DE69304573T2

DE69304573T2 - Aminsäurederivate mit antithrombotischer Wirkung

Info

Publication number: DE69304573T2
Application number: DE69304573T
Authority: DE
Inventors: Georg Kottirsch; Rainer Metternich
Original assignee: Sandoz AG
Current assignee: Novartis AG
Priority date: 1992-03-10
Filing date: 1993-03-08
Publication date: 1997-03-20
Anticipated expiration: 2013-03-09
Also published as: NO930830L; FI931023A0; SG47059A1; KR930019690A; FI931023L; JPH0665175A; FI931023A7; TW256828B; SK17093A3; DK0560730T3; NO930830D0; IL104972A0; NO300778B1; PH30893A; NZ247084A; ES2090934T3; AU3406993A; EP0560730A3; ATE142618T1; CZ36193A3

Description

Die Erfindung betrifft Derivate von β-Aminosäuren, die Isostere der Dipeptideinheit Gly-Asp sind. Die Verbindungen der Erfindung sind Pseudopeptide mit antithrombotischer Wirkung. Insbesondere sind die Verbindungen bemerkenswert; weil sie die Bindung von Fibrinogen an den Fibrinogenrezeptor auf Blutplättchen hemmen (Glycoprotein GP IIb/IIIa).
Ein entscheidender Schritt bei der Thrombusbildung ist die Vernetzung von Blutplättchen durch Fibrinogenmoleküle. Ein Erfordernis dafür ist die Aktivierung der Plättchen diirch Agonisten wie Thrombin oder Adenosindiphosphat (ADP). Diese Aktivierung bewirkt eine Umstrukturierung der Zellmembran, wodurch das GPIIb/IIIa in aktiver Form exponiert wird
GPIIb/IIIa gehört zu der Familie der Haftrezeptoren, die als Integrine bekannt sind. Weitere Liganden flir GPIIb/IIIa, außer Fibrinogen, sind Fibronectin, Vitronectin und der von Willebrand-Faktor. Diese Liganden spielen eine wichtige Rolle bei blutstillenden Prozessen, da sie die Haftung und Zusammenballung der Plättchen bzw. Thrombozyten bewirken. Eine spezifische therapeutische Hemmung dieser Wechselwirkungen könnte eine entscheidende Stufe in der Thrombusbildung beeinflussen. Die Bindung von Fibrinogen und anderen Liganden erfolgt durch die Peptidsequenz Arg-Gly-Asp (RGD) (E. Ruoslahti, M. Pierschbacher, Cell 1986, 44, 517-18).
Fibrinogen besitzt eine weitere Peptidsequenz (His-His-Leu-Gly-Gly-Ala-Lys-Gln-Ala-Gly-Asp-Val) am C-Ende der gamma-Kette mit Affinität flir den Fibrinogenrezeptor Kleine synthetische Peptide, die diese Sequenzen enthalten, können die Bindung von Fibrinogen, Fibronectin, Vitronection und dem von Willebrand- Faktor an GPIIb/IIIa hemmen und können damit die Plättchenzusammenballung hemmen (Plow et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1985, 82, 8057-61; Ruggeri et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1986, 5708-12; Ginsberg et al., J. Biol. Chem. 1985, 260, 3931-36; Gartner et al., J. Biol.Chem. 1987, 260, 11, 891-94).
Die vorliegende Erfindung liefert analoge Pseudopeptide Arg-Gly-Asp, bei denen die Gly-Asp-Einheit durch Derivate von β-Aminosäuren ersetzt ist und bei denen Arg in den meisten Fällen durch eine Benzamidincarbonsäure ersetzt ist. Die neuen Pseudopeptide hemmen die Plättchenzusmmenballung und die Thrombusbildung.
Somit liefert die vorliegende Erfindung ein Pseudopeptid der Formel I in freier Form oder in Salzform
worin
R&sub1; eine Gruppe der Formel -COOH, -CCOM oder -COO(C&sub1;-C&sub4;)-Alkyl, bevorzugt COOH ist, worin
M ein Alkali- oder Erdalkalimetall, bevorzugt Li ist,
X -CH&sub2;-, -CO-, -C*HOH- oder -C*HO((C&sub1;-C&sub4;)Alkyl)-, bevorzugt -CH&sub2;- ist,
oder auch bevorzugt X und R&sub1; zusammen eine
Gruppe bilden.
Y -(CH2)m- ist;
m 1 oder 2, bevorzugt 2 ist.
A eine Gruppe der Formel oder bevorzugt
ist, worin
k 3,4,5 oder 6 ist,
o 3,4 oder 5 ist und
p 0, 1 oder 2, bevorzugt 1 ist.
B entweder eine Gruppe der Formel
ist, worin
q 1 oder 2, bevorzugt 1 ist und
R&sub3; ein (C&sub1;-C&sub4;)-Alkyl-, 1-Adamantyl-, Trimethylsilyl-, 1-Naphthyl-, Phenyl-, 3-Indolyl- oder (C&sub1;-C&sub4;)- Alkoxyphenylrest, bevorzugt (CH&sub3;)&sub2;CH, (C&sub1;-C&sub4;)-Alkoxyphenylrest (zum Beispiel ein p-Methoxyphenylrest) oder ein 1-Adamantylrest, insbesondere (CH&sub3;)&sub2;CH ist oder
B eine Gruppe der Formel
ist, worin
r 0, 1 oder 2, bevorzugt 0 ist und
R&sub4; ein (C&sub1;-C&sub4;)-Alkyl-, 2-Propyl-, tert.-Butyl-, Phenyl-, p- (C&sub1;-C&sub4;)-Alkoxyphenyl-, 1-Naphthyl-, Tolyl-, Mesyl- oder Trimethylsilyl-, bevorzugt Mesylrest ist.
Jedes mit einem Stern (*) bezeichnete asyinmetrische C-Atom in den Formeln kanii entweder die R- oder S-Konfiguration haben.
In den Formeln ist ein (C&sub1;-C&sub4;)-Alkylrest bevorzugt ein Methylrest und ein (C&sub1;-C&sub4;)-Alkoxyrest ist bevorzugt ein Methoxyrest. Die Schutzgnippe Z ist bevorzugt eine Benzyloxycarbonyl- oder tert.-Butyloxycarbonylgruppe.
In der vorliegenden Beschreibung umfässen, wenn nicht anders angegeben, Ausdrucke wie "Verbindungen der Formel I" die Verbindungen in Salzform ebenso wie die Verbindungen in freier Form.
Bevorzugte Verbindungen sind solche der Formel I' Formel I'
worin
R&sub1; und m wie oben definiert sind, s 0 oder 1 ist, R&sub6; H, OH oder O(C&sub1;-C&sub4;)-Alkyl ist oder
R&sub1; und R&sub6; zusammen eine -O-CO-Gruppe bilden,
B' entweder eine Gruppe der Formel
ist, worin R&sub3; und q wie oben definiert sind, oder
B' eine Gruppe der Formel
worin R&sub4; und r wie oben definiert sind, ist.
Besonders bevorzugte Verbindungen sind solche mit der Formel I"
worin R&sub1;, R&sub6;, m und s wie oben definiert sind und
B" eine Gruppe der Formel
ist, worin q und R&sub3; wie oben definiert sind
Die am meisten bevorzugten Verbindungen der Formel I1 sind solche mit den folgenden Formeln II, III, IV, V, VI, VII:
Dies sind die Verbindungen der Beispiele 2, 3, 6, 9, 8 bzw. 7. Die Verbindungen der Formel I der Art, die die Verbindungen der Formeln II bis V oben einschließen, können synthetisiert werden unter Verwendung von Verfahren, die analog dem folgenden Syntheseschema sind. Syntheseschema I
In den obigen Formeln sind m, A, B, X, Y und R&sub1; wie oben definiert und Z ist eine Schutzgruppe.
In Verbindung mit dem Syntheseschema 1 werden Verbindungen der Formel I mit X = Y = CH&sub2;, R&sub1; = COOH und m 1 oder 2 aus Verbindung X durch Behandlung mit Triiluoressigsäure bei Raumtemperatur und gegebenenfalls anschließendes Freisetzen der Verbindung der Formel I aus dem so gebildeten Trifluoracetat hergestellt.
Die Verbindung X wird erhalten aus dem mit Z geschützten Ester IX, indem die Aminogruppe mit Isovaleriansäure oder p-Methoxyphenylpropansäure (abhängig vom Rest B) gekuppelt wird, wobei DCC und HOBT zugegeben werden, dann der Methylester mit LiOH hydrolysiert wird, die Säure in den tert.-Butylester mit Hilfe von tert.-Butyl-2,2,2-trichloracetimidat umgewandelt wird, die Schutzgruppe Z unter reduzierenden Bedingungen mit H&sub2;/Pd-C entfernt wird und anscmießend mit einem geeigneten Rest A gekuppelt wird [zum Beispiel bedeutet A (p-Amidinophenyl)-(CH2)s-CCOH, worin s wie oben definiert ist], wiederum unter Zugabe von DCC und HOBT. Der Methylester IX wird aus der mit Z = Boc geschützten Aminosäure VIII erhalten, durch Kettenverlängerung der Carbonsäure unter Verwendung des Diazomethan/Ag&sub2;O-Verfahrens (Helv. Chim. Act. 58, 969 (1975)) und indem die Boc-Gruppe mit Trifluoressigsaure bei Raumtemperatur entfernt wird.
Außerdem können Verbindungen der Formel I der Art, die die Verbindungen der Formeln VI und VII oben einschließt, unter Verwendung von Verfaliren analog zu dem folgenden Syntheseschema 2 hergestellt werden. Syntheseschema 2
In den obigen Formeln sind m, A, B, X, Y und R&sub1; wie oben definiert und Z ist eine Schutzgruppe.
Gemäß dem Syntheseschema 2 können Verbindungen der Formel I, worin m 1 ist, X und R&sub1; zusammen eine > C*H-O-CO-Gruppe bilden und Y eine CH&sub2;-Gruppe ist, aus Verbindung XIV hergestellt werden, indem mit einem geeigneten Rest A (analog zu Syntheseschema 1) gekuppelt wird, die Schutzgruppe unter reduzierenden Bedingungen mit H&sub2;/Pd-C entfernt wird und anschließend mit einem geeigneten Rest B (analog zu Syntheseschema 1) gektippelt wird und anschließend die tert.-Butyldimethylsilyl- und tert.-Butylschutzgruppen mit Trifluoressigsäure bei Raumtemperatur entfernt werden und gegebenenfalls die Verbindung der Formel I aus dem so gebildeten Trifluoracetat freigesetzt wird. Verbindung XIV wird aus Verbindung XIII erhalten, indem die Carbonsäure in ein mit Z geschütztes Amin mit Diphenylphosphorylazid und Triethylamin in Gegenwart von Benzylalkohol umgesetzt wird und die Azidogruppe mit Triphenylphospliin in Tetrahydrofüran reduziert wird. Die Carbonsäure XIII wird aus Verbindung XII durch enantioselektive Einführung an der sauren Seitenkette in drei Stufen erhalten: a) es wird mit dem Evans-Oxazolidinon gekuppelt, um eine chirale Hilfsgruppe einzuführen (J. Am. Chem. Soc. 1990; 112, 4011); b) das Amidenolat wird mit Li-Hexamethyldisilazid und durch Reaktion mit Bromessigsäure-tert.-butylester gebildet; c) die chirale Hilfsgruppe wird mit Li-Perhydroxid entfernt. Die Azidocarbonsäure XII wird aus dem Lacton XI erhalten durch Mesylierung des Alkohols mit Methansulfonylchlorid, Azidisierung mit Natriumazid, Öffnen des Lactons mit kaustischer Sodalösung in Ethanol und Reaktion mit tert.-Butyldimethylsilylchlorid in Gegenwart von Imidazol, um die Alkoholschutzgruppe einzuführen.
Die Verbindungen der Formel I hemmen die Bindung von Fibrinogen an den Fibrinogenrezeptor der Blutplättchen (Glycoprotein GP IIb/IIIa). Aufgrund dieser Eigenschaft verhindern die Verbindungen das Zusammenballen von menschlichen Blutplättchen und die Bildung von geronnenen Klumpen und können daher verwendet werden, um Thrombose, Schlaganfall. Herzinfarkt, Entzündungen, Atherosklerose und Tumore zu verhindern und zu behandeln. Weitere therapeutische Gebiete der Verwendung sind: Osteoporose, akuter Wiederverschluß nach PTCA und als Zusatz während der Thrombolyse. Die in der Beschreibung und den folgenden Beispielen verwendeten Abkürzungen haben die folgenden Bedeutungen:
Z = Benzoyloxycarbonyl
BOC = tert.-Butyloxycarbonyl
DCC = Dicyclohexylcarbodiimid
HOBT = Hydroxybenzotriazol
DMF = Dimethylformamid
THF = Tetrahydrofuran
TFA = Trifluoressigsäure
EtOAc = Ethylacetat
RP = Reversed Phase
Pd/C = Palladium-Ruß-Katalysator enthaltend 10% Palladium
LiOH = Lithiumhydroxid
PTCA = perkutanluminale Koronarangioplastie
TBDMS = tert.-Butyldimethylsilylchlorsilan
MeOH = Methanol
LiHMDS = Lithiumhexamethyldisilazid
DPPA = Diphenylphosphorylazid
EtOH = Ethanol
NMM = N-Methylmorpholin

Beispiel 1

(S)-3-(N-Tosylamino)-6-[N-(p-amidinophenylacetyl)amino]hexansäure

A) (S)-3-Amino-6-[N-(benzyloxycarbonyl)amino]hexansäuremethylestertrifluoracetat

0,69 ml Chlorameisensäureisobutylester werden tropfenweise zu einer Lösung von 1,95 g Boc- Orn(Z)-OH und 0,74 ml NEt&sub3; in 12 ml THF bei -15ºC zugegeben. Nach 30 Minuten bei -15ºC wird das ausgefällte Hydrochlorid abiltriert und das Filtrat bei -15ºC mit 40 ml (8 mmol) einer etherischen Lösung von Diazomethan vermischt. Die Rektionsmischung wird 4 Stunden bei 0ºC gerülut und weitere 16 Stunden bei 4ºC stehen gelassen. Wasser wird zugegeben und die Lösung mit Ether exirahiert. Die Etherphase wird mit gesättigter wäßriger Bicarbonatlösung gewaschen, uber Natriumsulfat getrocknet und durch Verdampfen eingeengt. Der erhaltene Rückstand wird in 15 ml Methanol aufgenommen, mit 246 mg Silber(I)oxid vermischt und 12 Stunden lang am Rückfluß erhitzt. Das feste Material wird durch Filtration entfernt, das Methanol verdampft und der Rückstand auf Silicagel (Etylacetat/Hexan 1/1) chromatographiert. Das so isolierte Produkt ist (S)-3-N-Boc-Amino-6-N-Z- aminohexansäuremethylester. MS: 395 (M+H)&spplus;.
Das erhaltene Produkt wird bei 0ºC mit 10 ml Methylenchlorid und 10 ml Trifluoressigsäure vermischt, 1 Stunde bei Raumtemperatur geruhrt, das Lösungsmittel durch Vakuumdestillation entfernt und der Rückstand 24 Stunden lang im Hochvakuum getrocknet. Das (S)-3-Amino-6-[N-(benzyloycarbonyl)amino]hexansäuremethylestertrifluoracetatprodukt wird als farbloser Feststoff erhalten.

B) (S)-3-N-Tosylamino-6-N-Z-aminohexansäuremethylester

1,3 g des Trifluoracetats von Stufe A) werden in 5 ml DMF zusammen mit 0,75 ml Triethylamin gelöst und dann werden 468 mg Tosylchlorid zugegeben. Nach 2 Stunden wird Wasser zugegeben und eine Extraktion mit Ether durchgeführt. Die Etherphase wird mit Wasser gewaschen, über Natriumsulfat getrocknet, der Ether verdampft und der Rückstand auf Silicagel (Ethylacetat/Hexan 1/1) chromatographiert. Das so isolierte Produkt ist (S)-3-N-Tosylamino-6-N-Z-aminohexansäuremethylester; MS: 449 (M+H)&spplus;.

C) (S)-3-(N-Tosylamino)-6-[N-(p-amidinophenylacetyl)amino]hexansaure

Das gemäß Stufe B) erhaltene Produkt wird in 20 ml Methanol gelöst und in Gegenwart von 0,3 g Pd/C (10%) und 1,34 mi in Salzsaure hydriert. Wenn die Reaktion beendet ist, wird der Katalysator durch Filtration entfernt, das Methanol verdampft und der Rückstand im Hochvakuum getrocknet. 500 mg (S)-3-(N-Tosylamino)-6-aminohexansäuremethylesterhydrochlorid werden als farbloser Schaum erhalten. 0,5 g des Hydrochlorids, 373 mg N-Boc-p-Amidinophenylessigsäure (hergestellt durch Bocylierung von p-Amidinophenylessigsäure (Pharmazie 29, 256-262)), 0,19 ml Triethylamin und 199 mg HOBT werden in 10 ml DMF gelöst und mit 276 mg DCC vermischt. Nach 16 Stunden bei Raumtemperatur wird der ausgefällte Feststoff durch Filtration entfernt, das DMF verdampft und der Rückstand in Ethylacetat aufgenommen. Die Ethylacelatphase wird mit Wasser gewaschen über Natriumsülfat getrocknet, durch Verdampfen eingeengt und der Rückstand auf Silicagel (Ethylacetat) chromatographiert. Das erhaltene Produkt wird mit einer Lösung von 0,2 ml Anisol in 5 ml TFA vermischt 2 Stunden bei Raumtemperatur gerührt und tropfenweise zu 300 ml Ether zugegeben. Der ausgefällte Feststoff wird abfiltriert, in einer Mischung aus 2 ml Methanol und 1 ml Wasser gelöst und mit 57 mg LiOH-H&sub2;O vermischt Nach 5 Stunden bei Raumtemperatur wird das Methanol verdampft und die wäßrige Lösung mit 0,13 ml TFA neutralisiert. Der ausgefillte Feststoff wird abfiltriert, getrocknet und aus Methanol/Ether umkristalllisiert. Das (S)-3-(N-Tosylamino)-6-[N-(p-amidinophenylacetyl)amino]hexansäuretriuoracetatprodukt wird als weißer Feststoff erhalten, MS: 461 (M+H)&spplus;. Die freie Verbindung wird aus dem Trifluoracetat in bekannter Weise erhalten.

Beispiel 2

(S)-3-[N-(3-Methylbutyryl)amino]-6-[N-(p-amidinophenylacetyl)amino]hexansäure

A) (S)-3-[N-(3-Methylbutyryl)aininoj-6-N-Z-aminohexansäuremethylester

1,3 g des Trifluoracetats von Stufe A) von Beispiel 1, 250 mg Isovaleriansaure, 0,34 ml Triethylamin und 363 mg HOBT werden in 5 ml DMF gelöst und mit 505 mg DCC vermischt. Nach 16 Stunden wird der ausgefällte Niederschlag durch Filtration entfernt, das DMF verdampft und der Rückstand in Ethylacetat gelöst. Die Ethylacetatphase wird mit gesättigter wäßriger Bicarbonadösung und Wasser gewaschen, über Natriumsulfat getrocknet und das Lösungsmittel im Vakuum entfernt. Der Rückstand wird durch Umkristallisieren aus Ethylacetat/Ether gereinigt und das (S)-3-[N-(3-Methylbutyryl)amino]-6-N-Z-aminohexansäuremethylesterprodukt wird in Form farbloser Kristalle erhalten. MS: 379 (M+H)&spplus;.

B) (S)-3-[N-(3-Methylbutyryl)amino]-6-[N-(p-amidinophenylacetyl)amino]hexansaure

560 mg des Produkts der Stufe A) von Beispiel 2 werden in 20 ml Methanol gelöst und in Gegenwart von 0,3 g Pd/C (10%) und 1,41 ml in Salzsaure hydriert. Nach Aufarbeitung, wie in Stufe
C) von Beispiel 1 beschrieben, wird (S)-3-[N-(3-Methylbutrryl)amio]-6-aminohexansäuremethylesterhydrochlorid in Form eines farblosen Öls erhalten. 400 mg des Hydrochlorids und 392 mg N-Boc-p- Amidinophenylessigsäure zusammen mit 0,2 ml Triethylamin, 259 mg HOBT und 290 mg DCC werden, wie in Stufe C) von Beispiel 1 beschrieben, umgesetzt und aufgearbeitet. Nach Abspaltung der Boc-Gruppe mit TFA und Hydrolyse des Methylesters mit LiOH-H&sub2;O, aaalog zu Stufe C) von Beispiel 1, wird das erhaltene rohe Produkt aus Methanol umkristallisiert. Das (S)-3-[N-(3-Methylbutyryl)amiol-6-[N-(p-amidinophenylacetyl)amino]hexansäuretrifluoracetatprodukt wird als weißes Pulver isoliert; MS: 391 (M+H)&spplus;. Die freie Verbindung wird aus dem Trifluoracetat in bekannter Weise erhalten.

Beispiel 3

(S)-3-N-[3-(p-Methoxyphenyl)propionyl]amino-6-[N-(p-amidinophenylacetyl)amino]hexansäure

A) (S)-3-N-(3-(p-Methoxyphenyl)propionyl]amino-6-N-Z-aminohexansaüremethylester

0,7 g des Trifluoracetats von Stufe A) von Beispiel 1 und 256 mg 3-(p-Methoxy)propionsäure zusammen mit 0,21 ml Triethylamin, 256 mg HOBT und 313 mg DCC werden, wie in Stufe A) von Beispiel 2 beschrieben, umgesetzt und aufgearbeitet. Das rohe Produkt wird aus Ether Umkristallisiert. Das (S)-3-N-[3-(p- Methoxyphenyl)propionyl]amino-6-N-Z-aminohexansauremethylesterprodukt wird in Form weißer Kristalle erhalten, MS: 457 (M+H)&spplus;.

B) (S)-3-N-[3-p-Methoxyphenyl)propionyl]amino-6-[N-(p-amidinophenyl)amino]hexansäure

440 mg des Methylesters von Stufe B) von Beispiel 3 werden analog zu Stufe C) von Beispiel 1 hydriert und das erhaltene Hydrochlorid wird mit 164 mg N-Boc-p-Amidinophenylessigsäure, 0,13 ml Triethylamin, 164 mg HOBT und 200 mg DCC, wie in Stufe C) von Beispiel 1 beschrieben, umgesetzt und aufgearbeitet. Die Schutzgruppen des Produktes werden mit TFA und LiOH-H&sub2;O analog zu Stufe C) von Beispiel 1 abgespalten und das rohe Produkt wird aus Methanol/Wasser umkristallisiert. Das (S)-3-N-[3-(p-Methoxyphenyl)propionyl]amino-6-[N-(p-amidinophenylacetyl)amino]hexansäuretrifluoracetatprodukt wird als weißes Pulver erhalten. MS: 583 (M+H)&spplus;. Die freie Verbindung wird aus dem Trifluoracetat in bekannter Weise hergestellt.

Beispiel 4

(S)-3-[N-)Adamant-1-ylacetyl)amino]-6-[N-(p-amidinophenylacetyl)amino]hexansäure

A) (S)-3-[N-(Adamant-1-ylacetyl)amino]-6-N-Z-aminohexansäuremethylester

0,7 g des Trifluoracetats von Stufe a) von Beispiel 1 werden mit 246 mg Adamant-1-ylessigsäure, 0,21 ml Triethylamin, 246 mg HOBT und 331 mg DCC, wie in Stufe A) von Beispiel 2 beschrieben, umgesetzt und aufgearbeitet. Das rohe Produkt wird auf Silicagel (Ethylacetat) chromatographiert und das (S)-3-[N- (Adamant-1-ylacetyl)amino]-6-N-Z-aminohexansäuremethylesterprodukt wird als farbloses Öl isoliert; MS 471 (M+H)&spplus;.

B) (S)-3-[N-(Adamant-1-ylacetyl)amino-6-N-Z-aminohexansäure-tert.-butylester

460 mg des Methylesters von Stufe A) von Beispiel 4 werden in 4 inl MeOH und 2 ml Wasser gelöst und mit 84 mg LiOH-H&sub2;O verrischt. Nach 4 Stunden bei Raumtemperatur wird die Mischung mit 1n Salzsäure neutralisiert und mit Ethylacetat extrahiert. Die Ethylacetatphase wird über Natriumsulfat getrocknet und das Lösungsmittel im Vakuum entfernt. 400 mg des rohen Produkes werden erhalten, das in 2 mi THF gelöst wird und mit einer Lösung von 479 mg tert.-Butyl-2,2,2-trichloracetimidat in 2,5 mi Cyclohexan vermischt wird. Nach Zugabe von 0,069 ml Bortrifluoretherat wird die Mischung 3 Stunden lang bei Raumtemperatur gerührt. Die Reaktionsmischung wird mit 5% wäßriger Bicarbonatlösung vermischt, mit Ethylacetat extrahiert, die Ethylacetatphase mit gesättigter wäßriger Natriumchloridlösung gewaschen, über Natriumsulfat getrocknet und das Lösungsmittel durch Verdampfen eingeengt. Der Rückstand wird in Methylenchlorid/Hexan 1/1 aufgenommen, das unlösliche Trichloracetamid abfiltriert und das Lösungsmittel verdampft. Das erhaltene rohe Öl wird auf Silicagel (Ethylacetat/Hexan 1/1) chromatographiert, was das (S)-3-[N-(Adamant-1-ylacetyl)amino]-6-N-Z- aminohexansäure-tert.-butylesterprodukt als farbloses Öl ergibt. MS: 513 (M+H)&spplus;.

C) (S)-3-[N-(Adamant-1-ylacetyl)amino]-6-[N-(p-amidinophenylacetyl)amino]hexansäure

225 mg des tert.-Butylesters von Stufe B) von Beispiel 4 werden in 20 ml Ethanol gelöst und in Gegenwart von 0,1 g Pd/C (10%) und 0,028 ml Essigsäure, wie in Stufe C) von Beispiel 1 beschrieben, hydriert. Das erhaltene rohe Produkt wird in 5 ml DMF gelöst und mit 119 ing N-Boc-p-Amidinophenylessigsäure, 0,061 ml Triethylamin, 73 mg HOBT und 90 mg DCC, analog zu Stufe C) von Beispiel 1, umgesetzt. Das nach der Aufarbeitung erhaltene rohe Produkt wird auf Silicagel (Ethylacetat) chromatographiert und das reine Produkt wird mit einer Lösung von 5 ml TFA in 0,2 ml Anisol vermischt.
Nach 3 Stunden bei Raumtemperatur wird die Reaktionsmischung tropfenweise zu 300 ml Ether zugegeben und der ausgefällte Feststoff abfiltriert. Nach Trocknen im Hochvakuum wird das (S)-3-[N-(Adamant- 1-ylacetyl)aminol-6-[N-(p-amidinophenylacetyl)amino]hexansäuretrifluoracetatprodukt als weißes Pulver erhalten; MS: 505 (M+H)&spplus;. Die freie Verbindung wird aus dem Trifluoracetat in bekannter Weise erzeugt.

Beispiel 5

(S)-3-[N-(3-Adamant-1-ylpropionyl)amino]-6-[N-(p-amidinophenylacetyl)amino]hexatuaure

A) (S)-3-[N-(3-Adamant-1-ylpropionyl)aminoj-6-N-Z-aminohexansäuremethylester

(S)-3-[N-(3-Adamant-1-ylpropionyl)amino]-6-N-Z-aminohexansäuremethylester wird erhalten, indem 0,85 g des Trifluoracetats von Stufe A) von Beispiel 1 mit 423' mg 3-Adamant-1-ylpropionsäure, 0,28 ml Triethylamin, 337 mg HOBT und 418 mg DCC umgesetzt werden und anschließend durch Chromatographie (Silicagel, Ethylacetat), analog zu Stufe A) von Beispiel 2 gereinigt wird, MS: 485 (M+H)&spplus;.

B) (S)-3-[N-(3-Adamant-1-ylpropionyl)amino]-6-N-Z-aminohexansäure-tert.-butylester

500 ing des Methylesters von Stufe A) von Beispiel 5 werden, wie in Stufe B) von Beispiel 4 beschrieben, mit 173 ing LiOH-H&sub2;O hydrolysiert und mit 575 mg tert.-Butyl-2,2,2-trichloracetimidat und 0,06 ml Bortrifluoretherat umgesetzt. Nach Aufarbeitung, wie in Stufe B) von Beispiel 1 beschrieben, wird das (S)-3-[N-(3- Adamant-1-ylpropionyl)amino]-6-N-Z-aminohexansäure-tert.-butylesterprodukt isoliert; MS. 527 (M+H)&spplus;.

C) (S)-3-[N-(3-Adamant-1-ylpropionyl)amino]-6-[N-(p-amidinophenylacetyl)amino]hexansäure

510 mg des Produkts von Stufe B) von Beispiel 5 werden analog zu Stufe C) von Beispiel 4 hydriert, mit 430 mg N-Boc-p-Amidinophenylessigsäure gekuppelt und nach Reinigung durch Chromatographie (Silicagel/Ethylacetat) werden bei dem erhaltenen Produkt die Schutzgruppen mit 5 ml TFA/Anisol (95:5) abgespalten. Nach Ausfällen mit Ether wird (S)-3-(N-(3-Adamant-1-ylpropionyl)amino]-6-[N-(p-amidinophenylacetyl)amino]hexansauretrrfluoracetat als weißes Pulver erhalten, analog zu Stufe C) von Beispiel 5; MS 497 (M+H)&spplus;. Die freie Verbindung wird aus dem Trifluoracetat in bekannter Weise hergestellt.

Beispiel 6

(S)-3-[N-(3-Methylbutyryl)amino]-7-[N-(p-amidinobenzoyl)amino]-heptansäure

A) (S)-3-Amino-6-N-Z-aminoheptansäuremethylester

4,04 g Boc-Lys(Z)-OH, 1,38 ml Chlorameisensäureisobutylester, 1,44 ml Triethylamin und 80 ml (16 mmol) etherische Diazomethanlösung werden miteinander umgesetzt, dann weiter mit 490 mg Silber(I)oxid umgesetzt und analog zu Stufe A) von Beispiel 1 aufgearbeitet, dann wird das rohe Produkt durch Chromatographie (Silicagel, Ethylacetat/Hexan 1/1) gereinigt, um (S)-3-N-Boc-Amino-6-N-Z- aminoheptansäuremethylester herzustellen. MS: 409 (M+H)&spplus;. Der Methylester wird in 15 ml Methylenchlorid gelöst und mit 15 ml TFA vermischt. Nach 1 Stunde werden TFA und Lösungsmittel im Vakuum entfernt und der Rückstand im Hochvakuum getrocknet, was das (S)-3-Amino-6-N-Z-aminoheptansäuremethylestertrifluoracetatprodukt liefert.

B) (S)-3-[N-(3-Methylbutyryl)amino]-7-N-Z-aminoheptansäuremethylester

4,1 g des Trifluoracetats von Stufe A) von Beispiel 6 werden mit 1,0 g Isovaleriansäure, 1,36 ml Triethylamin, 1,65 g HOBT und 2,02 g DCC, wie in Stufe A) von Beispiel 2 beschrieben, umgesetzt und analog aufgearbeitet. Das erhaltene rohe Produkt wird aus Ether umkristallisiert, was das (S)-3-[N-(3-Methylbutyryl)amino]-7-N-Z-aminoheptansäuremethylesterprodukt liefert; MS: 393 (M+H)&spplus;.

C) (S)-3-[N-(3-Methylbutyryl)amino]-7-N-Z-aminoheptansäure-tert.-butylester

Wie in Stufe B) von Beispiel 4 beschrieben werden 3,25 g des Methylesters von Stufe B) von Beispiel 6 mit 1,36 g LiOH-H&sub2;O verseitt und mit 4,04 g tert.-Butyl-2,2,2-trichloracetimidat und 0,42 ml Bortrifluoretherat umgesetzt, was das (S)-3-(N-(3-Methylbutyryl)amino]-7-N-Z-aminoheptansäure-tert.-butylesterprodukt liefert; MS: 435 (M+H)&spplus;.

D) (S)-3-[N-(3-Methylbutyryl)amino]-7-[N-(p-amidinobenzoyl)amino]heptansäure

Nach Hydrierung von 2,2 g des Produktes von Stufe C) von Beispiel 6 analog zu Stufe C) von Beispiel 4 wird das Produkt weiter mit 1,34 g N-Boc-p-Amidinobenzoesäure (Herstellung analog zu N-Boc-p-Amidinophenylessigsäure), 0,7 ml Triethylamin, 0,852 g HOBT und 1,04 g DCC, wie in Stufe C) von Beispiel 4 umgesetzt und anschließend die Schutzgruppen mit 25 ml TFA/Anisol (95/5) abgespalten und aufgearbeitet, um das (S)-3-N-(3-Methylbutyryl)amino]-7-[N-(p-amidinobenzoyl)amino]heptansäuretrifluoracetatprodukt in Form eines weißen Pulvers herzustellen, MS: 391 (M+H)&spplus;. Die freie Verbindung wird aus dem Trifluoracetat in bekunnter Weise hergestellt.

Beispiel 7

(S,5S)-6-(4-Amidinophenylacetylamino)-5-hydroxy-3-(3-methoxyphenylpropionylamino)hexansäure-δ-lacton

A) (4S)-4-Hydroxy-5-O-mesylvaleriansäure- -lacton
(4S)-4,5-Dihydroxyvaleriansäure- -lacton (16,3 g, 140 mmol) und Triethylamin (21,52 ml, 154 mmol) werden in Methylenchlorid gelöst und die Lösung auf -30ºC gekuhlt. Methansulfonylchlorid (12,0 ml, 154 mmol) werden dann unter Rühren tropfenweise zugegeben. Die Lösung wird dann 15 Minuten bei -30ºC gerührt und im Verlauf von 1½ Stunden auf 18ºC erwarrnt. Die erhaltene Suspension wird zu 0,5n HCl zugegeben und mehrere Male mit Ether extrahiert. Die vereinigten organischen Phasen werden mit gesättigter waßriger NaHCO&sub3;-Lösung und gesättigter wäßriger NaCl-Lösung gewaschen. Nach Trocknen über Na&sub2;SO&sub4; und Einengen an einem Rotationsverdampfer wird das (4S)-4-Hydroxy-5-O-mesylvaleriansäure- -lactonprodukt als Öl erhalten, das direkt in der nächsten Reaktionsstufe verwendet wird.

B) (4S)-4-Hydroxy-5-azidovaleriansäure- -lacton

Das Mesylat von Stufe A) von Beispiel 7 (25,0 g, 128,7 mmol) wird in DMSO gelöst, die Lösung bei Raumtemperatur mit Natriumazid (16,74 g, 257,4 mmol) vermischt und 1½ Stunden bei 100ºC gerührt. Die braune Suspension wird gekühlt und das DMSO im Vakuum abdestilliert. Der Rückstand wird in EtOAc aufgenommen, über Hyflo filtriert und im Vakuum eingeengt. Die Vakuumdestillation (0,16 mbar) liefert die Titelverbindung als farbloses Öl. αD = +79,90 (c = 2,2 in CHCl&sub3;).

C) (4S)-5-Azido-4-[((1,1-dimethylethyl)dimethylsilyl)oxy]pentansäure

(4S)-4-Hydroxy-5-azidovaleriansäure- -lacton (12,28 g, 87,01 inmol) von Stufe B) von Beispiel 7 werden in 435 ml Ethanol gelöst und dann werden 43,5 ml 2n wäßriges NaOH zugegeben, whhrend bei Raumtemperatur gerührt wird. Nach ½-stündigem Stehen bei Raumtemperatur wird die Lösung an einem Rotationsverdampfer eingeengt und in einem Hochvakuum getrocknet. Der erhaltene Rückstand (16,94 g) wird mit 174 ml DMF, Imidazol (29,63 g, 435,05 mmol) und TBDMS-Cl (48,3 g, 313,24 mmol) vermischt und 19 Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Die erhaltene Suspension wird zu Eis/1n wäßriger NaHSO&sub4;-Lösung zugegeben und mehrere Male mit Ether extrahiert. Die vereinigten organischen Phasen werden über Na&sub2;SO&sub4; getrocknet und im Vakuum eingeengt. Der Rückstand wird in 435 ml Methanol gelöst und mit 18,44 g Na&sub2;CO&sub3; (in 87,0 ml H&sub2;O) gelöst, wahrend bei Raumtemperatur gerührt wird und dann ½ Stunde bei Raumtemperatur bewegt wird. Die erhaltene Suspension wird mit 435 ml H&sub2;O vermischt und zweiinal mit Hexan extrahiert. Die vereinigten Hexanphasen werden mit Methanol/H&sub2;O (1:1) gewaschen und die vereinigten wäßrigen Phasen werden mit NaHSO&sub4; angesäuert. Nach Extraktion mit Hexan und Waschen mit gesättigter wäßriger NaCl-Lösung wird die organische Phase über Na&sub2;SO&sub4; getrocknet und an einem Rotationsverdampfer eingeengt. Nach Dunnschichtchromatographie und ¹H-NMR wird das erhaltene rohe (4S)-5-Azido-4-[((1,1-dimethylethyl)diethylsilyl)oxy]pentansäureprodukt praktisch rein erhalten und ohne weitere Reinigung angewendet. MS; 274 (M+H)&spplus;.

D) (3(4S),4R)-3-[5-Azido-4-(((1,1-dimethylethyl)dimethylsilyl)oxy)-1-oxopentyl]-4-(phenylmethyl)-2-oxazolidinon

Das optisch aktive Pentansäurederivat von Stufe C) von Beispiel 7 (19,79 g, 72,37 mmol) wird in 405 ml trockenem THF gelöst, auf -78ºC gekühlt mit 13,5 ml Triethylamin (97 mmol) und dann mit 10,4 ml (84,7 mmol) Pivaloylchlorid vermischt. Nach 5 Minuten bei -78ºC wird die Mischung im Verlauf von 1 Stunde auf 0ºC erwärmt und wiederum auf -78ºC gekühlt. In einem zweiten Rekktionsbehalter werden (4R)-4-Phenylmethyl-2- oxazolidinon (15,65 g, 88,3 mmol) in 405 ml wasserfreiem THF gelöst, auf -78ºC gekühlt, mit n-Butyllithium (56,1 ml einer 1,6M Lösung) vermischt und 0,25 Stunden bei -78ºC bewegt. Das so erzeugte Azaenolat wird bei -78ºC unter Verwendung einer Drucknadel mit dem gemischten Säureanhydrid, das vorher in sim hergestellt wurde, vermischt. Das Kühlbad wird entfernt und das Rühren 1 Stunde lang durchgeführt. Die Reaktionsmischung wird zu Eis/NaHSO&sub4;-Lösung zugegeben, mit EtOAc extrahiert, die organischen Phasen mit gesättigter wäßriger NaHCO&sub3;-Lösung und gesättigter wäßriger NaCl-Lösung gewaschen und anschließend über Na&sub2;SO&sub4; getrocknet und im Vakuum eingeengt. Das erhaltene rohe Material wird über Silicagel (Hexan/EtOAc 3:1) chromatographiert. Die Titelverbindung wird in Form eines weißen Feststoffs erhalten; MS: 433 (M+H)&spplus;.

E) (3(2S,4S),4R)-3-[5-Azido-4-(((1,1-diethylethyl)methylsilyl)oxy)-2-tert.butyloxycarbonylmethyl-1- oxopentyl]-4-(phenylmethyl)-2-oxazolidinon

Das optisch reine Imid von Stufe D) von Beispiel 7 (19,05 g, 44 mmol) wird in 44 mmol THF gelöst und zu einer Lösung von LiHMDS (48,4 ml einer 1,0M Lösung) in 66 ml THF, die auf -78ºC gekühlt ist, zugegeben. Nach ½ Stunde bei -78ºC wird Bromessigsäure-tert.-butylester (9,7 ml, 66 mmol) tropfenweise im Verlauf von 20 Minuten zu dem Enolat, das auf -78ºC gekühlt wird, zugegeben. Nach 1-stundigem Stehen bei -78ºC wird die Mischung auf 0ºC erwärmt und dann wird gesättigte wäßrige NH&sub4;Cl-Lösung zu der Reaktionsmischung zugegeben. Nach Extraktion nut Ether werden die vereinigten organischen Phasen mit gesättigter wäßriger NaHCO&sub3;-Lösung und gesättigter wäßriger NaCl-Lösung gewaschen, über Na&sub2;SO&sub4; getrocknet und im Vakuum eingeengt. Nach dem ¹H-NMR existiert das Produkt als diastereoisomere Mischung (90:10) von (3(2S,4S),4R):(3(2R,4S)4R). Nach Chromatographie über Silicagel (Hexan/Etoac, 6:1) wird die Titelverbindung in reiner diastereoisomerer Form als farbloses Öl erhalten; MS: 521 (M-N&sub2;+3H)&spplus;.

F) (3S,5S)-6-Azido-5-[((1,1-dimethylethyl)dimethylsilyl)oxy]-3-hydroxycarbonylhexansäure-tert.-butylester

Die Titelverbindung von Stufe E) von Beispiel 7(21,5 g, 39,4 nimol) wird in 500 ml THF gelöst und nacheinander mit 180 ml H&sub2;O, 16,7 ml H&sub2;O&sub2; (30%-ige Lösung) und LiOH (3,3 g, 78,8 mmol) vermischt und 1½ Stunden bei 0ºC bewegt. Dann wird Na&sub2;SO&sub3; (17,1 g, 136 runiol) in 120 ml H&sub2;O zugegeben und das Rühren 5 Minuten lang bei 0ºC durchgeflihrt. Die Reaktionsmischung wird mit in wäßriger NaHSO&sub4;-Lösung angesäuert und mehrere Male mit Ether extrahiert. Die vereinigten organischen Phasen werden mit gesättigter wäßriger NaCl-Lösung gewaschen, über Na&sub2;SO&sub4; getrocknet und im Vakuum eingeengt. Das erhaltene rohe Produkt wird in Hexan aufgenommen. Das entstehende (4R)4-Phenylmethyl-2-oxazolidinon wird abfiltriert und das Hexansäure- tert.-butylesterderivat in reiner Form erhalten, indem das Filtrat eingeengt wird und im Hochvakuum getrocknet wird. MS: 410 (M+H)&spplus; aus dem Na-Salz.

G) (3S,5S)-6-Azido-5-[((1,1-dimethylethyl)dimethylsilyl)oxy]-3-benzyloxycarbonylaminohexansäure-tert.- butylester

Die Titelverbindung von Stufe F) von Beispiel 7 (1,55 g, 4,0 mmol) wird in 20 ml wasserfreiem Toluol gelöst und aufeinanderfolgend mit DPPA (956 µl (95%), 4,2 mmol) und Triethylamin (613 µl, 4,4 mmol) vermischt und am Rückfluß ½ Stunde lang gerährt. Nach Abkhhlen auf ca. 40ºC wird Benzylalkohol (4,14 ml, 40 mmol) zugegeben und die Mischung am Rückfluß weitere 60 Minuten lang gerührt. Die Reaktionslösung wird auf Raumtemperatur gekühlt, mit zusätzlichem Toluol vermischt, mit gesättigter wäßriger NaHCO&sub3;-Losung, 10% Weinsäurelösung und gesättigter wäßriger NaCl-Lösung gewaschen, über Na&sub2;SO&sub4; getrocknet und im Vakuum eingeengt. Das rohe Produkt wird auf Silicagel (Hexan/EtOAc, 6:1) chromatographiert und die Titelverbindung in reiner Form erhalten; MS: 493 (M+H)&spplus;.

H) (3S,5S)-6-[4-(tert.-Butyloxycarbonyl)amidinophenylacetylamino]-5-[((1,1-dimethylethyl)dimethylsilyl)oxy]-3-benzyloxycarbonylaminohexansäure-tert.butylester

Die Titelverbindung von Stufe G) von Beispiel 7 (1,18 g, 2,4 mmol) wird in THF (12,0 ml) gelöst und mit Triphenylphosphin (0,66 g, 2,52 mmol) analog zu dem in der Literatur beschriebenen Verfahren (Tetrahedron Lett. 24,763 (1983)) anfangs bei Raumtemperatur (17 Stunden) und dann unter Rückfluß umgesetzt. Nach 1 Stunde am Rückfluß werden 3,6 Moläquivalente H&sub2;O zugegeben und die Mischung weitere 4 Stunden am Rückfluß gerührt. Die Reaktionslösung wird gekühlt, im Vakuum eingeengt, der Rückstand in Hexan aufgenommen und unlösliches Triphenylphosphinoxid abfiltriert. Das Filtrat wird im Vakuum eingeengt und das entstehende Amin als Öl isoliert, das sofort weiter umgesetzt wird. Das Amin wird in 8 ml DMF gelöst, zusammen mit 4-(tert.-Butyloxycarbonyl)amidinophenylessigsäure (733 mg, 2,64 mmol) und HOBT (4,89 mg, 3,19 mmol) und bei Raumtemperatur mit DCC (494 mg, 2,4 mmol) umgesetzt. Nach 16 Stunden bei Raumtemperatur wird die erhaltene Suspension auf 0ºC gekählt und der ausgefällte Dicyclohexylharnstoff abfiltriert. Das Filtrat wird mit EtOAc verdünnt und mit gesättigter wäßriger NaHCO&sub3;-Lösung und gesättigter wäßriger NaCl-Lösung gewaschen. Nach Trocknen über Na&sub2;SO&sub4; wird das Produkt im Vakuum eingeengt. Das erhaltene rohe Miiterial wird über Silicagel chromatographiert (Hexan/EtOAc, 30 70) Die Titelverbindung wird als weißer Feststoff erhalten; MS 727 (M+H)&spplus;.

I) (3S,5S)-6-[4-(tert.-Butyloxycarbonyl)amidinophenylacetylamino]-5-[((1,1-dimethylethyl)dimethylsilyl)oxy]-3-(4-methoxyphenylpropionylamino)hexansäure-tert.butylester

Das Kupplungsprodukt von Stufe H) von Beispiel 7 (1,23 g, 1,69 mmol) wird in 8,5 ml Ethanol gelöst und über 10% Pd/C hydriert. Nach 2 Stunden bei Raumtemperatur wird der Katalysator durch Filtration entfernt und das Filtrat im Vakuum eingeengt. Das erhaltene freie Amin wird in 5,6 ml DMF zusammen mit 4-Methoxyphenylpropionsäure (335 mg, 1,86 mmol) und HOBT (345 mg, 2,25 inmol) gelöst und daun mit DCC (349 mg, 1,69 mmol) vermischt. Nach 63-stündigem Stehen bei Raumtemperatur wird die Suspension auf 0ºC gekühlt und analog zu dem in Stufe H) von Beispiel 7 beschriebenen Verfahren aufgearbeitet.
Das erhaltene rohe Produkt wird über Silicagel chromatographiert (Hexan/EtOAc). Die Titelverbindung wird als weißer Schaum isoliert; MS: 755 (M+H)&spplus;.

J) (3S,5S)-6-(4-Amidinophenylacetylamino)-5-hydroxy-3-(4-methoxyphenylpropionylaminio)hexansäure-δ- lacton

Das Kupplungsprodukt von Stufe I) von Beispiel 7 (639 mg, 0,846 mmol) wird mit 0,21 mi Ethandithiol, 0,21 ml Anisol und 4,23 mi TFA/H&sub2;O (95:5) bei 0ºC vermischt. Nach 3 Stunden bei Raumtemperatur wird die Mischung wiederum auf 0ºC gekühlt, Ether zugegeben und der ausgefällte Feststoff abfiltriert. Der erhaltene Feststoff wird mit Ether gewaschen und anschließend umkristallisiert. Das Trifluoracetat der Titelverbindung wird als weiße kristalline Substanz erhalten Schmelzpkt 216-218ºC; [α]D = +13,5º (c = 0,48, MeOH), MS: 467 (M+H)+. Die freie Verbindung wird in bekannter Weise aus dem Trifluoracetat erhalten.

Beispiel 8

(3S,5S)-6-(4-Amidinophenylacetylamino)-5-hydroxy-3-(3-methylbutyrylamino)hexansäure-δ-lacton

A) (3S,5S)-6-[4-(tert.-Butyloxycarbonyl)amidinophenylacetylamino]-5-[((1,1-dimethylethyl)dimethylsilyl)oxy]-3-(3-methylbutyrylamino)hexansäure-tert.-butylester

Das Kupplungsprodukt von Stufe H) von Beispiel 7 (0,6 g, 0,82 mmol) wird in 5 ml Ethanol gelöst und über 10% Pd/C hydriert. Nach 2 Stunden bei Raumtemperatur wird der Katalysator durch Filtration entfernt und das Filtrat im Vakuum eingeengt. Das erhaltene freie Amin wird in 3 ml DMF gelöst, zummen mit Isovaleriansäure (110 µl, 0,9 mmol) und HOBT (172,5 mg, 1,13 mmol) und mit DCC (175 mg, 0,82 mmol) vermischt. Nach 16 Stunden bei Raumtemperatur wird die Reaktionsmischung analog zu dem in Stufe I) von Beispiel 7 beschriebenen Verfahren aufgearbeitet. Das erhaltene rohe Produl:t wird über Silicagel chromatographiert (Hexan/EtOAc). Die Titelverbindung wird als weißer Schaum erhalten. MS: 677 (M+H)&spplus;.

B) (3S,5S)-6-(4-Amidinophenylacetylamino)-5-hydroxy-3-(3-methylbutyrylamino)hexansäure-δ-lacton

Das Produkt aus Stufe A) von Beispiel 8 (320 mg, 0,473 mmol) wird mit TFA analog zu Stufe J) von Beispiel 7 versetzt und die Schutzgruppe dann entfernt. Nach einer Ausfällhungsreaktion mit Ether und anschließender Umkristallisierung wird das Trifluoracetat der Titelverbindung als weißes Kristallisat erhalten. Schmelzpunkt: 236,7-237,7ºC; [α]D = +15,0º (c = 0,5 MeOH); MS: 389 (M+H)&spplus;. Die freie Verbindung wird aus dem Trifluoracetat in bekannter Weise erhalten.

Beispiel 9

(S)-3-N-[3-(p-Mehtoxyphenyl)propionyl]amino-7-[N-(p-amidinobenzoyl)amino]heptansäure

A) (S)-3-N-[3-(p-Methoxyphenyl)propionyl)amino-7-N-Z-aminoheptansäuremethylester

1,18 g des gemäß Stufe A) von Beispiel 6 erhaltenen Trifluoracetats werden mit 0,43 g 3-p- Methoxyphenylpropionsäure, 0,4 g HOBT, 0,33 ml Triethylamin und 0,46 g DCC umgesetzt und aufgearbeitet unter Verwendung des in Stufe B) von Beispiel 6 beschriebenen Verfahrens. Das erhaltene rohe Material wird aus Ether umkristallisiert und die Titelverbindung in Form weißer Kristalle erhalten; MS: 471 (M+H)&spplus;.

B) (S)-3-N-[3-(p-Methoxyphenyl)propionyl]amino-7-N-Z-aminoheptansäure-tert.-butylester

Unter Verwendung des Verfahrens von Stufe B) von Beispiel 4 werden 0,7 g des in Stufe A) von Beispiel 9 erhaltenen Methylesters mit 0,21 g LiOH/H&sub2;O hydrolysiert und das Produkt der Hydrolyse wird mit 0,82 g tert.-Butyl-2,2,2-trichloracetimidat in Gegenwart von 0,1 rnl Bortriiluoretherat umgesetzt und analog aufgearbeitet. Nach Chromatographie auf Silicagel (Ethylacetat/ Hexan 1:1) wird die Titelverbindung als farbloses Öl erhalten; MS: 513 (M+H)&spplus;.

C) (S)-3-N-[3-(p-Methoxyphenyl)propionyl]amino-7-[-(p-amidinobenzoyl]heptansäure

0,55 g der in Stufe B) von Beispiel 9 erhaltenen Verbindung werden unter Verwendung des in Stufe C) von Beispiel 4 beschriebenen Verfahrens hydriert und das so erhaltene Amin mit 0,28 g N-Boc-p-Amidinobenzoesäure, 0,18 g HOBT, 0,15 ml Triethylamin und 0,22 g DCC unter Verwendung des in Stufe C) von Beispiel 4 beschriebenen Verfahrens umgesetzt. Das erhaltene rohe Produkt wird mit Chromatographie (Silicagel Ethylacetat) gereingt und die Schutzgruppen mit 5 ml TFA/Anisol (95/5) abgespalten. Nach Ausfällen mit Ether wird das Trifluoracetat der Titelverbindung in Form eines weißen Pulvers erhalten. MS 469 (M+H)&spplus;. Die freie Verbindung wird aus dem Trifluoracetat m bekannter Weise hergestellt.

Beispiel 10

(3S,5S)-6-[4-Amidinophenylacetylamino)-5-hydroxy-3-N-[2-(p-methoxyphenyl)ethansulfonylamino]hexansäure-δ- lacton

A) (3S,5S)-6-[4-(tert.-Butyloxycarbonyl)amidinophenylacetylamino]-5-[((1,1-dimethylethyl)dimethylsilyl)oxy]-3-aminohexansäure-tert.-butylester

1,09 g (1,50 mmol) des Titelprodukts von Stufe H von Beispiel 7 werden mit 75,0 mg PtO&sub2; in 7,50 ml EtOH vermischt und eine Hydrierung durchgeführt, indem zuerst eine 3/4 Stunde am Rückfluß erhitzt wird, wonach 75 mg Pd/C 10% zugegeben werden und die Mischung eine weitere 3/4 Stunde am Rückfluß erhitzt wird. Der Katalysator wird durch Filtration entfernt, 150 mg Pd/C 10% werden zu dem Filtrat zugegeben, das eine weitere ½ Stunde am Rückfluß erhitzt wird, wonach weitere 75 mg Pd/C zugegeben werden und das Rückfließen eine weitere Stunde fortgesetzt wird. Der Katalysator wird wiederum durch Filtration entfernt, weitere 150 mg Pd/C 10% werden zugegeben und das Rückfließen weitere 1½ Stunden fortgesetzt. Das Titelprodukt wird dann durch Entfernung des Katalysators durch Filtration und Eindampfen zur Trockne gewonnen. Das rohe Produkt (890 mg) ist ungefähr 100% rein, was mit DC beurteilt wird, und wird für die weitere Synthese ohne weitere Reinigung verwendet.

B) (3S,5S)-6-[4-(tert.-Butyloxycarbonyl)amidinophenylacetylamino]-5-[((1,1-dimethylethyl)dimethylsilyl)oxy]-3-N-[2-(p-methoxyphenyl)ethansulfonylamino]hexansäure-tert.-butylester

890 mg (1,50 mmol) der Titelverbindung von Teil A) von Beispiel 10 oben und 99 µl NMM (0,6 Moläquivalente) in 7,5 ml THF werden heftig mit 193,5 mg (0,55 Moläquivalente) 2-(p-Methoxyphenyl)ethansulfonylchlorid 2½ Stunden lang unter Stickstoffatmosphäre bei Raumtemperatur vermischt. Weitere 193,5 mg des Sulfonylchlorids und 99 µl NMM werden zugegeben und die Mischung wie vorher bei Raumtemperatur 1 Stunde lang gerührt, wonach die Mischung 18 Stunden lang bei Raumtemperatur stehen gelassen wird. Die entstehende Reaktionsmischung wird als Suspension in EtOAc aufgenommen und einmal mit einer 10%-igen wäßrigen Lösung von Essigsäure, einmal mit waßriger NaHCO&sub3;-Lösung und einmal mit wäßriger NaCl-Lösung extrahiert. Die vereinigten wäßrigen Phasen werden weiter einmal mit EtOAc extrahiert. Die vereinigten organischen Phasen werden dann getrocknet und zur Trockne eingedampft unter Verwendung eines Rotationsverdampfers. Dies liefert 1,10 g rohes Produkt, was einer Ausbeute von etwa 92,70% entspricht. Dieses rohe Produkt wird an einer chromatographischen Säule mit 102,5 ml (Silicagel 25-40 µm; Elutionsmittel Hexan/ETOAC 3:7; Durchflußrate 10 ml/min; 10 ml Fraktionen, Absorption 0,02/200 mv) gereinigt. Die Fraktionen 11 bis 20 werden gesammelt und das Titelprodukt (257 mg) wird nach Verdampfen des Lösungsmittels gewonnen. Ma&spplus;791; [MA-BOC]&spplus; 691; [MA-(BOC + C&sub4;H&sub8;)]&spplus; 635.

C) (3S,5S)-6-(4-Amidinophenylacetylamino)-5-hydroxy-3-N-[2-(p-methoxyphenyl)ethansulfonylamino]hexansäure-δ-lacton-trifluoressigsäure

Das Titelprodukt (257 mg) von Teil B) von Beispiel 10 wird mit Anisol (100 µl) und Ethandithiol (100 µl) in 2 ml 95% wäßriger Trifluoressigsäure vermischt und bei Raumtemperatur 1 1/3 Stunden lang stehen gelassen. Die entstehende Suspension wird heftig vermischt, wahrend auf einem Eisbad mit 20 ml Diethylether gekühlt wird. Das kristallisierte Produkt wird abfiltriert, mit Diethylether gewaschen und mit einem Wasserpumpenvaknum bei 40ºC getrocknet. Das entstehende rohe Produky wird in warmem EtOH gelöst, die Lösung gekihlt und das Produkt umkristallisiert, was das Titelprodukt (158 mg) in gereinigter Form ergibt. Das Endprodukt wird analysiert und hat die folgenden Eigenschaften: F: 160ºC; [α]D RT = +12,8º c = 0,25 in MeOH; MH&spplus; 503. Die freie Verbindung wird aus dem Trifluoracetat in bekannter Weise hergestellt.

Beispiel 11

Lithium-(3S,5S)-6-(4-amidinophenylacetylamino)-5-hydroxy-3-(4-methoxyphenylpropionylamino)hexanoat

153 mg (264 µmol) der Titelverbindung von Beispiel 7, gelöst in 528 µl Wasser, werden in die Acetatform durch Anionenaustauschchromatographie unter Verwendung eines Bio-Rad ACr 1-X2 100-200 mesh Anionenaustauscherharzes in Acetatform umgewandelt. 2M Essigsäure in Wasser/Acetonitril (1:1) werden als Elutionsmittel verwendet, die produkthaltigen Fraktionen werden eingedampft, der Rückstand in der minimalen Menge Ethylacetat gelöst und das Produkt durch Zugabe von Diethylether ausgefällt. Der amorphe Produktrückstand wird in Wasser gelöst und mit 264 µl 2n LiOH (2,00 Moläquivalente) vermischt und bei Raumtemperatur 15 Stunden lang stehen gelassen. Das Titelprodukt (87 mg, Ausbeute ungefähr 67%) wird aus der entstehenden Lösung durch Verdampfen und Kristallisation aus EtOH erhalten. Bei einer Analyse wurde gefunden, daß das Produkt die folgenden Eigenschaften hatte. Schmelzpunkt = 227-230ºC; [α]D RT = 11,6º (c = 0,31 in H&sub2;O); [M+Li]&spplus; des Lithiumsalzes 497 - COOLi 491 MH&spplus; - COOH 485.
Die Verbindungen der Formel I sind bemerkenswert wegen ihrer wertvollen therapeutischen Eigenschaften. Insbesondere haben die Verbindungen der Formel 1 die Fähigkeit, die Bindung von Fibrinogen an GPIIb/IIIa zu hemmen und damit die Plättchenzusammenballung zu verhindern.
Die vorteilhaften Eigenschaften der Verbindungen der Formel I bei der Hemmung der Bindung von Fibrinogen an isoliertes und immobilisiertes GPIIb/IIIa und bei der Hemmung einer durch ADP induzierten Zusammenballung von menschlichen Blutplättchen in Gegenwart von Fibrinogen werden in den folgenden Tests gezeigt:
a) Hemmung der Bindung von Fibrinogen an isoliertes und immobilrsiertes GPIIb/IIIa:
GPIIb/IIIa wird aus Membranen von menschlichen Blutpläuchen durch Extraktion mit Triton X-100 isoliert und durch Chromatographie auf Ionenaustauscher und Gelfiltration gereinigt. Das so erhaltene Rezeptorprotein wird an Mikrotiterplatten gebunden. Die Hemmung der Bindung von mit Bioun markiertem Fibrinogen an den Rezeptor in Gegenwart des Inhibitors wird quantitativ ausgewertet.
b) Hemmung der durch ADP induzierten Zusammenballung von menschlichen Blutplättchen in Gegenwart von Fibrinogen:
Blutplättchen werden aus frischem Vollblut durch Zentrifugation isoliert und gewaschen. Die gewaschenen Plättchen werden in Gegenwart von PGI2 und Apyrase resuspendiert und mit ADP (10 mM) in Gegenwart von Fibrinogen stimuliert. Die Fähigkeit der Plättchen, sich in Gegenwart oder Abwesenheit von inhibitoren zusammenzuballen, wird quantitativ ausgewertet unter Verwendung eines Aggregometers.
Die Verbindungen der Formel I bewirken eine Hemmung der Fibrinogen-GPIIb/IIIa-Bindung in einem Bereich der IC&sub5;&sub0; (Konzentration der Verbindungen der Formel I, die die Bindung von Fibrinogen an den Rezeptor um 50% reduzieren) von 0,5 bis 20 nM.
Die Hemmung der durch ADP induzierten Plättchenzusammenballung erfolgt durch Verbindungen der Formel I für die IC&sub5;&sub0; (Konzentration der Verbindungen der Formel I, bei denen 50% der Plättchenzusammenballung gehemmt wird) von 20 bis 100 nM.
Die Verbindungen der Beispiele 1 bis 8 werden getestet, um ihre IC&sub5;&sub0;-Werte fur die Hemmung der Fibrinogen-GPIIb/IIIa-Bindung (FB) und die Hemmung der durch ADP induzierten Plättchenzusammenballung (PA) mit den oben beschriebenen Testverfahren zu bestimmen. Die Ergebnisse sind unten angegeben.
Als Ergebnis der in diesen Tests gezeigten Aktivitäten können die Verbindungen der Formel I oder ihre Salze als Pharmazeutika für die prophylaktische und akute Behandlung von Thrombose verwendet werden. Vorteilhafte Ergebnisse werden erhalten mit Dosen von 0,1 bis 20 mg/kg, bevorzugt 0,1 bis 3 mg/kg pro Tag pro Erwachsenem.
Die Verbindungen der Formel I können in gleicher Weise in Form von Salzen angewendet werden, die erhalten werden, indem sie mit pharakologisch annelunbaren Säuren, wie Essigsäure, Trifluoressigsäure, Salzsäure etc. umgesetzt werden.
Verbindungen der Formel I, deren Solvate oder Salze können enteral, zum Beispiel oral (als Tabletten, Kapseln etc.) oder rektal oder als Spray verabreicht werden. Die parenterale Verabreichung in Form von Injektionslösungen oder Infusionslösungen ist auch möglich.
Die Erfindung schließt auch die Verwendung einer Verbindung der Erfindung oder eines Salzes davon zur Herstellung eines Arzneimittels zur prophylaktischen und akuten Behandlung von Thrombose ein.
Weiterhin schließt die Erfindung eine phannazeutische Zusammensetzung ein, die eine Verbindung der Erfindung oder ein Salz davon in Kombination mit einem pharmazeutisch annehmbaren Verdunnungsmittel oder Träger umfaßt.

Claims

1. Pseudopeptid der Formel I in freier Form oder in Salzform

worin

R&sub1; Gruppen der Formel -COOH, -COOM oder -COO((C&sub1;-C&sub4;)-Alkyl) bedeutet, worin M ein Alkali- oder Erdalkalimetallatom ist;

X -CH&sub2;-, -CO-, -C*HOH oder -C*HO((C&sub1;-C&sub4;)Alkyl)- bedeutet

oder X und R&sub1; zusammen eine

Gruppe bedeuten;

Y -(CH2)m- bedeutet;

m 1 oder 2 bedeutet;

A Gruppen der Formel

bedeutet, worin

k 3,4,5 oder 6 ist,

o 3,4 oder 5 ist und

p 0, 1 oder 2 ist,

B entweder eine Gruppe der Formel

bedeutet, worin

q 1 oder 2 ist und

R&sub3; einen (C&sub1;-C&sub4;)-Alkyl-, 1-Adamantyl-, Trimethylsilyl-, 1-Naphthyl-, Phenyl-, 3-Indolyl- oder (C&sub1;-C&sub4;)- Alkoxyphenylrest bedeutet oder.

B eine Gruppe der Formel

bedeutet, worin

r 0, 1 oder 2 ist und

R&sub4; einen (C&sub1;-C&sub4;)-Alkyl-, Phenyl-, p-(C&sub1;-C&sub4;)-Alkoxyphenyl-, 1-Naphthyl-, Tolyl-, Mesyl- oder Trimethylsilylrest bedeutet.

2. Verbindung nach Anspruch 1 der Formel I'

worin

R&sub1; und m wie in Anspruch 1 definiert sind, s 0 oder 1 ist, R&sub6; = H, OH oder O(C&sub1;-C&sub4;)-Alkyl ist oder

R&sub1; und R&sub6; zusammen eine -O-CO-Gruppe bilden und

B' entweder eine Gruppe der Formel

ist, worin R&sub1; und q wie in Anspruch 1 definiert sind, oder

B' eine Gruppe der Formel

ist, worin R&sub4; und r wie in Anspruch 1 definiert sind.

3. Verbindung nach Anspruch 1 oder 2 der Formel I"

worin R&sub1;, R&sub6;, n und s wie in Anspruch 2 definiert sind, und

B" eine Gruppe der Formel

bedeutet, worin q und R&sub3; wie in Anspruch 1 definiert sind.

4. Verbindung nach Anspruch 1, ausgewählt aus:

(S)-3-(N-Tosylamino-6-[N-(p-amidinophenylacetyl)amino]hexansäure, (S)-3-[N-(3-Methylbutyryl)amino]-6-N-(p-amidinophenylacetyl)amino]hexansaure, (S)-3-N-[3-(p-Methoxyphenyl)propionyl]amino-6-[N-(p-amidinophenylacetyl)amino]hexansäure, (S)-3-[N-(Adamant-1-ylacetyl)amino]-6-[N-(p-amidinophenylacetyl)amino]hexansäure, (S)-3-[N-(3-Adamant-1-ylpropionyl)amino]-6-[N-(p-amidinophenylacetyl)amino]hexansäure, (S)-3-[N-(3-Methylbutyryl)amino]-7-N-(p-amidinobenzoyl)amino]heptansäure, (3S,5S)-6-(4-Amidinophenylacetylamino)-5-hydroxy-3-(4-methoxyphenylpropionylamino)hexansäure- -lacton, (3S,5S)-6-(4-Amidinophenylacetylamino)-5-hydroxy-3-(3-methylbutyrylamino)hexansäure- -lacton, (S)-3-N-[3-(p-Methoxyphenylpropionyl)amino]-7-[N-(p-amidinobenzoyl)amino]heptansäure, (3S,5S)-6-(4-Amidinophenylacetylamino)-5-hydroxy-3-N-[2-(p-methoxyphenyl)ethansulfonylamino]hexansäure- - lacton, Lithium-(3S,5S)-6-(4-amidinophenylacetylamino)-5-hydroxy-3-(4-methoxyphenylpropionylamino)hexanoat.

5. Verfahren zur Herstellung einer Verbindung der Formel I, wie in Anspruch 1 definiert, worin m 1 bedeutet, X und R&sub1; zusammen eine > CH-O-CO-Gruppe bilden und Y eine -CH&sub2;-Gruppe bedeutet, dadurch gekennzeichnet, däß eine Verbindung der Formel XIV

worin Z eine Schutzgruppe ist, mit einem geeigneten Rest A gekupelt wird, wobei A wie in Anspruch 1 definiert ist, die Schutzgruppe Z hydrogenolytisch abgespalten wird, das Reaktionsprodukt mit einem geeigneten Rest B gekuppelt wird, wobei B wie in Anspruch 1 definiert ist, und die tert.-Butyldimethylsilyl- und tert.-Butylschutzgruppen anschließend mit Hilfe von Trifluoressigsärre abgespalten werden und die Verbindung der Formel I gegebenenfalls aus dem so gebildeten Trifluoracetat freigesezt wird.

6. Verfahren zur Herstellung von Verbindungen der Formel I, wie in Anspruch 1 definiert, worin X = Y = CH&sub2;, R&sub1; = COOH und m = 1 oder 2, dadurch gekennzeichnet, däß eine Verbindung der Formel X

worin A und B wie in Anspruch 1 definiert sind und m 1 oder 2 ist, mit Trifluoressigsäure bei Raumtemperatur umgesetzt wird und die Verbindung der Formel I anschließend gegebenenfalls aus dem so gebildeten Trifluoracetat freigesetzt wird.

7. Verbindung nach einem der Ansprüche 1 bis 4 in Form eines Salzes.

8. Verbindung nach Anspruch 1 oder ein Salz davon zur Verwendung als Pharmazeutikum für die prophylaktische und akute Behandlung von Thrombose.

9. Verwendung einer Verbindung nach Anspruch 1 oder eines Salzes davon zur Herstellung eines Arzneimittels zur prophylaktischen und akuten Behandlung von Thrombose.

10. Pharmazeutische Zusammensetzung, umfassend eine Verbindung nach Anspruch 1 oder ein Salz davon in Kombination mit einem pharmazeutisch annehmbaren Verdünnungsmittel oder Träger.