAL001 und JCM1173, Lactobacillus casei-Stämme ALAL002, ALAL003 und JCM1053, Lactobacillus rhamnosus-Stämme ALAL004, ALAL010 und JCM1136; Milchsäurebakterien, die zur Gattung Lactococcus gehören, beinhalten die Lactococcus lactis subsp. hordniae-Stämme ALAL008 und ALAL009; Milchsäurebakterien, die zur Gattung Streptococcus gehören, beinhalten Streptococcus thermophilus Stämme-ALRL011 und ALAL012; und Hefe beinhaltet z.B. die Saccharomyces cerevisiae-Stämme JCM1499, ALAY001, ALAY002, ALAY003 und ALAY004.
- Saccharomyces cerevisiae-Stamm ALAY001, Lactobacillus fermentum-Stamm ALAL001, Lactobacillus casei-Stamm ALAL003 und Lactobacillus rhamnosus-Stamm ALAL004 wurden von der A.L.A. Corporation von Nishisando Yanaki unter dem Budapester Vertrag am 28. November 1997 beim National Institute of Bioscience and Human-Technology, Agency of Industrial Science and Technology (1-3 Higashi 1-chome, Tsukuba-shi, Ibaraki, 305-0046, Japan) unter der Hinterlegungsnummer FERM BP-6626, 6627,6628 bzw. 6629 hinterlegt.
- Gemäß der vorliegenden Erfindung besteht der gemischte Mikroorganismus aus mindestens drei willkürlich gewählten Milchsäurebakterien und einer Hefe. Die Kombination der Mikroorganismen kann z.B. jede der Gruppen A bis D, wie dargestellt in Tabelle 1, sein.
- Tabelle 1
- Jede der Gruppen A bis D kann allein verwendet werden (vier Mikroorganismenstämme); oder zwei oder mehr Gruppen können kombiniert werden. Wenn Mikroorganismen derselben Art in zwei oder mehr Gruppen enthalten sind, die kombiniert und verwendet werden sollen (z.B. L. casei und S. cerevisiae überlappen, wenn die Gruppen A und C kombiniert werden), sollten unterschiedliche Stämme derselben Art verwendet werden.
- Die Zusammensetzung der vorliegenden Erfindung kann durch Kultivierung des gemischten Mikroorganismus erhalten werden, umfassend Milchsäurebakterien und Hefe in einem Medium, enthaltend ein Heißwasserextrakt der Sojabohne.
- Das Medium umfasst einen Heißwasserextrakt der Sojabohne. Nach einem Vermischen von 1 × 105 bis 1 × 106 von jedem der Milchsäurebakterien pro ml mit 1 × 104 bis 1 × 106 einer Hefe pro ml, wird der gemischte Mikroorganismus in das Medium inokuliert und bei 20 bis 37°C für 4 bis 10 Tage kultiviert.
- Wenn eine Vielzahl von Mikroorganismen von unterschiedlichen Gruppen kombiniert werden sollen, wird jede der Gruppen, die kombiniert werden soll, unter den oben beschriebenen Bedingungen kultiviert und dann mit jeder anderen, folgend auf die Kultivierung, unter den oben beschriebenen Bedingungen vermischt.
- Nach der Kultivierung wird die Kultur bei 80°C zur Sterilisierung gekocht und wiedergewonnen.
- Die Zusammensetzung der vorliegenden Erfindung kann durch Gefrier- oder Sprühtrocknen der Kultur erhalten werden. Alternativ kann die Kultur durch Filtration oder Zentrifugation behandelt werden oder auf andere Weise, um den Überstand von den Zellen zu trennen. In diesem Fall können der Überstand und die Zellen ebenfalls gefrier- oder sprühgetrocknet werden, um jeweils eine Zusammensetzung der vorliegenden Erfindung herzustellen.
- Die Zusammensetzung der vorliegenden Erfindung kann in jeder Form vorliegen und kann zu einer Flüssigkeit, einem Feststoff, einem Granulat oder ähnlichem verarbeitet werden. Die granuläre Form wird bevorzugt, da sie in geeigneter Weise verarbeitet werden kann.
- Wenn sie zu einer granulären Form verarbeitet wird, ist sie in einem Polysaccharid, wie z.B. Cyclodextrin, beinhaltet.
- Die Zusammensetzung der vorliegenden Erfindung, erhalten auf die oben beschriebene Weise, weist verschiedene Aktivitäten auf und kann daher als gesundes Nahrungsmittel mit einigen Funktionen verwendet werden (funktionelles Nahrungsmittel). Solche Aktivitäten beinhalten z.B. die Leber- und Nierenfunktion-verbessernde Aktivitäten, Antimutageneseaktivitäten, Tumorzellwachstum-inhibierende Aktivitäten und eine Aktivität, durch die die enterische Bakterienflora verbessert wird.
- Wenn sich die Zusammensetzung der vorliegenden Erfindung wie üblich in granulärer Form befindet, kann sie als funktionelles Nahrungsmittel verwendet werden, indem sie selbst in granulärer Form verzehrt wird oder durch Zugabe einer geeigneten Menge zu einem Nahrungsmittel.
- Nahrungsmittel beinhalten, sind jedoch nicht begrenzt auf, beispielsweise Süßigkeiten, wie z.B. Gelees und Bonbons, Getränke, wie z.B. Säfte, Tees und Ernährungsgetränke, und Reis.
- Menge und Rate der Zusammensetzung der vorliegenden Erfindung, die einem Nahrungsmittel zugefügt wird, kann in geeigneter Weise, abhängig von der Präferenz, eingestellt werden und beträgt in der Regel 0,1 bis 1 Gew.-% pro Nahrungsmittel.
- Kurze Beschreibung der Zeichnungen
-
1 zeigt die die Leberfunktion verbessernde Aktivität der Zusammensetzung gemäß der vorliegenden Erfindung. -
2 zeigt die die Nierenfunktion verbessernde Aktivität der Zusammensetzung gemäß der vorliegenden Erfindung. -
3 zeigt die die Nierenfunktion verbessernde Aktivität der Zusammensetzung gemäß der vorliegenden Erfindung. -
4 zeigt die die Nierenfunktion verbessernde Aktivität der Zusammensetzung gemäß der vorliegenden Erfindung. -
5 zeigt die die Leberfunktion verbessernde Aktivität der Zusammensetzung gemäß der vorliegenden Erfindung. -
6 zeigt die Veränderung des Körpergewichts von Testmäusen. -
7 zeigt die die Karzinogenese-inhibierende Aktivität der Zusammensetzung gemäß der vorliegenden Erfindung. -
8 zeigt die Antimutageneseaktivität der Zusammensetzung gemäß der vorliegenden Erfindung. - Beste Ausführungsform der Erfindung
- Die vorliegende Erfindung wird im Detail durch die folgenden Beispiele illustriert. Der Umfang der vorliegenden Erfindung ist jedoch nicht auf diese Beispiele begrenzt.
- Beispiel 1: Herstellung der Zusammensetzung
- Acht (8) Arten, 12 Stämme von Milchsäurebakterien und eine Art, 4 Stämme von. Hefe, wurden in vier Gruppen unterteilt (Gruppen A bis D), wie dargestellt in Tabelle 2.
- Tabelle 2
- Für jede Gruppe wurde eine Vorkultur, enthaltend vier jeweilige Stämme in einen Heißwasserextrakt von Sojabohne okuliert (jedes Milchsäurebakterium: 1 × 105 bis 1 × 106/ml; Hefe: 1 × 104 bis 1 × 105/ml) und bei 20 bis 37°C für 5 bis 10 Tage kultiviert.
- Jede Kultur wurde in ein frisches Medium eingemischt und weiter bei 20 bis 37°C für 2 bis 5 Tage kultiviert. Nach der Kultivierung wurde die Kultur für eine Sterilisation erwärmt und gefriergetrocknet, um 90 g eines getrockneten Produkts pro Liter zu gegeben. Andererseits wurde die Kultur filtriert und der Überstand wurde gefriergetrocknet, um 40 g eines Trockenprodukts pro Liter zu ergeben.
- Unter den so erhaltenen Zusammensetzungen wurden diejenigen, die aus der Kultur per se und diejenigen, die aus dem Überstand erhalten wurden, als RS-II bzw. RS-I bezeichnet.
- Beispiel 2: Test auf die Verbesserung der Aktivität der Leberfunktion (Wirkung auf eine mit Gallensäure beladene hepatopathische Ratte)
- Desoxycholinsäure, hiernach bezeichnet als DCA, ist eine repräsentative sekundäre Gallensäure, exkretiert von Cholinsäure durch enterische Bakterien. DCA ist hoch-toxisch, und es ist bekannt, dass sie eine cholestatische Hepatopathie bei Versuchstieren auslöst. Zusätzlich wird auch berichtet, dass DCA für eine akute Pankreatitis und Kolonkrebs verantwortlich sein kann.
- Die Menge und Zusammensetzung der Gallensäure im Blut und der Galle kann mit dem Essverhalten und dem physiologischen Zustand einer Person variieren; z.B. ist bekannt, dass die Menge von DCA in der Galle bei Diabetes-Patienten und Versuchsdiabetesmodelltieren signifikant erhöht ist. Die Wirkungen auf den lebenden Körper sind wichtig.
- Dementsprechend wurde zur Untersuchung der Wirkung der Zusammensetzung der vorliegenden Erfindung auf eine Hepatopathie DCA zur Induktion der Hepatopathie verwendet.
- (1) Verfahren
- Männliche Wistarratten mit einem Alter von 5 Wochen wurden von Charles River erworben und in einem gut klimatisierten Zuchtraum mit einer kontrollierten Raumtemperatur von 23 ± 1°C, einer Feuchtigkeit von 50 ±5 %, und einem fotoperiodischen Zyklus (12 Stunden Licht/12 Stunden Dunkelheit) für 1 Woche vorgezüchtet. In einem Alter von 6 Wochen wurden die Ratten in zwei Gruppen von jeweils sechs Ratten unterteilt, so dass die mittleren Körpergewichte in jeder Gruppe sowie deren Variation im wesentlichen zueinander identisch waren, wobei eine Gruppe eine Gruppe bildete, der die Zusammensetzung der vorliegenden Erfindung verabreicht wurde, und die andere eine Kontrollgruppe war. Die Verabreichungsgruppe wurde mit einem MF-pulverförmigen Nahrungsmittel (Oriental Yeast Co., Ltd.) gefüttert, das 0,5 % DCA und 5 % RS-I enthielt, während der Kontrollgruppe das MF-pulverförmige Nahrungsmittel, das nur 0,5 % DCA enthielt, verfüttert wurde. Diese Nahrungsmittel wurden frei von Ratten beider Gruppen zusammen mit Leitungswasser über 6 Wochen aufgenommen.
- 0, 2, 4 und 6 Wochen nach Beginn der Verabreichung wurde Blut aus der Schwanzvene entnommen, und das Serum wurde abgetrennt. Die Werte der Glutaminsäure-Oxaloessigsäuretransaminase (GOT), Glutaminsäure-Brenztraubensäuretransaminase (GPT), der Blutharnstoffstickstoff (BUN), Harnsäure (UA) und Cholesterin (CHL) wurden gemessen. Fünf Wochen nach der Verabreichung wurde ein Stoffwechselkäfig verwendet, um die Urinmenge und die Konzentration von Elektrolyten im Urin zu messen. Nach der Verabreichung wurde die Ratte geopfert und seziert. Die Gewichte der Organe wurden gemessen und das Serum wurde aus dem entnommenen Blut abgetrennt, um die biochemischen Serumeigenschaften zu analysieren.
- (2) Ergebnisse
- Nach Beladung mit DCA erhöhte sich die Serum-GOT-Aktivität der Ratten schnell. Bei der Kontrollgruppe stieg die Aktivität auf 1.366 ± 467 (Karmen) in 2 Wochen an und 5.122 ± 1.848 (Karmen), wie dargestellt in
1A . Demgegenüber betrug sie 406 ± 88 (Karmen) nach 2 Wochen bei der Gruppe, der RS-I verabreicht wurde; so wurde der Anstieg der GOT-Aktivität signifikant inhibiert (p<0,05). Selbst nach 4 Wochen betrug sie 1.636 ± 630 (Karmen), was anzeigte, dass der Anstieg der GOT-Aktivität dazu neigte, inhibiert zu werden (1A ). Es wurde auch beobachtet, dass andererseits der Anstieg der Serum-GPT-Aktivität wie bei der GOT-Aktivität inhibiert war (1B ). - Im Hinblick auf die BUN-Werte zeigte die Gruppe, der RS-I verabreicht wurde, signifikant (p<0,01) niedrigere Werte bei 4 und 6, Wochen im Vergleich mit der Kontrollgruppe (
2 ). Es wurde keine Wirkung einer RS-I-Verabreichung auf UA- und CHL-Werte beobachtet. - Die Gruppe, der RS-I verabreicht wurde, neigte dazu, größere Mengen an Urin nach 5 Wochen auszuscheiden (
3A ) und ebenfalls größere Anteile einer Exkretion zur Menge des aufgenommenen Wassers (3B ). - Es gab keinen Unterschied in der Konzentration von Elektrolyten im Urin zwischen der Gruppe, der RS-I verabreicht wurde, und der Kontrollgruppe; bei der Kontrollgruppe war die Urinmenge größer und daher war die Menge der ausgeschiedenen Elektrolyten größer (
4 ). - Gemäß der biochemischen Analyse der Seren nach Verabreichung von DCA wurde keine Veränderung aufgrund einer Verabreichung von RS-I bei den Werten von Gesamtprotein (TP), alkalischer Phosphatase (ALP), γ-Glutamyltranspeptidase (γ-GTP), Leucinaminopeptidase (LAP), Glucose (GLU), Gesamtcholesterin (T-CHL), Lipidperoxid (LPO), β-Lipoprotein (β-LP) und Bilirubin beobachtet. Die Konzentration der Gesamtgallensäure in den Seren betrug jedoch 81 ± 36 (nmol/ml) bei der Kontrollgruppe und 46 ± 34 (nmol/ml) bei der Gruppe, der RS-1 verabreicht wurde; so neigte die Gruppe, der RS-I verabreicht wurde, zu einer niedrigeren Konzentration von Gesamtgallensäure in den Seren im Vergleich mit der Kontrollgruppe.
- Die RS-I-Verabreichung zeigte eine Tendenz zur Inhibition des Anstiegs von Serum-GOT und GPT-Aktivitäten, ausgelöst durch die DCA-Beladung, und daher hat sich RS-I als nützlich für eine Verbesserung des Schadens im Hinblick auf die Leberfunktion erwiesen.
- Weiterhin erniedrigte die RS-I-Verabreichung die Serum-BUN-Werte und erhöhte die Menge des ausgeschiedenen Urins; dementsprechend zeigte sich RS-I als aktiv zur Verbesserung des Schadens der Nierenfunktion.
- Beispiel 3: Wirkung auf eine Galactosamin-hepatopathische Ratte
- Bei diesem Beispiel wurde die Wirkung einer RS-I-Verabreichung auf eine Hepatopathie untersucht, der ein anderer Mechanismus als bei dem DCA-induzierten Modell von Beispiel 1 zugrundelag.
- (1) Verfahren
- Männliche Wistarratten mit einem Alter von 5 Wochen wurden von Charles River erworben und in einem gut klimatisierten Zuchtraum mit einer kontrollierten Raumtemperatur von 23 ± 1°C, einer Feuchtigkeit von 50 ± 5 %, und einem fotoperiodischen Zyklus (12 Stunden Licht/12 Stunden Dunkelheit) für 1 Woche vorgezüchtet. Im Alter von 6 Wochen wurden die Ratten in zwei Gruppen von jeweils 6 Ratten unterteilt, so dass die mittleren Körpergewichte sowie deren Variation in jeder Gruppe im wesentlichen zueinander identisch waren, wobei eine Gruppe eine Gruppe bildete, der die Zusammensetzung der vorliegenden Erfindung verabreicht wurde, und die andere eine Kontrollgruppe war. Der Verabreichungsgruppe wurde ein MF-pulverförmiges Nahrungsmittel verabreicht, enthaltend 5 RS-I, während der Kontrollgruppe nur MF-pulverförmiges Nahrungsmittel verabreicht wurde. Diese Nahrungsmittel wurden von den Ratten von beiden Gruppen zusammen mit Leitungswasser für 3 Wochen frei aufgenommen.
- Drei Wochen nach der RS-I-Nahrungsmittelbelastung wurde ungefähr 1 ml einer wässrigen Lösung D-Galactosamin-Hydrochlorid intraperitoneal injiziert, wobei diese Lösung so hergestellt wurde, dass 500 mg D-Galactosamin-Hydrochlorid pro kg Körpergewicht der Ratte verabreicht wurde. 1, 2, 3 und 6 Tage nach der Galactosaminverabreichung wurde das Blut aus der Schwanzvene entnommen, und Serum-GOT, -CHL-, -GLU- und -BUN-Werte wurden gemessen.
- (2) Ergebnisse
- Nach Verabreichung von Galactosamin stieg Rattenserum GOT schnell. Nach 1 Tag hatte sich der Serum-GOT-Wert auf 5.148 ± 1.711 (Karmen) bei der Kontrollgruppe (
5 ) erhöht, während er bei 2.244 ± 1.241 (Karmen) bei der RS-I-Verabreichungsgruppe lag. So inhibierte die Verabreichung von RS-I den Anstieg der GOT-Aktivität aufgrund von Galactosamin signifikant (p<0,05) (5 ). Es wurden keinerlei Wirkungen der RS-I-Verabreichung auf die Serum-CHL-, -GLU- und -BUN-Werte beobachtet. - Beispiel 4: Wirkung auf DMH-Kolonkrebs-Mäuse
- Bei diesem Beispiel wurden mit Dimethylhydrazin (DMH)– induzierte Kolonkrebs-Mäuse verwendet, um die folgenden Experimente durchzuführen, in Bezug auf die Karzinogeneseinhibierende Wirkung der Zusammensetzung der vorliegenden Erfindung.
- (I) Verfahren
- CF#1-Mäuse, deren Zuchtlinie im Institut of Physical and Chemical Research erhalten wurde, wurden gepaart und 60 männliche Mäuse wurden gezüchtet. Die Mäuse dieser Zuchtlinie sind gegenüber DMH hochempfindlich, und Kolonpolypen sind spezifisch induziert. Die Züchtung wurde bei einer Temperatur von 23 ± 1°C, einer Feuchtigkeit von 50 ± 5 % und mit einem fotoperiodischen Zyklus (12 Stunden Licht/12 Stunden Dunkelheit) durchgeführt. Als Anzuchtnahrungsmittel wurde ein spezielles Zuchtnahrungsmittel (CMF), hergestellt von Oriental Yeast Co., Ltd., frei zusammen mit Leitungswasser verabreicht.
- Nach 5 Wochen wurden die Mäuse in drei Gruppen unterteilt (jede Gruppe mit 20 Mäusen), wie dargestellt in Tabelle 3, so dass die mittleren Körpergewichte und deren Variation identisch waren (
6 ). Wie in Tabelle 3 dargestellt, bestanden die drei Gruppen aus der Gruppe, der RS-II verabreicht wurde, der Gruppe, der RS-I verabreicht wurde, und der Kontrollgruppe; denen die jeweiligen dargestellten Mengen verabreicht wurden. Eine Lösung DMH wurde in die Mäuse mit 20 mg pro Körpergewicht einmal pro Woche über 10 Wochen intraperitoneal injiziert. Der Kontrollgruppe wurde nur CMF verabreicht. - Tabelle 3
- Diese drei Mäusegruppen wurden im Hinblick auf Kolonpolypen 35 Wochen nach der DMH-Verabreichung überwacht (in einem Alter von 40 Wochen).
- (2) Ergebnisse
- Die Inzidenz von Polypen betrug 94 % in der Kontrollgruppe, jedoch 65 % in der RS-II-Verabreichungsgruppe; so zeigte die Verabreichungsgruppe eine signifikant (p<0,05) niedrigere p Rate im Vergleich mit der Kontrollgruppe (
7A ). Die RS-I-Verabreichungsgruppe zeigt jedoch eine Polypeninzidenz von 94 %; so wurde kein Unterschied zur Kontrollgruppe beobachtet. - Die Polypenanzahl pro Maus betrug 4,0 ± 2,7 (Mittel ± Standardabweichung) bei der Kontrollgruppe und 1,4 ± 1,5 bei der RS-II-Verabreichungsgruppe, was signifikant (p<0,01) niedriger war als bei der Kontrollgruppe (
7B ). Die RS-I-Verabreichungsgruppe zeigte 2,7 ± 1,9, was ein signifikant (p<0,05) niedrigerer Wert war als bei der Kontrollgruppe (7B ). - Die Tumorgröße betrug 3,1 ± 1,8 mm bei der Kontrollgruppe und 2,5 ± 1,3 mm bei der RS-II-Verabreichungsgruppe; so zeigte die RS-II-Verabreichungsgruppe eine signifikant (p<0,05) kleinere Tumorgröße als die Kontrollgruppe (
7C ). - Aus den obigen Ergebnissen kann abgelesen werden, dass die Zusammensetzung der vorliegenden Erfindung eine Karzinogenese-inhibierende Wirkung aufweist.
- Beispiel 5: Antimutagenesetest von Substanzen, erzeugt von Milchsäurebakterien
- Es ist bekannt, dass die meisten der Substanzen mit einer Mutagenese eine Karzinogenizität aufweisen.
- Da die Ergebnisse von Beispiel 4 zeigten, dass die Zusammensetzung der vorliegenden Erfindung Kolonkrebs verhinderte, wurde auch vorgeschlagen, dass die Zusammensetzung der vorliegenden Erfindung ebenfalls inhibierende Wirkungen auf die Mutagenese aufweisen könnte.
- So wurden die Wirkungen der Zusammensetzung der vorliegenden Erfindung auf die folgenden Mutagenesesubstanzen untersucht.
- (1) Versuchsverfahren
- (i) Mutagenesesubstanzen
- Jede der Substanzen 4-Nitrochinolin-1-oxid (4NQO: 0,25 μg/Platte), N-Methyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidin (MNNG: 0,5 μg/Platte) und 3-Amino-1-methyl-5H-pyrido(4,3-b)indolacetat (Trp-P-2: 5 μg/Platte) wurde in DMSO gelöst.
- Trp-P-2 ist eine Substanz, die bei Verbrennen eines Proteins oder einer Aminosäure, wie z.B. verbranntem Fisch, erzeugt wird. MNNG ist eine Substanz, die zu Magenkrebs führt.
- (ii) Antimutagenesetest
- Der Antimutagenesetest wurde durch das Ames-Verfahren durchgeführt. Die verwendete Testzelle war ein Salmonella typhmurium-Stamm TA100 (his+). Der Stamm TA100 wurde über Nacht in Nährbrühe kultiviert und mit Na-K-Puffer gewaschen. Die Endkonzentration der Zellen in der Suspension wurde auf ungefähr 2 × 109 pro ml eingestellt.
- Das getrocknete RS-I-Produkt wurde in sterilisiertem Wasser bei jeder Konzentration gelöst. Zu einem Teströhrchen wurden sequenziell RS-I-Lösung, 100 μl einer Mutagenesesubstanz, 0,5 ml S9-Mischung oder Na-K-Puffer und 0,5 ml einer zu überprüfenden Zelllösung zugefügt. Nach einer Reaktion für 30 min bei 37°C wurde eine Zentrifugation bewirkt, und der Überstand wurde verworfen. Ein Weichagar, enthaltend Histidin (1 μM) und Biotin (1 μM) wurde zugefügt und in einem Minimalglucoseagarmedium ausgesät. Dies wurde bei 37°C kultiviert und die Zahl der Kolonien nach 2 oder 3 Tagen gezählt.
- (2) Ergebnisse
- Die Mutationsinhibition betrug 64 % für 4NQO bei einer RS-I-Konzentration von 0,06 mg/Platte, 86 % für MNNG bei einer RS-I-Konzentration von 0,25 mg/Platte und 72 % für Trp-P-2 bei einer RS-I-Konzentration von 0,5 mg/Platte (
8 ). DMH, Benzopyren (BP) und DCA wurden bis zu einer Konzentration von 20 μg/Platte, 20 μg/Platte bzw. 0,5 μg/Platte getestet, jedoch trat keine Mutagenese des Stamms TA100 durch diese Substanzen auf. Daher konnte keine inhibierende Rate von RS-I nachgewiesen werden. - Aus den obigen Ergebnissen lässt sich ableiten, dass die Zusammensetzung der vorliegenden Erfindung eine Antimutageneseaktivität gegen 4NQO, MNNG und Trp-P-2 aufweist.
- Beispiel 6: Eine die Flora der Verdauungsorgane verbessernde Aktivität
- Dieses Beispiel wurde durchgeführt, um die die Bakterienflora der Verdauungsorgane verbessernde Aktivität der Zusammensetzung gemäß der vorliegenden Erfindung zu überprüfen, die zu einer Verbesserung der Gesundheit des Menschen durch Verbesserung der menschlichen Intestinalbakterienflora, d.h. durch Erhöhung der Anzahl von günstigen Bakterien, einschließlich Bifidobacterium und Lactobacillus, unter Inhibition des Wachstums schädlicher Bakterien, wie z.B. Escherichia coli, führt.
- (1) Versuchsverfahren
- (i) Untersuchung der antibakteriellen Eigenschaften in flüssigen Medien
- Die verwendeten Medien waren ein Medium, enthaltend Brain-Heart Infusion (Difco) und ABCM-Medium (Eiken) für aerobe Bakterien und ein GAM-Medium (Nissue Seiyaku) oder ein mit Hemin-Menadion-versetztes GAM-Medium und ABCM-Medium für anaerobe Bakterien. Das Medium wurde in kleine Teströhrchen mit jeweils 2 ml verteilt, und das RS-I, gelöst in demselben Medium, wurde mit einer Konzentration von 1 % (G/V) zugefügt.
- Eine Zelllösung, enthaltend eine gegebene präkultivierte Zelle (Tabelle 4) wurde zu einer Endkonzentration von 1 × 105 pro ml verdünnt, dem obigen Medium zugefügt und bei 37°C für 18 bis 24 Stunden kultiviert. Eine Absorption bei 655 nm wurde unter Verwendung eines Microplate Reader (Bio-Rad, Modell 3550) gemessen, und die so gemessene Trübung wurde als relativer Wert zu dem der Kontrolle (100) ausgedrückt, und repräsentiert die Wachstumsrate.
- (2) Ergebnisse
- Wie sich aus den Ergebnissen der Tabelle 4 ableiten lässt, zeigte die Zusammensetzung der vorliegenden Erfindung eine das Wachstum unterstützende Aktivität auf günstige Bakterien, wie Bifidobacterium und Lactobacillus bei einer Konzentration von 1 % (Tabelle 4, oberer Teil). Andererseits wurde die Aktivität einer Inhibition des Wachstums schädlicher Bakterien, wie z.B. Escherichia coli und Bacteroides, beobachtet (Tabelle 4, unterer Teil).
- Tabelle 4
- Alle Veröffentlichungen, Patente und Patentanmeldungen, die hier zitiert wurden, sind in ihrer Gesamtheit durch Inbezugnahme eingeschlossen.
- Gewerbliche Anwendbarkeit
- Gemäß der vorliegenden Erfindung werden eine Zusammensetzung oder eine unbehandelte oder behandelte Kultur von Milchsäurebakterien, vermischt mit einer Hefe, und ein funktionelles Nahrungsmittel, umfassend die Zusammensetzung, bereitgestellt. So kann angenommen werden, dass die Zusammensetzung der vorliegenden Erfindung das Wachstum günstiger Bakterien, wie z.B. Bifidobacterium und Lactobacillus, im menschlichen Verdauungstrakt unterstützt und das Wachstum schädlicher Bakterien, z.B. Escherichia coli, inhibiert und dementsprechend zur Unterstützung der menschlichen Gesundheit beitragen kann.
Claims (7)
- Zusammensetzung, umfassend eine unbehandelte oder behandelte Kultur eines gemischten Mikroorganismus, umfassend: (i) mindestens drei Milchsäurebakterien von Lactobacillus delbrueckii, Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus plantarum, Lactobacillus fermentum, Lactobacillus casei, Lactobacillus rhamnosus, Lactococcus lactis oder Streptococcus thermophilus; und (ii) Saccharomyces cerevisiae.
- Zusammensetzung gemäß Anspruch 1, worin (i) ein oder mehr ist von: (a) Lactobacillus delbrueckii, Lactobacillus casei und Lactococcus lactis; (b) Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus rhamnosus und Lactococcus lactis; (c) Lactobacillus plantarum, Lactobacillus casei und Streptococcus thermophilus; oder (d) Lactobacillus fermentum, Lactobacillus rhamnosus und Streptococcus thermophilus.
- Zusammensetzung gemäß Anspruch 1 oder 2 in Form einer Flüssigkeit, eines Feststoffs oder eines Granulats.
- Funktionelles Nahrungsmittel, umfassend eine Zusammensetzung gemäß einem der vorstehenden Ansprüche.
- Funktionelles Nahrungsmittel gemäß Anspruch 4, umfassend 0,1 bis 1 Gew.-% der Zusammensetzung.
- Zusammensetzung gemäß einem der Ansprüche 1 bis 3 oder ein funktionelles Nahrungsmittel gemäß Anspruch 4 oder 5 zur Verwendung bei einem Verfahren zur Verbesserung der Leber- und Nierenfunktion, Reduktion der Mutagenese-Aktivität, Inhibition des Tumorzellwachstums oder Verbesserung des Wachstums der enterischen Bakterienflora.
- Verfahren zur Erzeugung einer Zusammensetzung gemäß einem der Ansprüche 1 bis 3, umfassend: (i) Kultivieren des gemischten Mikroorganismus, umfassend Milchsäurebakterien und Hefe in einem Medium, umfassend einen Heißwasserextrakt von Sojabohnen; (ii) Kochen bei 80°C oder Filtern der resultierenden Kultur und (iii) Gefrier- oder Sprühtrocknen der gekochten Kultur oder des Oberstands von der filtrierten Kultur.
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