DD272306A5

DD272306A5 - Verfahren zur herstellung von peptidanalogen

Info

Publication number: DD272306A5
Application number: DD88316656A
Authority: DD
Inventors: Jan O Karlsson; Erik M H Sohtell; Carl I Starke; Rolf Ch Westerlund
Original assignee: ��@��k��
Priority date: 1986-12-29
Filing date: 1988-06-10
Publication date: 1989-10-04
Also published as: NO883818L; WO1988005049A1; FI893155A0; DK469588D0; JPH02501735A; AU600549B2; DK469588A; EP0273893A2; EP0273893A3; HUT49892A; AU1108488A; NO883818D0; KR890700131A; CN1039017A; SE8605573D0; FI893155A; ZA883315B

Abstract

Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Herstellung von Peptidanalogen, die fuer die Verwendung in der Humanmedizin und Veterinaermedizin fuer therapeutische Zwecke zu Praeparaten verarbeitet werden. Durch das erfindungsgemaesse Verfahren werden Peptidanalogen der allgemeinen Formel, worin X H oder eine N-Schutzgruppe bedeutet, B eine Aminoacyl- oder Acylgruppe bedeutet, C eine Aminoacylgruppe bedeutet und Y eine ueber ein Schwefelatom gebundene Gruppe ist, sowie deren physiologisch vertraegliche Salze und/oder optischen Isomeren hergestellt. Formel

Description

Verfahren zur Herstellung von Peptidanalogen

Anwendungsgebiet der Erfindung

dr . rfindungsgemäOo Verfahren hergestellten Peptidanalogen können für die Verwendung in der Humanmedizin und Veterinärmedizin zu Präparaten verarbeitet werden« die Renininhibitoren sind.

Charakteristik der bekannten technischen Lösungen

* Renin ist ein natürliches proteolytischos Enzym, dan aus der Niere in das Blut abgegeben wird. Seine einzige bekannte Punktion ist die, zirkulierendes Angiotensinogen zu Angiotensin I zu spalten, das ein Dccapeptid der folgenden Struktur ist:

Asp-Arg-Val-Tyr-Ile-His-Pro-Phe-His-Leu

Dieses seinerseits wird durch Angiotcnsin umwandelndes Enzym (ACE) weiter geopnl fn, was zur Bildun-j dos Octapeptids Angiotensin II führt: 25

Asp-Arg-Val-Tyr-Ilo-His-Pro-Phe

Dieses Peptid ist eines der stärksten bekannten blutdruckerhöhenden Mittel. Seine biologische Aktivität in dieser Be-Ziehung beruht teilweise auf einer geräßregulierenden Wirkung und teilweise auf einor durch Aldosteron vermittelten ant idiuretibchen und anf.isaluretischen Wirkung.

Bemühungen, erhöhten Blutdruck mit Hilfe des Reninangioten-3^ sinsystems zu steuern, richteten sich bis in jüngste Zeit hauptsächlich auf die Hemmung von ACE. Obwohl dieses Prinzip sich als klinisch brauchbar erwies, zeigte sich doch, daß die fehlende Spezifität von ACE ein Grund für verschiedene

ZUJOC

Nebonwirkungen ist. Da Renin sehr spezifisch fUr Angiotensinogen ist, können Inhibitoren dieses Enzyme sich bei der Bekämpfung verschiedener Formen von Hypertension als vorteilhaft erweisen

5

Die frühesten Bemühungen um ein« Herstellung von Renininhibitoren waren hauptsächlich auf einfache Substratanaloge gerichtet. Durch Veränderungen der Aminosäuresequenz konnten Haber Qt al mit Erfolg ihre Stärke erhöhen. Weitere Wirksamkeit wurde erreicht» indem d'e leicht spaltbare Dipeptidein- heit in dun Inhibitoren durch eine nicht spaltbare Einheit, wie Statin (Doger et al, Nature, 303, 81, 1983) oder andere Isostere (Szelke et al, Nature, 299, 555, 1982) ersetzt wurde. Verbindungen dieses Typs erwiesen sich als sehr wirksam,hatten aber nur kurze Wirkungsdauer. Dies war einer proteolytischen Instabilität der Peptide zuzuschreiben, und somit richteten sich viele der jüngeren Arbeiten auf diesem Gebiet darauf, kleinere Inhibitoren mit einer verminderten Anzahl von leicht spaltbaren Peptidbindungen herzustellen. Für einige jüngste Publikationen bezüglich dieses Gegenstandes,siehe Matsuda et al, Chem. Lett. 1041, 1985, Plattnor etal, 191. ACS-Treffen, New York, 1986, Hanson Gt al, Biochem.

Bioph/s. Res. Comm. 132, 155, 1985 und Toda et al, Eur. J. Pharm. 129, 393 (1986). Jüngste Patentanmeldungen bezüglich

kürzerer Inhibitoren sind beispielsweise EP 186 977 (Sankyo), EP 189 182 (Abbott), EP 190 891 (Kissei), EP 172 346 (Abbott), EP 189 203 (Abbott), EP 172 347 (Abbott) und EP 181 110 (Kissei).

Im folgenden werden die jetzt angegebenen Definitionen angewendet, wenn nichts anderes speziell gesagt ist:

1. Der Ausdruck "Aminosäure" schließt Aminosäuren sowohl natürlichen als auch unnatürlichen Ursprungs ein.

2. Alle Aminosäuren können entweder L- oder D-I'^nfiguration haben, haben aber vorzugsweise L-Konfiguration, wenn nichts anderes angegeben ist,

-β- znsot.

3. Alle asymmetrischen Zentren können entweder R- oder S-Konfiguration haben, wenn nichts anderes angegeben ist.

Abkürzungen:	5	Asp	= Asparaginsäure
Arg	* Arginin
VaI	* Valin
Tyr	^a Tyrosin
10 lie	« Isoleucin
Mis	« Histidin
Pro	^s Prolin
_% Phe	* Phenylalanin
Leu	=» Leucin
15 Nva	^a Norvalin
Nie	=» Norleucin
Cha	" Cyclohexylalanin
Aia	= Alanin
Trp	= Tryptophan
20 Abu	= 2-Aminobuttersaure
Tyr(Me)	= O-Mothyltyrosin
hPhe	= Homophenylalanin
Me-Nva	= N-Methylnorvalin
Me-NIe	=» N-Methylnorleucin
25 Boc	= t-Dutoxycarbonyl
Dba	= Dibenzylacetyl
Z	= Benzyloxycarbonyl
Su	= Succinimido
30 Ziel der	Erfindung

Ziel der Erfindung ist die Herstellung neuer Typen kurzer Renininhibitoren.

Darlegung des Wesens der Erfindung

Die Aufgabe der Erfindung ist ein Verfahren zur Herstellung neuer Typen kurzer Renininhibitoren, die vorteilhaft als

Arzneimittel für die Behandlung von Hypertension, von mit Stauungen verbundenen Herzfehlern und von anderen HerzgefaO-erkrankungen verwendet werden können. Diese Verbindungen sind Peptidverbindungen der allgemeinen Formel

OH R⁶

X-B-C-NH _N Ϊ

worin

X = H o.ler eine N-schützende Gruppe R -(CH,) -0-C(O)-,

1 worin η ·» 0 bis 4,· R ^a eine geradkettig© oder verzweigtkettige Alkylgruppe mit 1 bis 6 Kohlenstoffatomen bedeutet, und

B a Phenylalaninyl, O-Mothyltyrosinyl, Homophenylalaninyl; Cyclohexylalaninyl oder Dibenzylacetyl und 20

C => Norvalinyl, Valinyl, Norleucinyl, Loucinyl, Histid.\ nyl, entweder als solches oder N~alky! M.-rt, und

H - eine geradkettige oder verzwoigtkettige Alkylgruppe mit 1 bis 6 Kohlenstoffatomen/ Cyclohexylmothyl und

R =» H, geradkettiges oder verzweigokettiyos Alkyl mit 1 bis 6 Kohlenstoffatomen, und

Y = a) -SCH (CH₃)₂

b) -S(O)₂CH(CH₃)₂

entweder als solche oder in der Form physiologisch verträglicher Salze und einschließlich optischen· Isomere. Diese Peptidverbindungen zeigen starke und spezifische Renininhibitorwirkungen.

Bevorzugte Verbindungen sind jene, worin X aus dor Gruppe

Boc oder H ausgewählt ist, B aus Ph«, Tyt(Kw), Cha, hPhe und

6a ausgewählt ist, C aus His, Nie, Nva, Me-Nva, Mo-NIe und

5 Me-His ausgewählt lit, R eine Cyclohexyltnothylgruppe ist

und R eine Mothylcjruppe bedeutet. Speziell bevorzugte Ver-S bindungon .find jene, die in der Tabelle I gezeigt sind.

Das Verfahren zur Herstellung von Peptidverbindungon nach der Erfindung besteht darin, daD man ein Isosteres der Allgemeinen Formel 10

T f

worm R , R und Y wie oben definiert sind, nach Standardpeptidsynthesemet hoden an geeignete Aminosäuren bmdot und in jenen Fallen, wo die Reaktionen zu einem Diustur^omorengemisch führen, diese Diastoreomoren nach üblichen chromatographischen Methoden oder Umkr istallisot ionarrothodon tronnt und gegebenenfalls ein physiologisch vertr;iq L iches Salz herstellt und/oder ein optischoa Isomerr·.'. !isoliert.

I. Synthese von Isosteren 25

Die Isosteren werden gemäß den i'oLgendon Methoden hergestellt:

Stufe 1

Methode A

^{R NH} ,ChO * Mt ? _ZR4

OH R³

worin ein metallorganisches Reagenz £ einen Aminoaldehyd _1 in einer geschützten Form angreift, um eine Verbindung 3 (Z * O) zu ergeben.

Methode B

OHC

20 HOOC

25

_H u OH R³

HN 0 j W

worin ein geeignetes Carbonsäurederivat £ und ein aliphatischer Aldehyd j> in einer Aldclre^ktion reagieren unc' nach einer Curtius-Umlagerung der freigesetzten Carbonsäure ein Oxazolidinon (> erzeugen, welches durch alkalische Hydrolyse gespalten werden kann, um den erwünschten Aminoalkohol ^u (Z = O) zu ergeben.

Umwandlung von Z «0 in Z "S(O)

Der Sauerstoff wird als ein Ether oder Ester eingeführt. In irgendeiner Stufe in der Synthese fUhrt eine Spaltung der Ether bzw. eine Reduktion der Ester zu dem Alkohol 22.

0 - CHo- OR

^* OCH - OH

0 · CO₂R ^

Der Sauerstoff in 2JJ wird durch Schwefel ersetzt, indem man zunächst den primären Alkohol in eine austretende Gruppe umwandelt .

Der Schwefel wird dann durch Behandlung von 2jl mit einem Thiolat eingeführt. Der resultierende Thioether 2S^ kann vor oder nach der Bindung der Aminosäuren zu Sulfon 3jO oxidiert werden.

R⁴S* 25 22 0-CH₉-L > 0 · CH

30

Bestimmte Vorkehrungen müssen getroffen worden, wenn 2jl synthetisiert wird:

In diesen Hydroxyisostoren muß die sekundäre Hydroxygruppe beispielsweise in der Form eines Oxazol idinons 24a geschützt. werden.

24 a

Der Oxazolidinonring kann dann gespalten werden« um den freien Aminoalkohol 2P_ ^zu orgeben.

24a

S(O)

33

II. Bindung der Isosteren an die Aminosäuren

Dies erfolgt durch Verwendung einer Standardpeptidsynthesemethode, wie durch Kupplung der Isosteren mit dom Hydroxybenzotriazol- und Hydroxysuccinimidoster der geeigneten N-geschützten Aminosäuren in zwei getrennten Stufen» wobei dieSchutzgruppe an der Aminosäure C vorzugsweise t-Boc und diejenige an der Aminosäure B X ist. In den Fällen, wo B eine Dibenzylacetylgruppe ist, werden amidbildende Standardreaktionen angewendet. Alternativ kann das Isostere mit einem aktivierten Acylderivat eines X-B-C-Restos gekuppelt werden.

III. Trennung von Diastereomeren In jenen Fällen, wo die Reaktionen zu einem Gemisch von Dia-

-H- ZUSOf,

stereomeren führen, werden diese nach üblichen chromatographischen Methoden oder Umkristallisntionsmethoden getrennt.

Die in den obigen Formeln in den Abnützen I bis III vorwendeten Symbole bedeuten folgendes:

Z=O; S(O _nMt a ein Metall R « niedermolekulares Alkyl R » N-Schutzgruppe

R² = Alkyl (1-6 C), Cyclohexylmethyl

R³ = H, Alkyl (I - 6 C)

4 . R = Isopropyl

g R = Amino- oder Alkoxyrest

W = H₂; O

L = ein austretende Gruppe

-t-r ^{0H r6}

D » "f~ ¹^

R" mit oder ohne Aminosäurereste, die an den Stickstoff

gebunden sind, η =0 oder 2.

Nach einem weiteren Aspekt betrifft die Erfindung eine Ver bindung der allgemeinen Formel

worin L eine H/droxygruppe oder eine austretende Gruppe ist, oder ein Säureadditionssalz hiervon, die brauchbar als ein Zwischenprodukt bei der Synthese einer Verbindung gemäß Anspruch 1 sind.

Ein weiterer Aspekt der Erfindung sind pharmazeutische Zu-

-is- IUSOi,

sammensetzungen, die die Verbindungen nach der Erfindung enthalten. Diooe können fUr die Verwendung zur Senkung des Blutdruckes in Arzneimitteln, wie Tabletten, Kapaoln oder Elixieren für orale oder rektale Verabreichung oder in sterilen Lösungen oder Suspensionen für parenterale oder nasale Verabreichung angemacht werden. Etwa 0,001 bis 50 mg einer Verbindung wr len dann mit einem physiologisch verträglichen Vehikel, Träger, Verhütungsmittel, Bindemittel, Konservierungsmittel, Stabilisator, Geuchmacksstoff usw. in der Formeiner Dosierungseinheit nach üblicher pharmazeutischer Praxis vermischt. D<o Menge an aktiver Verbindung in diesen Präparaten ist dprnrt, daß eine geeignete Dosierung in dem angegebenen Bereich erhalten wird. Variationen und Veränderungen, die tinem Fachmann für Arzneimittelformulierungenauf der Hand liegen, sollen innerhalb des Erfindungsgedankens liegen.

Ein weiteres Ziel der Erfindung ist die Verwendung der Verbindungen als Arzneimittel für die Behandlung von Hyperten-sion, von Stauungen hervorrufenden Herzfehlern oder anderen Herzgefäßerkrankungen. So wird beispielsweise durch Verabreichung einer Zusammensetzung, die eine dor Vorbindungen nach der Erfindung als Wirkstoff enthilt, an einen Patienten, der unter Hypertension leidet, eine Sonkuny des Blut-druckes erreicht. Die Substanz wird vorzugsweise oral verabreicht, doch können auch parenterale, rektale und nasale Verabteichungswege benutzt werden. Die Dosierung liegt vorzugsweise bei 0,001 bis 50 mg aktiven Bestandtoils und wird vorzugsweise ein- bis dreimal täglich verabreicht.

Ausführungsbeispiel Beispiel 1

35 Herstellung von _n. ,

^ Dba - Nva · NH

ZUJOC

1 a) Herstellung von

Das Zwischenprodukt II wurde gemäß N. Cohen et al, J. Org. Chem. 41, 3505 (1976) hergestellt, und das Zwischenprodukt III wurde nach J. Soger et al, J. Mod. Chem. 28, 1779 (1985) It .

δ*

Zu einem gerührton Gemisch von 1,4 g (0,057 Mol) pulverisiertem Magnesium in 14 ml wasserfreiem Tetrahydrofuran wurden ein Jodkristall und einige Tropfen einer Lösung von 9,9 g ((0,048 Mol) II in 20 mJ trockenem Tetrahydrofuran zugesetzt. Das Gemisch wurde auf Rückflußbedingungen gebracht, und nachdem die Reaktion begonnen hatt->, wurde der Rest der Lösung von II in solcher Geschwindigkeit zugesetzt, daß der Rückfluß aufrechterhalten wurde. Nach Beendigung «icr ' Zugabe wurde das Reaktionsgemisch unter Rückfluß eine weitere Stunde gerührt und dann auf 0 bis 5 ⁰C gekühlt, worauf eine Lösung von 4,9 g '0,019 Mol) III in 35 ml trockenem Tetrahydrofuran t-rop£^ iiweise zugesetzt wurde, während die Tempera-

JO tür unterhalb 10 ⁰C gehalten wurde. Das Reaktionsgemisch wurde 3 h bei Raumtemperatur gerührt und dann auf 30 ml gesättigte Ammoniumchloridlösung und 30 nl Wasser gegossen. 120 ml Ether wurden zugegeben, und das Gemisch wurde heftig gerührt. Die wäßrige Schicht wurde mit 2 χ 40 ml Ethet extrahiert. Dip kombinierten organischen Schichten wurden über Natriumsulfat getrocknet, und der Ether wurde verdampft. Das Rohprodukt wurdi.· auf Kieselgel chromatographiert und mit Petrolether/Ethylacetat (5 : 1) eluiert. Ausbeute: 3,4 g

-πι (46 %) Ia und 0,65 g (9 I) Ib.

b) Herstellung von

HN'

„•^N,

VfIi

Zu einor Lösung von 1,5 g (3,9 mMol) I in 15 ml Dimethylformamid wurden 0,24 g (10 mMol) Natriumhydrid (55 !ige Dispersion in Mineralöl) zugegeben. Das Gemisch wurde 5 h bei Raumtenperatur gerührt und dann auf 7 ml gesättigte Ammoniumchloridlösung und 7 ml Wasser gegossen. Das Gemisch wurde mit 3 χ 30 ml Methylenchlorid extrahiert. Die kombinierten organischen Schichten wurden über Natriumsulfat getrocknet und eingedampft und ergaben 1,1 g (91 %) Viii, das ohne weitere Reinigung in der nächsten Stufυ verwendet wurde.

c) Herstellung von Q

HN

CJ

^^ IX

CJ

Eine Lösung von 1,1 g VIII in b ml 4 M HCl und 6 ml Dioxan wurde auf einem Wasserbad von 90'CIh erhitzt. Das Reaktionsgemisch wurde eingedampft und dann auf Kicselgel mit Ethylacetat chromatographiert. Ausbeute: 0,50 g (56 %) IX. Alternativ kann VIII mit 2 Äquivalenten Trimethylsilyljodid in Methylenchlorid während 30 min behände)t wfrden. Die organische Phase wird dann mit Na-S-O₃ (aq) in Wasser gewa-sehen und getrocknet (MgSO.) und ergibt das Produkt.

1 d) Herstellung von

0-SO₂CH₃

Eine Lösung vom 0,50 g (1,9 mMol) IX und 0,23 g (2,2 mMoi) Triethylamin in 5 ml Methylenchlorid wurde auf 0 ⁰C gekühlt. Methansulfonylchlorid, 0,24 g (2,1 mMol), wurde zugegeben. Das Reaktionsgemisch wurde 2 h gerührt, und die Reaktion .wurde durch TLC überwacht. Ein Anteil von 5 ml Petrolether (40 bis 60 ⁰C) wurde zugegeben, und Triethylammoniumchlorid wurde abfiltriert. Die Lösung wurde eingedampft und ergab 0,75 g (100 %) X, welches direkt in der nächsten Stufe verwendet wurde.

e) Herstellung von

Zu einer Lösung von 0,75 g (1,9 mMol) X in 5 ml trockenem Tetrahydrofuran wurde eine Suspension von Natriumisopropylthiolat - hergestellt aus 0,18 g (2,3 mMol) Isopropylthiolund 0,11 g (2,5 mMol) Natriuinhydrid (55 %ige Dispersion in Mineralöl) - in 5 ml trockenem Tetrahydrofuran zugegeben. Das Reaktionsgemisch wurde 2 h gerührt. Die Reaktion wurde durch TLC überwacht. Sodar.n wurden 15 ml Methylenchlorid und 5 m). Wasser zugegeben, und das Gemisch wurde heftig gerührt.

Die beiden Schichten warden getrennt, und die wäßrige wurde mit 5 ml Methylenchlorid extrahiert. Die vereinigten organischen Schichten wurden über Natriumsulfat getrocknet und dann eingedampft und ergaben 0,62 g (100 %) XI, welches di-

rekt in der nächsten Stufe verwendet wurde.

f) Herstellung von

Eine Lösung von 0,50 g (1,6 mMol) XI und 1,0 g 55 ligo mtta-Chlorperbenzoesäure (3,2 mMol) in 20 ml Methylenchlorid wurde 3 h bei Raumtemperatur gerührt. Das Gemisch wurde dann mit 50 ml 1 M MaOH und dann mit Wasser gewaschen und

• schließlich über Natriumsulfat getrocknet und eingedampft.

Das Rohprodukt wurde auf Kiesolgel mit PetroJether/Ethylacetat (1 : 1) chromatogra^hiert. Ausbeute: 0,43 g (78 %).

g) Herstellung von OH

H 20

XV

Eine Suspension von 0,43 g (1,2 mMol) XIV und 0,28 g (5,0 mMol) Kaliumhydroxid iin 10 ml Ethanol wurde Über Nacht gerührt und auf 100 ⁰C erhitzt. Das Reaktionsgemisch wurde in Wasser gegossen und mit Methylenchlorid dreimal extrahiert. Die kombinierten organischen Fraktionen wurden mit Wasser gewaschen, über Natriumsulfat getrocknet und eingedampft. Das Rohprodukt begann zu kristallisieren und wurde als solches in der folgenden Stufe benutzt. Ausbeute»: 0,34 g (86 %).

h) Herstellung von 35 Boc-Nva-NH

XVI

.20-

Ein Gemisch von 0,29 g (1,4 mMoi) Boc-Nva-OH und 0,37 g (2,7 mMol) N-Hydroxybenzotriazol in 6 ml Mothylonchlorid wirde auf 0 ⁰C gekühlt. N-Cyclohexyl-N'-(2-morpoholinoethyl)-caibodiimid-metho-p-toluolsulfonat, CME-CDI, 0,66 g (1,6 mMol), wurde zugegeben. Das Gemisch ließ man Raumtumperatur erreichen und rührte es 3 h. Das Lösungemittel wurde verdampft, und eine Lösung von 0,34 g (1,1 mMol) XV in S ml Dimethylformamid wurde zugesetzt, und der pH-Wert wurde durch Zugabe von N-Mothylmorpholin auf 8 eingestellt. Das Gemisch wurdeüber Nacht bei Raumtemperatur gerührt. Dann wurde es in Wasser gegossen und dreimal mit 50 ml-Anteilen Ethylacetat extrahiert. Die vereinigte organische Phase wurde zweimal mit , 50 ml 0,5 M HCl, einmal mit 50 ml 1 M NaOH und schließlich mit Wasser gewaschen, über Natriumsulfat getrocknet und verdampft. Das Rohprodukt wurde eic solches in der nächsten Stufe verwendet. Ausbeute: 0,41 g (75 %).

i) Herstellung von XVII

Der Hydroxybenzotriüioleater von Dibenzylossigsauro wurde aus 0,21 g (0,87 mMol) Dibenzylessigsäure, 0,24 g (1,7 mMol) N-Hydroxybentotriazol und 0,42 g (0,9·) irMol) CME-CDI in 10 ml Methylenchlorid, wie in dor vorausgehenden Stufe boschrieben ist, hergestellt.

Die Vorbindung XVI, 0,41 g (0,79 mMoi), wurde in 1,8 ml Mothylenchloricl aufgelöst, und 0,6 ml Trifluorossigsäuro wurden zugesetzt. Nach 1,5 h wurde das Gemisch verdampft, in 5 ml Dimethylformamid und zu dem obigen vordampften Gemisch zugesetzt. Der pH-Wert wurde durch Zugabo von N-M'fthylmorpholin auf 8 eingestellt, und unter Rühren ließ man 60 h reagieren. Es wurde das gleiche Aufarbeitungsverfahren wie in der vorausgehenden Stufe angewendet. Das Rohprodukt wurde duf Kiuielyel mit Petroiethei/Ethylücetat (1 : 1) chromatographiert. Ausbeute: 0,33 g (65 %).

1 Bolsplel 2

Herstellung von

Boc-Pht-Nva 5

Uli A) Herstellung von

10

Eine Suspension von 0,62 g (1,9 mMol) Xl und 6,2 g Bariumhydroxid in 10 ml Wasser und 10 ml Dioxin wurde- 4 h gerührt rnd auf 100 ⁰C erhitzt. Das Reaktionsgemi»ch wurde auf Raumtompar.-itur gekühlt, und Methylonchiorid wurde zugegeben. Die flüssigen Schichten wurden von dem festen Rückstand abgetrennt:, welcher mehrere Male mit Methylenchlor id extrahiert wurde. Die vereinigton organischen Schichten wurden Ubor Natriumsulfat getrocknet, nitriert und «'imjedampf t. Das Produkt urdo auf Kieselsäure goroinijt und ,nt EtOAc : MeOM : HOAc : H₂O (48 : 3 : 3 : 2) eluicrt. Ausbeute: 0,47 g (81 %)

2E- XIl.

b) Herstellung von XIII

Die Zielverbindung wurde durch Standardpeptidverbindungsmethoden mit Boc-Nva-OH und Boc-Pho-OH synthetisiert. Die Aus beuten in den Reaktionen waren 62 % bzw. 35 I.

Beispiele 3 bis 6 (siehe» Tabellen II und III)

Die Herstellung dieser Verbindungen erfolgte in ähnlicher Weise, wie in den obigen Beispielen 1 und 2 beschrieben.

Beispiel 7

Eine Lösung wird aus den folgenden Bestandteile ι hergestellt:

Reniniphibitor . 1 g

Ethanol (99,^r Uq) 100 ml

Polyethylc lalyco) 400 400 ml

Wussor für Injektion bis zu 1000 ml

' Der Wirkstoff wird in dem Gemisch von Ethanol und Polyethylenglycoi ge'öst. Wasser wird bis zum Endvolumen zugesetzt, wonach die Lösung durch ein steriles 0,2 Mikro M-Filter filtriert und aseptisch in sterile Ampul Lon (5 ml) jofülit·. wird.

Beispiel 8 20

Lösung_für_In^OKt ion

Eine Lösung wird aus den folgenden Bestandteilen hergestellt:

Renininhibitor 1 g

Natriumchlorid 9 g

Methyl-p-hydroxybonzoat 0,5 g

Propyl-p-hydroxybenzotJL 0,2 g

Wasser für Injektion bis z'i 1000 ml

Der Wirkstoff, Natriumchlorid und Konservierungsmittel werden in dem Hauptteil des Wassers aufgelöst, wonach das Volumen auf 1000 ml eingestellt wird. Die Lösung wird durch ein steriles 0,2 Mikro M-Filter filtriert und aseptisch in sterile Ampullen (5 ml) gefüllt.

-23- ZUS01,

1 Beleplol 9

Eine Lösung wird au» den folgenden Bestandteilen hergestellt:

Renininhibitor Glycerin

10 Methyl-p-hydroxybenzoat PropyJ-p-hydroxybenzoat Wasser für Injektion bis zu

Dur Wirkstoff und die Konservierungsmittel wurden in Glyce·· rin und dem Hauptteil des Wassers gelöst. Das Volumen wird dann auf 1000 ml eingestellt, und die Lösung wird in sterile Polyethylt'.iOehalter gefüllt.

Beispiel 10 20

10	g
200	g
1	Ί
0,	2 g
1000	ml

1000 Tabletten worden aus den folgenden Bestandheilen hergestellt:

Renininhibitor 10 g

Lactose 100 g

Polyvinylpyrrolidon 20 g

Avicel 20 g

Magnosiumstearat 2 g

Der Wirkstoff und l.actoso werden mit einer wäßrigen Lösung von Polyvinylpyrrolidon vermischt. Das Genisch wird getrocknet und unter Bildung von Granalien vermählen. Has Avicel und dann das Magnesiumstoarat werden nunmehr zugemischt. DasGemisch wird dann in einer Tablettenmaschine zu 1000 Tabl ->tten verpreßt, von denen jede JO mg Wirkstoff enthält.

-24-Beispiel 11

S Gelatinekapseln werden mit einem Gemisch Hot folgenden Bestandteile gefüllt:

Renininhibitor 10 mg

Magnesiumstearat ' 2 mg

Lactose 1Θ8 mg

Biologische Daten

Die Wirksamkeiten der Verbindungen nach der Erfindung als Renininhibitoren wurden in vitro unter Verwendung einer menschlichen Renin/Angiotensinogenreaktion bestimmt. Der Verbuch beruht auf der Methode von Ikeda et al (J. Clin. Endocrinal Metab. 54, 423, 1982) und beruht auf der radioimmunoinetriochen Bestimmung der Menge von Angiotensin I, die durch Renin in einer Ansammlung von menschlichem Plasma freigesetzt wird.

Die Verbindungen nach der Erfindumj wurden in 0,1 M Essigsäure (10 ml) gelöst und dann zu menschlichem Plasma (200 ml) zugesetzt, das ΕΠΤΑ und 0,6 M Citratpuffor (20 ;.U) enthielt. Nach einer Inkubation während 60 min bei 37 ⁰C wurde

I-markiftrtes Angiotensin I mit einem Gehalt von 0,5 mg/ml

Pepstatin A zugegeben. Mit Antikörper überzogene Kugeln wurden zugesetzt, und das resultierende Gemisch wurde 3 h bei Raumtemperatur inkubiert. 2 ml destilliertes Wasser wurden dann zugesetzt, wonach die Flüssigkeit mit einem Saugapparat entfernt wurde. Die Radioaktivität der Kugeln wurde dann unter Verwendung einer gawna-Szintillationstechnik bestimmt.

Die so erhaltenen Stärken der Verbindungen (siehe Tabelle IV) sind als Mittel von wenigstens vier Experimenten angegeben und als piC.Q ausgedrückt, d. h. als der negative Logarithmus der molaren Konzentration, die erforderlich ist, um

1 50 Iige Hemmung zu bewirken.

10

	Tabelle	IV	?^IC50 8,3
Beispiel Nr. 1			6,0
2			9,3 6,7*
3 4			8,2
5			7,4
6
	Tabelle	I

15 20 25 30

X-B-C-NH

X	β	C	Y
Boc	Phe	Nva	SCH(CH₃)₂
8oc	Phe	Nva	SO₂CH(CH₃J₂
H	Oba	Nva	SO₂CH(CH₃ )₂
Boc	Tyr(Me)	Nva	SO₂CH(CH₃J₂

35

-26-Tabelle II

MlS(H.

• Zusammenstellung der AuafUhrungsbeispiele

Χ-β-C-NH

Bsp.	X	B	C	Y	Verfahren zur Herstel lung des Isosteren	Identifi-. 2ierungs- daten
1	H	Oba	Nva	SO₂-		¹H NMR
ι	Boc	Phe	Nva	«-	<^ A	¹H NMR
3	8oc	Phe	Nva	SOj-	\ A	¹H NMR
4	Boc	Tyr(Me)	Nva		C ^A	¹H NMR
5	8oc	TyT(Me)	Nva	so₂ -	< *	¹H NMR
6	Boc	Phe	Me-Nva	SO₂ -		¹H NMR

.27-Identifizierungsdaten CUr Verbindungen nach der Erfindung

Bap. ¹HNMR₁SOOMHz; ppm (CDC)₃) I. 0.6-2.0 (m,31H): davon 0.70 (t,3H), 1.14 (d,3H), 1.14

((1,3H)₁ 1.38 (d,3H), 1.40 (d,3H). 2.20 (mJH)·, ?..3-3.12 (m,8H); 3.37 (mJH); 3.59 (MJH); 3.88 (d,1H); 4.20 (mJH); 5.60 (dJH); 5.87 (d,1H); 7.1-7.4 (mJOH). 10

₍ 2. O.9O(t,3H); 1.05(d,3H); 1. 10-1.95(pi,20H); 1.2S(dd,6H);

1.40(s,9H); 2.40(dd,lH); 2.60(dd,lH); 2.90(mJH); 3.00(dd,IH)i 3.10(dd,IH); J.65(m,lH); 3.90((TiJII); 4.30(m,2H); 4.90(dJH); 6.35(bs,2H); 7.15-7.35(m,5H)

3. 0.7-1.9 (m,40H); davon 0.91(t,3H), 1.21 (d,3H), 1.39 (d,3H), 1.41 (d,3H), 1.42 (s,9H); 2.41 (mJH); 2.78 (ddJH);3.00 (ddJH); 3.14 (m,3H); 3.63 (m,IH); 3.90 (mJH); 4.27

(m,2H); 4.95 (bdJH); 6.39 (m,2H); 7.1-7.4 (m,5H).

4. 0.8-2.0 (M.41H); davon 0.93 (t,3H), 1.02 (d,3H), 1.23 (d,3H), 5.28 (d,3H), 1.45 (s,9M); 2.40 (ddJH); 2.6-2.75im,2H); 2.8-3.15 (m,3H); 3.65 (,HjHh 3.81 (s,3H); 3.93

(mJH); 4.11 (mJH); 4.22 (mJH); 4.32 (mJH); 4.91 (bdJH); 6.3-6.5 (m,2H); 6.81 (d,2H); 7.10 id,?H)

0.75-1.9 (m,40H); davon 0.92 (t,3H), 1.21 (d,3H), 1.38(d,3H), 1.41 (d,3H); 1.43 (s,9H); 2.44 (ntJH); 2.78 (ddJH);

2.96 (ddJH); 3.0-3.25 (m,4H); 3.62 (mJH); 3.80 (s,3H); 3.93 (mJH); 4.21 (mJH); 4.26 (mJH); 4.89 (mJH); 6.30 (inJH); 6.40 (mJH)j S.87 (d,2H); 7.12 (d,2H)

-28-1 Diese Verbindung existiert als zwei Konfigurationen

0,7 - 2,0 (m, 40H)₁ davon 0,87 (t, 3H)) 1,14 (d, 3H), 1,35(d, 3H)| 1,38 (8, 9H)| 1,40 (d, 3U); 2,3 - 2,5 (m, 1H)> 2,6

5 - 3,2 (m, 511), 2,68 ι ·., 3H₁ Hauptkonfiguration) ι 2,81 (β,3H, Nebenkonfiguration}; 3,59 (m, 111); 3,75 - 3,95 (m, 111);4,00 (m, IH); 4,43 (m, IH, Hauptkonfiguration)} 4,48 (m, IH,

Nebenkonfiguration); 4,57 (m, IH, Hauptkonfiguration); 4,90

(m, IH, Neben ;onfiquration) ? 5,26 (d, IH); 7,1 - V,4 (m, 511)

Claims

Erfindungsanspruch

1. Verfahren zur Herstellung von Poptidanalogen der allgemeinen Formel

X-B-C-Nh

worin

X=H oder eine N-schützende Gruppe R -(CH-) -0-C(O)-,

worin η = 0 bis 4; R= eine geradkettige oder verzweigtkettige Alkylgruppe mit 1 bis 6 Kohlenstoffatomen bedeutet, und

B » Phenylalaninyl, O-Methyltyrosinyl, Homophenylalaninyl; Cyclohsxylalaninyl oder Dibenzylacetyl und

C- Norvalinyl, Valinyl, Norleucinyl, Leucinyl, Hietidinyl, entweder als solches oder N-ilkyliert, und

R eine geradkettige oder verzweigtkettige Alkylgruppe mit 1 bis 6 Kohlenstoffatomen oder Cyclohexylmethyl und

R⁶ - H, geradkettiges oder verzweiytkettiges Alkyl mit 1 bis 6 Kohlenstoffatomen, und

Y - a) -SCH(CH₃)₂

b) -S(O)₂CH(CH₃J₂

entweder a*s solche oder in der Form physiologisch vertra'glicher Salze un<l einschließlich optischer Isomere, 15

gekennzeichnet dadurch, daß man ein Isostcrcs dor allgemeinen Formel

worin R , R und Y wie oben definiKi» sind, nach an sich bekannten Peptidsynthesemethoden an geeignete Aminosäuren bindet und in jenen Fällen, wo die Reaktionen zu einem Gemisch von Diastereomoren führen, diese nach an sich bekannten chromatographischen Methoden odor Umkristallisationsmethoden trennt und gegebenenfalls die so erhaltenen Verbindungen in üblicher Weise in physiologisch verträgliehe Salze überführt und/oder ihre optischen Isomeren isoliert.
2. Verfahren nach Anspruch 1, gekonnzeichnet dadurch, daß man eine Ausgangsverbindung verwendet, dio aus einer Verbindung der allgemeinen Formel

Xa

worin L eine austretende Gruppe bedeutet, oder einem Säureadditionssalz derselben durch Einführung von Schwefel un-IU ter Austausch von L mit einer Isopropylthiogruppe und ge·· gebenenfalls Oxidation derselben zu einer Sulfongruppe und durch Spaltung des Oxazolidinonringes hergestellt wurde.
3. Verfahren nach Anspruch 1 oder 2, gekennzeichnet dadurch, daß man Ausgansverbindungen verwendet, die zu Peptid analogen, deren physiologisch verträglichen Salzen und/ oder optischen Isomeren führen, in denen B Phe, Tyr(Me), Cha, hPhe oder Dba bedeutet.
4. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 3, gekennzeich net dadurch, daß man Ausgangsverbindunqon verwendet, die zu Peptidanalogen oder physio Uvj Lach verträglichen Salzen und/oder optischen Isomeren führen, in denen C His, Nie, Nva, Me-Nva, Me-NIe oder Me-His bedeutet.
5. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 4, gekennzeich net dadurch, daß man Ausgangsverbindungen verwendet, in

denen R eine Cyclohexylmethylgruppe ist.
6. Verbindungen nach einem der Ansprüche 1 bis 5, gekenn zeichnet dadurch, daß man Ausqangsverbindungon verwendet, in denen R^; eine Methylgruppe ist.
7. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 6, gekennzeichnet dadurch, daß man Ausgangsverbindungen verwendet, in denen Y SCH(CH₃)₂ bedeutet.

IUiOU
8. Verfahren nacn einem der Ansprüche 1 bis 7, gekennzeich net dadurch, daß man Ausgangsverbindungen verwendet, in denen Y S(O) ^CII(CII₃ ) ₂ bedeutet.
9. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 8, gekennzeich net dadurch, daß man eine Vorbindung der Formel

Oba-Nva-NH 10

entweder als solche oder in der Form eines physiologisch verträglichen Salzes und/oder eines optischen Isomeren gewinnt.
10. Verfahren nach einem der Ar.sorüche 1 bis 8, gekennzeichnet dadu-ch, daß man eine Verbindung der Formel
10

Boc-Tyr(Me)-Nva-NH

er

entweder als solche oder in der Form eines physiologisch verträglichen Salzes und/oder eines optischen Isomeren gewinnt.
30
11. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 8, «jokenzeichnet dadurch, daß man eine Verbindung der Formel

OH
Boc-Phe-Nva-NH / f SO <^

σ"

-s- mm

1 entweder als solche cder in der Form eines physiologisch verträglichen Salzes und/oder eines optischen Isomeren gewinnt.

5 12. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 8, gekennzeich net dadurch, daß man eine Verbindung der Formel

Boc-Phe-Nva-NH
ίο

15 entweder als solche oder in der Form eines physiologisch verträglichen Salze und/oder eines optischen Isomeren gewinnt.