DE69220861T2 - Zyklische Peptide und ihre Verwendung - Google Patents

Zyklische Peptide und ihre Verwendung

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Description

    HINTERGRUND DER ERFINDUNG
  • Die vorliegende Erfindung bezieht sich auf neue cyclische Peptide mit antagonistischer Aktivität gegenüber Endothelinrezeptoren und antagonistischer Aktivität gegenüber NK2-Rezeptoren. Diese cyclischen Peptide sind als prophylaktische und therapeutische Wirkstoffe bei Bluthochdruck, Herz- oder Hirnkreislauferkrankungen, Nierenerkrankungen und Asthma, entzündungshemmende Wirkstoffe, Antarthritika und dergleichen brauchbar. Die vorliegende Erfindung bezieht sich weiter auf deren Verwendung.
  • Endothelin (ET) ist ein gefäßverengendes Peptid, das aus 21 Aminosäureresten besteht. Endothelin wurde aus dem Kulturüberstand der Endotheliumszellen von Schweineaorten isoliert. Seine Struktur wurde 1988 durch M. Yanagisawa et al. [M. Yanagisawa et al., Nature 332, 411-412 (1988)] bestimmt. Kürzlich zeigte die Forschung an für Endothelin kodierenden Genen die Anwesenheit von Peptiden mit einer Endothelin ähnlichen Struktur. Diese Peptide werden Endothelin-1 (ET-1), Endothelin-2 (ET-2) beziehungsweise Endothelin-3 (ET-3) genannt. Ihre Strukturen sind wie folgt:
  • Alle ET-1, ET-2 und ET-3 bildenden Aminosäuren nehmen die L-Form ein [Inoue et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 86, 2863-2867 (1989)].
  • Die vorgenannten Peptide der Endothelinfamilie liegen in vivo vor und haben eine Vasopressoraktivität. Aus diesem Grund wird von diesen Peptiden erwartet, das sie intrinsische Faktoren sind, die für die Kontrolle des Kreislaufsystems verantwortlich sind und es wird gefolgert, daß sie mit Bluthochdruck, Herz- oder Hirnkreislauferkrankungen wie etwa Herzinfarkt und Nierenerkrankungen wie etwa akuter Niereninsuffizienz in Beziehung stehen. Außerdem haben diese Peptide auch eine Bronchienglattmuskelkonstriktoraktivität und es wird deshalb gefolgert, daß sie mit Asthma in Beziehung stehen.
  • Falls Antagonisten der Rezeptoren der vorgenannten Peptide der Endothelinfamihe erhalten werden, werden sie nicht nur als zur Aufklärung des Funktionsmechanismus dieser Peptide nützlich angesehen, sondern werden auch wahrscheinlich als wirkungsvolfe therapeutische Wirkstoffe für die vorgenannten Krankheiten verwendet. Wir haben bereits Anmeldungen für Patente hinsichtlich aus Fermentationsprodukten stammender cyclischer Pentapeptide mit antagonistischer Aktivität auf die Endothelinrezeptoren (japanische Patentanmeldung Nr. 2-413 828/1990 und 3-126 160/1991) angemeldet. Ein Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist deshalb das Bereitstellen neuer Peptide, die ähnlich wirkungsvoll oder wirkungsvoller als die früher angemeldeten Peptide sind.
    • ZUSAMMENFASSUNG DER ERFINDUNG
  • Die Erfinder haben neue cyclische Peptide mit einer antagonistischen Aktivität gegenüber den Endothelinrezeptoren hergestellt und haben weiter gefunden, daß eine gewisse Gruppe der auf diese Weise erhaltenen Peptide eine antagonistische Aktivität auf die NK2-Rezeptoren besitzt, wobei sie die vorliegende Erfindung durch weitere Untersuchungen vervollständigten.
  • Die vorliegende Erfindung stellt
  • (1) ein cyclisches Hexapeptid, das durch die Formel [I] dargestellt wird:
  • oder ein Salz desselben, worin X und Y jeweils α-Aminosäurereste darstellen, A den Rest einer sauren D-α-Aminosäure darstellt, B den Rest einer neutralen α-Aminosäure darstellt, C einen L-α- Aminosäurerest darstellt und D den Rest einer D-α-Aminosäure mit einer aromatischen Ringgruppe darstellt, wobei Hydroxy-, Thiol-, Amino-, Imino- und Carboxylgruppen substituiert oder unsubstituiert sein können;
  • (2) eine pharmazeutische Zusammensetzung, die das durch Formel [I] dargestellte Peptid oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz desselben als aktiven Wirkstoff in einer zum Beispiel als Endothelinrezeptor-Antagonist wirksamen Menge oder in einer als NK2- Rezeptor-Antagonist wirksamen Menge umfaßt;
  • (3) ein Verfahren zum Herstellen des durch Formel [I] dargestellten Polypeptids, wobei das Verfahren das Kondensieren eines Ausgangsmaterials mit einer reaktionsfähigen Carboxylgruppe, das einem von zwei Arten von Fragmenten entspricht, die an irgendeiner Stelle der Peptidbindung des gewünschten Peptids getrennt sind, mit einem Ausgangsmaterial mit einer reaktionsfähigen Aminogruppe, das dem anderen Fragment entspricht, das nachfolgende, gleichzeitige oder schrittweise Entfernen von Schutzgruppen von der C-terminalen α-Carboxylgruppe und der N-terminalen α-Aminogruppe der sich daraus ergebenden Verbindung und danach das Ausführen einer intramolekularen Kondensation beider unter Erhalten einer cyclischen Verbindung umfaßt und
  • (4) die Verwendung des durch Formel [I] dargestellten Peptids zum Herstellen als Endothelinrezeptor-Antagonist oder als NK2- Rezeptor-Antagonist wirkender Arzneimittel zum Behandeln oder Verhindern einer Herz- oder Hirnkreislauferkrankung und zum Behandeln und Verhindern von akuter Niereninsuffizienz bereit.
    • BESCHREIBUNG DER BEVORZUGTEN AUSFÜHRUNGSFORMEN
  • Das durch Formel [I] dargestellte Hexapeptid hat 6 Amidbindungen einschließlich einer Bindung zwischen A und D, wodurch gezeigt wird, daß das Molekül als Ganzes einen Ring bildet. In dieser Beschreibung wird dieses Hexapeptid manchmal als cyclo[-A-X-Y-B- C-D-] bezeichnet.
  • In Formel [I] kann eine Aminosäure, die den durch X oder Y dargestellten α-Aminosäurerest bildet, jede Aminosäure sein, solange sie eine α-Aminosäure ist. Beispiele derselben schließen Alanin, Arginin, Asparagin, Asparaginsäure, Cystein, Glutamin, Glutaminsäure, 2-Aminomalonsäure, 2-Aminoadipinsäure, Glycin, Histidin, Isoleucin, Leucin, Lysin, Ornithin, 2,4-Diaminobuttersäure, Methionin, Phenylalanin, Prolin, 4-Hydroxyprolin, Thioprolin, Azetidin-2-carbonsäure, Pipecolinsäure (Piperidin-2- carbonsäure), Indolin-2-carbonsäure, Tetrahydroisochinolin-3- carbonsäure, Serin, Threonin, Tryptophan, 5-Methyltryptophan, Tyrosin, Valin, Alloisoleucin, Norvalin, Norleucin, tertiäres Leucin, γ-Methylleucin, Phenylglycin, 2-Aminobuttersäure, Cysteinsäure, Homocysteinsäure, 1-Naphthylalanin, 2-Naphthylalanin, 2-Thienylglycin, 3-Thienylglycin, 3-Benzothienylalanin, 4- Biphenylalanin, Pentamethylphenylalanin, 1-Aminocyclopropan-1- carbonsäure, 1-Aminocyclobutan-1-carbonsäure, 1-Aminocyclopentan-1-carbonsäure, 1-aminocyclohexan-1-carbonsäure und 1-Aminocycloheptan-1-carbonsäure ein. Wenn diese α-Aminosäuren funktionelle Gruppen wie etwa Hydroxyl, Thiol, Amino, Imino und Carboxyl besitzen, können diese funktionellen Gruppen substituiert sein.
  • Die substituierten Hydroxylgruppen schließen Ester wie etwa C&sub1;&submin;&sub6;- Fettsäureester (zu Beispiel Ameisensäureester, Essigsäureester und Propionsäureester), alicyclische C&sub4;&submin;&sub9;-Carbonsäureester (zum Beispiel Cyclopentancarbonsäureester und Cyclohexancarbonsäureester), C&sub7;&submin;&sub1;&sub5;-Arylcarbonsäureester (zum Beispiel Benzoesäureester und 4-Methylbenzoesäureester), C&sub8;&submin;&sub1;&sub6;-Aralkylcarbonsäureester (zum Beispiel Phenylessigsäureester, 2-Phenylpropionsäureester, 3- Phenylpropionsäureester und Diphenylessigsäureester) und aromatische Heterocycloalkylcarbonsäureester (zum Beispiel Indol-2- ylessigsäureester und Indol-3-ylessigsäureester) und Ether wie etwa C&sub1;&submin;&sub6;-Alkylether (zum Beispiel Methylether, Ethylether, n- Propylether und t-Butylether), C&sub3;&submin;&sub8;-Cycloalkylether (zum Beispiel Cyclopentylether und Cyclohexylether), C&sub6;&submin;&sub1;&sub2;-Arylether (zum Beispiel Phenylether und 4-Methylphenylether) und C&sub7;&submin;&sub1;&sub5;-Aralkylether (zum Beispiel Benzylether, Phenethylether und Diphenylmethylether) ein. Beispiele der α-Aminosäuren, deren Hydroxylgruppen substituiert sind, schließen O-Acetylserin, O-Acetylthreonin, 4- Acetoxyprolin, O-Benzoylserin, O-Benzoylthreonin, 4-Benzoyloxyprolin, O-Phenylacetylserin, O-Phenylacetylthreonin, 4-Phenylacetoxyprolin, O-Ethylserin, O-Ethylthreonin, 4-Ethoxyprolin, O- Cyclohexylserin, O-Cyclohexylthreonin, 4-Cyclohexyloxyprolin, O- Phenylserin, O-Phenylthreonin, 4-Phenoxyprolin, O-Benzylserin, O-Benzylthreonin, 4-Benzyloxyprolin, O-Diphenylmethylserin, O- Diphenylmethylthreonin und 4-Diphenylmethoxyprolin ein.
  • Die substituierten Thiolgruppen schließen Thiolester wie etwa C&sub1;&sub6;-Fettsäurethiolester (zum Beispiel Ameisensäurethiolester, Essigsäurethiolester und Propionsäurethiolester), alicyclische C&sub4;&submin;&sub9;-Carbonsäurethiolester (zum Beispiel Cyclopentancarbonsäurethiolester und Cyclohexancarbonsäurethiolester), C&sub7;&submin;&sub1;&sub5;-Arylcarbonsäurethiolester (zum Beispiel Benzoesäurethiolester und 4- Methylbenzoesäurethiolester) und C&sub8;&submin;&sub1;&sub6;-Aralkylcarbonsäurethiolester (zum Beispiel Phenylessigsäurethiolester, 2-Phenylpropionsäurethiolester, 3-Phenylpropionsäurethiolester und Diphenylessigsäurethiolester) und Thioetherformen wie etwa C&sub1;&submin;&sub6;-Alkylthioether (zum Beispiel Methylthioether, Ethylthioether, n- Propylthioether und t-Butylthioether), C&sub3;&submin;&sub8;-Cycloalkylthioether (zum Beispiel Cyclopentylthioether und Cyclohexylthioether) C&sub6;&submin;&sub1;&sub2;-Arylthioether (zum Beispiel Phenylthioether und 4-Methylphenylthioether) und C&sub7;&submin;&sub1;&sub5;-Aralkylthioether (zum Beispiel Benzylthioether, Phenethylthioether und Diphenylmethylthioether) ein. Beispiele der α-Aminosäuren, deren Thiolgruppen substituiert sind, schließen S-Acetylcystein, S-Benzoylcystein, S-Phenylacetylcystein, S-Ethylcystein, S-Cyclohexylcystein, S-Phenylcystein und S-Benzylcystein ein.
  • Die substituierten Aminogruppen (oder Iminogruppen) schließen substituierte Amino- oder Iminogruppen wie etwa C&sub1;&submin;&sub6;-Alkylamino (oder -imino) [zum Beispiel N-Methylamino (oder -imino), N- Ethylamino (oder -imino) und N-t-Butylamino (oder -imino)], C&sub3;&submin;&sub8;- Cycloalkylamino (oder -imino) [zum Beispiel N-Cyclopentylamino (oder -imino) und N-Cyclohexylamino (oder -imino)], C&sub6;&submin;&sub1;&sub2;-Arylamino (oder -imino) [zum Beispiel N-Phenylamino (oder -imino) und N-{4-Methylphenyl}amino (oder -imino)], C&sub7;&submin;&sub1;&sub5;-Aralkylamino (oder -imino) [zum Beispiel N-Benzylamino (oder -imino), N-Phenethylamino (oder -imino), N-{2-Chlorbenzyl}amino (oder -imino), N-{3- Chlorbenzyl}amino (oder -imino), N- {4-Chlorbenzyl}amino (oder -imino), N-{2-Methylbenzyl}amino (oder -imino), N-{3-Methylbenzyl}amino (oder -imino), N-{4-Methylbenzyl}amino (oder -imino), N- {2-Methoxybenzyl}amino (oder -imino), N- {3-Methoxybenzyl}amino (oder -imino) und N-{4-Methoxybenzyl}amino (oder -imino)] und aromatisches Heterocyclo-C&sub1;&submin;&sub6;-alkylamino (oder -imino) [zum Beispiel 2-Furylmethylamino (oder -imino), 3-Furylmethylamino (oder -imino), 2-Thienylmethylamino (oder -imino), 3-Thienylmethylamino (oder -imino), Indol-2-ylmethylamino (oder -imino) und Indol-3-ylmethylamino (oder -imino)] und substituierte Amidooder Imidogruppen wie etwa aliphatisches C&sub1;&submin;&sub6;-Acylamido (oder -imido) [z. B. Formamido (oder -imido), Acetamido (oder -imido) und Propionamido (oder -imido)] alicyclisches C&sub4;&submin;&sub9;-Acylamido (oder -imido) [zum Beispiel Cyclopentancarbonylamido (oder -imido) und Cyclohexancarbonylamido (oder -imido)], C&sub7;&submin;&sub1;&sub5;-Arylacylamido (oder -imido) [zum Beispiel Benzamido (oder -imido) und 4-Methylbenzamido (oder -imido)], C&sub8;&submin;&sub1;&sub6;-Aralkylacylamido (oder -imido) [zum Beispiel Phenylacetamido (oder -imido), 2-Phenylpropionamido (oder -imido), 3-Phenylpropionamido (oder -imido), Diphenylacetamido (oder -imido), 1-Naphthylacetamido (oder -imido) und 2-Naphthylacetamido (oder -imido)], aromatisches Heterocyclocarbonylamido (oder -imido) [zum Beispiel Indol-2- ylcarbonylamido (oder -imido) und Indol-3-ylcarbonylamido (oder -imido)], aromatisches Heterocycloalkylcarbonylamido (oder -imido) [zum Beispiel Indol-2-ylacetamido (oder -imido) und Indol-3-ylacetamido (oder -imido)] und Sulfonylamido (oder -imido) [zum Beispiel Benzolsulfonylamido (oder -imido), p-Toluolsulfonylamido (oder -imido) und 4-Methoxy-2,3,6-trimethylbenzolsulfonylamido (oder -imido)] ein. Beispiele der α-Aminosäuren, deren Amino- oder Iminogruppen substituiert sind, schließen N-Methylglycin (Sarcosin), N-Ethylglycin, N-Methylleucin, N- Ethylleucin, N-Methylphenylalanin, N-Ethylphenylalanin, N(α)- Methyltryptophan, N(α)-Ethyltryptophan, N-Cyclopentylglycin, N- Cyclqhexylglycin, N-Phenylglycin, N-Phenylleucin, N-Benzylglycm, N-Benzylleucin, N(π)-Benzylhistidin, N(T)-Benzylhistidin, N(π)-Phenacylhistidin, N(π)-Benzyloxmethylhistidin, Ng-Benzolsulfonylarginin, Ng-p-Toluolsulfonylarginin, Ng-(4-Methoxy-2,3,6- trimethylbenzolsulfonyl) arginin, N(ε)-Benzolsulfonyllysin, N(ε)- p-Toluolsulfonyllysin, N(ε)-(4-Methoxy-2,3,6-trimethylbenzolsulfonyl)lysin, Nin-Methyltryptophan, Nin-Ethyltryptophan, Nin-Formyltryptophan, Nin-Acetyltryptophan, N(ε)-Benzyllysin, N(ε)-(2-Furylmethyl)lysin, N(ε)-(2-Thienylmethyl)lysin, N(ε)-(Indol-3-ylmethyl)lysin, N(ε)-Phenylacetyllysin, N(ε)-({2-Furyl}acetyl)lysin, N(ε)-({2-Thienyl}acetyl)lysin, N(ε)-({Indol-3-yl}acetyl)lysin, N(ε)-Benzoyllysin, N(ε)-(3-Phenylpropionyl)lysin, N(δ)-Benzylornithin, N(δ)-(2-Furylmethyl)ornithin, N(δ)-(2-Thienylmethyl)ornithin, N(δ)-(Indol-3-ylmethyl)ornithin, N(δ)-Benzoylornithin, N(δ)-Phenylacetylornithin, N(δ)-(3-Phenylpropionyl)ornithin, N(δ)-({2-Methylphenyl}acetyl)ornithin, N(δ)-({3-Methylphenyl}acetyl)ornithin, N(δ)-({4-Methylphenyl}acetyl)ornithin, N(δ)-({2-Chlorphenyl}acetyl)ornithin, N(δ)-({3-Chlorphenyl}acetyl)ornithin, N(δ)-({4-Chlorphenyl}acetyl)ornithin, N(δ)-({2- Methoxyphenyl}acetyl)ornithin, N(δ)-({3-Methoxyphenyl}acetyl)ornithin, N(δ)-({4-Methoxyphenyl}acetyl)ornithin, N(δ)-(4-Biphenylacetyl)ornithin, N(γ)-Benzyl-2,4-diaminobuttersäure, N(γ)-(2- Furylmethyl)-2,4-diaminobuttersäure, N(γ)-(2-Thienylmethyl)-2,4- diaminobuttersäure, N(γ)-(Indol-3-ylmethyl)-2,4-diaminobuttersäure, N(γ)-Benzoyl-2,4-diaminobuttersäure, N(γ)-Phenylacetyl- 2,4-diaminobuttersäure, N(γ)-(3-Phenylpropionyl-2,4-diaminobuttersäure, N(γ)-(2-Furylacetyl)-2,4-diaminobuttersäure, N(γ)-(2- Thienylacetyl)-2,4-diaminobuttersäure und N(γ)-({Indol-3-yl}acetyl)-2,4-diaminobuttersäure ein.
  • Die substituierten Carboxylgruppen schließen Amidogruppen wie etwa Carbonsäureamido (-CONH&sub2;), N-C&sub1;&submin;&sub6;-Alkylamido (zum Beispiel N- Methylamido, N-Ethylamido, N-{n-Propyl}amido und N-t-Butylamido) N-C&sub1;&submin;&sub8;-Cycloalkylamido (zum Beispiel N-Cyclopentylamido und N-Cyclohexylamido), N-C&sub6;&submin;&sub1;&sub2;-Arylamido (zum Beispiel N-Phenylamido und N-{4-Methylphenyl}amido), N-C&sub7;&submin;&sub1;&sub5;-Aralkylamido (zum Beispiel N-Benzylamido, N-phenethylamido, N-{1,2-Diphenylethyl}amido), N- {aromatisches Heterocyclo-C&sub1;&submin;&sub6;-alkyl}amido (zum BeispielN-[2- {Indol-2-yl}ethyl]amido und N-[2-{Indol-3-yl}ethyl]amido), piperidinamido, piperazinamido, N&sup4;-C&sub1;&submin;&sub6;-Alkylpiperazinamido (zum Beispiel N&sup4;-Methylpiperazinamido und N&sup4;-Ethylpiperazinamido) N&sup4;- C&sub3;&submin;&sub8;-Cycloalkylpiperazinamido (zum Beispiel N&sup4;-Cyclopentylpiperazinamido und N&sup4;-Cyclohexylpiperazinamido), N&sup4;-(5- bis 7gliedriges Heterocyclopiperazinamido (zum Beispiel N&sup4;-Pyridylpiperazinamido, N&sup4;-Furylpiperazinamido, N&sup4;-Thienylpiperazinamido), N&sup4;-C&sub6;&submin;&sub1;&sub2;-Aryrpiperazinamido (zum Beispiel N&sup4;-Phenylpiperazinamido und N&sup4;-{4- Methylphenyl}piperazinamido), N&sup4;-C&sub7;&submin;&sub1;&sub5;-Aralkylpiperazinamido (zum Beispiel N&sup4;-Benzylpiperazinamido, N&sup4;-Phenethylpiperazinamido, N&sup4;- {1,2-Diphenylethyl}piperazinamido), N&sup4;-{aromatisches Heterocyclo- C&sub1;&submin;&sub6;-alkyl}piperazinamido (zum Beispiel N&sup4;-[2-{Indol-2-yl}ethyl]piperazinamido und N&sup4;-[2-{Indol-3-yl}ethyl]piperazinamido), aliphatisches N&sup4;-C&sub1;&submin;&sub6;-Acylpiperazinamido (zum Beispiel N&sup4;-Acetylpiperazinamido und N&sup4;-Propionylpiperazinamido), alicyclisches N&sup4;-C&sub4;&submin;&sub9;- Acylpiperazinamido (zum Beispiel N&sup4;-cyclopentancarbonylpiperazinamido und N&sup4;-Cyclohexancarbonylpiperazinamido), N&sup4;-C&sub7;&submin;&sub1;&sub5;-Arylacylpiperazinamido (zum Beispiel N&sup4;-Benzoylpiperazinamido und N&sup4;-{4- Methylbenzoyl}piperazinamido), N&sup4;-C&sub8;&submin;&sub1;&sub6;-Aralkylacylpiperazinamido (zum Beispiel N&sup4;-Phenylacetylpiperazinamido, N&sup4;-{2-Phenylpropion}piperazinamido, N&sup4;-{3-Phenylpropionyl}piperazinamido, N&sup4;- Diphenylacetylpiperazinamido), N&sup4;-{1-Naphthylacetyl}piperazinamido und N&sup4;-{2-Naphthylacetyl}piperazinamido), N&sup4;-{aromatisches Heterocyclocarbonyl}piperazinamido (zum Beispiel N&sup4;-{Indol-2- ylcarbonyl}piperazinamido und N&sup4;-{Indol-3-ylcarbonyl}piperazinamido) und N&sup4;-{aromatisches Heterocycloalkylcarbonyl}piperazinamido (zum Beispiel N&sup4;-{Indol-2-ylacetyl}piperazinamido und N&sup4;- {Indol-3-yl-acetyl}piperazinamido) und Ester wie etwa C&sub1;&submin;&sub6;-Alkylester (zum Beispiel Methylester, Ethylester und n-Propylester), C&sub3;&submin;&sub8;-Cycloalkylester (zum Beispiel Cyclopentylester und Cyclohexylester) und C&sub7;&submin;&sub1;&sub5;-Aralkylester (zum Beispiel Benzylester, Phenethylester, 1-Phenylethylester und Diphenylmethylester) ein. Die vorgenannten Amidoformen schließen ferner Amidogruppen mit α-Aminosäuren und Amidogruppen mit Oligopeptiden (zum Beispiel Dipeptide, Tripeptide und Tetrapeptide) ein. Die α-Aminosäuren, deren carboxylgruppen substituiert sind, schließen zum Beispiel N&sup4;-Methylasparagin, N&sup4;-Phenylasparagin, N&sup4;-Benzylasparagin, N&sup4;- phenethylasparagini N&sup4;-(2-{Indol-3-yl}ethyl)asparagin, N&sup5;-Methylglutamin, N&sup5;-Phenylglutamin, N&sup5;-Benzylglutamin, N&sup5;-Phenethylglutamin, N&sup5;-(2-{Indol-3-yl}ethyl)glutamin, Asparaginsäure-β- methylester, Asparaginsäure-β-cyclopropylester, Asparaginsäure- β-benzylester, Asparaginsäure-β-phenethylester, Asparaginsäure- β-N&sup4;-phenylpiperazinamid, Asparaginsäure-β-N&sup4;- (2-methylphenylpiperazinamid, Asparaginsäure-β-N&sup4;-(3-methylphenylpiperazinamid, Asparaginsäure-β-N&sup4;-(4-methylphenylpiperazinamid, Asparaginsäure- β-N&sup4;-(2-methoxyphenylpiperazinamid, Asparaginsäure-β-N&sup4;-(3-methoxyphenylpiperazinamid, Asparaginsäure-β-N&sup4;-(4-methoxyphenylpiperazinamid, Asparaginsäure-β-N&sup4;-(2-chlorphenylpiperazinamid, Asparaginsäure-β-N&sup4;-(3-chlorphenylpiperazinamid, Asparaginsäure- β-N&sup4;-(4-chlorphenylpiperazinamid, Asparaginsäure-β-N&sup4;-(4-nitrophenylpiperazinamid,Asparaginsäure-β-N&sup4;-(4-fluorphenylpiperazinamid, Asparaginsäure-β-N&sup4;-(3-trifluormethylphenylpiperazinamidi-Asparaginsäure-β-N&sup4;-(2,3-dimethylphenylpiperazinamid, Asparaginsäure-β-N&sup4;-(2-pyridylpiperazinamid, Asparaginsäure-β-N&sup4;-(2-pyrimidylpiperazinamid, Glutaminsäure-γ-methylester, Glutaminsäure- γ-cyclopropylester, Glutaminsäure-γ-benzylester und Glutaminsäure-γ-phenethylester ein.
  • Die α-Aminosäure, die den durch X oder Y in Formel [I] dargestellten Aminosäurerest bildet, kann irgendeine L-, D- und DL- Form sein. Die L-Form ist jedoch in jedem Fall bevorzugter
  • Eine Aminosäure, die den durch A in Formel [I] dargestellten Rest einer sauren D-α-Aminosäure bildet, ist zum Beispiel eine Aminosäure mit einer sauren Gruppe wie etwa Carboxyl, Sulfonyl oder Tetrazolyl als Seitenkette. Beispiele derartiger Aminosäuren schließen D-Glutaminsäure, D-Asparaginsäure, D-Cysteinsäure, D-Homocysteinsäure, D-β-(5-Tetrazolyl)alanin und D-2-Amino-4-(5- tetrazolyl)buttersäure ein. Insbesondere sind D-Glutaminsäure, D-Asparaginsäure und D-Cysteinsäure bevorzugt.
  • Eine Aminosäure, die den durch B in Formel [I] dargestellten neutralen α-Aminosäurerest bildet, ist eine α-Aminosäure. Beispiele derartiger α-Aminosäuren schließen Alanin, Valin, Norvalin, Leucin, Isoleucin, Alloisoleucin, Norleucin, tertiäres Leucin, γ-Methylleucin, Phenylglycin, Phenylalanin, 1-Naphthylalanin, 2-Naphthylalanin, Prolin, 4-Hydroxyprolin, Azetidin-2- carbonsäure, Pipecolinsäure (Piperidin-2-carbonsäure), 2-Thienylalanin, 2-Thienylglycin, 3-Thienylglycin, 1-Aminocyclopropan- 1-carbonsäure, 1-Aminocyclobutan-1-carbonsäure, 1-Aminocyclopentan-1-carbonsäure, 1-Aminocyclohexan-1-carbonsäure, 1-Aminocycloheptan-1-carbonsäure, 2-Cyclopentylglycin und 2-Cyclohexylglycin ein. Wenn die vorgenannte neutrale α-Aminosäure in der L- und D-Form vorliegt, ist die D-Form bevorzugt. D-Leucin, D- Alloisoleucin, tertiäres D-Leucin, D-γ-Methylleucin, D-Phenylglycin, D-2-Thienylalanin, D-2-Thienylglycin, D-3-Thienylglycin und D-2-Cyclopentylglycin sind unter anderem bevorzugt. α-Iminogruppen dieser neutralen α-Aminosäuren können durch C&sub1;&submin;&sub6;-Alkylgruppen (zum Beispiel Methyl, Ethyl, n-Propyl und t-Butyl) substituiert sein. Beispiele derartiger α-Aminosäuren schließen N-Methylleucin, N-Methylalloisoleucin, tertiäres N-Methylleucin, N-Methyl-γ-methylleucin und N-Methylphenylglycin ein. Auch bei diesen α-Aminosäuren ist die D-Form bevorzugt.
  • Als eine Aminosäure, die den durch C in Formel [I] dargestellten L-α-Aminosäurerest bildet, wird eine üblicherweise in der frechnik bekannte L-α-Aminosäure verwendet. Beispiele derartiger L-α- Aminosäuren schließen Glycin, L-Alanin, L-Valin, L-Norvalin, L- Leucin, L-Isoleucin, tertiäres L-Leucin, L-Norleucin, L-Methionin, L-2-Aminobuttersäure, L-Serin, L-Threonin, L-Phenylalanin, L-Asparaginsäure, L-Glutaminsäure, L-Asparagin, L-Glutamin, L- Lysin, L-Tryptophan, L-Arginin, L-Tyrosin und L-Prolin ein. Insbesondere sind L-Leucin, L-Norleucin und L-Tryptophan bevorzugt. α-Iminogruppen dieser L-α-Aminosäuren können durch C&sub1;&submin;&sub6;- Alkylgruppen (zum Beispiel Methyl, Ethyl, n-Propyl und t-Butyl) substituiert sein. Beispiele derartiger L-α-Aminosäuren schließen L-N-Methylleucin, L-N-Methylnorleucin und L-N(α)-Methyltryptophan ein.
  • Als Aminosäure, die den D-α-Aminosäurerest mit der durch D in Formel [I] dargestellten aromatischen Ringgruppe bildet, wird eine D-α-Aminosäure mit einer aromatischen Ringgruppe als Seitenkette verwendet. Bevorzugte Beispiele derselben schließen D- Tryptophan, D-5-Methyltryptophan, D-Phenylalanin, D-Tyrosin, D- 1-Naphthylalanin, D-2-Naphthylalanin, D-3-Benzothienylalanin, D- 4-Biphenylalanin und D-Pentamethylphenylalanin ein. D-Tryptophan und D-5-Methyltryptophan sind bevorzugt und insbesondere ist D- Tryptophan bevorzugter Die α-Iminogruppen der D-α-Aminosäuren mit den aromatischen Ringen können durch C&sub1;&submin;&sub6;-Alkylgruppen (zum beispiel Methyl, Ethyl, n-Propyl und t-Butyl) substituiert sein. Weiter kann die Iminogruppe des Indolringes von D-Tryptophan durch eine Kohlenwasserstoffgruppe wie etwa eine C&sub1;&submin;&sub6;-Alkylgruppe (zum Beispiel Methyl, Ethyl, n-Propyl oder t-Butyl), eine C&sub3;&submin;&sub8;- Cycloalkylgruppe (zum Beispiel Cyclopentyl oder Cyclohexyl), eine C&sub6;&submin;&sub1;&sub2;-Arylgruppe (zum Beispiel Phenyl oder 4-Methylphenyl) oder C&sub7;&submin;&sub1;&sub5;-Aralkyl (zum Beispiel Benzyl oder Phenethyl) oder eine Acylgruppe wie etwa eine aliphatische C&sub1;&submin;&sub6;-Acylgruppe (zum Beispiel Formyl, Acetyl oder Propionyl), eine alicyclische C&sub4;&submin;&sub9;- Acylgruppe (zum Beispiel Cyclopentancarbonyl oder Cyclohexancarbonyl), eine C&sub7;&submin;&sub1;&sub5;-Arylacylgruppe (zum Beispiel Benzoyl oder 4- Methylbenzoyl), eine C&sub8;&submin;&sub1;&sub6;-Aralkylacylgruppe (zum Beispiel Phenylacetyl, 2-Phenylpropionyl, 3-Phenylpropionyl oder Diphenylacetyl) oder eine C&sub1;&submin;&sub6;-Alkoxycarbonylgruppe (zum Beispiel Methoxycarbonyl oder Ethoxycarbonyl) substituiert sein. Beispiele derartiger α-Aminosäuren schließen D-N(α)-Methyltryptophan, D-N- Methylphenylalanin, D-N-Methyltyrosin, D-Nin-Formyltryptophan, DNin-Ethyltryptophan, D-Nin-Methyltryptophan, und D-Nin-Acetyltryptophan ein. D-Nin-Methyltryptophan, D-Nin-Formyltryptophan und D-Nin-Acetyltryptophan sind unter anderen bevorzugt.
  • Bei dem durch Formel [I] dargestellten Hexapeptid sind die bevorzugten Ausführungsformen jedes Parameters wie folgt:
  • X hat die L-Konfiguration.
  • Y hat die L-Konfiguration.
  • A ist aus D-Glutaminsäure, D-Asparaginsäure, D-Cysteinsäure und D-β-(5-Tetrazolyl)alanin ausgewählt.
  • B hat die D-Konfiguration.
  • B ist aus 1-Aminocyclopropan-1-carbonsäure, 1-Aminocyclobutan-1- carbonsäure, 1-Aminocyclopentan-1-carbonsäure, 1-Aminocyclohexan-1-carbonsäure und 1-Aminocycloheptan-1-carbonsäure ausgewählt.
  • B ist aus D-Leucin, D-Alloisoleucin, tertiärem D-Leucin, D-γ- Methylleucin, D-Phenylglycin, D-2-Thienylglycin, D-3-Thienylglycin, D-cyclopentylglycin, D-Phenylalanin, D-2-Thienylalanmin, D-Valin, D-2-Furylglycin und D-3-Furylglycin ausgewählt.
  • C ist aus L-Leucin, L-Isoleucin, L-Valin, L-Norleucin und einem L-α-Aminosäurerest mit einer aromatischen Struktureinheit ausgewählt.
  • C ist aus L-Leucin, L-Phenylalanin und L-Tryptophan ausgewählt.
  • D ist D-Tryptophan oder ein Derivat desselben, D-1-Naphthylalanin, D-2-Naphthylalanin, D-Benzothienylalanin, D-4-Bisphenylalanin und D-Pentamethylphenylalanin.
  • Das Tryptophanderivat ist aus D-NinMethyltryptophan, D-Nin-Formyltryptophan und D-Nin-Acetyltryptophan ausgewählt.
  • Bevorzugte Kombinationen jedes Parameters schließen solche wie die ein, bei denen A D-Asparaginsäure ist; X Tryptophan, L-(β-4- Phenylpiperazinamid)asparaginsäure, L-(N&sup5;-Phenylacetyl)ornithin, L-(N&sup4;-[Indol-3-yl]ethyl)ornithin, L-(4-Benzyloxy)prolin, L-(N&sup5;- Benzyl)glutamin oder L-(Nδ-[Indol-3-yl]acetyl)asparagin ist; Y L- Leucin, L-Asparaginsäure, L-O-Benzylserin, Tryptophan, Serin oder Prolin ist; B D-Leucin, D-2-Thienylglycin oder D-3-Thienylglycin ist; C L-Leucin ist und D D-Tryptophan ist.
  • Alle durch Formel [I] dargestellten cyclischen Peptide der vorliegenden Erfindung (nachstehend als cyclische Peptide [I] bezeichnet) haben eine antagonistische Aktivität gegenüber Endothelinrezeptoren. Außerdem haben die Peptide mit Aminosäureresten wie etwa Asparaginsäure und Tryptophan als X und Aminosäureresten wie etwa Leucin, Tryptophan und O-Benzylserin als Y weiter auch eine antagonistische Aktivität gegenüber NK2-Rezeptoren.
  • Die Salze der cyclischen Peptide [I] schließen Metallsalze (zum Beispiel Natriumsalze, Kahumsalze, Calciumsalze und Magnesiumsalze), Salze von Basen oder basischen Verbindungen (zum Beispiel Ammoniumsalze und Argininsalze), Additionssalze anorganischer Säuren (zum Beispiel Hydrochloride, Sulfate und Phosphate) und Salze organischer Säuren (zum Beispiel Acetate, Propionate, Citrate, Tartrate, Malate und Oxalate) ein.
  • Wie in den Ausführungsbeispielen der Beschreibung beschrieben können die cyclischen Peptide [I] der vorliegenden Erfindung durch in der Technik bekannte Verfahren zur Peptidsynthese hergestellt werden, die entweder Festphasensyntheseverfahren oder Flüssigphasensyntheseverfahren sein können. In einigen Fällen sind die Flüssigphasensyntheseverfahren bevorzugt. Beispiele derartiger Verfahren zur Peptidsynthese schließen bei M. Bodansky und M. A. Ondetti, Peptide Synthesis, Interscience, New York (1966), F. M. Finn und K. Hofmann, The Proteins, Bd. 2, herausgegeben von H. Nenrath und R. L. Hill, Academic Press, New York, (1976), N. Izumiya et al., Peptide Gosei no kiso to Jikken (Grundlagen und Experimente zur Peptidsynthese), Maruzen (1985), H. Yazima, S. Sakakibara et al., Seikagaku Jikken Koza (Kurs über biochemische Experimente), 1, herausgegeben von der Biochemical Society of Japan, Tokyo Kagaku Doj in (1977), H. Kimura et al., Zoku Seikagaku Jikken Koza (Kurs über biochemische Experimente, zweite Reihe), 2, herausgegeben von der Biochemical Society of Japan, Tokyo Kagaku Dojin (1987), und J. M. Stewart und J. D. Young, Solid Phase Peptide Synthesis, Pierce Chemical Company, Illinois (1984), beschriebene Verfahren ein, die Azidverfahren, Chloridverfahren, Säureanhydridverfahren, Verfahren über ein gemischtes Anhydrid, DCC-Verfahren, Verfahren über einen aktiven Ester, Woodward-Reagenz K verwendende Verfahren, Carbodiimidazolverfahren, Oxidations-Reduktionsverfahren, DCC/HONB-Verfahren und BOP-Reagenzien verwendende Verfahren beschreiben.
  • Das cyclische Peptid [I] der vorliegenden Erfindung kann durch Kondensieren eines ersten Ausgangsmaterials mit einer reaktionsfähigen Carboxylgruppe, das einer oder zwei Arten Fragment entspricht, die an irgendeiner Stellung seiner Peptidbindung getrennt sind, mit einem zweiten Ausgangsmaterial mit einer reaktionsfähigen Aminogruppe, das dem anderen Fragment entspricht, nachfolgendes gleichzeitiges oder schrittweises Entfernen von Schutzgruppen der C-terminalen α-Carboxylgruppe und der N-terminalen α-Aminogruppe der sich daraus ergebenden Verbindung, danach Ausführen einer intramolekularen Kondensation beider durch in der Technik bekannte Verfahren unter Erhalten einer cyclischen Verbindung und anschließend Entfernen von Schutzgruppen durch in der Technik bekannte Verfahren hergestellt werden, falls das sich daraus ergebende kondensierte Produkt irgendwelche Schutzgruppen besitzt.
  • Die vorstehenden Ausgangsmaterialien sind üblicherweise Aminosäure- und/oder Peptidfragmente, die zusammengenommen das cyclische Hexapeptid der gewünschten Formel [I] oder ein Salz desselben bilden. Sie sind üblicherweise gerade oder verzweigt. Die reaktionsfähige Carboxylgruppe bedeutet eine Carboxylgruppe an sich oder eine aktivierte Carboxylgruppe. Die reaktionsfähige Aminogruppe bedeutet eine Aminogruppe an sich oder eine aktivierte Aminogruppe. Eine der beiden funktionellen Gruppen, die an der Kondensationsreaktion teilnehmen, ist üblicherweise aktiviert.
  • Die Carboxylgruppe und die Aminogruppe, die nicht an der Kondensationsreaktion teilnehmen, werden üblicherweise vor der Kondensationsreaktion geschützt.
  • Der Schutz funktioneller Gruppen, die die Reaktion der Ausgangsmaterialien nicht beeinflussen sollen, die Schutzgruppen und das Entfernen der Schutzgruppen und die Aktivierung mit der Reaktion in Beziehung stehender funktioneller Gruppen können geeigneterweise aus in der Technik bekannten Gruppen oder Verfahren gewählt werden.
  • Beispiele der Schutzgruppen für die Aminogruppen der Ausgangsmaterialien schließen Benzyloxycarbonyl, t-Butyloxycarbonyl, t- Amyloxycarbonyl, Isobornyloxycarbonyl, 4-Methoxybenzyloxycarbonyl, 2-Chlorbenzyloxycarbonyl, Adamantyloxycarbonyl, Trifluoracetyl, Phthalyl, Formyl, 2-Nitrophenylsulfenyl, Diphenylphosphinothioyl und 9-Fluorenylmethyloxycarbonyl ein. Die Schutzgruppen für die Carboxylgruppen schließen zum Beispiel Alkylester (wie etwa Methyl-, Ethyl-, Propyl-, Butyl-, t-Butyl-, Cyclopentyl-, Cyclohexyl-, Cycloheptyl-, Cyclooctyl- und 2- Adamantylester), Benzylester, 4-Nitrobenzylester, 4-Methoxybenzylester, 4-Chlorbenzylester, Benzhydrylester, Phenacylester, Benzyloxycarbonylhydrazid, t-Butyloxycarbonylhydrazid und Tritylhydrazid ein.
  • Die Hydroxylgruppe von Serin kann zum Beispiel durch Veresterung oder Veretherung geschützt werden. Beispiele zu dieser Veresterung geeigneter Gruppen schließen niederaliphatische Acylgruppen wie etwa Acetyl, Arylacylgruppen wie etwa Benzoyl und von Kohlensäure abgeleitete Gruppen wie etwa Benzyloxycarbonyl und Ethyloxycarbonyl ein. Beispiele zur Veretherung geeigneter Gruppen schließen Benzyl, Tetrahydropyranyl und t-Butyl ein. Die Hydroxylgruppe von Serin muß jedoch nicht immer geschützt werden.
  • Beispiele der Schutzgruppen für die phenolische Hydroxylgruppe von Tyrosin schließen Benzyl, 2,6-Dichlorbenzyl, 2-Nitrobenzyl, 2-Brombenzyloxycarbonyl und t-Butyl ein. Die phenolische Hydroxylgruppe von Tyrosin muß jedoch nicht immer geschützt werden.
  • Methionin kann in Form der Sulfoxide geschützt werden.
  • Die Schutzgruppen für den Imidazolring von Histidin schließen p- Toluolsulfonyl, 4-Methoxy-2,3,6-trimethylbenzolsulfonyl, 2,4- Dinitrophenyl, Benzyloxymethyl, t-Butoxymethyl, t-Butoxycarbonyl, Trityl und 9-Fluorenylmethyloxycarbonyl ein. Der Imidazolring muß jedoch nicht immer geschützt werden.
  • Die Schutzgruppen für den Indolring von Tryptophan schließen Formyl, 2,4,6-Trimethylbenzolsulfonyl, 2,4,6-Trimethoxybenzolsulfonyl, 4-Methoxy-2,3,6-trimethylbenzolsulfonyl, 2,2,2-Trichlorethyloxycarbonyl und Diphenylphosphinothioyl ein. Der Indolring muß jedoch nicht immer geschützt werden.
  • Beispiele der aktivierten Carboxylgruppen der Ausgangsmaterialien schließen die entsprechenden Säureanhydride, Azide und aktiven Ester ein (Ester von Alkoholen wie etwa Pentachlorphenol, 2,4,5-Trichlorphenol, 2,4-Dinitrophenol, Cyanmethylalkohol, p-Nitrophenol, N-Hydroxy-5-norbornen-2,3-dicarboxyimid, N-Hydroxysuccinimid, N-Hydroxyphthalimid und N-Hydroxybenzotriazol). Beispiele der aktivierten Aminosäuregruppen der Ausgangsmaterialien schließen die entsprechenden Phosphorsäureamide ein.
  • Die Kondensationsreaktion kann in Anwesenheit eines (von) Lösungsmittels (Lösungsmitteln) ausgeführt werden. Das (die) Lösungsmittel kann (können) aus den gemeinhin bei Peptidkondensationsreaktionen verwendeten Lösungsmitteln entsprechend ausgewählt werden. Beispiele der Lösungsmittel schließen wasserfreies oder wäßriges Dimethylformamid, Dimethylsulfoxid, Pyndin, Chloroform, Dioxan, Dichlormethan, Tetrahydrofuran, Acetonitril, Essigsäureethylester, N-Methylpyrrolidon und entsprechende Gemische derselben ein.
  • Die Reaktionstemperatur wird aus dem gemeinhin bei Peptidbildungsreaktionen verwendeten Temperaturbereich, üblicherweise aus dem Bereich von -20 bis 30ºC entsprechend ausgewählt.
  • Die intramolekulare Cyclisierungsreaktion kann an jeder Stellung des Peptids durch in der Technik bekannte Verfahren ausgeführt werden. Zum Beispiel wird die Schutzgruppe der C-terminalen α- Carboxylgruppe des geschützten Peptids zuerst durch in der Technik bekannte Verfahren entfernt und anschließend wird die Carboxylgruppe durch in der Technik bekannte Verfahren aktiviert, gefolgt vom Entfernen der Schutzgruppe der N-terminalen α-Aminogruppe durch in der Technik bekannte Verfahren und intramolekulare Cyclisierung. Die Schutzgruppen der C-terminalen α-Carboxylgruppe und der N-terminalen α-Aminogruppe des geschützten Peptids können gleichzeitig entfernt werden, gefolgt von der intramolekulare Cyclisierung gemäß bekannter Kondensationsreaktionen. In einigen Fällen wird die intramolekulare Cyclisierungsreaktion vorzugsweise in hochverdünntem Zustand ausgeführt.
  • Beispiele von Verfahren zum Entfernen der Schutzgruppen schließen die katalytische Reduktion in Anwesenheit eines Katalysators wie etwa Palladiumschwarz oder Pd-Kohle in einem Wasserstoffstrom, Säurebehandlung mit wasserfreiem Fluorwasserstoff, Methansulfonsäure, Trifluormethansulfonsäure, Trifluoressigsäure oder Gemischen derselben und die Reduktion mit Natrium in flüssigem Ammoniak ein. Die Reaktion zur Entfernung durch die vorgenannte Säurebehandlung wird im allgemeinen bei einer Temperatur zwischen -20 und 40ºC ausgeführt. Bei der Säurebehandlung ist es wirkungsvoll, ein Kationen einfangendes Mittel wie etwa Anisol, Phenol, Thioanisol, m-Kresol, p-Kresol, Dimethylsulfid, 1,4-Butandithiol oder 1,2-Ethandithiol zuzusetzen. Die als Schutzgruppe für den Imidazolring von Histidin verwendete 2,4- Dinitrophenylgruppe wird durch Thiophenolbehandlung entfernt. Die als Schutzgruppe für den Indolring von Tryptophan verwendete Formylgruppe kann entweder durch (i) Alkalibehandlung mittels verdünntem Natriumhydroxid oder verdünntem Ammoniak oder (ii) die vorgenannte Entfernung durch Säurebehandlung in Anwesenheit von 1,2-Ethandithiol oder 1,4-Butandithiol entfernt werden.
  • Nach Abschluß der Reaktion wird das auf diese Weise erhaltene cyclische Peptid [I] durch herkömmliche Trenn- und Reinigungsverfahren für Peptide wie etwa Extraktion, Verteilung, Umfällen, Umkristallisation, Säulenchromatographie und Hochleistungs- Flüssigkeitschromatographie gesammelt.
  • Die cyclischen Peptide [I] der vorliegenden Erfindung können durch in der Technik bekannte Verfahren als Metallsalze, Salze von Basen oder basischen Verbindungen, anorganische Säureadditionssalze und organische Säuresalze und insbesondere als pharmazeutisch annehmbare Säureadditionssalze wie etwa Salze anorganischer Säuren (zum Beispiel Salzsäure, Schwefelsäure und Phosphorsäure) oder organischer Säuren (zum Beispiel Essigsäure, Propionsäure, Zitronensäure, Weinsäure, Äpfelsäure, Oxalsäure und Methansulfonsäure) erhalten werden.
  • In dieser Beschreibung werden die Aminosäuren und Peptide durch die gemeinhin in der Technik verwandten oder von der IUPAC-IUB- Kommission für biochemische Nomenklatur angenommenen Abkürzungen bezeichnet. Zum Beispiel werden die folgenden Abkürzungen verwendet:
  • Gly: Glycin
  • Sar: Sarkosin (N-Methylglycin)
  • Ala: Alanin
  • Val: Valin
  • Nva: Norvalin
  • Ile: Isoleucin
  • aIle: Alloisoleucin
  • Nle: Norleucin
  • Leu: Leucin
  • N-MeLeu: N-Methylleucin
  • tLeu: tertiäres Leucin
  • γMeLeu: γ-Methylleucin
  • Met: Methionin
  • Arg: Arginin
  • Arg (Tos): m-p-Toluolsulfonylarginin
  • Lys: Lysin
  • Lys(Mtr): N(ε)-(4-Methoxy-2,3,6-trimethylbenzolsulfonyl)lysin
  • Orn: Ornithin
  • Orn(COPH): N(δ)-Benzoylornithin
  • Orn(COCH&sub2;Ph): N(δ)-Phenylacetylornithin
  • Orn(COCH&sub2;CH&sub2;Ph): N(δ)-(3-Phenylpropionyl)ornithin
  • Orn(COCH&sub2;-Ind): N(δ)-({Indol-3-yl}acetyl)ornithin
  • His: Histidin
  • His(Bom): N(π)-Benzyloxymethylhistidin
  • His(Dzl): N(τ)-Benzylhistidin
  • Asp: Asparaginsäure
  • Asn(CH&sub2;Ph): N&sup4;-Benzylasparagin
  • Asn (CH&sub2;CH&sub2;Ph): N&sup4;-Phenethylasparagin
  • Asn(CH&sub2;CH&sub2;-Ind): N&sup4;-(2-{Indol-3-yl}ethyl)asparagin
  • Asn(Me CH&sub2;CH&sub2;Ph): N&sup4;-Methyl-N&sup4;-phenethylasparagin
  • Asn(CH&sub2;CHMePh): N&sup4;-({2-Phenyl}propyl)asparagin
  • Asp(R1): Asparaginsäure-β-4-phenylpiperazinamid
  • Asp(R2): Asparaginsäure-β-4-phenylpiperidinamid
  • Asp(R3): Asparaginsäure-β-indolinamid
  • Asp(R4): Asparaginsäure-β-1-aminoindanamid
  • Asp(R5): Asparaginsäure-β-1-aminotetrahydronaphthalinamid
  • Asp(R6): Asparaginsäure-β-4-acetylpiperazinamid
  • Glu: Glutaminsäure
  • Gln(CH&sub2;Ph): N&sup5;-Benzylglutamin
  • Gln(CH&sub2;CH&sub2;Ph): N&sup5;-Phenethylglutamin
  • Gln(CH&sub2;CH&sub2;-Ind): N&sup5;-(2-{Indol-3-yl}ethyl)glutamin
  • Glu(R3): Glutaminsäure-γ-indolinamid
  • Glu(R4): Glutaminsäure-γ-1-aminoindanamid
  • Glu(R5): Glutaminsäure-γ-1-aminotetrahydronaphthalinamid
  • Cys: Cystein
  • Cta: Cysteinsäure
  • Ser: Serin
  • Ser(Bzl): O-Benzylserin
  • Thr: Threonin
  • Thr(Bzl): O-Benzylthreonin
  • Pro: Prolin
  • Tpr: Thioprolin
  • Hyp: 4-Hydroxyprolin
  • Hyp(Bzl): 4-Benzyloxyprolin
  • Azc: Azetidin-2-carbonsäure
  • Pip: Pipecolinsäure (Piperidin-2- carbonsäure)
  • Phe: Phenylalanin
  • N-MePhe: N-Methylphenylalanin
  • Tyr: Tyrosin
  • Trp: Tryptophan
  • mTrp: 5-Methyltryptophan
  • N-MeTrp: N(α)-Methyltryptophan
  • Trp(Me): Nin-Methyltryptophan
  • Trp(For): Nin-Formyltryptophan
  • Trp(Ac): Nin-Acetyltryptophan
  • Phg: Phenylglycin
  • Nal(1): 1-Naphthylalanin
  • Nal(2): 2-Naphthylalanin
  • Thi: 2-Thienylalanin
  • Thg(2): 2-Thienylglycin
  • Thg(3): 3-Thienylglycin
  • Acpr: 1-Aminocyclopropan-1-carbonsäure
  • Acbu: 1-Aminocyclobutan-1-carbonsäure
  • Acpe: 1-Aminocyclopentan-1-carbonsäure
  • Achx: 1-Aminocyclohexan-1-carbonsäure
  • Achp: 1-Aminocycloheptan-1-carbonsäure
  • Tic: Tetrahydroisochinolin-2-carbonsäure
  • In dieser Beschreibung gebräuchlicherweise verwendete Schutzgruppen und Reagenzien werden durch die folgenden Abkürzungen bezeichnet:
  • AcOEt: Essigsäureethylester
  • Boc: t-Butoxycarbonyl
  • Bzl: Benzyl
  • BrZ: 2-Brombenzyloxycarbonyl
  • ClZ: 2-Chlorbenzyloxycarbonyl
  • Tos: p-Toluolsulfonyl
  • For: Formyl
  • OBzl: Benzylester
  • OPac: Phenacylester
  • ONB: HONB-Ester
  • TFA: Trifluoressigsäure
  • TEA: Triethylamin
  • IBCF: Chlorameisensäureisobutylester
  • DMF: N,N-Dimethylformamid
  • DCC: N,N'-Dicyclohexylcarbodiimid
  • DCU: N,N'-Dicyclohexylharnstoff
  • HONB: N-Hydroxy-5-norbornen-2,3- dicarboxyimid
  • HOBt: 1-Hydroxybenzotriazol
  • DCM: Dichlormethan
  • THF: Tetrahydrofuran
  • Die cyclischen Peptide der vorliegenden Erfindung besitzen die folgende pharmakologische Aktivität. Wie in den nachstehend beschriebenen Versuchsbeispielen gezeigt, besitzen die neuen cyclischen Peptide [I] der vorliegenden Erfindung oder deren pharmazeutisch annehmbare Salze eine antagonistische Aktivität gegenüber Endothelinrezeptoren. Weiter besitzt eine gewisse Gruppe cyclischer Peptide [I] oder pharmazeutisch annehmbarer Salze derselben auch eine antagonistische Aktivität gegenüber NK2-Rezeptoren. Die cyclischen Peptide [I] oder deren pharmazeutisch annehmbaren Salze können als prophylaktische und therapeutische Wirkstoffe bei Bluthochdruck, Herz- oder Hirnkreislauferkrankungen, Nierenerkrankungen und Asthma verwendet werden, da sie gegenüber Endothelinrezeptoren eine antagonistische Aktivität besitzen. Weiter können die cyclischen Peptide [I] oder pharmazeutisch annehmbaren Salze derselben mit einer antagonistischen Aktivität gegenüber NK2-Rezeptoren außerdem auch als entzündungshemmende Wirkstoffe und Antarthritika verwendet werden.
  • Kürzliche Untersuchungen an Endothelinrezeptoren zeigten, daß die Endothelinrezeptoren zwei Untertypen (ETA und ETB) besitzen [zum Beispiel Twelfth Medicinal Chemistry Symposium - First Annual Meeting of the Medical Chemistry Section [Zwölftes Symposium über medizinische Chemie - erstes Jahrestreffen der Sektion Medizinische Chemie], Okayama, 4. bis 6. Dezember 1991, Zusammenfassung der Vorträge, Seite 82 (Vortrag Nr. P-20); Third Endothelin Symposium [Drittes Endothelin-Symposium], Tsukuba, 13. und 14. Dezember 1991, Zusammenfassungen der Vorträge (Vortrag Nr. P-05), und Nature, 348, 730-735 (1990)]. Bevorzugte neue cyclische Peptide [I] der vorliegenden Erfindung binden nicht nur stark an ETA, sondern auch an ETB, um wie in den nachstehend beschriebenen Versuchsbeispielen gezeigt als Antagonist auf Endothelinrezeptoren zu wirken. Weiter besitzt eine gewisse Gruppe der neuen cyclischen Peptide [I] der vorliegenden Erfindung eine antagonistische Aktivität gegenüber NK2-Rezeptoren und außerdem gegenüber einem der Tachykininpeptidrezeptoren. Als Tachykininfamilie sind Substanz P, Neurokinin A und Neurokinin B bekannt [Y. Yokoto et al., J. Biol. Chem., 264, 17649 (1989); A. D. Hershey et al., Science, 247, 958 (1990); Y. Sasai et al., Biochem. Biophys. Res. Commun., 165, 695 (1989); R. Shigemoto et al., J. Biol. Chem., 265, 623 (1990), und A. Graham et al., Biochem. Biophys. Res. Commun., 177, 8 (1991)] und NK1, NK2 beziehungsweise NK3 sind als Rezeptoren der entsprechenden Liganden bekannt. Antagonisten gegenüber NK-Rezeptoren werden in der japanischen ungeprüften Patentveröffentlichung Nr. 2197/1991, 17098/1991 und 141295/1991 beschrieben. Die darin offenbarten Verbindungen unterscheiden sich jedoch von den cyclischen Hexapeptiden [I] der vorliegenden Erfindung in der Struktur.
  • Die cyclischen Peptide [I] der vorliegenden Erfindung besitzen die bemerkenswerte Wirkung des Unterdrückens der Vasopressor aktivität von Endothelin als Antagonisten gegenüber Endothelinrezeptoren und einige davon besitzen auch eine starke Aktivität als Antagonisten gegenüber NK2-Rezeptoren. Aus diesem Grund können die neuen cyclischen Peptide der vorliegenden Erfindung oder deren Salze als prophylaktische und therapeutische Wirkstoffe bei Bluthochdruck, Herz- oder Hirnkreislauferkrankungen (zum Beispiel Herzinfarkt), Nierenerkrankungen (zum Beispiel akute Niereninsuffizienz) und Asthma verwendet werden. Weiter können die cyclischen Peptide mit antagonistischer Aktivität gegenüber NK2-Rezeptoren außerdem als entzündungshemmende Wirkstoffe und Antarthritika verwendet werden.
  • Wenn die cyclischen Peptide der vorliegenden Erfindung als vorgenannte prophylaktische und therapeutische Wirkstoffe verwendet werden, können sie sicher oral oder parenteral in Form von Pulvern, Granulaten, Tabletten, Kapseln, Injektionen, Suppositorien, Salben oder Zubereitungen zur verzögerten Freisetzung allein oder in Kombination mit pharmazeutisch annehmbaren Trägern, Arzneimittelträgern oder Verdünnern verwendet werden. Die Peptide der vorliegenden Erfindung werden typischerweise parenteral, zum Beispiel durch intravenöse oder subkutane Injektion, intraventrikuläre oder intraspinale Verabreichung, nasotracheale Verabreichung oder intrarektale Verabreichung verabfolgt. In einigen Fällen werden sie jedoch oral verabreicht.
  • Die cyclischen Peptide der vorliegenden Erfindung sind im allgemeinen stabile Substanzen und können deshalb als physiologische Kochsalzlösung aufbewahrt werden. Es ist ferner möglich, die Peptide zu lyophilisieren, sie in Ampullen mit Mannit oder Sorbit auf zubewahren und sie in einem geeigneten Träger zum Zeitpunkt der Verwendung aufzulösen. Die cyclischen Peptide der vorliegenden Erfindung können in ihrer freien Form oder in Form von Basensalzen oder Säureadditionssalzen derselben verabfolgt werden. Alle freien cyclischen Peptide, deren Basensalze und Säureadditionssalze werden im allgemeinen in einer geeigneten Dosis innerhalb des Bereichs von 1 µg bis 100 mg freies Peptid je kg Gewicht verabfolgt. Obschon die Dosis genauer in Abhängigkeit vom Typ der zu behandelnden Erkrankung, dem Krankheitssymptom, dem Ziel, an das die Wirkstoffe verabfolgt werden und dem Verabreichungsweg abhängt, wenn sie an erwachsene Bluthochdruckpatienten verabfolgt werden, ist es zum Beispiel von Vorteil, daß die aktiven Bestandteile (die Peptide [I] oder pharmazeutisch annehmbaren Salze derselben) normalerweise in einer Dosis von 1 µg bis 100 mg/kg Gewicht, bevorzugter 100 µg bis 20 mg/kg Gewicht, am bevorzugtesten 1 mg bis 20 mg/kg Gewicht, einmal bis 3 Mal täglich verabfolgt werden. Bei einer Injektion werden die Peptide [I] üblicherweise intravenös verabfolgt. Eine Tropfinfusion ist ebenfalls wirkungsvoll. In diesem Fall ist die Gesamtdosis dieselbe wie bei der Injektion.
  • Wenn die cyclischen Peptide der vorliegenden Erfindung oder die pharmazeutisch annehmbaren Salze derselben als prophylaktische oder therapeutische Wirkstoffe verwendet werden, müssen sie sorgfältig gereinigt werden, um keine Bakterien und keine Pyrogene zu enthalten.
  • Die vorliegende Erfindung wird mit den folgenden Beispielen und Versuchsbeispielen genauer beschrieben, bei denen alle Aminosäurereste die L-Form annehmen, solange nicht anders angegeben, wenn die D- und L-Form möglich ist.
  • In den folgenden Beispielen wurde SILICAGEL 60F-254 (Merck) als Platten für die Dünnschichtchromatographie verwendet und Chloroform-Methanol (19:1) und Chloroform-Methanol-Essigsäure (9:1:0,5) wurden als Entwicklungslösungsmittel für Rf&sub1; beziehungsweise Rf&sub2; verwendet.
    • Beispiel 1 Herstellung von cyclo [-D-Asp-Ala-Asp-D-Leu-Leu-D-Trp-] (1) Herstellung von Boc-D-Leu-Leu-OBzl
  • H-Leu-OBzl pTos (21,6 g) wurde in DMF (100 ml) gelöst und die Lösung wurde mit Eis gekühlt. TEA (7,7 ml) und Boc-D-Leu-ONB [hergestellt aus Boc-D-Leu-OH H&sub2;O (12,5 g), HONB (9,86 g) und DCC (11,4 g)) wurden hinzugefügt, gefolgt vom Rühren über Nacht. Der sich daraus ergebende DCU wurde durch Filtration abgetrennt und das Filtrat wurde unter Erhalten eines Rückstandes eingeengt. Der Rückstand wurde in AcOEt gelöst und die sich daraus ergebende Lösung wurde mit 4% wäßrigem NaHCO&sub3; und 10% wäßriger Zitronensäure gewaschen. Nach dem Waschen mit Wasser wurde die Lösung mit Na&sub2;SO&sub4; getrocknet und eingeengt. Ether wurde dem sich daraus ergebenden Rückstand unter Abscheiden eines Niederschlages zugesetzt, der durch Filtration gesammelt wurde.
  • Ausbeute: 19,8 g (91,3%), Schmelzpunkt: 94-95ºC, Rf&sub2;: 0,76.
  • [α]D²&sup5; +3,6º (c = 1,06 in DMF)
  • Elementaranalyse als C&sub2;&sub4;H&sub3;&sub8;N&sub2;O&sub5;
  • Berechnet: C 66,33; H 8,81; N 6,45
  • Gefunden: C 66,38; H 8,87; N 6,53
    • (2) Herstellung von Boc-D-Leu-Leu-OPac
  • Boc-D-Leu-Leu-OBzl (6,0 9) wurde in Methanol (20 ml) gelöst und im Wasserstoffstrom unter Verwenden von 10% Pd-Kohle als Katalysator katalytisch reduziert. Nachdem der Katalysator durch Filtration abgetrennt worden war, wurde die Lösung unter Erhalten eines Rückstands eingeengt. Der Rückstand und Cs&sub2;CO&sub3; (2,1 g) wurden in 90% wäßrigem Methanol gelöst und die Lösung wurde eingeengt. Der sich daraus ergebende Rückstand wurde in DMF (60 ml) gelöst und Phenacylbromid (2,8 g) wurde hinzugefügt, gefolgt vom Rühren über Nacht. Das sich daraus ergebende TEA-Hydrochlorid wurde durch Filtration abgetrennt und das Filtrat wurde unter Erhalten eines Rückstands eingeengt. Der Rückstand wurde in AcOEt gelöst und die sich daraus ergebende Lösung wurde mit 4% wäßrigem NaHCO&sub3; und 10% wäßriger Zitronensäure gewaschen. Nach dem Waschen mit Wasser wurde die Lösung mit Na&sub2;SO&sub4; getrocknet und eingeengt. Ether wurde dem sich daraus ergebenden Rückstand unter Abscheiden eines Niederschlages zugesetzt, der durch Futration gesammelt wurde.
  • Ausbeute: 5,48 g (85,8%), Schmelzpunkt: 98-99ºC, Rf&sub2;: 0,66.
  • [α]D²&sup5; -3,9º (c = 1,09 in DMF)
  • Elementaranalyse als C&sub2;&sub5;H&sub3;&sub8;N&sub2;O&sub6;
  • Berechnet: C 64,91; H 8,28; N 6,06
  • Gefunden: C 65,21; H 8,54; N 6,24
    • (3) Herstellung von Boc-Asp(OBzl)-D-Leu-Leu-OPac
  • TFA (20 ml) wurde Boc-D-Leu-Leu-OPac (1,85 g) unter Lösen zugesetzt, gefolgt vom Einengen. 4% wäßriges NaHCO&sub3; wurde unter Einstellen des pH auf 9-10 hinzugesetzt und anschließend wurde eine Extraktion mittels AcOEt ausgeführt. Der Extrakt wurde mit Na&sub2;SO&sub4; getrocknet, eingeengt und getrocknet. Das sich daraus ergebende Produkt wurde in DMF (15 ml) gelöst und mit Eis gekühlt. Anschließend wurde TEA (0,56 ml) hinzugefügt. Boc- Asp(OBzl)-ONB [hergestellt aus Boc-Asp(OBzl)-OH (1,42 g), HONB (0,86 g) und DCC (0,99 g)] wurde hinzugesetzt, gefolgt vom Rühren über Nacht. Das sich daraus ergebende unlösliche Material wurde durch Filtration abgetrennt, gefolgt vom Einengen. Der Rückstand wurde in AcOEt gelöst und die Lösung wurde mit Wasser, 10% wäßriger Zitronensäure und 4% wäßrigem NaHCO&sub3; gewaschen. Nach dem Waschen mit Wasser wurde die Lösung mit Na&sub2;SO&sub4; getrocknet und eingeengt. Dem sich daraus ergebenden Rückstand wurde Ether unter Abscheiden eines Niederschlages zugesetzt, der durch Filtration gesammelt wurde.
  • Ausbeute: 2,31 g (86,5%), Schmelzpunkt: 119-121ºC, Rf&sub1;: 0,57, Rf&sub2;: 0,79.
  • [α]D²&sup8; -40,8º (c = 0,93 in DMF)
  • Elementaranalyse: als C&sub3;&sub6;H&sub4;&sub9;N&sub3;O&sub9;
  • Berechnet: C 64,75; H 7,40; N 6,29
  • Gefunden: C 64,73; H 7,41; N 6,45
    • (4) Herstellung von Boc-Ala-Asp(OBzl)-D-Leu-Leu-OPac
  • TFA (20 ml) wurde Boc-Asp(OBzl)-D-Leu-Leu-OPac (2,14 g) unter Lösen zugesetzt, gefolgt vom Einengen. 8 N HCl/Dioxan (1,00 ml) wurde hinzugesetzt und unter Ausfällen von Kristallen wurde Ether hinzugesetzt. Die Kristalle wurden durch Filtration abgetrennt und getrocknet. Das sich daraus ergebende Produkt wurde in DMF (15 ml) gelöst und mit Eis gekühlt. Anschließend wurde TEA (0,90 ml) hinzugefügt. Boc-Ala-ONB [hergestellt aus Boc-Ala- OH (0,61 g), HONB (0,63 g) und DCC (0,73 g)] wurde hinzugesetzt, gefolgt vom Rühren über Nacht. Das sich daraus ergebende unlösliche Material wurde durch Filtration abgetrennt, gefolgt vom Einengen. Der Rückstand wurde in AcOEt gelöst und die Lösung wurde mit Wasser, 10% wäßriger Zitronensäure und 4% wäßrigem NaHCO&sub3; gewaschen. Nach dem Waschen mit Wasser wurde die Lösung mit Na&sub2;SO&sub4; getrocknet und eingeengt. Ether wurde dem sich daraus ergebenden Rückstand unter Abscheiden eines Niederschlages zugesetzt, der durch Filtration gesammelt wurde.
  • Ausbeute: 2,28 9 (96,4%), Schmelzpunkt: 132-133ºC, Rf&sub1;: 0,34, Rf&sub2;: 0,66.
  • [α]D²&sup8; -46,6º (c = 0,76 in DMF)
  • Elementaranalyse: als C&sub3;&sub9;H&sub5;&sub4;N&sub4;O&sub1;&sub0;
  • Berechnet: C 63,40; H 7,37; N 7,58
  • Gefunden: C 63,15; H 7,44; N 7,66
    • (5) Herstellung von Boc-D-Asp(OBzl)-Ala-Asp(OBzl)-D-Leu-Leu- OPac
  • TFA (20 ml) wurde Boc-Ala-Asp(OBzl)-D-Leu-Leu-OPac (1,77 g) unter Lösen zugesetzt, gefolgt vom Einengen. 8 N HCl/Dioxan (0,75 ml) wurde hinzugesetzt und unter Ausfällen von Kristallen wurde Ether hinzugesetzt. Die Kristalle wurden durch Filtration abgetrennt und getrocknet. Das sich daraus ergebende Produkt wurde in DMF (15 ml) gelöst und mit Eis gekühlt. Anschließend wurde TEA (0,67 ml) hinzugefügt. Boc-D-Asp(OBzl)-ONB [hergestellt aus Boc-D-Asp(OBzl)-OH (0,85 g), HONB (0,51 g) und DCC (0,60 g)] wurde hinzugesetzt, gefolgt vom Rühren über Nacht. Das sich daraus ergebende unlösliche Material wurde durch Filtration abgetrennt, gefolgt vom Einengen. Der Rückstand wurde in AcOEt gelöst und die Lösung wurde mit Wasser, 10% wäßriger Zitronensäure und 4% wäßrigem NaHCO&sub3; gewaschen. Nach dem Waschen mit Wasser wurde die Lösung mit Na&sub2;SO&sub4; getrocknet und eingeengt. Ether wurde dem sich daraus ergebenden Rückstand unter Abscheiden eines Niederschlages zugesetzt, der durch Filtration gesammelt wurde.
  • Ausbeute: 2,08 g (91,8%), Schmelzpunkt: 92-94ºC, Rf&sub1;: 0,38, Rf&sub2;: 0,70.
  • [α]D²&sup8; -21,0º (c = 0,64 in DMF)
  • Elementaranalyse als C&sub5;&sub0;H&sub6;&sub5;N&sub5;O&sub1;&sub3;
  • Berechnet: C 63,61; H 6,94; N 7,42
  • Gefunden: C 63,33; H 6,98; N 7,52
    • (6) Herstellung von Boc-D-Trp-D-Asp(OBzl)-Ala-Asp(OBzl)-D-Leu- Leu-OPac
  • TFA (20 ml) wurde Boc-D-Asp(OBzl)-Ala-Asp(OBzl)-D-Leu-Leu-OPac (1,60 g) unter Lösen zugesetzt, gefolgt vom Einengen. 8 N HCl/Dioxan (0,53 ml) wurde hinzugesetzt und unter Ausfällen von Kristallen wurde Ether hinzugesetzt. Die Kristalle wurden durch Filtration abgetrennt und getrocknet. Das sich daraus ergebende Produkt wurde in DMF (15 ml) gelöst und mit Eis gekühlt. Anschließend wurde TEA (0,48 ml) hinzugefügt. Boc-D-Trp-ONB [hergestellt aus Boc-D-Trp-OH (0,57 g), HONB (0,37 g) und DCC (0,42 g)] wurde hinzugesetzt, gefolgt vom Rühren über Nacht. Das sich daraus ergebende unlösliche Material wurde durch Filtration abgetrennt, gefolgt vom Einengen. Der Rückstand wurde in AcOEt gelöst und die Lösung wurde mit Wasser, 10% wäßriger Zitronensäure und 4% wäßrigem NaHCO&sub3; gewaschen. Nach dem Waschen mit Wasser wurde die Lösung mit Na&sub2;SO&sub4; getrocknet und eingeengt. Ether wurde dem sich daraus ergebenden Rückstand unter Abscheiden eines Niederschlages zugesetzt, der durch Filtration gesammelt wurde.
  • Ausbeute: 1,61 g (83,8%), Schmelzpunkt: 160-162ºC, Rf&sub1;: 0,35, Rf&sub2;: 0,68.
  • [α]D²&sup8; +17,5º (c = 0,71 in DMF)
  • Elementaranalyse: als C&sub6;&sub1;H&sub7;&sub5;N&sub7;O&sub1;&sub4;
  • Berechnet: C 64,82; H 6,69; N 8,67
  • Gefunden: C 64,70; H 6,72; N 8,81
    • (7) Herstellung von Boc-D-Trp-D-Asp(OBzl)-Ala-Asp(Bozl)-D-Leu- Leu-OH
  • Boc-D-Trp-D-Asp(OBzl)-Ala-Asp(OBzl)-D-Leu-Leu-OPac (1,47 g) wurde in 90% wäßriger AcOH (20 ml) gelöst und Zn-Pulver (4,26 g) wurde hinzugesetzt, gefolgt von 3 Stunden Rühren. Das Zn-Pulver wurde durch Filtration abgetrennt und das Filtrat wurde eingeengt. AcOEt wurde dem Rückstand unter Lösen zugesetzt und die Lösung wurde mit 10% wäßriger Zitronensäure gewaschen. Nach dem Waschen mit Wasser wurde die Lösung mit Na&sub2;SO&sub4; getrocknet und eingeengt. Dem sich daraus ergebenden Rückstand wurde Ether unter Abscheiden eines Niederschlages zugesetzt, der durch Filtration gesammelt wurde.
  • Ausbeute: 1,23 g (93,5%), Schmelzpunkt: 195-196ºC, Rf&sub1;: 0,14, Rf&sub2;: 0,67.
  • [α]D²&sup8; +27,1º (c = 0,65 in DMF)
  • Elementaranalyse als C&sub5;&sub3;H&sub6;&sub9;N&sub7;O&sub1;&sub3;
  • Berechnet: C 62,89; H 6,87; N 9,69
  • Gefunden: C 63,02; H 6,57; N 9,68
    • (8) Herstellung von cyclo[-D-Asp-Ala-Asp-D-Leu-Leu-D-Trp-]
  • Boc-D-Trp-D-Asp(OBzl)-Ala-Asp(OBzl)-D-Leu-Leu-OH (0,51 g) wurde in DCM (20 ml) gelost und die Lösung wurde mit Eis gekühlt. HONB (0,18 g) und DCC (0,21 g) wurden hinzugesetzt, gefolgt von 3 Stunden Rühren. Anschließend wurde der sich daraus ergebende DCU durch Filtration abgetrennt, gefolgt vom Einengen, und dem Rückstand wurde Ether unter Abscheiden eines Niederschlages zugesetzt, der durch Filtration gesammelt wurde. Ethandithiol (0,09 ml) und 8 N HCl/Dioxan (20 ml) wurden zum Lösen des Niederschlages unter Eiskühlung hinzugesetzt. Die sich daraus ergebende Lösung wurde 10 Minuten gerührt und eingeengt. Anschließend wurde dem Rückstand Ether unter Abscheiden eines Niederschlages zugesetzt, der durch Filtration gesammelt und getrocknet wurde. Der Niederschlag wurde in DMF (10 ml) gelöst und die sich daraus ergebende Lösung wurde während 30 Minuten tropfenweise TEA (0,7 ml) enthaltendem DMF (90 ml) zugesetzt, gefolgt vom Rühren über Nacht und Einengen. Dem sich daraus ergebenden Rückstand wurde Acetonitril unter Abscheiden eines Niederschlages zugesetzt, der durch Filtration gesammelt und getrocknet wurde. 89 mg dieses Niederschlages wurden in DMF (15 ml) gelöst und im Wasserstoffstrom unter Verwenden von Palladiumschwarz als Katalysator katalytisch reduziert. Der Katalysator wurde durch Filtration abgetrennt und das Filtrat wurde eingeengt. Der sich daraus ergebende Rückstand wurde in einer geringen Menge AcOH gelöst und anschließend wurde zum Ausführen der Lyophilisierung Wasser hinzugesetzt. Das lyophilisisierte Produkt wurde schließlich durch Flüssigkeitschromatographie mittels einer YMC-D-ODS- 5-Säule (2 cm x 25 cm) (Y.M.C.) unter Erhalten des gewünschten Materials gereinigt. Die Ausbeute war 13,6 mg (18,2%).
  • Aminosäurenanal. [6 N HCl, 110ºC, 24 Stunden Hydrolyse; die Zahlen in Klammern zeigen die theoretischen Werte): Asp 2,00 (2), Ala 1,06 (1), Leu 2,11 (2).
  • LSIMS (M + H&spplus;) = 714, (theoretischer Wert) = 714
    • Beispiel 2 Herstellung von cyclo [-D-Asp-Ala-D-Asp-D-Leu-Leu-D-Trp-] (1) Herstellung von Boc-D-Asp(OBzl)-D-Leu-Leu-OPac
  • TFA (20 ml) wurde in Beispiel 1 (2) hergestelltem Boc-D-Leu-Leu- OPac (1,85 g) unter Lösen zugesetzt, gefolgt vom Einengen. 4% wäßriges NaHCO&sub3; wurde zum Einstellen des pH auf 9-10 hinzugesetzt und anschließend wurde unter Verwenden von AcOET eine Extraktion ausgeführt. Der Extrakt wurde mit Na&sub2;SO&sub4; getrocknet und eingeengt. Das sich daraus ergebende Produkt wurde in DMF (15 ml) gelöst und mit Eis gekühlt. Anschließend wurde TEA (0,56 ml) hinzugesetzt. Boc-D-Asp(OBzl)-ONB [hergestellt aus Boc-D- Asp(OBzl)-OH (1,42 g), HONB (0,86 g) und DCC (0,99 g)] wurde hinzugesetzt, gefolgt vom Rühren über Nacht. Das sich daraus ergebende unlösliche Material wurde durch Filtration abgetrennt, gefolgt vom Einengen. Der Rückstand wurde in AcOEt gelöst und die Lösung wurde mit Wasser, 10% wäßriger Zitronensäure und 4% wäßrigem NaHCO&sub3; gewaschen. Nach dem Waschen mit Wasser wurde die Lösung mit Na&sub2;SO&sub4; getrocknet und eingeengt. Ether wurde dem sich daraus ergebenden Rückstand unter Abscheiden eines Niederschlages zugesetzt, der durch Filtration gesammelt wurde.
  • Ausbeute: 2,58 g (96,4%), Schmelzpunkt: 113-114ºC, Rf&sub1;: 0,51, Rf&sub2;: 0,75.
  • [α]D²&sup8; +14,2º (c = 1,23 in DMF)
  • Elementaranalyse als C&sub3;&sub6;H&sub4;&sub9;N&sub3;O&sub9;
  • Berechnet: C 64,75; H 7,40; N 6,29
  • Gefunden: C 64,78; H 7,50; N 6,47
    • (2) Herstellung von Boc-Ala-D-Asp(OBzl)-D-Leu-Leu-OPac
  • TFA (20 ml) wurde Boc-D-Asp(OBzl)-D-Leu-Leu-OPac (2,14 g) unter Lösen zugesetzt, gefolgt vom Einengen. 8 N HCl/Dioxan (1,00 ml) wurde hinzugesetzt und unter Ausfällen von Kristallen wurde Ether hinzugesetzt. Die Kristalle wurden durch Filtration abgetrennt und getrocknet. Das sich daraus ergebende Produkt wurde in DMF (15 ml) gelöst und mit Eis gekühlt. Anschließend wurde TEA (0,90 ml) hinzugefügt. Boc-Ala-ONB [hergestellt aus Boc-Ala- OH (0,61 g), HONB (0,63 g) und DCC (0,73 g)] wurde hinzugesetzt, gefolgt vom Rühren über Nacht. Das sich daraus ergebende unlösliche Material wurde durch Filtration abgetrennt, gefolgt vom Einengen. Der Rückstand wurde in AcOEt gelöst und die Lösung wurde mit Wasser, 10% wäßriger Zitronensäure und 4% wäßrigem NaHCO&sub3; gewaschen. Nach dem Waschen mit Wasser wurde die Lösung mit Na&sub2;SO&sub4; getrocknet und eingeengt. Ether wurde dem sich daraus ergebenden Rückstand unter Abscheiden eines Niederschlages zugesetzt, der durch Filtration gesammelt wurde.
  • Ausbeute: 2,08 g (88,0%), Schmelzpunkt: 167-168ºC, Rf&sub1;: 0,36, Rf&sub2;: 0,67.
  • [α]D²&sup8; +5,99º (c = 0,94 in DMF)
  • Elementaranalyse als C&sub3;&sub9;H&sub5;&sub4;N&sub4;O&sub1;&sub0;
  • Berechnet: C 63,40; H 7,37; N 7,58
  • Gefunden: C 63,32; H 7,47; N 7,74
    • (3) Herstellung von Boc-D-Asp(OBzl)-Ala-D-Asp(Bozl)-D-Leu-Leu- OPac
  • TFA (20 ml) wurde Boc-Ala-D-Asp(OBzl)-D-Leu-Leu-OPac (1,77 g) unter Lösen zugesetzt, gefolgt vom Einengen. 8 N HCl/Dioxan (0,75 ml) wurde hinzugesetzt ünd unter Ausfällen von Kristallen wurde Ether hinzugesetzt. Die Kristalle wurden durch Filtration abgetrennt und getrocknet. Das sich daraus ergebende Produkt wurde in DMF (15 ml) gelöst und mit Eis gekühlt. Anschließend wurde TEA (0,67 ml) hinzugefügt. Boc-D-Asp(OBzl)-ONB [hergestellt aus Boc-D-Asp(OBzl)-OH (0,85 g), HONB (0,51 g) und DCC (0,60 g)] wurde hinzugesetzt, gefolgt vom Rühren über Nacht. Das sich daraus ergebende unlösliche Material wurde durch Filtration abgetrennt, gefolgt vom Einengen. Der Rückstand wurde in AcOEt gelöst und die Lösung wurde mit Wasser, 10% wäßriger Zitronensäure und 4% wäßrigem NaHCO&sub3; gewaschen. Nach dem Waschen mit Wasser wurde die Lösung mit Na&sub2;SO&sub4; getrocknet und eingeengt. Ether wurde dem sich daraus ergebenden Rückstand unter Abscheiden eines Niederschlages zugesetzt, der durch Filtration gesammelt wurde.
  • Ausbeute: 1,79 g (79,0%), Schmelzpunkt: 120-121ºC, Rf&sub1;: 0,37, Rf&sub2;: 0,70.
  • [α]D²&sup8; +34,2º (c = 0,85 in DMF)
  • Elementaranalyse als C&sub5;&sub0;H&sub6;&sub5;N&sub5;O&sub1;&sub3;
  • Berechnet: C 63,61; H 6,94; N 7,42
  • Gefunden: C 63,70; H 6,89; N 7,63
    • (4) Herstellung von Boc-D-Trp-D-Asp(OBzl)-Ala-D-Asp(BOzl)-D- Leu-Leu-OPac
  • TFA (20 ml) wurde Boc-D-Asp(OBzl)-Ala-D-Asp(OBzl)-D-Leu-Leu-OPac (1,60 9) unter Lösen zugesetzt, gefolgt vom Einengen. 8 N HCl/Dioxan (0,53 ml) wurde hinzugesetzt und unter Ausfällen von Kristallen wurde Ether hinzugesetzt. Die Kristalle wurden durch Filtration abgetrennt und getrocknet. Das sich daraus ergebende Produkt wurde in DMF (15 ml) gelöst und mit Eis gekühlt. Anschließend wurde TEA (0,48 ml) hinzugefügt. Boc-D-Trp-ONB [hergestellt aus Boc-D-Trp-OH (0,57 9), HONB (0,37 g) und DCC (0,42 g)] wurde hinzugesetzt, gefolgt vom Rühren über Nacht. Das sich daraus ergebende unlösliche Material wurde durch Filtration abgetrennt, gefolgt vom Einengen. Der Rückstand wurde in AcOEt gelöst und die Lösung wurde mit Wasser, 10% wäßriger Zitronensäure und 4% wäßrigem NaHCO&sub3; gewaschen. Nach dem Waschen mit Wasser wurde die Lösung mit Na&sub2;SO&sub4; getrocknet und eingeengt. Ether wurde dem sich daraus ergebenden Rückstand unter Abscheiden eines Niederschlages zugesetzt, der durch Filtration gesammelt wurde.
  • Ausbeute: 1,62 g (84,3%), Schmelzpunkt: 178-179ºC, Rf&sub1;: 0,37, Rf&sub2;: 0,69.
  • [α]D²&sup8; +41,1º (c = 0,84 in DMF)
  • Elementaranalyse: als C&sub6;&sub1;H&sub7;&sub5;N&sub7;O&sub1;&sub4;
  • Berechnet: C 64,82; H 6,69; N 8,67
  • Gefunden: C 64,69; H 6,74; N 8,88
    • (5) Herstellung von Boc-D-Trp-D-Asp(OBzl)-Ala-D-Asp(BOzl)-D- Leu-Leu-OH
  • Boc-D-Trp-D-Asp(OBzl)-Ala-D-Asp(BOzl)-D-Leu-Leu-OPac (1,47 g) wurde in 90% wäßriger AcOH (20 ml) gelöst und Zn-Pulver (4,26 g) wurde hinzugesetzt, gefolgt von 3 Stunden Rühren. Das Zn-Pulver wurde durch Filtration abgetrennt und das Filtrat wurde eingeengt. Dem Rückstand wurde zum Lösen AcOEt zugesetzt und die Lösung wurde mit 10% wäßriger Zitronensäure gewaschen. Nach dem Waschen mit Wasser wurde die Lösung mit Na&sub2;SO&sub4; getrocknet und eingeengt. Dem sich daraus ergebenden Rückstand wurde Ether unter Abscheiden eines Niederschlages zugesetzt, der durch Filtration gesammelt wurde.
  • Ausbeute: 1,23 g (93,5%), Schmelzpunkt: 165-166ºC, Rf&sub1;: 0,17, Rf&sub2;: 0,67.
  • [α]D²&sup8; +54,5º (c = 1,05 in DMF)
  • Elementaranalyse als C&sub5;&sub3;H&sub6;&sub9;N&sub7;O&sub1;&sub3;
  • Berechnet: C 62,89; H 6,87; N 9,69
  • Gefunden: C 62,59; H 7,05; N 9,63
    • (6) Herstellung von cyclo[-D-ASP-Ala-D-Asp-D-Leu-Leu-D-Trp-]
  • Boc-D-Trp-D-Asp(OBzl)-Ala-D-Asp(BOzl)-D-Leu-Leu-OH (0,51 g) wurde in DCM (20 ml) gelöst und die Lösung wurde mit Eis gekühlt. HONB (0,18 g) und DCC (0,21 g) wurden hinzugesetzt, gefolgt von 3 Stunden Rühren. Anschließend wurde der sich daraus ergebende DCU durch Filtration abgetrennt, gefolgt vom Einengen, und dem Rückstand wurde Ether unter Abscheiden eines Niederschlages zugesetzt, der durch Filtration gesammelt wurde. Ethandithiol (0,09 ml) und 8 N HCl/Dioxan (20 ml) wurden unter Eiskühlung zum Lösen des Niederschlages hinzugesetzt. Die sich daraus ergebende Lösung wurde 10 Minuten gerührt und eingeengt. Anschließend wurde dem Rückstand Ether unter Abscheiden eines Niederschlages zugesetzt, der durch Filtration gesammelt und getrocknet wurde. Der Niederschlag wurde in DMF (10 ml) gelöst und die sich daraus ergebende Lösung wurde während 30 Minuten tropfenweise TEA (0,7 ml) enthaltendem DMF (90 ml) zugesetzt, gefolgt vom Rühren über Nacht und Einengen. Dem sich daraus ergebenden Rückstand wurde Acetonitril unter Abscheiden eines Niederschlages zugesetzt, der durch Filtration gesammelt und getrocknet wurde. 89 mg dieses Niederschlages wurden in DMF (15 ml) gelöst und im Wasserstoffstrom unter Verwenden von Palladiumschwarz als Katalysator katalytisch reduziert. Der Katalysator wurde durch Filtration abgetrennt und das Filtrat wurde eingeengt. Der sich daraus ergebende Rückstand wurde in einer geringen Menge AcOH gelöst und anschließend wurde zum Ausführen der Lyophilisierung Wasser hinzusetzt. Das lyophilisisierte Produkt wurde schließlich durch Flüssigkeitschromatographie mittels einer YMC-D-ODS-5-Säule (2 cm x 25 cm) (Y.M.C.) unter Erhalten des gewünschten Materials gereinigt. Die Ausbeute war 23,4 mg (15,3%).
  • Aminosäurenanal. [6 N HCl, 110ºC, 24 Stunden Hydrolyse; die Zahlen in Klammern zeigen die theoretischen Werte]: Asp 2,00 (2), Ala 1,04 (1), Leu 2,07 (2).
  • LSIMS (M + H&spplus;) 714, (theoretischer Wert) = 714
    • Beispiel 3 Herstellung von cyclo [-D-Asp-Ala-Glu-D-Leu-Leu-D-Trp-] (1) Herstellung von Boc-Glu(OBzl)-D-Leu-Leu-OPac
  • TFA (20 ml) wurde in Beispiel 1 (2) hergestelltem Boc-D-Leu-Leu- OPac (1,85 g) unter Lösen zugesetzt, gefolgt vom Einengen. 4% wäßriges NaHCO&sub3; wurde zum Einstellen des pH auf 9-10 hinzugesetzt und anschließend wurde mittels AcOEt eine Extraktion ausgeführt. Der Extrakt wurde mit Na&sub2;SO&sub4; getrocknet und eingeengt. Das sich daraus ergebende Produkt wurde in DMF (15 ml) gelöst und mit Eis gekühlt. Anschließend wurde TEA (0,56 ml) hinzugefügt. Boc- Glu(OBzl)-ONB [hergestellt aus Boc-Glu(OBzl)-OH (1,48 g), HONB (0,86 g) und DCC (0,99 g)] wurde hinzugesetzt, gefolgt vom Rühren über Nacht. Das sich daraus ergebende unlösliche Material wurde durch Filtration abgetrennt, gefolgt vom Einengen. Der Rückstand wurde in AcOEt gelöst und die Lösung wurde mit Wasser, 10% wäßriger Zitronensäure und 4% wäßrigem NaHCO&sub3; gewaschen. Nach dem Waschen mit Wasser wurde die Lösung mit Na&sub2;SO&sub4; getrocknet und eingeengt. Ether wurde dem sich daraus ergebenden Rückstand unter Abscheiden eines Niederschlages zugesetzt, der durch Filtration gesammelt wurde.
  • Ausbeute: 2,04 g (74,5%), Schmelzpunkt: 118-120ºC, Rf&sub1;: 0,41, Rf&sub2;: 0,71.
  • [α]D²&sup8; -23,8º (c = 0,84 in DMF)
  • Elementaranalyse als C&sub3;&sub7;H&sub5;&sub1;N&sub3;O&sub9;
  • Berechnet: C 65,18; H 7,54; N 6,16
  • Gefunden: C 65,20; H 7,73; N 6,34
    • (2) Herstellung von Boc-Ala-Glu(OBzl)-D-Leu-Leu-OPac
  • TFA (20 ml) wurde Boc-Glu(OBzl)-D-Leu-Leu-OPac (1,91 g) unter Lösen zugesetzt, gefolgt vom Einengen. 8 N HCl/Dioxan (0,88 ml) wurde hinzugesetzt und unter Ausfällen von Kristallen wurde Ether hinzugesetzt. Die Kristalle wurden durch Filtration abgetrennt und getrocknet. Das sich daraus ergebende Produkt wurde in DMF (15 ml) gelöst und mit Eis gekühlt. Anschließend wurde TEA (0,90 ml) hinzugefügt. Boc-Ala-ONB [hergestellt aus Boc-Ala- OH (0,53 g), HONB (0,55 g) und DCC (0,64 g)] wurde hinzugesetzt, gefolgt vom Rühren über Nacht. Das sich daraus ergebende unlösliche Material wurde durch Filtration abgetrennt, gefolgt vom Einengen. Der Rückstand wurde in AcOEt gelöst und die Lösung wurde mit Wasser, 10% wäßriger Zitronensäure und 4% wäßrigem NaHCO&sub3; gewaschen. Nach dem Waschen mit Wasser wurde die Lösung mit Na&sub2;SO&sub4; getrocknet und eingeengt. Ether wurde dem sich daraus ergebenden Rückstand unter Abscheiden eines Niederschlages zugesetzt, der durch Filtration gesammelt wurde.
  • Ausbeute: 2,00 g (94,9%), Schmelzpunkt: 129-130ºC, Rf&sub1;: 0,36, Rf&sub2;: 0,67.
  • [α]D²&sup8; -32,9º (c = 1,03 in DMF)
  • Elementaranalyse als C&sub4;&sub0;H&sub5;&sub6;N&sub4;O&sub1;&sub0;
  • Berechnet: C 63,81; H 7,50; N 7,44
  • Gefunden: C 63,70; H 7,55; N 7,62
    • (3) Herstellung von Boc-D-Asp(OBzl)-Ala-Glu(OBzl)-D-Leu-Leu- OPac
  • TFA (20 ml) wurde Boc-Ala-Glu(OBzl)-D-Leu-Leu-OPac (1,81 g) unter Lösen zugesetzt, gefolgt vom Einengen. 8 N HCl/Dioxan (0,75 ml) wurde hinzugesetzt und unter Ausfällen von Kristallen wurde Ether hinzugesetzt. Die Kristalle wurden durch Filtration abgetrennt und getrocknet. Das sich daraus ergebende Produkt wurde in DMF (15 ml) gelöst und mit Eis gekühlt. Anschließend wurde TEA (0,67 ml) hinzugefügt. Boc-D-Asp(OBzl)-ONB [hergestellt aus Boc-D-Asp(OBzl)-OH (0,85 g), HONB (0,51 g) und DCC (0,60 g)] wurde hinzugesetzt, gefolgt vom Rühren über Nacht. Das sich daraus ergebende unlösliche Material wurde durch Filtration abgetrennt, gefolgt vom Einengen. Der Rückstand wurde in AcOEt gelöst und die Lösung wurde mit Wasser, 10% wäßriger Zitronensäure und 4% wäßrigem NaHCO&sub3; gewaschen. Nach dem Waschen mit Wasser wurde die Lösung mit Na&sub2;SO&sub4; getrocknet und eingeengt. Ether wurde dem sich daraus ergebenden Rückstand unter Abscheiden eines Niederschlages zugesetzt, der durch Filtration gesammelt wurde.
  • Ausbeute: 2,07 g (90,0%), Schmelzpunkt: 149-151ºC, Rf&sub1;: 0,34, Rf&sub2;: 0,69.
  • [α]D²&sup8; +3,00º (c = 1,14 in DMF)
  • Elementaranalyse als C&sub5;&sub1;H&sub6;&sub7;N&sub5;O&sub1;&sub3;
  • Berechnet: C 63,93; H 7,05; N 7,31
  • Gefunden: C 64,01; H 7,11; N 7,48
    • (4) Herstellung von Boc-D-Trp-D-Asp(OBzl)-Ala-Glu(Bozl)-D-Leu- Leu-OPac
  • TFA (20 ml) wurde Boc-D-Asp(OBzl)-Ala-Glu(OBzl)-D-Leu-Leu-OPac (1,63 g) unter Lösen zugesetzt, gefolgt vom Einengen. 8 N HCl/Dioxan (0,53 ml) wurde hinzugesetzt und unter Ausfällen von Kristallen wurde Ether hinzugesetzt. Die Kristalle wurden durch Filtration abgetrennt und getrocknet. Das sich daraus ergebende Produkt wurde in DMF (15 ml) gelöst und mit Eis gekühlt. Anschließend wurde TEA (0,48 ml) hinzugefügt. Boc-D-Trp-ONB [hergestellt aus Boc-D-Trp-OH (0,57 g), HONB (0,37 g) und DCC (0,42 g)] wurde hinzugesetzt, gefolgt vom Rühren über Nacht. Das sich daraus ergebende unlösliche Material wurde durch Filtration abgetrennt, gefolgt vom Einengen. Der Rückstand wurde in AcOEt gelöst und die Lösung wurde mit Wasser, 10% wäßriger Zitronensäure und 4% wäßrigem NaHCO&sub3; gewaschen. Nach dem Waschen mit Wasser wurde die Lösung mit Na&sub2;SO&sub4; getrocknet und eingeengt. Ether wurde dem sich daraus ergebenden Rückstand unter Abscheiden eines Niederschlages zugesetzt, der durch Filtration gesammelt wurde.
  • Ausbeute: 1,91 g (98,2%), Schmelzpunkt: 172-174ºC, Rf&sub1;: 0,37, Rf&sub2;: 0,69.
  • [α]D²&sup8; +28,8º (c = 0,68 in DMF)
  • Elementaranalyse als C&sub6;&sub2;H&sub7;&sub7;N&sub7;O&sub1;&sub4;
  • Berechnet: C 65,08; H 6,78; N 8,57
  • Gefunden: C 64,84; H 6,83; N 8,80
    • (5) Herstellung von Boc-D-Trp-D-Asp(OBzl)-Ala-Glu(BOzl)-D-Leu- Leu-OH
  • Boc-D-Trp-D-Asp(OBzl)-Ala-Glu(BOzl)-D-Leu-Leu-OPac (1,49 g) wurde in 90% wäßriger AcOH (20 ml) gelöst und Zn-Pulver (4,26 g) wurde hinzugesetzt, gefolgt von 3 Stunden Rühren. Das Zn-Pulver wurde durch Filtration abgetrennt und das Filtrat wurde eingeengt. Dem Rückstand wurde zum Lösen AcOEt zugesetzt und die Lösung wurde mit 10% wäßriger Zitronensäure gewaschen. Nach dem Waschen mit Wasser wurde die Lösung mit Na&sub2;SO&sub4; getrocknet und eingeengt. Dem sich daraus ergebenden Rückstand wurde Ether unter Abscheiden eines Niederschlages zugesetzt, der durch Filtration gesammelt wurde.
  • Ausbeute: 1,30 g (97,5%), Schmelzpunkt: 192-194ºC, Rf&sub1;: 0,12, Rf&sub2;: 0,66.
  • [α]D²&sup8; +37,7º (c = 0,92 in DMF)
  • Elementaranalyse als C&sub5;&sub4;H&sub7;&sub1;N&sub7;O&sub1;&sub3;
  • Berechnet: C 63,20; H 6,97; N 9,55
  • Gefunden: C 63,02; H 6,96; N 9,63
    • (6) Herstellung von cyclo[-D-Asp-Ala-Glu-D-Leu-Leu-D-Trp-]
  • Boc-D-Trp-D-Asp(OBzl)-Ala-Glu(OBzl)-D-Leu-Leu-OH (0,51 g) wurde in DCM (20 ml) gelöst und die Lösung wurde mit Eis gekühlt. HONB (0,18 g) und DCC (0,21 9) wurden hinzugesetzt, gefolgt von 3 Stunden Rühren. Anschließend wurde der sich daraus ergebende DCU durch Filtration abgetrennt, gefolgt vom Einengen, und dem Rückstand wurde Ether unter Abscheiden eines Niederschlages zugesetzt, der durch Filtration gesammelt wurde. Ethandithiol (0,09 ml) und 8 N HCl/Dioxan (20 ml) wurden zum Lösen des Niederschlages unter Eiskühlung hinzugesetzt. Die sich daraus ergebende Lösung wurde 10 Minuten gerührt und eingeengt. Anschließend wurde dem Rückstand Ether unter Abscheiden eines Niederschlages zugesetzt, der durch Filtration gesammelt und getrocknet wurde. Der Niederschlag wurde in DMF (10 ml) gelöst und die sich daraus ergebende Lösung wurde während 30 Minuten tropfenweise TEA (0,7 ml) enthaltendem DMF (90 ml) zugesetzt, gefolgt vom Rühren über Nacht und Einengen. Dem sich daraus ergebenden Rückstand wurde Acetonitril unter Abscheiden eines Niederschlages zugesetzt, der durch Filtration gesammelt und getrocknet wurde. 91 mg dieses Niederschlages wurden in DMF (15 ml) gelöst und im Wasserstoffstrom unter Verwenden von Palladiumschwarz als Katalysator katalytisch reduziert. Der Katalysator wurde durch Filtration abgetrennt und das Filtrat wurde eingeengt. Der sich daraus ergebende Rückstand wurde in einer geringen Menge AcOH gelöst und anschließend wurde zum Ausführen der Lyophilisierung Wasser hinzugesetzt. Das lyophilisierte Produkt wurde schließlich durch Flüssigkeitschromatographie mittels einer YMC-D-ODS- 5-Säule (2 cm x 25 cm) (Y.M.C.) unter Erhalten des gewünschten Materials gereinigt. Die Ausbeute war 17,7 mg (24,1%).
  • Aminosäurenanal. [6 N HCl, 110ºC, 24 Stunden Hydrolyse; die Zahlen in Klammern zeigen die theoretischen Werte]: Asp 1,00 (1), Glu 1,04 (1), Ala 1,05 (1), Leu 2,07 (2).
  • LSIMS (M + H&spplus;) 728, (theoretischer Wert) = 728
    • Beispiel 4 Herstellung von cyclo[-D-Asp-Ala-D-Glu-D-Leu-Leu-D-Trp-] (1) Herstellung von Boc-D-Glu(OBzl)-D-Leu-Leu-OPac
  • TFA (20 ml) wurde in Beispiel 1 (2) hergestelltem Boc-D-Leu-Leu- OPac (1,85 g) unter Lösen zugesetzt, gefolgt vom Einengen. 4% wäßriges NaHCO&sub3; wurde zum Einstellen des pH auf 9-10 hinzugesetzt und anschließend wurde mittels AcOEt eine Extraktion ausgeführt. Der Extrakt wurde mit Na&sub2;SO&sub4; getrocknet und eingeengt. Das sich daraus ergebende Produkt wurde in DMF (15 ml) gelöst und mit Eis gekühlt. Anschließend wurde TEA (0,56 ml) hinzugefügt. Boc-D- Glu(OBzl)-ONB [hergestellt aus Boc-D-Glu(OBzl)-OH (1,489), HONB (0,86 g) und DCC (0,99 g)] wurde hinzugesetzt, gefolgt vom Rühren über Nacht. Das sich daraus ergebende unlösliche Material wurde durch Filtration abgetrennt, gefolgt vom Einengen. Der Rückstand wurde in AcOEt gelöst und die Lösung wurde mit Wasser, 10% wäßriger Zitronensäure und 4% wäßrigem NaHCO&sub3; gewaschen. Nach dem Waschen mit Wasser wurde die Lösung mit Na&sub2;SO&sub4; getrocknet und eingeengt. Ether wurde dem sich daraus ergebenden Rückstand unter Abscheiden eines Niederschlages zugesetzt, der durch Filtration gesammelt wurde.
  • Ausbeute: 2,21 g (81,0%), Schmelzpunkt: 136-137ºC, Rf&sub1;: 0,40, Rf&sub2;: 0,68
  • [α]D²&sup8; -3,33º (c = 1,02 in DMF)
  • Elementaranalyse als C&sub3;&sub7;H&sub5;&sub1;N&sub3;O&sub9;
  • Berechnet: C 65,18; H 7,54; N 6,16
  • Gefunden: C 65,23; H 7,65; N 6,10
    • (2) Herstellung von Boc-Ala-D-Glu(OBzl)-D-Leu-Leu-OPac
  • TFA (20 ml) wurde Boc-D-Glu(OBzl)-D-Leu-Leu-OPac (1,91 g) unter Lösen zugesetzt, gefolgt vom Einengen. 8 N HCl/Dioxan (0,88 ml) wurde hinzugesetzt und unter Ausfällen von Kristallen wurde Ether hinzugesetzt. Die Kristalle wurden durch Filtration abgetrennt und getrocknet. Das sich daraus ergebende Produkt wurde in DMF (15 ml) gelöst und mit Eis gekühlt. Anschließend wurde TEA (0,90 ml) hinzugefügt. Boc-Ala-ONB [hergestellt aus Boc-Ala- OH (0,539), HONB (0,559) und DCC (0,649)] wurde hinzugesetzt, gefolgt vom Rühren über Nacht. Das sich daraus ergebende unlösliche Material wurde durch Filtration abgetrennt, gefolgt vom Einengen. Der Rückstand wurde in AcOEt gelöst und die Lösung wurde mit Wasser, 10% wäßriger Zitronensäure und 4% wäßrigem NaHCO&sub3; gewaschen. Nach dem Waschen mit Wasser wurde die Lösung mit Na&sub2;SO&sub4; getrocknet und eingeengt. Ether wurde dem sich daraus ergebenden Rückstand unter Abscheiden eines Niederschlages zugesetzt, der durch Filtration gesammelt wurde.
  • Ausbeute: 1,92 g (91,1%), Schmelzpunkt: 187-188ºC, Rf&sub1;: 0,36, Rf&sub2;: 0,68.
  • [α]D²&sup8; -15,2º (c = 0,94 in DMF)
  • Elementaranalyse als C&sub4;&sub0;H&sub5;&sub6;N&sub4;O&sub1;&sub0;
  • Berechnet: C 63,81; H 7,50; N 7,44
  • Gefunden: C 63,91; H 7,59; N 7,74
    • (3) Herstellung von Boc-D-Asp(OBzl)-Ala-D-Glu(OBzl)-D-Leu-Leu- OPac
  • TFA (20 ml) wurde Boc-Ala-D-Glu(OBzl)-D-Leu-Leu-OPac (1,81 g) unter Lösen zugesetzt, gefolgt vom Einengen. 8 N HCl/Dioxan (0,75 ml) wurde hinzugesetzt und unter Ausfällen von Kristallen wurde Ether zugesetzt. Die Kristalle wurden durch Filtration abgetrennt und getrocknet. Das sich daraus ergebende Produkt wurde in DMF (15 ml) gelöst und mit Eis gekühlt. Anschließend wurde TEA (0,67 ml) hinzugefügt. Boc-D-Asp(OBzl)-ONB [hergestellt aus Boc-D-Asp(OBzl)-OH (0,85 g), HONB (0,51 g) und DCC (0,60 g)] wurde hinzugesetzt, gefolgt vom Rühren über Nacht. Das sich daraus ergebende unlösliche Material wurde durch Filtration abgetrennt, gefolgt vom Einengen. Der Rückstand wurde in AcOEt gelöst und die Lösung wurde mit Wasser, 10% wäßriger Zitronensäure und 4% wäßrigem NaHCO&sub3; gewaschen. Nach dem Waschen mit Wasser wurde die Lösung mit Na&sub2;SO&sub4; getrocknet und eingeengt. Ether wurde dem sich daraus ergebenden Rückstand unter Abscheiden eines Niederschlages zugesetzt, der durch Filtration gesammelt wurde.
  • Ausbeute: 1,83 g (79,6%), Schmelzpunkt: 116-117ºC, Rf&sub1;: 0,35, Rf&sub2;: 0,69.
  • [α]D²&sup8; +17,4º (c = 0,80 in DMF)
  • Elementaranalyse als C&sub5;&sub1;H&sub6;&sub7;N&sub5;O&sub1;&sub3;
  • Berechnet: C 63,93; H 7,05; N 7,31
  • Gefunden: C 63,77; H 7,01; N 7,44
    • (4) Herstellung von Boc-D-Trp-D-Asp(OBzl)-Ala-D-Glu(OBzl)-D- Leu-Leu-OPac
  • TFA (20 ml) wurde Boc-D-Asp(OBzl)-Ala-D-Glu(OBzl)-D-Leu-Leu-OPac (1,63 g) unter Lösen zugesetzt, gefolgt vom Einengen. 8 N Hall- Dioxan (0,53 ml) wurde hinzugesetzt und unter Ausfällen von Kristauen wurde Ether zugesetzt. Die Kristalle wurden durch Filtration abgetrennt und getrocknet. Das sich daraus ergebende Produkt wurde in DMF (15 ml) gelöst und mit Eis gekühlt. Anschließend wurde TEA (0,48 ml) hinzugefügt. Boc-D-Trp-ONB [hergestellt aus Boc-D-Trp-OH (0,57 g), HONB (0,37 g) und DCC (0,42 g)] wurde hinzugesetzt, gefolgt vom Rühren über Nacht. Das sich daraus ergebende unlösliche Material wurde durch Filtration abgetrennt, gefolgt vom Einengen. Der Rückstand wurde in AcOEt gelöst und die Lösung wurde mit Wasser, 10% wäßriger Zitronensäure und 4% wäßrigem NaHCO&sub3; gewaschen. Nach dem Waschen mit Wasser wurde die Lösung mit Na&sub2;SO&sub4; getrocknet und eingeengt. Ether wurde dem sich daraus ergebenden Rückstand unter Abscheiden eines Niederschlages zugesetzt, der durch Filtration gesammelt wurde.
  • Ausbeute: 1,64 g (84,3%), Schmelzpunkt: 149-150ºC, Rf&sub1;: 0,38, Rf&sub2;: 0,70.
  • [α]D²&sup8; +24,2º (c = 0,66 in DMF)
  • Elementaranalyse als C&sub6;&sub2;H&sub7;&sub7;N&sub7;O&sub1;&sub4;
  • Berechnet: C 65,08; H 6,78; N 8,57
  • Gefunden: C 64,91; H 6,86; N 8,67
    • (5) Herstellung von Boc-D-Trp-D-Asp(OBzl)-Ala-D-Glu(BOzl)-D- Leu-Leu-OH
  • Boc-D-Trp-D-Asp(OBzl)-Ala-D-Glu(BOzl)-D-Leu-Leu-OPac (1,49 g) wurde in 90% wäßriger AcOH (20 ml) gelöst und Zn-Pulver (4,26 g) wurde hinzugesetzt, gefolgt von 3 Stunden Rühren. Das Zn-Pulver wurde durch Filtration abgetrennt und das Filtrat wurde einge engt. Dem Rückstand wurde zum Lösen AcOEt zugesetzt und die Lösung wurde mit 10% wäßriger Zitronensäure gewaschen. Nach dem Waschen mit Wasser wurde die Lösung mit Na&sub2;SO&sub4; getrocknet und eingeengt. Dem sich daraus ergebenden Rückstand wurde Ether unter Abscheiden eines Niederschlages zugesetzt, der durch Futration gesammelt wurde.
  • Ausbeute: 1,24 g (93,0%), Schmelzpunkt: 147-149ºC, Rf&sub1;: 0,18, Rf&sub2;: 0,67.
  • [α]D²&sup8; +44,1º (c = 0,86 in DMF)
  • Elementaranalyse als C&sub5;&sub4;H&sub7;&sub1;N&sub7;O&sub1;&sub3;
  • Berechnet: C 63,20; H 6,97; N 9,55
  • Gefunden: C 62,90; H 7,10; N 9,48
    • (6) Herstellung von cyclo[-D-Asp-Ala-D-Glu-D-Leu-Leu-D-Trp-]
  • Boc-D-Trp-D-Asp(OBzl)-Ala-D-Glu(Bozl)-D-Leu-Leu-OH (0,51 g) wurde in DCM (20 ml) gelöst und die Lösung wurde mit Eis gekühlt. HONB (0,18 g) und DCC (0,21 g) wurden hinzugesetzt, gefolgt von 3 Stunden Rühren. Anschließend wurde der sich daraus ergebende DCU durch Filtration abgetrennt, gefolgt vom Einengen, und dem Rückstand wurde Ether unter Abscheiden eines Niederschlages zugesetzt, der durch Filtration gesammelt wurde. Ethandithiol (0,09 ml) und 8 N HCl/Dioxan (20 ml) wurden zum Lösen des Niederschlages unter Eiskühlung hinzugesetzt. Die sich daraus ergebende Lösung wurde 10 Minuten gerührt und eingeengt. Anschließend wurde dem Rückstand Ether unter Abscheiden eines Niederschlages zugesetzt, der durch Filtration gesammelt und getrocknet wurde. Der Niederschlag wurde in DMF (10 ml) gelöst und die sich daraus ergebende Lösung wurde während 30 Minuten tropfenweise TEA (0,7 ml) enthaltendem DMF (90 ml) zugesetzt, gefolgt vom Rühren über Nacht und Einengen. Dem sich daraus ergebenden Rückstand wurde Acetonitril unter Abscheiden eines Niederschlages zugesetzt, der durch Filtration gesammelt und getrocknet wurde. 91 mg dieses Niederschlages wurden in DMF (15 ml) gelöst und im Wasserstoffstrom unter Verwenden von Palladiumschwarz als Katalysator katalytisch reduziert. Der Katalysator wurde durch Filtration abgetrennt und das Filtrat wurde eingeengt. Der sich daraus ergebende Rückstand wurde in einer geringen Menge AcOH gelöst und anschließend wurde zum Ausführen der Lyophilisierung Wasser hinzugesetzt. Das lyophilisierte Produkt wurde schließlich durch Flüssigkeitschromatographie mittels einer YMC-D-ODS-5-Säule (2 cm x 25 cm) (Y.M.C.) unter Erhalten des gewünschten Materials gereinigt. Die Ausbeute war 14,3 mg (10,8%).
  • Aminosäurenanal. [6 N HCl, 110º, 24 Stunden Hydrolyse; die Zahlen in Klammern zeigen die theoretischen Werte]: Asp 1,00 (1), Glu 1,04 (1), Ala 1,05 (1), Leu 2,09 (2).
  • LSIMS (M + H&spplus;) = 728, (theoretischer Wert) = 728
    • Beispiel 5 Herstellung von cyclo[-D-Asp-Gly-Ala-D-Leu-Leu-D-Trp-) (1) Herstellung von Boc-Ala-D-Leu-Leu-OPac
  • TFA (20 ml) wurde in Beispiel 1 (2) hergestelltem Boc-D-Leu-Leu- OPac (6,50 g) unter Lösen zugesetzt, gefolgt vom Einengen. 4% wäßriges NaHCO&sub3; wurde zum Einstellen des pH auf 9-10 hinzugesetzt und anschließend wurde mittels AcOEt eine Extraktion ausgeführt. Der Extrakt wurde mit Na&sub2;SO&sub4; getrocknet und eingeengt. Das sich daraus ergebende Produkt wurde in DMF (15 ml) gelöst und mit Eis gekühlt. Anschließend wurde IEA (2,07 ml) hinzugefügt. Boc-Ala- ONB [hergestellt aus Boc-Ala-OH (2,67 g), HONB (2,65 g) und DCC (3,05 g)] wurde hinzugesetzt, gefolgt vom Rühren über Nacht. Das sich daraus ergebende unlösliche Material wurde durch Filtration abgetrennt, gefolgt vom Einengen. Der Rückstand wurde in AcOEt gelöst und die Lösung wurde mit Wasser, 10% wäßriger Zitronensäure und 4% wäßrigem NaHCO&sub3; gewaschen. Nach dem Waschen mit Wasser wurde die Lösung mit Na&sub2;SO&sub4; getrocknet und eingeengt. Ether wurde dem sich daraus ergebenden Rückstand unter Abscheiden eines Niederschlages zugesetzt, der durch Filtration gesammelt wurde.
  • Ausbeute: 6,70 g (90,0%), Schmelzpunkt: 121,0-122,0ºC, Rf&sub1;: 0,56, Rf&sub2;: 0,71
  • [α]D²&sup5; -12,0º (c = 1,01 in DMF)
  • Elementaranalyse als C&sub2;&sub8;H&sub4;&sub3;N&sub3;O&sub7;
  • Berechnet: C 63,02; H 8,12; N 7,87
  • Gefunden: C 63,07; H 7,90; N 7,92
    • (2) Herstellung von Boc-Gly-Ala-D-Leu-Leu-OPac
  • TFA (20 ml) wurde Boc-Ala-D-Leu-Leu-OPac (2,20 g) unter Lösen zugesetzt, gefolgt vom Einengen. 8 N HCl/Dioxan (1,00 ml) wurde hinzugesetzt und unter Ausfällen von Kristallen wurde Ether zugesetzt. Die Kristalle wurden durch Filtration abgetrennt und getrocknet. Das sich daraus ergebende Produkt wurde in DMF (15 ml) gelöst und mit Eis gekühlt. Anschließend wurde TEA (0,61 ml) hinzugefügt. Boc-Gly-ONB [hergestellt aus Boc-Gly-OH (0,72 9)1 HONB (0,78 g) und DCC (0,89 9)] wurde hinzugesetzt, gefolgt vom Rühren über Nacht. Das sich daraus ergebende unlösliche Material wurde durch Filtration abgetrennt, gefolgt vom Einengen. Der Rückstand wurde in AcOEt gelöst und die Lösung wurde mit Wasser, 10% wäßriger Zitronensäure und 4% wäßrigem NaHCO&sub3; gewaschen. Nach dem Waschen mit Wasser wurde die Lösung mit Na&sub2;SO&sub4; getrocknet und eingeengt. Ether wurde dem sich daraus ergebenden Rückstand unter Abscheiden eines Niederschlages zugesetzt, der durch Filtration gesammelt wurde.
  • Ausbeute: 2,26 g (93,2%), Schmelzpunkt: 158,5-160,0ºC, Rf&sub1;: 0,30, Rf&sub2;: 0,54.
  • [α]D²&sup5; -4,8º (c = 1,02 in DMF)
  • Elementaranalyse als C&sub3;&sub0;H&sub4;&sub6;N&sub4;O&sub8;
  • Berechnet: C 61,00; H 7,85; N 9,48
  • Gefunden: C 60,92; H 7,91; N 9,66
    • (3) Herstellung von BOC-D-Asp(OBzl)-Gly-Ala-D-Leu-Leu-OPac
  • TFA (20 ml) wurde Boc-Ala-Gly-D-Leu-Leu-OPac (2,23 g) unter Lösen zugesetzt, gefolgt vom Einengen. 8 N HCl/Dioxan (1,00 ml) wurde hinzugesetzt und unter Ausfällen von Kristallen wurde Ether zugesetzt. Die Kristalle wurden durch Filtration abgetrennt und getrocknet. Das sich daraus ergebende Produkt wurde in DMF (15 ml) gelöst und mit Eis gekühlt. Anschließend wurde TEA (0,55 ml) hinzugefügt. Boc-D-Asp(OBzl)-ONB [hergestellt aus Boc-D-Asp(OBzl)-OH (1,22 g), HONB (0,71 g) und DCC (0,82 g)] wurde hinzugesetzt, gefolgt vom Rühren über Nacht. Das sich daraus ergebende unlösliche Material wurde durch Filtration abgetrennt, gefolgt vom Einengen. Der Rückstand wurde in AcOEt gelöst und die Lösung wurde mit Wasser, 10% wäßriger Zitronensäure und 4% wäßrigem NaHCO&sub3; gewaschen. Nach dem Waschen mit Wasser wurde die Lösung mit Na&sub2;SO&sub4; getrocknet und eingeengt. Ether wurde dem sich daraus ergebenden Rückstand unter Abscheiden eines Niederschlages zugesetzt, der durch Filtration gesammelt wurde.
  • Ausbeute: 2,62 g (87,3%), Schmelzpunkt: 68,0-69,5ºC, Rf&sub1;: 0,25, Rf&sub2;: 0,53.
  • [α]D²&sup5; +5,4º (c = 1,03 in DMF)
  • Elementaranalyse als C&sub4;&sub1;H&sub5;&sub7;N&sub5;O&sub1;&sub1;
  • Berechnet: C 61,87; H 7,22; N 8,80
  • Gefunden: C 61,78; H 7,34; N 8,62
    • (4) Herstellung von Boc-D-Trp-D-Asp(OBzl)-Gly-Ala-D-Leu-Leu- OPac
  • TFA (20 ml) wurde Boc-D-Asp(OBzl)-Gly-Ala-D-Leu-Leu-OPac (2,51 g) unter Lösen zugesetzt, gefolgt vom Einengen. 8 N HCl/Dioxan (1,00 ml) wurde hinzugesetzt und unter Ausfällen von Kristallen wurde Ether zugesetzt. Die Kristalle wurden durch Filtration abgetrennt und getrocknet. Das sich daraus ergebende Produkt wurde in DMF (15 ml) gelöst und mit Eis gekühlt. Anschließend wurde TEA (0,46 ml) hinzugefügt. Boc-D-Trp-ONB [hergestellt aus Boc-D-Trp-OH (0,96 g), HONB (0,59 g) und DCC (0,68 g)] wurde hinzugesetzt, gefolgt vom Rühren über Nacht. Das sich daraus ergebende unlösliche Material wurde durch Filtration abgetrennt, gefolgt vom Einengen. Der Rückstand wurde in AcOEt gelöst und die Lösung wurde mit Wasser, 10% wäßriger Zitronensäure und 4% wäßrigem NaHCO&sub3; gewaschen. Nach dem Waschen mit Wasser wurde die Lösung mit Na&sub2;SO&sub4; getrocknet und eingeengt. Ether wurde dem sich daraus ergebenden Rückstand unter Abscheiden eines Niederschlages zugesetzt, der durch Filtration gesammelt wurde.
  • Ausbeute: 1,52 g (49,1%), Schmelzpunkt: 109,5-110,0ºC, Rf&sub1;: 0,27, Rf&sub2;: 0,54.
  • [α]D²&sup5; +9,0º (c = 1,04 in DMF)
  • Elementaranalyse: als C&sub5;&sub2;H&sub6;&sub7;N&sub7;O&sub1;&sub2;
  • Berechnet: C 63,59; H 6,88; N 9,98
  • Gefunden: C 63,72; H 6,96; N 10,17
    • (5) Herstellung von Boc-D-Trp-D-Asp(OBzl)-Gly-Ala-D-Leu-Leu-OH
  • Boc-D-Trp-D-Asp(OBzl)-Gly-Ala-D-Leu-Leu-OPac (0,50 g) wurde in 90% wäßriger AcOH (20 ml) gelöst und Zn-Pulver (1,66 g) wurde hinzugesetzt, gefolgt von 3 Stunden Rühren. Das Zn-Pulver wurde durch Filtration abgetrennt und das Filtrat wurde eingeengt. Dem Rückstand wurde zum Lösen AcOEt zugesetzt und die Lösung wurde mit 10% wäßriger Zitronensäure gewaschen. Nach dem Waschen mit Wasser wurde die Lösung mit Na&sub2;SO&sub4; getrocknet und eingeengt. Dem sich daraus ergebenden Rückstand wurde unter Abscheiden eines Niederschlages Ether zugesetzt, der durch Filtration gesammelt wurde.
  • Ausbeute: 385 mg (87,5%), Schmelzpunkt: 120,0-122,0ºC, Rf&sub1;: 0,02, Rf&sub2;: 0,40.
  • [α]D²&sup5; +23,0º (c = 1,01 in DMF)
  • Elementaranalyse: als C&sub4;&sub4;H&sub6;&sub1;N&sub7;O&sub1;&sub1;
  • Berechnet: C 61,17; H 7,12; N 11,35
  • Gefunden: C 61,28; H 7,08; N 11,11
    • (6) Herstellung von cyclo[-D-Asp-Gly-Ala-D-Leu-Leu-D-Trp-]
  • Boc-D-Trp-D-Asp(OBzl)-Gly-Ala-D-Leu-Leu-OH (0,51 g) wurde in Acetonitril (20 ml) gelöst und die Lösung wurde mit Eis gekühlt. HONB (0,18 g) und DCC (0,21 g) wurden hinzugesetzt, gefolgt von 3 Stunden Rühren. Anschließend wurde der sich daraus ergebende DCU durch Filtration abgetrennt, gefolgt vom Einengen, und dem Rückstand wurde Ether unter Abscheiden eines Niederschlages zugesetzt, der durch Filtration gesammelt wurde. Ethandithiol (0,09 ml) und 8 N HCl/Dioxan (20 ml) wurden zum Lösen des Niederschlages unter Eiskühlung hinzugesetzt. Die sich daraus ergebende Lösung wurde 10 Minuten gerührt und eingeengt. Anschließend wurde dem Rückstand Ether unter Abscheiden eines Niederschlages zugesetzt, der durch Filtration gesammelt und getrocknet wurde. Der Niederschlag wurde in DMF (10 ml) gelöst und die sich daraus ergebende Lösung wurde während 30 Minuten tropfenweise TEA (0,7 ml) enthaltendem DMF (90 ml) zugesetzt, gefolgt vom Rühren über Nacht und Einengen. Dem sich daraus ergebenden Rückstand wurde Acetonitril unter Abscheiden eines Niederschlages zugesetzt, der durch Filtration gesammelt und getrocknet wurde. 51 mg dieses Niederschlages wurden in DMF (15 ml) gelöst und im Wasserstoffstrom unter Verwenden von Palladiumschwarz als Katalysator katalytisch reduziert. Der Katalysator wurde durch Filtration abgetrennt und das Filtrat wurde eingeengt. Der sich daraus ergebende Rückstand wurde in einer geringen Menge AcOH gelöst und anschließend wurde zum Ausführen der Lyophilisierung Wasser hinzugesetzt. Das lyophilisierte Produkt wurde schließlich durch Flüssigkeitschromatographie mittels einer YMC-D-ODS- 5-Säule (2 cm x 25 cm) (Y.M.C.) unter Erhalten des gewünschten Materials gereinigt. Die Ausbeute war 28,5 mg (19,2%).
  • Aminosäurenanal. [6 N HCl, 110ºC, 24 Stunden Hydrolyse; die Zahlen in Klammern zeigen die theoretischen Werte]: Asp 1,00 (1), Gly 1,03 (1), Ala 1,04 (1), Leu 2,09 (2).
  • LSIMS (M + H&spplus;) = 656, (theoretischer Wert) = 656
    • Beispiel 6 Herstellung von cyclo[-D-Asp-Asp-Ala-D-Leu-Leu-D-Trp-] (1) Herstellung von Boc-Asp(OBzl)-Ala-D-Leu-Leu-OPac
  • TFA (20 ml) wurde in Beispiel 5 (1) hergestelltem BOC-Ala-D-Leu- Leu-OPac (2,20 g) unter Lösen zugesetzt, gefolgt vom Einengen. 8 N HCl/Dioxan (1,00 ml) wurde hinzugesetzt und unter Ausfällen von Kristallen wurde Ether hinzugesetzt. Die Kristalle wurden durch Filtration abgetrennt und getrocknet. Das sich daraus ergebende Produkt wurde in DNF (15 ml) gelöst und mit Eis gekühlt. Anschließend wurde TEA (0,61 ml) hinzugefügt. Boc- Asp(OBzl)-ONB [hergestellt aus Boc-Asp(OBzl)-OH (1,33 g), HONB (0,78 g) und DCC (0,89 g)) wurde hinzugesetzt, gefolgt vom Rühren über Nacht. Das sich daraus ergebende unlösliche Material wurde durch Filtration abgetrennt, gefolgt vom Einengen. Der Rückstand wurde in AcOEt gelöst und die Lösung wurde mit Wasser, 10% wäßriger Zitronensäure und 4% wäßrigem NaHCO&sub3; gewaschen. Nach dem Waschen mit Wasser wurde die Lösung mit Na&sub2;SO&sub4; getrocknet und eingeengt. Ether wurde dem sich daraus ergebenden Rückstand unter Abscheiden eines Niederschlages zugesetzt, der durch Filtration gesammelt wurde.
  • Ausbeute: 2,87 g (94,2%), Schmelzpunkt: 149,5-150,5ºC, Rf&sub1;: 0,58, Rf&sub2;: 0,68
  • [α]D²&sup5; -15,2º (c = 1,02 in DMF)
  • Elementaranalyse als C&sub3;&sub9;H&sub5;&sub4;N&sub4;O&sub1;&sub0;
  • Berechnet: C 63,40; H 7,37; N 7,58
  • Gefunden: C 63,55; H 7,42; N 7,68
    • (2) Herstellung von Boc-D-Asp(OBzl)-Asp(OBzl)-Ala-D-Leu-Leu- OPac
  • TFA (20 ml) wurde Boc-Asp(OBzl)-Ala-D-Leu-Leu-OPac (2,77 g) unter Lösen zugesetzt, gefolgt vom Einengen. 8 N HCl/Dioxan (1,00 ml) wurde hinzugesetzt und unter Ausfällen von Kristallen wurde Ether zugesetzt. Die Kristalle wurden durch Filtration abgetrennt und getrocknet. Das sich daraus ergebende Produkt wurde in DMF (15 ml) gelöst und mit Eis gekühlt. Anschließend wurde TEA (0,55 ml) hinzugefügt. Boc-D-Asp(OBzl)-ONB [hergestellt aus Boc-D-Asp(OBzl)-OH (1,21 g), HONB (0,71 g) und DCC (0,81 g)] wurde hinzugesetzt, gefolgt vom Rühren über Nacht. Das sich daraus ergebende unlösliche Material wurde durch Filtration abgetrennt, gefolgt vom Einengen. Der Rückstand wurde in AcOEt gelöst und die Lösung wurde mit Wasser, 10% wäßriger Zitronensäure und 4% wäßrigem NaHCO&sub3; gewaschen. Nach dem Waschen mit Wasser wurde die Lösung mit Na&sub2;SO&sub4; getrocknet und eingeengt. Ether wurde dem sich daraus ergebenden Rückstand unter Abscheiden eines Niederschlages zugesetzt, der durch Filtration gesammelt wurde.
  • Ausbeute: 3,08 g (87,0%), Schmelzpunkt: 72,0-74,0ºC, Rf&sub1;: 0,56, Rf&sub2;: 0,64.
  • [α]D²&sup5; -7,0º (c = 1,02 in DMF)
  • Elementaranalyse: als C&sub5;&sub0;H&sub6;&sub5;N&sub5;O&sub1;&sub3;
  • Berechnet: C 63,61; H 6,94; N 7,42
  • Gefunden: C 63,38; H 6,88; N 7,42
    • (3) Herstellung von Boc-D-Trp-D-Asp(OBzl) -Ala-D-Leu-Leu-OPac
  • TFA (20 ml) wurde Boc-D-Asp(OBzl)-Asp(OBzl)-Ala-D-Leu-Leu-OPac (2,94 g) unter Lösen zugesetzt, gefolgt vom Einengen. 8 N HCl/Dioxan (1,00 ml) wurde hinzugesetzt und unter Ausfällen von Kristallen wurde Ether zugesetzt. Die Kristalle wurden durch Filtration abgetrennt und getrocknet. Das sich daraus ergebende Produkt wurde in DMF (15 ml) gelöst und mit Eis gekühlt. Anschließend wurde TEA (0,46 ml) hinzugefügt. Boc-D-Trp-ONB [hergestellt aus Boc-D-Trp-OH (0,96 g), HONB (0,59 g) und DCC (0,68 g)] wurde hinzugesetzt, gefolgt vom Rühren über Nacht. Das sich daraus ergebende unlösliche Material wurde durch Filtration abgetrennt, gefolgt vom Einengen. Der Rückstand wurde in AcOEt gelöst und die Lösung wurde mit Wasser, 10% wäßriger Zitronensäure und 4% wäßrigem NaHCO&sub3; gewaschen. Nach dem Waschen mit Wasser wurde die Lösung mit Na&sub2;SO&sub4; getrocknet und eingeengt. Ether wurde dem sich daraus ergebenden Rückstand unter Abscheiden eines Niederschlages zugesetzt, der durch Filtration gesammelt wurde.
  • Ausbeute: 2,61 g (77,0%), Schmelzpunkt: 190,0-192,5ºC, Rf&sub1;: 0,49, Rf&sub2;: 0,60.
  • [α]D²&sup5; +4,9º (c = 1,03 in DMF)
  • Elementaranalyse als C&sub6;&sub1;H&sub7;&sub5;N&sub7;O&sub1;&sub4;
  • Berechnet: C 64,82; H 6,69; N 8,67
  • Gefunden: C 65,01; H 6,78; N 8,87
    • (4) Herstellung von Boc-D-Trp-D-Asp(OBzl)-Asp(OBzl)-Ala-D-Leu- Leu-OH
  • Boc-D-Trp-D-Asp(OBzl)-Asp(OBzl)-Ala-D-Leu-Leu-OPac (0,50 g) wurde in 90% wäßriger AcOH (20 ml) gelöst und Zn-Pulver (1,66 g) wurde hinzugesetzt; gefolgt von 3 Stunden Rühren. Das Zn-Pulver wurde durch Filtration abgetrennt und das Filtrat wurde eingeengt. Dem Rückstand wurde zum Lösen AcOEt zugesetzt und die Lösung wurde mit 10% wäßriger Zitronensäure gewaschen. Nach dem Waschen mit Wasser wurde die Lösung mit Na&sub2;SO&sub4; getrocknet und eingeengt. Dem sich daraus ergebenden Rückstand wurde Ether unter Abscheiden eines Niederschlages zugesetzt, der durch Filtration gesammelt wurde.
  • Ausbeute: 363 mg (81,0%), Schmelzpunkt: 174,0-175,0ºC, Rf&sub1;: 0,04, Rf&sub2;: 0,50.
  • [α]D²&sup5; +12,1º (c = 1,03 in DMF)
  • Elementaranalyse als C&sub5;&sub3;H&sub6;&sub9;N&sub7;O&sub1;&sub3;
  • Berechnet: C 62,89; H 6,87; N 9,69
  • Gefunden: C 62,92; H 6,89; N 9,78
    • (5) Herstellung von cyclo[-D-Asp-Asp-Ala-D-Leu-Leu-D-Trp-]
  • Boc-D-Trp-D-Asp(OBzl)-Asp(OBzl)-Ala-D-Leu-Leu-OH (0,51 g) wurde in Acetonitril (20 ml) gelöst und die Lösung wurde mit Eis gekühlt. HONB (0,16 g) und DCC (0,18 g) wurden hinzugesetzt, gefolgt von 3 Stunden Rühren. Anschließend wurde der sich daraus ergebende DCU durch Filtration abgetrennt, gefolgt vom Einengen, und dem Rückstand wurde Ether unter Abscheiden eines Niederschlages zugesetzt, der durch Filtration gesammelt wurde. Ethandithiol (0,09 ml) und 8 N HCl/Dioxan (20 ml) wurden zum Lösen des Niederschlages unter Eiskühlung hinzugesetzt. Die sich daraus ergebende Lösung wurde 10 Minuten gerührt und eingeengt. Anschließend wurde dem Rückstand Ether unter Abscheiden eines Niederschlages zugesetzt, der durch Filtration gesammelt und getrocknet wurde. Der Niederschlag wurde in DMF (10 ml) gelöst und die sich daraus ergebende Lösung wurde während 30 Minuten tropfenweise TEA (0,62 ml) enthaltendem DMF (90 ml) zugesetzt, gefolgt vom Rühren über Nacht und Einengen. Dem sich daraus ergebenden Rückstand wurde Acetonitril unter Abscheiden eines Niederschlages zugesetzt, der durch Filtration gesammelt und getrocknet wurde. 51 mg dieses Niederschlages wurden in DMF (15 ml) gelöst und im Wasserstoffstrom unter Verwenden von Palladiumschwarz als Katalysator katalytisch reduziert. Der Katalysator wurde durch Filtration abgetrennt und das Filtrat wurde eingeengt. Der sich daraus ergebende Rückstand wurde in einer geringen Menge AcOH gelöst und anschließend wurde zum Ausführen der Lyophilisierung Wasser hinzugesetzt. Das lyophilisierte Produkt wurde schließlich durch Flüssigkeitschromatographie mittels einer YMC-D-ODS-5-Säule (2 cm x 25 cm) (Y.M.C.) unter Erhalten des gewünschten Materials gereinigt. Die Ausbeute war 28,5 mg (17,8%).
  • Aminosäurenanal. [6 N HCl, 110ºC, 24 Stunden Hydrolyse; die Zahlen in Klammern zeigen die theoretischen Werte]: Asp 2,00 (2), Ala 1,04 (1), Leu 2,10 (2).
  • LSIMS (M + H&spplus;) = 714, (theoretischer Wert) = 714
    • Beispiel 7 Herstellung von cyclo [-D-Asp-Glu-Ala-D-Leu-Leu-D-Trp-] (1) Herstellung von Boc-Glu(OBzl)-Ala-D-Leu-Leu-OPac
  • TFA (20 ml) wurde in Beispiel 5 (1) hergestelltem Boc-Ala-D-Leu- Leu-OPac (2,20 g) unter Lösen zugesetzt, gefolgt vom Einengen. 8 N HCl/Dioxan (1,00 ml) wurde hinzugesetzt und unter Ausfällen von Kristallen wurde Ether zugesetzt. Die Kristalle wurden durch Filtration abgetrennt und getrocknet. Das sich daraus ergebende Produkt wurde in DMF (15 ml) gelöst und mit Eis gekühlt. Anschließend wurde TEA (0,61 ml) hinzugefügt. Boc-Glu(OBzl)-ONB [hergestellt aus Boc-Glu(OBzl)-OH (1,39 g), HONB (0,78 g) und DCC (0,89 g)] wurde hinzugesetzt, gefolgt vom Rühren über Nacht. Das sich daraus ergebende unlösliche Material wurde durch Filtration abgetrennt, gefolgt vom Einengen. Der Rückstand wurde in AcOEt gelöst und die Lösung wurde mit Wasser, 10% wäßriger Zitronensäure und 4% wäßrigem NaHCO&sub3; gewaschen. Nach dem Waschen mit Wasser wurde die Lösung mit Na&sub2;SO&sub4; getrocknet und eingeengt. Ether wurde dem sich daraus ergebenden Rückstand unter Abscheiden eines Niederschlages zugesetzt, der durch Filtration gesammelt wurde.
  • Ausbeute: 2,86 g (92,4%), Schmelzpunkt: 152,5-153,5ºC, Rf&sub1;: 0,36, Rf&sub2;: 0,67
  • [α]D²&sup5; +0,8º (c = 1,04 in DMF)
  • Elementaranalyse: als C&sub4;&sub0;H&sub5;&sub6;N&sub4;O&sub1;&sub0;
  • Berechnet: C 63,81; H 7,50; N 7,44
  • Gefunden: C 63,86; H 7,53; N 7,65
    • (2) Herstellung von Boc-D-Asp(OBzl)-Glu(OBzl)-Ala-D-Leu-Leu- OPac
  • TFA (20 ml) wurde Boc-Glu(OBzl)-Ala-D-Leu-Leu-OPac (2,76 9) unter Lösen zugesetzt, gefolgt vom Einengen. 8 N HCl/Dioxan (1,00 ml) wurde hinzugesetzt und unter Ausfällen von Kristallen wurde Ether zugesetzt. Die Kristalle wurden durch Filtration abgetrennt und getrocknet. Das sich daraus ergebende Produkt wurde in DMF (15 ml) gelöst und mit Eis gekühlt. Anschließend wurde TEA (0,54 ml) hinzugefügt. Boc-D-Asp(OBzl)-ONB [hergestellt aus Boc-D-Asp(OBzl)-OH (1,19 9), HONB (0,69 9) und DCC (0,80 g)] wurde hinzugesetzt, gefolgt vom Rühren über Nacht. Das sich daraus ergebende unlösliche Material wurde durch Filtration abgetrennt, gefolgt vom Einengen. Der Rückstand wurde in AcOEt gelöst und die Lösung wurde mit Wasser, 10% wäßriger Zitronensäure und 4% wäßrigem NaHCO&sub3; gewaschen. Nach dem Waschen mit Wasser wurde die Lösung mit Na&sub2;SO&sub4; getrocknet und eingeengt. Ether wurde dem sich daraus ergebenden Rückstand unter Abscheiden eines Niederschlages zugesetzt, der durch Filtration gesammelt wurde.
  • Ausbeute: 3,089 (87,6%), Schmelzpunkt: 127,0-127,5ºC, Rf&sub1;: 0,51, Rf&sub2;: 0,60.
  • [α]D²&sup5; +4,5º (c = 1,01 in DMF)
  • Elementaranalyse: als C&sub5;&sub1;H&sub6;&sub7;N&sub5;O&sub1;&sub3;
  • Berechnet: C 63,93; H 7,05; N 7,31
  • Gefunden: C 64,05; H 7,08; N 7,42
    • (3) Herstellung von Boc-D-Trp-D-ASP(OBzl)-Glu(OBzl)-Ala-D-Leu- Leu-OPac
  • TFA (20 ml) wurde Boc-D-ASP(OBzl)-Glu(OBzl)-Ala-D-Leu-Leu-OPac (2,95 g) unter Lösen zugesetzt, gefolgt vom Einengen. 8 N HCl/Dioxan (1,00 ml) wurde hinzugesetzt und unter Ausfällen von Kristallen wurde Ether hinzugesetzt. Die Kristalle wurden durch Filtration abgetrennt und getrocknet. Das sich daraus ergebende Produkt wurde in DMF (15 ml) gelöst und mit Eis gekühlt. Anschließend wurde TEA (0,46 ml) hinzugefügt. Boc-D-Trp-ONB [hergestellt aus Boc-D-Trp-OH (0,94 g), HONB (0,58 g) und DCC (0,67 g)) wurde hinzugesetzt, gefolgt vom Rühren über Nacht. Das sich daraus ergebende unlösliche Material wurde durch Filtration abgetrennt, gefolgt vom Einengen. Der Rückstand wurde in AcOEt gelöst und die Lösung wurde mit Wasser, 10% wäßriger Zitronensäure und 4% wäßrigem NaHCO&sub3; gewaschen. Nach dem Waschen mit Wasser wurde die Lösung mit Na&sub2;SO&sub4; getrocknet und eingeengt. Ether wurde dem sich daraus ergebenden Rückstand unter Abscheiden eines Niederschlages zugesetzt, der durch Filtration gesammelt wurde.
  • Ausbeute: 2,59 g (75,4%), Schmelzpunkt: 182,0-183,5ºC, Rf&sub1;: 0,51, Rf&sub2;: 0,62.
  • [α]D²&sup5; +12,1º (c = 1,03 in DMF)
  • Elementaranalyse als C&sub6;&sub2;H&sub7;&sub7;N&sub7;O&sub1;&sub4;
  • Berechnet: C 65,08; H 6,78; N 8,57
  • Gefunden: C 65,11; H 6,76; N 8,76
    • (4) Herstellung von Boc-D-Trp-D-Asp(OBzl)-Glu(OBzl)-Ala-D-Leu- Leu-OH
  • Boc-D-Trp-D-Asp(OBzl)-Glu(OBzl)-Ala-D-Leu-Leu-OPac (0,50 g) wurde in 90% wäßriger AcOH (20 ml) gelöst und Zn-Pulver (1,66 g) wurde hinzugesetzt, gefolgt von 3 Stunden Rühren. Das Zn-Pulver wurde durch Filtration abgetrennt und das Filtrat wurde eingeengt. Dem Rückstand wurde zum Lösen AcOEt zugesetzt und die Lösung wurde mit 10% wäßriger Zitronensäure gewaschen. Nach dem Waschen mit Wasser wurde die Lösung mit Na&sub2;SO&sub4; getrocknet und eingeengt. Dem sich daraus ergebenden Rückstand wurde Ether unter Abscheiden eines Niederschlages zugesetzt, der durch Filtration gesammelt wurde.
  • Ausbeute: 410 mg (91,4%), Schmelzpunkt: 179,5-180,5ºC, Rf&sub1;: 0,03, Rf&sub2;: 0,53.
  • [α]D²&sup5; +16,1º (c = 1,02 in DMF)
  • Elementaranalyse als C&sub5;&sub4;H&sub7;&sub1;N&sub7;O&sub1;&sub3;
  • Berechnet: C 63,20; H 6,97; N 9,55
  • Gefunden: C 63,45; H 7,00; N 9,67
    • (5) Herstellung von cyclo[-D-Asp-Glu-Ala-D-Leu-Leu-D-Trp-]
  • Boc-D-Trp-D-Asp(OBzl)-Glu(OBzl)-Ala-D-Leu-Leu-OH (0,51 g) wurde in Acetonitril (20 ml) gelöst und die Lösung wurde mit Eis gekühlt. HONB (0,16 g) und DCC (0,18 g) wurden hinzugesetzt, gefolgt von 3 Stunden Rühren. Anschließend wurde der sich daraus ergebende DCU durch Filtration abgetrennt, gefolgt vom Einengen, und dem Rückstand wurde Ether unter Abscheiden eines Niederschlages zugesetzt, der durch Filtration gesammelt wurde. Ethandithiol (0,09 ml) und 8 N HCl/Dioxan (20 ml) wurden zum Lösen des Niederschlages unter Eiskühlung hinzugesetzt. Die sich daraus ergebende Lösung wurde 10 Minuten gerührt und eingeengt. Anschließend wurde dem Rückstand Ether unter Abscheiden eines Niederschlages zugesetzt, der durch Filtration gesammelt und getrocknet wurde. Der Niederschlag wurde in DMF (10 ml) gelöst und die sich daraus ergebende Lösung wurde während 30 Minuten tropfenweise TEA (0,62 ml) enthaltendern DMF (90 ml) zugesetzt, gefolgt vom Rühren über Nacht und Einengen. Dem sich daraus ergebenden Rückstand wurde Acetonitril unter Abscheiden eines Niederschlages zugesetzt, der durch Filtration gesammelt und getrocknet wurde. 51 mg dieses Niederschlages wurden in DMF (15 ml) gelöst und im Wasserstoffstrom unter Verwenden von Palladiumschwarz als Katalysator katalytisch reduziert. Der Katalysator wurde durch Filtration abgetrennt und das Filtrat wurde eingeengt. Der sich daraus ergebende Rückstand wurde in einer geringen Menge AcOH gelöst und anschließend wurde zum Ausführen der Lyophilisierung Wasser hinzugesetzt. Das lyophilisierte Produkt wurde schließlich durch Flüssigkeitschromatographie mittels einer YMC-D-ODS-5-Säule (2 cm x 25 cm) (Y.M.C.) unter Erhalten des gewünschten Materials gereinigt. Die Ausbeute war 28,5 mg (20,6%).
  • Aminosäurenanal. [6 N HCl, 110ºC, 24 Stunden Hydrolyse; die Zahlen in Klammern zeigen die theoretischen Werte): Asp 1,00 (1), Glu 1,02 (1), Ala 1,05 (1), Leu 2,06 (2).
  • LSIMS (M + H&spplus;) = 728, (theoretischer Wert) = 728
    • Beispiel 8 Herstellung von cyclo[-D-Asp-Trp-Asp-D-Leu-Leu-D-Trp-] (1) Herstellung von Boc-Trp-Asp(OBzl)-D-Leu-Leu-OPac
  • In Beispiel 1 (3) hergestelltes Boc-Asp(OBzl)-D-Leu-Leu-OPac (2,14 g) wurde in 8 N HCl/Dioxan (10 ml) gelöst und die Lösung wurde 10 Minuten unter Eiskühlung gerührt, gefolgt vom Einengen. Anschließend wurde Ether unter Ausfällen von Kristallen zugesetzt. Die Kristalle wurden durch Filtration abgetrennt und getrocknet. Das sich daraus ergebende Produkt wurde in DMF (15 ml) gelöst und mit Eis gekühlt. Anschließend wurde TEA (0,90 ml) hinzugefügt. Boc-Trp-ONB [hergestellt aus Boc-Trp-OH (1,17 g), HONB (0,69 g) und DCC (0,79 g)] wurde hinzugesetzt, gefolgt vom Rühren über Nacht. Das sich daraus ergebende unlösliche Material wurde durch Filtration abgetrennt, gefolgt vom Einengen. Der Rückstand wurde in AcOEt gelöst und die Lösung wurde mit Wasser, 10% wäßriger Zitronensäure und 4% wäßrigem NaHCO&sub3; gewaschen. Nach dem Waschen mit Wasser wurde die Lösung mit Na&sub2;SO&sub4; getrocknet und eingeengt. Ether wurde dem sich daraus ergebenden Rückstand unter Abscheiden eines Niederschlages zugesetzt, der durch Filtration gesammelt wurde.
  • Ausbeute: 2,48 g (90,7%), Schmelzpunkt: 143-144ºC, Rf&sub1;: 0,43, Rf&sub2;: 0,74
  • [α]D²&sup8; -25,8º (c = 0,98 in DMF)
  • Elementaranalyse: als C&sub4;&sub7;H&sub5;&sub9;N&sub5;O&sub1;&sub0;
  • Berechnet: C 66,10; H 6,96; N 8,20
  • Gefunden: C 66,22; H 7,01; N 8,49
    • (2) Herstellung von Boc-D-Asp(OBzl)-Trp-Asp(OBzl)-D-Leu-Leu- OPac
  • Boc-Trp-Asp(OBzl)-D-Leu-Leu-OPac (2,31 g) wurde in 8 N HCl/Dioxan (10 ml) gelöst und die Lösung wurde 10 Minuten unter Eiskühlung gerührt, gefolgt vom Einengen. Anschließend wurde Ether unter Ausfällen von Kristallen zugesetzt. Die Kristalle wurden durch Filtration abgetrennt und getrocknet. Das sich daraus ergebende Produkt wurde in DMF (15 ml) gelöst und mit Eis gekühlt. Anschließend wurde TEA (0,75 ml) hinzugefügt. Boc-D- Asp(OBzl)-ONB [hergestellt aus Boc-D-Asp(OBzl)-OH (0,96 g), HONB (0,58 g) und DCC (0,67 g)] wurde hinzugesetzt, gefolgt vom Rühren über Nacht. Das sich daraus ergebende unlösliche Material wurde durch Filtration abgetrennt, gefolgt vom Einengen. Der Rückstand wurde in AcOEt gelöst und die Lösung wurde mit Wasser, 10% wäßriger Zitronensäure und 4% wäßrigem NaHCO&sub3; gewaschen. Nach dem Waschen mit Wasser wurde die Lösung mit Na&sub2;SO&sub4; getrocknet und eingeengt. Ether wurde dem sich daraus ergebenden Rückstand unter Abscheiden eines Niederschlages zugesetzt, der durch Filtration gesammelt wurde.
  • Ausbeute: 2,48 g (86,7%), Schmelzpunkt: 171-172ºC, Rf&sub1;: 0,41, Rf&sub2;: 0,72.
  • [α]D²&sup8; -16,0º (c = 1,31 in DMF)
  • Elementaranalyse als C&sub5;&sub8;H&sub7;&sub0;N&sub6;O&sub1;&sub3;
  • Berechnet: C 65,77; H 6,66; N 7,93
  • Gefunden: C 65,82; H 6,91; N 8,10
    • (3) Herstellung von Boc-D-Trp-D-Asp(OBzl)-Trp-Asp(OBzl)-D-Leu- Leu-OPac
  • Boc-D-Asp(OBzl)-Trp-Asp(OBzl)-D-Leu-Leu-OPac (2,12 g) wurde in 8 N HCl/Dioxan (10 ml) gelöst und die Lösung wurde 10 Minuten unter Eiskühlung gerührt, gefolgt vom Einengen. Anschließend wurde Ether unter Ausfällen von Kristallen zugesetzt. Die Kristalle wurden durch Filtration abgetrennt und getrocknet. Das sich daraus ergebende Produkt wurde in DMF (15 ml) gelöst und mit Eis gekühlt. Anschließend wurde TEA (0,56 ml) hinzugefügt. Boc-D-Trp-ONB [hergestellt aus Boc-D-Trp-OH (0,67 g), HONB (0,43 g) und DCC (0,49 g)] wurde hinzugesetzt, gefolgt vom Rühren über Nacht. Das sich daraus ergebende unlösliche Material wurde durch Filtration abgetrennt, gefolgt vom Einengen. Der Rückstand wurde in AcOEt gelöst und die Lösung wurde mit Wasser, 10% wäßriger Zitronensäure und 4% wäßrigem NaHCO&sub3; gewaschen. Nach dem Waschen mit Wasser wurde die Lösung mit Na&sub2;SO&sub4; getrocknet und eingeengt. Ether wurde dem sich daraus ergebenden Rückstand unter Abscheiden eines Niederschlages zugesetzt, der durch Filtration gesammelt wurde.
  • Ausbeute: 2,10 g (93,1%), Schmelzpunkt: 180-181ºC, Rf&sub1;: 0,33, Rf&sub2;: 0,69.
  • [α]D²&sup8; -4,4º (c = 1,11 in DMF)
  • Elementaranalyse als C&sub6;&sub9;H&sub6;&sub0;N&sub8;O&sub1;&sub4;
  • Berechnet: C 66,54; H 6,47; N 9,00
  • Gefunden: C 66,45; H 6,76; N 9,10
    • (4) Herstellung von Boc-D-Trp-D-Asp(OBzl)-Trp-Asp(OBzl)-D-Leu- Leu-OH
  • Boc-D-Trp-D-Asp(OBzl)-Trp-Asp(OBzl)-D-Leu-Leu-OPac (1,49 g) wurde in 90% wäßriger AcOH (20 ml) gelöst und Zn-Pulver (3,92 g) wurde hinzugesetzt, gefolgt von 3 Stunden Rühren. Das Zn-Pulver wurde durch Filtration abgetrennt und das Filtrat wurde eingeengt. Dem Rückstand wurde zum Lösen AcOEt zugesetzt und die Lösung wurde mit 10% wäßriger Zitronensäure gewaschen. Nach dem Waschen mit Wasser wurde die Lösung mit Na&sub2;SO&sub4; getrocknet und eingeengt. Dem sich daraus ergebenden Rückstand wurde unter Abscheiden eines Niederschlages Ether zugesetzt, der durch Filtration gesammelt wurde.
  • Ausbeute: 1,30 g (96,1%), Schmelzpunkt: 114-115ºC, Rf&sub1;: 0,10, Rf&sub2;: 0,65.
  • [α]D²&sup8; +1,6º (c = 0,87 in DMF)
  • Elementaranalyse als C&sub6;&sub1;H&sub7;&sub4;N&sub8;O&sub1;&sub3;
  • Berechnet: C 64,99; H 6,62; N 9,94
  • Gefunden: C 65,01; H 6,88; N 10,02
    • (5) Herstellung von cyclo[-D-Asp-Trp-Asp-D-Leu-Leu-D-Trp-]
  • Boc-D-Trp-D-Asp(OBzl)-Trp-Asp(OBzl)-D-Leu-Leu-OH (0,56 g) wurde in DOM (20 ml) gelöst und die Lösung wurde mit Eis gekühlt. HONB (0,18 g) und DCC (0,21 g) wurden hinzugesetzt, gefolgt von 3 Stunden Rühren. Anschließend wurde der sich daraus ergebende DCU durch Filtration abgetrennt, gefolgt vom Einengen, und dem Rückstand wurde Ether unter Abscheiden eines Niederschlages zugesetzt, der durch Filtration gesammelt wurde. 8 N HCl/Dioxan (20 ml) wurde zum Lösen des Niederschlages unter Eiskühlung hinzugesetzt. Die sich daraus ergebende Lösung wurde 10 Minuten gerührt und eingeengt. Anschließend wurde dem Rückstand Ether unter Abscheiden eines Niederschlages zugesetzt, der durch Filtration gesammelt und getrocknet wurde. Der Niederschlag wurde in DMF (10 ml) gelöst und die sich daraus ergebende Lösung wurde während 30 Minuten tropfenweise TEA (0,7 ml) enthaltendem DMF (90 ml) zugesetzt, gefolgt vom Rühren über Nacht und Einengen. Dem sich daraus ergebenden Rückstand wurde Acetonitril-Ether unter Abscheiden eines Niederschlages zugesetzt, der durch Filtration gesammelt und getrocknet wurde. 101 mg dieses Niederschlages wurden in DMF (15 ml) gelöst und im Wasserstoff strom unter Verwenden von Palladiumschwarz als Katalysator katalytisch reduziert. Der Katalysator wurde durch Filtration abgetrennt und das Filtrat wurde eingeengt. Der sich daraus ergebende Rückstand wurde in einer geringen Menge AcOH gelöst und anschließend wurde zum Ausführen der Lyophilisierung Wasser hinzugesetzt. Das lyophilisierte Produkt wurde schließlich durch Flüssigkeitschroma tographie mittels einer YMC-D-ODS-5-Säule (2 cm x 25 cm) (Y.M.C.) unter Erhalten des gewünschten Materials gereinigt. Die Ausbeute war 12,4 mg (52,9%).
  • Aminosäurenanal. [6 N HCl, 110ºC, 24 Stunden Hydrolyse; die Zahlen in Klammern zeigen die theoretischen Werte]: Asp 2,00 (2), Leu 2,15 (2).
  • LSIMS (M + H&spplus;) = 829, (theoretischer Wert) = 829
    • Beispiel 9 Herstellung von cyclo[-D-Asp-Pro-Asp-D-Leu-Leu-D-Trp-] (1) Herstellung von Boc-Pro-Asp(OBzl)-D-Leu-Leu-OPac
  • In Beispiel 1 (3) hergestelltes Boc-Asp(OBzl)-D-Leu-Leu-OPac (2,14 g) wurde in 8 N HCl/Dioxan (10 ml) gelöst und die Lösung wurde 10 Minuten unter Eiskühlung gerührt, gefolgt vom Einengen. Anschließend wurde Ether unter Ausfällen von Kristallen hinzugesetzt. Die Kristalle wurden durch Filtration abgetrennt und getrocknet. Das sich daraus ergebende Produkt wurde in DMF (15 ml) gelöst und mit Eis gekühlt. Anschließend wurde TEA (0,90 ml) hinzugefügt. Boc-Pro-ONB [hergestellt aus Boc-Pro-OH (0,76 g), HONB (0,69 g) und DCC (0,79 g)] wurde hinzugesetzt, gefolgt vom Rühren über Nacht. Das sich daraus ergebende unlösliche Material wurde durch Filtration abgetrennt, gefolgt vom Einengen. Der Rückstand wurde in AcOEt gelöst und die Lösung wurde mit Wasser, 10% wäßriger Zitronensäure und 4% wäßrigem NaHCO&sub3; gewaschen. Nach dem Waschen mit Wasser wurde die Lösung mit Na&sub2;SO&sub4; getrocknet und eingeengt. Ether wurde dem sich daraus ergebenden Rückstand unter Abscheiden eines Niederschlages zugesetzt, der durch Filtration gesammelt wurde.
  • Ausbeute: 2,19 g (89,5%), Schmelzpunkt: 135-136ºC, Rf&sub1;: 0,44, Rf&sub2;: 0,74
  • [α]D²&sup8; -40,0º (c = 1,02 in DMF)
  • Elementaranalyse als C&sub4;&sub1;H&sub5;&sub6;N&sub4;O&sub1;&sub0;
  • Berechnet: C 64,38; H 7,38; N 7,32
  • Gefunden: C 64,40; H 7,53; N 7,37
    • (2) Herstellung von Boc-D-Asp(OBzl)-Pro-Asp(OBzl)-D-Leu-Leu- OPac
  • Boc-Pro-Asp(OBzl)-D-Leu-Leu-OPac (2,07 g) wurde in 8 N HCl/Dioxan (10 ml) gelöst und die Lösung wurde 10 Minuten unter Eiskühlung gerührt, gefolgt vom Einengen. Anschließend wurde Ether unter Ausfällen von Kristallen zugesetzt. Die Kristalle wurden durch Filtration abgetrennt und getrocknet. Das sich daraus ergebende Produkt wurde in DMF (15 ml) gelöst und mit Eis gekühlt. Anschließend wurde TEA (0,75 ml) hinzugefügt. Boc-D- Asp(OBzl)-ONB [hergestellt aus Boc-D-Asp(OBzl)-OH (0,969), HONB (0,58 g) und DCC (0,67 g)] wurde hinzugesetzt, gefolgt vom Rühren über Nacht. Das sich daraus ergebende unlösliche Material wurde durch Filtration abgetrennt, gefolgt vom Einengen. Der Rückstand wurde in AcOEt gelöst und die Lösung wurde mit Wasser, 10% wäßriger Zitronensäure und 4% wäßrigem NaHCO&sub3; gewaschen. Nach dem Waschen mit Wasser wurde die Lösung mit Na&sub2;SO&sub4; getrocknet und eingeengt. Ether wurde dem sich daraus ergebenden Rückstand unter Abscheiden eines Niederschlages zugesetzt, der durch Filtration gesammelt wurde.
  • Ausbeute: 2,39 g (91,2%), Schmelzpunkt: 59-61ºC, Rf&sub1;: 0,48, Rf&sub2;: 0,74.
  • [α]D²&sup8; -14,3º (c = 1,07 in DMF)
  • Elementaranalyse: als C&sub5;&sub2;H&sub6;&sub7;N&sub6;O&sub1;&sub3;
  • Berechnet: C 64,38; H 6,96; N 7,22
  • Gefunden: C 64,17; H 7,18; N 7,39
    • (3) Herstellung von Boc-D-Trp-D-Asp(OBzl)-Pro-Asp(OBzl)-D-Leu- Leu-OPac
  • Boc-D-Asp(OBzl)-Pro-Asp(OBzl)-D-Leu-Leu-OPac (1,94 g) wurde in 8 N HCl/Dioxan (10 ml) gelöst und die Lösung wurde 10 Minuten unter Eiskühlung gerührt, gefolgt vom Einengen. Anschließend wurde Ether unter Ausfällen von Kristallen zugesetzt. Die Kristalle wurden durch Filtration abgetrennt und getrocknet. Das sich daraus ergebende Produkt wurde in DMF (15 ml) gelöst und mit Eis gekühlt. Anschließend wurde TEA (0,56 ml) hinzugefügt. Boc-D-Trp-ONB [hergestellt aus Boc-D-Trp-OH (0,67 g), HONB (0,43 g) und DCC (0,49 g)] wurde hinzugesetzt, gefolgt vom Rühren über Nacht. Das sich daraus ergebende unlösliche Material wurde durch Filtration abgetrennt, gefolgt vom Einengen. Der Rückstand wurde in AcOEt gelöst und die Lösung wurde mit Wasser, 10% wäßriger Zitronensäure und 4% wäßrigem NaHCO&sub3; gewaschen. Nach dem Waschen mit Wasser wurde die Lösung mit Na&sub2;SO&sub4; getrocknet und eingeengt. Ether wurde dem sich daraus ergebenden Rückstand unter Abscheiden eines Niederschlages zugesetzt, der durch Filtration gesammelt wurde.
  • Ausbeute: 1,82 g (78,7%), Schmelzpunkt: 102-104ºC, Rf&sub1;: 0,34, Rf&sub2;: 0,70.
  • [α]D²&sup8; +8,3º (c = 1,22 in DMF)
  • Elementaranalyse als C&sub6;&sub3;H&sub7;&sub7;N&sub7;O&sub1;&sub4;
  • Berechnet: C 65,44; H 6,71; N 8,48
  • Gefunden: C 65,32; H 6,86; N 8,53
    • (4) Herstellung von Boc-D-Trp-D-Asp(OBzl)-Pro-Asp(OBzl)-D-Leu- Leu-OH
  • Boc-D-Trp-D-Asp(OBzl)-Pro-Asp(OBzl)-D-Leu-Leu-OPac (1,39 g) wurde in 90% wäßriger AcOH (20 ml) gelöst und Zn-Pulver (3,92 g) wurde hinzugesetzt, gefolgt von 3 Stunden Rühren. Das Zn-Pulver wurde durch Filtration abgetrennt und das Filtrat wurde eingeengt. Dem Rückstand wurde zum Lösen AcOEt zugesetzt und die Lösung wurde mit 10% wäßriger Zitronensäure gewaschen. Nach dem Waschen mit Wasser wurde die Lösung mit Na&sub2;SO&sub4; getrocknet und eingeengt. Dem sich daraus ergebenden Rückstand wurde Ether unter Abscheiden eines Niederschlages zugesetzt, der durch Filtration gesammelt wurde.
  • Ausbeute: 1,22 g (97,9%), Schmelzpunkt: 110-112ºC, Rf&sub1;: 0,13, Rf&sub2;: 0,65.
  • [α]D²&sup8; +14,6º (c = 1,07 in DMF)
  • Elementaranalyse als C&sub5;&sub5;H&sub7;&sub1;N&sub7;O&sub1;&sub3;
  • Berechnet: C 63,63; H 6,89; N 9,44
  • Gefunden: C 63,62; H 7,17; N 9,25
    • (5) Herstellung von cyclo[-D-Asp-Pro-Asp-D-Leu-Leu-D-Trp-]
  • Boc-D-Trp-D-Asp(OBzl)-Pro-Asp(OBzl)-D-Leu-Leu-OH (0,53 g) wurde in DOM (20 ml) gelöst und die Lösung wurde mit Eis gekühlt. HONB (0,18 g) und DCC (0,21 g) wurden hinzugesetzt, gefolgt von 3 Stunden Rühren. Anschließend wurde der sich daraus ergebende DCU durch Filtration abgetrennt, gefolgt vom Einengen, und dem Rückstand wurde Ether unter Abscheiden eines Niederschlages zugesetzt, der durch Filtration gesammelt wurde. 8 N HCl/Dioxan (20 ml) wurde zum Lösen des Niederschlages unter Eiskühlung hinzugesetzt. Die sich daraus ergebende Lösung wurde 10 Minuten gerührt und eingeengt. Anschließend wurde dem Rückstand Ether unter Abscheiden eines Niederschlages zugesetzt, der durch Filtration gesammelt und getrocknet wurde. Der Niederschlag wurde in DMF (10 ml) gelöst und die sich daraus ergebende Lösung wurde während 30 Minuten tropfenweise TEA (0,7 ml) enthaltendem DMF (90 ml) zugesetzt, gefolgt vom Rühren über Nacht und Einengen. Dem sich daraus ergebenden Rückstand wurde Acetonitril-Ether unter Abscheiden eines Niederschlages zugesetzt, der durch Filtration gesammelt und getrocknet wurde. 92 mg dieses Niederschlages wurden in DMF (15 ml) gelöst und im Wasserstoffstrom unter Verwenden von Palladiumschwarz als Katalysator katalytisch reduziert. Der Katalysator wurde durch Filtration abgetrennt und das Filtrat wurde eingeengt. Der sich daraus ergebende Rückstand wurde in einer geringen Menge AcOH gelöst und anschließend wurde zum Ausführen der Lyophilisierung Wasser hinzugesetzt. Das lyophilisierte Produkt wurde schließlich durch Flüssigkeitschromatographie mittels einer YMC-D-ODS-5-Säule (2 cm x 25 cm) (Y.M.C.) unter Erhalten des gewünschten Materials gereinigt. Die Ausbeute war 15,2 mg (47,4%).
  • Aminosäurenanal. [6 N HCl, 110ºC, 24 Stunden Hydrolyse; die Zahlen in Klammern zeigen die theoretischen Werte]: Asp 2,00 (2), Pro 1,03 (1), Leu 2,11 (2).
  • LSIMS (M + H&spplus;) = 740, (theoretischer Wert) = 740
    • Beispiel 10 Herstellung von cyclo[-D-Asp-Asn(CH&sub2;Ph)-Asp-D-Leu-Leu-D-Trp-] (1) Herstellung von Boc-Asn(CH&sub2;Ph)-OBzl
  • Boc-Asp-OBzl (1,61 g, erworben von Watanabe Kagaku) wurde in Acetonitril (50 ml) gelöst und HONB (0,98 g) und DCC (1,13 g) wurden hinzugesetzt, gefolgt von 2 Stunden Rühren unter Eiskühlung. Das sich daraus ergebende unlösliche Material wurde durch Filtration abgetrennt und Benzylamin (1,09 ml) wurde hinzugesetzt, gefolgt vom Rühren über Nacht. Nach dem Einengen der Reaktionslösung wurde der Rückstand in AcOEt gelöst und die Lösung wurde mit Wasser, 10% wäßriger Zitronensäure und 4% wäßrigem NaHCO&sub3; gewaschen. Nach dem Waschen mit Wasser wurde die Lösung mit Na&sub2;SO&sub4; getrocknet und eingeengt. Dem sich ergebenden Rückstand wurde Ether unter Abscheiden eines Niederschlages zugesetzt, der durch Filtration gesammelt wurde.
  • Ausbeute: 1,90 g (92,5%), Schmelzpunkt: 116,5-117,0ºC, Rf&sub1;: 0,56, Rf&sub2;: 0,69.
  • [α]D²&sup5; -11,3º (c = 1,05 in DMF)
  • Elementaranalyse als C&sub3;H&sub2;&sub8;N&sub2;O&sub5;
  • Berechnet: C 66,97; H 6,84; N 6,79
  • Gefunden: C 67,25; H 6,95; N 7,07
    • (2) Herstellung von Boc-Asn(CH&sub2;Ph)-Asp(OBzl)-D-Leu-Leu-OPac
  • Boc-Asp(OBzl)-D-Leu-Leu-OPac (2,00 g) wurde in 8 N HCl/Dioxan (10 ml) gelöst und die Lösung wurde 10 Minuten unter Eiskühlung gerührt, gefolgt vom Einengen. Anschließend wurde Ether unter Ausfällen von Kristallen zugesetzt. Die Kristalle wurden durch Filtration abgetrennt und getrocknet. Das sich daraus ergebende Produkt wurde in DMF (15 ml) gelöst und mit Eis gekühlt. Anschließend wurde TEA (0,44 ml) hinzugefügt. Boc-Asn(CH&sub2;Ph)-ONB [hergestellt durch katalytisches Reduzieren von in (1) synthetisiertem Boc-Asn(CH&sub2;Ph)-OBzl (1,23 g) in Methanol (20 ml) in Gegenwart von 10% Pd-Kohle (20 mg) im Wasserstoffstrom bei Normaltemperatur und -druck, Abtrennen des Katalysators durch Filtration, gefolgt vom Einengen, Lösen des Rückstandes in Acetonitril und anschließend Zufügen von HONB (0,56 g) und DCC (0,65 g) unter Eiskühlung] wurde hinzugesetzt, gefolgt vom Rühren über Nacht. Das sich daraus ergebende unlösliche Material wurde durch Filtration abgetrennt, gefolgt vom Einengen. Der Rückstand wurde in AcOEt gelöst und die Lösung wurde mit Wasser, 10% wäßriger Zitronensäure und 4% wäßrigem NaHCO&sub3; gewaschen. Nach dem Waschen mit Wasser wurde die Lösung mit Na&sub2;SO&sub4; getrocknet und eingeengt. Ether wurde dem sich daraus ergebenden Rückstand unter Abscheiden eines Niederschlages zugesetzt, der durch Filtration gesammelt wurde.
  • Ausbeute: 2,26 g (86,7%), Schmelzpunkt: 155,0-157,0ºC, Rf&sub1;: 0,49, Rf&sub2;: 0,70
  • [α]D²&sup5; -37,1º (c = 1,05 in DMF)
  • Elementaranalyse: als C&sub4;&sub7;H&sub6;&sub1;N&sub5;O&sub1;&sub1;
  • Berechnet: C 64,74; H 7,05; N 8,03
  • Gefunden: C 64,80; H 7,19; N 8,25
    • (3) Herstellung von Boc-D-Asp(OBzl)-Asn(CH&sub2;Ph)-Asp(OBzl)-D-Leu- Leu-OPac
  • Boc-Asn(CH&sub2;Ph)-Asp(OBzl)-D-Leu-Leu-OPac (1,92 9) wurde in 8 N HC/Dioxan (10 ml) gelöst und die Lösung wurde 10 Minuten unter Eiskühlung gerührt, gefolgt vom Einengen. Anschließend wurde Ether unter Ausfällen von Kristallen zugesetzt. Die Kristalle wurden durch Filtration abgetrennt und getrocknet. Das sich daraus ergebende Produkt wurde in DMF (15 ml) gelöst und mit Eis gekühlt. Anschließend wurde TEA (0,32 ml) hinzugefügt. Boc-D- Asp(OBzl)-ONB [hergestellt aus Boc-D-Asp(OBzl)-OH (0,71 g), HONB (0,41 g) und DCC (0,46 g)] wurde hinzugesetzt, gefolgt vom Rühren über Nacht. Das sich daraus ergebende unlösliche Material wurde durch Filtration abgetrennt, gefolgt vom Einengen. Der Rückstand wurde in AcOEt gelöst und die Lösung wurde mit Wasser, 10% wäßriger Zitronensäure und 4% wäßrigem NaHCO&sub3; gewaschen. Nach dem Waschen mit Wasser wurde die Lösung mit Na&sub2;SO&sub4; getrocknet und eingeengt. Ether wurde dem sich daraus ergebenden Rückstand unter Abscheiden eines Niederschlages zugesetzt, der durch Filtration gesammelt wurde.
  • Ausbeute: 2,22 g (93,9%), Schmelzpunkt: 141,5-143,0ºC, Rf&sub1;: 0,57, Rf&sub2;: 0,75.
  • [α]D²&sup5; -22,7º (c = 1,01 in DMF)
  • Elementaranalyse: als C&sub5;&sub8;H&sub7;&sub2;N&sub6;O&sub1;&sub4;
  • Berechnet: C 64,67; H 6,74; N 7,80
  • Gefunden: C 64,46; H 6,86; N 7,91
    • (4) Herstellung von Boc-D-Trp-D-Asp(OBzl)-Asn(CH&sub2;Ph)-Asp(OBzl)- D-Leu-Leu-OPac
  • Boc-D-Asp(OBzl)-Asn(CH&sub2;Ph)-Asp(OBzl)-D-Leu-Leu-OPac (1,93 g) wurde in 8 N HCl/Dioxan (10 ml) gelöst und die Lösung wurde 10 Minuten unter Eiskühlung gerührt, gefolgt vom Einengen. Anschließend wurde Ether unter Ausfällen von Kristallen zugesetzt. Die Kristalle wurden durch Filtration abgetrennt und getrocknet.
  • Das sich daraus ergebende Produkt wurde in DMF (15 ml) gelöst und mit Eis gekühlt. Anschließend wurde TEA (0,27 ml) hinzugefügt. Boc-D-Trp-ONB [hergestellt aus Boc-D-Trp-OH (0,55 g), HONB (0,34 g) und DCC (0,39 g)) wurde hinzugesetzt, gefolgt vom Rühren über Nacht. Das sich daraus ergebende unlösliche Material wurde durch Filtration abgetrennt, gefolgt vom Einengen. Der Rückstand wurde in AcOEt gelöst und die Lösung wurde mit Wasser, 10% wäßriger Zitronensäure und 4% wäßrigem NaHCO&sub3; gewaschen. Nach dem Waschen mit Wasser wurde die Lösung mit Na&sub2;SO&sub4; getrocknet und eingeengt. Ether wurde dem sich daraus ergebenden Rückstand unter Abscheiden eines Niederschlages zugesetzt, der durch Filtration gesammelt wurde.
  • Ausbeute: 1,85 g (81,6%), Schmelzpunkt: 149,0-151,0ºC, Rf&sub1;: 0,47, Rf&sub2;: 0,71.
  • [α]D²&sup5; -9,8º (c = 1,03 in DMF)
  • Elementaranalyse als C&sub6;&sub9;H&sub8;&sub2;N&sub8;O&sub1;&sub5;
  • Berechnet: C 65,59; H 6,54; N 8,87
  • Gefunden: C 65,36; H 6,70; N 8,89
    • (5) Herstellung von Boc-D-Trp-D-Asp(OBzl)-Asn(CH&sub2;Ph)-Asp(OBzl)- D-Leu-Leu-OH
  • Boc-D-Trp-D-Asp(OBzl)-Asn(CH&sub2;Ph)-Asp(OBzl)-D-Leu-Leu-OPac (500 mg) wurde in 90% wäßriger AcOH (20 ml) gelöst und Zn-Pulver (1,30 g) wurde hinzugesetzt, gefolgt von 3 Stunden Rühren. Das Zn-Pulver wurde durch Filtration abgetrennt und das Filtrat wurde eingeengt. Dem Rückstand wurde zum Lösen AcOEt zugesetzt und die Lösung wurde mit 10% wäßriger Zitronensäure gewaschen. Nach dem Waschen mit Wasser wurde die Lösung mit Na&sub2;SO&sub4; getrocknet und eingeengt. Dem sich daraus ergebenden Rückstand wurde Ether unter Abscheiden eines Niederschlages zugesetzt, der durch Filtration gesammelt wurde.
  • Ausbeute: 436 mg (96,1%), Schmelzpunkt: 153,0-155,0ºC, Rf&sub1;: 0,02, Rf&sub2;: 0,67.
  • [α]D²&sup5; -3,2º (c = 1,02 in DMF)
  • Elementaranalyse: als C&sub6;&sub1;H&sub7;&sub6;N&sub8;O&sub1;&sub4;
  • Berechnet: C 63,97; H 6,69; N 9,78
  • Gefunden: C 63,85; H 6,74; N 9,51
    • (6) Herstellung von cyclo[-D-Asp-Asn(CH&sub2;Ph)-Asp-D-Leu-Leu-D- Trp-]
  • Boc-D-Trp-D-Asp(OBzl)-Asn(CH&sub2;Ph)-Asp(OBzl)-D-Leu-Leu-OH (396 mg) wurde in DOM (20 ml) gelöst und die Lösung wurde mit Eis gekühlt. HONB (0,14 g) und DCC (0,16 g) wurden hinzugesetzt, gefolgt von 3 Stunden Rühren. Anschließend wurde der sich daraus ergebende DCU durch Filtration abgetrennt, gefolgt vom Einengen, und dem Rückstand wurde Ether unter Abscheiden eines Niederschlages zugesetzt, der durch Filtration gesammelt wurde. 8 N HCl/Dioxan (20 ml) wurde zum Lösen des Niederschlages unter Eiskühlung hinzugesetzt. Die sich daraus ergebende Lösung wurde 10 Minuten gerührt und eingeengt. Anschließend wurde dem Rückstand Ether unter Abscheiden eines Niederschlages zugesetzt, der durch Filtration gesammelt und getrocknet wurde. Der Niederschlag wurde in DMF (10 ml) gelöst und die sich daraus ergebende Lösung wurde während 30 Minuten tropfenweise TEA (0,55 ml) enthaltendem DMF (90 ml) zugesetzt, gefolgt vom Rühren über Nacht und Einengen. Dem sich daraus ergebenden Rückstand wurde Acetonitril-Ether unter Abscheiden eines Niederschlages zugesetzt, der durch Filtration gesammelt und getrocknet wurde. 50 mg dieses Niederschlages wurden in DMF (15 ml) gelöst und im Wasserstoffstrom unter Verwenden von Palladiumschwarz als Katalysator katalytisch reduziert. Der Katalysator wurde durch Filtration abgetrennt und das Filtrat wurde eingeengt. Der sich daraus ergebende Rückstand wurde in einer geringen Menge AcOH gelöst und anschließend wurde zum Ausführen der Lyophilisierung Wasser hinzusetzt. Das lyophilisisierte Produkt wurde schließlich durch Flüssigkeitschromatographie mittels einer YMC-D-ODS- 5-Säule (2 cm x 25 cm) (Y.M.C.) unter Erhalten des gewünschten Materials gereinigt. Die Ausbeute war 19,5 mg (23,8%).
  • Aminosäurenanal. [6 N HCl, 110ºC, 24 Stunden Hydrolyse; die Zahlen in Klammern zeigen die theoretischen Werte): Asp 3,00 (3), Leu 2,00 (2).
  • LSIMS (M + H&spplus;) = 847, (theoretischer Wert) = 847
    • Beispiel 11 Herstellung von cyclo[-D-Asp-Asn(CH&sub2;CH&sub2;Ph)-Asp-D-Leu-Leu-D-Trp-] (1) Herstellung von Boc-Asn(CH&sub2;CH&sub2;Ph)-OBzl
  • Boc-Asp-OBzl (1,61 g, erworben von Watanabe Kagaku) wurde in Acetonitril (50 ml) gelöst und HONB (0,98 g) und DCC (1,13 g) wurden hinzugesetzt, gefolgt von 2 Stunden Rühren unter Eiskühlung. Das sich daraus ergebende unlösliche Material wurde durch Filtration abgetrennt und β-Phenethylamin (0,79 ml) wurde hinzugesetzt, gefolgt vom Rühren über Nacht. Nach dem Einengen der Reaktionslösung wurde der Rückstand in AcOEt gelöst und die Lösung wurde mit Wasser, 10% wäßriger Zitronensäure und 4% wäßrigem NaHCO&sub3; gewaschen. Nach dem Waschen mit Wasser wurde die Lösung mit Na&sub2;SO&sub4; getrocknet und eingeengt. Dem sich daraus ergebenden Rückstand wurde Ether unter Abscheiden eines Niederschlages zugesetzt, der durch Filtration gesammelt wurde.
  • Ausbeute: 1,96 g (92,3%), Schmelzpunkt: 117,0-118,5ºC, Rf&sub1;: 0,53, Rf&sub2;: 0,68.
  • [α]D²&sup5; -7,3º (C = 1,00 in DMF)
  • Elementaranalyse als C&sub2;&sub4;H&sub3;&sub0;N&sub2;O&sub5;
  • Berechnet: C 67,59; H 7,09; N 6,57
  • Gefunden: C 67,68; H 7,15; N 6,75
    • (2) Herstellung von Boc-Asn(CH&sub2;CH&sub2;Ph)-Asp(OBzl)-D-Leu-Leu-OPac
  • Boc-Asp(OBzl)-D-Leu-Leu-OPac (2,00 g) wurde in 8 N HCl/Dioxan (10 ml) gelöst und die Lösung wurde 10 Minuten unter Eiskühlung gerührt, gefolgt vom Einengen. Anschließend wurde Ether unter Ausfällen von Kristallen zugesetzt. Die Kristalle wurden durch Filtration abgetrennt und getrocknet. Das sich daraus ergebende Produkt wurde in DMF (15 ml) gelöst und mit Eis gekühlt. Anschließend wurde TEA (0,44 ml) hinzugefügt. Boc-Asn(CH&sub2;CH&sub2;Ph)-ONB [hergestellt durch katalytisches Reduzieren von in (1) synthetisiertem Boc-Asn(CH&sub2;CH&sub2;Ph)-OBzl (1,28 g) in Methanol (20 ml) in Gegenwart von 10% Pd-Kohle (20 mg) im Wasserstoffstrom bei Normaltemperatur und -druck, Abtrennen des Katalysators durch Filtration, gefolgt vom Einengen, Lösen des Rückstandes in Acetonitril und anschließend Zufügen von HONB (0,56 g) und DCC (0,65 g) unter Eiskühlung] wurde hinzugesetzt, gefolgt vom Rühren über Nacht. Das sich daraus ergebende unlösliche Material wurde durch Filtration abgetrennt, gefolgt vom Einengen. Der Rückstand wurde in AcOEt gelöst und die Lösung wurde mit Wasser, 10% wäßriger Zitronensäure und 4% wäßrigem NaHCO&sub3; gewaschen. Nach dem Waschen mit Wasser wurde die Lösung mit Na&sub2;SO&sub4; getrocknet und eingeengt. Ether wurde dem sich daraus ergebenden Rückstand unter Abscheiden eines Niederschlages zugesetzt, der durch Filtration gesammelt wurde.
  • Ausbeute: 2,35 g (88,7%), Schmelzpunkt: 162,0-164,0ºC, Rf&sub1;: 0,59, Rf&sub2;: 0,65
  • [α]D²&sup5; -36,7º (c = 1,03 in DMF)
  • Elementaranalyse als C&sub4;&sub8;H&sub6;&sub3;N&sub5;O&sub1;&sub1;
  • Berechnet: C 65,07; H 7,17; N 7,90
  • Gefunden: C 65,15; H 7,20; N 8,08
    • (3) Herstellung von Boc-D-Asp(OBzl)-Asn(CH&sub2;CH&sub2;Ph)-Asp(OBzl)-D- Leu-Leu-OPac
  • Boc-Asn(CH&sub2;CH&sub2;Ph)-ASP(OBzl)-D-Leu-Leu-OPac (1,95 g) wurde in 8 N HCl/Dioxan (10 ml) gelöst und die Lösung wurde 10 Minuten unter Eiskühlung gerührt, gefolgt vom Einengen. Anschließend wurde Ether unter Ausfällen von Kristallen zugesetzt. Die Kristalle wurden durch Filtration abgetrennt und anschließend getrocknet. Das sich daraus ergebende Produkt wurde in DMF (15 ml) gelöst und mit Eis gekühlt. Anschließend wurde TEA (0,32 ml) hinzugefügt. Boc-D-Asp(OBzl)-ONB [hergestellt aus Boc-D-Asp(OBzl)-OH (0,71 g), HONB (0,41 g) und DCC (0,46 g)) wurde hinzugesetzt, gefolgt vom Rühren über Nacht. Das sich daraus ergebende unlösliche Material wurde durch Filtration abgetrennt, gefolgt vom Einengen. Der Rückstand wurde in AcOEt gelöst und die Lösung wurde mit Wasser, 10% wäßriger Zitronensäure und 4% wäßrigem NaHCO&sub3; gewaschen. Nach dem Waschen mit Wasser wurde die Lösung mit Na&sub2;SO&sub4; getrocknet und eingeengt. Ether wurde dem sich daraus ergebenden Rückstand unter Abscheiden eines Niederschlages zugesetzt, der durch Filtration gesammelt wurde.
  • Ausbeute: 2,24 g (93,5%), Schmelzpunkt: 173,0-175,0ºC, Rf&sub1;: 0,39, Rf&sub2;: 0,66.
  • [α]D²&sup5; -21,6º (c = 1,02 in DMF)
  • Elementaranalyse als C&sub5;&sub9;H&sub7;&sub4;N&sub6;O&sub1;&sub4;
  • Berechnet: C 64,94; H 6,83; N 7,70
  • Gefunden: C 64,82; H 6,93; N 7,85
    • (4) Herstellung von Boc-D-Trp-D-Asp(OBzl)-Asn(CH&sub2;CH&sub2;Ph)- Asp(OBzl)-D-Leu-Leu-OPac
  • Boc-D-Asp(OBzl)-Asn(CH&sub2;CH&sub2;Ph)-Asp(OBzl)-D-Leu-Leu-OPac (1,95 9) wurde in 8 N HCl/Dioxan (10 ml) gelöst und die Lösung wurde 10 Minuten unter Eiskühlung gerührt, gefolgt vom Einengen. Anschließend wurde Ether unter Ausfällen von Kristallen zugesetzt. Die Kristalle wurden durch Filtration abgetrennt und anschließend getrocknet. Das sich daraus ergebende Produkt wurde in DMF (15 ml) gelöst und mit Eis gekühlt. Anschließend wurde TEA (0,27 ml) hinzugefügt. Boc-D-Trp-ONB [hergestellt aus Boc-D-Trp-OH (0,55 g), HONB (0,34 g) und DCC (0,39 g)] wurde hinzugesetzt, gefolgt vom Rühren über Nacht. Das sich daraus ergebende unlösliche Material wurde durch Filtration abgetrennt, gefolgt vom Einengen. Der Rückstand wurde in AcOEt gelöst und die Lösung wurde mit Wasser, 10% wäßriger Zitronensäure und 4% wäßrigem NaHCO&sub3; gewaschen. Nach dem Waschen mit Wasser wurde die Lösung mit Na&sub2;SO&sub4; getrocknet und eingeengt. Ether wurde dem sich daraus ergebenden Rückstand unter Abscheiden eines Niederschlages zugesetzt, der durch Filtration gesammelt wurde.
  • Ausbeute: 2,07 g (90,5%), Schmelzpunkt: 139,5-141,0ºC, Rf&sub1;: 0,24, Rf&sub2;: 0,65.
  • [α]D²&sup5; -7,6º (c = 1,00 in DMF)
  • Elementaranalyse als C&sub7;&sub0;H&sub8;&sub4;N&sub8;O&sub1;&sub5;
  • Berechnet: C 65,81; H 6,63; N 8,77
  • Gefunden: C 65,58; H 6,71; N 8,94
    • (5) Herstellung von Boc-D-Trp-D-Asp(OBzl)-Asn(CH&sub2;CH&sub2;Ph)- Asp(OBzl)-D-Leu-Leu-OH
  • Boc-D-Trp-D-Asp(OBzl)-Asn(CH&sub2;CH&sub2;Ph)-Asp(OBzl)-D-Leu-Leu-OPac (500 mg) wurde in 90% wäßriger AcOH (20 ml) gelöst und Zn-Pulver (1,28 g) wurde hinzugesetzt, gefolgt von 3 Stunden Rühren. Das Zn-Pulver wurde durch Filtration abgetrennt und das Filtrat wurde eingeengt. Dem Rückstand wurde zum Lösen AcOEt zugesetzt und die Lösung wurde mit 10% wäßriger Zitronensäure gewaschen. Nach dem Waschen mit Wasser wurde die Lösung mit Na&sub2;SO&sub4; getrocknet und eingeengt. Dem sich daraus ergebenden Rückstand wurde Ether unter Abscheiden eines Niederschlages zugesetzt, der durch Filtration gesammelt wurde.
  • Ausbeute: 441 mg (97,3%), Schmelzpunkt: 170,0-172,0ºC, Rf&sub1;: 0,03, Rf&sub2;: 0,67.
  • [α]D²&sup5; -1,8º (c = 1,03 in DMF)
  • Elementaranalyse als C&sub6;&sub2;H&sub7;&sub8;N&sub8;O&sub1;&sub4;
  • Berechnet: C 64,23; H 6,78; N 9,67
  • Gefunden: C 64,08; H 6,86; N 9,55
    • (6) Herstellung von cyclo[-D-Asp-Asn(CH&sub2;CH&sub2;Ph)-Asp-D-Leu-Leu-D- Trp-]
  • Boc-D-Trp-D-Asp(OBzl)-Asn(CH&sub2;CH&sub2;Ph)-Asp(OBzl)-D-Leu-Leu-OH (401 mg) wurde in DOM (20 ml) gelöst und die Lösung wurde mit Eis gekühlt. HONB (0,14 g) und DCC (0,16 g) wurden hinzugesetzt, gefolgt von 3 Stunden Rühren. Anschließend wurde der sich daraus ergebende DCU durch Filtration abgetrennt, gefolgt vom Einengen, und dem Rückstand wurde Ether unter Abscheiden eines Niederschlages zugesetzt, der durch Filtration gesammelt wurde. 8 N HCl/Dioxan (20 ml) wurde zum Lösen des Niederschlages unter Eiskühlung hinzugesetzt. Die sich daraus ergebende Lösung wurde 10 Minuten gerührt und eingeengt. Anschließend wurde dem Rückstand Ether unter Abscheiden eines Niederschlages zugesetzt, der durch Filtration gesammelt und getrocknet wurde. Der Niederschlag wurde in DMF (10 ml) gelöst und die sich daraus ergebende Lösung wurde während 30 Minuten tropfenweise TEA (0,55 ml) enthaltendem DMF (90 ml) zugesetzt, gefolgt vom Rühren über Nacht und Einengen. Dem sich daraus ergebenden Rückstand wurde Acetonitril-Ether ünter Abscheiden eines Niederschlages zugesetzt, der durch Filtration gesammelt und getrocknet wurde. 50 mg dieses Niederschlages wurden in DMF (15 ml) gelöst und im Wasserstoffstrom unter Verwenden von Palladiumschwarz als Katalysator katalytisch reduziert. Der Katalysator wurde durch Filtration abgetrennt und das Filtrat wurde eingeengt. Der sich daraus ergebende Rückstand wurde in einer geringen Menge AcOH gelöst und anschließend wurde zum Ausführen der Lyophilisierung Wasser hinzusetzt. Das lyophilisisierte Produkt wurde schließlich durch Flüssigkeitschromatographie mittels einer YNC-D-ODS- 5-Säule (2 cm x 25 cm) (Y.M.C.) unter Erhalten des gewünschten Materials gereinigt. Die Ausbeute war 20,5 mg (24,1%).
  • Aminosäurenanal. [6 N HCl, 110ºC, 24 Stunden Hydrolyse; die Zahlen in Klammern zeigen die theoretischen Werte]: Asp 3,00 (3), Leu 2,04 (2).
  • LSIMS (M + H&spplus;) = 861, (theoretischer Wert) = 861
    • Beispiel 12 Herstellung von cyclo[-D-Asp-Asn(CH&sub2;CH&sub2;-Ind)-Asp-D-Leu-Leu-D- Trp-] (1) Herstellung von Boc-Asn(CH&sub2;CH&sub2;-Ind)-OBzl
  • Boc-Asp-OBzl (1,61 g, erworben von Watanabe Kagaku) wurde in Acetonitril (50 ml) gelöst und HONB (0,98 g) und DCC (1,13 g) wurden hinzugesetzt, gefolgt von 2 Stunden Rühren unter Eiskühlung. Das sich daraus ergebende unlösliche Material wurde durch Filtration abgetrennt und Tryptaminhydrochlond (0,98 ml) und TEA (1,04 ml) enthaltendes DMF (20 ml) wurde hinzugesetzt, gefolgt vom Rühren über Nacht. Nach dem Einengen der Reaktionslösung wurde der Rückstand in AcOEt gelöst und die Lösung wurde mit Wasser, 10% wäßriger Zitronensäure und 4% wäßrigem NaHCO&sub3; gewaschen. Nach dem Waschen mit Wasser wurde die Lösung mit Na&sub2;SO&sub4; getrocknet und eingeengt. Dem sich daraus ergebenden Rückstand wurde Ether unter Erhalten des gewünschten Produktes als hellgelbes glasartiges Material zugesetzt.
  • Ausbeute: 1,95 g (84,1%), Rf&sub1;: 0,42, Rf&sub2;: 0,67.
  • LSIMS (M + H&spplus;) = 466, (theoretischer Wert) = 466
    • (2) Herstellung von Boc-Asn(CH&sub2;CH&sub2;-Ind)-Asp(OBzl)-D-Leu-Leu-OPac
  • Boc-Asp(OBzl)-D-Leu-Leu-OPac (2,00 g) wurde in 8 N HCl/Dioxan (10 ml) gelöst und die L5 sung wurde 10 Minuten unter Eiskühlung gerührt, gefolgt vom Einengen. Anschließend wurde Ether unter Ausfällen von Kristallen zugesetzt. Die Kristalle wurden durch Filtration abgetrennt und anschließend getrocknet. Das sich daraus ergebende Produkt wurde in DMF (15 ml) gelöst und mit Eis gekühlt. Anschließend wurde TEA (0,44 ml) hinzugefügt. Boc- Asn(CH&sub2;CH&sub2;-Ind)-ONB [hergestellt durch katalytisches Reduzieren von in (1) synthetisiertem Boc-Asn(CH&sub2;CH&sub2;-Ind)-OBzl (1,35 g) in Methanol (20 ml) in Gegenwart von 10% Pd-Kohle (20 mg) im Wasserstoffstrom bei Normaltemperatur und -druck, Abtrennen des Katalysators durch Filtration, gefolgt vom Einengen, Lösen des Rückstandes in Acetonitril und anschließend Zufügen von HONB (0,56 g) und DCC (0,65 g) unter Eiskühlung] wurde hinzugesetzt, gefolgt vom Rühren über Nacht. Das sich daraus ergebende unlösliche Material wurde durch Filtration abgetrennt, gefolgt vom Einengen. Der Rückstand wurde in AcOEt gelöst und die Lösung wurde mit Wasser, 10% wäßriger Zitronensäure und 4% wäßrigem NaHCO&sub3; gewaschen. Nach dem Waschen mit Wasser wurde die Lösung mit Na&sub2;SO&sub4; getrocknet und eingeengt. Ether wurde dem sich daraus ergebenden Rückstand unter Abscheiden eines Niederschlages zugesetzt, der durch Filtration gesammelt wurde.
  • Ausbeute: 2,16 g (78,1%), Schmelzpunkt: 141,0-143,0ºC, Rf&sub1;: 0,46, Rf&sub2;: 0,73
  • [α]D²&sup5; -35,8º (c = 1,06 in DMF)
  • Elementaranalyse als C&sub5;&sub0;H&sub6;&sub4;N&sub6;O&sub1;&sub1;
  • Berechnet: C 64,92; H 6,97; N 9,08
  • Gefunden: C 64,63; H 7,11; N 8,96
    • (3) Herstellung von Boc-D-Asp(OBzl)-Asn(CH&sub2;CH&sub2;-Ind)-Asp(OBzl)-D- Leu-Leu-OPac
  • Boc-Asn(CH&sub2;CH&sub2;-Ind)-Asp(OBzl)-D-Leu-Leu-OPac (2,00 g) wurde in 8 N HCl/Dioxan (10 ml) gelöst und die Lösung wurde 10 Minuten unter Eiskühlung gerührt, gefolgt vom Einengen. Anschließend wurde Ether unter Ausfällen von Kristallen zugesetzt. Die Kristalle wurden durch Filtration abgetrennt und getrocknet. Das sich daraus ergebende Produkt wurde in DMF (15 ml) gelöst und mit Eis gekühlt. Anschließend wurde TEA (0,32 ml) hinzugefügt. Boc-D-Asp(OBzl)-ONB [hergestellt aus Boc-D-Asp(OBzl)-OH (0,71 9)1 HONB (0,41 g) und DCC (0,46 g)] wurde hinzugesetzt, gefolgt vom Rühren über Nacht. Das sich daraus ergebende unlösliche Material wurde durch Filtration abgetrennt, gefolgt vom Einengen. Der Rückstand wurde in AcOEt gelöst und die Lösung wurde mit Wasser, 10% wäßriger Zitronensäure und 4% wäßrigem NaHCO&sub3; gewaschen. Nach dem Waschen mit Wasser wurde die Lösung mit Na&sub2;SO&sub4; getrocknet und eingeengt. Ether wurde dem sich daraus ergebenden Rückstand unter Abscheiden eines Niederschlages zugesetzt, der durch Filtration gesammelt wurde.
  • Ausbeute: 2,12 g (85,4%), Schmelzpunkt: 112,5-114,0ºC, Rf&sub1;: 0,50, Rf&sub2;: 0,70.
  • [α]D²&sup5; -22,0º (c 1,02 in DMF)
  • Elementaranalyse als C&sub6;&sub1;H&sub7;&sub5;N&sub7;O&sub1;&sub4;
  • Berechnet: C 64,82; H 6,69; N 8,67
  • Gefunden: C 64,66; H 6,86; N 8,55
    • (4) Herstellung von Boc-D-Trp-D-Asp(OBzl)-Asn(CH&sub2;CH&sub2;-Ind)- Asp(OBzl)-D-Leu-Leu-OPac
  • Boc-D-Asp(OBzl)-Asn(CH&sub2;CH&sub2;-Ind)-Asp(OBzl)-D-Leu-Leu-OPac (2,00 9) wurde in 8 N HCl/Dioxan (10 ml) gelöst und die Lösung wurde 10 Minuten unter Eiskühlung gerührt, gefolgt vom Einengen. Anschließend wurde Ether unter Ausfällen von Kristallen zugesetzt. Die Kristalle wurden durch Filtration abgetrennt und getrocknet. Das sich daraus ergebende Produkt wurde in DMF (15 ml) gelöst und mit Eis gekühlt. Anschließend wurde TEA (0,27 ml) hinzugefügt. Boc-D-Trp-ONB [hergestellt aus Boc-D-Trp-OH (0,55 g), HONB (0,34 g) und DCC (0,39 g)] wurde hinzugesetzt, gefolgt vom Rühren über Nacht. Das sich daraus ergebende unlösliche Material wurde durch Filtration abgetrennt, gefolgt vom Einengen. Der Rückstand wurde in AcEOt gelöst und die Lösung wurde mit Wasser, 10% wäßriger Zitronensäure und 4% wäßrigem NaHCO&sub3; gewaschen. Nach dem Waschen mit Wasser wurde die Lösung mit Na&sub2;SO&sub4; getrocknet und eingeengt. Ether wurde dem sich daraus ergebenden Rückstand unter Abscheiden eines Niederschlages zugesetzt, der durch Filtration gesammelt wurde.
  • Ausbeute: 2,11 g (89,5%), Schmelzpunkt: 113,0-115,0ºC, Rf&sub1;: 0,42, Rf&sub2;: 0,68.
  • [α]D²&sup5; -9,2º (c = 1,04 in DMF)
  • Elementaranalyse: als C&sub7;&sub2;H&sub8;&sub5;N&sub9;O&sub1;&sub5;
  • Berechnet: C 65,69; H 6,51; N 9,58
  • Gefunden: C 65,60; H 6,60; N 9,49
    • (5) Herstellung von Boc-D-Trp-D-Asp(OBzl)-Asn(CH&sub2;CH&sub2;-Ind)- Asp(OBzl)-D-Leu-Leu-OH
  • Boc-D-Trp-D-Asp(OBzl)-Asn(CH&sub2;CH&sub2;-Ind)-Asp(OBzl)D-Leu-Leu-OPac (500 mg) wurde in 90% wäßriger AcOH (20 ml) gelöst und Zn-Pulver (1,26 g) wurde hinzugesetzt, gefolgt von 3 Stunden Rühren. Das Zn-Pulver wurde durch Filtration abgetrennt und das Filtrat wurde eingeengt. Dem Rückstand wurde zum Losen AcOEt zugesetzt und die Lösung wurde mit 10% wäßriger Zitronensäure gewaschen. Nach dem Waschen mit Wasser wurde die Lösung mit Na&sub2;SO&sub4; getrocknet und eingeengt. Dem sich daraus ergebenden Rückstand wurde Ether unter Abscheiden eines Niederschlages zugesetzt, der durch Filtration gesammelt wurde.
  • Ausbeute: 426 mg (92,5%), Schmelzpunkt: 115,0-117,5ºC, Rf&sub1;: 0,01, Rf&sub2;: 0,65.
  • [α]D²&sup5; -1,4º (c = 1,06 in DMF)
  • Elementaranalyse als C&sub6;&sub4;H&sub7;&sub9;N&sub9;O&sub1;&sub4;
  • Berechnet: C 64,15; H 6,64; N 10,52
  • Gefunden: C 64,07; H 6,74; N 10,38
    • (6) Herstellung von cyclo[-D-Asp-Asn(CH&sub2;CH&sub2;-Ind)-Asp-D-Leu-Leu- D-Trp-)
  • Boc-D-Trp-D-Asp(OBzl)-Asn(CH&sub2;CH&sub2;-Ind)-Asp(OBzl)-D-Leu-Leu-OH (386 mg) wurde in DOM (20 ml) gelöst und die Lösung wurde mit Eis gekühlt. HONB (0,14 g) und DCC (0,16 g) wurden hinzugesetzt, gefolgt von 3 Stunden Rühren. Anschließend wurde der sich daraus ergebende DCU durch Filtration abgetrennt, gefolgt vom Einengen, und dem Rückstand wurde Ether unter Abscheiden eines Niederschlages zugesetzt, der durch Filtration gesammelt wurde. 8 N HCl/Dioxan (20 ml) wurde zum Lösen des Niederschlages unter Eiskühlung hinzugesetzt. Die sich daraus ergebende Lösung wurde 10 Minuten gerührt und eingeengt. Anschließend wurde dem Rückstand Ether unter Abscheiden eines Niederschlages zugesetzt, der durch Filtration gesammelt und getrocknet wurde. Der Niederschlag wurde in DMF (10 ml) gelöst und die sich daraus ergebende Lösung wurde während 30 Minuten tropfenweise TEA (0,54 ml) enthaltendem DMF (90 ml) zugesetzt, gefolgt vom Rühren über Nacht und Einengen. Dem sich daraus ergebenden Rückstand wurde Acetonitril-Ether unter Abscheiden eines Niederschlages zugesetzt, der durch Filtration gesammelt und getrocknet wurde. 40 mg dieses Niederschlages wurden in DMF (15 ml) gelöst und im Wasserstoffstrom unter Verwenden von Palladiumschwarz als Katalysator katalytisch reduziert. Der Katalysator wurde durch Filtration abgetrennt und das Filtrat wurde anschließend eingeengt. Der sich daraus ergebende Rückstand wurde in einer geringen Menge AcOH gelöst und danach wurde zum Ausführen der Lyophilisierung Wasser hinzusetzt. Das lyophilisisierte Produkt wurde schließlich durch Flüssigkeitschromatographie mittels einer YMC- D-ODS-5-Säule (2 cm x 25 cm) (Y.M.C.) unter Erhalten des gewünschten Materials gereinigt. Die Ausbeute war 19,6 mg (19,4%).
  • Aminosäurenanal. [6 N HCl, 110ºC, 24 Stunden Hydrolyse; die Zahlen in Klammern zeigen die theoretischen Werte] Asp 3,00 (3), Leu 2,35 (2).
  • LSIMS (M + H&spplus;) = 900, (theoretischer Wert) = 900
    • Beispiel 13 Herstellung von cyclo[-D-Asp-Hyp(Bzl)-Asp-D-Leu-Leu-D-Trp-] (1) Herstellung von Boc-Hyp(Bzl)-Asp(OBzl)-D-Leu-Leu-OPac
  • Boc-Asp(OBzl)-D-Leu-Leu-OPac (2,34 g) wurde in Dioxan (1,0 ml) gelöst und die Lösung wurde mit Eis gekühlt. 10 N HCl/Dioxan (5,0 ml) wurde hinzusetzt, gefolgt von 30 Minuten Rühren. Das Lösungsmittel wurde durch Destillation bei Raumtemperatur entfernt und dem Rückstand wurde unter Abscheiden eines Niederschlages Ether zugesetzt, der durch Filtration gesammelt und unter vermindertem Druck getrocknet wurde. Das sich daraus ergebende Produkt wurde in DMF (15 ml) gelöst und unter Rühren und Eiskühlung mit TEA neutralisiert. Aus Boc-Hyp(Bzl)-OH (1,57 g), HONB (1,16 g) und DCC (1,55 g) hergestelltes Boc-Hyp(Bzl)- ONB wurde hinzugesetzt und über Nacht bei Raumtemperatur gerührt. Das sich daraus ergebende unlösliche Material wurde durch Filtration entfernt und das Filtrat wurde eingeengt. Der Rückstand wurde in AcOEt gelöst und die Lösung wurde nacheinander mit 10% wäßriger Zitronensäure, 4% wäßrigem NaHCO&sub3; und einer gesättigten Natriumchloridlösung gewaschen. Nach dem Trocknen mit Na&sub2;SO&sub4; wurde das Lösungsmittel durch Destillation entfernt und dem Rückstand wurde unter Abscheiden eines Niederschlages Ether zugesetzt, der durch Filtration gesammelt wurde. Der Niederschlag wurde aus AcOEt-Petroleum umkristallisiert.
  • Ausbeute: 4,01 g (92,0%), Schmelzpunkt: 73,0-74,0ºC, Rf&sub1;: 0,44, Rf&sub2;: 0,72.
  • [α]D²&sup5; -33,3º (c = 1,00 in DMF)
  • Elementaranalyse als C&sub4;&sub8;H&sub6;&sub2;N&sub4;O&sub1;&sub1;
  • Berechnet: C 66,19; H 7,17; N 6,43
  • Gefunden: C 66,19; H 7,33; N 6,68
    • (2) Herstellung von Boc-D-Asp(OBzl)-Hyp(Bzl)-Asp(OBzl)-D-Leu- Leu-OPac
  • Boc-Hyp(Bzl)-Asp(OBzl)-D-Leu-Leu-OPac (3,49 g) wurde in Dioxan (1,0 ml) gelöst und die Lösung wurde mit Eis gekühlt. 10 N HCl/Dioxan (5,0 ml) wurde hinzusetzt, gefolgt von 30 Minuten Rühren. Das Lösungsmittel wurde durch Destillation bei Raumtemperatur entfernt und dem Rückstand wurde Ether unter Abscheiden eines Niederschlages zugesetzt, der durch Filtration gesammelt und unter vermindertem Druck getrocknet wurde. Das sich daraus ergebende Produkt wurde in DMF (15 ml) gelöst und unter Rühren und Eiskühlung mit TEA neutralisiert. Aus Boc-D-Asp(OBzl)-OH (1,55 g), HONB (1,08 g) und DCC (1,44 g) hergestelltes Boc- Asp(OBzl)-ONB wurde hinzugesetzt und über Nacht bei Raumtemperatur gerührt. Das sich daraus ergebende unlösliche Material wurde durch Filtration entfernt und das Filtrat wurde eingeengt. Der Rückstand wurde in AcOEt gelöst und die Lösung wurde nacheinander mit 10% wäßriger Zitronensäure, 4% wäßrigem NaHCO&sub3; und einer gesättigten Natriumchloridlösung gewaschen. Nach dem Trocknen mit Na&sub2;SO&sub4; wurde das Lösungsmittel durch Destillation entfernt und der Rückstand wurde durch Kieselgelchromatographie (Merck Kieselgel 60. 2% Methanol/Chloroform) unter Erhalten eines öligen Produktes gereinigt.
  • Ausbeute: 3,63 g (84,3%), Rf&sub1;: 0,42, Rf&sub2;: 0,74.
  • LSIMS (M + H&spplus;) = 1077, (theoretischer Wert) = 1077
    • (3) Herstellung von Boc-D-Trp-D-Asp(OBzl)-Hyp(Bzl)-Asp(OBzl)-D- Leu-Leu-OPac
  • Boc-D-Asp(OBzl)-Hyp(Bzl)-Asp(OBzl)-D-Leu-Leu-OPac (3,77 g) wurde in Dioxan (1,0 ml) gelöst und die Lösung wurde mit Eis gekühlt. 10 N HCl/Dioxan (5,0 ml) wurde hinzusetzt, gefolgt von 30 Minuten Rühren. Das Lösungsmittel wurde durch Destillation bei Raumtemperatur entfernt und dem Rückstand wurde Ether unter Abscheiden eines Niederschlages zugesetzt, der durch Filtration gesammelt und unter vermindertem Druck getrocknet wurde. Das sich daraus ergebende Produkt wurde in DMF (15 ml) gelöst und unter Rühren und Eiskühlung mit TEA neutralisiert. Aus Boc-D- Trp-OH (1,17 g), HONB (752 mg) und DCC (939 mg) hergestelltes Boc-D-Trp-ONB wurde hinzugesetzt und über Nacht bei Raumtemperatur gerührt. Das sich daraus ergebende unlösliche Material wurde durch Filtration entfernt und das Filtrat wurde eingeengt. Der Rückstand wurde in AcOEt gelöst und die Lösung wurde nacheinander mit 10% wäßriger Zitronensäure, 4% wäßrigem NaHCO&sub3; und einer gesättigten Natriumchloridlösung gewaschen. Nach dem Trocknen mit Na&sub2;SO&sub4; wurde das Lösungsmittel durch Destillation entfernt und der Rückstand wurde durch Kieselgelchromatographie (Merck Kieselgel 60. 2% Methanol/Chloroform) gereinigt. Anschließend wurde Ether-Petrolether unter Abscheiden eines Niederschlages zugesetzt, der durch Filtration gesammelt wurde.
  • Ausbeute: 3,44 g (91,4%), Schmelzpunkt: 84,0-85,0ºC, Rf&sub1;: 0,37, Rf&sub2;: 0,72.
  • [α]D²&sup5; 12,8º (c = 1,00 in DMF)
  • Elementaranalyse als C&sub7;&sub0;H&sub8;&sub3;N&sub7;O&sub1;&sub5;
  • Berechnet: C 66,60; H 6,63; N 7,77
  • Gefunden: C 66,65; H 6,68; N 7,76
    • (4) Herstellung von Boc-D-Trp-D-Asp(OBzl)-Hyp(Bzl)-Asp(OBzl)-D- Leu-Leu-OH
  • Boc-D-Trp-D-Asp(OBzl)-Hyp(Bzl)-Asp(OBzl)-D-Leu-Leu-OPac (2,52 g) wurde in 90% wäßriger AcOH (50 ml) gelöst und Zn-Pulver (6,54 g) wurde unter Rühren und Eiskühlung hinzugesetzt, weiter gefolgt vom Rühren bei Raumtemperatur. Das Zn-Pulver wurde durch Filtration abgetrennt und das Filtrat wurde eingeengt. Der Rückstand wurde in AcOEt gelöst und die Lösung wurde nacheinander mit 10% wäßriger Zitronensäure und einer gesättigten wäßrigen Natriumchloridlösung gewaschen. Nach dem Trocknen mit Na&sub2;SO&sub4; wurde das Lösungsmittel durch Destillation entfernt und dem Rückstand wurde Ether-Petrolether unter Abscheiden eines Niederschlages zugesetzt, der durch Filtration gesammelt und unter vermindertem Druck getrocknet wurde.
  • Ausbeute: 2,29 g (quantitativ), Schmelzpunkt: 94,0-96,0ºC, Rf&sub1;: 0,17, Rf&sub2;: 0,70.
  • [α]D²&sup5; 19,2º (c = 1,00 in DMF)
  • Elementaranalyse als C&sub6;&sub2;H&sub7;&sub7;N&sub7;O&sub1;&sub4;
  • Berechnet: C 65,07; H 6,78; N 8,57
  • Gefunden: C 65,05; H 6,86; N 8,39
    • (5) Herstellung von cyclo[-D-Asp(OBzl)-Hyp(Bzl)-Asp(OBzl)-D- Leu-Leu-D-Trp-)
  • Boc-D-Trp-D-Asp(OBzl)-Hyp(Bzl)-Asp(OBzl)-D-Leu-Leu-OH (1,14 g) wurde in Dichlormethan (10 ml) gelöst und HONB (358 mg) und DCC (413 mg) wurden nacheinander unter Rühren und Eiskühlung zugesetzt, weiter gefolgt von 3 Stunden Rühren unter Eiskühlung. Das sich daraus ergebende unlösliche Material wurde durch Filtration entfernt und das Lösungsmittel wurde durch Destillation entfernt. Der Rückstand wurde in Acetonitril (20 ml) gelöst und das unlösliche Material wurde durch Filtration entfernt. Das Lösungsmittel wurde durch Destillation entfernt und dem Rückstand wurde Ether-Petrolether unter Abscheiden eines Niederschlages zugesetzt, der durch Filtration gesammelt und unter vermindertem Druck getrocknet wurde. Das sich daraus ergebende Produkt wurde in Dioxan (2 ml) gelöst und 10 N HCl/Dioxan (10 ml) wurde unter Rühren und Eiskühlung hinzugesetzt, weiter gefolgt von 10 Minuten Rühren. Das Lösungsmittel wurde durch Destillation bei Raumtemperatur entfernt und dem Rückstand wurde Ether unter Abscheiden eines Niederschlages zugesetzt, der durch Filtration gesammelt und unter vermindertem Druck getrocknet wurde. Dieser wurde in DMF (5 ml) gelöst und die sich daraus ergebende Lösung wurde tropfenweise TEA (6,96 ml) enthaltendem DMF (100 ml) zugesetzt, gefolgt vom Rühren über Nacht. Das Lösungsmittel wurde durch Destillation entfernt und der Rückstand wurde in AcOEt gelöst. Die Lösung wurde nacheinander mit 10% wäßriger Zitronensäure, 5% wäßrigem NaHCO&sub3; und einer gesättigten wäßrigen Natriumchloridlösung gewaschen. Nach dem Trocknen mit Na&sub2;SO&sub4; wurde das Lösungsmittel durch Destillation entfernt und der Rückstand wurde durch Kieselgelchromatographie (Merck Kieselgel 60. 1% Methanol/Chloroform) gereinigt. Anschließend wurde Ether- Petrolether unter Abscheiden eines Niederschlages hinzugesetzt, der durch Filtration gesammelt und unter vermindertem Druck getrocknet wurde.
  • Ausbeute: 847 mg (82,6%), Rf&sub1;: 0,40, Rf&sub2;: 0,74.
    • (6) Herstellung von cyclo[-D-Asp-Hyp(Bzl)Asp-D-Leu-Leu-D-Trp-]
  • cyclo[-D-Asp(OBzl)-Hyp(Bzl)-Asp(OBzl)-D-Leu-Leu-D-Trp-] (103 mg) wurde in DMF (10 ml) gelöst und Palladiumschwarz (100 mg) wurde hinzugesetzt. Das Gemisch wurde im Wasserstoffstrom 1 Stunde bei Raumtemperatur heftig gerührt. Der Katalysator wurde durch Filtration entfernt und das Filtrat wurde eingeengt. Anschließend wurde dem Rückstand Ether unter Abscheiden eines Niederschlages zugesetzt, der durch Filtration gesammelt und unter vermindertem Druck getrocknet wurde. Die Ausbeute war 64 mg (82,6%). 30,0 mg dieses Niederschlages wurden durch Umkehrphasen-Flüssigkeitschromatographie [Säule: YMC-D-ODS-5 (2 cm x 25 cm)] gereinigt. Die Ausbeute war 23,7 mg (79,0%).
  • Aminosäurenanal. [6 N HCl, 110ºC, 24 Stunden Hydrolyse; die Zahlen in Klammern zeigen die theoretischen Werte]: Asp 2,00 (2), Leu 1,97 (2), Hyp 0,84 (1).
  • LSIMS (M + H&spplus;) = 846, (theoretischer Wert) = 846
    • Beispiel 14 Herstellung von cyclo[-D-Asp-Hyp-Asp-D-Leu-Leu-D-Trp-]
  • cyclo[-D-Asp(OBzl)-Hyp(Bzl)-Asp(OBzl)-D-Leu-Leu-D-Trp-] (103 mg) wurde in DMF (10 ml) gelöst und Palladiumschwarz (100 mg) wurde hinzugesetzt. Das Gemisch wurde im Wasserstoffstrom 1 Stunde bei Raumtemperatur heftig gerührt. Der Katalysator wurde durch Filtration entfernt und das Filtrat wurde eingeengt. Anschließend wurde dem Rückstand Ether unter Abscheiden eines Niederschlages zugesetzt, der durch Filtration gesammelt und unter vermindertem Druck getrocknet wurde. Das sich daraus ergebende Produkt wurde in Methanol (10 ml) gelöst und Palladiumschwarz (100 mg) wurde hinzugesetzt. Das Gemisch wurde im Wasserstoffstrom 1 Stunde bei Raumtemperatur heftig gerührt. Der Katalysator wurde durch Filtration entfernt und das Filtrat wurde eingeengt. Anschließend wurde dem Rückstand Ether unter Abscheiden eines Niederschlages zugesetzt, der durch Filtration gesammelt und unter vermindertem Druck getrocknet wurde. Die Ausbeute war 65 mg (85,7%). 25,0 mg dieses Niederschlages wurden durch Umkehrphasen-Flüssigkeitschromatographie [Säule: YMC-D-ODS-5 (2 cm x 25 cm)] gereinigt. Die Ausbeute war 19,7 mg (78,8%).
  • Aminosäurenanal. [6 N HCl, 110ºC, 24 Stunden Hydrolyse; die Zahlen in Klammern zeigen die theoretischen Werte]: Asp 2,00 (2), Leu 2,00 (2), Hyp 0,97 (1).
  • LSIMS (M + H&spplus;) = 756, (theoretischer Wert) = 756
    • Beispiel 53 Herstellung von cyclo[-D-Asp-Trp-Asp-D-tleu-Leu-D-Trp-] (1) Herstellung von Boc-Asp(OBzl)-OPac
  • Boc-Asp(OBzl)-OH (32,3g) und Cs&sub2;CO&sub3; (16,3 9) wurden in 90% wäßrigem Methanol gelöst und die Lösung wurde eingeengt. Der Rückstand wurde in DMF (300 ml) gelöst und Phenacylbromid (21,9 g) wurde hinzugesetzt, gefolgt vom Rühren über Nacht. Das sich daraus ergebende CsBr wurde durch Filtration abgetrennt und das Filtrat wurde eingeengt. Der Rückstand wurde in AcOEt gelöst und die Lösung wurde mit 4% wäßrigem NaHCO&sub3; und 10% wäßriger Zitronensäure gewaschen. Nach dem Waschen mit Wasser wurde die Lösung mit Na&sub2;SO&sub4; getrocknet und eingeengt. Anschließend wurde der Rückstand aus Essigsäureethylester-Petrolether umkristallisiert.
  • Ausbeute: 42,9 g (97,1%), Schmelzpunkt: 73-74ºC, Rf&sub1;: 0,69, Rf&sub2;: 0,82.
  • [α]D²&sup8; -21,8º (c = 0,99 in DMF)
  • Elementaranalyse als C&sub2;&sub4;H&sub2;&sub7;NO&sub7;
  • Berechnet: C 65,29; H 6,16; N 3,17
  • Gefunden: C 65,42; H 6,25; N 3,32
    • (2) Herstellung von Boc-Trp-Asp(OBzl)-OPac
  • Boc-Trp-OH (12,2 g) wurde in THF gelöst und die Lösung wurde unter Rühren auf -15ºC gekühlt. Anschließend wurde N-Methylmorpholin (4,4 ml) hinzugesetzt und nachfolgend wurde IBCF (5,4 ml) zugesetzt. Nach 2 Minuten wurde eine DMF-Lösung von HCl H- Asp(OBzl)-OPac und N-Methylmorpholin zugesetzt. HCl H-Asp(OBzl)- OPac wurde durch Lösen von Boc-Asp(OBzl)-OPac (17,7 g) in 8 N HCl/Dioxan (100 ml) erhalten, wobei die Lösung 30 Minuten unter Eiskühlung gerührt wurde, gefolgt vom Einengen und Zusetzen von Ether unter Fällen von Kristallen, die durch Filtration gesammelt und getrocknet wurden. Nach 30 Minuten Rühren bei -15ºC wurde die Lösung auf Raumtemperatur gebracht. Nach 30 Minuten wurde das sich daraus ergebende unlösliche Material durch Filtration abgetrennt, gefolgt vom Einengen. Der Rückstand wurde in AcOEt gelöst und die Lösung wurde mit Wasser, 10% wäßriger Zitronensäure und 4% wäßrigem NaHCO&sub3; gewaschen. Nach Waschen mit Wasser wurde die Lösung mit Na&sub2;SO&sub4; getrocknet und eingeengt. Dem sich daraus ergebenden Rückstand wurde Ether unter Abscheiden eines Niederschlages zugesetzt, der durch Filtration gesammelt wurde.
  • Ausbeute: 23,9 g (95,2%), Schmelzpunkt: 73-74ºC, Rf&sub1;: 0,40, Rf&sub2;: 0,69.
  • [α]D²&sup8; -20,6º (c = 1,05 in DMF)
  • Elementaranalyse als C&sub3;&sub5;H&sub3;&sub7;N&sub3;O&sub8;
  • Berechnet: C 66,97; H 5,94; N 6,69
  • Gefunden: C 67,21; H 6,13; N 6,71
    • (3) Herstellung von Boc-D-Asp(OBzl)-Trp-Asp(OBzl)-OPac
  • 8N HCl/Dioxan wurde Boc-Trp-Asp(OBzl)-OPac (50,2 g) unter Lösen zugesetzt und die Lösung wurde 30 Minuten unter Eiskühlung gerührt, gefolgt vom Einengen. Anschließend wurde Ether unter Fällen von Kristallen hinzugesetzt, die gesammelt und getrocknet wurden. Die Kristalle wurden in DMF (80 ml) gelöst und die Lösung wurde mit Eis gekühlt, gefolgt von der TEA-Zugabe (22,3 ml). Boc-D-Asp(OBzl)-ONB [hergestellt aus Boc-D-Asp(OBzl)-OH (28,5 g), HONB (17,2 g) und DCC (19,8 g)] wurde hinzugesetzt und das Gemisch wurde über Nacht gerührt. Das sich daraus ergebende unlösliche Material wurde durch Filtration abgetrennt, gefolgt vom Einengen. Der Rückstand wurde in AcOEt gelöst und die Lösung wurde mit Wasser, 10% wäßriger Zitronensäure und 4% wäßrigem NaHCO&sub3; gewaschen. Nach dem Waschen mit Wasser wurde die Lösung mit Na&sub2;SO&sub4; getrocknet und eingeengt. Dem sich daraus ergebenden Rückstand wurde Ether unter Abscheiden eines Niederschlages zugesetzt, der durch Filtration gesammelt wurde.
  • Ausbeute: 60,3 g (90,5%), Schmelzpunkt: 95-97ºC, Rf&sub1;: 0,40, Rf&sub2;: 0,70.
  • [α]D²&sup8; -5,2º (c = 1,14 in DMF)
  • Elementaranalyse als C&sub4;&sub6;H&sub4;&sub8;N&sub4;O&sub1;&sub1;
  • Berechnet: C 66,33; H 5,81; N 6,73
  • Gefunden: C 66,40; H 5,93; N 6,84
    • (4) Herstellung von Boc-D-Trp-Asp(OBzl)Trp-Asp(OBzl)-OPac
  • 8 N HCl/Dioxan wurde Boc-D-Asp(OBzl)-Trp-Asp(OBzl)-OPac (59,1 g) unter Lösen zugesetzt und die Lösung wurde 40 Minuten unter Eiskühlung gerührt, gefolgt vom Einengen. Anschließend wurde Ether unter Fällen von Kristallen hinzugesetzt, die durch Filtration gesammelt und getrocknet wurden. Die Kristalle wurden in DMF (70 ml) gelöst und die Lösung wurde mit Eis gekühlt, gefolgt von der TEA-Zugabe (19,8 ml). Boc-D-Trp-ONB [hergestellt aus Boc-D-Trp-OH (23,8 g), HONB (15,3 g) und DCC (17,6 g)] wurde hinzugesetzt und das Gemisch wurde über Nacht gerührt. Das sich daraus ergebende unlösliche Material wurde durch Filtration abgetrennt, gefolgt vom Einengen. Der Rückstand wurde in AcOEt gelöst und die Lösung wurde mit Wasser, 10% wäßriger Zitronensäure und 4% wäßrigem NaHCO&sub3; gewaschen. Nach dem Waschen mit Ether wurde die Lösung mit Na&sub2;SO&sub4; getrocknet und eingeengt. Dem sich daraus ergebenden Rückstand wurde Ether unter Abscheiden eines Niederschlages zugesetzt, der durch Filtration gesammelt wurde.
  • Ausbeute: 58,1 g (80,3%), Schmelzpunkt: 139-140ºC, Rf&sub1;: 0,38, Rf&sub2;: 0,70.
  • [α]D²&sup8; -3,0º (c = 1,29 in DMF)
  • Elementaranalyse: als C&sub5;&sub7;H&sub5;&sub8;N&sub6;O&sub1;&sub2;
  • Berechnet: C 67,18; H 5,74; N 8,25
  • Gefunden: C 67,28; H 5,87; N 8,34
    • (5) Herstellung von Boc-Leu-D-Trp-D-Asp(OBzl)-Trp-Asp(OBzl)- OPac
  • 8N HCl/Dioxan wurde Boc-D-Trp-D-Asp(OBzl)-Trp-Asp(OBzl)-OPac (20,4 g) unter Lösen zugesetzt und die Lösung wurde 30 Minuten unter Eiskühlung gerührt, gefolgt vom Einengen. Anschließend wurde Ether unter Fällen von Kristallen hinzugesetzt, die durch Filtration gesammelt und getrocknet wurden. Die Kristalle wurden in DMF (20 ml) gelöst und die Lösung wurde mit Eis gekühlt, gefolgt von der Teazugabe (5,6 ml). Boc-Leu-ONB [hergestellt aus Boc-Leu-OH H&sub2;O (5,48 g), HONB (4,30 g) und DCC (4,95 g)] wurde hinzugesetzt und das Gemisch wurde über Nacht gerührt. Das sich daraus ergebende unlösliche Material wurde durch Filtration abgetrennt, gefolgt vom Einengen. Der Rückstand wurde in AcOEt gelöst und die Lösung wurde mit Wasser, 10% wäßriger Zitronensäure und 4% wäßrigem NaHCO&sub3; gewaschen. Nach dem Waschen mit Ether wurde die Lösung mit Na&sub2;SO&sub4; getrocknet und eingeengt. Der sich daraus ergebende Rückstand wurde aus Essigsäureethylester- Petrolether umkristallisiert.
  • Ausbeute: 18,6 g (82,2%), Schmelzpunkt: 119-120ºC, Rf&sub1;: 0,39, Rf&sub2;: 0,70.
  • [α]D²&sup8; -9,1º (c = 0,98 in DMF)
  • Elementaranalyse als C&sub6;&sub3;H&sub6;&sub9;N&sub7;O&sub1;&sub3;
  • Berechnet: C 66,83; H 6,14; N 8,66
  • Gefunden: C 66,80; H 6,38; N 8,75
    • (6) Herstellung von Boc-D-tLeu-Leu-D-Trp-D-Asp(OBzl)-Trp- Asp(OBzl)-OPac
  • 8N HCl/Dioxan wurde Boc-Leu-D-Trp-D-Asp(OBzl)-Trp-Asp(OBzl)-OPac (1,02 g) unter Lösen zugesetzt und die Lösung wurde 15 Minuten unter Eiskühlung gerührt, gefolgt vom Einengen. Anschließend wurde Ether unter Fällen von Kristallen hinzugesetzt, die durch Filtration gesammelt und getrocknet wurden. Die Kristalle wurden in DMF (5 ml) gelöst und die Lösung wurde mit Eis gekühlt, gefolgt von der TEA-Zugabe (0,25 ml). Boc-D-tLeu-OH (0,23 g), HONB (0,15 g) und DCC (0,22 g) wurden hinzugesetzt und das Gemisch wurde über Nacht gerührt. Das sich daraus ergebende unlösliche Material wurde durch Filtration abgetrennt, gefolgt vom Einengen. Der Rückstand wurde in AcOEt gelöst und die Lösung wurde mit Wasser, 10% wäßriger Zitronensäure und 4% wäßrigem NaHCO&sub3; gewaschen. Nach dem Waschen mit Ether wurde die Lösung mit Na&sub2;SO&sub4; getrocknet und eingeengt. Dem sich daraus ergebenden Rückstand wurde Ether unter Abscheiden eines Niederschlages zugesetzt, der durch Filtration gesammelt wurde.
  • Ausbeute: 1,08 g (96,4%), Schmelzpunkt: 124-126ºC, Rf&sub1;: 0,34, Rf&sub2;: 0,71.
  • [α]D²&sup8; -6,1º (c = 1,27 in DMF)
  • Elementaranalyse: als C&sub6;&sub9;H&sub8;&sub0;N&sub8;O&sub1;&sub4;
  • Berechnet: C 66,54; H 6,47; N 9,00
  • Gefunden: C 66,67; H 6,60; N 9,21
    • (7) Herstellung von Boc-D-tLeu-Leu-D-Trp-D-Asp(OBzl)-Trp- Asp(OBzl)-OH
  • Boc-D-tleu-Leu-D-Trp-D-Asp(OBzl)-Trp-Asp(OBzl)-OPac (0,75 g) wurde in 90% wäßriger AcOH (10 ml) gelöst und Zn-Pulver (1,96 g) wurde hinzugesetzt, gefolgt von 3 Stunden Rühren. Das Zn-Pulver wurde durch Filtration entfernt und das Filtrat wurde eingeengt. Dem Rückstand wurde AcOEt zum Lösen zugesetzt und die Lösung wurde mit 10% wäßriger Zitronensäure gewaschen. Nach dem Waschen mit Wasser wurde die Lösung mit Na&sub2;SO&sub4; getrocknet und eingeengt. Anschließend wurde dem Rückstand Petrolether unter Abscheiden eines Niederschlages zugesetzt, der durch Filtration gesammelt wurde.
  • Ausbeute: 0,66 g (97,6%), Schmelzpunkt: 125-127ºC, Rf&sub1;: 0,03, Rf&sub2;: 0,67.
  • [α]D²&sup5; -5,5º (c = 1,19 in DMF)
  • Elementaranalyse: als C&sub6;&sub1;H&sub7;&sub4;N&sub8;O&sub1;&sub3;
  • Berechnet: C 64,99; H 6,62; N 9,94
  • Gefunden: C 65,11; H 6,78; N 10,01
    • (8) Herstellung von cyclo[-D-Asp-Trp-Asp-D-tLeu-Leu-D-Trp-]
  • Boc-D-tleu-Leu-Trp-D-Asp(OBzl)-Trp-Asp(OBzl)-OH (0,34 g) wurde in DCM (10 ml) gelöst und die Lösung wurde mit Eis gekühlt. HONB (0,11 g) und DCC (0,12 g) wurden hinzugesetzt, gefolgt von 3 Stunden Rühren. Anschließend wurde der sich daraus ergebende DCU durch Filtration abgetrennt, gefolgt vom Einengen und dem Rückstand wurde Ether unter Abscheiden eines Niederschlages zugesetzt, der durch Filtration gesammelt wurde. 8 N HCl/Dioxan (10 ml) wurde unter Eiskühlung zum Lösen des Niederschlages hinzugesetzt. Die sich daraus ergebende Lösung wurde 15 Minuten gerührt und eingeengt. Anschließend wurde dem Rückstand Ether unter Abscheiden eines Niederschlages zugesetzt, der durch Filtration gesammelt und getrocknet wurde. Der Niederschlag wurde in DMF (6 ml) gelöst und die sich daraus ergebende Lösung wurde während 30 Minuten tropfenweise TEA (0,42 ml) enthaltendem DMF (54 ml) zugesetzt, gefolgt vom Rühren über Nacht und Einengen. Der Rückstand wurde in AcOEt gelöst und die Lösung wurde mit 4% wäßrigem NaHCO&sub3; gewaschen. Nach dem Waschen mit Wasser wurde die Lösung mit Na&sub2;SO&sub4; getrocknet und eingeengt. Anschließend wurde dem Rückstand Ether-Petrolether unter Abscheiden eines Niederschlages zugesetzt, der durch Filtration gesammelt und getrocknet wurde. 101 mg dieses Niederschlages wurden in DMF (15 ml) gelöst und im Wasserstoffstrom unter Verwenden von Palladiumschwarz als Katalysator katalytisch reduziert. Der Katalysator wurde durch Filtration abgetrennt und anschließend wurde das Filtrat eingeengt. Der sich daraus ergebende Rückstand wurde in einer geringen Menge AcOH gelöst und danach wurde Wasser zum Ausführen einer Lyophilisierung zugesetzt. Schließlich wurde ein Teil des lyophilisierten Produktes durch Flüssigkeitschromatographie mittels einer YMC-D-ODS-5-Säule (2 cm x 25 cm) (Y.M.C.) unter Erhalten des gewünschten Materials gereinigt. Die Ausbeute war 12,4 mg (42,8%).
  • Aminosäurenanal. [6 N HCl, 110ºC, 24 Stunden Hydrolyse; die Zahlen in Klammern zeigen die theoretischen Werte): Asp 2,00 (2), Leu 1,29 (1).
  • LSIMS (M + H&spplus;) = 829, (theoretischer Wert) = 829
    • Beispiel 54 Herstellung von cyclo [-D-Asp-Trp-Asp-D-γMeLeu-Leu-D-Trp-] (1) Herstellung von Boc-D-γMeLeu-Leu-D-Trp-D-Asp(OBzl)-Trp- Asp(OBzl)-OPac
  • 8 N HCl/Dioxan wurde Boc-Leu-D-Trp-D-Asp(OBzl)-Trp-Asp(OBzl)- OPac (1,02 g) unter Lösen zugesetzt und die Lösung wurde 15 Minuten unter Eiskühlung gerührt, gefolgt vom Einengen. Anschließend wurde Ether unter Ausfällen von Kristallen zugesetzt, die durch Filtration gesammelt und getrocknet wurden. Die Kristalle wurden in DMF (5 ml) gelöst und die Lösung wurde mit Eis gekühlt, gefolgt von der Zugabe von TEA (0,25 ml). Boc-D-γMeLeu- OH (0,24 g), HONB (0,15 g) und DCC (0,22 g) wurden hinzugesetzt und das Gemisch wurde über Nacht gerührt. Das sich daraus ergebende unlösliche Material wurde durch Filtration abgetrennt, gefolgt vom Einengen. Der Rückstand wurde in AcOEt gelöst und die Lösung wurde mit Wasser, 10% wäßriger Zitronensäure und 4% wäßrigem NaHCO&sub3; gewaschen. Nach dem Waschen mit Wasser wurde die Lösung mit Na&sub2;SO&sub4; getrocknet und eingeengt. Dem sich daraus ergebenden Rückstand wurde Ether unter Abscheiden eines Niederschlages zugesetzt, der durch Filtration gesammelt wurde.
  • Ausbeute: 1,11 g (98,0%), Schmelzpunkt: 171-172ºC, Rf&sub1;: 0,32, Rf&sub2;: 0,70.
  • [α]D²&sup8; +5,4º (c = 1,12 in DMF)
  • Elementaranalyse als C&sub7;&sub0;H&sub8;&sub2;N&sub8;O&sub1;&sub4;
  • Berechnet: C 66,76; H 6,56; N 8,90
  • Gefunden: C 66,88; H 6,69; N 9,09
    • (2) Herstellung von Boc-D-γMeLeu-Leu-D-Trp-D-Asp(OBzl)-Trp- Asp(OBzl)-OH
  • Boc-D-γMeLeu-Leu-D-Trp-D-Asp(OBzl)-Trp-Asp(OBzl)-OPac (0,76 g) wurde in 90% wäßrigem AcOH (10 ml) gelöst und Zn-Pulver (1,96 g) wurde hinzugesetzt, gefolgt von 3 Stunden Rühren. Das Zn-Pulver wurde durch Filtration entfernt und das Filtrat wurde eingeengt. Dem Rückstand wurde AcOEt zum Lösen zugesetzt und die Lösung wurde mit 10% wäßriger Zitronensäure gewaschen. Nach dem Waschen mit Wasser wurde die Lösung mit Na&sub2;SO&sub4; getrocknet und eingeengt. Anschließend wurde dem Rückstand Petrolether unter Abscheiden eines Niederschlages zugesetzt, der durch Filtration gesammelt wurde.
  • Ausbeute: 0,67 g (97,8%), Schmelzpunkt: 115-117ºC, Rf&sub1;: 0,03, Rf&sub2;: 0,67.
  • [α]D²&sup8; +6,3º (c = 1,24 in DMF)
  • Elementaranalyse als C&sub6;&sub2;H&sub7;&sub6;N&sub8;O&sub1;&sub3;
  • Berechnet: C 65,25; H 6,71; N 9,82
  • Gefunden: C 65,18; H 6,87; N 9,85
    • (3) Herstellung von cyclo[-D-Asp-Trp-Asp-D-γMeLeu-Leu-D-Trp-]
  • Boc-D-ymeleu-Leu-D-Trp-D-Asp(OBzl)-Trp-Asp(OBzl)-OH (0,34 g) wurde in DOM (10 ml) gelöst und die Lösung wurde mit Eis gekühlt. HONB (0,11 g) und DCC (0,12 g) wurden hinzugesetzt, gefolgt von 3 Stunden Rühren. Anschließend wurde der sich daraus ergebende DCU durch Filtration abgetrennt, gefolgt vom Einengen und dem Rückstand wurde Ether unter Abscheiden eines Niederschlages zugesetzt, der durch Filtration gesammelt wurde. 8 N HCl/Dioxan (10 ml) wurde unter Eiskühlung zum Lösen des Niederschlages hinzugesetzt. Die sich daraus ergebende Lösung wurde 15 Minuten gerührt und eingeengt. Anschließend wurde dem Rückstand Ether unter Abscheiden eines Niederschlages zugesetzt, der durch Filtration gesammelt und getrocknet wurde. Der Niederschlag wurde in DMF (6 ml) gelöst und die sich daraus ergebende Lösung wurde während 30 Minuten tropfenweise TEA (0,42 ml) enthaltendem DMF (54 ml) zugesetzt, gefolgt vom Rühren über Nacht und Einengen. Der Rückstand wurde in AcOEt gelöst und die Lösung wurde mit 4% wäßrigem NaHCO&sub3; gewaschen. Nach dem Waschen mit Wasser wurde die Lösung mit Na&sub2;SO&sub4; getrocknet und eingeengt. Anschließend wurde dem Rückstand Ether unter Abscheiden eines Niederschlages zugesetzt, der durch Filtration gesammelt und getrocknet wurde. 102 mg dieses Niederschlages wurden in DMF (15 ml) gelöst und im Wasserstoffstrom unter Verwenden von Palladiumschwarz als Katalysator katalytisch reduziert. Der Katalysator wurde durch Filtration abgetrennt und anschließend wurde das Filtrat eingeengt. Der sich daraus ergebende Rückstand wurde in einer geringen Menge AcOH gelöst und danach wurde Wasser zum Ausführen einer Lyophilisierung zugesetzt. Schließlich wurde ein Teil des lyophilisierten Produktes durch Flüssigkeitschromatographie mittels einer YMC-D-ODS-5-Säule (2 cm x 25 cm) (Y.M.C.) unter Erhalten des gewünschten Materials gereinigt. Die Ausbeute war 16,1 mg (51,5%).
  • Aminosäurenanal. [6 N HCl, 110ºC, 24 Stunden Hydrolyse; die Zahlen in Klammern zeigen die theoretischen Werte]: Asp 2,00 (2), Leu 1,25 (1).
  • LSIMS (M + H&spplus;) = 843, (theoretischer Wert) = 843
    • Beispiel 55 Herstellung von cyclo[-D-Asp-Trp-Asp-D-Thg(2)-Leu-D-Trp-] (1) Herstellung von Boc-D-Thg(2)-Leu-D-Trp-D-Asp(OBzl)-Trp- Asp(OBzl)-OPac
  • 8 N HCl/Dioxan wurde Boc-Leu-D-Trp-D-Asp(OBzl)-Trp-Asp(OBzl)- OPac (1,02 g) unter Lösen zugesetzt und die Lösung wurde 15 Minuten unter Eiskühlung gerührt, gefolgt vom Einengen. Anschließend wurde Ether unter Abscheiden von Kristallen hinzugesetzt, die durch Filtration gesammelt und getrocknet wurden. Die Kristalle wurden in DMF (5 ml) gelöst und die Lösung wurde mit Eis gekühlt, gefolgt von der Zugabe von TEA (0,25 ml). Boc-D- Thg(2)-OH (0,19 g), HONB (0,15 g) und DCC (0,22 g) wurden zugesetzt und das Gemisch wurde über Nacht gerührt. Das sich daraus ergebende unlösliche Material wurde durch Filtration abgetrennt, gefolgt vom Einengen. Der Rückstand wurde in AcOEt gelöst und die Lösung wurde mit Wasser, 10% wäßriger Zitronensäure und 4% wäßrigem NaHCO&sub3; gewaschen. Nach dem Waschen mit Wasser wurde die Lösung mit Na&sub2;SO&sub4; getrocknet und eingeengt. Dem sich daraus ergebenden Rückstand wurde Ether unter Abscheiden eines Niederschlages zugesetzt, der durch Filtration gesammelt wurde.
  • Ausbeute: 1,04 g (90,9%), Schmelzpunkt: 130-132ºC, Rf&sub1;: 0,32, Rf&sub2;: 0,68.
  • [α]D²&sup8; -5,9º (c = 0,95 in DMF)
  • Elementaranalyse als C&sub6;&sub9;H&sub7;&sub4;N&sub8;O&sub1;&sub4;S
  • Berechnet: C 65,18; H 5,87; N 8,81; S 2,52
  • Gefunden: C 65,39; H 5,99; N 8,94; S 2,46
    • (2) Herstellung von Boc-D-Thg(2)-Leu-D-Trp-D-Asp(OBzl)-Trp- Asp(OBzl)-OH
  • Boc-D-Thg(2)-Leu-D-Trp-D-Asp(OBzl)-Trp-Asp(OBzl)-OPac (0,76 g) wurde in 90% wäßrigem AcOH (10 ml) gelöst und Zn-Pulver (1,96 g) wurde hinzugesetzt, gefolgt von 3 Stunden Rühren. Das Zn-Pulver wurde durch Filtration entfernt und das Filtrat wurde eingeengt. Dem Rückstand wurde AcOEt zum Lösen zugesetzt und die Lösung wurde mit 10% wäßriger Zitronensäure gewaschen. Nach dem Waschen mit Wasser wurde die Lösung mit Na&sub2;SO&sub4; getrocknet und eingeengt. Anschließend wurde dem Rückstand Petrolether unter Abscheiden eines Niederschlages zugesetzt, der durch Filtration gesammelt wurde.
  • Ausbeute: 0,68 g (98,3%), Schmelzpunkt: 167-169ºC, Rf&sub1;: 0,03 Rf&sub2;: 0,68.
  • [α]D²&sup8; -5,3º (c = 0,99 in DMF)
  • Elementaranalyse als C&sub6;&sub1;H&sub6;&sub8;N&sub8;O&sub1;&sub3;S
  • Berechnet: C 63,53; H 5,94; N 9,72; S 2,78
  • Gefunden: C 63,42; H 6,04; N 9,90; S 2.82
    • (3) Herstellung von cyclo[-D-Asp-Trp-Asp-D-Thg(2)-Leu-D-Trp-]
  • Boc-D-Thg(2)-Leu-D-Trp-D-Asp(OBzl)-Trp-Asp(OBzl)-OH (0,35 g) wurde in DOM (10 ml) gelöst und die Lösung wurde mit Eis gekühlt. HONB (0,11 g) und DCC (0,12 g) wurden hinzugesetzt, gefolgt von 3 Stunden Rühren. Anschließend wurde der sich daraus ergebende DCU durch Filtration abgetrennt, gefolgt vom Einengen und dem Rückstand wurde Petrolether unter Abscheiden eines Niederschlages zugesetzt, der durch Filtration gesammelt wurde. 8 N HCl/Dioxan (10 ml) wurde unter Eiskühlung zum Lösen des Niederschlages hinzugesetzt, der durch Filtration gesammelt wurde. Die sich daraus ergebende Lösung wurde 15 Minuten gerührt und eingeengt. Anschließend wurde dem Rückstand Ether unter Abscheiden eines Niederschlages zugesetzt, der durch Filtration gesammelt und getrocknet wurde. Der Niederschlag wurde in DMF (6 ml) gelöst und die sich daraus ergebende Lösung wurde während 30 Minuten tropfenweise TEA (0,42 ml) enthaltendem DMF (54 ml) zugesetzt, gefolgt vom Rühren über Nacht und Einengen. Der Rückstand wurde in AcOEt gelöst und die Lösung wurde mit 4% wäßrigem NaHCO&sub3; gewaschen. Nach dem Waschen mit Wasser wurde die Lösung mit Na&sub2;SO&sub4; getrocknet und eingeengt. Der Rückstand wurde mittels Kieselgelchromatographie (1,5% Methanol/DCM) gereinigt und nachfolgend wurde Ether unter Abscheiden eines Niederschlages hinzugesetzt, der durch Filtration gesammelt und getrocknet wurde. 104 mg dieses Niederschlages wurden in DMF (15 ml) gelöst und im Wasserstoffstrom unter Verwenden von Palladiumschwarz als Katalysator katalytisch reduziert. Der Katalysator wurde durch Filtration entfernt und anschließend wurde das Filtrat eingeengt. Der sich daraus ergebende Rückstand wurde in einer geringen Menge AcOH gelöst und danach wurde Wasser zum Ausführen einer Lyophilisierung zugesetzt. Schließlich wurde ein Teil des lyophilisierten Produktes durch Flüssigkeitschromatographie mittels einer YMC-D-ODS-5-Säule (2 cm x 25 cm) (Y.M.C.) unter Erhalten des gewünschten Materials gereinigt. Die Ausbeute war 11,7 mg (4,6%).
  • Aminosäurenanal. [110ºC, 24 Stunden Hydrolyse; die Zahlen in Klammern zeigen die theoretischen Werte]: Asp 2,00 (2), Leu 1,30 (1).
  • LSIMS (M + H&spplus;) = 855, (theoretischer Wert) = 855
    • Beispiel 56 Herstellung von cyclo[-D-ASP-Trp-Asp-Acbu-Leu-D-Trp-] (1) Herstellung von Boc-Acbu-Leu-D-Trp-D-Asp(OBzl)-Trp- Asp(OBzl)-OPac
  • 8 N HCl/Dioxan wurde Boc-Leu-D-Trp-D-Asp(OBzl)-Trp-Asp(OBzl)- OPac (1,02 g) unter Lösen zu und die Lösung wurde 15 Minuten unter Eiskühlung gerührt, gefolgt vom Einengen. Anschließend wurde Ether unter Abscheiden von Kristallen hinzugesetzt, die durch Filtration gesammelt und getrocknet wurden. Die Kristalle wurden in DMF (5 ml) gelöst und die Lösung wurde mit Eis gekühlt, gefolgt von der Zugabe von TEA (0,25 ml). Boc-Acbu- OH (0,20 g), HONB (0,15 g) und DCC (0,22 g) wurden hinzugesetzt und das Gemisch wurde über Nacht gerührt. Das sich daraus ergebende unlösliche Material wurde durch Filtration abgetrennt, gefolgt vom Einengen. Der Rückstand wurde in AcOEt gelöst und die Lösung wurde mit Wasser, 10% wäßriger Zitronensäure und 4% wäßrigem NaHCO&sub3; gewaschen. Nach dem Waschen mit Wasser wurde die Lösung mit Na&sub2;SO&sub4; getrocknet und eingeengt. Dem sich daraus ergebenden Rückstand wurde Ether unter Abscheiden eines Niederschlages zugesetzt, der durch Filtration gesammelt wurde.
  • Ausbeute: 1,06 g (94,0%), Schmelzpunkt: 141-143ºC, Rf&sub1;: 0,27, Rf&sub2;: 0,67.
  • [α]D²&sup8; -10,6º (c = 1,27 in DMF)
  • Elementaranalyse: als C&sub6;&sub8;H&sub7;&sub6;N&sub8;O&sub1;&sub4;
  • Berechnet: C 66,43; H 6,23; N 9,11
  • Gefunden: C 66,42; H 6,33; N 9,30
    • (2) Herstellung von Boc-Acbu-Leu-D-Trp-D-Asp(OBzl)-Trp- Asp(OBzl)-OH
  • Boc-Acbu-Leu-D-Trp-D-Asp(OBzl)-Trp-Asp(OBzl)-OPac (0,74 g) wurde in 90% wäßriger AcOH (10 ml) gelöst und Zn-Pulver (1,96 g) wurde hinzugesetzt, gefolgt von 3 Stunden Rühren. Das Zn-Pulver wurde durch Filtration entfernt und das Filtrat wurde eingeengt. Dem Rückstand wurde AcOEt zum Lösen zugesetzt und die Lösung wurde mit 10% wäßriger Zitronensäure gewaschen. Nach dem Waschen mit Wasser wurde die Lösung mit Na&sub2;SO&sub4; getrocknet und eingeengt. Anschließend wurde dem Rückstand Petrolether unter Abscheiden eines Niederschlages zugesetzt, der durch Filtration gesammelt wurde.
  • Ausbeute: 0,65 g (97,5%), Schmelzpunkt: 114-116ºC, Rf&sub1;: 0,03, Rf&sub2;: 0,67.
  • [α]D²&sup8; -12,5º (c = 1,02 in DMF)
  • Elementaranalyse als C&sub6;&sub0;H&sub7;&sub0;N&sub8;O&sub1;&sub3;
  • Berechnet: C 64,85; H 6,35; N 10,08
  • Gefunden: C 64,92; H 6,42; N 10,01
    • (3) Herstellung von cyclo[-D-Asp-Trp-Asp-Acbu-Leu-D-Trp-]
  • Boc-Acbu-Leu-D-Trp-D-Asp(OBzl)-Trp-Asp(OBzl)-OH (0,33 g) wurde in DOM (10 ml) gelöst und die Lösung wurde mit Eis gekühlt. HONB (0,11 g) und DCC (0,12 g) wurden hinzugesetzt, gefolgt von 3 Stunden Rühren. Anschließend wurde der sich daraus ergebende DCU durch Filtration abgetrennt, gefolgt vom Einengen und dem Rückstand wurde Ether unter Abscheiden eines Niederschlages zugesetzt, der durch Filtration gesammelt wurde. 8 N HCl/Dioxan (10 ml) wurde unter Eiskühlung zum Lösen des Niederschlages hinzugesetzt. Die sich daraus ergebende Lösung wurde 15 Minuten gerührt und eingeengt. Anschließend wurde dem Rückstand Ether unter Abscheiden eines Niederschlages zugesetzt, der durch Filtration gesammelt und getrocknet wurde. Der Niederschlag wurde in DMF (6 ml) gelöst und die sich daraus ergebende Lösung wurde während 30 Minuten tropfenweise TEA (0,42 ml) enthaltendem DMF (54 ml) zugesetzt, gefolgt vom Rühren über Nacht und Einengen. Der Rückstand wurde in AcOEt gelöst und die Lösung wurde mit 4% wäßrigem NaHCO&sub3; gewaschen. Nach dem Waschen mit Wasser wurde die Lösung mit Na&sub2;SO&sub4; getrocknet und eingeengt. Anschließend wurde dem Rückstand Ether unter Abscheiden eines Niederschlages zugesetzt, der durch Filtration gesammelt und getrocknet wurde. 99 mg dieses Niederschlages wurden in DMF (15 ml) gelöst und im Wasserstoffstrom unter Verwenden von Palladiumschwarz als Katalysator katalytisch reduziert. Der Katalysator wurde durch Filtration abgetrennt und anschließend wurde das Filtrat eingeengt. Der sich daraus ergebende Rückstand wurde in einer geringen Menge AcOH gelöst und danach wurde Wasser zum Ausführen einer Lyophilisierung zugesetzt. Schließlich wurde ein Teil des lyophilisierten Produktes durch Flüssigkeitschromatographie mittels einer YMC-D-ODS-5-Säule (2 cm x 25 cm) unter Erhalten des gewünschten Materials gereinigt. Die Ausbeute war 2,2 mg (10,4%).
  • Aminosäurenanal. [110ºC, 24 Stunden Hydrolyse; die Zahlen in Klammern zeigen die theoretisöhen Werte]: Asp 2,00 (2), Leu 1,23 (1).
  • LSIMS (M + H&spplus;) = 813, (theoretischer Wert) = 813
    • Beispiel 79 Herstellung von cyclo[-D-Asp-Orn(COPh)-Asp-D-Leu-Leu-D-Trp-] (1) Herstellung von Boc-D-Asp(OBzl)-OPac
  • Boc-D-Asp(OBzl)-OH(25,0 g) wurde in Methanol (50 ml) gelöst und Cs&sub2;CO&sub3; (12,6 g) wurde unter Rühren bei Raumtemperatur nach und nach zugesetzt. Nachdem das Cs&sub2;CO&sub3; gelöst war, wurde das Lösungsmittel durch Destillation entfernt und der Rückstand wurde in DMF (500 ml) gelöst. Eine DMF-Lösung (50 ml) von Phenacylbromid (15,4 g) wurde tropfenweise unter Rühren und Eiskühlung hinzugesetzt, weiter gefolgt von 1 Stunde Rühren bei Raumtemperatur. Ausgefallenes CsBr wurde durch Filtration entfernt und das Lösungsmittel wurde durch Destillation entfernt. Der Rückstand wurde in AcOEt gelöst und die Lösung wurde nacheinander mit 5% wäßrigem NaHCO&sub3;, 10% wäßriger Zitronensäure und einer gesättigten Natriumchloridlösung gewaschen. Nach dem Trocknen mit Na&sub2;SO&sub4; wurde das Lösungsmittel durch Destillation entfernt und der Rückstand wurde aus Essigsäureethylester-Petrolether umkristallisiert.
  • Ausbeute: 31,8 g (93,2%), Schmelzpunkt: 74,0-75,0ºC, Rf&sub1;: 0,73, Rf&sub2;: 0,86.
  • [α]D²&sup5; 21,9º (c = 1,00 in DMF)
  • Elementaranalyse als C&sub2;&sub4;H&sub2;&sub7;NO&sub7;
  • Berechnet: C 65,29; H 6,16; N 3,17
  • Gefunden: C 65,03; H 6,19; N 3,14
    • (2) Herstellung von Boc-D-Trp-D-Asp(OBzl)-OPac
  • Boc-D-Asp(OBzl)-OPac (26,5 g) wurde in Dioxan (50 ml) gelöst und 10 N HCl/Dioxan (28,6 ml) wurde unter Eiskühlung hinzugesetzt, gefolgt von 30 Minuten Rühren unter Eiskühlung. Das Lösungsmittel wurde durch Destillation bei Raumtemperatur entfernt und dem Rückstand wurde Ether unter Bilden eines Niederschlages zugesetzt, der durch Filtration gesammelt wurde, wodurch H-D- Asp(OBzl)-OPac-Hydrochlorid erhalten wurde.
  • Boc-D-Trp-OH (18,3 g) wurde in destilliertem THF (150 ml) gelöst und N-Methylmorpholin wurde unter Rühren bei Raumtemperatur zugesetzt. Nachdem die Luft durch Stickstoff ersetzt worden war, wurde langsam Chlorameisensäureisobutylester (7,88 ml) tropfenweise unter Rühren bei -15ºC zugesetzt und das Rühren wurde weiter 15 Minuten bei -15ºC fortgesetzt, wodurch gemischte Säureanhydride erhalten wurden. Ein Aminbestandteil [hergestellt durch Lösen von H-D-Asp(OBzl)-OPac-Hydrochlorid in DMF (100 ml) und Hinzusetzen von N-Methylmorpholin (6,62 ml) zur Neutralisation unter Rühren bei -15ºC] wurde unter Rühren bei -15ºC nach und nach hinzugesetzt und das Gemisch wurde bei Raumtemperatur 1 Stunde weitergerührt. Das Lösungsmittel wurde durch Destillation entfernt und der Rückstand wurde in AcOEt gelöst. Die Lösung wurde nacheinander mit 5% wäßrigem NaHCO&sub3;, 10% wäßriger Zitronensäure und einer gesättigten wäßrigen Natriumchloridlösung gewaschen. Nach dem Trocknen mit Na&sub2;SO&sub4; wurde das Lösungsmittel durch Destillation entfernt und der Rückstand wurde aus Essigsäureethylester-Petrolether umkristallisiert.
  • Ausbeute: 36,1 g (96,0%), Schmelzpunkt: 75,0-76,0ºC, Rf&sub1;: 0,34, Rf&sub2;: 0,73.
  • [α]D²&sup5; 19,1º (c = 1,00 in DMF)
  • Elementaranalyse: als C&sub3;&sub5;H&sub3;&sub7;N&sub3;O&sub8;
  • Berechnet: C 66,97; H 5,94; N 6,69
  • Gefunden: C 67,19; H 6,20; N 6,44
    • (3) Herstellung von Boc-Leu-D-Trp-D-Asp(OBzl)-OPac
  • Boc-D-Trp-D-Asp(OBzl)-OPac (34,5 g) wurde in Dioxan (50 ml) gelöst und 10 N HCl/Dioxan (100 ml) wurden unter Eiskühlung hinzugesetzt, gefolgt von 30 Minuten Rühren unter Eiskühlung. Das Lösungsmittel wurde durch Destillation bei Raumtemperatur entfernt und dem Rückstand wurde Ether unter Abscheiden eines Niederschlages zugesetzt, der durch Filtration gesammelt wurde. Der sich daraus ergebende Niederschlag wurde in DMF (350 ml) gelöst und TEA wurde unter Eiskühlung und Neutralisieren zugesetzt. Eine aus Boc-Leu-OH (15,3 g), HONB (13,8 g) und DCC (17,0 g) hergestellte DMF-Lösung (50 ml) von Boc-Leu-ONB wurde weiter hinzugesetzt, gefolgt vom Rühren über Nacht bei Raumtemperatur. Das Lösungsmittel wurde durch Destillation entfernt und der Rückstand wurde in AcOEt gelöst. N,N-Dimethylpropandiamin (2,5 ml) wurde hinzugesetzt, gefolgt von 30 Minuten Rühren bei Raumtemperatur. Das Gemisch wurde nacheinander mit 5% wäßrigem NaHCO&sub3;, 10% wäßriger Zitronensäure und einer gesättigten wäßrigen Natriumchloridlösung gewaschen. Nach dem Trocknen mit Na&sub2;SO&sub4; wurde das Lösungsmittel durch Destillation entfernt und anschließend wurde dem Rückstand Ether-Petrolether unter Abscheiden eines Niederschlages zugesetzt, der durch Filtration gesammelt wurde.
  • Ausbeute: 37,49 g (92,0%), Schmelzpunkt: 72-74ºC, Rf&sub1;: 0,28, Rf&sub2;: 0,71.
  • [α]D²&sup5; 28,3º (c = 1,00 in DMF)
  • Elementaranalyse als C&sub4;&sub1;H&sub4;&sub8;N&sub4;O&sub9;
  • Berechnet: C 66,47; H 6,53; N 7,56
  • Gefunden: C 66,25; H 6,68; N 7,56
    • (4) Herstellung von Boc-D-Leu-Leu-D-Trp-D-Asp(OBzl)-OPac
  • Boc-Leu-D-Trp-D-Asp(OBzl)-OPac (29,6 g) wurde in Dioxan (40 ml) gelöst und 10 N HCl/Dioxan (100 ml) wurde unter Eiskühlung hinzugesetzt, gefolgt von 30 Minuten Rühren unter Eiskühlung. Das Lösungsmittel wurde durch Destillation bei Raumtemperatur entfernt und dem Rückstand wurde Ether unter Abscheiden eines Niederschlages zugesetzt, der durch Filtration gesammelt wurde. Der sich daraus ergebende Niederschlag wurde in DMF (300 ml) gelöst und zum Neutralisieren wurde TEA unter Rühren und Eiskühlung zugesetzt. Eine DMF-Lösung (40 ml) von aus Boc-D-Leu-OH H&sub2;O (11,0 g), HONB (8,60 g) und DCC (10,7 g) hergestelltem Boc-D- Leu-ONB wurde weiter hinzugesetzt, gefolgt vom Rühren über Nacht bei Raumtemperatur. Das Lösungsmittel wurde durch Destillation entfernt und der Rückstand wurde in AcOEt gelöst. N,N-Dimethylpropandiamin (1,26 ml) wurde hinzugesetzt, gefolgt von 30 Minuten Rühren bei Raumtemperatur. Das Gemisch wurde nacheinander mit 5% wäßrigem NaHCO&sub3;, 10% wäßriger Zitronensäure und einer gesättigten wäßrigen Natriumchloridlösung gewaschen. Nach dem Trocknen mit Na&sub2;SO&sub4; wurde das Lösungsmittel durch Destillation entfernt und anschließend wurde dem Rückstand Ether-Petrolether unter Abscheiden eines Niederschlages zugesetzt, der durch Filtration gesammelt wurde.
  • Ausbeute: 30,9 g (90,5%), Schmelzpunkt: 79-80ºC, Rf&sub1;: 0,26, Rf&sub2;: 0,73.
  • [α]D²&sup5; 27,4º (c = 1,00 in DMF)
  • Elementaranalyse: als C&sub4;&sub7;H&sub5;&sub9;N&sub5;O&sub1;&sub0;
  • Berechnet: C 66,10; H 6,96; N 8,20
  • Gefunden: C 66,11; H 7,05; N 8,05
    • (5) Herstellung von Boc-Asp(OBzl)-D-Leu-Leu-D-Trp-D-Asp(OBzl)- OPac
  • Boc-D-Leu-Leu-D-Trp-D-Asp(OBzl)-OPac (17,1 g) wurde in Diokan (10 ml) gelöst und 10 N HCl/Dioxan (50 ml) wurde unter Eiskühlung hinzugesetzt, gefolgt von 30 Minuten Rühren unter Eiskühlung. Das Lösungsmittel wurde durch Destillation bei Raumtemperatur entfernt und dem Rückstand wurde Ether unter Abscheiden eines Niederschlages zugesetzt, der durch Filtration gesammelt wurde. Der sich daraus ergebende Niederschlag wurde in DMF (100 ml) gelöst und zum Neutralisieren wurde TEA unter Rühren und Eiskühlung hinzugesetzt. Eine DMF-Lösung (20 ml) von aus Boc- Asp-(OBzl)-OH (7,76 g), HONB (5,02 g) und DCC (6,19 g) hergestelltem Boc-Asp(OBzl)-ONB wurde weiter hinzugesetzt, gefolgt vom Rühren über Nacht bei Raumtemperatur. Das Lösungsmittel wurde durch Destillation entfernt und der Rückstand wurde in AcOEt gelöst. N,N-Dimethylpropandiamin (0,63 ml) wurde hinzugesetzt, gefolgt von 30 Minuten Rühren bei Raumtemperatur. Das Gemisch wurde nacheinander mit 5% wäßrigem NaHCO&sub3;, 10% wäßriger Zitronensäure und einer gesättigten wäßrigen Natriumchloridlösung gewaschen. Nach dem Trocknen mit Na&sub2;SO&sub4; wurde das Lösungsmittel durch Destillation entfernt und anschließend wurde dem Rückstand Ether-Petrolether unter Abscheiden eines Niederschlages zugesetzt, der durch Filtration gesammelt wurde. Der Niederschlag wurde aus Essigsäureethylacetat-Petrolether umkristallisiert.
  • Ausbeute: 16,5 g (82,5%), Schmelzpunkt: 178-179ºC, Rf&sub1;: 0,28, Rf&sub2;: 0,76.
  • [α]D²&sup5; 13,0º (c = 1,00 in DMF)
  • Elementaranalyse: als C&sub5;&sub6;H&sub7;&sub0;N&sub6;O&sub1;&sub3;
  • Berechnet: C 65,77; H 6,66; N 7,93
  • Gefunden: C 65,49; H 6,69; N 8,02
    • (6) Herstellung von Boc-Orn(COPh)-OH DCHA
  • Boc-Orn-OH (0,51 g) [durch katalytisches Reduzieren von Boc- Orn(Z)-OH in Methanol im Wasserstoffstrom mittels 10% Pd-Kohle als Katalysator erhalten] wurde in DMF gelöst und die Lösung wurde mit Eis gekühlt. TEA (0,61 ml) und PhCOONB [hergestellt aus PhCOOH (0,30 g), HONB (0,47 g) und DCC (0,54 g)] wurden hinzugesetzt, gefolgt vom Rühren über Nacht. Die Reaktionslösung wurde eingeengt und der Rückstand wurde in AcOEt gelöst. Die sich daraus ergebende Lösung wurde mit 10% wäßriger Zitronensäure gewaschen. Nach dem Waschen mit Wasser wurde die Lösung mit Na&sub2;SO&sub4; getrocknet und eingeengt. Anschließend wurden Ether und Dicyclohexylamin (438 µl) unter Abscheiden eines Niederschlages zugesetzt, der durch Filtration gesammelt wurde.
  • Ausbeute: 1,01 g (97,6%), Schmelzpunkt: 148-150ºC
  • [α]D²&sup8; +9,6º (c = 0,90 in Methanol)
  • Elementaranalyse als C&sub2;&sub9;H&sub4;&sub7;N&sub3;O&sub5;
  • Berechnet: C 67,28; H 9,15; N 8,12
  • Gefunden: C 67,35; H 8,99; N 8,03
    • (7) Herstellung von Boc-Orn(COPh)-Asp(OBzl)-D-Leu-Leu-D-Trp-D- Asp(OBzl)-OPac
  • In vorstehend beschriebenem (5) erhaltenes Boc-Asp(OBzl)-D-Leu- Leu-D-Trp-D-Asp(OBzl)-OPac (0,85 9) wurde in 8 N HCl/Dioxan (15 ml) gelöst und die Lösung wurde 10 Minuten unter Eiskühlung gerührt, gefolgt vom Einengen. Anschließend wurde Ether unter Fällen von Kristallen zugesetzt, die durch Filtration gesammelt und getrocknet wurden. Die Kristalle wurden in DMF (15 ml) gelöst und die Lösung wurde mit Eis gekühlt, gefolgt von der Zugabe von TEA (0,22 ml). Boc-Orn(COPH)-ONB [hergestellt aus Boc-Orn(COPh)-OH (0,30 g), HONB (0,18 g) und DCC (0,21 g)] wurde hinzugesetzt und das Gemisch wurde über Nacht gerührt. Das sich daraus ergebende unlösliche Material wurde durch Filtration getrennt, gefolgt vom Einengen. Der Rückstand wurde in AcOEt gelöst und die Lösüng wurde mit Wasser, 10% wäßriger Zitronensäure und 4% wäßrigem NaHCO&sub3; gewaschen. Nach dem Waschen mit Wasser wurde die Lösung mit Na&sub2;SO&sub4; getrocknet und eingeengt. Dem sich daraus ergebenden Rückstand wurde Ether unter Abscheiden eines Niederschlages zugesetzt, der durch Filtration gesammelt wurde.
  • Ausbeute: 0,97 g (94,9%), Schmelzpunkt: 107-109ºC, Rf&sub1;: 0,28, Rf&sub2;: 0,63.
  • [α]D²&sup8; +8,2º (c = 1,23 in DMF)
  • Elementaranalyse als C&sub7;&sub0;H&sub8;&sub4;N&sub8;O&sub1;&sub5;
  • Berechnet: C 65,81; H 6,63; N 8,77
  • Gefunden: C 65,76; H 6,76; N 8,93
    • (8) Herstellung von Boc-Orn(COPh)-Asp(OBzl)-D-Leu-Leu-D-Trp-D- Asp(OBzl)-OH
  • Boc-Orn(COPh)-Asp(OBzl)-D-Leu-Leu-D-Trp-D-Asp(OBzl)-OPac (0,77 g) wurde in 90% wäßriger AcOH (20 ml) gelöst und Zn-Pulver (1,96 g) wurde hinzugesetzt, gefolgt von 3 Stunden Rühren. Das Zn- Pulver wurde durch Filtration entfernt und das Filtrat wurde eingeengt. Dem Rückstand wurde AcOEt zum Lösen zugesetzt und die Lösung wurde mit 10% wäßriger Zitronensäure gewaschen. Nach dem Waschen mit Wasser wurde die Lösung mit Na&sub2;SO&sub4; getrocknet und eingeengt. Anschließend wurde dem Rückstand Petrolether unter Abscheiden eines Niederschlages zugesetzt, der durch Filtration gesammelt wurde.
  • Ausbeute: 0,68 g (97,8%), Schmelzpunkt: 113-115ºC, Rf&sub1;: 0,02, Rf&sub2;: 0,63.
  • [α]D²&sup8; +9,8º (c = 1,10 in DMF)
  • Elementaranalyse als C&sub6;&sub2;H&sub7;&sub8;N&sub8;O&sub1;&sub4;
  • Berechnet: C 64,23; H 6,78; N 9,67
  • Gefunden: C 64,11; H 6,90; N 9,52
    • (9) Herstellung von cyclo[-D-Asp-Orn(COPh)-Asp-D-Leu-Leu-D- Trp-]
  • Boc-Orn(COPh)-Asp(OBzl)-D-Leu-Leu-D-Trp-D-Asp(OBzl)-OH (0,35 g) wurde in DCM (20 ml) gelöst und die Lösung wurde mit Eis gekühlt. HONB (0,11 g) und DCC (0,12 g) wurden hinzugesetzt, gefolgt von 3 Stunden Rühren. Anschließend wurde der sich daraus ergebende DCU durch Filtration abgetrennt, gefolgt vom Einengen und dem Rückstand wurde Ether unter Abscheiden eines Niederschlages zugesetzt, der durch Filtration gesammelt wurde. 8 N HCl/Dioxan (20 ml) wurde unter Eiskühlung zum Lösen des Niederschlages hinzugesetzt. Die sich daraus ergebende Lösung wurde 10 Minuten gerührt und eingeengt. Anschließend wurde dem Rückstand Ether unter Abscheiden eines Niederschlages zugesetzt, der durch Filtration gesammelt und getrocknet wurde. Der Niederschlag wurde in DMF (6 ml) gelöst und die sich daraus ergebende Lösung wurde während 30 Minuten tropfenweise TEA (0,42 ml) enthaltendem DMF (54 ml) zugesetzt, gefolgt vom Rühren über Nacht und Einengen. Der Rückstand wurde in AcOEt gelöst und die Lösung wurde mit 4% wäßrigem NaHCO&sub3; gewaschen. Nach dem Waschen mit Wasser wurde die Lösung mit Na&sub2;SO&sub4; getrocknet und eingeengt. Anschließend wurde dem Rückstand Ether-Petrolether unter Abscheiden eines Niederschlages zugesetzt, der durch Filtration gesammelt und getrocknet wurde. 104 mg dieses Niederschlages wurden in DMF (15 ml) gelöst und im Wasserstoffstrom unter Verwenden von Palladiumschwarz als Katalysator katalytisch reduziert. Der Katalysator wurde durch Filtration entfernt und anschließend wurde das Filtrat eingeengt. Der sich daraus ergebende Rückstand wurde in einer geringen Menge AcOH gelöst und anschließend wurde Wasser zum Ausführen einer Lyophilisierung zugesetzt. Schließlich wurde ein Teil des lyophilisierten Produktes durch Flüssigkeitschromatographie mittels einer YMC-D-ODS-5-Säule (2 cm x 25 cm) (Y.M.C.) unter Erhalten des gewünschten Materials gereinigt. Die Ausbeute war 11,1 mg (48,1%).
  • Aminosäurenanal. [6 N HCl, 110ºC, 24 Stunden Hydrolyse; die Zahlen in Klammern zeigen die theoretischen Werte]: Asp 2,00 (2), Leu 2,19 (2), Orn 1,09 (1).
  • LSIMS (M + H&spplus;) = 861, (theoretischer Wert) = 861
    • Beispiel 80 Herstellung von cyclo[-D-Asp-Orn(COCH&sub2;Ph)-Asp-D-Leu-Leu-D-Trp-] (1) Herstellung von Boc-Orn(COCH&sub2;Ph)-OH CHA
  • Boc-Orn-OH (0,51 g) wurde in DMF gelöst und die Lösung wurde mit Eis gekühlt. TEA (1,53 ml) und PHCH&sub2;COCl (367 µl) wurden hinzugesetzt und 2 Stunden gerührt. Die Reaktionslösung wurde eingeengt und der Rückstand wurde in AcOEt gelöst. Die sich daraus ergebende Lösung wurde mit 10% wäßriger Zitronensäure gewaschen. Nach dem Waschen mit Wasser wurde die Lösung mit Na&sub2;SO&sub4; getrocknet und eingeengt. Anschließend wurden dem Rückstand Ether und Cyclohexylamin (254 µl) unter Abscheiden eines Niederschlages zugesetzt, der durch Filtration gesammelt wurde.
  • Ausbeute: 0,52 g (57,9%), Schmelzpunkt: 137-139ºC
  • [α]D²&sup8; +2,4º (c = 0,50 in Methanol)
  • Elementaranalyse: als C&sub2;&sub4;H&sub3;&sub9;N&sub3;O&sub5;
  • Berechnet: C 64,12; H 8,74; N 9,35
  • Gefunden: C 64,05; H 8,92; N 9,39
    • (2) Herstellung von Boc-Orn(COCH&sub2;Ph)-Asp(OBzl)-D-Leu-Leu-D-Trp- D-Asp(OBzl)-OPac
  • In Beispiel 79 (5) hergestelltes BOC-Asp(OBzl)-D-Leu-Leu-D-Trp- D-Asp(OBzl)-OPac (0,85 g) wurde in 8 N HCl/Dioxan (15 ml) gelöst und die Lösung wurde 10 Minuten unter Eiskühlung gerührt, gefolgt vom Einengen. Anschließend wurde Ether unter Fällen von Kristallen zugesetzt, die durch Filtration gesammelt und getrocknet wurden. Die Kristalle wurden in DMF (15 ml) gelöst und die Lösung wurde mit Eis gekühlt, gefolgt von der Zugabe von TEA (0,22 ml). Boc-Orn(COCH&sub2;Ph)-ONB [hergestellt aus Boc- Orn(COCH&sub2;Ph)-OH (0,32 g), HONB (0,18 g) und DCC (0,21 g)] wurde hinzugesetzt und das Gemisch wurde über Nacht gerührt. Das sich daraus ergebende unlösliche Material wurde durch Filtration getrennt, gefolgt vom Einengen. Der Rückstand wurde in AcOEt gelöst und die Lösung wurde mit Wasser, 10% wäßriger Zitronensäure und 4% wäßrigem NaHCO&sub3; gewaschen. Nach dem Waschen mit Wasser wurde die Lösung mit Na&sub2;SO&sub4; getrocknet und eingeengt. Dem sich daraus ergebenden Rückstand wurde Ether unter Abscheiden eines Niederschlages zugesetzt, der durch Filtration gesammelt wurde.
  • Ausbeute: 0,81 g (78,4%), Schmelzpunkt: 148-150ºC, Rf&sub1;: 0,34, Rf&sub2;: 0,65.
  • [α]D²&sup8; +14,1º (c = 1,13 in DMF)
  • Elementaranalyse als C&sub7;&sub1;H&sub8;&sub6;N&sub8;S&sub1;&sub5;
  • Berechnet: C 66,03; H 6,71; N 8,68
  • Gefunden: C 66,14; H 6,67; N 8,51
    • (3) Herstellung von Boc-Orn(COCH&sub2;Ph)-Asp(OBzl)-D-Leu-Leu-D-Trp- D-Asp(OBzl)-OH
  • Boc-Orn(COOH&sub2;Ph)-Asp(OBzl)-D-Leu-Leu-D-Trp-D-Asp(OBzl)-OPac (0,65 g) wurde in 90% wäßriger AcOH (20 ml) gelöst und Zn-Pulver (1,63 g) wurde hinzugesetzt, gefolgt von 3 Stunden Rühren. Das Zn- Pulver wurde durch Filtration entfernt und das Filtrat wurde eingeengt. Dem Rückstand wurde AcOEt zum Lösen zugesetzt und die Lösung wurde mit 10% wäßriger Zitronensäure gewaschen. Nach dem Waschen mit Wasser wurde die Lösung mit Na&sub2;SO&sub4; getrocknet und eingeengt. Anschließend wurde dem Rückstand Petrolether unter Abscheiden eines Niederschlages zugesetzt, der durch Filtration gesammelt wurde.
  • Ausbeute: 0,57 g (97,2%), Schmelzpunkt: 120-122ºC, Rf&sub1;: 0,03, Rf&sub2;: 0,64.
  • [α]D²&sup8; +16,9º (c = 0,91 in DMF)
  • Elementaranalyse: als C&sub6;&sub3;H&sub8;&sub0;N&sub8;O&sub1;&sub4;
  • Berechnet: C 64,49; H 6,87; N 9,55
  • Gefunden: C 64,60; H 6,79; N 9,36
    • (4) Herstellung von cyclo[-D-Asp-Orn(COCH&sub2;Ph)-Asp-D-Leu-Leu-D- Trp-]
  • Boc-Orn(COCH&sub2;Ph)-Asp(OBzl)-D-Leu-Leu-D-Trp-D-Asp(OBzl)-OH (0,35 g) wurde in DOM (20 ml) gelöst und die Lösung wurde mit Eis gekühlt. HONB (0,11 g) und DCC (0,12 g) wurden hinzugesetzt, gefolgt von 3 Stunden Rühren. Anschließend wurde der sich daraus ergebende DCU durch Filtration abgetrennt, gefolgt vom Einengen und dem Rückstand wurde Ether unter Abscheiden eines Niederschlages zugesetzt, der durch Filtration gesammelt wurde. 8 N HCl/Dioxan (20 ml) wurde unter Eiskühlung zum Lösen des Niederschlages hinzugesetzt, der durch Filtration gesammelt wurde. Die sich daraus ergebende Lösung wurde 10 Minuten gerührt und eingeengt. Anschließend wurde dem Rückstand Ether unter Abscheiden eines Niederschlages zugesetzt, der durch Filtration gesammelt und getrocknet wurde. Der Niederschlag wurde in DMF (10 ml) gelöst und die sich daraus ergebende Lösung wurde während 30 Minuten tropfenweise TEA (0,42 ml) enthaltendem DMF (54 ml) zugesetzt, gefolgt vom Rühren über Nacht und Einengen. Der Rückstand wurde in AcOEt gelöst und die Lösung wurde mit 4% wäßrigem NaHCO&sub3; gewaschen. Nach dem Waschen mit Wasser wurde die Lösung mit Na&sub2;SO&sub4; getrocknet und eingeengt. Anschließend wurde dem Rückstand Ether-Petrolether unter Abscheiden eines Niederschlages zugesetzt, der durch Filtration gesammelt und getrocknet wurde. 106 mg dieses Niederschlages wurden in DMF (15 ml) gelöst und im Wasserstoffstrom unter Verwenden von Palladiumschwarz als Katalysator katalytisch reduziert. Der Katalysator wurde durch Filtration entfernt und anschließend wurde das Filtrat eingeengt. Der sich daraus ergebende Rückstand wurde in einer geringen Menge AcOH gelöst und anschließend wurde Wasser zum Ausführen einer Lyophilisierung zugesetzt. Schließlich wurde ein Teil des lyophilisierten Produktes durch Flüssigkeitschroma tographie mittels einer YMC-D-ODS-5-Säule (2 cm x 25 cm) (Y.M.C.) unter Erhalten des gewünschten Materials gereinigt. Die Ausbeute war 2,3 mg (2,9%).
  • Aminosäurenanal. [6 N HCl, 110ºC, 24 Stunden Hydrolyse; die Zahlen in Klammern zeigen die theoretischen Werte]: Asp 2,00 (2), Leu 2,29 (2), Orn 1,10 (1).
  • LSIMS (M + H&spplus;) = 876, (theoretischer Wert) = 876
    • Beispiel 81 Herstellung von cyclo[-D-Asp-Orn(COCH&sub2;CH&sub2;Ph)-Asp-D-Leu-Leu-D- Trp-] (1) Herstellung von Boc-Orn(COCH&sub2;CH&sub2;Ph)-OH DCHA
  • Boc-Orn-OH (0,51 g) wurde in DMF gelöst und die Lösung wurde mit Eis gekühlt. TEA (0,61 ml) und PhCH&sub2;CH&sub2;COONB [hergestellt aus PhCH&sub2;CH&sub2;COOH (0,36 g), HONB (0,47 g) und DCC (0,54 g)] wurden hinzugesetzt und über Nacht gerührt. Die Reaktionslösung wurde eingeengt und der Rückstand wurde in AcOEt gelöst. Die Reaktionsiösung wurde mit 10% wäßriger Zitronensäure gewaschen. Nach dem Waschen mit Wasser wurde die Lösung mit Na&sub2;SO&sub4; getrocknet und eingeengt. Anschließend wurden dem Rückstand Ether und Dicyclohexylamin (438 µl) unter Abscheiden eines Niederschlages zugesetzt, der durch Filtration gesammelt wurde.
  • Ausbeute: 0,72 g (66,1%), Schmelzpunkt: 131-133ºC
  • [α]D²&sup8; +6,9º (c = 0,86 in Methanol)
  • Elementaranalyse: als C&sub3;&sub1;H&sub5;&sub1;N&sub3;O&sub5;
  • Berechnet: C 68,22; H 9,42; N 7,70
  • Gefunden: C 68,29; H 9,22; N 7,62
    • (2) Herstellung von Boc-Orn(COCH&sub2;CH&sub2;Ph)-Asp(OBzl)-D-Leu-Leu-D- Trp-D-Asp(OBzl)-OPac
  • In Beispiel 79 (5) hergestelltes Boc-Asp(OBzl)-D-Leu-Leu-D-Trp- D-Asp(OBzl)-OPac (0,85 g) wurde in 8 N HCl/Dioxan (15 ml) gelöst und die Lösung wurde 10 Minuten unter Eiskühlung gerührt, gefolgt vom Einengen. Anschließend wurde Ether unter Fällen von Kristallen zugesetzt, die durch Filtration gesammelt und getrocknet wurden. Die Kristalle wurden in DMF (15 ml) gelöst und die Lösung wurde mit Eis gekühlt, gefolgt von der Zugabe von TEA (0,22 ml). Boc-Orn(COCH&sub2;CH&sub2;Ph)-ONB [hergestellt aus Boc- Orn(COCH&sub2;CH&sub2;Ph)-OH (0,33 g), HONB (0,18 g) und DCC (0,21 g)] wurde hinzugesetzt und das Gemisch wurde über Nacht gerührt. Das sich daraus ergebende unlösliche Material wurde durch Filtration getrennt, gefolgt vom Einengen. Der Rückstand wurde in AcOEt gelöst und die Lösung wurde mit Wasser, 10% wäßriger Zitronensäure und 4% wäßrigem NaHCO&sub3; gewaschen. Nach dem Waschen mit Wasser wurde die Lösung mit Na&sub2;SO&sub4; getrocknet und eingeengt. Dem sich daraus ergebenden Rückstand wurde Ether unter Abscheiden eines Niederschlages zugesetzt, der durch Filtration gesammelt wurde.
  • Ausbeute: 0,95 g (91,0%), Schmelzpunkt: 110-112ºC, Rf&sub1;: 0,23, Rf&sub2;: 0,65.
  • [α]D²&sup8; +9,0º (c = 0,98 in DMF)
  • Elementaranalyse: als C&sub7;&sub2;H&sub8;&sub8;N&sub8;O&sub1;&sub5;
  • Berechnet: C 66,24; H 6,79; N 8,58
  • Gefunden: C 66,07; H 6,90; N 8,75
    • (3) Herstellung von Boc-Orn(COCH&sub2;CH&sub2;Ph)-Asp(OBzl)-D-Leu-Leu-D- Trp-D-Asp(OBzl)-OH
  • Boc-Orn(COCH&sub2;CH&sub2;Ph)-Asp(OBzl)-D-Leu-Leu-D-Trp-D-Asp(OBzl)-OPac (0,78 g) wurde in 90% wäßriger AcOH (20 ml) gelöst und Zn-Pulver (1,96 g) wurde hinzugesetzt, gefolgt von 3 Stunden Rühren. Das Zn-Pulver wurde durch Filtration entfernt und das Filtrat wurde eingeengt. Dem Rückstand wurde AcOEt zum Lösen zugesetzt und die Lösung wurde mit 10% wäßriger Zitronensäure gewaschen. Nach dem Waschen mit Wasser wurde die Lösung mit Na&sub2;SO&sub4; getrocknet und eingeengt. Anschließend wurde dem Rückstand Petrolether unter Abscheiden eines Niederschlages zugesetzt, der durch Filtration gesammelt wurde.
  • Ausbeute: 0,70 g (98,3%), Schmelzpunkt: 105-108ºC, Rf&sub1;: 0,02, Rf&sub2;: 0,64.
  • [α]D²&sup8; +10,4º (c = 1,20 in DMF)
  • Elementaranalyse als C&sub6;&sub4;H&sub8;&sub2;N&sub8;O&sub1;&sub4;
  • Berechnet: C 64,74; H 6,96; N 9,44
  • Gefunden: C 64,60; H 7,07; N 9,64
    • (4) Herstellung von cyclo[-D-Asp-Orn(COCH&sub2;CH&sub2;Ph)-Asp-D-Leu-Leu- D-Trp-]
  • Boc-Orn(COCH&sub2;CH&sub2;Ph)-Asp(OBzl)-D-Leu-Leu-D-Trp-D-Asp(OBzl)-OH (0,36 g) wurde in DOM (20 ml) gelöst und die Lösung wurde mit Eis gekühlt. HONB (0,11 g) und DCC (0,12 g) wurden hinzugesetzt, gefolgt von 3 Stunden Rühren. Anschließend wurde der sich daraus ergebende DCU durch Filtration abgetrennt, gefolgt vom Einengen und dem Rückstand wurde Ether unter Abscheiden eines Niederschlages zugesetzt; der durch Filtration gesammelt wurde. 8 N HCl/Dioxan (20 ml) wurde unter Eiskühlung zum Lösen des Niederschlages hinzugesetzt. Die sich daraus ergebende Lösung wurde 10 Minuten gerührt und eingeengt. Anschließend wurde dem Rückstand Ether unter Abscheiden eines Niederschlages zugesetzt, der durch Filtration gesammelt und getrocknet wurde. Der Niederschlag wurde in DMF (6 ml) gelöst und die sich daraus ergebende Lösung wurde während 30 Minuten tropfenweise TEA (0,42 ml) enthaltendem DMF (54 ml) zugesetzt, gefolgt vom Rühren über Nacht und Einengen. Der Rückstand wurde in AcOEt gelöst und die Lösung wurde mit 4% wäßrigem NaHCO&sub3; gewaschen. Nach dem Waschen mit Wasser wurde die Lösung mit Na&sub2;SO&sub4; getrocknet und eingeengt. Anschließend wurde dem Rückstand Ether-Petrolether unter Abscheiden eines Niederschlages zugesetzt, der durch Filtration gesammelt und getrocknet wurde. 107 mg dieses Niederschlages wurden in DMF (15 ml) gelöst und im Wasserstoffstrom unter Verwenden von Palladiumschwarz als Katalysator katalytisch reduziert. Der Katalysator wurde durch Filtration entfernt und anschließend wurde das Filtrat eingeengt. Der sich daraus ergebende Rückstand wurde in einer geringen Menge AcOH gelöst und danach wurde Wasser zum Ausführen einer Lyophilisierung zugesetzt. Schließlich wurde ein Teil des lyophilisierten Produktes durch Flüssigkeitschromatographie mittels einer YMC-D-ODS-5-Säule (2 cm x 25 cm) (Y.M.C.) unter Erhalten des gewünschten Materials gereinigt. Die Ausbeute war 9,1 mg (40,9%).
  • Aminosäurenanal. [6 N HCl, 110ºC, 24 Stunden Hydrolyse; die Zahlen in Klammern zeigen die theoretischen Werte): Asp 2,00 (2), Leu 2,22 (2), Orn 1,10 (1).
  • LSIMS (M + H&spplus;) = 889, (theoretischer Wert) = 889
    • Beispiel 82 Herstellung von cyclo[-D-Asp-Orn(COCH&sub2;-Ind)-Asp-D-Leu-Leu-D-Trp-] (1) Herstellung von Boc-Orn(COCH&sub2;-Ind)-OH DCHA
  • Boc-Orn-OH (0,51 g) wurde in DMF gelöst und die Lösung wurde mit Eis gekühlt. TEA (0,61 ml) und Ind-CH&sub2;COONB [hergestellt aus Ind- CH&sub2;COOH (0,42 g), HONB (0,47 9) und DCC (0,54 g)] wurde hinzugesetzt und über Nacht gerührt. Die Reaktionslösung wurde eingeengt und der Rückstand wurde in AcOEt gelöst. Die sich daraus ergebende Lösung wurde mit 10% wäßriger Zitronensäure gewaschen. Nach dem Waschen mit Wasser wurde die Lösung mit Na&sub2;SO&sub4; getrocknet und eingeengt. Anschließend wurden dem Rückstand Ether und Cyclohexylamin (254 µl) unter Abscheiden eines Niederschlages zugesetzt, der durch Filtration gesammelt wurde.
  • Ausbeute: 1,10 g (96,5%), Schmelzpunkt: 95-98ºC
  • [α]D²&sup8; +5,3º (c = 0,92 in Methanol)
  • Elementaranalyse als C&sub3;&sub2;H&sub5;&sub0;N&sub4;O&sub5;
  • Berechnet: C 67,34; H 8,83; N 9,82
  • Gefunden: C 67,25; H 9,00; N 9,93
    • (2) Herstellung von Boc-Orn(COCH&sub2;-Ind)-Asp(OBzl)-D-Leu-Leu-D- Trp-D-Asp(OBzl)-OPac
  • In Beispiel 79 (5) hergestelltes Boc-Asp(OBzl)-D-Leu-Leu-D-Trp- D-Asp(OBzl)-OPac (0,85 g) wurde in 8 N HCl/Dioxan (15 ml) gelöst und die Lösung wurde 10 Minuten unter Eiskühlung gerührt, gefolgt vom Einengen. Anschließend wurde Ether unter Fällen von Kristallen hinzugesetzt, die durch Filtration gesammelt und getrocknet wurden. Die Kristalle wurden in DMF (15 ml) gelöst und die Lösung wurde mit Eis gekühlt, gefolgt von der Zugabe von TEA (0,22 ml). Boc-Orn(COCH&sub2;-Ind)-ONB [hergestellt aus Boc-Orn(COCH&sub2;- Ind)-OH (0,35 g), HONB (0,18 g) und DCC (0,21 g)] wurde hinzugesetzt und das Gemisch wurde über Nacht gerührt. Das sich daraus ergebende unlösliche Material wurde durch Filtration getrennt, gefolgt vom Einengen. Der Rückstand wurde in AcOEt gelöst und die Lösung wurde mit Wasser, 10% wäßriger Zitronensäure und 4% wäßrigem NaHCO&sub3; gewaschen. Nach dem Waschen mit Wasser wurde die Lösung mit Na&sub2;SO&sub4; getrocknet und eingeengt. Dem sich daraus ergebenden Rückstand wurde Ether unter Abscheiden eines Niederschlages zugesetzt, der durch Filtration gesammelt wurde.
  • Ausbeute: 0,93 g (87,4%), Schmelzpunkt: 109-111ºC, Rf&sub1;: 0,16, Rf&sub2;: 0,64.
  • [α]D²&sup8; +9,7º (c = 1,01 in DMF)
  • Elementaranalyse: als C&sub7;&sub3;H&sub8;&sub7;N&sub8;O&sub1;&sub5;
  • Berechnet: C 65,90; H 6,59; N 9,47
  • Gefunden: C 65,69; H 6,89; N 9,47
    • (3) Herstellung von Boc-Orn(COCH&sub2;-Ind)-Asp(OBzl)-D-Leu-Leu-D- Trp-D-Asp(OBzl)-OH
  • Boc-Orn(COCH&sub2;-Ind)-Asp(OBzl)-D-Leu-Leu-D-Trp-D-Asp(OBzl)-OPac (0,80 g) wurde in 90% wäßriger AcOH (20 ml) gelöst und Zn-Pulver (1,96 g) wurde hinzugesetzt, gefolgt von 3 Stunden Rühren. Das Zn-Pulver wurde durch Filtration entfernt und das Filtrat wurde eingeengt. Dem Rückstand wurde AcOEt zum Lösen zugesetzt und die Lösung wurde mit 10% wäßriger Zitronensäure gewaschen. Nach dem Waschen mit Wasser wurde die Lösung mit Na&sub2;SO&sub4; getrocknet und eingeengt. Anschließend wurde dem Rückstand Petrolether unter Abscheiden eines Niederschlages zugesetzt, der durch Filtration gesammelt wurde.
  • Ausbeute: 0,71 g (97,6%), Schmelzpunkt: 96-98ºC, Rf&sub1;: 0,02, Rf&sub2;: 0,62.
  • [α]D²&sup8; +9,4º (c = 1,01 in DMF)
  • Elementaranalyse als C&sub6;&sub5;H&sub8;&sub1;N&sub9;O&sub1;&sub4;
  • Berechnet: C 64,39; H 6,73; N 10,40
  • Gefunden: C 64,51; H 6,86; N 10,36
    • (4) Herstellung von cyclo[-D-Asp-Orn(COCH&sub2;-Ind)-Asp-D-Leu-Leu-D- Trp-]
  • Boc-Orn(COCH&sub2;-Ind)-Asp(OBzl)-D-Leu-Leu-D-Trp-D-Asp(OBzl)-OH (0,36 g) wurde in DCM (20 ml) gelöst und die Lösung wurde mit Eis gekühlt. HONB (0,11 g) und DCC (0,12 g) wurden hinzugesetzt, gefolgt von 3 Stunden Rühren. Anschließend wurde der sich daraus ergebende DCU durch Filtration abgetrennt, gefolgt vom Einengen und dem Rückstand wurde Ether unter Abscheiden eines Niederschlages zugesetzt, der durch Filtration gesammelt wurde. 8 N HCl/Dioxan (20 ml) wurde unter Eiskühlung zum Lösen des Niederschlages hinzugesetzt. Die sich daraus ergebende Lösung wurde 10 Minuten gerührt und eingeengt. Anschließend wurde dem Rückstand Ether unter Abscheiden eines Niederschlages zugesetzt, der durch Filtration gesammelt und getrocknet wurde. Der Niederschlag wurde in DMF (6 ml) gelöst und die sich daraus ergebende Lösung wurde während 30 Minuten tropfenweise TEA (0,42 ml) enthaltendem DMF (54 ml) zugesetzt, gefolgt vom Rühren über Nacht und Einengen. Der Rückstand wurde in AcOEt gelöst und die Lösung wurde mit 4% wäßrigem NaHCO&sub3; gewaschen. Nach dem Waschen mit Wasser wurde die Lösung mit Na&sub2;SO&sub4; getrocknet und eingeengt. Anschließend wurde dem Rückstand Ether-Petrolether unter Abscheiden eines Niederschlages zugesetzt, der durch Filtration gesammelt und getrocknet wurde. 109 mg dieses Niederschlages wurden in DMF (15 ml) gelöst und im Wasserstoffstrom unter Verwenden von Palladiumschwarz als Katalysator katalytisch reduziert. Der Katalysator wurde durch Filtration entfernt und anschließend wurde das Filtrat eingeengt. Der sich daraus ergebende Rückstand wurde in einer geringen Menge AcOH gelöst und danach wurde Wasser zum Ausführen einer Lyophilisierung zugesetzt. Schließlich wurde ein Teil des lyophilisierten Produktes durch Flüssigkeitschromatographie mittels einer YMO-D-ODS-5-Säule (2 cm x 25 cm) unter Erhalten des gewünschten Materials gereinigt. Die Ausbeute war 4,1 mg (12,5%).
  • Aminosäurenanal. [6 N HCl, 110ºC, 24 Stunden Hydrolyse; die Zahlen in Klammern zeigen die theoretischen Werte]: Asp 2,00 (2), Leu 2,25 (2), Orn 1,08 (1).
  • LSIMS (M + H&spplus;) = 915, (theoretischer Wert) = 915
    • Beispiel 88 Herstellung von cyclo[-D-Asp-Hyp(Bzl)-Asp-D-Thg(2)-Leu-D-Trp-] (1) Herstellung von Boc-D-Asp(OBzl)-Hyp(Bzl)-Asp(OBzl)-OPac
  • 8 N HCl/Dioxan wurde gemäß den in Beispiel 53 (1) und (2) beschriebenen Verfahren hergestelltem Boc-Hyp(Bzl)-Asp(OBzl)-OPac (3,77 9) unter Lösen zugesetzt und die Lösung wurde 30 Minuten unter Eiskühlung gerührt, gefolgt vom Einengen. 4% wäßriges NaHCO&sub3; wurde unter Einstellen des pH auf 9-10 hinzugesetzt und anschließend wurde eine Extraktion mit AcOEt ausgeführt. Der Extrakt wurde mit Na&sub2;SO&sub4; getrocknet, eingeengt und getrocknet. Das sich daraus ergebende Produkt wurde in DMF (40 ml) gelöst und mit Eis gekühlt. Anschließend wurde TEA (0,84 ml) hinzugesetzt. Boc-D-Asp(OBzl)-ONB [hergestellt aus Boc-D-Asp(OBzl)-OH (2,16 g), HONB (1,31 g) und DCC (1,51 g)] wurde hinzugesetzt, gefolgt vom Rühren über Nacht. Das sich daraus ergebende unlösliche Material wurde durch Filtration abgetrennt, gefolgt vom Einengen. Der Rückstand wurde in AcOEt gelöst und die Lösung wurde mit Wasser, 10% wäßriger Zitronensäure und 4% wäßrigem NaHCO&sub3; gewaschen. Nach dem Waschen mit Wasser wurde die Lösung mit Na&sub2;SO&sub4; getrocknet und eingeengt. Der Rückstand wurde mittels Kieselgelchromatographie (1% Methanol/DCM) gereinigt und nachfolgend eingeengt. Die Ausbeute war 2,22 g (57,4%).
    • (2) Herstellung von Boc-D-Trp-D-Asp(OBzl)-Hyp(Bzl)-Asp(OBzl)- OPac
  • 8 N HCl/Dioxan wurde Boc-D-Asp(OBzl)-Hyp(Bzl)-Asp(OBzl)-OPac (1,67 g) unter Lösen zugesetzt und die Lösung wurde 10 Minuten unter Eiskühlung gerührt, gefolgt vom Einengen. 4% wäßriges NaHCO&sub3; wurde unter Einstellen des pH auf 9-10 hinzugesetzt und anschließend wurde eine Extraktion mittels AcOEt ausgeführt. Der Extrakt wurde mit Na&sub2;SO&sub4; getrocknet, eingeengt und getrocknet. Das sich daraus ergebende Produkt wurde in DMF (20 ml) gelöst und mit Eis gekühlt. Anschließend wurde TEA (0,28 ml) hinzugesetzt. Boc-D-Trp-ONB [hergestellt aus Boc-D-Trp-OH (0,67 g), HONB (0,43 g) und DCC (0,50 g)] wurde hinzugesetzt, gefolgt vom Rühren über Nacht. Das sich daraus ergebende unlösliche Material wurde durch Filtration getrennt, gefolgt vom Einengen. Der Rückstand wurde in AcOEt gelöst und die Lösung wurde mit Wasser, 10% wäßriger Zitronensäure und 4% wäßrigem NaHCO&sub3; gewaschen. Nach dem Waschen mit Wasser wurde die Lösung mit Na&sub2;SO&sub4; getrocknet und eingeengt. Dem sich daraus ergebenden Rückstand wurde Ether- Petrolether unter Abscheiden eines Niederschlages zugesetzt, der durch Filtration gesammelt wurde.
  • Ausbeute: 2,05 g (98,9%), Schmelzpunkt: 76-78ºC, Rf&sub1;: 0,48, Rf&sub2;: 0,72.
  • [α]D²&sup8; +9,2º (c = 1,13 in DMF)
  • Elementaranalyse: als C&sub5;&sub8;H&sub6;&sub1;N&sub5;O&sub1;&sub3;
  • Berechnet: C 67,23; H 5,93; N 6,76
  • Gefunden: C 67,04; H 6,14; N 6,79
    • (3) Herstellung von Boc-Leu-D-Trp-D-Asp(OBzl)-Hyp(Bzl)- Asp(OBzl)-OPac
  • 8 N HCl/Dioxan wurde Boc-D-Trp-D-Asp(OBzl)-Hyp(Bzl)-Asp(OBzl)- OPac (1,04 g) unter Lösen zugesetzt und die Lösung wurde 10 Minuten unter Eiskühlung gerührt, gefolgt vom Einengen. Anschließend wurde dem Rückstand Ether unter Abscheiden eines Niederschlages zugesetzt, der durch Filtration gesammelt und getrocknet wurde. Das sich daraus ergebende Produkt wurde in DMF (15 ml) gelöst und mit Eis gekühlt. Anschließend wurde TEA (0,28 ml) zugesetzt. Boc-Leu-ONB [hergestellt aus Boc-Leu-OH H&sub2;O (0,27 g), HONB (0,22 g) und DCC (0,25 g)] wurde hinzugesetzt, gefolgt von 3 Stunden Rühren. Das sich daraus ergebende unlösliche Material wurde durch Filtration getrennt, gefolgt vom Einengen. Der Rückstand wurde in AcOEt gelöst und die Lösung wurde mit Wasser, 10% wäßriger Zitronensäure und 4% wäßrigem NaHCO&sub3; gewaschen. Nach dem Waschen mit Wasser wurde die Lösung mit Na&sub2;SO&sub4; getrocknet und eingeengt. Dem sich daraus ergebenden Rückstand wurde Ether-Petrolether unter Abscheiden eines Niederschlages zugesetzt, der durch Filtration gesammelt wurde.
  • Ausbeute: 1,09 g (94,8%), Schmelzpunkt: 88-90ºC, Rf&sub1;: 0,50, Rf&sub2;: 0,71.
  • [α]D²&sup8; +0,6º (c = 0,88 in DMF)
  • Elementaranalyse als C&sub6;&sub4;H&sub7;&sub2;N&sub6;O&sub1;&sub4;
  • Berechnet: C 66,88; H 6,31; N 7,31
  • Gefunden: C 66,91; H 6,61; N 7,51
    • (4) Herstellung von Boc-D-Thg(2)-Leu-D-Trp-D-Asp(OBzl)- Hyp(Bzl)-Asp(OBzl)-OPac
  • 8 N HCl/Dioxan wurde Boc-Leu-D-Trp-D-Asp(OBzl)-Hyp(Bzl)- Asp(OBzl)-OPac (0,92 g) unter Lösen zugesetzt und die Lösung wurde 15 Minuten unter Eiskühlung gerührt, gefolgt vom Einengen. Anschließend wurde dem Rückstand Ether unter Abscheiden eines Niederschlages zugesetzt, der durch Filtration gesammelt und getrocknet wurde. Das sich daraus ergebende Produkt wurde in DMF (10 ml) gelöst und mit Eis gekühlt. Anschließend wurde TEA (0,22 ml) zugesetzt. Boc-D-Thg(2)-OH (0,23 g), HONB (0,13 g) und DCC (0,20 g) wurden hinzugesetzt, gefolgt von 3 Stunden Rühren. Das sich daraus ergebende unlösliche Material wurde durch Filtration getrennt, gefolgt vom Einengen. Der Rückstand wurde in AcOEt gelöst und die Lösung wurde mit Wasser, 10% wäßriger Zitronensäure und 4% wäßrigem NaHCO&sub3; gewaschen. Nach dem Waschen mit Wasser wurde die Lösung mit Na&sub2;SO&sub4; getrocknet und eingeengt. Dem sich daraus ergebenden Rückstand wurde Ether-Petrolether unter Abscheiden eines Niederschlages zugesetzt, der durch Filtration gesammelt wurde.
  • Ausbeute: 1,01 g (98,0%), Schmelzpunkt: 94-97ºC, Rf&sub1;: 0,41, Rf&sub2;: 0,70.
  • [α]D²&sup8; -0,1º (c = 0,78 in DMF)
  • Elementaranalyse: als C&sub7;&sub0;H&sub7;&sub7;N&sub7;O&sub1;&sub5;S
  • Berechnet: C 65,25; H 6,02; N 7,61; 5 2,49
  • Gefunden: C 65,40; H 6,13; N 7,75; 5 2,30
    • (5) Herstellung von Boc-D-Thg(2)-Leu-D-Trp-D-Asp(OBzl)- Hyp(Bzl)-Asp(OBzl)-OH
  • Boc-D-Thg(2)-Leu-D-Trp-D-Asp(OBzl)-Hyp(Bzl)-Asp(OBzl)-OPac (0,77 g) wurde in 90% wäßiger AcOH (20 ml) gelöst und Zn-Pulver (1,96 g) wurde hinzugesetzt, gefolgt von 3 Stunden Rühren. Das Zn- Pulver wurde durch Filtration entfernt und das Filtrat wurde eingeengt. Dem Rückstand wurde AcOEt zum Lösen zugesetzt und die Lösung wurde mit 10% wäßriger Zitronensäure gewaschen. Nach dem Waschen mit Wasser wurde die Lösung mit Na&sub2;SO&sub4; getrocknet und eingeengt. Anschließend wurde dem Rückstand Petrolether unter Abscheiden eines Niederschlages zugesetzt, der durch Filtration gesammelt wurde.
  • Ausbeute: 0,70 g (99,7%), Schmelzpunkt: 108-110ºC, Rf&sub1;: 0,33, Rf&sub2;: 0,65.
  • [α]D²&sup8; +4,6º (c = 1,15 in DMF)
  • Elementaranalyse: als C&sub6;&sub2;H&sub7;&sub1;N&sub7;O&sub1;&sub4;S
  • Berechnet: C 63,63; H 6,11; N 8,38; S 2,74
  • Gefunden: C 63,83; H 6,23; N 8,49; 5 2,45
    • (6) Herstellung von cyclo[-D-Asp-Hyp(Bzl)-Asp-D-Thg(2)-Leu-D- Trp-]
  • Boc-D-Thg(2)-Leu-D-Trp-D-Asp(OBzl)-Hyp(Bzl)-Asp(OBzl)-OH (0,35 g) wurde in DCM (10 ml) gelöst und die Lösung wurde mit Eis gekühlt. HONB (0,11 g) und DCC (0,12 g) wurden hinzugesetzt, gefolgt von 3 Stunden Rühren. Anschließend wurde der sich daraus ergebende DCU durch Filtration abgetrennt, gefolgt vom Einengen und dem Rückstand wurde Ether unter Abscheiden eines Niederschlages zugesetzt, der durch Filtration gesammelt wurde. 8 N HCl/Dioxan (10 ml) wurde unter Eiskühlung zum Lösen des Niederschlages hinzugesetzt. Die sich daraus ergebende Lösung wurde 10 Minuten gerührt und eingeengt. Anschließend wurde dem Rückstand Ether unter Abscheiden eines Niederschlages zugesetzt, der durch Filtration gesammelt und getrocknet wurde. Der Niederschlag wurde in DMF (6 ml) gelöst und die sich daraus ergebende Lösung wurde während 30 Minuten tropfenweise TEA (0,42 ml) enthaltendem DMF (54 ml) zugesetzt, gefolgt vom Rühren über Nacht und Einengen. Der Rückstand wurde in AcOEt gelöst und die Lösung wurde mit 4% wäßrigem NaHCO&sub3; gewaschen. Nach dem Waschen mit Wasser wurde die Lösung mit Na&sub2;SO&sub4; getrocknet und eingeengt. Anschließend wurde dem Rückstand Ether-Petrolether unter Abscheiden eines Niederschlages zugesetzt, der durch Filtration gesammelt und getrocknet wurde. 74 mg dieses Niederschlages wurden in DMF (15 ml) gelöst und im Wasserstoffstrom unter Verwenden von Palladiumschwarz als Katalysator katalytisch reduziert. Der Katalysator wurde durch Filtration entfernt und anschließend wurde das Filtrat eingeengt. Der sich daraus ergebende Rückstand wurde in einer geringen Menge AcOH gelöst und danach wurde Wasser zum Ausführen einer Lyophilisierung zugesetzt. Schließlich wurde ein Teil des lyophilisierten Produktes durch Flüssigkeitschromatographie mittels einer YMC-D-ODS-5-Säule (2 cm x 25 cm) (Y.M.C.) unter Erhalten des gewünschten Materials gereinigt. Die Ausbeute war 4,7 mg (5,7%).
  • Aminosäurenanal. [110ºC, 24 Stunden Hydrolyse; die Zahlen in Klammern zeigen die theoretischen Werte]: Asp 2,00 (2), Leu 1,18 (1).
  • LSIMS (M + H&spplus;) = 872, (theoretischer Wert) = 872
    • Beispiel 89 Herstellung von cyclo[-D-Asp-Gln(Bzl)-Asp-D-Thg(2)-Leu-D-Trp-] (1) Herstellung von Boc-Gln(Bzl)-OBzl
  • Boc-Glu-OBzl (1,17 g, erworben von Watanabe Kagaku) wurde in Acetonitril (50 ml) gelöst und HONB (0,68 g) und DCC (0,79 g) wurden hinzugesetzt, gefolgt von 2 Stunden Rühren unter Eiskühlung. Das sich daraus ergebende unlösliche Material wurde durch Filtration abgetrennt und Benzylamin (0,76 ml) wurde hinzugesetzt, gefolgt vom Rühren über Nacht. Nach Einengen der Reaktionslösung wurde der Rückstand in AcOEt gelöst und die Lösung wurde mit Wasser, 10% wäßriger Zitronensäure und 4% wäßrigem NaHCO&sub3; gewaschen. Nach dem Waschen mit Wasser wurde die Lösung mit Na&sub2;SO&sub4; getrocknet und eingeengt. Anschließend wurde dem Rückstand Ether unter Abscheiden eines Niederschlages zugesetzt, der durch Filtration gesammelt wurde.
  • Ausbeute: 1,37 g (92,6%), Schmelzpunkt: 91,5-92,5ºC, Rf&sub1;: 0,36, Rf&sub2;: 0,69.
  • [α]D²&sup5; -16,5º (c = 1,02 in DMF)
  • Elementaranalyse als C&sub2;&sub4;H&sub3;&sub0;N&sub2;O&sub5;
  • Berechnet: C 67,59; H 7,09; N 6,57
  • Gefunden: C 67,44; H 7,20; N 6,68
    • (2) Herstellung von Boc-Gln(Bzl)-Asp(OBzl)-OPac
  • Boc-Gln(Bzl)-OH (3,36 g) [hergestellt durch katalytisches Reduzieren von Boc-Gln(Bzl)-OBzl (4,26 g) in Methanol (20 ml) im Wasserstoffstrom bei Normaltemperatur und -druck in Anwesenheit von 10% Pd-Kohle (20 mg)] wurde in THF gelöst und die Lösung wurde unter Rühren auf -15ºC gekühlt. Anschließend wurde N- Methylmorpholin (1,1 ml) hinzugesetzt und nachfolgend wurde IBCF (1,3 ml) zugesetzt. Nach 2 Minuten wurde eine DMF-Lösung von HCl Asp(OBzl)-OPac und N-Methylmorpholin (1,1 ml) zugesetzt. HCl Asp (OBzl)-OPac wurde durch Lösen von Boc-Asp(OBzl)-OPac (4,41 g) in 8 N HCl/Dioxan (50 ml), 30 Minuten Rühren der Lösung unter Eiskühlung, gefolgt vom Einengen und Zufügen von Ether unter Ausfällen von Kristallen erhalten, die durch Filtration gesammelt und getrocknet wurden. Nach 30 Minuten Rühren bei -15ºC wurde die Lösung auf Raumtemperatur gebracht. Nach 30 Minuten wurde das sich daraus ergebende unlösliche Material durch Filtration abgetrennt, gefolgt vom Einengen. Der Rückstand wurde in AcOEt gelöst und die Lösung wurde mit Wasser, 10% wäßriger Zitronensäure und 4% wäßrigem NaHCO&sub3; gewaschen. Nach dem Waschen mit Wasser wurde die Lösung mit Na&sub2;SO&sub4; getrocknet und eingeengt. Dem sich daraus ergebenden Rückstand wurde Ether unter Abscheiden eines Niederschlages zugesetzt, der durch Filtration gesammelt wurde.
  • Ausbeute: 5,11 g (77,5%), Schmelzpunkt: 148,5-150,0ºC, Rf&sub1;: 0,41, Rf&sub2;: 0,64.
  • [α]D²&sup8; -13,4º (c = 1,00 in DMF)
  • Elementaranalyse als C&sub3;&sub6;H&sub4;&sub1;N&sub3;O&sub9;
  • Berechnet: C 65,54; H 6,26; N 6,37
  • Gefunden: C 65,38; H 6,25; N 6,34
    • (3) Herstellung von Boc-D-Asp(OBzl)-Gln(Bzl)-Asp(OBzl)-OPac
  • 8 N HCl/Dioxan wurde Boc-Gln(Bzl)-Asp(OBzl)-OPac (3,96 g) unter Lösen zugesetzt und die Lösung wurde 10 Minuten unter Eiskühlung gerührt, gefolgt vom Einengen. Anschließend wurde dem Rückstand Ether unter Ausfällen von Kristallen zugesetzt, die durch Filtration gesammelt und getrocknet wurden. Die Kristalle wurden in DMF (40 ml) gelöst und mit Eis gekühlt. Anschließend wurde TEA (1,67 ml) zugesetzt. Boc-D-Asp(OBzl)-ONB [hergestellt aus Boc-D- Asp(OBzl)-OH (2,16 g), HONB (1,31 g) und DCC (1,51 g)] wurde hinzugesetzt, gefolgt vom Rühren über Nacht. Das sich daraus ergebende unlösliche Material wurde durch Filtration abgetrennt, gefolgt vom Einengen. Der Rückstand wurde in AcOEt gelöst und die Lösung wurde mit Wasser, 10% wäßriger Zitronensäure und 4% wäßrigem NaHCO&sub3; gewaschen. Nach dem Waschen mit Wasser wurde die Lösung mit Na&sub2;SO&sub4; getrocknet und eingeengt. Anschließend wurde dem Rückstand Ether unter Abscheiden eines Niederschlages zugesetzt, der durch Filtration gesammelt wurde.
  • Ausbeute: 4,56 g (87,9%), Schmelzpunkt: 140-141ºC, Rf&sub1;: 0,42, Rf&sub2;: 0,69.
  • [α]D²&sup8; -2,0º (c = 1,02 in DMF)
  • Elementaranalyse: als C&sub4;&sub7;H&sub5;&sub2;N&sub4;O&sub1;&sub2;
  • Berechnet: C 65,27; H 6,06; N 6,48
  • Gefunden: C 65,05; H 6,13; N 6,67
    • (4) Herstellung von Boc-D-Trp-D-Asp(OBzl)-Gln(Bzl)-Asp(OBzl)- OPac
  • 8 N HCl/Dioxan wurde Boc-D-Asp(OBzl)-Gln(Bzl)-Asp(OBzl)-OPac (1,73 g) unter Lösen zugesetzt und die Lösung wurde 10 Minuten unter Eiskühlung gerührt, gefolgt vom Einengen. Anschließend wurde dem Rückstand Ether unter Ausfällen von Kristallen zugesetzt, die durch Filtration gesammelt und getrocknet wurden. Die Kristalle wurden in DMF (20 ml) gelöst und mit Eis gekühlt. Anschließend wurde TEA (0,56 ml) zugesetzt. Boc-D-Trp-ONB [hergestellt aus Boc-D-Trp-OH (0,67 g), HOND (0,43 g) und DCC (0,50 g)] wurde hinzugesetzt, gefolgt vom Rühren über Nacht. Das sich daraus ergebende unlösliche Material wurde durch Filtration getrennt, gefolgt vom Einengen. Der Rückstand wurde in AcOEt gelöst und die Lösung wurde mit Wasser, 10% wäßriger Zitronensäure und 4% wäßrigem NaHCO&sub3; gewaschen. Nach dem Waschen mit Wasser wurde die Lösung mit Na&sub2;SO&sub4; getrocknet und eingeengt. Anschließend wurde dem Rückstand Essigsäureethylester unter Abscheiden eines Niederschlages zugesetzt, der durch Filtration gesammelt wurde.
  • Ausbeute: 1,98 g (94,2%), Schmelzpunkt: 194-196ºC, Rf&sub1;: 0,36, Rf&sub2;: 0,67.
  • [α]D²&sup8; +1,6º (c = 0,93 in DMF)
  • Elementaranalyse als C&sub5;&sub8;H&sub6;&sub2;N&sub6;O&sub1;&sub3;
  • Berechnet: C 66,27; H 5,95; N 7,99
  • Gefunden: C 66,14; H 6,03; N 8,07
    • (5) Herstellung von Boc-Leu-D-Trp-D-Asp(OBzl)-Gln(Bzl)- Asp(OBzl)-OPac
  • 8 N HCl/Dioxan wurde Boc-D-Trp-D-Asp(OBzl)-Gln(Bzl)-Asp(OBzl)- OPac (1,05 g) unter Lösen zugesetzt und die Lösung wurde 10 Minuten unter Eiskühlung gerührt, gefolgt vom Einengen. Anschließend wurde dem Rückstand Ether unter Ausfällen von Kristallen zugesetzt, die durch Filtration gesammelt und getrocknet wurden. Die Kristalle wurden in DMF (15 ml) gelöst und mit Eis gekühlt. Anschließend wurde TEA (0,28 ml) hinzugesetzt. Boc-Leu- ONB [hergestellt aus Boc-Leu-OH H&sub2;O (0,27 g), HONB (0,22 g) und DCC (0,25 g)] wurde hinzugesetzt, gefolgt von 3 Stunden Rühren. Das sich daraus ergebende unlösliche Material wurde durch Futration abgetrennt, gefolgt vom Einengen. Der Rückstand wurde in AcOEt gelöst und die Lösung wurde mit Wasser, 10% wäßriger Zitronensäure und 4% wäßrigem NaHCO&sub3; gewaschen. Nach dem Waschen mit Wasser wurde die Lösung mit Na&sub2;SO&sub4; getrocknet und eingeengt. Anschließend wurde dem Rückstand Ether unter Abscheiden eines Niederschlages zugesetzt, der durch Filtration gesammelt wurde.
  • Ausbeute: 1,04 g (89,3%), Schmelzpunkt: 175-177ºC, Rf&sub1;: 0,38, Rf&sub2;: 0,68.
  • [α]D²&sup8; +0,35º (c = 0,85 in DMF)
  • Elementaranalyse als C&sub6;&sub4;H&sub7;&sub3;N&sub7;O&sub1;&sub4;
  • Berechnet: C 66,02; H 6,32; N 8,42
  • Gefunden: C 65,94; H 6,43; N 8,48
    • (6) Herstellung von Boc-D-Thg(2)-Leu-D-Trp-D-Asp(OBzl)- Gin(Bzl)-Asp(OBzl)-OPac
  • 8 N HCl/Dioxan wurde Boc-Leu-D-Trp-D-ASP(OBzl)-Gln(Bzl)- Asp(OBzl)-OPac (0,93 g) unter Lösen zugesetzt und die Lösung wurde 15 Minuten unter Eiskühlung gerührt, gefolgt vom Einengen. Anschließend wurde dem Rückstand Ether unter Ausfällen von Kristallen zugesetzt, die durch Filtration gesammelt und getrocknet wurden. Die Kristalle wurden in DMF (5 ml) gelöst und mit Eis gekühlt. Anschließend wurde TEA (0,22 ml) hinzugesetzt. Boc-D-Thg(2)-OH (0,23 g), HONB (0,13 g) und DCC (0,20 g) wurden hinzugesetzt, gefolgt von 3 Stunden Rühren. Das sich daraus ergebende unlösliche Material wurde durch Filtration abgetrennt, gefolgt vom Einengen. Der Rückstand wurde in AcOEt gelöst und die Lösung wurde mit Wasser, 10% wäßriger Zitronensäure und 4% wäßrigem NaHCO&sub3; gewaschen. Nach dem Waschen mit Wasser wurde die Lösung mit Na&sub2;SO&sub4; getrocknet und eingeengt. Anschließend wurde dem Rückstand Ether unter Abscheiden eines Niederschlages zugesetzt, der durch Filtration gesammelt wurde.
  • Ausbeute: 1,02 g (97,9%), Schmelzpunkt: 170-172ºC Rf&sub1;: 0,30, Rf&sub2;: 0,69.
  • [α]D²&sup8; +3,6º (c = 0,83 in DMF)
  • Elementaranalyse als C&sub7;&sub0;H&sub7;&sub8;N&sub8;O&sub1;&sub5;S
  • Berechnet: C 64,50; H 6,03; N 8,60; S 2,46
  • Gefunden: C 64,52; H 6,15; N 8,77; 5 2,41
    • (7) Herstellung von Boc-D-Thg(2)-Leu-D-Trp-D-Asp(OBzl)- Gln(Bzl)-Asp(OBzl)-OH
  • Boc-D-Thg(2)-Leu-D-Trp-D-Asp(OBzl)-Gln(Bzl)-Asp(OBzl)-OPac (0,78 g) wurde in 90% wäßriger AcOH (15 ml) gelöst und Zn-Pulver (1,96 g) wurde hinzugesetzt, gefolgt von 3 Stunden Rühren. Das Zn- Pulver wurde durch Filtration entfernt und das Filtrat wurde eingeengt. Dem Rückstand wurde AcOEt zum Lösen zugesetzt und die Lösung wurde mit 10% wäßriger Zitronensäure gewaschen. Nach dem Waschen mit Wasser wurde die Lösung mit Na&sub2;SO&sub4; getrocknet und eingeengt. Anschließend wurde dem Rückstand Petrolether unter Abscheiden eines Niederschlages zugesetzt, der durch Filtration gesammelt wurde.
  • Ausbeute: 0,67 g (94,2%), Schmelzpunkt: 145-147ºC, Rf&sub1;: 0,22, Rf&sub2;: 0,66.
  • [α]D²&sup8; +6,6º (c = 1,00 in DMF)
  • Elementaranalyse als C&sub6;&sub2;H&sub7;&sub2;N&sub8;O&sub1;&sub4;S
  • Berechnet: C 62,82; H 6,12; N 9,45; 5 2,71
  • Gefunden: C 62,93; H 6,24; N 9,62; 5 2,44
    • (8) Herstellung von cyclo[-D-Asp-Gln(Bzl)-Asp-D-Thg(2)-Leu-D- Trp-]
  • Boc-D-Thg(2)-Leu-D-Trp-D-Asp(OBzl)-Gln(Bzl)-Asp(OBzl)-OH (0,36 9) wurde in DCM (10 ml) gelöst und die Lösung wurde mit Eis gekühlt HONB (0,11 g) und DCC (0,12 g) wurden hinzugesetzt, gefolgt von 3 Stunden Rühren. Anschließend wurde der sich daraus ergebende DCU durch Filtration abgetrennt, gefolgt vom Einengen und dem Rückstand wurde Ether unter Abscheiden eines Niederschlages zugesetzt, der durch Filtration gesammelt wurde. 8 N HCl/Dioxan (10 ml) wurde unter Eiskühlung zum Lösen des Niederschlages hinzugesetzt. Die sich daraus ergebende Lösung wurde 10 Minuten gerührt und eingeengt. Anschließend wurde dem Rückstand Ether unter Abscheiden eines Niederschlages zugesetzt, der durch Filtration gesammelt und getrocknet wurde. Der Niederschlag wurde in DMF (6 ml) gelöst und die sich daraus ergebende Lösung wurde während 30 Minuten tropfenweise TEA (0,42 ml) enthaltendem DMF (54 ml) zugesetzt, gefolgt vom Rühren über Nacht und Einengen. Der Rückstand wurde in AcOEt gelöst und die Lösung wurde mit 4% wäßrigem NaHCO&sub3; gewaschen. Nach dem Waschen mit Wasser wurde die Lösung mit Na&sub2;SO&sub4; getrocknet und eingeengt. Anschließend wurde dem Rückstand Ether-Petrolether unter Abscheiden eines Niederschlages zugesetzt, der durch Filtration gesammelt und getrocknet wurde. 75 mg dieses Niederschlages wurden in DMF (15 ml) gelöst und im Wasserstoffstrom unter Verwenden von Palladiumschwarz als Katalysator katalytisch reduziert. Der Katalysator wurde durch Filtration entfernt und anschließend wurde das Filtrat eingeengt. Der sich daraus ergebende Rückstand wurde in einer geringen Menge AcOH gelöst und danach wurde Wasser zum Ausführen einer Lyophilisierung zugesetzt. Schließlich wurde ein Teil des lyophilisierten Produktes durch Flüssigkeitschromatographie mittels einer YMC-D-ODS-5-Säule (2 cm x 25 cm) (Y.M.C.) unter Erhalten des gewünschten Materials gereinigt. Die Ausbeute war 5,0 mg (8,8%).
  • Aminosäurenanal. [110ºC, 24 Stunden Hydrolyse; die Zahlen in Klammern zeigen die theoretischen Werte]: Asp 2,00 (2), Glu 1,08 (1), Leu 1,09 (1)
  • LSIMS (M + H&spplus;) 887, (theoretischer Wert) = 887
    • Beispiel 90 [A] Herstellung von cyclo[-D-Asp-Asn(CH&sub2;OH&sub2;-Ind)-Asp-D-Thg(2)- Leu-D-Trp-] (1) Herstellung von Boc-Asn(CH&sub2;OH&sub2;-Ind)-OBzl
  • Boc-Asp(ONB)-OBzl [hergestellt aus Boc-Asp-OBzl (14,23 g), HONB (8,68 g) und DCC (9,99 g)] wurde Tryptaminhydrochlond (7,87 g) zusammen mit TEA (8,4 ml) in DMF (150 ml) unter Eiskühlung zugesetzt und das Gemisch wurde über Nacht gerührt. Die Reaktionslösung wurde eingeengt und der Rückstand wurde in AcOEt gelöst. Die sich daraus ergebende Lösung wurde mit Wasser, 10% wäßriger Zitronensäure und 4% wäßrigem NaHCO&sub3; gewaschen. Nach dem Waschen mit Wasser wurde die Lösung mit Na&sub2;SO&sub4; getrocknet und eingeengt. Anschließend wurde dem Rückstand Ether unter Ergeben von Kristallen zugesetzt, die durch Filtration gesammelt wurden.
  • Ausbeute: 17,1 g (92,0%), Schmelzpunkt: 96-97ºC, Rf&sub1;: 0,41, Rf&sub2;: 0,70.
  • [α]D²&sup8; -9,8º (c = 1,24 in DMF)
  • Elementaranalyse als C&sub2;&sub6;H&sub3;&sub0;N&sub3;O&sub5;
  • Berechnet: C 67,22; H 6,51; N 9,05
  • Gefunden: C 67,31; H 6,44; N 8,97
    • (2) Herstellung von Boc-Asn(CH&sub2;CH&sub2;-Ind)-OH CHA
  • Boc-Asn(CH&sub2;CH&sub2;-Ind)-OBzl (4,6 g) wurde in Methanol (100 ml) gelöst und im Wasserstoffstrom mittels Palladiumschwarz als Katalysator katalytisch reduziert. Der Katalysator wurde durch Filtration entfernt und das Filtrat wurde anschließend eingeengt. Der sich daraus ergebende Rückstand wurde in Ether-AcOEt (1:1) gelöst und CHA (1,1 ml) wurde unter Ausfällen von Kristallen zugesetzt, die durch Filtration gesammelt wurden. Die Kristalle wurden aus Methanol-Ether unter Erhalten des gewünschten Materials umkristallisiert.
  • Ausbeute: 4,1 g (88,9%), Schmelzpunkt: 178-179ºC, Rf&sub2;: 0,37
  • [α]D²&sup8; +7,5º (c = 1,17 in Methanol)
  • Elementaranalyse: als C&sub2;&sub5;H&sub3;&sub7;N&sub4;O&sub5;
  • Berechnet: C 63,13; H 8,26; N 11,78
  • Gefunden: C 63,11; H 8,22; N 11,78
    • (3) Herstellung von Boc-Asn(CH&sub2;CH&sub2;-Ind)-Asp(OBzl)-OPac
  • Boc-Asn(CH&sub2;CH&sub2;-Ind)-OH [hergestellt aus Boc-Asn (CH&sub2;OH&sub2;-Ind)-OH CHA (3,7 g)] wurde in THF gelöst und die Lösung wurde unter Rühren auf -15ºC gekühlt. Anschließend wurde N-Methylmorpholin (0,9 ml) hinzugesetzt und nachfolgend wurde IBCF (1,1 ml) zugesetzt. Nach 2 Minuten wurde eine DMF-Lösung von HCl Asp(OBzl)-OPac und N- Methylmorpholin zugesetzt. HCl Asp(OBzl)-OPac wurde durch Lösen von Boc-Asp(OBzl)-OPac (3,5 g) in 8 N HCl/Dioxan (20 ml), 30 Minuten Rühren der Lösung unter Eiskühlung, gefolgt vom Einengen und Zufügen von Ether unter Ausfällen von Kristallen erhalten, die durch Filtration gesammelt und getrocknet wurden. Nach 30 Minuten Rühren bei -15ºC wurde die Lösung auf Raumtemperatur gebracht. Nach 30 Minuten wurde das sich daraus ergebende unlösliche Material durch Filtration abgetrennt, gefolgt vom Einengen. Der Rückstand wurde in AcOEt gelöst und die Lösung wurde mit Wasser, 10% wäßriger Zitronensäure und 4% wäßrigem NaHCO&sub3; gewaschen. Nach dem Waschen mit Wasser wurde die Lösung mit Na&sub2;SO&sub4; getrocknet und eingeengt. Dem sich daraus ergebenden Rückstand wurde Ether unter Abscheiden eines Niederschlages zugesetzt, der durch Filtration gesammelt wurde.
  • Ausbeute: 4,3 g (79,2%), Schmelzpunkt: 142-143ºC, Rf&sub1;: 0,38, Rf&sub2;: 0,69.
  • [α]D²&sup8; -8,0º (c = 0,97 in DMF)
  • Elementaranalyse als C&sub3;&sub8;H&sub4;&sub1;N&sub4;O&sub9;
  • Berechnet: C 65,41; H 5,92; N 8,03
  • Gefunden: C 65,46; H 5,95; N 7,89
    • (4) Herstellung von Boc-Asp(OBzl)-Asn(CH&sub2;CH&sub2;-Ind)-Asp(OBzl)-OPac
  • 8 N HCl/Dioxan wurde Boc-Asn(CH&sub2;Ch&sub2;-Ind)-Asp(OBzl)-OPac (4,09 g) unter Lösen zugesetzt und die Losung wurde 10 Minuten unter Eiskühlung gerührt, gefolgt vom Einengen. Anschließend wurde dem Rückstand Ether unter Ausfällen von Kristallen zugesetzt, die durch Filtration gesammelt und getrocknet wurden. Die Kristalle wurden in DMF (40 ml) gelöst und mit Eis gekühlt. Anschließend wurde TEA (1,67 ml) zugesetzt. Boc-D-Asp(OBzl)-ONB [hergestellt aus Boc-D-Asp(OBzl)-OH (2,16 g), HONB (1,31 g) und DCC (1,51 g)] wurde hinzugesetzt, gefolgt vom Rühren über Nacht. Das sich daraus ergebende unlösliche Material wurde durch Filtration getrennt, gefolgt vom Einengen. Der Rückstand wurde in AcOEt gelöst und die Lösung wurde mit Wasser, 10% wäßriger Zitronensäure und 4% wäßrigem NaHCO&sub3; gewaschen. Nach dem Waschen mit Wasser wurde die Lösung mit Na&sub2;SO&sub4; getrocknet und eingeengt. Anschließend wurde dem Rückstand Ether unter Abscheiden eines Niederschlages zugesetzt, der durch Filtration gesammelt wurde.
  • Ausbeute: 4,84 g (89,2%), Schmelzpunkt: 92-94ºC, Rf&sub1;: 0,41, Rf&sub2;: 0,67.
  • [α]D²&sup8; -7,4º (c = 1,11 in DMF)
  • Elementaranalyse als C&sub4;&sub9;H&sub5;&sub3;N&sub5;O&sub1;&sub2;
  • Berechnet: C 65,10; H 5,91; N 7,75
  • Gefunden: C 64,85; H 5,97; N 7,93
    • (5) Herstellung von Boc-D-Trp-D-Asp(OBzl)-Asn(CH&sub2;CH&sub2;-Ind)- Asp(OBzl)-OPac
  • 8 N HCl/Dioxan wurde Boc-D-Asp(OBzl)-Asn(CH&sub2;CH&sub2;-Ind)-Asp(OBzl)- OPac (1,77 g) unter Lösen zugesetzt und die Lösung wurde 10 Minuten unter Eiskühlung gerührt, gefolgt vom Einengen. Anschließend wurde dem Rückstand Ether unter Ausfällen von Kristallen zugesetzt, die durch Filtration gesammelt und getrocknet wurden. Die Kristalle wurden in DMF (20 ml) gelöst und mit Eis gekühlt. Anschließend wurde TEA (0,56 ml) hinzugesetzt. Boc-D- Trp-ONB [hergestellt aus Boc-D-Trp-OH (0,67 g), HONB (0,43 g) und DCC (0,50 g)] wurde hinzugesetzt, gefolgt vom Rühren über Nacht. Das sich daraus ergebende unlösliche Material wurde durch Filtration getrennt, gefolgt vom Einengen. Der Rückstand wurde in AcOEt gelöst und die Lösung wurde mit Wasser, 10% wäßriger Zitronensäure und 4% wäßrigem NaHCO&sub3; gewaschen. Nach dem Waschen mit Wasser wurde die Lösung mit Na&sub2;SO&sub4; getrocknet und eingeengt. Anschließend wurde der Rückstand mittels Kieselgelchromatographie (2% Methanol/DCM) gereinigt. Nachfolgend wurde Petrolether unter Abscheiden eines Niederschlages zugesetzt, der durch Filtration gesammelt wurde.
  • Ausbeute: 1,24 g (56,9%), Schmelzpunkt: 139-140ºC, Rf&sub1;: 0,34, Rf&sub2;: 0,67.
  • [α]D²&sup8; -0,1º (c = 0,92 in DMF)
  • Elementaranalyse als C&sub6;&sub0;H&sub6;&sub3;N&sub7;O&sub1;&sub3;
  • Berechnet: C 66,10; H 5,82; N 8,99
  • Gefunden: C 65,98; H 5,83; N 8,95
    • (6) Herstellung von Boc-Leu-D-Trp-D-Asp(OBzl)-Asn(CH&sub2;CH&sub2;-Ind)- Asp(OBzl)-OPac
  • 8 N HCl/Dioxan wurde Boc-D-Trp-D-Asp(OBzl)-Asn(CH&sub2;CH&sub2;-Ind)- Asp(OBzl)-OPac (1,09 g) unter Lösen zugesetzt und die Lösung wurde 30 Minuten unter Eiskühlung gerührt, gefolgt vom Einengen. Anschließend wurde dem Rückstand Ether unter Ausfällen von Kristallen zugesetzt, die durch Filtration gesammelt und getrocknet wurden. Die Kristalle wurden in DMF (15 ml) gelöst und mit Eis gekühlt. Anschließend wurde TEA (0,28 ml) hinzugesetzt. Boc-Leu-ONB [hergestellt aus Boc-Leu-OH H&sub2;O (0,27 g), HONB (0,22 g) und DCC (0,25 g)] wurde hinzugesetzt, gefolgt von 3 Stunden Rühren. Das sich daraus ergebende unlösliche Material wurde durch Filtration getrennt, gefolgt vom Einengen. Der Rückstand wurde in AcOEt gelöst und die Lösung wurde mit Wasser, 10% wäßriger Zitronensäure und 4% wäßrigem NaHCO&sub3; gewaschen. Nach dem Waschen mit Wasser wurde die Lösung mit Na&sub2;SO&sub4; getrocknet und eingeengt. Anschließend wurde dem Rückstand Ether unter Abscheiden eines Niederschlages zugesetzt, der durch Filtration gesammelt wurde.
  • Ausbeute: 1,10 g (91,4%), Schmelzpunkt: 140-142ºC, Rf&sub1;: 0,34, Rf&sub2;: 0,67.
  • [α]D²&sup8; -0,5º (c = 0,84 in DMF)
  • Elementaranalyse als C&sub6;&sub6;H&sub7;&sub4;N&sub8;O&sub1;&sub4;
  • Berechnet: C 65,88; H 6,20; N 9,31
  • Gefunden: C 66,00; H 6,23; N 9,20
    • (7) Herstellung von Boc-D-Thg(2)-Leu-D-Trp-D-Asp(OBzl)- Asn(CH&sub2;CH&sub2;-Ind)-Asp(OBzl)-OPac
  • 8 N HCl/Dioxan wurde Boc-Leu-D-Trp-D-Asp(OBzl)-Asn(CH&sub2;CH&sub2;-Ind)- Asp(OBzl)-OPac (0,96 g) unter Lösen zugesetzt und die Lösung wurde 10 Minuten unter Eiskühlung gerührt, gefolgt vom Einengen. Anschließend wurde dem Rückstand Ether unter Ausfällen von Kristallen zugesetzt, die durch Filtration gesammelt und getrocknet wurden. Die Kristalle wurden in DMF (10 ml) gelöst und mit Eis gekühlt. Anschließend wurde TEA (0,22 ml) hinzugesetzt. Boc-D-Thg(2)-OH (0,23 g), HONB (0,13 g) und DCC (0,20 g) wurden hinzugesetzt, gefolgt von 3. Stunden Rühren. Das sich daraus ergebende unlösliche Material wurde durch Filtration abgetrennt, gefolgt vom Einengen. Der Rückstand wurde in AcOEt gelöst und die Lösung wurde mit Wasser, 10% wäßriger Zitronensäure und 4% wäßrigem NaHCO&sub3; gewaschen. Nach dem Waschen mit Wasser wurde die Lösung mit Na&sub2;SO&sub4; getrocknet und eingeengt. Anschließend wurde dem Rückstand Ether unter Abscheiden eines Niederschlages zugesetzt, der durch Filtration gesammelt wurde.
  • Ausbeute: 1,06 g (98,7%), Schmelzpunkt: 162-164ºC, Rf&sub1;: 0,30, Rf&sub2;: 0,69.
  • [α]D²&sup8; +4,4º (c = 0,75 in DMF)
  • Elementaranalyse als C&sub7;&sub2;H&sub7;&sub9;N&sub9;O&sub1;&sub5;S
  • Berechnet: C 64,41; H 5,93; N 9,39; 5 2,39
  • Gefunden: C 64,36; H 6,04; N 9,49; 5 2,16
    • (8) Herstellung von Boc-D-Thg(2)-Leu-D-Trp-D-Asp(OBzl)-Asn (CH&sub2;CH&sub2;-Ind)-Asp(OBzl)-OH
  • Boc-D-Thg(2)-Leu-D-Trp-D-Asp(OBzl)-Asn(CH&sub2;CH&sub2;-Ind)-Asp(OBzl)-OPac (0,81 g) wurde in 90% wäßriger AcOH (20 ml) gelöst und Zn-Pulver (1,96 g) wurde hinzugesetzt, gefolgt von 3 Stunden Rühren. Das Zn-Pulver wurde durch Filtration entfernt und das Filtrat wurde eingeengt. Dem Rückstand wurde AcOEt zum Lösen zugesetzt und die Lösung wurde mit 10% wäßriger Zitronensäure gewaschen. Nach dem Waschen mit Wasser wurde die Lösung mit Na&sub2;SO&sub4; getrocknet und eingeengt. Anschließend wurde dem Rückstand Petrolether unter Abscheiden eines Niederschlages zugesetzt, der durch Filtration gesammelt wurde.
  • Ausbeute: 0,72 g (98,0%), Schmelzpunkt: 140-143ºC, Rf&sub1;: 0,22, Rf&sub2;: 0,66.
  • [α]D²&sup8; +5,8º (c = 0,93 in DMF)
  • Elementaranalyse als C&sub6;&sub4;H&sub7;&sub3;N&sub9;O&sub1;&sub4;S
  • Berechnet: C 62,78; H 6,01; N 10,30; S 2,62
  • Gefunden: C 62,75; H 6,14; N 10,27; 5 2,49
    • (9) Herstellung von cyclo[-D-Asp-Asn(CH&sub2;CH&sub2;-Ind)-Asp-D-Thg(2)- Leu-D-Trp-)
  • Boc-D-Thg(2)-Leu-D-Trp-D-Asp(OBzl)-Asn(CH&sub2;CH&sub2;-Ind)-Asp(OBzl)-OH (0,37 9) wurde in DOM (10 ml) gelöst und die Lösung wurde mit Eis gekühlt. HONB (0,11 g) und DCC (0,12 g) wurden hinzugesetzt, gefolgt von 3 Stunden Rühren. Anschließend wurde der sich daraus ergebende DCU durch Filtration abgetrennt, gefolgt vom Einengen und dem Rückstand wurde Ether unter Abscheiden eines Niederschlages zugesetzt, der durch Filtration gesammelt wurde. 8 N HCl/Dioxan (10 ml) wurde unter Eiskühlung zum Lösen des Niederschlages hinzugesetzt. Die sich daraus ergebende Lösung wurde 10 Minuten gerührt und eingeengt. Anschließend wurde dem Rückstand Ether unter Abscheiden eines Niederschlages zugesetzt, der durch Filtration gesammelt und getrocknet wurde. Der Niederschlag wurde in DMF (6 ml) gelöst und die sich daraus ergebende Lösung wurde während 30 Minuten tropfenweise TEA (0,4 ml) enthaltendem DMF (54 ml) zugesetzt, gefolgt vom Rühren über Nacht und Einengen. Der Rückstand wurde in AcOEt gelöst und die Lösung wurde mit 4% wäßrigem NaHCO&sub3; gewaschen. Nach dem Waschen mit Wasser wurde die Lösung mit Na&sub2;SO&sub4; getrocknet und eingeengt. Anschließend wurde dem Rückstand Ether-Petrolether unter Abscheiden eines Niederschlages zugesetzt, der durch Filtration gesammelt und getrocknet wurde. 111 mg dieses Niederschlages wurden in DMF (15 ml) gelöst und im Wasserstoffstrom unter Verwenden von Palladiumschwarz als Katalysator katalytisch reduziert. Der Katalysator wurde durch Filtration entfernt und anschließend wurde das Filtrat eingeengt. Der sich daraus ergebende Rückstand wurde in einer geringen Menge AcOH gelöst und danach wurde Wasser zum Ausführen einer Lyophilisierung zugesetzt. Schließlich wurde ein Teil des lyophilisierten Produktes durch Flüssigkeitschromatographie mittels einer YMC-D-ODS-5-Säule (2 cm x 25 cm) (Y.M.C.) unter Erhalten des gewünschten Materials gereinigt. Die Ausbeute war 5,4 mg (9,5%).
  • Aminosäurenanal. [110ºC, 24 Stunden Hydrolyse; die Zahlen in Klammern zeigen die theoretischen Werte]: Asp 3,00 (3), Leu 1,39 (1)
  • LSIMS (M + H&spplus;) = 926, (theoretischer Wert) = 926
    • [B] Herstellung von cyclo[-D-Asp-Asn(CH&sub2;CH&sub2;-Ind)-Asp-D-Thg(2)- Leu-D-Trp-] (1) Herstellung von Boc-D-Thg(2)-Leu-OBzl
  • Boc-Thg(2)-OH CHA (17,8 g, 50 mMol) wurde in einem Lösungsmittelgemisch aus Essigsäureethylester (250 ml) und Wasser (250 ml) suspendiert, gefolgt von heftigem Rühren. Anschließend wurde 1 N wäßrige H&sub2;SO&sub4; (50 ml) zum vollständigen Auflösen hinzugesetzt. Die Essigsäureethylesterschicht wurde abgetrennt und mit Na&sub2;SO&sub4; getrocknet. Das Lösungsmittel wurde danach durch Eindampfen unter vermindertem Druck entfernt. DMF (90 ml) wurde dem Rückstand unter Herstellen von Lösung (1) zugefügt.
  • Tos H-Leu-OBzl (39,4 g, 100 mMol) wurde einem Lösungsmittelgemisch aus Essigsäureethylester (250 ml) und 10% wäßrigem NaHCO&sub3; (250 ml) zugesetzt, gefolgt von heftigem Rühren zum vollständigen Auflösen. Die Essigsäureethylesterschicht wurde abgetrennt und mit Na&sub2;SO&sub4; getrocknet. Das Lösungsmittel wurde danach durch Eindampfen unter vermindertem Druck entfernt. DMF (90 ml) wurde dem Rückstand unter Herstellen von Lösung (II) zugefügt.
  • Lösung (I) und (II) wurden miteinander vereinigt und HOBT (13,5 g, 100 mMol) wurden unter Lösen hinzugesetzt. Anschließend wurden 30 ml einer Lösung von DCC (20,6 g, 100 mMol) in DMF während 10 Minuten unter Eiskühlung tropfenweise zugesetzt, gefolgt von 1 Stunde Rühren. Die sich daraus ergebende Lösung wurde danach über Nacht bei 4ºC gerührt. Das unlösliche Material wurde durch Filtration entfernt und das Lösungsmittel wurde durch Eindampfen entfernt. Essigsäureethylester und Wasser wurden dem Rückstand zugesetzt und 1 N wäßrige H&sub2;SO&sub4; (50 ml) wurde hinzugesetzt, gefolgt von der Extraktion mit Essigsäureethylester. Die Essigsäureethylesterschicht wurde abgetrennt und nacheinander mit einer gesättigten wäßrigen NaCl-Lösung, 4% wäßrigem NaHCO&sub3; und gesättigter wäßriger NaCl-Lösung gewaschen. Nach dem Trocknen mit Na&sub2;SO&sub4; wurde das Lösungsmittel durch Eindampfen entfernt. Der Rückstand wurde durch Kieselgel-Säulenchromatographie (6 cm x 30 cm, Hexan : Essigsäureethylester = 10:1 --- 3:1) gereinigt. Durch Kristallisation aus einer Petroletherlösung wurden farblose Kristalle erhalten.
  • Ausbeute: 14,9 g (87,2%), Schmelzpunkt: 71,0-72,5ºC, Rf&sub1;: 0,80, Rf&sub2;: 0,88.
  • [α]D²&sup5; -46,3º (c = 1,02 in DMF)
  • Elementaranalyse als C&sub2;&sub4;H&sub3;&sub2;N&sub2;O&sub5;S
  • Berechnet: C 62,59; H 7,00; N 6,08
  • Gefunden: C 62,35; H 7,00; N 6,10
    • (2) Herstellung von Boc-D-Thg(2)-Leu-OPac
  • In 500 ml Methanol wurden 16,1 g (35,0 mMol) in (1) synthetisiertes Boc-D-Thg(2)-Leu-OBzl gelöst und 5 g Tierkohle wurde hinzugesetzt, gefolgt vom Rühren. Die Tierkohle wurde durch Filtration entfernt und dem Filtrat wurde 1 g Palladiumschwarz zugesetzt. Das Gemisch wurde im Wasserstoffstrom 5 Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Der Katalysator wurde durch Filtration entfernt und das Filtrat wurde unter vermindertem Druck auf etwa 100 ml eingeengt. Anschließend wurden 50 ml einer wäßrigen Lösung von Cs&sub2;CO&sub3; (5,70 g, 17,5 mMol) tropfenweise während 10 Minuten zugesetzt, gefolgt von 30 Minuten Rühren. Das Lösungsmittel wurde danach durch Eindampfen entfernt. Dem Rückstand wurde DMF (100 ml) zugesetzt und das Lösungsmittel wurde unter vermindertem Druck entfernt. Dieser Vorgang wurde zweimal wiederholt. Dem Rückstand wurde zum Lösen DMF (100 ml) zugesetzt und 50 ml einer Lösung von Phenacylbromid (7,18 g, 35,0 mMol) in DMF wurden während 10 Minuten tropfenweise unter Eiskühlung hinzugesetzt. Das sich daraus ergebende Gemisch wurde auf Raumtemperatur gebracht und anschließend über Nacht gerührt. Das Lösungsmittel wurde durch Destillation entfernt und dem Rückstand wurde Essigsäureethylester zugesetzt, gefolgt von der Extraktion mit Essigsäureethylester. Die Essigsäureethylesterschicht wurde abgetrennt und nacheinander mit 10% wäßriger Zitronensäure, gesättigter wäßriger NaCl-Lösung, gesättigter wäßriger NaHCO&sub3;-Lösung und gesättigter wäßriger NaCl-Lösung gewaschen. Nach dem Trocknen mit Na&sub2;SO&sub4; wurde das Lösungsmittel entfernt. Durch Kristallisation aus Ether-Petrolether wurden farblose Kristalle erhalten.
  • Ausbeute: 14,99 (87,2%), Schmelzpunkt: 119,0-120,0ºC, Rf&sub1;: 0,79, Rf&sub2;: 0,91.
  • [α]D²&sup5; -50,2º (c = 1,05 in DMF)
  • Elementaranalyse als C&sub2;&sub5;H&sub3;&sub2;N&sub2;O&sub6;S
  • Berechnet: C 61,46; H 6,60; N 5,73
  • Gefunden: C 61,43; H 6,63; N 5,85
    • (3) Herstellung von Boc-Asp(OBzl)-D-Thg(2)-Leu-OPac
  • In 30 ml Dioxan wurden 14,7 g (30,0 mMol) in (2) synthetisiertes Boc-D-Thg(2)-Leu-OPac gelöst und 10 N HCl/Dioxan (50 ml) wurden unter Eiskühlung hinzugesetzt, gefolgt von 15 Minuten Rühren. Das Lösungsmittel wurde durch Eindampfen unter vermindertem Druck entfernt und dem Rückstand wurde Ether zugesetzt. Der sich daraus ergebende Niederschlag wurde durch Filtration gesammelt und getrocknet. Der Niederschlag wurde in DMF (160 ml) gelöst und die Lösung wurde mit Eis gekühlt. Anschließend wurde Diisopropylethylamin (5,30 ml, 30,36 mMol) hinzugesetzt. Boc- Asp(OBzl)-ONB [hergestellt aus Boc-Asp(OBzl)-OH (9,68 g, 30 nimol), HONB (5,91 g, 33,0 mMol) und DCC (6,81 g, 33,0 mMol)] wurde weiter hinzugesetzt, gefolgt vom Rühren über Nacht. Das sich daraus ergebende unlösliche Material wurde durch Filtration abgetrennt, gefolgt vom Einengen. Der Rückstand wurde in Essig säureethylester gelöst und die Lösung wurde mit Wasser, 10% wäßriger Zitronensäure, gesättigter wäßriger NaCl-Lösung, gesättigter wäßriger NaHCO&sub3;-Lösung und gesättigter wäßriger NaCl- Lösung gewaschen. Nach dem Trocknen mit Na&sub2;SO&sub4; wurde das Lösungsmittel durch Eindampfen entfernt. Dem Rückstand wurde Ether- Petrolether unter Erhalten eines Niederschlages zugesetzt.
  • Ausbeute: 20,31 g (97,6%), Schmelzpunkt: 67,0-68,5ºC, Rf&sub1;: 0,61, Rf&sub2;: 0,83.
  • [α]D²&sup5; -52,0º (c = 1,03 in DMF)
  • Elementaranalyse als C&sub3;&sub6;H&sub4;&sub3;N&sub3;O&sub9;S
  • Berechnet: C 62,32; H 6,25; N 6,06
  • Gefunden: C 62,34; H 6,36; N 6,20
    • (4) Herstellung von Boc-Asn(NHCH&sub2;CH&sub2;Ind)-Asp(OBzl)-D-Thg(2)-Leu- OPac
  • In 30 ml Dioxan wurden 20,1 g (29,0 mMol) in (3) synthetisiertes Boc-Asp(OBzl)-D-Thg(2)-Leu-OPac gelöst und 10 N HCl/Dioxan (150 ml) wurde unter Eiskühlung hin zugesetzt, gefolgt von 15 Minuten Rühren. Das Lösungsmittel wurde durch Eindampfen unter vermindertem Druck entfernt und dem Rückstand wurde Ether zugesetzt. Der sich daraus ergebende Niederschlag wurde durch Filtration gesammelt und getrocknet. Der Niederschlag wurde in DMF (240 ml) gelöst und die Lösung wurde mit Eis gekühlt. Anschließend wurde Dusopropylethylamin (5,05 ml, 29,0 mMol) hinzugesetzt. Boc- Asn(CH&sub2;CH&sub2;-Ind)-ONB [hergestellt aus Boc-Asn(NHCH&sub2;CH&sub2;Ind)-OH {hergestellt aus Boc-Asn(NHCH&sub2;CH&sub2;Ind)-OH CHA (14,5 g, 30,45 mMol)}, HONB (5,72 g, 31,9 mMol) und DCC (6,58 g, 31,9 mMol)] wurde weiter hinzugesetzt, gefolgt vom Rühren über Nacht. Das sich daraus ergebende unlösliche Material wurde durch Filtration abgetrennt, gefolgt vom Einengen des Filtrats unter Erhalten eines Rückstandes. Dem Rückstand wurde Essigsäureethylester- Ether (1:1) unter Erhalten eines Niederschlages zugesetzt.
  • Ausbeute: 26,68 g (96,7%), Schmelzpunkt: 178,0-180,5ºC, Rf&sub1;: 0,38, Rf&sub2;: 0,77.
  • [α]D²&sup5; -44,8º (c = 1,03 in DMF)
  • Elementaranalyse: als C&sub5;&sub0;H&sub5;&sub8;N&sub6;O&sub1;&sub1;S
  • Berechnet: C 63,14; H 6,15; N 8,84
  • Gefunden: C 62,85; H 6,11; N 8,80
    • (5) Herstellung von Boc-D-Asp(OBzl)-Asn(NHCH&sub2;CH&sub2;Ind)-Asp(OBzl)- D-Thg(2)-Leu-OPac
  • In 25 ml Dioxan wurden 24,7 9 (26,0 mMol) in (4) synthetisiertes Boc-Asn(CH&sub2;CH&sub2;Ind)-Asp(OBzl)-D-Thg(2)-Leu-OPac gelöst und 10 N HCl/Dioxan (130 ml) wurde unter Eiskühlung hinzugesetzt, gefdlgt von 15 Minuten Rühren. Das Lösungsmittel wurde durch Eindampfen unter vermindertem Druck entfernt und dem Rückstand wurde Ether zugesetzt. Der sich daraus ergebende Niederschlag wurde durch Filtration gesammelt und getrocknet. Der Niederschlag wurde in DMF (200 ml) gelöst und Dusopropylethylamin (4,53 ml, 26, mMol) wurde unter Eiskühlung hinzugesetzt. Boc-D-Asp(OBzl)-ONB [hergestellt aus Boc-D-Asp(OBzl)-OH (8,82 g, 27,3 mMol), HONB (5,12 g, 28,6 mMol) und DCC (5,90 g, 28,6 mMol)] wurde weiter hinzugesetzt, gefolgt vom Rühren über Nacht. Das sich daraus ergebende unlösliche Material wurde durch Filtration abgetrennt, gefolgt vom Einengen des Filtrats unter Erhalten eines Rückstandes. Der Rückstand wurde in Essigsäureethylester gelöst und die Lösung wurde mit Wasser, 10% wäßriger Zitronensäure, gesättigter wäßriger NaCl-Lösung, gesättigter wäßriger NaHCO&sub3;-Lösung und gesättigter wäßriger NaCl-Lösung gewaschen. Nach dem Trocknen mit Na&sub2;SO&sub4; wurde das Lösungsmittel durch Eindampfen entfernt. Dem Rückstand wurde Essigsäureethylester-Ether unter Erhalten eines Niederschlages zugesetzt.
  • Ausbeute: 25,82 g (85,9%), Schmelzpunkt: 148,0-150,0ºC, Rf&sub1;: 0,54, Rf&sub2;: 0,78.
  • [α]D²&sup5; -38,9º (c = 1,04 in DMF)
  • Elementaranalyse: als C&sub6;&sub1;H&sub6;&sub9;N&sub7;O&sub1;&sub4;S
  • Berechnet: C 63,36; H 6,01; N 8,48
  • Gefunden: C 63,15; H 6,00; N 8,45
    • (6) Herstellung von Boc-D-Trp-D-Asp(OBzl)-Asn(NHCH&sub2;CH&sub2;Ind)- Asp(OBzl)-D-Thg(2)-Leu-OPac
  • 22 ml Dioxan wurden 25,44 g (22,0 mMol) in (5) synthetisiertes Boc-D-Asp(OBzl)-Asn(NHCH&sub2;CH&sub2;Ind)-Asp(OBzl)-D-Thg(2)-Leu-OPac zugesetzt und 10 N HCl/Dioxan (110 ml) wurde unter Eiskühlung hinzugesetzt, gefolgt von 15 Minuten Rühren. Das Lösungsmittel wurde durch Eindampfen unter vermindertem Druck entfernt und dem Rückstand wurde Ether zugesetzt. Der sich daraus ergebende Niederschlag wurde durch Filtration gesammelt und getrocknet. Der Niederschlag wurde in DMF (200 ml) gelöst und die Lösung wurde mit Eis gekühlt. Anschließend wurde Diisopropylethylamin (3,83 ml, 22,0 mMol) hinzugesetzt. Boc-D-Trp-ONB [hergestellt aus Boc-D-Trp-OH (6,70 g, 22,0 mMol), HONB (4,34 g, 24,2 mMol) und DCC (5,00 g, 24,2 mMol)] wurde weiter hinzugesetzt, gefolgt vom Rühren über Nacht. Das sich daraus ergebende unlösliche Material wurde durch Filtration abgetrennt, gefolgt vom Einengen des Filtrats unter Erhalten. eines Rückstands. Der Rückstand wurde in Chloroform gelöst und die Lösung wurde mit Wasser, 10% wäßriger Zitronensäure, gesättigter wäßriger NaCl-Lösung, gesättigter wäßriger NaHCO&sub3;-Lösung und gesättigter wäßriger NaCl- Lösung gewaschen. Nach dem Trocknen mit Na&sub2;SO&sub4; wurde das Lösungsmittel durch Eindampfen entfernt. Der Rückstand wurde durch Kieselgel-Säulenchromatographie (9,5 cm x 50 cm, 0,5% Methanol- Chloroform) gereinigt. Dem gereinigten Produkt wurde Ether- Petrolether unter Erhalten eines Niederschlages zugesetzt.
  • Ausbeute: 20,10 g (68,0%), Schmelzpunkt: 172,0-173,5ºC, Rf&sub1;: 0,52, Rf&sub2;: 0,77.
  • [α]D²&sup5; -24,1º (c = 1,05 in DMF)
  • Elementaranalyse als C&sub7;&sub2;H&sub7;&sub9;N&sub9;O&sub1;&sub5;S
  • Berechnet: C 64,41; H 5,93; N 9,39
  • Gefunden: C 64,35; H 5,99; N 9,22
    • (7) Herstellung von Boc-D-Trp-D-Asp(OBzl)-Asn(NHCH&sub2;CH&sub2;Ind)- Asp(OBzl)-D-Thg(2)-Leu-OH
  • In 500 ml 90% wäßriger Essigsäurelösung wurden 6,71 g (5,00 mMol) in (6) synthetisiertes Boc-D-Trp-D-Asp(OBzl)- Asn(NHCH&sub2;CH&sub2;Ind)-Asp(OBzl)-D-Thg(2)-Leu-OPac gelöst und 16,33 g (250,0 mMol) Zinkpulver wurden hinzugesetzt, gefolgt von 1 Stunde Rühren. Das Zinkpulver wurde durch Filtration abgetrennt und das Filtrat wurde eingeengt. Der Rückstand wurde in Essigsäureethylester gelöst und die Lösung wurde mit 10% wäßriger Zitronensäure und gesättigter wäßriger NaCl-Lösung gewaschen. Nach dem Trocknen mit Na&sub2;SO&sub4; wurde das Lösungsmittel durch Eindampfen entfernt. Dem Rückstand wurde Ether unter Erhalten eines Niederschlages zugesetzt.
  • Ausbeute: 6,00 g (98,0%), Schmelzpunkt: 120,0-122,0ºC, Rf&sub1;: 0,00, Rf&sub2;: 0,67.
  • [α]D²&sup5; -18,8º (c = 1,03 in DMF)
  • Elementaranalyse als C&sub6;&sub4;H&sub7;&sub3;N&sub9;O&sub1;&sub4;S
  • Berechnet: C 62,78; H 6,01; N 10,30
  • Gefunden: C 62,66; H 5,96; N 10,06
    • (8) Herstellung von cyclo[-D-Asp(OBzl)-Asn(NHCH&sub2;CH&sub2;Ind)- Asp(OBzl)-D-Thg(2)-Leu-D-Trp-)
  • In 80 ml DMF wurden 5,82 g (4,75 mMol) in (7) synthetisiertes Boc-D-Trp-D-Asp(OBzl)-Asn(NHCH&sub2;CH&sub2;Ind)-Asp(OBzl)-D-Thg(2)-Leu-OH gelöst und die Lösung wurde mit Eis gekühlt. Anschließend wurde HONB (1,70 g, 9,50 mMol) und DCC (1,96 g, 9,50 mMol) hinzugesetzt, gefolgt vom Rühren über Nacht. Das sich daraus ergebende unlösliche Material wurde durch Filtration abgetrennt, gefolgt vom Einengen des Filtrats unter Erhalten eines Rückstands. Anschließend wurde dem Rückstand Ether-Petrolether unter Abscheiden eines Niederschlages zugesetzt, der durch Filtration gesammelt wurde. Der Niederschlag wurde in Dioxan (5 ml) gelöst und 10 N HCl/Dioxan (50 ml) wurde unter Eiskühlung hinzugesetzt, gefolgt von 5 Minuten Rühren. Nach dem Einengen des Filtrats unter Erhalten eines Rückstandes wurde dem Rückstand Ether hinzugesetzt. Der sich daraus ergebende Niederschlag wurde durch Filtration gesammelt und getrocknet. Der Niederschlag wurde in DMF (100 ml) gelöst. Die Lösung wurde während 30 Minuten tropfenweise 900 ml DMF zugesetzt, das Diisopropylethylamin (8,27 ml, 47,5 mMol) enthielt, gefolgt vom Rühren über Nacht. Das Lösungsmittel wurde durch Eindampfen entfernt und dem Rückstand wurde destilliertes Wasser zugesetzt. Der sich daraus ergebende Niederschlag wurde durch Filtration gesammelt. Der Niederschlag wurde in DMF gelöst, gefolgt vom Einengen des Filtrats unter Erhalten eines Rückstands. Anschließend wurde dem Rückstand Ether unter Abscheiden eines Niederschlages zugesetzt, der durch Filtration gesammelt, mit Acetonitril gewaschen und getrocknet wurde.
  • Ausbeute: 4175 9 (90,4%)
    • (9) Herstellung von cyclo[-D-Asp-Asn(NHCH&sub2;CH&sub2;Ind)-Asp-D-Thg(2)- Leu-D-Trp-)
  • In 100 ml DMF wurden 2,00 g (1,81 mMol) in (8) synthetisiertes cyclo[-D-Asp(OBzl)-Asn(NHCH&sub2;CH&sub2;Ind)-Asp(OBzl)-D-Thg(2)-Leu-D- Trp-] gelöst und es wurde 1 g Tierkohle hinzugesetzt, gefolgt vom Rühren. Die Tierkohle wurde durch Filtration entfernt und dem Filtrat wurde 1 g Palladiumschwarz zugesetzt. Das Gemisch wurde im Wasserstoffstrom 6 Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Es wurden weitere 1 g Palladiumschwarz hinzugesetzt und das Gemisch wurde 6 Stunden bei Raumtemperatur im Wasserstoff strom gerührt. Der Katalysator wurde durch Filtration entfernt und das Lösungsmittel wurde durch Eindampfen unter vermindertem Druck entfernt. Anschließend wurde Ether unter Erhalten eines Niederschlages zugesetzt.
  • Ausbeute: 1,68 g (quant.)
  • 1,50 g dieses Niederschlages wurden durch Umkehrphasen-Flüssigkeitschromatographie [Säule: YMC-Pack R & D D-ODS-58 (3 cm x 25 cm), Lösungsmittel: 30%-40% Acetonitril (30 Minuten)/H&sub2;O (0,1% TFA)] gereinigt.
  • Ausbeute: 1,11 g
  • LSIMS (M + H&spplus;) 926, (theoretischer Wert) = 926
    • (10) Herstellung von cyclo[-D-ASP-Asn(NHCH&sub2;CH&sub2;Ind)-Asp-D-Thg(2)- Leu-D-Trp-] 2Na
  • In 60 ml Acetonitril wurden 3,00 9 (3,24 mMol) in (9) synthetisiertes cyclo[-D-Asp-Asn(NHCH&sub2;CH&sub2;Ind)-Asp-D-Thg(2)-Leu-D-Trp-] suspendiert und die Suspension wurde tropfenweise 240 ml wäßriger Natriumcarbonatlösung (343,4 mg, 3,24 mMol) zugesetzt. Nach 15 Minuten Rühren bei Raumtemperatur wurde der pH mit einer 0,1 M wäßrigen Natriumcarbonatlösung auf 7,0 eingestellt, gefolgt vom Einengen unter vermindertem Druck. Das sich daraus ergebende Produkt wurde in 100 ml destilliertem Wasser gelöst und der Lyophilisierung unterzogen.
  • Ausbeute: 2,80 g
    • Beispiel 15-52, 57-78, 83-87 und 91-96
  • Gemäß den Verfahren von Beispiel 1-14 (A), den Verfahren von Beispiel 53-56 und 88-90 (B) oder den Verfahren von Beispiel 79- 82 (C) wurden die folgenden Verbindungen synthetisiert:
    • Beispiel 97-203
  • Gemäß einem der vorgenannten Verfahren (A), (B) und (C) können die folgenden Verbindungen synthetisiert werden:
  • In den vorstehenden Formeln stellen R1 bis R16 die folgenden Gruppen dar:
    • Versuchsbeispiel 1
  • Test auf die Affinität zu Rezeptor (1) Bindungsaktivität gegenüber dem ETA-Rezeptor
  • Eine aus Schweineherz hergestellte Merribranfraktion wurde mittels einer Testpufferlösung auf 0,15 mg/ml verdünnt und 100 µl der sich daraus ergebenden Suspension der Membranfraktion wurden in jedes zum Test verwendete Teströhrchen gegossen. Dieser Suspension der Membranfraktion wurden 2 µl 5 nM Lösung von ¹²&sup5;I-markiertem Endothelin-1 zugesetzt. Weiter wurden 3 µl einer Testpeptidlösung hinzugesetzt, gefolgt von 1 Stunde Inkubation bei einer Temperatur von 25ºC. Anschließend wurde die sich daraus ergebende Suspension mit 900 µl der mit Eis gekühlten Testpufferlösung verdünnt und danach durch 10 Minuten Zentrifugieren bei 12 000 x g in einen Überstand und einen Niederschlag aufgetrennt. Die Zellmembranen und darin befindlicher Endothelinrezeptor A (ETA) waren in dem Niederschlag enthalten und das mit dem Rezeptor verbundene, mit radioaktivem Iod markierte Endothelin wurde ebenfalls in dem Niederschlag isoliert. Dementsprechend wurde die Menge des mit dem Endothelinrezeptor A (ETA) verbundenen, mit radioaktivem Iod markierten Endothelins durch Messen der Menge in dem Niederschlag enthaltenen radioaktiven Iods mit einem Geigerzähler bestimmt. Die Ergebnisse werden in der nachstehenden Tabelle 1 dargestellt. Das in der japanischen Patentanmeldung Nr. 2-413 328/1990 beschriebene cyclische Pentapeptid cyclo[-D-Glu-Ala-D-aIle-Leu-D-Trp-] wurde als Kontrollverbindung verwendet. Der in Tabelle 1 dargestellte Zahlenwert von ETA ist der Wert der spezifischen Aktivität, bei dem die Bindungsaktivität dieses cyclischen Pentapeptids gegenüber dem Rezeptor A als 1,0 angenommen wird. Die Bindungsaktivität (IC&sub5;&sub0;) dieses cyclischen Pentapeptids gegenüber dem ETA-Rezeptor ist 2 x 10&supmin;&sup6; M.
    • Versuchsbeispiel 2 Test auf die Affinität zu Rezeptor (2) Bindungsaktivität gegenüber dem ETB-Rezeptor *1
  • Eine aus Rinderhirn hergestellte Membranfraktion wurde mittels einer Testpufferlösung auf 0,15 mg/ml verdünnt und 100 µl der sich daraus ergebenden Suspension der Membranfraktion wurden in jedes zum Test verwendete Teströhrchen gegossen. Dieser Suspension der Membranfraktion wurden 2 µl 5 nM Lösung von ¹²&sup5;I-markiertem Endothelin-1 zugesetzt. Weiter wurden 3 µl einer Testpeptidlösung hinzugesetzt, gefolgt von 1 Stunde Inkubation bei einer Temperatur von 25ºC. Anschließend wurde die sich daraus ergebende Suspension mit 900 µl der mit Eis gekühlten Testpufferlösung verdünnt und danach durch 10 Minuten Zentrifugieren bei 12 000 x g in einen Überstand und einen Niederschlag aufgetrennt. Die Zellmembranen und darin befindlicher Endothelinrezeptor B (ETB) waren in dem Niederschlag enthalten und das mit dem Rezeptor verbundene, mit radioaktivem Iod markierte Endothelin wurde ebenfalls in dem Niederschlag isoliert. Dementsprechend wurde die Menge des mit dem Endothelinrezeptor B (ETB) verbundenen, iodmarkierten Endothelins durch Messen der Menge in dem Niederschlag enthaltenen radioaktiven Iods mit einem Geigerzähler bestimmt. Die Ergebnisse werden in der nachstehenden Tabelle 1 dargestellt. Der in Tabelle 1 dargestellte Zahlenwert von ETB ist der Wert der spezifischen Aktivität, bei dem die Bindungsaktivität der Verbindung von Beispiel 8 gegenüber dem Rezeptor B als 100 angenommen wird. Die Bindungsaktivität (IC&sub5;&sub0;) der Verbindung von Beispiel 8 gegenüber dem ETB-Rezeptor ist 3 x 10&supmin;&sup6; M. Gemäß demselben Test war der Wert der spezifischen Aktivität des in der europäischen Patentveröffentlichung Nr. 436 189 beschriebenen Pentapeptids cyclo[-D-ASP-Pro-D-Val-Leu-D-Trp-] geringer als 5 und der des vorgenannten, in der japanischen Patentanmeldung Nr. 2-413 328/1990 beschriebenen cyclischen Pentapeptids cyclo[-D-Glu-Ala-D-aIle-Leu-D-Trp-] geringer als 1.
    • Versuchsbeispiel 2' ETB-Radiorezeptortest *2
  • Bei dem Endothelin-Radiorezeptortest wurden Meerschweinchennieren verwendet. Meerschweinchen (Std Hartrey, männlich, 250 g, Japan SLC Ltd.) brachte man eine Gehirnerschütterung bei und sie wurden durch Ausbluten aus der Carotisarterie getötet, um die Nieren zu entnehmen, und zum Präparieren der Nieren wurde das Fett davon entfernt. Die erhaltenen Nieren wurden zerschnitten und durch einen Politron-Homogenisator in 20 ml 50 mM Tris-HCl- Puffer [pH 7,4; 20 mM NaHCO&sub3;, 0,1 mM PMSF (Phenylmethylsulfonylfluorid), 1 mM EDTA (Ethylendiamintetraessigsäure)] auf eine Niere homogenisiert. Auf die homogenisierte Niere wurde 15 Minuten Zentrifugieren bei 1 000 x g angewandt und auf den Überstand wurde weiter 20 Minuten Zentrifugieren bei 30 000 x g angewandt. Der sich daraus ergebende Niederschlag wurde zweimal mit 50 mM Tris-HCl-Puffer (pH 7,4) gewaschen, der 0,1 mM PMSF, 1 mM EDTA enthielt. Das sich daraus Ergebende wurde bei -80ºC als rohe Rezeptormembranfraktion aufbewahrt und wurde bei Bedarf als Suspension in dem folgenden Puffer verwendet.
  • 740 Bq ¹²&sup5;I-Endothelin-1 (81,4 TBq/mMol, Du Pont, USA) als Radioligand, die rohe Membranfraktion (2,1 µg Protein) und die Proben wurden dem folgenden Puffer zugesetzt. Die Reaktion wurde 90 Minuten bei 37ºC in 0,2 ml Puffer ausgeführt [50 mM Tris-HCl- Puffer (pH 7,4), der 0,1 mM PMSF, 1 mM EDTA, 0,2% Rinderserumalbumin enthielt].
  • Die Reaktion wurde durch Schnellfiltration an einem Glasfilter (GF/B, Wattman, USA) durch einen Zellernter (290 PHD, Cambridge- Technology, Großbritannien) angehalten und das Filter wurde dreimal mit 50 mM Tris-HCl-Puffer (pH 7,4) gewaschen. Die auf dem Filter zurückgebliebene Radioaktivität wurde durch einen Geigerzähler bestimmt.
  • Die Ergebnisse werden in Tabelle 1 dargestellt.
    • Versuchsbeispiel 3 Test auf die Affinität zu Rezeptor (3) Bindungshemmaktivität gegenüber dem NK2-Rezeptor
  • Das Verfahren von Paul L. M. Van Giersbergen et al. [Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 88, 1661 (1991), wurde für diesen Test abgeändert. Die den Rezeptor enthaltende Membranfraktion wurde aus der Innenwand des dritten Rindermagens (von Kyoto Chuo Chikusan Fukuseibutsu Oroshi Kyoukai) hergestellt.
  • Die bei -80ºC aufbewahrte Innenwand des dritten Rindermagens wurde in 1 cm x 1 cm oder weniger geschnitten und in 3 Liter/kg 50 mM Tris-HCl-Puffer (pH 7,4), der mit 120 mM Natriumchlorid, 5 mM Kaliumchlorid, 0,02% BSA und 5% Sucrose ergänzt war, mittels eines Polytron-Homogenisators (Kinematika, Deutschland) aufgebrochen. Anschließend wurde das aufgebrochene Produkt 10 Minuten bei 1 000 x g zentrifugiert. Der Überstand wurde 20 Minuten bei 45 000 x g weiterzentrifugiert. Der Niederschlag wurde in 200 ml 50 mM Tris-HCl-Puffer (pH 7,4) suspendiert, der mit 300 mM Kaliumchlorid, 10 mM Ethylendiamintetraessigsäure, 0,1 mM Phenylmethylsulfoniumfluorid und 0,02% BSA ergänzt war, und 60 Minuten gelinde unter Eiskühlung gerührt. Die Suspension wurde 20 Minuten bei 45 000 x g zentrifugiert. Der Niederschlag wurde mit 200 ml 50 mM Tris-HCl-Puffer (pH 7,4) gewaschen und als Rezeptorprobe bei -40ºC im gefrorenen Zustand aufbewahrt.
  • Diese Probe wurde so in einer Reaktionspufferlösung [50 mM Tris- HCl-Puffer (pH 7,4), 0,02% Rinderserumalbumin und 4 mM Manganchlorid] suspendiert, daß sich eine Proteinkonzentration von 0,7 mg/ml ergab und 100 µl davon wurden zur Reaktion verwendet. Eine Testprobe und ¹²&sup5;I-NKA (0,61 KBq, ¹²&sup5;I-Neurokinin A, 81,4 TBq/mmol, Du Pont/NEN Research Products, USA) wurden ebenfalls zugesetzt und in 0,2 ml Reaktionspufferlösung 3 Stunden bei 25ºC umgesetzt. Das Reaktionsgemisch wurde zum Beenden der Reaktion rasch durch ein Glasfilter (GF/B, Whatman, USA) mittels eines Zellernters (Typ 290PHD, Cambridge Technology Inc.) filtriert und dreimal mit 250 µl 50 mM Tris-HCl-Puffer (pH 7,4) gewaschen, der mit 0,02% Rinderserumalbumin ergänzt war. Die auf dem Filter zurückgebliebene Radioaktivität wurde mit einem Geigerzähler gemessen. Die Ergebnisse werden in Tabelle 1 als Bindungshemmaktivität (IC&sub5;&sub0;, Einheit: µM) gegenüber dem NK2-Rezeptor dargestellt. Tabelle 1 Tabelle 1 (Fortsetzung) Tabelle 1 (Fortsetzung) Tabelle 1 (Fortsetzung) Tabelle 1 (Fortsetzung) Tabelle 1 (Fortsetzung) Tabelle 1 (Fortsetzung)

Claims (41)

1. Verbindung umfassend ein cyclisches Peptid, das durch die Formel [I] dargestellt wird:
oder ein Salz desselben, worin X und Y jeweils α-Aminosäurereste darstellen, A den Rest einer sauren D-α-Aminosäure darstellt, B den Rest einer neutralen α-Aminosäure darstellt, C einen L-α- Aminosäurerest darstellt und D den Rest einer D-α-Aminosäure mit einer aromatischen Ringgruppe darstellt, wobei Hydroxy-, Thiol-, Amino-, Imino- und Carboxylgruppen substituiert oder unsubstituiert sein können.
2. Verbindung gemäß Anspruch 1, wobei X die L-Konfiguration besitzt.
3. Verbindung gemäß Anspruch 1, wobei Y die L-Konfiguration besitzt.
4. Verbindung gemäß Anspruch 1, wobei A aus D-Glutaminsäure, D-Asparaginsäure, D-Cysteinsäure und D-β-(5-Tetrazolyl)alanin ausgewählt ist.
5. Verbindung gemäß Anspruch 1, wobei B die D-Konfiguration besitzt.
6. Verbindung gemäß Anspruch 1, wobei B aus 1-Aminocyclopropan-1-carbonsäure, 1-Aminocyclobutan-1-carbonsäure, 1-Aminocyclopentan-1-carbonsäure, 1-Aminocyclohexan-1-carbonsäure und 1- Aminocycloheptan-1-carbonsäure ausgewählt ist.
7. Verbindung gemäß Anspruch 1, wobei B aus D-Leucin, D-Alloisoleucin, D-tert-Leucin, D-γ-Methylleucin, D-Phenylglycin, D-2- Thienylglycin, D-3-Thienylglycin, D-Cyclopentylglycin, D-Phenylalanin, D-2-Thienylalanin, D-Valin, D-2-Furylglycin und D-3- Furylglycin ausgewählt ist.
8. Verbindung gemäß Anspruch 1, wobei C aus L-Leucin, L-Isoleucin, L-Valin, L-Norleucin und dem Rest einer L-α-Aminosäure mit einer aromatischen Struktureinheit ausgewählt ist.
9. Verbindung gemäß Anspruch 8, wobei C aus L-Leucin, L-Phenylalanin und L-Tryptophan ausgewählt ist.
10. Verbindung gemäß Anspruch 1, wobei D aus D-Tryptophan oder einem Derivat desselben, D-1-Naphthylalanin, D-2-Naphthylalanin, D-Benzothienylalanin, D-4-Bisphenylalanin und D-Pentamethylphenylalanin ausgewählt ist.
11. Verbindung gemäß Anspruch 10, wobei das Tryptophanderivat aus D-NIn-Methyltryptophan und D-NIn-Formyltryptophan und D-NIn-Acetyltryptophan ausgewählt ist.
12. Verbindung gemäß Anspruch 1, wobei A D-Asparaginsäure ist, X Tryptophan, L-(β-4-Phenylpiperazinamid)asparaginsäure, L-(Nδ- Phenylacetyl)ornithin, L-(N&sup4;-[Indol-3-yl]ethyl)ornithin, L-(4- Benzyloxy)prolin, L-(N&sup5;-Benzyl)glutamin oder L-(Nδ-[Indol-3- yl]acetyl)asparagin ist, Y L-Leucin, L-Asparaginsäure, L-O- Benzylserin, Tryptophan, Serin oder Prolin ist, B D-Leucin, D-2- Thienylglycin oder D-3-Thienylglycin ist, C L-Leucin ist und D D-Tryptophan ist.
13. Verbindung gemäß Anspruch 1, die cyclo[-D-Asp-Trp-Asp-D- Leu-Leu-D-Trp-] ist, oder ein Salz derselben.
14. Verbindung gemäß Anspruch 1, die cyclo[-D-Asp-Asn(CH&sub2;CH&sub2;- Ind)-Asp-D-Leu-Leu-D-Trp-] ist, wobei Asn(CH&sub2;CH&sub2;-Ind) N&sup4;-(2-{Indol-3-yl}ethyl)asparagin ist, oder ein Salz derselben.
15. Verbindung gemäß Anspruch 1, die cyclo[-D-Asp-Trp-Leu-D- Leu-Leu-D-Trp-] ist, oder ein Salz derselben.
16. Verbindung gemäß Anspruch 1, die cyclo[-D-Asp-Trp-Ser(Bzl)- D-Leu-Leu-D-Trp-] ist, wobei Ser(Bzl) O-Benzylserin ist, oder ein Salz derselben.
17. Verbindung gemäß Anspruch 1, die cyclo[-D-Asp-Trp-Asp-D- Leu-Leu-D-Trp(Ac)-] ist, wobei Trp(Ac) NIn-Acetyltryptophan ist, oder ein Salz derselben.
18. Verbindung gemäß Anspruch 1, die cyclo[-D-Asp-Trp-Asp-D- Thi-Leu-D-Trp-] ist, wobei Thi 2-Thienylalanin ist, oder ein Salz derselben.
19. Verbindung gemäß Anspruch 1, die cyclo[-D-Asp-Trp-Asp-D- γMeLeu-Leu-D-Trp-) ist, wobei γMeLeu γ-Methylleucin ist, oder ein Salz derselben.
20. Verbindung gemäß Anspruch 1, die cyclo[-D-Asp-Trp-Asp-D- Thg(2)-Leu-D-Trp-) ist, wobei Thg(2) 2-Thienylglycin ist, oder ein Salz derselben.
21. Verbindung gemäß Anspruch 1, die cyclo[-D-Asp-Trp-Asp-D- Phe-Leu-D-Trp-] ist oder ein Salz derselben.
22. Verbindung gemäß Anspruch 1, die cyclo[-D-Asp-Asp(R1)-Asp- D-Leu-Leu-D-Trp-] ist, wobei Asp(Rl) Asparaginsäure-β-4-phenylpiperazinamid ist, oder ein Salz derselben.
23. Verbindung gemäß Anspruch 1, die cyclo[-D-Asp-Orn(COCH&sub2;Ph)- Asp-D-Leu-Leu-D-Trp-) ist, wobei Orn(COCH&sub2;Ph) N(δ)-Phenylacetylornithin ist, oder ein Salz derselben.
24. Verbindung gemäß Anspruch 1, die cyclo[-D-Asp-Orn-(COCH&sub2;- Ind)-Asp-D-Leu-Leu-D-Trp-) ist, wobei Orn- (COCH&sub2;-Ind) N(δ)-({Indol-3-yl}acetyl)ornithin ist, oder ein Salz derselben.
25. Verbindung gemäß Anspruch 1, die cyclo[-D-Asp-Hyp(Bzl)-Asp- D-Thg(2)-Leu-D-Trp-] ist, wobei Hyp(Bzl) 4-Benzyloxyprolin und Thg(2) 2-Thienylglycin ist, oder ein Salz derselben.
26. Verbindung gemäß Anspruch 1, die cyclo[-D-Asp-Gln(Bzl)-Asp- D-Thg(2)-Leu-D-Trp-] ist, wobei Gln(Bzl) N&sup5;-Benzylglutamin und Thg(2) 2-Thienylglycin ist, oder ein Salz derselben.
27. Verbindung gemäß Anspruch 1, die cyclo[-D-Asp-Asn(CH&sub2;CH&sub2;- Ind)-Asp-D-Thg(2)-Leu-D-Trp-] ist, wobei Asn(CH&sub2;CH&sub2;-Ind) N&sup4;-(2- {Indol-3-yl}ethyl)asparagin und Thg (2) 2-Thienylglycin ist, oder ein Salz derselben.
28. Verbindung gemäß Anspruch 1, die cyclo[-D-Asp-Asp(R1)-Asp- D-Thg(2)-Leu-D-Trp-] ist, wobei Asp(R1) Asparaginsäure-β-4- phenylpiperazinamid und Thg(2) 2-Thienylglycin ist, oder ein Salz derselben.
29. Verbindung gemäß Anspruch 1, die cyclo[-D-Asp-Asp(R1)-Asp- D-Thg(2)-Leu-D-Trp-] ist, wobei Asp(R1) Asparaginsäure-β-4- phenylpiperazinamid und Thg(2) 2-Thienylglycin ist, oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz derselben.
30. Pharmazeutische Zusammensetzung, die das in einem der Ansprüche 1 bis 29 beanspruchte Peptid oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz desselben als aktiven Bestandteil umfaßt.
31. Die in Anspruch 30 beanspruchte pharmazeutische Zusammensetzung, die das Peptid oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz desselben in einer als Endothelinrezeptor Antagonist wirksamen Menge umfaßt.
32. Die in Anspruch 30 beanspruchte pharmazeutische Zusammensetzung, die das Peptid oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz desselben in einer als NK2-Rezeptor-Antagonist wirksamen Menge umfaßt.
33. Die in Anspruch 30 beanspruchte pharmazeutische Zusammensetzung, wobei die Zusammensetzung zum Behandeln oder Verhindern einer Herz- oder Hirnkreislauferkrankung geeignet ist.
34. Die in Anspruch 33 beanspruchte pharmazeutische Zusammensetzung, wobei die Zusammensetzung zum Behandeln oder Verhindern von Herzinfarkt geeignet ist.
35. Die in Anspruch 30 beanspruchte pharmazeutische Zusammensetzung, wobei die Zusammensetzung zum Behandeln oder Verhindern von akuter Niereninsuffizienz geeignet ist.
36. Verfahren zum Herstellen der Verbindung gemäß Anspruch 1 oder eines Salzes derselben, welches das Kondensieren eines Ausgangsmaterials mit einer reaktionsfähigen Carboxylgruppe, das einem von zwei Arten von Fragmenten entspricht, die an irgendeiner Stelle der Peptidbindung des gewünschten Peptids getrennt sind, mit einem Ausgangsmaterial mit einer reaktionsfähigen Aminogruppe, das dem anderen Fragment entspricht, das nachfolgende, gleichzeitige oder schrittweise Entfernen von Schutzgruppen von der C-terminalen α-Carboxylgruppe und der N-terminalen α-Aminogruppe der sich daraus ergebenden Verbindung und danach das Ausführen einer intramolekularen Kondensation beider, um eine cyclische Verbindung zu erhalten, umfaßt.
37. Verwendung der Verbindung gemäß einem Anspruch 1 bis 29 oder eines pharmazeutisch annehmbaren Salzes derselben zum Herstellen eines als Endothelinrezeptor-Antagonist wirkenden Arzneimittels.
38. Verwendung der Verbindung gemäß einem Anspruch 1 bis 29 oder eines pharmazeutisch annehmbaren Salzes derselben zum Herstellen eines als NK2-Rezeptor-Antagonist wirkenden Arzneimittels.
39. Verwendung der Verbindung gemäß einem Anspruch 1 bis 29 oder eines pharmazeutisch annehmbaren Salzes derselben zum Herstellen eines Arzneimittels zum Behandeln oder Verhindern einer Herz- oder Hirnkreislauferkrankung.
40. Verwendung der Verbindung gemäß einem Anspruch 1 bis 29 oder eines pharmazeutisch annehmbaren Salzes derselben zum Herstellen eines Arzneimittels zum Behandeln oder Verhindern von Herzinfarkt.
41. Verwendung der Verbindung gemäß einem Anspruch 1 bis 29 oder eines pharmazeutisch annehmbaren Salzes derselben zum Herstellen eines Arzneimittels zum Behandeln oder Verhindern von akuter Niereninsuffizienz.
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