DE69705238T2 - Derivate der asiatica-saeure mit einem modifizierten a-ring - Google Patents

Derivate der asiatica-saeure mit einem modifizierten a-ring

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Description

  • Die vorliegende Erfindung betrifft Asiatsäurederivate mit einem modifizierten A-Ring, dargestellt durch die allgemeine Formel 1:
  • worin R&sub1; eine Niederalkylgruppe mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen dargestellt, eine Alkoxygruppe mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen, eine Hydroxymethylgruppe, eine Halogenmethylgruppe oder eine Aldehydgruppe, die mit Ethandithiol geschützt sein kann; R&sub2; eine Niederalkylgruppe mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen, eine t-Butyldimethylsilyloxymethylgruppe, eine Halogenmethylgruppe, -CH&sub2;OCO(CH&sub2;)nCO&sub2;H (n = 0-3), -CH&sub2;OCOCHCHC&sub6;H&sub5; oder eine Hydroxymethylgruppe, die durch eine Acetyl- oder Benzoylgruppe geschützt sein kann, darstellt; R&sub3; Wasserstoff oder eine Methylgruppe darstellt; und die Doppelbindung in der 2-Position reduziert sein kann, um eine Einfachbindung zu bilden; und
  • Antikrebsmittel und Mittel, die die Leberfunktion schützen enthaltend diese Verbindung als wirksame Komponente.
    • STAND DER TECHNIK
  • Diese Asiatsäurederivate wurden durch Modifizierung des A- Rings der Asiatsäure oder von Methylasiatat hergestellt. Die Modifikation wurde bereits durchgeführt, um die Strukturformel der Asiatsäure festzulegen und darüber wurde berichtet [B. Singh and R. P. Rastogi, Phytochemistry, 8, 917-921, 1969].
  • Asiatsäure und Asiaticoside (Trisaccharide der Asiatsäure) und Madecassinsäure (madecassic acid), extrahiert aus Centella-Asiatica, die Verbindungen darstellen, und wurden zuerst durch Bontems 1941 isoliert [J. E. Bontems, Bull. Sci. Pharmacol., 49, 186-96 (1947)] und ihre Struktur wurde von Polonsky und Kollegen [J. Polonsky, Compt. Rend., 232, 1878- 80 (1951): J. Polonsky, Bull. Soc. Chim., 173-80 (1953)] definiert.
  • Der Extrakt, enthaltend Asiatsäure und Asiaticoside aus Centella-Asiatica wurde zur Behandlung von verletzter Haut oder chronischem Magengeschwür schon in den alten Zeiten verwendet und ebenfalls zur Behandlung von Hautveränderungen aufgrund von Tuberkulose oder Lepra [P. Boiteau, A. Buzas, E. Lederer und J. Polonsky, Bull. Soc. Chim., 31, 46-51 (1949)].
  • Vor kurzem wurde berichtet, dass verschiedene Triterpene, die eine ähnliche Struktur wie die Asiatsäure aufweisen, aus Pflanzen extrahiert wurden, insbesondere zeigt Ursolsäure eine cytotoxische Wirkung auf. [K. Yasukawa, Oncology, 48, 72-76 (1991); Dominic, Y. Alex, Med. Sci. Res., 21(5), 213- 215 (1993); Ryu, Shi young, Arch. Pharmacal Res., 17(5), 375- 7 (1994)] Es wurde berichtet, dass Betulinsäure, welche einfach aus ihrem Vorläufer, der aus Rinde von weisser Birke isoliert werden kann, synthetisiert werden kann, eine Cytotoxizität gegenüber Melanomzellen ohne wesentliche Nebeneffekte aufzeigt [Nat. Med., 1, 1046 (1995)].
    • OFFENBARUNG DER ERFINDUNG
  • Die Erfinder haben intensive Studien zur Entwicklung von neuen pharmazeutischen Zusammensetzungen für verschiedene medizinische Anwendungen durchgeführt und als Ergebnis haben sie verschiedene Derivate mit modifiziertem A-Ring, ausgehend von Asiatsäure erhalten aus Centella-Asiatica, synthetisiert. Sie haben weiterhin gefunden, daß die Derivate eine Cytotoxizität und eine Leber-schützende Funktion aufzeigen und somit diese Erfindung gemacht.
  • Ziel der vorliegenden Erfindung ist die Bereitstellung von Asiatsäurederivaten.
  • Die vorliegende Erfindung betrifft Asiatsäurederivate, dargestellt durch die allgemeine Formel 1: Formel 1:
  • worin R&sub1; eine Niederalkylgruppe mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen dargestellt, eine Alkoxygruppe mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen, eine Hydroxymethylgruppe, eine Halogenmethylgruppe oder eine Aldehydgruppe, die mit Ethandithiol geschützt sein kann; R&sub2; eine Niederalkylgruppe mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen, eine t-Butyldimethylsilyloxymethylgruppe, eine Halogenmethylgruppe, -CH&sub2;OCO(CH&sub2;)nCO&sub2;H (n = 0-3), -CH&sub2;OCOCHCHC&sub6;H&sub5; oder eine Hydroxymethylgruppe, die durch eine Acetyl- oder Benzoylgruppe geschützt sein kann, darstellt; R&sub3; Wasserstoff oder eine Methylgruppe darstellt; und die Doppelbindung in der 2-Position reduziert sein kann, um eine Einfachbindung zu bilden; und Antikrebsmittel und Mittel, die die Leberfunktion schützen enthaltend diese Verbindung als wirksame Komponente.
  • Das Verfahren zur Herstellung der Asiatsäurederviate mit modifiziertem A-Ring gemäß der vorliegenden Erfindung wird im folgenden dargestellt.
    • Verfahren 1
  • 1) Asiatsäure (2) wurde mit Diazomethan behandelt, um Methylasiatat (3, R&sub3; = Methyl) quantitativ zu erhalten, dies wurde dann oxidiert um eine Verbindung mit einer Lactolstruktur (4, R&sub3; = Methyl) zu ergeben, bei dem der A- Ring modifiziert wurde. Die Verbindung wurde mit einer katalytischen Menge an Essigsäure/Piperidin behandelt, um Methyl A(1)-norursa-2,12-dien-23-hydroxy-2-formyl-28-oat (5, R&sub3; = Methyl) zu erhalten (siehe Schema 1).
  • 2) Eine Verbindung mit einer Lactolstruktur (4, R&sub3; = H) wird durch Verwendung von Asiatsäure (2) wie oben erhalten und die erhaltene Verbindung wurde mit Essigsäure/Piperidin- Katalysator behandelt um Methyl A(1)-norursa-2,12-dien- 23-hydroxy-2-formyl-28-carbonsäure (5, R&sub3; = H) zu erhalten, die einen modifizierten A-Ring aufweist (siehe Schema 1). Schema 1
    • Verfahren 2
  • Eine Verbindung, dargestellt durch die allgemeine Formel (6) wurde durch verestern der Verbindung (5), wie sie oben erhalten wurde, mit R&sub4;COOH in Anwesenheit eines Katalysators hergestellt (siehe Schema 2). Schema 2
  • [In der Formel stellt R&sub4; (CH&sub2;)nCO&sub2;H, n = 0-3, CHCHC&sub6;H&sub5; oder C&sub6;H&sub5; dar.]
    • Verfahren 3
  • Die Verbindung (5), wie sie oben erhalten wurde, wurde mit t- Butyldimethylsilylchlorid und Imidazol behandelt, um ein Zwischenprodukt der allgemeinen Formel (7) zu erhalten, ein Zwischenprodukt, bei der die 23-OH-Gruppe geschützt wurde. Die Aldehydgruppe der erhaltenen Verbindung wurde reduziert um die allgemeine Formel (8) zu erhalten, die dann halogeniert wurde um ein Zwischenprodukt der allgemeinen Formel (9) zu ergeben.
  • Die Zwischenverbindung mit der allgemeinen Formel (9) wurde mit einem reduzierenden Mittel behandelt und unter Rückfluß erhitzt, um die Verbindung der allgemeinen Formel (10) zu erhalten, von dieser wurde dann die Silylgruppe durch Tetrabutylammoniumfluorid entfernt um die Verbindung der allgemeinen Formel (11) zu ergeben, eine neue Verbindung gemäß der vorliegenden Erfindung (siehe Schema 3). Schema 3
    • Verfahren 4
  • Die Aldehydgruppe (5), wie sie oben erhalten wurde, wird reduziert, um die Verbindung der allgemeinen Formel (12) zu erhalten, eine neue Verbindung gemäß der vorliegenden Erfindung, diese wurde dann mit einem Halogenierungsmittel behandelt, um die Verbindung der allgemeinen Formel (13) zu ergeben.
  • Die Verbindung der allgemeinen Formel (13), wie sie oben erhalten wurde, wurde mit einem Reduktionsmittel behandelt und unter Rückfluß erhitzt, um die Verbindung der allgemeinen Formel (14) zu ergeben, eine neue Verbindung gemäß der vorliegenden Erfindung (siehe Schema 4). Schema 4
    • Verfahren 5
  • Die 23-Hydroxy(OH)-Gruppe der Verbindung der allgemeinen Formel (5), wie sie oben erhalten wurde, wurde acetyliert, um eine geschützte Verbindung, die Verbindung der allgemeinen Formel (15), zu ergeben, diese wurde dann mit Diethylaminschwefeltrifluorid behandelt, um die Verbindung der allgemeinen Formel (16) zu ergeben, eine neue Verbindung gemäß der vorliegenden Erfindung.
  • Die Verbindung der allgemeinen Formel (15), wie sie oben erhalten wurde, wurde reduziert, um die Verbindung der allgemeinen Formel (17) zu ergeben, diese wurde dann mit Diethylaminschwefeltrifluorid behandelt, um die Verbindung der allgemeinen Formel (18) zu ergeben, eine neue Verbindung (siehe Schema 5). Schema 5
    • Verfahren 6
  • Eine Verbindung der allgemeinen Formel (12), wie sie oben erhalten wurde, wird reduziert, um die Verbindung der allgemeinen Formel (19) zu ergeben, eine neue Verbindung (siehe Schema 6). Schema 6
    • Verfahren 7
  • Eine Verbindung der allgemeinen Formel (5), wie sie oben erhalten wurde, wurde mit Ethanedithiol behandelt um Verbindung (20) zu erhalten, diese wurde dann mit Thioacetal geschützt. Die allgemeine Verbindung (20) wurde dann mit einem Raney Nickel reduziert um die Verbindung der allgemeinen Formel (21) zu ergeben, eine neue Verbindung gemäß der vorliegenden Erfindung (siehe Schema 7). Schema 7
    • Verfahren 8
  • Die Hydroxygruppe einer Verbindung der allgemeinen Formel (8), wie sie oben erhalten wurde, wurde methyliert um die Verbindung der allgemeinen Formel 22 zu ergeben, deren Silylgruppe wurde dann durch Verwendung von Tetrabutylammoniumfluorid entfernt, um die Verbindung der allgemeinen Formel (23) zu erhalten (siehe Schema 8) Schema 8
  • Die Dosis der Verbindung der allgemeinen Formel (1) ist als Antikrebsmittel 0,01 bis 1000 mg/Tag und 0,05 bis 50 mg/Tag als Leber-schützendes Mittel für einen Erwachsenen. Die Dosis hängt normalerweise vom Alter und vom Körpergewicht des Patienten ab, genauso wie von den Symptomen und dem Zustand.
  • Das Antikrebsmittel und das Leber-schützende Mittel gemäß der vorliegenden Erfindung können in geeignete Formulierungen zur oralen oder parenteralen Verabreichung unter Verwendung von herkömmlichen Verfahren formuliert werden, zur oralen Verabreichung können sie als Tabletten, Kapseln, Lösungen, Sirup oder Suspension formuliert sein, während für die parenterale Verabreichung, sie als transermale oder hypodermische Injektionen oder Injektionen in die abdomalen Hüllen oder Muskeln formuliert sind.
    • BESTES VERFAHREN ZUR DRUCHFÜHRUNG DER ERFINDUNG
  • Im folgenden wird die Erfindung unter Bezugnahme auf Beispiele, experimentelle Beispiele und Formulierungsbeispiele erklärt. Es ist aber klar, dass die vorliegende Erfindung nicht auf diese Beispiele beschränkt sind.
    • BEISPIEL 1: HERSTELLUNG VON METHYLASIATAT (3)
  • Asiatsäure (500 mg) wurde in Methanol (25 ml) gelöst und die Lösung wurde auf 0ºC gekühlt. Ein Überschuß an Diazomethan/Etherlösung wurde zugegeben und die erhaltene Mischung wurde bei Raumtemperatur für 1 Stunde gerührt. Das Lösungsmittel wurde durch Evaporation unter reduziertem Druck entfernt und der Rest wurde mittels Säulenchromatographie (Eluent: Dichlormethan/Methanol = 30 : 1) aufgereinigt, um 490 mg eines weissen Feststoffs (Ausbeute: 95%) zu ergeben. Das Produkt wurde aus Ethylacetat rekristallisiert um nadelartige Kristalle zu ergeben.
  • IR (unverdünnt): 3400, 1718 cm&supmin;¹
  • Mass (EI): m/e 503(M&spplus; + 1); 467, 443, 262, 203, 189, 133
  • ¹H-NMR (CDCl&sub3;): δ 0,75, 0,91, 1,04, 1,08 (jede 3H, s), 0,85 (3H, d, J = 6,4 Hz), 0,94 (1H, d, J = 5,0 Hz) 2,23 (1H, d, J = 10,8 Hz), 3,41, 3,47 (2H, ABq, J = 9,2 Hz), 2,60 (3H, S), 3,69 (1H, d, J = 10,4 Hz), 3,73-3,80 (1H, m), 5,25 (1H, brt)
    • BEISPIEL 2: HERSTELLUNG DER VERBINDUNG (4, R&sub3; = METHYL)
  • Methylaseatat (1000 mg, 1,99 mmol) wurde in Methanol : Wasser = 20 : 1 gelöst und NaIO&sub4; (645,5 mg) wurde zugegeben und die erhaltene Mischung wurde bei Raumtemperatur für ca. 3 Stunden gerührt. Das Lösungsmittel wurde durch Einkonzentration unter reduziertem Andruck entfernt und der Rest wurde mit Ethylacetat verdünnt, gewaschen und getrocknet. Nach Filtration wurde das Filtrat unter reduziertem Druck einkonzentriert um einen Rest zu ergeben, der durch Säulenchromatographie (Dichlormethan : Methanol = 50 : 1) aufgetrennt wurde um 790 mg eines weissen Feststoffs (Ausbeute: 79,3%) zu ergeben.
  • IR (unverdünnt): 3426, 1713 cm&supmin;¹
  • Mass (EI): m/e 500(M&spplus;)
  • ¹H-NMR (400 MHz, CDCl&sub3;): δ 9,95 (s, 1H), 5,30 (t, 1H, J = 2,3 Hz), 5,14-5,10 (m, 1H), 3,93, 3,75 (ABq, 2H, J = 13,6 Hz), 2,61 (s, 3H), 2,34 (d, 1H, J = 2,9 Hz), 1,08, 1,06, 1,00, 0,84 (jede s, 3H), 0,85 (d, 3H, J = 7,8 Hz)
    • HERSTELLUNG DER VERBINDUNG (4, R&sub3; = H)
  • Mit Ausnahme, dass Methylasiatat durch Asiatsäure ersetzt wurde, wurde das gleiche Verfahren wie in Beispiel 2 durchgeführt (Ausbeute: 72,8%).
  • IR (unverdünnt): 3368, 2927, 1694 cm&supmin;¹
  • Mass (EI): m/e 486(M&spplus;)
  • ¹H-NMR (300 MHz, CDCl&sub3;): δ 9,93 (s, 1H), 5,28 (t, 1H), 5,10 (m, 1H), 3,91, 3,73 (ABq, 2H, J = 13,3 Hz), 2,19 (d, 1H, J = 10,5 Hz), 1,07, 1,04, 0,98, 0,82 (jede s, 3H), 0,93 (d, 3H, J = 5,61 Hz), 0,85 (d, 3H, J = 3,66 Hz)
    • BEISPIEL 3: HERSTELLUNG VON METHYL A(1)-NORURSA-2,12,DIEN-23- HYDROXY-2-FORMYL-28-OAT (5, R&sub3; = METHYL)
  • Die Verbindung (4, 830 mg, 1,66 ml) wurde unter reduziertem Druck getrocknet und eine Stickstoffatmosphäre wurde angelegt und in wasserfreiem Benzol gelöst. Essigsäure (20 ml), Piperidin (20 ml) wurden zugegeben. Die erhaltene Lösung wurde unter Rückfluß bei 60ºC für ca. 1 Stunde erhitzt. Nach 1 Stunde wurde wasserfreies Magnesiumsulfat zugesetzt und für 5 Stunden unter Rückfluß erhitzt, das Lösungsmittel wurde durch Evaporation bei reduziertem Druck entfernt und der Rest wurde mit Ethylacetat verdünnt, gewaschen und getrocknet. Das Filtrat wurde unter reduziertem Druck einkonzentriert und durch Säulenchromatographie aufgereinigt (Dichlormethan : Methanol = 80 : 1), um 580 mg zu ergeben (Ausbeute: 72,5%).
  • IR (unverdünnt): 3443, 1718, 1685 cm&supmin;¹
  • Mass (EI): m/e 483(M&spplus; + 1)
  • ¹H-NMR (300 MHz, CDCl&sub3;): δ 9,70 (s, 1H), 6,64 (t, 1H), 5,26 (t, 1H, J = 4,0 Hz), 3,59 (s, 3H), 3,54, 3,50 (ABq, 2H, J = 6,96 Hz), 1,23, 1,07, 1,01, 0,83 (jedes s, 3H), 0,91 (d, 3H, J = 5,61 Hz), 0,82 (d, 3H, J = 6,36 Hz)
    • BEISPIEL 4: HERSTELLUNG VON METHYL A(1)-NORURSA-2,12,DIEN-23- ALKYLCARBONYLOXY-2-FORMYL-28-OAT (6, R&sub4; = C&sub2;H&sub4;CO&sub2;H)
  • Die Verbindung (5, 31,5 mg, 0,065 ml), Bernsteinsäure (8,49 ml), 1,3-Dicyclohexylcarboimid (14,98 mg), 4- Dimethylaminopyridin (0,80 mg) wurden unter reduziertem Druck getrocknet und unter Argonatmosphäre gebracht, in wasserfreiem Dichlormethan gelöst und bei Raumtemperatur für 22 Stunden gerührt. Das Erhaltene wurde filtriert und das Filtrat wurde mit verdünnter Salzsäure, Wasser und gesättigter Natriumchloridlösung gewaschen und getrocknet. Das Filtrat wurde unter reduziertem Druck eingetrocknet und durch Säulenchromatographie aufgereinigt (Dichlormethan : Methanol = 20 : 1), um 17,3 mg zu ergeben (Ausbeute: 45,5%).
  • IR (unverdünnt): 2927, 1733 cm&supmin;¹
  • Mass (EI): m/e 582(M&spplus;)
  • ¹H-NMR (300 MHz, CDCl&sub3;): δ 9,69 (s, 1H), 6,56 (s, 1H), 5,28 (t, 1H), 4,06, 3,98 (ABq, 2H, J = 10,97 Hz), 3,59 (s, 3H), 2,65 (s, 4H), 1,23, 1,06, 1,0, (jedes s, 3H), 0,91 (d, 3H, J = 5,85 Hz), 0,83 (d, 3H, J = 4,14 Hz)
    • VERBINDUNG (6, R&sub4; = -C&sub3;H&sub6;CO&sub2;H)
  • Mit Ausnahme der Verwendung von Glutarsäure anstelle von Bernsteinsäure wurde das gleiche Verfahren wie in Beispiel 4 durchgeführt (Ausbeute: 51,2%).
  • IR (unverdünnt): 2928, 1733 cm&supmin;¹
  • Mass (EI): m/e 596(M&spplus;), 597, 598
  • ¹H-NMR (300 MHz, CDCl&sub3;): δ 9,69 (s, 1H), 6,58 (s, 1H), 5,26 (t, 1H), 4,05, 3,94 (ABq, 2H, J = 10,7 Hz), 3,59 (s, 3H), 2,42 (t, 2H, J = 6,71 Hz), 2,21 (d, 1H, J = 11,2 Hz), 1,95 (t, 2H, J = 7,19 Hz) 1,22, 1,07, 1,05, 0,92, 0,82 (jedes s, 3H), 0,82 (d, 3H, J = 6,33 Hz)
    • VERBINDUNG (6, R&sub4; = CHCHC&sub6;H&sub5;)
  • Mit Ausnahme des Ersetzens von Bernsteinsäure durch Zimtsäure wurde das gleiche Verfahren wie in Beispiel 4 durchgeführt (Ausbeute: 73,0%).
  • IR (unverdünnt): 2927, 1718 cm&supmin;¹
  • Mass (EI): m/e 612(M&spplus;), 613, 614
  • ¹H-NMR (300 MHz, CDCl&sub3;): δ 9,72 (s, 1H), 7,68 (d, 1H, J = 15,8 Hz), 7,53-7,50 (m, 2H), 7,40-7,37 (m, 3H) 6,66 (s, 1H), 6,43 (d, 1H, J = 16,1 Hz), 5,27 (t, 1H), 4,17, 4,08 (ABq, 2H, J = 10,95 Hz), 3,59 (s, 3H), 2,20 (d, 1H, J = 10,5 Hz), 1,53, 1,24, 1,10, 1,04, 0,79 (jedes s, 3H), 0,90 (d, 3H, J = 6,09 Hz), 0,82 (d, 3H, J = 5,13 Hz)
    • VERBINDUNG (6, R&sub4;) = -C&sub6;H&sub5;)
  • Mit Ausnahme des Ersetzens von Bernsteinsäure durch Benzoesäure wurde das gleiche Verfahren wie in Beispiel 4 durchgeführt (Ausbeute: 60,1%).
  • IR (unverdünnt): 2927, 1723 cm&supmin;¹
  • Mass (EI): m/e 586(M&spplus;), 587
  • ¹H-NMR (300 MHz, CDCl&sub3;): δ 9,96 (s, 1H), 7,96 (d, 2H, J = 6,42 Hz), 7,51 (t, 1H, J = 7,40 Hz), 7,38 (t, 2H, J = 7,19 Hz) 6,63 (s, 1H), 5,21 (t, 1H, J = 3,53 Hz), 4,26, 4,11, (ABq, 2H, J = 10,98 Hz), 3,54 (s, 3H), 2,15 (d, 1H, J = 10,3 Hz), 1,20, 1,08, 0,95, 0,84, 0,76 (jedes s, 3H), 0,78 (d, 3H, J = 2,19 Hz)
    • BEISPIEL 5: HERSTELLUNG VON METHYL A(1)-NORURSA-2,12-DIEN-23- O-t-BUTYLDIMETHYLSILYL-2-FORMYL-28-OAT (7)
  • Die Verbindung (5, 50 mg, 0,104 mmol), wie oben erhalten, Imidazol (24,8 mg), t-Butyldimethylsilylchlorid (62,7 mg) wurden unter reduziertem Druck getrocknet und unter Argonatmosphäre gebracht. Die erhaltene Mischung wurde in wasserfreiem Dichlormethan gelöst und bei Raumtemperatur für 6 Stunden gerührt. Das Lösungsmittel wurde durch Evaporation unter reduziertem Druck entfernt. Der Rest wurde mit Ethylacetat verdünnt, gewaschen, getrocknet und filtriert. Das Filtrat wurde unter reduziertem Druck einkonzentriert und mit Säulenchromatographie aufgereinigt (Hexan : Ethylacetat = 10 : 1), um eine transparente, ölige Verbindung zu erhalten 56,2 mg (Ausbeute: 90,7%).
  • IR (unverdünnt): 1725, 1689 cm&supmin;¹
  • Mass (EI): m/e 596(M&spplus;)
  • ¹H-NMR (400 MHz, CDCl&sub3;): δ 9,70 (s, 1H), 6,63 (s, 1H), 5,29 (t, 1H, J = 3,4 Hz), 3,61 (s, 3H), 3,52, 3,37 (ABq, 2H, J = 9,5 Hz), 2,23 (d, 1H, J = 10,7 Hz) 1,23, 1,08, 0,97, 0,84 (jedes s, 3H), 0,93 (d, 3H, J = 5,9 Hz), 0,85 (d, 3H, J = 6,4 Hz), 0,88 (s, 9H), 0,05 (s, 6H)
    • BEISPIEL 6: HERSTELLUNG VON METHYL A(1)-NORURSA-2- HYDROXYMETHYL-2,12-DIEN-23-O-t-BUTYLDIMETHYLSILYL-28-OAT (8)
  • Die Verbindung (7, 91,7 mg, 0,154 mmol), wie oben erhalten, Natriumborhydrid (11,9 mg) wurden unter reduziertem Druck getrocknet und unter Argonatmosphäre gebracht. Die erhaltene Mischung wurde in wasserfreiem Dichlormethan gelöst und bei Raumtemperatur für 2 Stunden gerührt. Das Lösungsmittel wurde durch Evaporation unter reduziertem Druck entfernt und mit Säulenchromatographie aufgereinigt (Hexan : Ethylacetat = 15 : 1) um die Verbindung zu erhalten 91,4 mg (Ausbeute: 99,3%).
  • IR (unverdünnt): 3449, 1724 cm&supmin;¹
  • Mass (EI): m/e 580(M&spplus; - H&sub2;O)
  • ¹H-NMR (400 MHz, CDCl&sub3;): δ 5,40 (s, 1H), 5,23 (t, 1H), 4,21, 4,12 (ABq, 2H, J = 22,9 Hz), 3,60 (s, 3H), 3,38, 3,29 (ABq, 2H, J = 9,5 Hz) 2,22 (d, 1H, J = 11,2 Hz), 1,15, 1,10, 0,93, 0,80 (jedes s, 3H), 0,86 (d, 3H, J = 6,4 Hz), 0,88 (s, 9H), 0,02 (s, 6H)
    • BEISPIEL 7: HERSTELLUNG VON METHYL A(1)-NORURSA-2-BROMMETHYL- 2,12-DIEN-23-O-t-BUTYLDIMETHYLSILYL-28-OAT (9, R&sub5; = Br)
  • Die Verbindung (8, 54 mg, 0,090 mmol), wie oben erhalten, PPh&sub3;(35,8 mg), Kohlenstofftetrabromid (45,2 mg) wurden unter reduziertem Druck getrocknet und unter Argon gebracht. Die erhaltene Mischung wurde in wasserfreiem Dichlormethan gelöst und bei Raumtemperatur für 30 Minuten gerührt. Das Lösungsmittel wurde durch Evaporation unter reduziertem Druck entfernt. Der Rest wurde mit Ethylacetat verdünnt, gewaschen, getrocknet und filtriert. Das Filtrat wurde unter reduziertem Druck einkonzentriert und mit Säulenchromatographie aufgereinigt (Hexan : Ethylacetat = 10 : 1), um die Verbindung zu erhalten 53,7 mg (Ausbeute: 90%).
  • ¹H-NMR (500 MHz, CDCl&sub3;): o 5,57 (s, 1H), 5,25 (t, 1H, J = 3,48 Hz), 4,08, 4,02 (ABq, 2H, J = 11,1 Hz), 3,58 (s, 3H), 3,35, 3,26 (ABq, 2H, J = 9,5 Hz), 2,20 (d, 1H, J = 3,3 Hz) 1,10, 0,93, 0,81 (jedes s, 3H), 0,91 (d, 3H, J = 4,05 Hz), 0,85 (d, 9H), 0,00 (s, 6H)
    • BEISPIEL 8: HERSTELLUNG VON METHYL A(1)-NORURSA-2- CHLORMETHYL-2,12-DIEN-23-O-t-BUTYLDIMETHYLSILYL-28-OAT (9, R&sub5; = Cl)
  • Die Verbindung (8, 10,3 mg, 0,017 mmol), wie oben erhalten, wurde unter reduziertem Druck getrocknet und unter Argon gebracht. Die erhaltene Mischung wurde in wasserfreiem Dichlormethan gelöst, Pyridin (1,38 ul) und SOCl&sub2; (3,76 ul) wurden bei 0ºC dazugegeben und 24 Stunden gerührt. Kleine Mengen Wasser wurden zugegeben und das Lösungsmittel wurde durch Evaporation bei reduziertem Druck entfernt. Der Rest wurde mit Ethylacetat verdünnt, gewaschen und getrocknet. Das Filtrat wurde unter reduziertem Druck einkonzentriert und mit Säulenchromatographie aufgereinigt (Hexan : Ethylacetat = 30 : 1), um die Verbindung zu erhalten, 0,6 mg (Ausbeute: 5,7%).
  • IR (unverdünnt): 1726, 2928 cm&supmin;¹
  • ¹H-NMR (400 MHz, CDCl&sub3;): o 5,56 (s, 1H), 5,25 (t, 1H, J = 3,2 Hz), 4,17, 4,16 (ABq, 2H, J = 1,23 Hz), 3,61 (s, 3H), 3,38, 3,29 (ABq, 2H, J = 9,27 Hz), 2,24 (d, 1H, J = 10,26 Hz) 1,19, 1,12, 0,94, 0,82 (jedes s, 3H), 0,95 (d, 3H, J = 5,37 Hz), 0,87 (d, 3H, J = 7,81 Hz), 0,88 (d, 9H), 0,02 (s, 6H)
    • BEISPIEL 9: HERSTELLUNG VON METHYL A(1)-NORURSA-2-JODMETHYL- 2,22-DIEN-23-O-t-BUTYLDIMETHYLSILYL-28-OAT (9, R&sub5; = I)
  • Die Verbindung (8, 31 mg, 0,052 mmol), wie oben erhalten, wurde unter reduziertem Druck getrocknet und unter Argon gesetzt. Die erhaltene Mischung wurde in wasserfreiem THF gelöst und bei 0ºC gerührt. Methyltriphenoxyphosphoniumjodid [(PhO)&sub3;P&spplus;CH&sub3;I&supmin;] und gelöst in wasserfreiem THF, wurden zu der erhaltenen Lösung zugegeben und für 30 Minuten gerührt. 5% Kaliumcarbonat wurde zu dem Erhaltenen gegeben und das Lösungsmittel wurde durch Evaporation unter reduziertem Druck entfernt. Der Rest wurde mit Ethylacetat verdünnt, gewaschen und getrocknet. Das Filtrat wurde unter reduziertem Druck einkonzentriert und mit Säulenchromatographie aufgereinigt (Hexan : Ethylacetat = 10 : 1), um die Verbindung zu erhalten.
  • ¹H-NMR (500 MHz, CDCl&sub3;): δ 5,57 (s, 1H), 5,26 (t, 1H), 4,06, 3,89 (ABq, 2H, J = 10,25 Hz), 3,58 (s, 3H), 3,32, 3,24 (ABq, 2H, J = 9,48 Hz), 2,24 (d, 1H, J = 10,26 Hz) 1,23, 1,18, 1,12, 0,81 (jedes s, 3H), 0,92 (d, 3H, J = 6,4 Hz), 0,87 (d, 3H, J = 1,15 Hz), 0,87 (s, 9H), 0,01 (s, 6H)
    • BEISPIEL 10: HERSTELLUNG VON METHYL A(1)-NORURSA-2-METHYL- 2,12-DIEN-23-O-t-BUTYLDIMETHYLSILYL-28-OAT (10)
  • Die Verbindung (9, 15,3 mg, 0,023 mmol), wie oben erhalten, Natriumborhydrid (1,79 mg) wurden unter reduziertem Druck getrocknet und unter Argon gesetzt. Die erhaltene Mischung wurde in wasserfreiem DMSO gelöst und bei Raumtemperatur für 4 Stunden gerührt. Das Lösungsmittel wurde durch Evaporation unter reduziertem Druck entfernt und durch Säulenchromatographie aufgereinigt (Hexan : Ethylacetat = 30 : 1) um die Verbindung zu erhalten 12 mg (Ausbeute: 89%).
  • IR (unverdünnt): 2928, 1728 cm&supmin;¹
  • Mass (EI): m/e 582(M&spplus;)
  • ¹H-NMR (400 MHz, CDCl&sub3;): δ 5,22 (t, 1H), 5,02 (s, 1H) 3,60 (s, 3/), 3,33, 3,24 (ABq, 2H, J = 12,3 Hz), 2,21 (d, 1H, J = 15,4 Hz) 1,71 (s, 3H), 1,10, 1,08, 0,94, 0,79 (jedes s, 3H), 0,88 (d, 3H, J = 9,4 Hz), 0,87 (d, 9H), 0,00 (s, 6H)
    • BEISPIEL 11: HERSTELLUNG VON METHYL A(1)-NORURSA-2-METHYL- 2,12-DIEN-23-HYDROXY-28-OAT (11)
  • Die Verbindung (10, 12 mg, 0,021 mmol), wie oben erhalten, wurde unter reduziertem Druck getrocknet und in wasserfreiem Teer gelöst. Tetrabutylammoniumfluorid (6,0 mg) wurde zu der erhaltenen Mischung bei Raumtemperatur gegeben und für 24 Stunden gerührt. Das Lösungsmittel wurde durch Evaporation unter reduziertem Druck entfernt und durch Säulenchromatographie aufgereinigt (Hexan : Ethylacetat = 10 : 1) um die Verbindung zu erhalten 3,8 mg (Ausbeute: 54,7%).
  • IR (unverdünnt): 3436 cm&supmin;¹
  • Mass (EI): m/e 469(M&spplus; + 1)
  • ¹H-NMR (300 MHz, CDCl&sub3;): δ 5,22 (t, 1H, J = 3,29 Hz), 4,98 (s, 1H) 3,59 (s, 3H), 3,37, 3,30 (ABq, 2H, J = 8,04 Hz), 2,07 (d, 1H, J = 8,31 Hz) 1,75 (s, 3H), 1,10, 0,96, 0,88, 0,79 (jedes s, 3H), 0,84 (d, 3H, J = 6,33 Hz)
    • BEISPIEL 12: HERSTELLUNG VON METHYL A(1)-NORURSA-2- HYDROXYMETHYL-2,12-DIEN-23-HYDROXY-28-OAT (12)
  • Mit der Ausnahme des Ersetzens von Verbindung (7) durch Verbindung (5) wurde das gleiche Verfahren wie in Beispiel 6 angewendet (Ausbeute 89,9%).
  • IR (unverdünnt): 3368, 2926, 1733 cm&supmin;¹
  • Mass (EI): m/e 485(M&spplus; + 1)
  • ¹H-NMR (400 MHz, CDCl&sub3;): δ 5,40 (s, 1H), 5,23 (t, 1H), 4,31, 4,22 (ABq, 2H, J = 0,98 Hz), 3,61 (s, 3H), 3,47, 3,35 (ABq, 2H, J = 10,7 Hz), 2,23 (d, 1H, J = 11,2 Hz), 1,18, 1,12, 0,95, 0,81 (jedes s, 3H), 0,94 (d, 3H, J = 6,3 Hz), 0,85 (d, 3H, J = 6,3 Hz)
    • BEISPIEL 13: HERSTELLUNG VON METHYL A(1)-NORURSA-2- FLUORMETHYL-2,12-DIEN-23-HYDROXY-28-OAT (13, R&sub5; = F)
  • Die Verbindung (12, 25 mg, 51,7 umol), wie oben erhalten, wurde unter reduziertem Druck getrocknet, und unter Argon gesetzt und in wasserfreiem Dichlormethan gelöst. Diethylaminoschwefeltrifluorid (DAST, 20,5 ul) wurde zu der erhaltenen Mischung bei -78ºC gegeben und bei Raumtemperatur für 1,5 Stunden gerührt. Gesättigtes Natriumbicarbonat wurde bei 0ºC zu dem Erhaltenen gegeben, gewaschen und getrocknet. Das Filtrat wurde unter reduziertem Druck einkonzentriert und separat mit Säulenchromatographie aufgereinigt (Hexan : Ethylacetat = 15 : 1) um die Verbindung zu erhalten, 8,3 mg (Ausbeute: 32,9%).
  • IR (unverdünnt): 2928, 1732 cm&supmin;¹
  • Mass (EI): m/e 488(M&spplus;)
    • BETSPIEL 14: HERSTELLUNG VON METHYL A(1)-NORURSA-2- BROMMETHYL-23-BROM-2,12-DIEN-23-HYDROXY-28-OAT (13, R&sub5; = Br)
  • Mit der Ausnahme des Ersetzens von Verbindung (8) durch Verbindung (12) wurde das gleiche Verfahren wie in Beispiel 8 angewendet (Ausbeute: 53,9%).
  • IR (unverdünnt): 2962 cm&supmin;¹
  • Mass (EI): m/e 610(M&spplus;)
  • ¹H-NMR (300 MHz, CDCl&sub3;): δ 5,59 (s, 1H), 5,19 (t, 1H), 4,00, 3,99 (ABq, 2H, J = 1,71 Hz), 3,54 (s, 3H), 3,34, 3,22 (ABq, 2H, J = 9,9 Hz), 1,19, 1,15, 1,06, 0,78 (jedes s, 3H), 0,87 (d, 3H, J = 5,37 Hz), 0,80 (d, 3H, J = 6,33 Hz)
    • BEISPIEL 15: HERSTELLUNG VON METHYL A(1)-NORURSA-2- CHLORMETHYL-23-CHLOR-2,12-DIEN-23-HYDROXY-28-OAT (13, R&sub5; = Cl)
  • Mit der Ausnahme des Ersetzens von Verbindung (8) durch Verbindung (12) wurde das gleiche Verfahren wie in Beispiel 8 durchgeführt (Ausbeute: 12,8%).
  • IR (unverdünnt): 1719 cm&supmin;¹
  • ¹H-NMR (400 MHz, CDCl&sub3;): δ 5,61 (s, 1H), 5,27 (t, 1H), 4,21, 4,15 (ABq, 2H, J = 9,8 Hz), 3,82, 3,72 (ABq, 2H, J = 9,7 Hz), 3,63 (s, 3H), 2,22 (d, 1H), 1,23, 1,14, 1,06, 0,98, 0,84 (jedes s, 3H), 0,89 (jedes s, 3H), 0,89 (d, 3H, J = 6,4 Hz)
    • BEISPIEL 16: HERSTELLUNG VON METHYL A(1)-NORURSA-2-METHYL- 2,12-DIEN-28-OAT (14)
  • Mit der Ausnahme des Verwendens von Verbindung (13) anstelle von Verbindung (9) wurde das gleiche Verfahren wie in Beispiel 10 durchgeführt (Ausbeute: 27,0%).
  • IR (unverdünnt): 2925, 1726 cm&supmin;¹
  • Mass (EI): m/e 452(M&spplus;)
    • BEISPIEL 17: HERSTELLUNG VON METHYL A(1)-NORURSA-2,12-DIEN- 23-ACETYLOXY-2-FORMYL-28-OAT (15)
  • Die Verbindung (5, 101,2 mg, 0,0210 mmol), wie oben erhalten, wurde unter reduziertem Druck getrocknet, und unter Argon gestellt. Die erhaltene Mischung in wasserfreiem THF gelöst. Wasserfreie Essigsäure (39,6 um) wurde bei Raumtemperatur zugegeben und für 2 Stunden gerührt. Das Lösungsmittel wurde unter reduziertem Druck entfernt und der Rest wurde mit Ethylacetat verdünnt, gewaschen und getrocknet. Das Filtrat wurde unter reduziertem Druck einkonzentriert und separat mit Säulenchromatographie gereinigt (Hexan : Ethylacetat = 10 : 1), um die Verbindung zu erhalten, 94 mg (Ausbeute: 84,5%).
  • IR (unverdünnt): 2927, 1686 cm&supmin;¹
  • Mass (EI): m/e 524(M&spplus;)
  • ¹H-NMR (400 MHz, CDCl&sub3;): δ 9,7 (s, 1H), 6,61 (s, 1H), 5,28 (t, 1H, J = 3,62 Hz), 4,03, 3,96 (ABq, 2H, J = 10,92 Hz), 3,61 (s, 3H), 2,24 (d, 1H), 2,06 (s, 3H), 1,24, 1,08, 1,05, 0,84 (jedes s, 3H), 0,93 (d, 3H, J = 6,04 Hz), 0,84 (d, 3H, J = 6,36 Hz)
    • BEISPIEL 18: HERSTELLUNG VON METHYL A(1)-NORURSA-2- DIFLUORMETHYL-2,12-DIEN-23-ACETYLOXY-28-OAT (16)
  • Mit der Ausnahme des Ersetzens der Verbindung (12) durch Verbindung (15) wurde das gleiche Verfahren wie in Beispiel 13 durchgeführt (Ausbeute: 38,8%).
  • IR (unverdünnt): 1239 cm&supmin;¹
  • Mass (EI): m/e 546(M&spplus;)
  • ¹H-NMR (400 MHz, CDCl&sub3;): δ 6,25 (t, 1H, J = 55,4 Hz), 5,92 (s, 1H), 5,26 (t, 1H), 3,97, 3,86 (ABq, 2H, J = 10,7 Hz), 3,61 (s, 3H), 2,24 (d, 1H, J = 9,92 Hz), 2,06 (s, 3H), 1,23, 1,11, 1,03, 0,95, 0,83 (jedes s, 3H), 0,94 (d, 3H, J = 6,12 Hz), 0,86 (d, 3H, J = 6,4 Hz)
    • BEISPIEL 19: HERSTELLUNG VON METHYL A(1)-NORURSA-2- HYDROXYMETHYL-2,12-DIEN-23-ACETYLOXY-28-OAT (17)
  • Mit der Ausnahme des Ersetzens der Verbindung (7) durch Verbindung (15) wurde das gleiche Verfahren wie in Beispiel 6 durchgeführt (Ausbeute: 78,2%).
  • IR (unverdünnt): 3503, 2926, 1718 cm&supmin;¹
  • Mass (EI): m/e 546(M&spplus;)
  • ¹H-NMR (400 MHz, CDCl&sub3;): δ 5,45 (s, 1H), 5,23 (t, 1H, J = 3,4 Hz), 4,29, 4,20 (ABq, 2H, J = 3,54 Hz), 3,92, 3,86 (ABq, 2H, J = 10,56 Hz), 3,61 (s, 3H), 2,21 (d, 1H), 2,04 (s, 3H), 1,17, 1,10, 1,00, 0,80 (jedes s, 3H), 0,94 (d, 3H, J = 6,08 Hz), 0,856 (d, 3H, J = 6,44 Hz)
    • BEISPIEL 20: HERSTELLUNG VON METHYL A(1)-NORURSA-2- FLUORMETHYL-2,12-DIEN-23-ACETYLOXY-28-OAT (18)
  • Mit der Ausnahme des Ersetzens der Verbindung (12) durch Verbindung (17) wurde das gleiche Verfahren wie in Beispiel 13 durchgeführt (Ausbeute: 27,9%).
  • IR (unverdünnt): 2927, 1740 cm&supmin;¹
  • Mass (EI): m/e 528(M&spplus;), 529
  • ¹H-NMR (500 MHz, CDCl&sub3;): δ 5,49 (s, 1H), 5,17 (t, 1H, J = 3,7 Hz), 4,94-4,79 (m, 2H), 3,87, 3,80 (ABq, 2H, J = 10,7 Hz), 3,54 (s, 3H), 2,17 (d, 1H), 1,99 (s, 3H), 1,19, 1,11, 1,04, 0,95, 0,75 (jedes s, 3H), 0,87 (d, 3H, J = 6,2 Hz), 0,79 (d, 3H, J = 6,5 Hz)
    • BEISPIEL 21: HERSTELLUNG VON METHYL A(1)-NORURSA-2- HYDROXYMETHYL-12-EN-23-HYDROXY-28-OAT (19)
  • Verbindung (12, 15 mg, 0,031 mmol), wie oben erhalten, wurde Ethanol gelöst und 10% Pd/C (3 mg) wurde zugegeben. Das Erhaltene wurde für 5 Stunden mit einem Hydrierapparat umgesetzt. Pd/C wurde abfiltriert und mit Methanol gewaschen. Das Lösungsmittel wurde durch Evaporation unter reduziertem Druck entfernt und der Rest wurde mit Ethylacetat verdünnt, gewaschen und getrocknet. Das Filtrat wurde unter reduziertem Druck einkonzentriert und separat mit Säulenchromatographie getrennt (Hexan : Ethylacetat = 15 : 1), um die Verbindung zu erhalten, 13,6 mg (Ausbeute: 90%).
  • IR (unverdünnt): 3468, 2927 cm&supmin;¹
  • Mass (EI): m/e 486(M&spplus;)
  • ¹H-NMR (500 MHz, CDCl&sub3;): δ 5,23 (t, 1H, J = 4,53 Hz), 3,61 (s, 3H), 3,32, 3,26 (d, 2H, J = 4,50 Hz), 2,21 (d, 2H), 1,10, 0,95, 0,89, 0,83, 0,75 (jedes s, 3H), 0,91 (d, 3H, J = 8,25 Hz), 0,87 (d, 3H, J = 8,15 Hz)
    • BEISPIEL 22: HERSTELLUNG DER VERBINDUNG (20)
  • Verbindung (5, 11 mg, 0,023 mmol), wie oben erhalten, wurde unter reduziertem Druck getrocknet und unter Argon gesetzt. Die erhaltene Mischung in wasserfreiem Dichlormethan gelöst und BF&sub3;·OEt&sub2; (0,28 ul) und 1,3-Ethandithiol (2,39 ul) wurden nacheinander zugegeben. Das Erhaltene wurde unter reduziertem Druck einkonzentriert und separat mit Säulenchromatographie gereinigt (Hexan : Ethylacetat = 10 : 1), um die Verbindung zu erhalten, 7,8 mg (Ausbeute: 61,3%).
  • IR (unverdünnt): 3448, 2927 cm&supmin;¹
  • ¹H-NMR (300 MHz, CDCl&sub3;): δ 5,33 (t, 1H), 5,06 (s, 1H), 3,59 (s, 3H), 3,55, 3,37 (ABq, 2H, J = 10,5 Hz), 3,29-3,15 (m, 4H) 2,64 (bd, 1H), 2,47 (d, 1H, J = 13,9 Hz), 1,09, 0,96, 0,69, (jedes s, 3H), 0,85 (d, 3H, J = 6,87 Hz)
    • BEISPIEL 23: HERSTELLUNG VON METHYL A(1)-NORURSA-2-METHYL-12- EN-23-HYDROXY-28-OAT (21)
  • Verbindung (20, 7,8 mg, 0,014 mmol), wie oben erhalten, wurde unter reduziertem Druck getrocknet und mit Stickstoff versetzt. Die erhaltene Mischung wurde in wasserfreiem Ethanol gelöst und für 4 Stunden mit zugegebenem Raney Ni (0,47 ml) gerührt. Nach Filtration wurde das Lösungsmittel durch Evaporation unter reduziertem Druck entfernt. Das Erhaltene wurde separat mit Säulenchromatographie aufgereinigt (Hexan : Ethylacetat = 10 : 1), um die Verbindung zu erhalten, 4,4 mg (Ausbeute: 66,97%).
  • IR (unverdünnt): 3471, 2927 cm&supmin;¹
  • ¹H-NMR (300 MHz, CDCl&sub3;): δ 5,33 (t, 1H), 3,59 (s, 1H), 3,45, 3,22 (ABq, 2H, J = 7,31 Hz), 2,27 (d, 1H, J = 11,4 Hz) 1,16, 1,13, 1,08, 0,70 (jedes s, 3H), 0,96 (d, 3H, J = 3,66 Hz), 0,93 (d, 3H, J = 5,37 Hz), 0,86 (d, 3H, J = 6,33 Hz)
    • BEISPIEL 24: HERSTELLUNG VON METHYL A(1)-NORURSA-2- METHYLOXYMETHYL-2,12-DIEN-23-O-t-BUTYLDIMETHYLSILYL-28-OAT (22)
  • Verbindung (8, 15 mg, 0,025 mmol), wie oben erhalten, wurde unter reduziertem Druck getrocknet und mit Argon ausgetauscht und in wasserfreiem THF gelöst. Das Erhaltene wurde zu Natriumhydrid (1,505 mg) gegeben, mit Hexan gewaschen und MeI (1,72 ul) wurde nach 1 Stunde zugegeben. Das Erhaltene wurde unter Rückfluß für 3 Stunden erhitzt, unter reduziertem Andruck einkonzentriert und separat mit Säulenchromatographie getrennt (Hexan : Ethylacetat = 30 : 1), um die Verbindung zu erhalten, 10,9 mg (Ausbeute: 71%).
  • IR (unverdünnt): 2927, 1725 cm&supmin;¹
  • Mass (EI): 612 m/e (M&supmin;)
  • ¹H-NMR (404 MHz, CDCl&sub3;): δ 5,38 (s, 1H), 3,22 (t, 1H), 3,98, 3,88 (ABq, 2H, J = 6,83 Hz), 3,59 (s, 3H), 3,36, 3,28 (ABq, 2H, J = 9,28 Hz) 3,32 (s, 3H), 2,20 (d, 1H, J = 10,3 Hz), 1,12, 1,08, 0,78 (jedes s, 3H), 0,92 (d, 3H, J = 3,42 Hz), 0,83 (d, 3H, J = 7,32 Hz), 0,85 (s, 9H). 0,00 (s, 6H)
    • BEISPIEL 25: HERSTELLUNG VON METHYL A(1)-NORURSA-2- METHYLOXYMETHYL-2,12-DIEN-23-HYDROXY-28-OAT (23)
  • Verbindung (22), wie oben erhalten, wurde unter reduziertem Druck getrocknet und in wasserfreiem THF gelöst.
  • Tetrabutylammoniumflorid (5 ul) wurde zugegeben. Das Erhaltene wurde unter reduziertem Druck einkonzentriert und separat mit Säulenchromatographie aufgereinigt (Hexan : Ethylacetat = 10 : 1), um die Verbindung zu erhalten, 4 mg (Ausbeute: 70,2%).
  • Mass (EI): 498 m/e (M&spplus;)
  • ¹H-NMR (400 MHz, CDCl&sub3;): δ 5,39 (s, 1H), 5,24 (t, 1H), 4,06, 3,92 (ABq, 2H, J = 13,7 Hz), 3,61 (s, 3H), 3,45, 3,36 (ABq, 2H, J = 1026 Hz), 3,39 (s, 3H), 2,23 (d, 1H, J = 11,7 Hz), 1,17, 1,12, 0,95, 0,81 (jedes s, 3H), 0,90 (d, 3H, J = 7,32 Hz), 0,86 (d, 3H, J = 6,35 Hz)
    • EXPERIMENTELLES BEISPIEL 1: CYTOTOXIZITÄT DER VERBINDUNGEN
  • Die Cytotoxizität der Verbindungen wurde unter Verwendung von P388 Lymphoid-Neoplasmazelllinie und mit dem MTT-Assay bestimmt, ein System, welches die Cytotoxizität von Komponenten, die von natürlichen Produkten stammen, untersucht. Wenn man berücksichtigt, dass die klinische Verwendung von Asiatsäurederivaten bisher auf die Haut und dergl. beschränkt ist, wurde deren cytotoxische Wirkung unter Verwendung von einer Melanomazelllinie (Malme-3M) und einer Normalzelllinie (Detoit 551) untersucht.
  • Bei einer Verbindung wird ein Wert von bis zu 4 ug/ml ED&sub5;&sub0; als cytotoxisch angesehen. Die Ergebnisse wurden aufgrund dieser Basis evaluiert.
  • Das experimentelle Verfahren ist im folgenden beschrieben:
  • Die Zellen wurden mit verschiedenen Konzentrationen von Asiatsäurederivaten in Mikrotiterplatten in einem Inkubator (37ºC, 5% CO&sub2;) für einen Tag inkubiert. 3-(4,5- Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl-tetrazoliumbromin (MTT, Sigma, St. Louis, MO, USA) Lösung wurde dazugegeben und die Menge an so gebildetem Formazan wurde mit einem spektroskopischen Verfahren analysiert. Als Maßstab für die Cytotoxizität wurde die ED&sub5;&sub0; verwendet (Konzentration einer Verbindung, die 50% des Zellwachstums hemmt). Als Kontrolle wurde der ED&sub5;&sub0;-Wert von Adriamycin verwendet. Tabelle 1 Tabelle 2
    • EXPERIMENTELLES BEISPIEL 2: LEBER-SCHÜTZENDE WIRKUNG UND BEHANDLUNG MIT ASIATSÄUREDERIVATEN BEI LEBERZELLTOXIZITÄT INDUZIERT DURCH KOHLENSTOFFTETRACHLORID ODER GLACTOSAMIN
  • Die Leber-schützende Wirkung und die Behandlung mit Methyl A(1)-norursa-2-methyl-2,12-dien-23-hydroxy-28-oat, Methyl A(1)-norursa-2-methyl-2,12-dien-23-succinyloxy-2- formyl-28-oat, Methyl A(1)-norursa-2,12-dien-23-glutaryloxy- 2-formyl-28-oat, Methyl A(1)-norursa-2,12-dien-23-benzoyloxy- 2-formyl-28-oat, Methyl A(1)-norursa-2,12-dien-23- cinnamyloxy-2-formyl-28-oat und Methyl A(1)-norursa-2- hydroxymethyl-2,12-dien-23-hydroxy-28-oat der Verbindungen (1) gemäß der vorliegenden Erfindung wurden untersucht.
  • Für das Experiment wurden männlicher Wistars mit 150 bis 200 g Körpergewicht verwendet. Vor dem Experiment fasteten die Tiere für einen Tag und die Leberzellen wurden in einem 2-Schritt-Kollagenase-Ausflußverfahren [D.M. Crisp and C.I. Pogson, Biochem., 126, 1009 (1972)] isoliert, wobei dieses Verfahren etwas modifiziert gegenüber dem von Berry and Friend [M.N. Berry, D.S. Friend, J. Cell Biol., 43, 5006 (1969)] ist.
  • Die Toxizität der Leberzellen bei Verwendung von Tetrachlorkohlenstoff (CCl&sub4;) wurde durch Kultivieren der isolierten Leberzellen für 24 Stunden induziert und anschließendem weiteren Kultivieren in einem Kulturmedium, enthaltend 10 mmol Tetrachlorkohlenstoff für 1,5 Stunden. [Y. Kiso, Y. Suzuki and H. Hikino, Planta. Med., 49, 222 (1983)].
  • Andererseits wurde die Toxizität der Leberzellen durch Galactosamin durch Kultivieren der isolierten Leberzellen für 24 Stunden induziert und anschließend werden sie in einem Kulturmedium, enthaltend 1,5 mM Galactosamin für 14 Stunden weiter kultiviert [Y. Kris, M. Tohkin and H. Hikino, J. Nat. Prod., 46, 841 (1983)].
  • Die Leberzellen, bei denen Toxizität induziert wurde, wurden in einem Kulturmedium, enthaltend die Verbindung in einer Konzentration von 5 ug/ml oder 50 ug/ml kultiviert. Anschließend wurde die kultivierte Lösung entnommen, um die Aktivität der Glutaminpyruvintransaminase (GPT) mittels dem Reitman-Frankel-Verfahren zu messen. [S. Reitman and S. Frankel, Am. J. Cli. Pathol., 28, 56 (1957)].
  • GPT-Wert der normalen Leberzellen ohne Induktion der Toxizität wurde als 100% bestimmt und die Werte der Toxizität-induzierten Leberzellen ohne Behandlung mit irgendeiner Verbindung wurde als 0% bestimmt. Dann wurde der Effekt der Regenerierung bei Lebertoxizität durch die Verbindung als relativer Schutz (%) ausgedrückt. Die Ergebnisse sind in der Tabelle 3 gezeigt. Tabelle 3
  • Methyl A(1)-norursa-2,12-dien-23-succinyloxy-2-formyl-28-oat, Methyl A(1)-norursa-2-hydroxymethyl-2,12-dien-23-hydroxy-28- oat, die Asiatsäurederivate mit modifiziertem A-Ring der chemischen Formel (1) gemäß der vorliegenden Erfindung zeigten zu 23-41% einen Leberschutz bei Leberzellen mit Toxizität, induziert durch 5 ug/ml Tetrachlorkohlenstoff und 40-72% Leberschutz bei Leberzellen mit einer Toxizität, induziert durch Galactosamin.
    • FORMULIERUNGSBEISPIELE 1. Herstellung von Tabletten (Antikrebsmittel)
  • Aktive Komponente 2,5 mg
  • Lactose BP 151,0 mg
  • Stärke BP 30,0 mg
  • Vor-gelatinisierte Maisstärke BP 15,0 mg
  • Die aktive Komponente wurde gesiebt, mit Lactose, Stärke und vor-gelatinisierter Maisstärke vermischt. Entsprechende Mengen an gereinigtem Wasser wurden dazugegeben und die Mischung wurde granuliert. Nach dem Trocknen wurden die Körnchen mit Magnesiumstearat vermischt und zu Tabletten gepreßt.
    • 2. Herstellung einer Injektion (Antikrebsmittel)
  • Aktive Komponente 800 ug/ml
  • Verdünnte Salzsäure BP Bis zu pH 3,5
  • Injizierbares Natriumchlorid BP Maximal 1 ml
  • Die aktive Komponente wurde in entsprechender Menge injizierbarem Natriumchlorid BP gelöst und der pH der erhaltenen Lösung wurde auf 3,5 durch Zugabe von verdünnter Salzsäure BP eingestellt. Anschließend wurde das Volumen der Lösung durch Zugabe von injizierbarem Natriumchlorid BP eingestellt und die Lösung wurde kräftig gemischt. Die Lösung wurde in 5 ml Typel-Ampullen, hergestellt aus transparentem Glas, gefüllt und die Ampullen wurden unter dem oberen Luftgitter durch Verschmelzen des Glases geschlossen. Anschließend wurden die Ampullen durch Autoklavieren bei 120ºC für 15 Minuten oder länger sterilisiert, um eine Injektion zu ergeben.
    • 3. Herstellung von Tabletten (Leber-schützendes Mittel)
  • Methyl A(1)-norursa-2-methyl-2,12-dien-28-oat 5,0 mg
  • Lactose BP 150,0 mg
  • Stärke BP 30,0 mg
  • Vor-gelatinisierte Maisstärke BP 15,0 mg
  • Magnesiumstearat 1,0 mg
  • Methyl A(1)-norursa-2-methyl-2,12-dien-28-oat wurde gesiebt und mit Lactose, Stärke und vor-gelatinisierter Maisstärke vermischt. Entsprechende Mengen an gereinigtem Wasser wurden dazugegeben und die Mischung wurde granuliert. Nach dem Trocknen wurden die Körnchen mit Magnesiumstearat vermischt und zu Tabletten gepreßt.
    • 4. Herstellung von Kapseln (Leber-schützendes Mittel)
  • Methyl A(1)-norursa-2-methyl-2,12-dien-28-oat 5,0 mg
  • Stärke BP 100,0 mg
  • Magnesiumstearat BP 1,0 mg
  • Methyl A(1)-norursa-2-methyl-2,12-dien-28-oat wurde gesiebt und mit den Vehikeln vermischt. Die Mischung wurde in Gelatinekapseln gefüllt.
    • 5. Herstellung einer Injektion (Leber-schützendes Mittel)
  • Methyl A(1)-norursa-2-hydroxymethyl-2,12-dien-23-hydroxy-28-oat 1000 ug/ml
  • Verdünnte Salzsäure BP bis zu pH 3,5
  • Injizierbares Natriumchlorid BP Maximal 1 ml
  • Methyl A(1)-norursa-2-hydroxymethyl-2,12-dien-23-hydroxy-28- oat wurde in entsprechender Menge injizierbarem Natriumchlorid BP gelöst und der pH der erhaltenen Lösung wurde auf 3,5 durch Zugabe von verdünnter Salzsäure BP eingestellt. Anschließend wurde das Volumen der Lösung durch Verwendung von injizierbarem Natriumchlorid BP eingestellt und die Lösung wurde kräftig gerührt. Die Lösung wurde in 5 ml Typel-Ampullen aus transparentem Glas gefüllt und die Ampullen wurden unter dem oberen Luftgitter verschlossen durch Verschmelzen des Glases. Anschließend wurden die Ampullen durch Autoklavieren bei 120ºC für 15 Minuten oder länger sterilisiert, um eine Injektion zu ergeben.
  • Wie aus den experimentellen Beispielen zu erkennen ist, zeigen die Asiatsäurederivate gemäß der vorliegenden Erfindung einen hervorragenden Effekt bei den Cytotoxizitätsexperimenten gegenüber Melanomazellen und einen Leber-schützenden Effekt auf Leberzellen bei einer Toxizität injiziert durch Tetrachlorkohlenstoff oder Galactosamin.

Claims (3)

1. Asiatische Säure-Derivate mit einem modifizierten A- Ring, dargestellt durch die allgemeine Formel (1), oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz oder Ester davon:
worin R&sub1; eine Niederalkylgruppe mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen, eine Alkoxygruppe mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen, eine Hydroxymethylgruppe, eine Halogenmethylgruppe oder eine Aldehydgruppe, die mit Ethandithiol geschützt sein kann, darstellt; R&sub2; eine Niederalkylgruppe mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen, eine t-Butyldimethylsilyloxymethylgruppe, eine Halogenmethylgruppe, -CH&sub2;OCO(CH&sub2;)nCO&sub2;H (n = 0-3), -CH&sub2;OCOCHCHC&sub6;H&sub5; oder eine Hydroxymethylgruppe, die durch eine Acetyl- oder Benzoylgruppe geschützt sein kann, darstellt; R&sub3; Wasserstoff oder eine Methylgruppe darstellt; und die Doppelbindung in der 2-Position reduziert sein kann, um eine Einfachbindung zu bilden.
2. Antineoplastisches Mittel, enthaltend ein Asiatische Säure-Derivat mit einem modifizierten A-Ring, das durch Formel (1) dargestellt wird, oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz oder Ester davon, gemäss Anspruch 1.
3. Leberschützendes Mittel, enthaltend ein Asiatische Säure-Derivat mit einem modifizierten A-Ring, welcher durch Formel (1) dargestellt wird, oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz oder Ester davon, gemäss Anspruch 1.
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