JP2003252770A

JP2003252770A - 糖尿病合併症予防・改善・治療剤

Info

Publication number: JP2003252770A
Application number: JP2002054729A
Authority: JP
Inventors: Hiroshi Tanaka; 博田中; Yasuyuki Seto; 泰幸瀬戸; Shiyuki Tejima; 珠紀手島; Shigeru Fujiwara; 茂藤原
Original assignee: Snow Brand Milk Products Co Ltd
Current assignee: Snow Brand Milk Products Co Ltd
Priority date: 2002-02-28
Filing date: 2002-02-28
Publication date: 2003-09-10
Anticipated expiration: 2022-02-28
Also published as: JP4280016B2

Abstract

(57)【要約】【課題】糖尿病に伴って発生する合併症の予防・
改善・治療剤及び／または糖尿病に伴って発生する合併
症の予防・改善・治療作用を有する飲食品を提供するこ
とを課題とする。【解決手段】ラクトバチルス・ガセリ（Lactobacillu
s gasseri）及びビフィドバクテリウム・ロンガム（Bif
idobacteriumu longum）に属する乳酸菌を培養して得ら
れる菌体及びその培養物を有効成分とする培養物及び／
または菌体を有効成分とする糖尿病に伴って発生する合
併症の予防・改善・治療剤、さらにこのような有効成分
を含有してなる糖尿病に伴って発生する合併症の予防・
改善・治療作用を有する飲食品を調製する。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、糖尿病に伴って発
生する合併症の予防・改善・治療剤及び／または糖尿病
に伴って発生する合併症の予防・改善・治療作用を有す
る飲食品に関する。

【０００２】

【従来の技術】近年、欧米化された食生活の定着に伴
い、日本人の糖尿病発症率は増加の一途をたどってい
る。加えて、日本における糖尿病のうち、インシュリン
非依存性糖尿病（NIDDM）の割合は著しく高く（90%以
上）、また難治性で、疾病が長期化し、治療が著しく困
難な疾患である。このNIDDMに対しては、根本的な治療
法が確立されておらず、カロリー制限を主体とした栄養
療法（食餌療法）ならびにカロリー消費を目的とした運
動療法を主体とし、血糖の直接的なコントロールのた
め、適宜、薬物療法（経口血糖降下剤：グリクロピラミ
ド、トリブタミド、グリクラジドなどのスルフォニル尿
素剤及びビグアナイド剤）が組み合わされて処方されて
いる。

【０００３】NIDDMの治療方法として食餌療法が行われ
るが、主たる目的はカロリー制限である。また、これに
運動療法も加え、肥満抑制によるインスリン抵抗性の改
善がNIDDM治療のための２本柱である。これらは、継続
的な実行がともなって初めて有効となるが、これを意思
の力によって継続することは非常に難しいことでもあ
る。また乳酸菌が血糖値を降下させることが知られてお
り、乳酸菌の菌体を有効成分とする血糖降下剤が提案さ
れている（特開平10-7577号公報）。この発明によると
乳酸菌の中で、エンテロコッカス・フェカリス、エンテ
ロコッカス・フェシウム、ストレプトコッカス・サーモ
フィラス、ラクトコッカス・ラクチス、ラクトコッカス
・クレモリス等の乳酸球菌、及びラクトバチルス・デル
ブルッキ・ラクチス、ラクトバチルス・デルブルッキ・
ブルガリス、ラクトバチルス・ヘルベチクス、ラクトバ
チルス・アシドフィルス、ラクトバチルス・サリバリウ
ス、ラクトバチルス・カゼイ、ラクトバチルス・ファー
メンタム等の乳酸桿菌を体重１キログラム当たり10〜50
0ｍｇと大量に投与することによって、血糖値を降下さ
せている。しかし、このような大量投与は成人一人当た
りでは30ｇ以上にも達し現実的ではない。

【０００４】また、特開平６-116156号公報には、乳酸
菌体から血糖を降下させる画分を抽出する方法が開示さ
れている。さらにまた、特開平８-59492号公報には、菌
体の細胞壁成分から多糖類−グリカン複合体を抽出し、
これを血糖降下剤として用いることが開示されている。
このように乳酸菌を用いた糖尿病治療剤が種々提案され
ているが、必ずしも満足できるものではなかった。これ
らの乳酸菌を用いた研究では、いずれもヒト腸管内に定
着性を有する菌株ではなく、効果も一時的なものに過ぎ
なかったため、実際の糖尿病治療に用いることはできな
かった。

【０００５】

【発明が解決しようとする課題】本発明者らは、ヒト腸
管内に定着性を有する乳酸菌の研究を行っていたとこ
ろ、腸管内定着性を有する乳酸菌、特にラクトバチルス
・ガセリ（Lactobacillusgasseri)に属する乳酸菌を培
養して得られる培養物及び／または菌体と、ビフィドバ
クテリウム・ロンガム（Bifidobacterium longum）に属
する乳酸菌を培養して得られる培養物及び／または菌体
を投与すると、これらの微生物は腸管内に定着すること
によって宿主に作用し、インシュリン非依存性糖尿病に
しばしば発生するインシュリン抵抗性の発生を予防、改
善し、さらには糖尿病性腎症を改善することを見出し、
本発明を完成するに至った。従って本発明は、ラクトバ
チルス・ガセリ（Lactobacillus gasseri)に属する乳酸
菌を培養して得られる培養物及び／または菌体とビフィ
ドバクテリウム・ロンガム（Bifidobacterium longu
m）に属する乳酸菌を培養して得られる培養物及び／ま
たは菌体を有効成分とする糖尿病合併症予防・改善・治
療剤を提供することを課題とする。また本発明は、ラク
トバチルス・ガセリ（Lactobacillus gasseri)に属する
乳酸菌を培養して得られる培養物及び／または菌体とビ
フィドバクテリウム・ロンガム（Bifidobacterium lon
gum）に属する乳酸菌を培養して得られる培養物及び／
または菌体を含有する糖尿病合併症予防・改善・治療剤
飲食品を提供することを課題とする。

【０００６】本発明者らは、従来から種々の発酵乳の研
究を行っていたところ、これらの発酵乳から分離された
乳酸菌やヒト由来の乳酸菌の中で特にラクトバチルス・
ガセリ（Lactobacillus gasseri)、ビフィドバクテリウ
ム・ロンガム（Bifidobacterium longum）が従来に見ら
れない高いヒト腸管内定着性を有していることを見出
し、さらにこのラクトバチルス・ガセリ（Lactobacillu
s gasseri)とビフィドバクテリウム・ロンガム（Bifido
bacterium longum）が、従来知られていなかった腸管定
着性によってNIDDMによるインシュリン抵抗性を改善
し、さらに糖尿病性腎症を改善することを見出し、上記
課題の解決に成功した。

【０００７】

【発明を解決するための手段】すなわち本発明は、ラク
トバチルス・ガセリ（Lactobacillus gasseri)及びビフ
ィドバクテリウム・ロンガム（Bifidobacterium ｌongu
m）に属する乳酸菌を培養して得られる菌体、その培養
物を有効成分とする糖尿病合併症の予防・改善・治療剤
に関する。さらに、本発明は、このような有効成分を含
有してなる糖尿病合併症の予防・改善・治療作用のある
飲食品に関する。本発明は、特許請求範囲に記載した下
記の構成からなる発明である。

【０００８】（１）ラクトバチルス・ガセリ（Lactobac
illus gasseri)に属する乳酸菌を培養して得られる培養
物及び／または菌体とビフィドバクテリウム・ロンガム
（Bifidobacterium longum）に属する乳酸菌を培養して
得られる培養物及び／または菌体を有効成分とする糖尿
病合併症予防・改善・治療剤。（２）ラクトバチルス・ガセリ（Lactobacillus gasser
i)に属する乳酸菌が、ヒト腸管内定着性を有するラクト
バチルス・ガセリ（Lactobacillus gasseri)であり、ビ
フィドバクテリウム・ロンガム（Bifidobacterium long
um）に属する乳酸菌がヒト腸管内定着性を有するビフィ
ドバクテリウム・ロンガム（Bifidobacterium longum）
である（１）記載の糖尿病合併症予防・改善・治療剤。（３）糖尿病合併症が糖尿病性腎症である（１）又は
（２）記載の糖尿病合併症予防・改善・治療剤。（４）ラクトバチルス・ガセリ（Lactobacillus gasser
i)に属する乳酸菌とビフィドバクテリウム・ロンガム
（Bifidobacterium longum）に属する乳酸菌を培養して
得られる培養物が醗酵乳である、（１）〜（３）のいず
れかに記載の糖尿病合併症予防・改善・治療剤。（５）ラクトバチルス・ガセリ（Lactobacillus gasser
i)に属する乳酸菌がラクトバチルス・ガセリ（Lactobac
illus gasseri)・SBT2055（以下LG2055という）（FERM
P-15535）、ビフィドバクテリウム・ロンガム（Bifidob
acterium longum）に属する乳酸菌がビフィドバクテリ
ウム・ロンガム（Bifidobacterium longum）・SBT2928
（以下BL2928という）（FERM P-10657）である（１）〜
（４）のいずれかに記載の糖尿病合併症予防・改善・治
療剤。（６）ラクトバチルス・ガセリ（Lactobacillus gasser
i)に属する乳酸菌を培養して得られる培養物及び／また
は菌体とビフィドバクテリウム・ロンガム（Bifidobact
erium longum）に属する乳酸菌を培養して得られる培養
物及び／または菌体を添加した糖尿病合併症予防・改善
・治療作用を有する飲食品。

【０００９】

【発明の実施の形態】本発明は、上述の課題を解決する
ためになされたものであって、本発明者らは、目的とす
る乳酸菌をスクリーニングするに際し、次のような基準
を新たに設定し目的に合致する株を選定した。すなわ
ち、本発明者らは、醗酵乳やヒト由来の数多くのラクト
バチルス・ガセリ、ビフィドバクテリウム・ロンガムの
うち、胃酸耐性が高い、低ｐＨ条件下での生育が良好で
ある、ヒト腸管へ高い定着性を示す、ヒト腸管細胞親和
性を示す、胆汁酸耐性がある、腸管内に定着することに
よってNIDDMによって発生するインシュリン抵抗性を改
善する効果を有する、食品に適用した際に生残性が高
く、香味、物性も優れている等々の条件を設定し、菌株
の選定につき鋭意研究を重ねた。本条件によってスクリ
ーニングした結果、これらの条件に合致する菌株として
以下の２菌株を選択することができた。なお、これらの
菌株は、下記の寄託番号により独立行政法人産業技術総
合研究所特許微生物寄託センターに寄託されている。

【００１０】菌株ラクトハ゛チルス・カ゛セリ (Lactobacillus gasseri)SBT2055 FERM P
-15535ヒ゛フィト゛ハ゛クテリウム・ロンカ゛ム (Bifidobacterium longum)SBT2928
FERM P-10657 これらの菌株は、ヒト腸管細胞に高い親和性を有し、経
口で投与した時、生存して腸管内に到達することができ
長期間腸管内に常在することが可能であり、腸管内生育
することで宿主に作用し糖尿病に伴って発生するインシ
ュリン抵抗性を改善し糖尿病性腎症を改善する。体外か
ら投与したラクトバチルス・ガセリ(Lactobacillus gas
seri)に属する乳酸菌とビフィドバクテリウム・ロンガ
ム(Bifidobacterium longum)に属する乳酸菌が腸内に定
着し、このような生理効果を示すことは全く知られてお
らず、本発明者らによって初めて明らかにされた。

【００１１】さらに本発明では、上記寄託菌に限らずヒ
トや醗酵乳から分離されるラクトバチルス・ガセリ（La
ctobacillus gasseri)とビフィドバクテリウム・ロンガ
ム（Bifidobacterium longum）であって、上記の作用を
示すものであれば、いずれのものでも使用できる。

【００１２】次にこれらの乳酸菌の培養方法を記す。本
発明のラクトバチルス・ガセリ（Lactobacillus gasser
i)とビフィドバクテリウム・ロンガム(Bifidobacterium
longum)の培地には、乳培地又は乳成分を含む培地、こ
れを含まない半合成培地等種々の培地を用いることがで
きる。このような培地としては、脱脂乳を還元して加熱
殺菌した還元脱脂乳培地を例示することができる。培養
法は、静置培養又はｐＨを一定にコントロールした中和
培養で行うが、菌が良好に生育する条件であれば特に培
養法に制限はない。本発明は上述のようにして得られる
培養物及び／または菌体を有効成分とする。また乾燥し
た粉末を有効成分としてもよい。これらの乾燥は凍結乾
燥で行なうことが菌体を変質させることなく乾燥するこ
とができるので好ましい。

【００１３】これらの有効成分は経口摂取することが望
ましい。また、これらの粉末は乳糖等の適当な賦形剤と
混合し粉剤、錠剤、丸剤、カプセル剤または粒剤等とし
て経口投与することができる。投与量は、投与対象者の
症状、年齢等を考慮してそれぞれ個別に適宜決定される
が、通常成人１日当たり、乾燥物として0.5〜10ｇであ
り、これを１日数回に分けて投与するとよい。特に好ま
しくは、それぞれの株が生菌として成人一人当たり、10
⁸〜10¹²cfu／日投与することで本発明の目的とする効果
を発揮させることが可能となる。このようにして摂取す
ることによって腸管内に定着し所望の効果を発揮する。

【００１４】また、本発明の有効成分は、飲食品の製造
工程中に原料に添加してもよい。飲食品としてはどのよ
うな飲食品でもよく、その例として、乳飲料、発酵乳、
果汁飲料、ゼリー、キャンディー、乳製品、マヨネーズ
等の卵加工品、バターケーキ等の菓子パン類等の食品を
あげることができる。但し、本発明の特性として乳酸菌
が生存した状態で腸管に定着することが必要であり、過
度の加熱は避けなければならない。また、マイクロカプ
セル等の従来技術を採用して、加熱を避ける手段を講じ
ることも必要であろう。さらにまた、本発明における飲
食品は、前述したラクトバチルス・ガセリ（Lactobacil
lus gasseri)とビフィドバクテリウム・ロンガム(Bifid
obacterium longum)の菌株を使用して乳酸発酵を行なっ
て製造されたヨーグル等であっても良い。

【００１５】以下に本発明に用いる乳酸菌株としてLG20
55(FERM P-15535)とBL2928(FERM P-10657)を用いた試験
例を示し、分類学的性状及びインビトロ、インビボによ
る効果を具体的に説明する。しかし、本発明はこの記載
内容に限定されるものではない。 BL2928株の同定１．分類学的性状（１）菌形 BL血液寒天平板培地を用いて37℃、48時間
嫌気培養後の結果を示す。形状：桿菌大きさ：0.5-1×3-4μm 連鎖したもの多数（２）グラム染色性陽性（３）コロニー形態形状：円形周縁：滑状大きさ：直径2-3mm 色調：茶色表面：円滑（４）芽胞形成陰性（５）ガス産生なし（６）運動性なし（７）カタラーゼ活性陰性（８）脱脂乳凝固性凝固（９）ゼラチン液化性なし（１０）硝酸塩還元性なし（１１）インドール産性なし（１２）硫化水素産性なし

【００１６】２．糖の発酵性市販の細菌同定用キット（アピ50CH、ビオメリュー社）
にて糖の発酵性を検討した結果を以下に記載する。Ｌ−アラビノース＋Ｌ−リボース＋ソルビトール − セロビオース − ラクトース＋メレジトース＋ラフィノース＋スターチ − グルコネート − （＋は発酵性有りを示し、−は発酵性なしを示す。）

【００１７】上記の分類学的性状と糖の発酵性は、典型
的なビフィドバクテリウム・ロンガム（Bifidobacteriu
m longum）の性状を示した。

【００１８】次いで、以下の通りDNA相同性試験による
確認試験を実施した。 DNA相同性試験以下に記載したビフィドバクテリウムの基準株、被験菌
BL2928株、そしてコントロールとして、大腸菌（Esche
richia. coli）のDNAを抽出、精製した。被験菌： BL2928株基準株：ビフィドバクテリウム・ロンガム JCM1217株ビフィドバクテリウム・インファンティス JCM1222株ビフィドバクテリウム・ビフィダム JCM1255株ビフィドバクテリウム・ブレベ JCM1192株ビフィドバクテリウム・アドレッセンティス JCM1275株ビフィドバクテリウム・アニマリス JCM1190株大腸菌（Escherichia. coli） BL2928株のDNA同士の相同性を100％、BL2928株と大腸菌
とのDNA相同性を０％としたときの、BL2928株と各基準
株のDNA相同性をDNAハイブリダイゼーション法により検
討した。その結果、BL2928株はビフィドバクテリウム・
ロンガム基準株と90％以上の相同性を有していたため、
BL2928株はビフィドバクテリウム・ロンガムと同定し
た。

【００１９】LG2055株の同定１．分類学的性状（１）菌形 LBS寒天平板培地を用いて37℃、48時間嫌
気培養後の結果を示す。形状：桿菌大きさ：0.5-1×3-4μｍ連鎖したもの多数（２）グラム染色性陽性（３）コロニー形態形状：円形周縁：波状大きさ：直径2-3mm 色調：白色表面：円滑（４）芽胞形成陰性（５）ガス産生なし（６）運動性なし（７）カタラーゼ活性陰性（８）脱脂乳凝固性凝固（９）ゼラチン液化性なし（１０）硝酸塩還元性なし（１１）インドール産性なし（１２）硫化水素産性なし

【００２０】２．糖の発酵性市販の細菌同定用キット（アピ50CH、ビオメリュー社）
にて糖の発酵性を検討した結果を以下に記載する。グリセロール − エリスリトール − Ｄ−アラビノース − Ｌ−アラビノース＋リボース − D−キシロース − L−キシロース − アド二トール − β−メチル−Ｄ−キシロシド − ガラクト-ス＋Ｄ−グルコース＋Ｌ-フルクト-ス＋Ｄ−マンノース＋Ｌ−ソルボース − ラムノース − ダルシトール − イノシトール − マンニトール − ソルビトール − α−メチル−Ｄ−マンノシド − α−メチル−Ｄ−グルコシド − Ｎ−アセチル−グルコサミン＋アミグダリン＋アルブチン＋エスクリン＋サリシン＋セロビオース＋マルトース＋ラクト-ス＋メリビオース − サッカロース＋トレハロース＋イヌリン − メレジトース − Ｄ−ラフィノース − アミドン − グリコーゲン − キシリトール − β−ゲンチオビオース＋Ｄ−ツラノース − Ｄ−リキソース − Ｄ−タガトース＋Ｄ−アラビトール − Ｌ−アラビトール − グルコネート − ２−ケトーグルコネート − ５−ケトーグルコネート − （＋は発酵性有りを示し、−は発酵性なしを示す。）上記の分類学的性状は、典型的なラクトバチルス・アシ
ドフィルス複合菌種（Lactobacillus acidophilus comp
lex）の性状を示した。

【００２１】次いで、以下の通りDNA相同性試験による
確認試験を実施した。 DNA相同性試験以下に記載したラクトバチルスの基準株、被験菌LG2055
株、そしてコントロールとして、大腸菌（Escherichi
a. coli）のDNAを抽出、精製した。被験菌： LG2055株基準株：ラクトバチルス・アシドフィルス JCM1132株ラクトバチルス・クリスパタス JCM1185株ラクトバチルス・ガリナラム JCM2011株ラクトバチルス・アミロボラス JCM1126株ラクトバチルス・ガセリ JCM1131株ラクトバチルス・ジョンソニー JCM2012株大腸菌（Escherichia. coli） LG2055株のDNA同士の相同性を100％、LG2055株と大腸菌
とのDNA相同性を０％としたときの、LG2055株と各基準
株のDNA相同性をDNAハイブリダイゼーション法により検
討した。その結果、LG2055株はラクトバチルス・ガセリ
JCM1131株と90％以上の相同性を有していたため、LG205
5株はラクトバチルス・ガセリと同定された。

【００２２】胃酸耐性胃酸耐性試験は瀧口らの方法（腸内細菌学雑誌 14.11-1
8．2000）に従ってｐＨ2.0人工胃液を調製し胃酸耐性試
験を行ったところ、LG2055株、BL2928株は３時間以上生
残した。

【００２３】人工腸液耐性瀧口らの方法（腸内細菌学雑誌 14.11-18．2000）に従
って胆汁末を含む人工腸液を調製しこれに前記の人工胃
液処理を行ったLG2055株、BL2928株を加えて耐性を試験
したところ、20時間以上の生存性を示した。LG2055株、
BL2928株は、消化管を通過し大腸まで生存して到達する
ことが確認された。

【００２４】ヒトの腸管通過能と腸内定着性無脂乳固形9.5％、乳脂肪3.0％の乳LG2055株又はBL2928
株のスターターを４％接種し39度で４時間発酵させた発
酵乳を健康な成人ボランティア42名に４週間、毎日100
ｇを1日1回食させて腸内菌の変化を観察した。試験期間
中は腸内菌に影響のある食品やオリゴ糖、薬品の摂取を
禁ずる以外は自由に食事をさせて評価を行った。試験前
は検出されなかったLG2055株、BL2928株がすべての被験
者から４週間後には検出され、両株が高い腸管内定着性
を有することがわかった。

【００２５】インシュリン非依存性糖尿病動物モデルに
対する試験１．乳酸菌脱脂乳培養物の調製 LG2055株及びBL2928株を用いた。乳酸菌は、115℃、20
分間の滅菌処理をした0.5％酵母エキス（アサヒビール
社製）を添加した11.55％脱脂乳培地にて、37℃、16時
間の培養を３代以上行って賦活させた。これを同培地に
３％接種し、37℃で16時間培養した。得られた培養物
は、凍結乾燥後、乳鉢で粉砕した。

【００２６】２．モデル動物と試験群糖尿病モデルである４週齢のKK-Aｙ系雄マウス（日本ク
レア）50匹を４群に振り分け、うち２群には培養基であ
る脱脂乳及び凍結乾燥発酵乳を20％添加した精製飼料AI
N93M（オリエンタル酵母社製）（コントロール群13匹、
試験群11群）を与え、他の２群には、同様に粗精製飼料
MF（オリエンタル酵母社製）をベースとして脱脂乳及び
凍結乾燥発酵乳を20％添加した飼料を与え、各々５ヶ月
齢に至るまで飼育した。

【００２７】３．試験方法実験期間中、体重ならびに平常時血糖値を経時的に測定
した。実験終了２週間前において、１日あたりの飼料摂
取量、糞排泄量、飲水量、尿排泄量、さらに尿ｐＨ、尿
蛋白、尿クレアチニン含量を測定し、解剖時には、絶食
時血糖値、血漿レプチン濃度、血漿インスリン濃度、後
腹壁脂肪重量、血球分析値等を分析し、糖尿病の症状な
らびにインスリン抵抗性指標に与えるBL2928株・LG2055
株調製発酵乳の影響について調べた。なお、測定方法に
ついては以下に示す。・平常時血糖値の測定：約４時間断食させた後、尾静脈
から抗凝固（ヘパリン）処理したキャタピラー管を用い
て採血し、遠心分離より血漿を得た。生化学自動分析装
置富士ドライケムFDC5500（富士フィルムメディカル社
製）を用いて測定した。・飼料摂取量測定法：一日当たり７ｇの飼料を与え、翌
日の同時間に容器内にある餌残量を測定し、１日当たり
食餌摂取量を算出した。・尿ｐＨの測定：新鮮尿を採尿し、簡易型ｐＨメーター
（ISFET KS723：新電元工業社製）を用いて測定した。・尿蛋白測定法：新鮮尿を採尿し、ブラッドフォード法
（BioRad社製）にて測定した。・尿クレアチニン測定法：新鮮尿を採尿し、クレアチニ
ンテストワコー（和光純薬工業社製）を用いて測定し
た。・血漿レプチンの測定：約16時間絶食させた後、炭酸ガ
ス雰囲気下に殺処理し、下大静脈から凝固処理リジンを
用いて全採血を行った（ヘパリン：最終濃度約10単位／
ml）。遠心分離（15,000rpm、５min）により血漿を得、
分析時まで凍結保存（−80℃）した。保存血漿を解凍
し、マウスレプチン測定キット（森永生科学研究所製）
を用いて測定した。・血漿インシュリンの測定：インシュリン測定キット
（森永生科学研究所製）を用い、血漿レプチン同様に測
定した。・後腹壁脂肪重量の測定：開腹後、左右の後腹壁脂肪を
摘出し、各々、精密天秤（METTLER AE240：日本シイベ
ルヘグナー社製）にて測定した。・血球分析：解剖、全採血後のヘパリン血（最終濃度約
10単位／ml）の一部を用いて、全自動血球計数機（MEK-
6158:日本光電社製）により測定した。

【００２８】４．試験結果基本飼料別の体重の推移を図１に、平常時血糖値の推移
を図２に示した。体重の増加パターンならびに平常時血
糖値の上昇にも大きな差は認められなかった。しかし、
空腹時血糖値に対する影響は基本飼料によって大きく異
なり、粗精製飼料（MF）では発酵乳摂取の影響による血
糖値の低下傾向が認められた（p=0.0879:図３）。

【００２９】さらに、血漿のインスリン濃度は何れの飼
料においても、本発明の治療剤である発酵乳摂取によっ
て低下した（P=0.0221:図４）。即ち、空腹時血糖値な
らびにインスリン濃度の積で代表されるインスリン抵抗
性指標では、本発明の治療剤である発酵乳摂取の影響が
大きく現れ、明らかな改善が確認された（P=0.0498:図
５）。

【００３０】一方、後腹壁脂肪の蓄積量は発酵乳摂取群
において有意に低下し（P=0.0040:図６）、血漿レプチ
ン濃度も発酵乳摂取群で有意な低下が示され、脂肪の蓄
積にも影響が現れている（P=0.0003:図７）。血液学的
検査においては大きな変化は認められなかったものの、
本発明の治療剤である発酵乳摂取により、血小板の有意
な増加が認められた（p=0.0390:図８）。また、1日あた
りの飲水量（p=0.0283:図９）、尿排泄量（p=0.0077:図
10）ともに本発明の治療剤である発酵乳摂取群において
有意に抑制され、糖尿病に伴う腎機能低下の症状が改善
された。新鮮尿のｐH（p=0.0444:図11）、尿蛋白の排泄
も有意に抑制され、糖尿病性腎症が顕著に改善された
（p=0.0337:図12）。

【００３１】以上の結果から、BL2928株・LG2055株を用
いて調製した発酵乳がインスリン非依存性糖尿病に伴っ
て発生するインシュリン抵抗性を改善し、糖尿病性腎症
の改善に有効であることが確認された。

【００３２】以下に実施例を示して本発明を具体的に説
明する。しかし、本発明はこの実施例に限定されるもの
ではない。

【実施例】１．乾燥粉末の調製 LG2055株及びBL2928株を10％還元脱脂乳培地（121℃、1
0分加熱）で培養し、本培養物を凍結乾燥し粉末化し、
本発明の予防改善治療剤を調製した（Ａ）。

【００３３】２．発酵乳の製造 BL2928株をブリッグス肝臓培地にて培養した。また、LG
2055株をMRS液体培地にて培養した。対数増殖期にある
各培養液を、0.3％の酵母エキスを添加した10％還元脱
脂乳（115℃、20分滅菌）に１％接種し、個々マザーカ
ルチャーを作成した。これをヨーグルトミックス（10％
の還元脱脂乳を添加し、100℃にて10分間加熱したも
の）に各2.5％添加して調製した。発酵は37℃で行い、
乳酸酸度0.85に到達した時点で冷却し、発酵を終了させ
た（Ｂ）。

【００３４】３．BL2928株・LG2055株生菌混合製剤の製
造 BL2928株及びLG2055株の液体培養物から対数増殖期にあ
る菌体を培養液から４°Ｃで、7,000ｒｐｍで15分間遠
心分離して滅菌水による洗浄を行い、これを３回繰り返
して洗浄菌体を得た。これを凍結乾燥処理して菌体粉末
を得た。この菌体粉末１部に脱脂乳４部を混合し、この
粉末をを打錠機により１ｇずつ定法により打錠して、菌
体200ｍｇを含む錠剤を調製した。また、上記のBL2928
株及びLG2055株の発酵乳を凍結乾燥し、得られた粉末を
用いて直接打錠した。

【００３５】４．カプセル化剤の製造凍結乾燥粉末を散剤化した後、造粒により顆粒状とした
後、空カプセルに10ｍｇづつ充填しカプセル剤とした。

【００３６】５．製剤の製造（２） LG2055株をMRS液体培地（Difco社製）５Ｌに接種後、37
℃、18時間静置培養を行った。BL2928株を脱脂乳５Ｌに
接種後、37℃、18時間静置培養を行った。培養終了後、
7,000ｒｐｍで15分間遠心分離を行い、培養液の１／50
量のそれぞれの濃縮菌体を得た。次いで、この濃縮菌体
を脱脂粉乳10％（重量）、グルタミン酸ソーダ１％（重
量）を含む分散媒と同量混合し、ｐＨ７に調整後、凍結
乾燥を行った。得られた凍結乾燥物を60メッシュのフル
イで整粒化し、凍結乾燥菌末を得た。

【００３７】第13改正日本薬局方解説書製剤総則「散
剤」の規定に準拠し、上記５で得られた凍結乾燥菌末１
ｇにラクトース（日局）400ｇ、バレイショデンプン
（日局）600ｇを加えて均一に混合し、散剤を製造し
た。

【００３８】６．製剤の製造（３）次の配合により抗潰瘍剤を製造した。（１）LG2055株、BL2928株の脱脂粉乳培地における培養
物の凍結乾燥物50ｇ、（２）ラクトース90ｇ、（３）コ
ーンスターチ29ｇ、（４）ステアリン酸マグネシウム１
ｇ、この混合物を圧縮錠剤機により圧縮して、１錠あた
り有効成分を40ｍｇ含有する錠剤100個を製造した。

【００３９】７．製剤の製造（４） LG2055株、BL2928株をホエー培地（0.5％酵母エキス、
0.1％トリプチケースペプトン添加）で培養後遠心分離
で菌体を回収した。この培養物１ｇを乳糖５ｇと混合し
顆粒状に成形して顆粒剤を得た。

【００４０】８．BL2928株及びLG2055株を含む食品の製
造（１）飲料洗浄菌体の凍結乾燥粉末を、BL2928株及びLG2055株が各
々10⁸個以上含まれるように200ｍｌの牛乳と混合して、
本発明の治療剤入り飲料を得た。良好な風味を有してい
た。

【００４１】（２）発酵乳 BL2928株及びLG2055株をヨーグルトミックス（生乳に２
％脱脂乳を添加し、100℃で10分加熱）に接種し、20℃
で24時間培養した。紙カップに充填し冷却後ヨーグルト
とした製品中のBL2928株及びLG2055株の生菌数濃度は、
100ｇ当たりBL2928株が10⁹個以上であり、LG2055株は10
⁸個以上であった。

【００４２】（３）発酵バター発酵バター（ｗｔ／ｗｔ）乳脂肪９６．８％食塩１．２１．で得られた試料（Ａ）２

【００４３】（４）バターケーキバターケーキ（ｗｔ／ｗｔ）バター２４％薄力粉２４砂糖２４全卵２４２．で得られた試料（Ｂ）４香料少々

【００４４】（５）マヨネーズマヨネーズ（ｗｔ／ｗｔ）サラダ油６５％卵黄１７食酢１０１．得られた試料（Ａ）３香辛料４．４グルタミン酸モノナトリウム０．６

【００４５】

【発明の効果】本発明によれば、ラクトバチルス・ガセ
リ（Lactobacillus gasseri)に属する乳酸菌を培養して
得られる培養物及び／または菌体とビフィドバクテリウ
ム・ロンガム（Bifidobacterium longum）に属する乳酸
菌を培養して得られる培養物及び／または菌体を有効成
分とする糖尿病合併症予防・改善・治療剤と糖尿病合併
症予防・改善・治療剤飲食品を提供することができる。
本発明によって提供される糖尿病合併症予防・改善・治
療剤は、毒性及び副作用が極めて少なく、また、食品素
材としても有用である。

【図面の簡単な説明】

【図１】飼育期間中の体重変化を示す。図中AIN93M、MF
は投与基礎飼料を示し、Controlは本発明非投与群を、L
ABは本発明剤投与群を示す。

【図２】飼育期間中の血糖値変化を示す。図中AIN93M、
MFは投与基礎飼料を示し、Controlは本発明非投与群
を、LABは本発明剤投与群を示す。

【図３】絶食後の血糖値を示す。図中AIN93M、MFは投与
基礎飼料を示し、白抜きグラフは本発明剤非投与群を、
網掛けグラフは本発明剤投与群を示す。

【図４】空腹時血漿インシュリン値を示す。図中AIN93
M、MFは投与基礎飼料を示し、白抜きグラフは本発明剤
非投与群を、網掛けグラフは本発明剤投与群を示す。

【図５】インシュリン抵抗性指標を示す。図中AIN93M、
MFは投与基礎飼料を示し、白抜きグラフは本発明剤非投
与群を、網掛けグラフは本発明剤投与群を示す。

【図６】後腹壁脂肪重量を示す。図中AIN93M、MFは投与
基礎飼料を示し、白抜きグラフは本発明剤非投与群を、
網掛けグラフは本発明剤投与群を示す。

【図７】空腹時血漿レプチン濃度を示す。図中AIN93M、
MFは投与基礎飼料を示し、白抜きグラフは本発明剤非投
与群を、網掛けグラフは本発明剤投与群を示す。

【図８】血小板測定値を示す。図中AIN93M、MFは投与基
礎飼料を示し、白抜きグラフは本発明剤非投与群を、網
掛けグラフは本発明剤投与群を示す。

【図９】飲用水量測定値を示す。図中AIN93M、MFは投与
基礎飼料を示し、白抜きグラフは本発明剤非投与群を、
網掛けグラフは本発明剤投与群を示す。

【図１０】尿排泄量測定値を示す。図中AIN93M、MFは投
与基礎飼料を示し、白抜きグラフは本発明剤非投与群
を、網掛けグラフは本発明剤投与群を示す。

【図１１】尿ｐＨ測定値を示す。図中AIN93M、MFは投与
基礎飼料を示し、白抜きグラフは本発明剤非投与群を、
網掛けグラフは本発明剤投与群を示す。

【図１２】尿蛋白濃度の測定値を示す。図中AIN93M、MF
は投与基礎飼料を示し、白抜きグラフは本発明剤非投与
群を、網掛けグラフは本発明剤投与群を示す。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号ＦＩテーマコート゛(参考）Ａ６１Ｐ 13/12 Ａ６１Ｐ 13/12 // Ｃ１２Ｎ 1/20 Ｃ１２Ｎ 1/20 ＡＣ１２Ｑ 1/68 Ｃ１２Ｑ 1/68 Ａ (72)発明者藤原茂埼玉県所鶴ヶ島市脚折1385−34 Ｆターム(参考） 4B001 AC06 AC31 EC05 4B018 LE01 LE03 MD86 MD87 ME03 ME14 MF13 4B063 QA13 QA18 QQ43 QR32 QR55 QS34 4B065 AA21X AA30X AC12 BA22 CA42 CA44 4C087 AA01 AA02 BC56 BC59 CA09 CA10 MA02 MA52 NA03 NA12 NA14 ZA81 ZC35

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】ラクトバチルス・ガセリ（Lactobacillu
s gasseri)に属する乳酸菌を培養して得られる培養物及
び／または菌体とビフィドバクテリウム・ロンガム（Bi
fidobacterium longum）に属する乳酸菌を培養して得ら
れる培養物及び／または菌体を有効成分とする糖尿病合
併症予防・改善・治療剤。
【請求項２】ラクトバチルス・ガセリ（Lactobacillu
s gasseri)に属する乳酸菌が、ヒト腸管内定着性を有す
るラクトバチルス・ガセリ（Lactobacillusgasseri)で
あり、ビフィドバクテリウム・ロンガム（Bifidobacter
ium longum）に属する乳酸菌が、ヒト腸管内定着性を有
するビフィドバクテリウム・ロンガム（Bifidobacteriu
m longum）である請求項１記載の糖尿病合併症予防・改
善・治療剤。
【請求項３】糖尿病合併症が糖尿病性腎症である請求
項１又は２記載の糖尿病合併症予防・改善・治療剤。
【請求項４】ラクトバチルス・ガセリ（Lactobacill
us gasseri)に属する乳酸菌とビフィドバクテリウム・
ロンガム（Bifidobacterium longum）に属する乳酸菌を
培養して得られる培養物が醗酵乳である請求項１〜３の
いずれかに記載の糖尿病合併症予防・改善・治療剤。
【請求項５】ラクトバチルス・ガセリ（Lactobacillu
s gasseri)に属する乳酸菌がラクトバチルス・ガセリ
（Lactobacillus gasseri)・SBT2055（以下LG2055とい
う）（FERM P-15535）、ビフィドバクテリウム・ロンガ
ム（Bifidobacterium longum）に属する乳酸菌がビフィ
ドバクテリウム・ロンガム（Bifidobacterium longum）
・SBT2928（以下BL2928という）（FERM P-10657）であ
る請求項１〜４のいずれかに記載の糖尿病合併症予防・
改善・治療剤。
【請求項６】ラクトバチルス・ガセリ（Lactobacillu
s gasseri)に属する乳酸菌を培養して得られる培養物及
び／または菌体とビフィドバクテリウム・ロンガム（Bi
fidobacterium longum）に属する乳酸菌を培養して得ら
れる培養物及び／または菌体を添加した糖尿病合併症予
防・改善・治療作用を有する飲食品。