SK17093A3

SK17093A3 - New derivatives of beta-amino acids

Info

Publication number: SK17093A3
Application number: SK17093A
Authority: SK
Inventors: Georg Kottirsch; Rainer Metternich
Original assignee: Sandoz Ag
Priority date: 1992-03-10
Filing date: 1993-03-08
Publication date: 1993-10-06
Also published as: NO300778B1; TW256828B; JPH0665175A; US5561112A; HU9300501D0; IL104972A0; ZA931724B; EP0560730A2; NO930830L; RU2106356C1; PH30893A; FI931023A; CN1076200A; FI931023A0; CA2091292A1; KR930019690A; GR3021030T3; IL104972A; JP2860222B2; ES2090934T3

Description

Pseudopeptidy, spôsob ich prípravy a ich použitie

Oblasť techniky

Vynález sa týka nových derivátov beta-amínokyselin, ktoré sú izoestermi dipeptidovej jednotky Gly-Asp. Zlúčeniny podľa vynálezu sú pseudopeptidmi, ktoré majú antitrombotickú účinnosť . Tieto zlúčeniny sú pozoruhodné tým, že potláčajú väzbu fibrinogénu na receptor fibrinogénu v krvných doštičkách (glykoproteín GP Ilb/IIIa).

Doterajší stav techniky

Rozhodujúcim momentom pri tvorbe trombu je zoši eťovani e krvných doštičiek molekulami fibrinogénu. Predpokladom k tomu je aktivácia krvných doštičiek agonistami ako je trombín alebo adenozíntrifosfát (ADP). Táto aktivácia spôsobí, že dochádza k prestavbe bunkovej membrány. V dôsledku toho sa GPIIb/IIIa dostane do aktívnej formy.

GPIIb/IIIa patrí do skupiny receptorov adhézie, známych ako integríny fibrinogénu sú

Ďalšími ligandami pre fibronektin, vitronektin faktor. Tieto ligandy zohrávajú významnú

GPIIb/IIIa okrem a von Wildebrandov úlohu v hemostatických pochodoch tým, že uskutočňujú adhéziu a agregáciu krvných potlačenie týchto interakkrok pri tvorbe trombu. ligandov sa uskutoční peptidovou (Ruoslahti E., Pierschbacher M., doštičiek. Špecifické terapeutické cií môže ovplyvniť rozhodujúci Viazanie fibrinogénu a iných sekvenciou Arg-Gly-Asp (RGD)

Celí 1986, 44, 517-18).

Fibrinogén obsahuje ďalšiu peptidovú sekvenciu (His-His-Leu-Gly-Gly-Ala-Lys-Gln-Ala-Gly-Asp-Val) na C-konci gamareťazca s afinitou k receptoru fibrinogénu. Malé syntetické peptidy, ktoré obsahujú tieto sekvencie, môžu potláčať viazanie fibrinogénu, fibronektínu, vitronektínu a von Wildebrandovho faktora na GPIIb/IIIa a môžu tým potlačiť zhlukovaní e krvných doštičiek (Plow a Sci. USA 1985, 8057-61; Ruggeri a spol USA 1986, 5708-12; Ginsberg a spol. J 3931-36; Gartner a spol. J. Biol. 891-94).

spol.	Proc. Nat1 .	Acad .
Proc.	, Natl. Acad.	Sci .
Biol.	, Chem. 1985,	260 ,
Chem,	1987, 260,	11,

Podstata vynálezu

Predmetom vynálezu sú pseudopeptidické analógy Agr-Gly-Asp, v ktorých je jednotka Gly-Asp nahradená derivátmi beta-amínokyselin a v ktorých je Arg vo väčšine prípadov nahradený benzamidínkarboxylovou kyselinou. Tieto nové pseudopeptidy potláčajú zhlukovanie .krvných doštičiek a z tvorbu trombov.

Vynález sa teda týka voľnej formy alebo solí pseudopeptidov všeobecného vzorca I

(I) v ktorom

Rx predstavuje karboxylovú skupinu M-substituovanú karboxylovú skupinu alebo karboxyalkylovú skupinu s 1 až 4 atómami uhlíka, s výhodou karboxylovú skupinu, pričom

M znamená atóm alkalického kovu alebo kovu alkalickej zeminy, s výhodou lítium,

X predstavuje jednu zo skupín -CH2-, -CH=, -CO-,

-C'HOH alebo -CHO(alky1)-/v ktorej alkylový zvyšok obsahuje 1 až 4 atómy uhlíka/,s výhodou -CHa- skupinu, alebo s výhodou tiež

X a Rx dohromady predstavujú skupinu \· ⁰CH-O-M— /

predstavuje skupiny -(CHaJm-, =CH- alebo -NH-, s výhodou a

je celé číslo s hodnotou 1 alebo 2, s výhodou 2, je buď skupina všeobecného vzorca

v ktorom

D je vodík, ochranná skupina Z alebo alfa-amínokyselina, ktorá je viazaná cez svoju karbonylovú skupinu,

R- je skupina vzorca (CH₂)-NH₂

NH

-(CH₂)-—N^NH, n _H 2

//—(CH₂)_

(CH₂) —n t H

NH

Λ

NH.

alebo k\ //

NH nh₂ v ktorom n je číslo s hodnotou 3 alebo 4 a t je číslo s hodnotou 0 alebo 1 alebo

A je skupina vzorca

ΝΗ νη₂

V k

ο

Ρ

Β

ktorom

je číslo s hodnotou 3, 4, 5 alebo 6,

je číslo s hodnotou 3, 4 alebo 5 a

je číslo s hodnotou 0, 1 alebo 2, s výhodou

'je buď skupina všeobecného vzorca

-^U-(CH₂)₍--R₃ v ktorom q je číslo s hodnotou 1 alebo 2, s výhodou 1 a

R₃ predstavuje skupiny alkyl- s 1 až 4 atómami uhlíka, izopropyl-, terc.butyl-, 1-adamantyl-, trimetylsilyl1-naftyl-, fenyl-, 3-indolyl- alebo alkoxyfenyl- s 1 až 4 atómymi v alkoxylovom zvyšku, s výhodou izopropyl-, alkoxyfenyl s 1 až 4 atómami uhlíka v alkoxylovom zvyšku (napríklad p-metoxyfenyl) alebo 1-adamantyl-, najmä izopropyl-, alebo

B je skupina všeobecného vzorca

o.. -.° / '(CH,)—r₄ v ktorom r predstavuje číslo s hodnotou 0, 1 alebo 2, s výhodou 0 a

R-4 predstavuje skupiny alkyl- s 1 až 4 atómami uhlíka,

2-propyl-, terc.butyl-, fenyl-, p-alkoxyfeny1 s 1 až 4 atómami uhlíka v alkoxylovom zvyšku,' 1-naftyl-, tolyl-, mesyl-, alebo trisyl-, s výhodou mesyl, alebo

B je skupina všeobecného vzorca

v ktorom

D je vodík alebo ochranná skupina Z a

Rs je jedna zo skupín fenyl-(CHa)t-, indo1-3-y1-(CHa)t-, naft-l-yl-(CHa)-t-, adamant-l-yl-(CHa)tprop-2-yl-(CHa)t-, trimetylsilyl-(CHa)t- alebo terc.buty1-(CHa)t, v ktorých t má vyššie uvedený význam alebo je alfa-amínokyselina, ktorá je viazaná cez svoju karbonylovú skupinu.

Každý asymetrický atóm uhlíka, označený hviezdičkou (*) vo vzorcoch sa môže vyskytovať buď v konfigurácii R alebo S.

Vo vzorcoch znamená alkylskupina s 1 až 4 atómami uhlíka s výhodou metylskupinu a alkoxylová skupina s 1 až 4 atómami uhlíka znamená s výhodou metoxyskupinu. Ochranná skupina je s výhodou benzyloxykarbonyl alebo terc.butylúxykarbonyl. V prípadoch, kde D a/alebo B predstavujú alfa-amínokyselinu, môže táto byť v prírode sa vyskytujúcou, alebo v prírode sa nevyskytujúcou alfa-amíno kyselinou.

Pokiaľ nie je uvedené inak, zahŕňajú výrazy uvedené v opise ako zlúčeniny všeobecného vzorca I zlúčeniny vo forme voľnej a tiež vo forme soli.

Medzi výhodné patria vzorcu I ' zlúčeniny odpovedajúce všeobecnému

v ktorom

Ri a m majú už uvedený význam, s znamená číslo s hodnotou 0 alebo 1,

Re predstavuje vodík, OH-skupinu alebo alkylskupinu s 1 až 4 atómami uhlíka alebo

Ri a Re tvoria dohromady skupinu -0-C0-,

B' je buď skupina všeobecného vzorca

Ο ^Ji-(CH₂)-R₃

Η v ktorom R₃ a q majú vyššie uvedený význam, alebo B' je skupina všeobecného vzorca

O., o —Rr v ktorom R₄ a r majú vyššie uvedený význam, alebo B' je skupina všeobecného vzorca

v ktorom R= a D majú vyššie uvedený význam.

Výhodné sú najmä zlúčeniny všeobecného vzorca I

[ch₂]₃.

WÍ2J

d) v ktorom Ri, Re, m a s majú vyššie uvedený význam, alebo Ri a Re tvoria dohromady skupinu -0-C0- a

B'' je skupina všeobecného vzorca o

-U-(CH₂)— r₃ v ktorom q a Re majú už uvedený význam.

Najvýhodnejšie sú zlúčeniny všeobecného vzorca I, ktoré odpovedajú nasledujúcim všeobecným vzorcom II, III, IV, V, VI, VII :

Η ,4

Sú to zlúčeniny z príkladov 2, 3, 6, 9, 8 a 7.

Zlúčeniny všeobecného vzorca I tohto typu, ktorý zahŕňa zlúčeniny vyššie uvedených všeobecných vzorcov XI až V sa môžu syntetizovať podľa nasledujúcej syntéznej schémy 1 :

Syntézna schéma 1

’Γ

R,

N'

H .B (O

Vo vyššie uvedených všeobecných vzorcoch predstavuje [v]_mskupinu [CHz]_m a m, A, B, X, Y a Ri majú vyššie uvedený význam.

Podľa syntéznej schémy 1 sa zlúčeniny všeobecného vzorca I, v ktorom X = Y = CH₂, Ri = COOH a m = 1 alebo 2, vyrábajú zo zlúčeniny všeobecného vzorca X reakciou s kyselinou tri fluóroctovou pri teplote miestnosti. Zlúčenina všeobecného vzorca X sa získa z esteru všeobecného vzorca IX chráneného skupino.u Z kondenzáciou amínoskupiny s kyselinou izovalérovou alebo s kyselinou p-metoxyfenylpropánovou (podľa významu skupiny B) za prídavku DCC a HOBT. Po kondenzácii nasleduje hydrolýza metylesteru pomocou LiOH, prevedením kyseliny na terc.butylester pomocou terc.buty1-2, 2,2-trichlóracetimidátu, odstránením ochrannej skupiny Z za redukčných podmienok pomocou Hs/Pd-C, potom kondenzáciou s vhodnou skupinou A [napr. A znamená (p-amidínofeny1)-(CH^)_S-COOH, kde s má vyššie uvedený význam], s opätovným prídavkom D'CC a HOBT. Metylester všeobecného vzorca IX sa získa z aminokyseliny všeobecného vzorca VIII, chránenej skupinou Z = BOC, predĺžením .reťazca karboxylovej kyseliny pri použití metódy diazometán/AgaO (Helv.Chim. Act. 58, 969 (1975) a odstránením skupiny BOC kyselinou trifluóroctovou pri teplote miestnosti.

Zlúčeniny všeobecného vzorca I typu, ktorý zahŕňa zlúčeniny všeobecných vzorcov VI a VII uvedených vyššie sa môžu tiež vyrobiť použití m postupov podľa nasledujúcej syntéznej schémy 2 :

Syntézna schéma 2

Vo vyššie a m, A , B , X, Z a Ri uvedených vzorcoch majú už uvedený význam [v]„ znamená [CHzln.

Podľa syntéznej schémy 2 sa zlúčeniny všeobecného vzorca I, v ktorom m je 1 a X a Rx dohromady tvoria skupinu HC'-O-CO- a Y je metylénová skupina, môžu pripraviť zo zlúčeniny všeobecného vzorca XIV kondenzáciou s vhodnou skupinou A (analogicky so syntéznou schémou 1), odstránením ochrannej skupinyv podmienkach redukcie s H-/Pd-C, následnou kondenzáciou s vhodnou skupinou B (analogicky so syntéznou schémou 1) a ďalej odstránením ochranných skupín kyselinou trifluóroctovou pri teplote okolia. Zlúčenina všeobecného vzorca XIV sa získa zo zlúčeniny všeobecného vzorca XIII prevedením karboxylovej kyseliny pôdsobením difenylfosforylazidu a trimetylamínu za prítomnosti benzylalkoholu na amín cránený skupinou Z a redukciou azidovej skupiny trifenylfosfinom v tetrahydrofuráne. Karboxylová kyselina vzorca XIII sa získa zo zlúčeniny vzorca XII enantioselektívnym zavedením postranného reťazca v troch stupňoch :

a) kondenzáciou s Evansovým oxazolidínom pre zavedenie chirálnej pomocnej skupiny (J. Am. Chem. Soc. 1990, 112, 4011),

b) vytvorením amid-enolátu s hexametylsi lazidom lítnym a reakciou s terc.butylesterom kyseliny brómoctovej,

c) odstránením chirálnej pomocnej skupiny perhydroxidom 1 í tnym.

Azidokarboxylová kyselina vzorca XII sa získa z laktónu vzorca XI mesyláciou alkoholu metánsulfonylchloridom, azidáciou azidom sodným, otvorením laktónu roztokom hydroxidu sodného v etanole a reakciou s terc.butyldimetyls ilylchloridom v prítomnosti imidazolu pre zavedenie ochrannej skupiny alkoholu.

Zlúčeniny všeobecného vzorca I potláčajú väzbu fibrinogénu na receptor fibrinogénu v krvných doštičkách (glykoproteín GP Ilb/IIIa). Vďaka tejto svojej vlastnosti zabraňujú zlúčeniny podľa vynálezu zhlukovaniu ľudských krvných doštičiek a vytváraniu zrazenín. Môžu sa preto používať na prevenciu a liečenie trombózy, apoplexie, infarktu myokardu, zápalov, artériosklerózy a nádorov. Ďalšími možnosťami terapeutického použitia zlúčenín podľa vynálezu sú : osteoporóza, akútny uzáver PTCA a podpora trombolýzy. /

Skratky použité v opise a v príkladoch uskutočnenia vynálezu majú nasledujúce významy :

Z	benzoyloxykarbonyl
BOC	terc.butoxykarbony1
DCC	d icyk1ohexykarbodi im id
HOBT	hydroxybenzotriazol
DMF	d imetylformám id
THF	tetrahydrofurán

TFA	kyselina tri fluóroctová
EtOAc	etylacetát
RP	obrátená fáza
Pd/C(10 %)	katalyzátor na báze paládia na uhlí obsahu 10 % paládia
LiOH	hydroxid lítny
PTCA	perkutánna transluminálna koronárna angio- plast ika
TBDMS	terc.buty1dimetyls ilylchlórsilán
LiHMDS	hexametyldisilazid lítny
DPPA	difenylfosforylaz id
EtOH	etanol
NMM	N-metylmorfolín

Príklady uskutočnenia vynálezu

Príklad 1

Kyselina (S)-3(N-tosylamíno)-6-[N-(p-amidínofenylacetyl)amíno] hexánová

A) Trifluóracetát metylesteru (S)-3-amíno-6-[N-(benzyloxykarbonyl)amíno]hexánovej kyseliny /

K roztoku 1,95 g Boc-Orn(Z)-OH a 0,74 ml Nets v 12 ml THF sa pri teplote -15 °C po kvapkách pridá 0,69 ml izobutylesteru kyseliny chlórkarbónovej. Po 30 minútach pri teplote -15 °C sa odfiltruje vyzrážaný hydrochlorid a filtrát sa pri teplote -15 °C zmieša so 40 ml (8 mmol) roztoku diazometánu v éteri. Reakčná zmes sa mieša 4 hodiny pri teplote 0 °C a potom sa nechá stáť ďalších 16 hodín pri teplote 4 °C. Pridá sa voda a roztok sa extrahuje éterom. Éterová fáza sa premyje nasýteným vodným roztokom hydrogénuhličitanu sodného , vysuší nad síranom sodným a zakoncentruj e odparením. Získaný odparok sa vyberie do 15 ml metanolu, zmieša s 246 mg oxidu striebor16 ného a zahrieva 12 hodín pod spätným chladičom. Pevný materiál sa odfiltruje, metanol sa odparí a zvyšok sa prečistí chromatografiou na silikageli pri použití zmesi etylacetátu a hexánu v pomere 1 : 1 ako elučného činidla. Takto sa ako pevný produkt získa metyiester kyseliny (S )-3-N-Boc-amíηο-6-N-Z-amínohexánovej.

Molekulová hmotnosť : 395 (M+H)+

Získaný produkt sa zmieša pri teplote 0°C s 10 ml metylénchloridu a 10 ml kyseliny trifluóroctovej a mieša sa počas jednej hodiny pri teplote miestnosti. Rozpúšťadlo sa odstráni vákuovou destiláciou a zvyšok sa suší 24 hodín pri vysokom vákuu. Ako produkt sa získa trifluóracetát metylesteru kyseliny (S)-3-amíno-6-[N-(benzyl/oxykarbonyl)amíno]hexánovej vo forme pevnej látky.

B) Metyiester kyseliny (S)-3-N-tosylamíηο-6-N-Z-amíno hexánove j

V 5 ml DMF sa spoločne s 0,75 ml trietylamínu rozpustí 1,3 g trifuóracetátu zo stupňa A a potom sa pridá 468 mg tosylchloridu. Po 2 hodinách sa pridá voda a reakčná zmes sa extrahuje éterom. Eterová fáza sa premyje vodou, vysuší nad síranom sodným , éter sa odparí a zvyšok sa prečistí chromatografiou na silikageli pri použití zmesi etylalcetátu a hexánu v pomere 1 : 1 ako elučného činidla. Týmto spôsobom sa získa metyiester kyseliny (S)-3N-tosylamíno-6-N-Z-amínohexánovej.

Molekulová hmotnosť : 449 (M+H)+

C) Kyselina (S)-3-(N-tosylamíno)-6[N-(p-amidínofenylacety1)amí no]hexánová

Produkt získaný v stupni B) sa rozpustí v 20 ml metanolu a podrobí hydrogenácii v prítomnosti 0,3 g Pd/C (10 %) a 1,34 ml IN kyseliny chlorovodíkovej. Po ukončení reakcie sa metanol odparí a odparok sa vysuší pod vysokým vákuom. Získa sa 500 mg hydrochloridu metylesteru kyseliny (S)-3-(N-tosylamíno)-6-amínohexánovej vo forme bezfarebnej peny. 0,5 g hydrochloridu, 373 mg kyseliny N-Boc-p-amidínofenyloctovej /vyrobenej Bocyláciou p-amidínofenyloctovej kyseliny trietylamínu

256-262)/, 0,19 ml rozpustí v 10 ml DMF a zmieša sa hodinách pri teplote odfiltruje, DMF sa (Pharmacie 29, a 199 mg HOBT sa s 276 mg DCC. Po 16 okolia sa vyzrážaná pevná látka odparí a odparok sa vyberie do etylacetátu. Etylacetátová fáza sa premyje vodou, vysuší nad síranom sodným, zakoncentruje sa odparením a odparok sa prečistí chromatografiou na silikageli pri použití etylacetátu ako elučného činidla. Získaný produkt sa zmieša s roztokom 0,2 ml anizolu v 5 ml TFA, mieša sa pri teplote okolia a po kvapkách sa pridá éteru. Vyzrážaná pevná látka sa odfiltruje, rozpustí v zmesi 2 ml etanolu a 1 ml vody a zmieša s 57 mg LiOH.H-O. Po 5 hodinách pri teplote miestnosti sa metanol odparí a vodný roztok sa zneutralizuje pomocou 0,13 ml TFA.Vyzrážaná pevná látka sa odfiltruje, vysuší sa a rekryštalizuje zo zmesi metanolu a vody. Týmto spôsobom sa získa trifluóracetát kyseliny (S)-3-(N-tosylamíno)6-[N-(p-ami d ínofeny1acety1)amíno]hexánovej. Molekulová hmotnosť : 461 (M+H)+ hodiny k 300 ml

Voľná zlúčenina sa získa z trifluóracetátu známym spôsobom .

Príklad 2

Kyselina (S)-3-[N-(3-metylbutyryl)am íno]-6-[N-(p-amidínofeny1acetyl)amino]hexánová

A) Metylester kyseliny (S)-3-[N-(3-metylbutyry1)am íno]-6-NZ-amínohexánovej

1,3 g tri fluóracetátu. zo stupňa A príkladu 1, 250 mg ky18 seliny izovalérovej, 0,34 ml trietylamínu a 363 mg HOBT sa rozpustí v 5 ml DMF a zmieša s 505 mg DCC. Po 16 hodinách sa vytvorená zrazenina odfiltruje, DMF sa odparí a zvyšok sa rozpustí v etylacetáte. Etylacetátová fáza sa premyje nasýteným vodným roztokom hydrogénuhličitanu sodného a vodou, vysuší nad síranom sodným a rozpúšťadlo sa oddestiluje vo vákuu'. Odparok sa vyčistí rekryštalizáciou zo zmesi atylacetátu a éteru a takto sa získa metylester kyseliny (S)-3-[Ν-3-metylbutyry1)amíno] -hexánovej vo forme bezfarebných kryštálov.

Molekulová hmotnosť· : 379 (M+H)+

B)' Kyselina (S)-3-[N-(3-metylbutyryl)amíno]-6-[N-(p-amidínofenylacetyl)amino]hexánová

560 mg produktu zo stupňa A príkladu 2 sa rozpustí v 20 ml metanolu a podrobí hydrogenácii v prítomnosti 0,3 g Pd/C (10 %) a 1,41 ml IN kyseliny chlorovodíkovej. Po postupe analogickom s postupom opísaným v stupni C) príkladu 1, sa získa hydrochlorid metylesteru kyseliny (S)-3-[N-(3-(metylbutyryl)amíno]-6-amínohexánovej vo forme bezfarebného oleja. 400 mg hydrochloridu a 392 mg kyseliny N-Boc-p-amidínofenyloctovej spolu s 0,2 ml trietylamínu, 259 mg HOBT a 290 mg DCC sa nechá reagovať postupom analogickým s postupom opísaným v stupni C) v príklade 1. Po odštiepení skupiny Boe pomocou TFA a hydrolýze metylesteru pomocou LiOH.H-O analogicky so stupňom C) príkladu 1 sa získaný surový produkt rekryštalizuje z metanolu. Získaný trifluóracetát kyseliny (S)-3-[N-(3-metylbutyryl)amíno]-6-[N-(p-amidínofenylacetyl)amíno]hexánovej vo forme bieleho prášku.

Molekulová hmotnosť : 391 (M+H)+

Voľná zlúčenina sa získa z trifluóracetátu známym spôsobom .

bom .

Príklad 3

Kyselina (S)-3-N-[3-(p-metoxyfenyl)propionyl]amíno-6-[N-(p-amidínofenylacetyl)am í no]hexánová

A) Metylester kyseliny (S)-3-N-[3-(p-metoxyfenyl)propionyl]amíηο-6-N-Z-amínohexánovej

0,7 g trifluóracetátu zo stupňa A) príkladu 1 a 256 mg kyseliny 3-(p-metoxy)propiónovej spolu s 0,21 ml trietylamínu, 256 mg HOBT a 313 g DCC sa nechá reagovať postupom analogickým postupu, ktorý je opísaný v stupni A príkladu 2. Surový produkt sa rekryštalizuje z éteru. Týmto postupom sa získa metylester kyseliny (S)-3-N-[3(p-metoxyfenyl)propionyl]amíno-6~N-Z-amínohexánovej vo forme bielych kryštálov.

Molekulová hmotnosť : 457 (M+H)+ .1

B) Kyselina (S)-3-N-[3-(p-metoxyfény1)propionyl]amino-6-[N(p-amidínofenylacetyl)amíno]hexánová

440 mg metylesteru zo stupňa B) príkladu 3 sa podrobí hydrolýze postupom analogickým postupu opísanému v stupni C) príkladu 1 a získaný hydrochlorid sa podrobí reakcii s 164 mg N-Boc-p-amidínofenyloctovej kyseliny, 0,13 ml tr i'etylamí nu, 164 HOBT a 200 mg DCC, analogicky postupu v stupni C) príkladu 1 a surový produkt sa rekryštalizuje zo zmesi metanolu a vody. Produkt - trifluóracetát kyseliny (S)-3-N-[3-(p-metoxyfenyl)propionylJarní no-6-[N-(p-amidínofenylacetyl)amino]hexánovej vo forme bieleho prášku.

Molekulová hmotnosť : 583 (M+H)+

Voľná zlúčenina sa získa z trifluóracetátu známym spôsobom .

Príklad 4

Kyselina (S)-3-[N-(adamant-l-ylacetyl)amíno]-6-(N-(p-amidínofenylacetyl)amíno]hexánová

A) Metylester kyseliny (S)-3-[N-(adamant-l-yôacetyl)amíno]6-N-Z-amínohexánovej

0,7 g trifluóracetátu zo stupňa A) príkladu 1 sa nechá reagovať s 246 mg kyseliny adamant-l-ylacetyloctovej, 0,21 ml trietylamínu, 246 mg HOBT a 331 mg DCC, pričom sa postupuje analogicky s postupom opísaným v stupni A) príkladu 2. Surový produkt sa prečistí chromatografiou na silikageli pri použití etylacetátu ako elučného činidla a výsledný produkt - metylester kyseliny (S)-3[N-(adamant-l-y1acety1)amíno]-6-N-Z-amínohexánove j sa izoluje vo forme bezfarebného oleja.

Molekulová hmotnosť : 471 (M+H)+

B) Terc.butylester kyseliny (S)-3-[N-(adamant-l-ylacetyl)amíno-6-N-Z-amínohexánovej

460 mg metylesteru zo stupňa A) príkladu 4 sa rozpustí v 4 ml MeOH a 2 ml vody a zmieša sa s 84 mg LiOH.HaO. Po 4 hodinách pri teplote miestnosti sa zmes zneutralizuje kyselinou chlorovodíkovou a extrahuje etylacetátom. Etylacetátová fáza sa vysuší nad síranom sodným a rozpúšťadlo sa oddestiluje vo vákuu. 400 mg získaného surového produktu sa rozpustí v 2 ml THF a zmieša sa s roztokom 479 mg terc.butyl-2,2,2-trichlóracetimidatu v 2,5 ml cyklohexánu. Po pridaní 0,069 ml tri fluóréterátu sa zmes mieša 3 hodiny pri teplote miestnosti. Reakčná zmes sa zmieša s 5 % roztokom hydrogénuhličitanú vo vode, extrahuje etylacetátom, etylacetátová fáza sa premyje nasýteným vodným roztokom chloridu sodného, vysuší sa nad síranom sodným a rozpúšťadlo sa odparí. Odparok sa vyberie do zmesi metylénchloridu a hexánu v pomere

1:1, nerozpustný trichlóracetamid sa odfiltruje a rozpúšťadlo sa odparí. Surový získaný olej sa prečistí chromatografiou na silikageli pri použití zmesi etylacetátu a hexánu v pomere 1 : 1 ako elučného činidla. Týmto postupom sa získa terc.butylester kyseliny (S)-3-[N-(adamant-l-ylacety1)amíno]-6-N-Z-amínohexánovej vo forme bezfarebného oleja.

Molekulová hmotnosť : 513 (M+H)+

C) Kyselina (S)-3-[N-(adamant-l-ylacetyl)amíno]-6-[N-(pamidínofenylacetyl)amíno]hexánová

225 mg terc.butylesteru zo stupňa B) príkladu 4 sa rozpustí v 20 ml etanolu a podrobí hydrogenácii za prítomnosti 0,1 g Pd/C (10¾) a 0,028 ml kyseliny octovej postupom opísaným v stupni C) príkladu 1. Získaný surový produkt sa rozpustí v 5 ml DMF a nechá sa reagovať so 119 mg kyseliny N-Boc-p-amidínofenyloctovej, 0,061 ml trietylamínu, 73 mg HOBT a 90 mg ĽCC analogicky s postupom uvedeným v stupni C) príkladu 1. Po tomto spracovaní sa získaný produkt prečistí chromatografiou na silikageli pri použití etylacetátu ako elučného činidla a čistý produkt sa zmieša s roztokom 5 ml TFA v 0,2 ml anizolu. Po uplynutí 3 hodín pri teplote miestnosti sa k reakčnej zmesi po kvapkách pridá 300 ml éteru a vyzrážaná pevná látka sa odfiltruje. Po vysušení vo vysokom vákuu sa získa produkt- trifluóracetát kyseliny (S)-3-[N-(adamant-l-ylacetyl)amí no]-6-[N-(p-amidínofenyl acety1)am íno]hexánovej vo forme bieleho prášku.

Molekulová hmotnosť : 505 (M+H)+

Voľná zlúčenina sa získa z trifluóracetátu známym spôsobom.

Príklad 5

Kyselina (S)-3-[N-(3-adamant-l-ylpropionyl)amíno]-6-[N-(amidínofenylacetyl)amíno]hexánová

A) Metylester kyseliny (S)-3-[N-(3-adamant-l-ylpropiony1)amí no]-6-N-Z-amínohexánovej

Metylester kyseliny (S)-3-[N-(3-adamant-l-ylpropionyl)amino]-6-N-Z-amínohexánovej sa získa reakciou 0,85 g tri fluóracetátu zo stupňa A) príkladu 1 s 423 mg kyseliny 3-adamant-l-ylpropionovej, 0,28 ml trietylamínu,

337 mg HOBT a 418 mg DCC a následným vyčistením chromatografiou na silikageli s použitím etylacetátu ako elučného činidla analogicky s postupom uvedeným v stupni A) príkladu 2.

Molekulová hmotnosť : 485 (M+H)+

B) Terc.butylester kyseliny (S)-3-[N-(3-adamant-l-ylpropionyl )amino]-6-N-Z-amínohexánovej

500 mg metylesteru zo stupňa A) príkladu 5 sa podrobí hydrolýze postupom opísaným v stupni B) príkladu 4, so 173 mg LiOH.HaO a nechá sa reagovať s 575 mg terc.butyl2,2,2-trichlóracetimidátu a 0,06 ml trifluóréterátu boritého. Po spracovaní pos.tupom opísaným v stupni B) príkladu 1, sa izoluje produkt - terc.butylester kyseliny (S)-3-[N-(3-adamant-l-ylpropionyl)amíno]-6-N-Z-amínohexánove j .

Molekulová hmotnosť : 527 (M+H)+

C) Kyselina (S)-3-[-(3-adamant-l-ylpropionyl)amíno]-6-[N(p-amídínofenylacetyl)amíno]hexánová

510 mg produktu zo stupňa B) príkladu 5 sa podrobí hydrogenácii postupom analogickým s postupom opísaným v stupni C) príkladu 4, sa nechá reagovať so 430 mg kyseliny N-Boc-p-amidínofenyloctovej a po vyčistení chromatografiou na silikageli pri použití etylacetátu ako elučného činidla sa zo získaného produktu odstráni ochranná skupina pomocou zmesi TFA s anizolom v pomere 95 : 5. Po vyzrážaní z éteru sa získa tŕi fluóracetát kyseliny (S)-3-[N-(3-adamant-l-ylpropionyl)amí no J-6-[N-(p-amidínofenylacetyl)amino]hexánovej vo forme bieleho prášku analogicky so stupňom C) príkladu 5.

Molekulová hmotnosť : 497 (M+H)+

Voľná zlúčeniny sa získa z tri fluóracetátu známym spôsobom.

Príklad 6

Kyselina (S)-3-[N-(3-metylbutyryl)amíno]-7-[N-(p-amidínobenzoyl)amíno]heptánová

A) Metylester kyseliny (S)-3-amíηο-6-N-Z-amínoheptánovej

4,04 g Boc-Li s(Z)-OH, 1,38 ml izobutylesteru kyseliny chlórkarbónovej, 1,44 ml trietylamínu a 80 ml (16 mmol) éterového roztoku diazometánu sa nechajú vzájomne reagovať, následne sa reakčná zmes nechá reagovať so 490 mg oxidu strieborného a spracuje sči analogicky s postupom uvedeným v stupni A) príkladu 1. Potom sa surový produkt vyčistí chromatografiou na silikageli pri použití etylacetátu a hexánu v pomere 1 : 1 ako elučného činidla. Takto sa získa metylester kyseliny (S)-3-N-Boc-amíno-6-N-Z-amínoheptánovej.

Molekulová hmotnosť : 409 (M+H)+

Metylester sa rozpustí v 15 ml metylénchloridu a zmieša s 15 ml TFA. Po uplynutí 1 hodiny sa TFA a rozpúšťadlo odstráni vo vákuu a zvyšok sa vysuší vo vysokom vákuu, čím sa získa produkt - trifluóracetát metylesteru kyseliny (S)-3-amíno-6-N-Z-amínoheptánovej..

B) Metylester kyseliny (S)-3-[N-(3-metylbutyryl)amíno]7-N-Z-amínoheptánovej

4,1 g trifluóracetátu zo stupňa A) príkladu 1 sa podrobí reakcii s 1 g kyseliny izovalérovej, 1,36 ml trietylamínu, 1,65 HOBT a 2,02 g DCC postupom analogickým postupu opísanému v stupni A) príkladu 2. Získaný surový produkt sa rekryštalizuje z éteru, čím sa získa produktmetylester kyseliny (S ) - 3-[ N-( 3-me.ty lbut yry 1) am í no ]-7-NZ-amínoheptánovej

Molekulová hmotnost : 393 (M+H)+

C) Terc.butylester kyseliny (S)-3-[N-(3-metylbutyry1)amino]7-N-Z-am ínoheptánovej

Postupom analogickým postupu opísanému v stupni B) zmydelní sa 3,25 g metylesteru zo stupňa B) príkladu 6 s 1,36 g LiOH.H^O a nechá sa reagovať s 4,04 g terc.butyl-2,2,2-tríchlóracetimidátu a 0,42 ml trifluóreterátu boritého, čím sa získa produkt - terc.butylester kyseliny (S)-3-[N-(3-metylbutyryl)amíno]-7-N-Z-amínoheptánovej.

Molekulová hmotnosť : 435 (M+H)+

D) Kyselina (S)-3-[N-(3-metylbutyry1)amíno]-7-[N-(p-amidínobenzoyl)amíno]heptánová

Pre hydrogenáciu 2,2 g produktu zo stupňa C) príkladu 6 sa analogicky s postupom uvedeným v stupni C) príkladu 4 sa tento produkt nechá reagovať s 1,34 g kyseliny N-BOCp-amidínofenyloctovej, 0,7 ml trietylamínu, 0,852 g HOBT a 1,04 g DCC a následne sa odstráni ochranná skupina pomocou 25 ml zmesi TFA s anizolom v pomere 95 : 5, čím sa získa po potrebnom ďalšom spracovaní - trifluóracetát kyseliny (S)-3-[N-(3-mety1butyry1)-amíno]-7-[N-(p-amidínobenzoyl)amíno]heptánovej vo forme bieleho prášku

Molekulová hmotnosť : 391 (M+H)+

Voľná zlúčenina sa získa z trifluóracetátu známym spôsobom.

Delta-lakton kyseliny (3S,5S)-6-(4--amidínofenylacetylamíno)· (4-metoxypropionylamíno)hexánove j

A)

B) gama-lakton kyseliny (4S)-4-hyroxy-5“0-mezy1valérovej teplotu -30 °C kvapkách 12 ml

15,3 g (140 mmol) gama-laktonu kyseliny (45)-4,5dihydroxy-valérovej a 21,52 ml (154 mmol) trietylamínu sa rozpustí v metylénchloride a roztok sa ochladí na Potom sa pridá za súčasného miešania po (154 mmol) matánsulfony1 chlóridu. Roztok sa potom mieša 15 minút pri teplote -30 °C a následne sa zahreje počas 1,5 hodiny na teplotu 18 °C. Získaná suspenzia sa pridá ku 0,5 N kyseline chlorovodíkovej a niekoľkokrát sa extrahuje éterom. Spojené organické fázy sa premyjú nasýteným roztokom hydrogénuhli č i tanú sodného a nasýteným vodným roztokom chloridu sodného. Po vysušení nad síranom sodným a odparení na rotačnej odparke sa získa produkt gama-lakton kyseliny (4S)-4hydroxy-5-mesyl-valérovej vo forme oleja, ktorý sa použije bezprostredne v nasledujúcom reakčnom stupni.

gama-lakton kyseliny (4S)-4-hydroxy-5-aziďo-valérovej g (128,7 mmol) mesylátu zo stupňa A) príkladu 7 sa rozpustí v DMSO, roztok sa zmieša pri teplote miestnosti s 16,74 g (257,4 mmol) azidu sodného a mieša sa 1,5 hodiny pri teplote 100 °C. Hnedá suspenzia sa ochladí a DMSO oddestiluje vo vákuu. Odparok sa vyberie do EtOAc, prefiltruje sa cez Hyflo a odparí vo vákuu. Vákuovou destiláciou sa pri 16 Pa získa požadovaná zlúčenina vo forme bezfarebného oleja.

οςD = + 79,9 ° c = 2,2 v CHCls)

C) Kyselina (4S)-5-azido-4-[((1,1-dimetylety1)dimetyls i lyl)oxy]pentánová

12,28 g (87,01 mmol) gama-laktónu kyseliny (4S)-4-hydroxy-5-azidovalérovej zo stupňa B) príkladu 7 sa rozpustí v 435 ml etanolu a potom sa pridá za súčasného miešania pri teplote miestnosti 43,5 ml 2N vodného roztoku hydroxidu sodného. Roztok sa nechá stáť 0,5 hodiny pri teplote miestnosti a následne sa zkoncentruje v rotačnej odparke a vysuší vo vysokom vákuu. Získaných 16,49 g. odparku sa zmieša so 174 ml DMF, 29,63 g (435,05 mmol) imidazolu a 48,3 g (313,24 mmol) TBDMS-C1 a mieša sa 19 hodín pri teplote miestnosti. Získaná suspenzia sa pridá ku zmesi ľadu a IN vodného roztoku hydrogénsíranu sodného a extrahuje sa niekoľkokrát éterom. Spojené organické fázy sa vysušia nad síranom sodným a odparia vo vákuu. Odparok sa rozpustí v 435 ml metanolu a zmieša s 18,44 h uhličitanmu sodného v 87 ml vody za súčasného miešania pri teplote miestnosti a následne sa zmes mieša 0,5 hodiny pri teplote miestnosti. Získaná suspenzia sa mieša s 435 ml vody a extrahuje sa dva krát hexánom. Spojené hexánové fázy sa premyjú zmesou metanolu s vodou v pomere 1 : 1 a spojené vodné fázy sa okyslia hydrogénsíranom sodným. Po extrakcii hexánom a premytí nasýtený, vodným roztokom chloridu sodného sa organická fáza vysuší nad síranom sodným a zkoncentruje na rotačnej odparke. Po prečistení chromatografiou na .- ,27 tenkej vrstve a Ή-NMR sa získa surový produkt - kyselina (4S)-5-azido-4-[((1, 1-dimetyletyl)dimetysilyl)oxy]pentánová, prakticky čistý a použije sa bez ďalšieho čistenia.

Molekulová hmotnosť : 274 (M+H)+

D) (3(4S),4R)-3-[5-azido-4-(((l,l-dimetyetyl)dimetylsilyl)oxy)-l-oxopentyl]-4-(fenylmetyl)-2-oxazolidinón

Opticky aktívny derivát kyseliny pentánovej zo stupňa C) príkladu 7 (19,9 g, 72,37 mmol) sa rozpustí v 405 ml suchého THF, ochladí na teplotu -78 °C, zmieša s 13,5 ml (97 mmol) trietylamínu a potom s 10,4 ml(84,7 mmol) pivaloylchloridu. Po piatich minútach pri teplote -78 °C sa zmes zahreje v priebeho 1 hodiny na teplotu 0 “C a znova sa ochladí na teplotu -78 ° C. V druhej reakčnej nádobe sa rozpustí 15,65 g (88,3 mmol) (4R)-4-feny1metyl-2-oxazolidinónu v 405 ml bezvodého THF, ochladí sa na teplotu -78 °C, zmieša sa s 56,1 ml 1,6M roztoku n-butyllítia a mieša sa 0,25 hodiny pri teplote -78 °C. Takto pripravený azaenolát sa zmieša pri teplote -78 °C pri použití tlakovej ihly so zmiešaným anhydridom kyseliny, ktorý bol pripravený predom in situ. Chladiaci kúpeľ sa odstráni a zmes sa mieša počas 1 hodiny. Reakčná zmes sa pridá ku zmesi ľadu a roztoku hydrogénsíranu sodného a extrahuje pri použití EtOAc, organické fázy sa premyjú nasýteným vodným roztokom hydrogénuhličitanu a nasýteným vodným roztokom chloridu sodného, sa nad síranom sodným a odparí vovákuu. Podľa existuje produkt ako diastereoizomérna zmes : (3(2R,4S)4R) v pomere 90 ; 10. Po chromasilikageli s použitím zmesi : 1 sa v nadpise uvedená sodného vysuší 'H-NMR (3(2S,4S)4R) tografii na v pomere 6 hexánu s EtOAc zlúčenina získa v čistej diastereoizomérnej forme ako bezfarebný olej.

Molekulová hmotnosť : 521 (M-N-+3H)+

F) Terc.butylester kyseliny (3S,5S)-6-azido-5-[((1,1-dimetyletyl)dimetylsilyl)oxy]-3-hydroxykarbonylhexánovej

21,5 g (39,4 mmol) zlúčeniny uvedenej v nadpise stupňa

E) príkladu 7 sa rozpustí v 500 ml THF, zmieša postupne so 180 ml vody, 16,7 ml 39 % roztoku peroxidu vodíka a 3,3 g (78,8 mmol) hydroxidu lítneho a zmes sa mieša 1,5 hodiny pri 0 °C. Potom sa pridá 17,1 g (136 mmol) siričitanu sodného v 120 ml vody a v miešaní sa pokračuje 5 minút pri 0 °C. Reakčná zmes sa okyslí IN vodným roztokom hydrogénsíranu sodného a extrahuje sa niekoľkokrát éterom. Spojené organické fázy sa premyjú nasýteným vodným roztokom chloridu sodného, vysušia nad síranom sodným a odparia vo vákuu. Získaný surový produkt sa vyberie do hexánu. Výsledný (4R)-4-fenylmetyl-2oxazolidinón sa odfiltruje a terc.butylester kyseliny hexánovej sa získa v čistej forme odparením filtrátu a jeho vysušením vo vysokom vákuu.

Molekulová hmotnosť ; 410 (M+H)+ zo sodnej soli

G) Terc.butylester kyseliny(3S,5S)-6-azido-5-[((1,1-dimetyletyl)dimetylsilyl)oxy]-3-benzy1oxykarbonylamínohexánovej

1,55 g (4 mmol) zlúčeniny uvedenej v nadpise stupňa F) príkladu 7 sa rozpustí v 20 ml bezvodého toluénu a zmieša sa postupne s 956 /ul (95 %) (4,2 mmol) DPPA a

613 /ul (4,4 mmol) trietyiamínu a zmes sa mieša 0,5 hodiny pod spätným chladičom. Po ochladení približne na 40 °C sa pridá 4,14 (40 mmol) benzylalkoholu a zmes sa mieša pod spätným chladičom ďalších 60 minút. Reakčný roztok sa ochladí na teplotu miestnosti, zmieša sa s ďalším toluénom, premyje sa nasýteným vodným roztokom hydrogénuhli č i tanú sodného, 10 % roztokom kyseliny vínnej a nasýteným vodným roztokom chloridu sodného, vysuší sa nad síranom sodným a odparí vo vákuu. Surový produkt sa prečistí chromatografiou na silikageli, pri použití zmesi hexánu a EtOAc v pomere 6 : 1 ako elučného činidla. Požadovaná zlúčenina uvedená v nadpise sa získa v čistej forme.

H) Terc.butylester kyseliny (3S,5S)-6-[4-(terc.butyloxykarbonyl)amidínofenylacetylamíno]-5-[((l,l-dimetyletyl)dimetyls ilyl)oxy]-3-benzyloxykarbonylamínohexánovej

1,18 g (2,4 mmol) zlúčeniny uvedenej v nadpise stupňa G) príkladu 7 sa rozpustí v 12 ml THF a nechá reagovať s 2,52 mmol (0,66 g) trifenylfosfínu analogicky s postuopísaným v literatúre (Tetrahedron Lett.24, 763 17 hodín pri teplote miestnosti a potom spätným chladičom.

pom (1983)) najprv za varu pod

Po zahrievaní pod sp)tným chladičom počas 1 hodiny sa pridajú 3,6 mól ekvivalenty vody a spätným chladičom vákuu , odparok sa vyberie zmes sa k mieša ďalšie 4 hodiny pod Reakčný roztok sa ochladí, odparí vo do hexánu a nerozpustný trifenylfosf ínoxid sa odfiltruje. Filtrát sa odparí vo vákuu a výsledný amín sa izoluje vo forme oleja, ktorý sa nechá ihneď ďalej reagovať. Amín sa rozpustí v 8 ml DMF spolu s 733 mg (2,64 mmol) 4-(terc.butoxykarbony1)amia 4,89 mg (3,19 mmol) HOBT a dínofenyloctovej kyseliny nechá sa reagovať pri teplote miestnosti mmol) DCC. Po 16 hodinách pri teplote 0 získaná suspenzia ochladí na teplotu dicyklohexylmočovina sa odfiltruje. EtOAc a premyje nasýteným hydrogénuhličitanu chloridu sodného, produkt odparí vo s 494 mg (2,4 miestnosti sa C a vyzrážaná

Filtrát sa zriedi roztokom vodným sodného a nasýteným vodným roztokom Po vysušení nad síranom sodným sa vákuu. Získaný surový materiál sa chromatografuje na silikageli s použitím zmesi hexánu s EtOAc v pomere 30 : 70. Požadovaná zlúčenina uvedená v nadpise sa získa vo forme pevnej bielej látky.

Molekulová hmotnosť : 727 (M+H)+

I) Terc.butylester kyseliny (3S,5S)-6-[4-(terc.butyloxykarbonyl)amidínofenylacetamíno]-5-[((1,l--dimetyletyl)dimetylsilyl)oxy] - 3- (4-metoxyfenylpropiony1amino)hexánove j

1,23 g (1,69 mmol) produktu zo stupňa H) príkladu 7 sa rozpustí v 8,5 ml etanolu a hydrogénuje sa nad 10 % Pd/C. Po dvoch hodinách pri teplote miestnosti sa odfiltruje katalyzátor a filtrát voľný amín sa rozpustí v sa odparí vo vákuu. Získaný 5,6 ml DMF spolu s 335. mg (1,86 mmol) kyseliny 4-metoxyfenylpropiónovej s 349 mg (2,25 mmol) HOBT a potom sa zmieša s 349 mg (1,69 mmol) DCC. Potom sa suspenzia nechá stáť pri teplote miestnosti počas 63 hodín a následne sa ochladí na teplotu 0°C a spracuje ďalej analogicky s postupom opísaným v stupni H) príkladu 7.

Získaný surový produkt sa chromatografu je na silikageli pri použití zmesi hexánu a EtOAc. Požadovaná zlúčenina uvedená v nadpise sa izoluje vo forme bielej peny. Molekulová hmotnosť : 755 (M+H)+)

J) delta-lakton kyseliny (3S,5S)-6-(4-amidínofeny1acety1amíno)-3-(metoxyfenylprop iónylamíno)hexánove j

639 mg (0,846 mmol) produktu zo stupňa I) príkladu 7 sa zmieša s 0,21 ml etánditiolu, 0,21 ml anizolu a 4,23 ml zmesi TFA a vody v pomere 95 : 5 pri teplote 0 °C. Po 3 hodinách pri teplote miestnosti sa zmes znova ochladína teplotu 0 °C, pridá sa éter a vyzrážaná pevná látka sa odfiltruje. Získaná pevná látka sa premyje éterom a potom sa rekryštalizuje. Získa sa trifluóracetát požadovanej zlúčeniny uvedenej v nadpise vo forme bielej kryštalickej látky.

Teplota topenia 216 až 218 + 13,5 (C

0,48 MeOH), molekulová hmotnosť : 467 (M+H)+

Voľná zlúčenina sa získa z tri fluóracetátu známym spôsobom.

delta-lakton kyseliny (3S,5S)-6-(4-amidínofenylacetylamíno)-3(3-metylbutyrylamíno)hexánovej

A) Terc.butylestér kyseliny (3S , 5S)-6-[4-(terc.butyloxykarbonyl )amidínofenylacetylamíno]-5-[((l,l-dimetyletyl)dimetylsilyl)oxy]-3-(3-metylbutyrylamí no)hexánovej

0,6 g (0,82 mmol) produktu zo stupňa H) príkladu 7 sa rozpustí v 5 ml etanolu a podrobí hydrogenácii nad 10 % Pd/C. Po dvoch hodinách pri teplote miestnosti sa katalyzátor odfiltruje a filtrát sa odparí vo vákuu. Získaný voľný amín sa rozpustí v 3 ml DMF spoločne so 110 /ul (0,9 mmol) kyseliny izovalérovej a 172,5 mg (1,13 mmol) HOBT a zmieša sa so 175 mg (0,82 mmol) DCC. Po 16 hodinách prpi teplote miestnosti sa reakčná zmes spracuje analogicky s postupom opísaným v stupni I) príkladu 7. Získaný surový produkt sa prečistí chromatografiou na silikageli pri použití zmesi hexánu a EtOAc ako elučného činidla. Požadovaná zlúčeniny uvedená v nadpise sa získa vo forme bielej peny.

Molekulová hmotnosť : 677 (M+H)+

B) delta-lakton kyseliny (3S , 5S)-6-(4-amid ínofenylacetylamíno)-3-(3-metylbutyrylamíno)hexánovej

320 mg (0,473 mmol) produktu zo stupňa A) príkladu 8 sa nechá reagovať s TFA analogicky s postupom opísaným v stupni J) príkladu 7 a ochranná skupina sa odstráni. Po vyzrážaní s éterom a nasledujúcej rekryštalizáci i sa získa tri fluóracetát požadovanej zlúčeniny uvedenje ¹ v nadpise vo forme bielej Teplota topenia : 236,7 = 0,5 MeOH) , molekuloví kryštalickej látky.

až 237,7 °C, [..]_D = + 15,0 ° (C hmotnosť : 389 (M+H)+

Voľná zlúčenina sa získa z tri fluóracetátu známym spôsobom.

Príklad 9

Kyselina (S)-3-N-[3-(p-metoxyfenyl)propiony1]am íno-7-[N-(p-amidínobenzoyl)am í no]heptánová

A) Metylester kyseliny (S)-3-N-[3-(p-metoxyfeny1)propiony1] amí no-7-N-Z-amínoheptánovej

1,18 g trifluóracetátu získaného podľa stupňa A) príkladu 6 sa nechá reagovať s 0,43 g 3-p-metoxyfeny1propiónovej kyseliny, 0,4 g HOBT, 0,33 ml trietylamínu a 0,46 g DCC a spracuje sa použitím postupu opísaného v stupni B) príkladu 6. Získaný surový materiál sa rekryštalizuje z éteru a takto sa získa požadovaná zlúčenina uvedená v nadpise vo forme bielych kryštálov.

Molekulová hmotnosť : 471 (M+H)+

B) Terc.butylester kyseliny (S)-3-N-[3-(p-metoxyfenyl)propionyl]amíno-7-N-Z-amínoheptánovej

Použitím postupu podľa stupňa B) príkladu 4 sa 0,7 g metylesteru získaného v stupni A) príkladu 9 hydrolyzuje s 0,21 g LiOH.HzO a produkt hydrolýzy sa nechá reagovať s 0,82 g terc.butyl-2,2,2-trichlóracetimidátu v prítomnosti 0,1 ml trifluóréterátu boritého a analogicky sa ďalej spracuje. Po chromatografi i na silikageli pri použití zmesi etylacetátu s hexánom v pomere 1 : 1 sa získa požadovaná zlúčeniny uvedená v nadpise vo forme bezfarebného oleja.

Molekulová hmotnosť : 513 (M+H)+

C) Kyselina (S)-3-N-[3-(p-metoxyfenyl)propionyl]amíno-7[N-(p-amid£nobenzoyl)amí no]heptánová

0,55 g zlúčeniny získanej podľa stupňa B) príkaldu 9 sa podrobí hydrogenácii pri použití postupu opísaného v stupni C) príkladu 4 a takto získaný amín sa nechá reagovať s 0,28 g kyseliny N-BOC-p-amidínobenzoovej, 0,18 g HOBT, 0,15 ml trietylamínu a 0,22 g DCC analogicky citovanému postupu. Získaný surový produkt sa vyčistí chromatografiou na silikageli pri použití etylacetátu ako elučného činidla a ochranná skupina sa odstráni pomocou zmesi TFA a anizolu v pomere 95 : 5. Po vyzrážaní éterom sa získa trifluóracetát požadovanej zlúčeniny uvedenej v nadpise, vo forme bieleho prášku.

Molekulová hmotnosť : 469 (M+H)+

Voľná zlúčenina sa získa z trifluóracetátu známym spôsobom .

Príklad 10 delta-lakton kyseliny (3S,5S)-6-(4-amidínofenylacetylamíno)-3N-[2-(p-metoxyfenyl)etánsulfonylamíno]hexánová

A) Terc.butylester kyseliny (3S,5S)-6-[4-(terc.butoxykarbony 1 )amidínofenylacetylamíno]-5-[((1,1-dimetyletyl)dimetylsilyl)oxy]-3-amínohexánovej

1,09 g (1,5 mmél) produktu zo stupňa H) príkladu 7 sa zmieša so 75 mg oxidu platičitého v 7,5 ml etylalkoholu a hydrogénuje sa najprv zahrievaním pod spätným chladičom poča 3/4 hodiny a náslledne sa pridá 75 mg 10 % Pd/C a zmes sa zahrieva pod spätným chladičom ďalšiu 3/4 hodinu. Katalyzátor sa odfiltruje, k filtrátu sa pridá 150 mg 10 % Pd/C a zmes sa zahrieva pod spätným chladičom ďalšiu 1/2 hodinu a následne sa pridá 75 mg Pd/C a v zharievaní pod spätným chladičom sa pokračuje ďalšiu hodinu. Katalyzátor sa znova odfiltruje, pridá sa ďalších 150 mg 10 % Pd/C a v zahrievaní pod spätným chladičom sa pokračuje ďalšiu 1 1/2 hodiny. Požadovaný produkt uvedený v nadpise sa získa odstránením katalyzátora filtráciou a odparením do sucha. Surový produkt (8 90 mg) má, podľa chromatograf i e na tenkej vrstve, približne 100 % čistotu a použije sa pre ďalšiu syntézu bez ďalšieho čistenia.

B) Terc.butylester kyseliny (3S,5S)-6-[4-(terc.butyloxykarbonyl)amidínofenylacetylamíno]-3-N-[2-(p-metoxyfenyl)etánsulfonylamíno]hexánovej počas 1 stáť 18 hodín pri teplote

890 mg (1,5 mmol) zlúčeniny uvedenej v nadpise časti A) príkladu 10 a 99 /ul (0,6 mol.ekviv.) NMM v 7,5 ml THF sa intenzívne mieša pri teplote miestnosti v atmosfére dusíka počas 2 1/2 hodiny s 193,5 mg (0,55 mol.ekviv.) 2-(p-metoxyfeny1)etánsulfony1 chlóridu. Pridá sa ďalších

193.5 mg sulfony1chlóridu a 99 /ul NMM a zmes sa mieša ako je uvedené vyššie pri teplote miestnosti hodiny a následne sa nechá miestnosti. Výsledná reakčná zmes sa vyberie ako suspenzia do EtOAc a extrahuje sa jeden krát 10 % roztokom kyseliny octovej vo vode, jeden krát vodným roztokom hydrogénuhli č i tanú sodného a jeden krát vodným roztokom chloridu sodného. Spojené vodné fázy sa ďalej extrahujú jedn krát EtOAc. Spojené organické fázy sa potom vysušia a odparia do sucha pri použití rotačnej odparky. Týto spôsobom sa získa 1,1 g surového produktu, čo odpovedá približne 92,7 % výťažku. Surový produkt sa vyčistí na

102.5 ml chromatograf i ckej kolóne (s i 1ikagel 24 - 40 /ul, elučné činidlo : zmes hexánu s EtOAc v pomere 3 : 7, prietoková rýchlosť 10 ml/minúta, 10 ml frakcie, absorbancia 0,02/200 mv). Frakcia 11 až 20 sa spojí a požadovaná zlúčenina uvedená v nadpise (257 mg) sa získa po odparení rozpúšťadla.

MA* 791, [MA-BOC]* 691, [MA-(BOC + C^Hs)]* 635

C) delta-lakton kyseliny (3S,5S)-6-(4-amidínofenylacety1amíno)-3-N-[2-(p-metoxyfeny1)etánsulfonylamí no]hexánovej . kyselina tri fluóroctová

257 mg produktu uvedeného v nadpise časti B) príkladu 10 a zmieša sa so 100 zul anizolu a 100 /ul etánditiolu v 2 ml 90 % vodnej kyseliny trifluóroctovej a zmes sa nechá stáť pri teplote miestnosti 1 1/3 hodiny. Výsledná suspenzia sa intenzívne mieša pri súčasnom chladení v ľadovom kúpeli s 20 ml dietyléteru. Vykryštalizovaný produkt sa odfiltruje, premyje sa dietyléterom a vysuší vo vákuu vodnej vývevy pri teplote 40 ° C. Výsledný sutový produkt sa rozpustí v teplom etylalkohole, roztok sa ochaldí a produkt sa· prekryštalizuje, čím sa získa 158 mg požadovanej zlúčeniny uvedenej v nadpise, v čistej forme. Výsledný produkt sa analyzuje a má nasledu júce charakteristické vlastosti :

F : Ab 160 °C

ÄT [βς]ο = + 12,8 ° c = 0,25 v MeOH 221 - 896 Hf MA*503

Voľná zlúčenina sa získa z tri fluóracetátu známym spôsobom.

Príklad 11 (3S,5S)-6-(4-amidínofenylacetylamíno)-3-(metoxyfenylpropppionylamíno)hexanoát lítny

153 mg (264 zumol) zlúčeniny uvedenej v nadpise príkladu 7, rozpustenej v 528 zul vody sa prevedie na formu acetátu chromatografiou na anexe pri použití anexovej živice Bio-Rad-ACr 1-X2 100 - 200 mesh v acetátovej for36 me. Ako elučné činidlo sa použije 2M kyselina octová v zmesi vody a acetonitrilu v pomere 1:1. Frakcia obsahujúca produkt sa odparí, odparok sa rozpustí v minimálnom množstve etylacetátu a produkt sa vyzráža prídavkom dietyléteru. Amorfný produkt sa rozpustí vo vode a zmieša sa s 264 zul 2N hydroxidu lítneho (2 mol.ekviv) a následne sa nechá stáť 15 hodín pri teplote miestnosti. Odparením výsledného roztoku a kryštalizáciou z etylalkoholu sa získa 87 mg (približne 67 % výťažok) požadovaného produktu

Analýza produktu potvrdzuje vlastnosti :

uvedeného v d nadpise, tieto charakteristické

Teplota topenia = 227 až 230 ° C

RT [0C]d . = 11,6 ° (c = 0,31 v H-0) [M+Li]* lítnej soli 497

- COOLi 491 MH*

- COOH 485

Zlúčeniny všeobecného vzorca I sú významné pre svoje cenné terapeutické vlastnosti. Zlúčeniny všeobecného vzorca I majú najmä schopnosť zabraňovať viazaniu fibrinogénu na G P Ilb/IIIa a tým predchádzať zhlukovamniu krvných doštičiek.

Výhodné vlastnosti zlúčenín všeobecného vzorca I prejavujúce sa v potláčaní väzby fibrinogénu na izolovaný a immobilizovaný GP Ilb/IIa a pri potláčaní zhlukovania ľudských krvných doštičiek vyvolaného ADP za prítomnosti fibrinogénu dokumentujú nasledujúce testy:

a) Potláčanie väzby fibrinogénu na izolovaný a immobilizovaný GP Ilb/IIIa :

GP Ilb/IIIa sa izoluje z membrán ľudských krvných doštičiek extrakciou tritónom X-100 a vyčistí sa chromatografiou na inonomeničoch a gelovou filtráciou, . Takto získaný receptorový proteín sa uloží na mikrotitračné doštičky. Stanoví sa potlačenie väzby biotínom značeného fibrinogénu na receptor za prítomnosti inhibítoru.

b) Potláčanie zhlukovanía ľudských krvných doštičiek vyvolaného ADP za prítomnosti fibrinogénu.:

Krvné doštičky sa izolujú z čerstvej krve odstredením a premyjú sa. premyté doštičky sa znova suspendujú v prítomnosti PGI2 a apyrázy a stimulujú sa s 10 nM ADP v prítomnosti fibrinogénu. Použitím agregometru sa stanoví schopnosť doštičiek zhlukovat sa v prítomnosti alebo neprítomnosti inhibítorov .

Zlúčeniny všeobecného vzorca I majú schopnosť potláčať väzbu f ibrimogénu na GP Ilb/IIa v rozmedzí ICso (koneentrác i ia zlúčenín všeobecného vzorca I, pri ktorej sa znižuje väzba fibrinogénu na receptor o 50 medzi 0,5 a 20 nM.

Zlúčeniny z príkladov 1 postupmi testovali s cieľom zis lačení väzby fibrinogénu na GP zhlukovania krvných doštičiek výsledky sú uvedené nižšie.

Produkt z príkladu : 123 ž 8 sa opísanými testovacími enia ich hodnôt ICso pri potIIb(IIa (FB) a pri potlačení vyvolaných ADP (PA). Získané

5 6 7 8

FB :	ICso	(nM)	7,6	1,7	1,1	2,2	0,4	0,5	0,5
PA :	ICso	(nM)	640	100	31	67	61	15	80

0,9

110

Vzhľadom na účinky preukázané týmito testami je možné zlúčeniny všeobecného vzorca I použiť na profylaktické a akútne liečenie trombózy. Priaznivé výsledky sa pri dospelých pacientoch dosiahnu s dávkami 0,1 až 20 mg/kg , s výhodou 0,1 až 3 mg/kg na deň.

Zlúčeniny všeobecného vzorca I sa môžu podobne použiť,vo forme solí, ktoré sa získajú ich reakciou s farmakologicky prijateľnými kyselinami, ako kyselina octová, kyselina trifluóroctová, kyselina chlorovodíková a podobne.

Zlúčeniny všeobecného vzorca I, ich solváty alebo soli je možné aplikovať enterálne, napríklad orálne ( vo forme tabliet, kapsulí atď.) alebo rektálne alebo ako spray. Je tiež možné parenterálna aplikácia vo forme injekčných roztokov alebo infúznych roztokov.

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY · ·' r,-> .·!

1. Pseudopeptidy všeobecného vzorca I vo voľnej forme alebo vo forme solí ^R1 v ktorom

Ri predstavuje jednu zo skupín -COOH,- COOL1, karboxyalkyl s 1 až 4 atómami uhlíka v alkylovom zvyšku

X predstavuje jednu zo skupín -CHz-, -CH=, -CO-,

-C*HOH-, C*HO(alkyl), v ktorej alkylový zvyšok obsahuje 1 až 4 atómy uhlíka, alebo

X a Rx dohromady predstavujú skupinu

\. O /CH-O¹¹—

Y predstavuje jednu zo skupín -(CH?.-CH=, -NHa m predstavuje celé číslo 1 alebo 2,

A znamená buď skupinu všeobecného vzorca v ktorom

D predstavuje vodík, ochrannú skupinu alfa-amínokyselinu, ktorá je viazaná cez skupinu,

R-> predstavuje skupiny vzorcov i

t i

i

Z alebo · karbonylovú í u

—(CH,) N NH, n h ² ~(^CH2)t~~\\ //~ (^ch2)—NH₂

NH

-Λκ.

• l\—/ l H alebo

-(CH₂)-

NH '<

nh₂ v ktorých n predstavuje číslo o hodnote 3 alebo 4 a t predstavuje číslo o hodnote 0 alebo 1 alebo

A znamená skupiny všeobecných vzorcov >-(CH₂)-NH₂ ^ζ k ²

ΝΗ ^υ JJ /-(CH₂) — ν-^'ΝΗ

Ο Ζ^λ ΝΗ

ΝΗ, alebo

Ο \\

ΝΗ,

v ktorých k predstavuje číslo ο hodnote 3, 4, 5 alebo 6, o predstavuje číslo o hodnote 3, 4 alebo 5 a p predstavuje číslo o hodnote 0, 1 alebo 2

B buď označuje skupinu všeobecného vzorca o

Jí-₍ch_s)-r₃ v ktorom q označuje číslo o hodnote 1 alebo 2 a

Ra predstavuje skupiny alkyl- s 1 až 4 atómami uhlíka, i zopropy1-, terc.butyl-, 1-adamantyl-, trimetyls ily1-, 1-naftyl-, fenyl-, 3-indolyl-, alkoxyfenyl s 1 až 4 atómami uhlíka alkoxylovom zvyšku, alebo označuje skupinu všeobecného vzorca °,_s,° /^O(CH₂)—R, r v ktorom r znamená celé a

R₄ predstavuje
2-propyl-, t atómami uhlí mesyl-, trisylalebo číslo o hodnote 0, 1 alebo 2 skupiny alkyl- s src.butyl-, fenyl1 až 4 atómami uhlíka, p-alkoxyfeny1 s 1 až 4 ka v alkoxylovom zvyšku, Ι-naftyl-, tolyl-, v ktorom

D je vodík, alebo ochranná skupina Z a

Rs je jedna zo skupín fenyl-(CH2)t-, indol-3-yl-(CH₃)t-, naf t-l-y 1-(CH2)-t-, adamant-l-y1-(CHa)tprop-2-y 1- (CH3.) t - , trimetylsilyl-(CHs)t- alebo terc . butyl-(CH₃ )-e , v ktorých t má vyššie uvedený význam alebo

B označuje vždy alfa-amínokyselinu, ktorá je viazaná cez svoju karbonylovú skupinu.

tft-ť v ktorom

Ri a m majú význam uvedený v nároku 1, s znamená číslo s hodnotou 0 alebo 1,

Rô predstavuje vodík, OH-skupinu alebo alkylskupinu s 1 až 4 atómami uhlíka alebo

Rx a Re tvoria dohromady skupinu -0-C0-,

B' je buď skupina všeobecného vzorca

-^U-(CH₂)-R₃ v ktorom R₃ a q majú význam uvedený v nároku 1, alebo

B' je skupina všeobecného vzorca v ktorom R₄ a r majú význam definovaný v nároku l_zalebo

B' je skupina všeobecného vzorca v ktorom Rs a D majú vyššie uvedený význam.
3. Pseudopeptidy podľa nárokov 1 a 2 všeobecného vzorca I

B (I ) v ktorom Ri, Rs, mas majú význam definovaný v nároku 1, alebo

Ri a Rs tvoria dohromady skupinu -0-C0- a

B'' predstavuje skupinu všeobecného vzorca

O

-U—(CH₂) —R, q ' v ktorom q a Rs majú význam definovaný v nároku 1.
4. Pseudopeptidy podľa predchádzajúcich nárokov, skupiny zahŕňajúcej :

zvolené zo kyselinu (S)-3-(N-tosylamíno)-6-[N-(p-amidínofenylacetyl) amino]hexánovú, kyselinu (S)-3-[N-(3-metylbutyryl)amíno]-6-[N-(p-amidínorený lacetyl) amino] hexánovú, kyselinu (S ) -3-N- (3-(p-metoxyfenyl) pr'opiony 1 ]amíno-6-[N(p-amidínofenylacetyl)amíno]hexánovú, kyselinu (S)-3-[N-(adamant-1-ylacetyl) amíno]-6-[N-(p-ami dínofénylacetyl)am íno]hexánovú, kyselinu (S)-3-[N-(3-adamant-l-ylpropionyl)amíno]-6-[N(p-amidínofenylacetyl)amí no]hexánovú, kyselinu (S)-3-[N-(3-metylbutyry 1)amíno]-7-[N-(p-amidínobenzoyl)amíno]heptánovú, delta-lakton kyseliny (3S , 5S)-6-(4-amid ínofenylacety1amíno )-3-(4-metoxyfeny1propionylamí no)hexánovej, delta-lakton kyseliny (3S , 5S)-6-(4-amidínofenylacetylamíno)-3-(3-metylbutyrylamíno)hexánovej, kyselinu (S)-3-N-[3-(p-metoxyfenylpropionyl)amíno]-7[N-(p-amidínobenzoyl)amino]heptánovú, delta-lakton kyseliny (3S,5S)-6-(4-amidofenylacetylamíno)-3-N-[2-(p-metoxyfenyl)etánsulfonylamíno]hexánovej a hexanoát (3S,5S)-6-(4-amidínofenylacetylamíno)-3-(4-metoxyfenylpropionylamíno) lítny.
5. Spôsob výroby zlúčenín všeobecného vzorca I, podľa nároku 1, v ktorom m znamená číslo 1, X a Ri tvoria dohromady skupinu HC -0-C0- a Y predstavuje metylénovú skupinu, vyznačený t ý m, že sa zlúčenina všeobecného vzorca XIV (XIV) v ktorom Z má význam uvedený v nároku 1, kondenzuje s vhodnou skupinou A, ktorá má význam uvedený v nároku 1, ochranná skupina sa hydrogenolyticky rozštiepi, reakčný produkt sa kondenzuje s vhodnou skupinou B, ktorá má význam uvedený v nároku 1, ochranné skupiny sa potom odštiepia pomocou kyseliny trifluóroctovej a zlúčenina všeobecného vzorca I sa prípadne oddelí od vytvoreného trifluóracetátu.
6. Spôsob výroby 1, v ktorom X a -CH2-, Rx znamená vyznačený zlúčenín všeobecného vzorca I, podľa nároku Y majú rovnaký význam a znamenajú skupinu karboxylovú skupinu a m znamená 1 alebo 2, tým, že sa zlúčenina všeobecného vzorca X (X) v ktorom [ v ] m predstavuje skupinu [ CHz ] π.,

A a B majú význam definovaný v nároku 1 a m znamená číslo o hodnote 1 alebo 2, nechá reagovať pri teplote miestnosti s kyselinou trifluóroctovou a zlúčenina všeobecného vzorca I sa potom prípadne oddelí od takto vytvoreného tri fluóracetátu.
7. Pseudopeptidy podľa nároku 1 až 5 vo forme solí.
8. Použitie pseudopeptidov podľa nárokov 1 až 5 alebo ich solí pri výrobe liečiv pre profylaktické a akútne liečenie trombózy.
9. Použitie pseudopeptidov podľa nárokov 1 až 5 alebo ich solí pri výrobe liečiv pre profylaktické a akútne liečenie trombózy.
10. Terapeutický prostriedok obsahujúci jeden alebo viac pseudopeptidov alebo ich solí podľa nárokov 1 až 5.