NO310295B1

NO310295B1 - Sykliske peptider, farmasöytisk preparat inneholdende disse samt anvendelse derav

Info

Publication number: NO310295B1
Application number: NO19923142A
Authority: NO
Inventors: Mitsuhiro Wakimasu; Takashi Kikuchi; Akira Kawada; Hideo Shirafuji
Original assignee: Takeda Chemical Industries Ltd
Priority date: 1991-08-13
Filing date: 1992-08-12
Publication date: 2001-06-18
Also published as: EP0528312A3; JPH069689A; US5616684A; EP0528312A2; JP2726647B2; NO923142D0; ES2103857T3; FI923619A0; JP2677489B2; CA2075878A1; FI923619A; DK0528312T3; JPH08225595A; DE69220861D1; FI106031B; NO923142L; DE69220861T2; CA2075878C; GR3024495T3; EP0528312B1

Description

Foreliggende oppfinnelse vedrører nye sykliske peptider med antagonistisk aktivitet på endotelin reseptorer og antagonistisk aktivitet på NK2 reseptorene. Disse sykliske peptidene er nyttige som profylaktiske og terapeutiske medikamenter for hypertensjon, hjerte eller cerebral sirkulatoriske sykdommer, nyresykdommer og astma, anti-inflammatoriske medikamenter, antartritiske sykdommer og lignende. Foreliggende oppfinnelse vedrører videre anvendelse derav.

Endotelin (ET) er et kar-forsnevrende peptid bestående av 21 aminosyre residier. Endotelin ble isolert fra kultursuper-natanten til endoteliske celler fra grise aortar. Deres struktur ble bestemt av M. Yanagisawa et al. i 1988 [M. Yanagisawa et al., Nature 332, 411-412 (1988)]. I den senere tid har forskning på gener kodende for endotelin vist til-stedeværelse av peptider som ligner på endotelin i struktur. Disse peptidene er betegnet endotelin-1 (ET-1), endotelin-2 (ET-2) og endotelin-3 (ET-3). Deres strukturer er som følger:

Alle aminosyrene som utgjør ET-1, ET-2 og ET-3 innehar L-form [Inoue et al., Proe. Nati. Acad. Sei. U.S.A. 86, 2863 - 2867

(1989)] .

Ovennevnte peptider fra endotelinfamilien eksisterer in vivo og har vasopressor aktivitet. Av denne grunnen er disse peptidene betraktet å være intrinsiske faktorer ansvarlige for kontroll av sirkulatoriske systemer og utledet til å være relatert til hypertensjonen, hjerte eller cerebral sirkulatoriske sykdommer såsom hjerteinfarkt og nyresykdommer såsom akutt nyre-insuffisiens. I tillegg har disse peptidene også bronkie glatt-muskel sammentrekkende aktivitet og ser ut til å være relatert til astma.

Dersom antagonister for reseptorene av ovennevnte peptider fra endotelinfamilien blir oppnådd, er det ikke bare betraktet å være nyttige for å bestemme den funksjonelle mekanismen til disse peptidene, men skal også bli anvendt som effektive terapeutiske medikamenter for ovennevnte sykdommer. Det er allerede inngitt egne søknader for pasienter med hensyn på fermentasjons produkt-avledete sykliske pentapeptider med antagonistisk aktivitet på endotelin reseptorene (japansk patentsøknad nr. 2-413828/1990 og 3-126160/1991). Det er derfor en hensikt ifølge foreliggende oppfinnelse å tilveiebringe nye peptider som er like effektive eller mer effektive enn peptidene som tidligere er kjent.

Foreliggende oppfinnere har fremstilt nye sykliske peptider med antagonistisk aktivitet på endotelin reseptorene og har videre oppdaget at en viss gruppe peptider oppnådd på denne måten hadde antagonistisk aktivitet på NK2 reseptorene og har fullført oppfinnelsen ved ytterligere studier.

Foreliggende oppfinnelse tilveiebringer en kjemisk forbindelse kjennetegnet ved at den omfatter et cyklisk heksapeptid representert ved formel (I) eller et salt derav:

hvori X og Y hver representerer a-amino syreresidier, A representerer et D-acidisk-a-aminosyre residie, B representerer et nøytralt-a-aminosyre residie, C representerer et L-a-syre residie og D representerer et D-a-aminosyre residie med en aromatisk ring-gruppe; hvori hydroksy, tiol, amino, imino og karboksylgruppene kan bli substituert eller være usubstituerte.

Foreliggende oppfinnelse omfatter også et farmasøytisk preparat, kjennetegnet ved at det inneholder peptidet som tidligere nevnt eller et farmasøytisk akseptabelt salt derav.

Videre omfatter oppfinnelsen anvendelse av forbindelsen som tidligere nevnt, eller det farmasøytisk akseptable saltet derav, for fremstilling av et farmasøytisk preparat som har antagonistisk aktivitet på endodtelin reseptorer og NK2 reseptorene.

Heksapeptidet representert ved formel (I) har 6 amid-bind-inger inkludert en binding mellom A og D som viser at molekylet i sin helhet danner en ring. I denne beskrivelsen blir dette heksapeptidet noen ganger referert til som cyklo

[-A-X-Y-B-C-D-].

I formel (I) kan en aminosyre som angir a-aminosyre residiet representert ved X og Y være en hvilken som helst aminosyre dersom det er en a-aminosyre. Eksempler på dette omfatter alanin, arginin, asparagin, asparaginsyre, cystein, glutamin, glutaminsyre, 1-aminomalonsyre, 2-aminoadipinsyre, glycin, histidin, isoleucin, leucin, lysin, ornitin, 2,4-diaminobuty-risk syre, mentionin, fenylalanin, prolin, 4-hydroksyprolin, tioprolln, azatidin-2-karboksylsyre, pipekolinsyre (piperi-din-2-karboksylsyre, pipekolinsyre (piperidin-2-karboksylsyre ), indolin-2-karboksylsyre, tetrahydroisokinolin-3-karboksylsyre, serin, treonin, tryptofan, 5-metyltryptofan, tyrosin, valin, alloisoleucin, norvalin, norleucin, tertiary leucin, -Y-metylleucin, fenylglycin, 2-aminosmørsyre, cysteinsyre, homocysteinsyre, 1-naftylalanin, 2-naftylalanin, 2-tienylglycin, 3-tienylglycin, 3-benzotienyl-alanin, 4-bifenylalanin, pentametylfenylalanin, 1-aminocyklopropan-l-karboksylsyre, 1-aminocyklobutan-l-karboksylsyre, 1-aminocyklobutan-l-karboksylsyre, 1-aminocyklopentan-l-karboksylsyre, 1-aminocykloheksan-l-karboksylsyre og 1-aminocykloheptan-l-karboksyl syre. Når disse cx-aminosyrene har funksjonelle grupper såsom hydroksyl, tiol, amino, imino og karboksyl, kan disse funksjonelle gruppene være substituerte.

De substituerte hydroksylgruppene inkluderer estere såsom cl-6 fettsyreestere (f.eks. formater, acetater og propionater), C^_ C^ alisykliske karboksylsyreestere (f.eks. cyklopentankarboksylater og cykloheksankarboksylater), C7-15 arylkarboksylsyreestere (f. eks. benzoater og 4-metylbenzo-ater), c8-16 aralkylkarboksylsyreestere (f.eks. fenyl-acetater, 2-fenylpropionater, 3-fenylpropionater og difenyl-acetater) og aromatiske heterocykel-alkylkarboksylsyreestere (f.eks. indol-2-ylacetater og indol-3-ylacetater; og etere såsom C-l_£j alkyleter (f.eks. metyletere, etyletere n-propyl-etere og t-butyletere), C3_g cykloalkyletere (f.eks. cyklo-pentyletere og cykloheksyletere), C(,_^2 aryletere (f.eks. fenyletere og 4-metylfenyletere) og C7-15 aryletere (f.eks. benzyletere, fenetyletere og difenylmetyletere). Eksempler på ot-aminosyrer hvor hydroksylgruppene er substituert omfatter O-acetylserin, O-acetyltreonin, 4-acetoksyprolin, 0-benzoylserin, 0-benzoyltreonin, 4-benzoyloksyprolin, 0-fenylacetylserin, O-fenylacetyltreonin, 4-fenylacetoksy-prolin, 0-etylserin, 0-etyltreonin, 4-etoksyprolin, 0-cykloheksylserin, O-cykloheksyltreonin, 4-cykloheksyloksy-prolin, 0-fenylserin, 0-fenyltreonin, 4-fenoksyprolin, 0-benzylserin, O-benzyltreonin, 4-benzyloksyprolin, 0-difenyl-metylserin, 0-difenylmetyltreonin og 4-difenylmetoksyprolin.

De substituerte tiolgruppene omfatter tiolestere såsom C^_( i fettsyre tiolestere (f.eks. maursyre tiolestere, maursyre tiolestere og propionsyre tiolestere), C4_g alisykliske karboksylsyre tiolestere (f.eks. cyklopentankarboksylsyre tiolestere og cykloheksankarboksylsyre tiolestere), C7-15 arylkarboksylsyre tiolestere (f.eks. benzosyre tiolestere og 4-metylbenzosyre tiolestere) og Cs- lb aralkylkarboksylsyre tiolestere (f.eks. fenyleddiksyre tiolester, 2-fenylpropionsyre tiolestere, 3-fenylpropionsyre tiolestere og difenyl-eddiksyre tiolestere); og tioeterformer såsom C^_f, alkyl tioetere (f.eks. metyl tioetere, etyl tioetere, n-propyl tioetere og t-butyl tioetere), C3-8 cykloalkyl tioetere (f.eks. cyklopentyl tioetere og cykloheksyl tioetere), Cb- 12 aryl tioetere (f.eks. fenyl tioetere og 4-metylfenyl tioetere) og C7_i5 aralkyl tioetere (f.eks. benzyl tioetere, fenetyl tioetere og difenylmetyl tioetere). Eksempler på a-aminosyrer hvor tiolgruppene er substituert omfatter S-acetyl-cystein, S-benzoylcystein, S-fenylacetylcystein, S-etylcystein, S-cykloheksylcystein, S-fenylcystein og S-benzylcystein.

De substituerte aminogruppene (eller iminogruppene) innbefatter substituerte amino eller iminogrupper såsom C^_£, alkylamino (eller imino) [f.eks. N-metylamino (eller imino), N-etylamino (eller imino) og N-t-butylamino (eller imino)], c3-8 cykloalkyl-amino (eller imino) [f.eks. N-cyklopentyl-amino (eller imino) og N-cykloheksylamino (eller imino)],

c6-12 arylamino (eller imino) [f.eks. N-fenylamino (eller

. imino) og N-(4-metylfenyl}amino (eller imino)], c7-i5 aralkylamino (eller imino) [f.eks. N-benzylamino (eller imino), N-fenyletyl-amino (eller imino), N-{2-klorobenzyl}-amino (eller imino), N-(3-klorobenzyl)amino (eller imino), N-(4-klorobenzyl}amino (eller imino), N-{2-metylbenzyl}amino (eller imino), N-(3-metyl-benzyl)amino (eller imino), N-(4-metylbenzyl)amino (eller imino), N-{2-metoksybenzyl>amino (eller imino), N-(3-metoksy-benzyl>amino (eller imino) og N-(4-metoksybenzyl}amino (eller imino)] og aromatisk heterocykel-Ci_6 alkylamino (eller imino) [f.eks. 2-furylmetylamino (eller imino), 3-furyl-metylamino (eller imino), 2-tienylmetylamino (eller imino), 3-tienylmetylamino (eller imino), indol-2-ylmetylamino (eller imino) og indol-3-ylmetylamino (eller imino)]; og substituerte amido (eller imido) grupper såsom C^_£, alifatisk acylamido (eller imido) [f.eks. form-amido (eller imido), acetamido (eller imido) og propionamido (eller imido)], C4_g alisyklilsk acylamido (eller imido)

[f.eks. cyklopentankarbonylamido (eller imido) og cyklo-

heksankarbonylamido (eller imido)], C7-15 arylacylamido (eller imido) [f.eks. benzamido (eller imido) og 4-metylbenz-amido (eller imido)], Cs- lb aralkylacylamido (eller imido)

[f.eks. fenylacetamido (eller imido), 2-fenylpropionamido (eller imido), 3-fenylpropionamido (eller imido), difenyl-acetamido (eller imido), 1-naftylacetamido (eller imido) og 2-naftylacetamido (eller imido)], aromatisk heterocykel-karbonylamido (eller imido) [f.eks. indol-2-ylkarbonylamido (eller imido) og indol-3-ylkarbonylamido (eller imido)], arometisk heterocykel-alkylkarbonylamido (eller imido)

[f.eks. indol-2-ylacetamido (eller imido) og indol-3-ylacet-amido (eller imido)], og sulfonylamido (eller imido) [f.eks. benzensulfonylamido (eller imido), p-toluensulfonylamido (eller imido) og 4-metoksy-2,3,6-trimetylbenzensulfonylamido (eller imido)]. Eksempler på a-aminosyrer hvor amino (eller imino)gruppene er substituert innbefatter N-metylglycin (sarcosin) N-etylglycin, N-metylleucin, N-etylleucin, N-metylfenylalanin, N-etylfenylalanin, N(a)-metyltryptofan, N(a)-etyltryptofan, N-cyklopentylglycin, N-cykloheksylglycin, N-fenylglycin, N-fenylleucin, N-benzylglycin, N-benzylleucin, N(n)-benzyl-histin, N(n)-benzylhistin, N(n)-fenacylhistin, N(n )-benzyloksymetylhistin, N§-benzensulfonylarginin, NS-p-toluensulfonylarginin, N§-(4-metoksy-2,3,6-trimetylbenzensulfonyl)arginin , N(E)-benzensulfonyllysin, N(E)-p-toluensul-fonyllysin , N(E)-(4-metoksy-2,3,6-trimetylbenzensulfonyl )-lysin, Nin<->metyl-tryptofan, Nin<->etyltryptofan, Nin<->formyl-tryptofan, Nin<->acetyltryptofan, N(E)-benzyllysin, N(E)-(2-furylmetyl)lysin, N(E)-(2-tienylmetyl)lysin, N(E)-(indol-3-ylmetyl)lysin, N(E)-fenylacetyllysin, N(E)-((2-furyl>acetyl )-lysin, N(E)-((2-tienyl)acetyl)lysin, N(E)-((indol-3-yl)-acetyl)lysin, N(E)-benzoyllysin, N(E)-(3-fenylpropionyl)-lysin, N(S )-benzylornitin, N(S)-(2-furylmetyl)ornitin, N(S)-(2-tienylmetyl)ornitin, N(5 )-(indol-3-ylmetyl)ornitin, N(S)-benzoylornitin, N(S )-fenylacetylornitin, N(5 )-fenylacetylornitin, N(5 )-(3-fenylpropion)-ornitin, N(S)-({2-metylfenyl>-acetyl)ornitin, N(5)-((3-metylfenyl)acetyl)ornitin, N(S)-((4-metylfenyl}-acetyl)ornitin, N(S)-((2-klorofenyl)acetyl)-

ornitin, N(S)-({3-klorofenyl>acetyl]ornitin, N(S)-({4-klorofenyl}acetyl)ornitin, N(S)-({2-metoksyfenyl>acetyl)-ornitin, N(§ )-({4-metoksyfenyl}acetyl)ornitin, N(S)-(4-bifenyl-acetyl1)ornitin, N(7)-benzyl-2,4-diaminosmørsyre, N("Y )-(2-furylmetyl )-2 ,4-diaminosmørsyre , N(-y )-(2-tienyl-metyl )-2 ,4-diaminosmørsyre , N(*y )-( indol-3-ylmetyl )-2 ,4-diaminosmørsyre, N(7)-benzoyl-2,4-diaminosmørsyre, N(^)-fenylacetyl-2 ,4-diaminosmørsyre , N("y )-(2-furylacetyl )-2 ,4-diaminosmørsyre , N("Y )-(2-tienylacetyl )-2 ,4-diaminosmørsyre og N("Y )-( { indol-3-yl >acetyl )-2 ,4-diaminosmørsyre .

Substituerte karboksylgrupper innbefatter aminogrupper såsom karboksylsyre amido (-CONH2), N-C^_6 alkylamido (f.eks. N.metylamido, N-etylamido, N-{n-propyl>-amido og N-t-butyl-amido), N-C3_g cykloalkylamido (f.eks. N-cyklopentylamido og N-cykloheksylamido), N-C^,.-^ arylamido (f.eks. N-fenylamido og N-{4-metylfenyl}amido, N-C7_15 aralkylamido (f.eks. N-benzylamido, N-fenetylamido, N-{1,2-difenyletyl>amido ), N-{aromatisk heterocykel-C^_5 alkyl}amido (f.eks. N-[2-{indol-2-yl}etyl]amido og N-[2-{indol-3-yl}etyl]-amido )-piperidin-amido, piperazinamido, N<4->Ci_6 alkyl-piperazinamido (f.eks. N<4->metylpiperazinamido og N<4->etylpiperazinamido), N<4->C3_g cykloalkylpiperazinamido (f.eks. N<4->cyklopentylpiperazinamido og N<4->cykloheksylpiperazinamido), N<4->(5 til 7 leddet heterocyklisk piperazinamido (f.eks. N<4->pyridylpiperazinamido, N<4->tienylpiperazinamido), ^~^ t>- i2 arylpiperazinamido (f.eks. N<4->{4-metylfenyl>-piperazinamido), N<4->Cy_^5 aralkylpiperazin-amido (f.eks. N<4->benzylpiperazinamido, N<4->fenetylpiperazin-amido, N<4->{1,2-difenyletyl}piperazinamido), N<4->{aromatisk heterocykel-C-L_£ alkyl }piperazinamido (f.eks. N<4->[2-{indol-2-yl>etyl]piperazinamido og N<4->[2-{indol-3-yl}etyl]piperazinamido), N<4->C^_5 alifatisk acylpiperazin-amido (f.eks. N<4->acetylpiperazinamido og N<4->propionylpiperazinamido), N<4->C4_q alicyklisk acylpiperazinamido (f.eks. N<4->cyklopentankarbonyl-piperazinamido og N<4->cykloheksankarbonylpiperazinamido), N<4->^7-15 arylacylpiperazinamido (f.eks. N<4->benzoylpiperazinamido og N<4->{4-metylbenzoyl}piperazinamido), N<4->Cg_^j aralkylacyl-piperazinamido (f.eks. N<4->fenylacetylpiperazinamido N<4->{2-fenylpropion)piperazinamido, N<4->{3-fenylpropionyl>piperazin-amido, N<4->difenylacetylpiperazinamido), N<4->{1-naftylacetyl}-piperazinamido og N<4->{2-naftylacetyl}piperazinamido), N<4->

(aromatisk heterocykel-karbonyl}piperazinamido (f.eks. N<4->

{indol-2-ylkarbonyl}piperazinamido og N4-{ indol-3-ylkar-bonyl}piperazinamido) og N<4->{aromatisk heterocyklisk alkyl-karbonyl}piperazinamido (f.eks. N<4->{indol-2-ylacetyl}piperazinamido og N<4->{indol-3-ylacetyl}-piperazinamido); og estere såsom C^_5 alkylestere (f.eks. metylestere, etylestere og n-propylestere ), ^3_g cykloalkylestere (f.eks. cyklopentyl-estere og cykloheksylestere) og C7-15 aralkylestere (f-, eks. benzylestere, fenetylestere, 1-fenyletylestere og difenyl-metylestere). Ovennevnte amidoformer omfatter også amidogrupper med a-aminosyrer og amidogrupper med oligopeptider (f.eks. dipeptider, tripeptider og tetrapeptider). a-aminosyrene hvor karboksylgruppene er substituert omfatter f.eks. N<4->metylasparagin, N<4->fenylasparagin, N<4->benzylaspara-gin, N<4->fenetylasparagin, N<4->(2-{indol-3-yl}etyl)asparagin, N<5->metylglutamin, N^-fenylglutamin, N<5->bnzylglutamin, N<5->fenetylglutamin, N5-(2-{indol-3-yl}etyl )glutamin, asparaginsyre p-metylester , asparaginsyre p<->cyklopropylester, asparaginsyre p<->benzylester, asparaginsyre p-fenetylester, asparaginsyre p-N<4->fenylpiperazinamid, asparaginsyre p-N<4->(e-metylfenyl)-piperazinamid, asparaginsyre P-N<4->(e-metylfenyl)-piperazinamid, asparaginsyre P-N<4->(3-metylfenyl)-piperazin-amid, asparaginsyre p<->N<4->(4-metylfenyl)-piperazinamid, asparaginsyre p<->N<4->(2-metoksyfenyl)-piperazinamid, asparaginsyre p-N<4->(3-metoksyfenyl)-piperazinamid, asparaginsyre p<->N<4->

(4-metoksyfenyl)-piperazinamid, asparaginsyre p-N<4->(2-klorofenyl )-piperazinamid, asparaginsyre P-N4-(3-klorofenyl )-piperazinamid, asparaginsyre p-N<4->(4-klorofenyl)-piperazin-amid, asparaginsyre P-N<4->(4-nitrofenyl)-piperazinamid, asparaginsyre p<->N<4->(4-fluorfenyl)-piperazinamid, asparaginsyre p-N<4->(3-trifluormetyl-fenyl)piperazinamid, asparaginsyre p-N<4->(2,3-dimetyl-fenyl)piperazinamid, asparaginsyre p-N<4->(2-pyridyl)-piperazinamid, asparaginsyre p<->N<4->(2-pyrimidyl)-

piperazinamid, glutaminsyre -y-metylester , glutaminsyre 7-cyklopropylester, glutaminsyre -y-benzylester og glutaminsyre 7-fenetylester.

a-aminosyren som danner aminosyre residiet er representert ved X eller Y i formel [I] kan være hvilke som helst av L-, D- og DL-formene. L-formen er derimot mer foretrukket i hvert tilfelle.

En aminosyre som danner D-acidisk-a-aminosyre residiet representert ved A i formel [I] er f.eks. en aminosyre med en sur gruppe såsom karboksyl, sulfonyl eller tetrazolyl som en sidekjede. Eksempler på slike aminosyrer omfatter D-glutaminsyre, D-asparaginsyre, D-cysteinsyre, D-homocysteinsyre, D-p-(5-tetrazolyl)alanin og D-2-amino-4-(5-tetrazolyl)smør-syre. Spesielt D-glutaminsyre, D-asparaginsyre og D-cysteinsyre er foretrukket.

En aminosyre som danner det naturlige a-aminosyre residiet representert ved B i formel [I] er en a-aminosyre. Eksempler på slike a-aminosyrer omfatter alanin, valin, norvalin, leucin, isoleucin, alloisoleucin, norleucin, tertiært leucin, "Y-metyl leucin, fenylglycin, fenylalanin, 1-naf tylalanin , 2-naftylalanin, prolin, 4-hydroksyprolin, azetidin-2-karboksylsyre, pipecolinsyre (piperidin-2-karboksylsyre), 2-tienylala-nin, 2-tienylglycin, 3-tienylglycin, 1-aminocyklopropan-l-karboksylsyre, 1-aminocyklobutan-l-karboksylsyre, 1-aminocyklopentan-l-karboksylsyre, 1-aminocykloheksan-l-karboksylsyre, 1-aminocykloheptan-l-karboksylsyre, 2-cyklopentylglycin og 2-cykloheksylglycin. Når ovennevnte nøytrale a-aminosyre eksisterer i L- og D-former, er D-formen foretrukket. D-leucin, D-alloisoleucin, D-tertiær leucin, B- y-metylleucin, D-fenylglycin, D-2-tienylalanin, D-2-tienylglycin, D-3-tienylglycin og D-2-cyklopentylglycin er blant andre foretrukket, a-iminogruppene til disse nøytrale-a-aminosyrene kan bli substituert med C1-6 alkylgrupper (f.eks. metyl, etyl, n-propyl og t-butyl). Eksempler på slike a-aminosyrer innbefatter N-metylleucin, N-metylalloisoleucin, N-metyl tertiær leucin, N-metyl 7-metylleucin og N-metylfenyl-glycin. For disse a-aminosyrene er D-formen foretrukket.

Som en aminosyre som danner L-cx-aminosyre residiet representert ved C i formel [I] anvendes vanligvis en kjent L-a-aminosyre. Eksempler på slike L-a-aminosyrer innbefatter glycin, L-alanin, L-valin, L-norvalin, L-leucin, L-isoleucin, L-tertiær leucin, L-norleucin, L-metionin, L-2-aminosmørsyre, L-serin, L-treonin, L-fenylalanin, L-asparaginsyre, L-glultaminsyre, L-asparagin, L-glutamin, L-lysin, L-tryptofan, L-arginin, L-tyrosin og L-prolin. L-leucin, L-norleucin og L-tryptofan er spesielt foretrukket. cx-iminogruppene til disse L-a-aminosyrene kan bli substituert med C^_6 alkylgrupper (f.eks. metyl, etyl, n-propyl og t-butyl). Eksempler på slike L-a-aminosyrer omfatter L-N-metylleucin, L-N-metylnorleucin og L-N(a)-metyl-tryptofan.

Som en aminosyre som danner D-a-aminosyre residiet med den aromatiske ring-gruppen representert ved det i formel [I] anvendes en D-a-aminosyre som har en aromatisk ring-gruppe som en sidekjede. Foretrukne eksempler derav omfatter D-tryptofan, D-5-metyltryptofan, D-fenylalanin, D-tyrosin, D-l-naftylalanin, D-2-naftyl-alanin, D-3-benzotienylalanin, D-4-bifenylalanin og D-pentametylfenylalanin. D-tryptofan og D-5-metyltryptofan er foretrukket, og spesielt D-tryptofan er mer foretrukket, a-aminogruppene til D-a-aminosyrene som har de aromatiske ringene kan bli substituert med £\-b alkylgrupper (f.eks. metyl, etyl, n-propyl og t-butyl). Imino-gruppen til indolringen til D-tryptofan kan videre bli substituert med en hydrokarbongruppe såsom en £\- t> alkyl-gruppe (f.eks. metyl, etyl, n-propyl eller t-butyl), 03.8 cykloalkylgruppe (f.eks. cyklopentyl eller cykloheksyl), en ^6-12 arylgruppe (f.eks. fenyl, eller 4-metylfenyl) eller c7-15 aralkyl (f.eks. benzyl eller fenetyl), eller en acylgruppe såsom en C^_£, alifatisk acylgruppe (f.eks. formyl, acetyl eller propionyl), en C^_ c) alicyklisk acylgruppe

(f.eks. cyklopentankarbonyl eller cykloheksankarbonyl), en c7-15 arylacyl gruppe (f.eks. benzoyl eller 4-metylbenzoyl) en <Cg_>i6 aralkylacylgruppe (f.eks. fenylacetyl, 2-fenylpropionyl, 3-fenylpropionyl eller dlfenylacetyl) eller en C^_^ alkoksykarbonylgruppe (f.eks. metoksykarbonyl eller etoksy-karbonyl). Eksempler på slike a-aminosyrer innbefatter D-N(a )-metyltryptofan, D-N-metylfenylalanin, D-N-metyltyrosin , D-Nin<->metyltryptofan, D-Nin-etyltryptofan, D-Nin-formyltryp-tofan og D-N<*n->acetyl-tryptofan. D-Nin<->metyltryptofan, D-Nin<->formyltryptofan og D-Nin<->acetyltryptofan er blant andre foretrukket.

I heksapeptidet representert ved formel [I] er de foretrukne utførelsesformene ifølge hver parameter som følger:

X har L-konfigurasjon.

Y har L-konfigurasjon.

A blir valgt fra gruppen bestående av D-glutaminsyre, D-asparaginsyre, D-cysteinsyre og D-p<->(5-tetrazolyl)alanin residiet.

B har D-konfigurasjon.

B blir valgt fra gruppen bestående av 1-aminocyklopropan-l-karboksylsyre, 1-aminocyklobutan-l-karboksylsyre, 1-aminocyklopentan-l-karboksylsyre, 1-aminocykloheksan-l-karboksylsyre og 1-aminocykloheptan-l-karboksylsyre residie.

B blir valgt fra gruppen bestående av D-leucin, D-alloisoleucin, D-tertiærleucin, D-gammametylleucin, D-fenylglycin, D-2-tienylglycin, D-3-tienylglycin, D-cyklopentylglycin, D-fenylalanin, D-2-tienylalanin, C-valin, D-2-furylglycin og D-3-furylglycin residie.

C blir valgt fra gruppen bestående av L-leucin, L-isoleucin, L-valin, L-norleucin og L-a-aminosyre residie som har en aromatisk del.

C blir valgt fra gruppen bestående av L-leucin, L-fenylalanin og L-tryptofan.

D er D-tryptofan, eller et derivat derav, D-l-naftylalanin, D-2-naftylalanin, D-benzotienylalanin, D-4-bisfenlalanin og

D-pentametylfenylalanin residiet.

Derivatet av tryptofan velges fra gruppen bestående av D-Nin-metyltryptofan, D-Nin<->formyltryptofan og D-Nin<->acetyltrypto-fan residiet.

Foretrukne kombinasjoner av hvert parameter innbefatter slike som der A er D-asparaginsyre residie; X er tryptofan, L-(p-4-fenylpiperazinamid)asparaginsyre, L-(N^-fenylacetyl)ornitin, L-(N<4->[indol-3-yl]etyl)ornitin, L-(4-benzyloksy)prolin, L-(N<5->benzyl)glutamin eller L-(N^-[indol-3-yl]acetyl)asparagin residiet; Y er L-leucin, L-asparaginsyre, L-O-benzylserin, tryptofan, serin eller prolin residiet; B er D-leucin, D-2-tienylglycin eller D-3-tienylglycin residiet; C er L-leucin residiet; og D er D-tryptofan residiet.

Alle de sykliske peptidene representert ved formel [I] ifølge foreliggende oppfinnelse (nedenfor referert til som sykliske peptider [I] har den antagonistiske aktiviteten på endotelinreseptorene. I tillegg, peptidene med aminosyre residier såsom asparaginsyre og tryptofan som X og aminosyre residier såsom leucin, tryptofan og O-benzylserin som Y har videre også den antagonistiske aktiviteten på NK2 reseptorene.

Salter av de sykliske peptidene [I] omfatter metallsalter (f.eks. natriumsalter, kaliumsalter, kalsiumsalter, magnesiumsalter), salter av baser eller basiske forbindelser (f.eks. ammoniumsalter og argininsalter), addisjonssalter av uorganiske syrer (f.eks. hydroklorider, sulfater og fosfater) og salter av organiske syrer (f.eks. acetater, propionater, citrater, tartrater, malater og oksalater).

Som beskrevet i arbeidseksemplene ifølge beskrivelsen, kan de sykliske peptidene [I] ifølge foreliggende oppfinnelse bli fremstilt ved fremgangsmåter for peptidsyntese som er kjent innenfor dette fagområdet og som kan være enten fast fase-syntesemetoder eller væskefase syntesemetoder. I noen tilfeller er væskefase syntesemetodene foretrukket. Eksempler på slike fremgangsmåter for peptidsyntese omfatter fremgangsmåtene beskrevet i M. Bodansky og M.A. Ondetti, Peptide Synthesis, Interscience, New York (1966); F.M. Finn og K. Hofmann, The Proteins, Bind 2, av H. Nenrath og R.L. Hill, Academic Press, New York (1976); N. Izumiya et al., Peptide Gosei no Kiso to Jikken (Fundamentals and Experiments of Peptide Synthesis), Maruzen (1985); H. Yazima, S.Sakakibara et al., Seikagaku Jikken Koza (Course of Biochemical Experiments), 1, av Biochemical Society of Japan, Tokyo Kagaku Dojin (1977); H. Kimura et al., Zoku Seikagaku Jikken Koza (Course of Biochemical Experiments, second series), 2, av Biochemical Society of Japan, Tokyo Kagaku Dojin (1987); og J.M. Stewart og J.D. Young, Solid Phase Peptide Synthesis, Pierce Chemical Company, Illinois (1984), som beskriver azid fremgangsmåter, kloridfremgangsmåter, syreanhydrid-fremgangsmåter, blandet syreanhydrid-fremgangsmåter, DCC fremgangsmåter, aktiv ester-fremgangsmåter, fremgangsmåter ved anvendelse av Woodward reagens K, karbo-diimidazol-fremgangsmåter, oksidasjon-reduksjonsfremgangs-måter , DCC/HONB fremgangsmåter og fremgangsmåter med anvendelse av BOP reagenser.

Det sykliske peptidet [I] ifølge foreliggende oppfinnelse kan bli fremstilt ved kondensering av et første utgangsmateriale som har en reaktiv karbonylgruppe tilsvarende en av de to typene av fragmentene som blir separert ved en hvilken som helst posisjon av dets peptidbinding med et andre utgangsmateriale som har en reaktiv aminogruppe som tilsvarer det andre fragmentet, for deretter eliminering av beskyttende grupper av den C-terminale a-karbonylgruppen og N-terminale a-aminogruppen til den resulterende forbindelsen samtidig eller trinnvis, for deretter å utføre intramolekylær konden-sasjon av begge ved fremgangsmåter som er kjent innenfor dette området for å oppnå en syklisk forbindelse, og deretter, eliminering av beskyttende grupper ved en fremgangsmåte som er kjent innenfor området, dersom det resulterende kondenserte produktet har noen beskyttende grupper.

Ovennevnte utgangsmaterialer er vanligvis aminosyre og/eller peptidfragmenter som sammen danner det sykliske heksapeptidet med ønsket formel [I] eller et salt derav. De er vanligvis lineære eller forgrenete. Den reaktive karboksylgruppen betyr selve karboksylgruppen eller en aktivert karboksyl-gruppe. Den reaktive aminogruppen betyr selve aminogruppen eller en aktivert aminogruppe. En av de to funksjonelle gruppene som deltar i kondensasjonsreaksjonen blir vanligvis aktivert.

Karboksylgruppen og aminogruppen som ikke deltar i konden-sasjons-reaksjonen blir vanligvis beskyttet før konden-sas j onsreaksj onen.

Beskyttelse av funksjonelle grupper som ikke skal påvirke reaksjonen til utgangsmaterialene, beskyttende grupper og eliminering av beskyttende grupper og aktivering av funksjonelle grupper relatert til reaksjonen kan også fortrinnsvis velges fra grupper eller fremgangsmåter kjent innenfor dette området.

Eksempler på de beskyttende gruppene for aminogrupper av utgangsmaterialene omfatter benzyloksykarbonyl, t-butyloksy-karbonyl, t-amyloksykarbonyl, isobornyloksykarbonyl, 4-metoksybenzyloksykarbonyl, 2-klorobenzyloksykarbonyl, adamantyloksykarbonyl, trifluoracetyl, ftalyl, formyl, 2-nitrofenylsulfenyl, difenylfosfinotioyl og 9-fluorenylmetyloksykarbonyl. De beskyttende gruppene for karboksylgruppene omfatter f.eks. alkylestere (såsom estere av metyl, etyl, propyl, butyl, t-butyl, cyklo-pentyl, cykloheksyl, cyklohep-tyl, cyklooktyl og 2-adamantyl), benzyl estere, 4-nitrobenzyl estere, 4-metoksybenzyl estere, 4-klorbenzyl estere, benzhyd-ryl estere, fenacyl estere, benzyloksykarbonylhydrazid, t-butoksykarbonylhydrazid og tritylhydrazid.

Hydroksylgruppen til serin kan bli beskyttet f.eks. ved forestring eller foretring. Eksempler på grupper egnede for denne forestringen omfatter lavere alifatiske acylgrupper såsom acetyl, arylacylgrupper såsom benzoyl og karbonsyre-avledete grupper såsom benzyloksykarbonyl og etyloksykar-bonyl. Eksempler på grupper egnede for forestring omfatter benzyl, tetrahydropyranyl og t-butyl. Hyroksylgruppen til serin behøver derimot ikke alltid å bli beskyttet.

Eksempler på beskyttende grupper for den fenoliske hydroksylgruppen til tyrosin omfatter benzyl, 2,6-diklor-benzyl, 2-nitrobenzyl, 2-brombenzyloksykarbonyl og t-butyl. Den fenoliske hydroksylgruppen til tyrosin behøver ikke alltid å bli beskyttet.

Metionin kan bli beskyttet i form av sulfoksider.

De beskyttende gruppene for imidazolringen til histidin omfatter p-toluensulfonyl, 4-metoksy-2,3,6-trimetylbenzensulfonyl, 2,4-dinitrofenyl, benzyloksymetyl, t-butoksymetyl, t-butoksykarbonyl, trityl og 9-fluorenylmetyloksykarbonyl. Imidazolringen behøver derimot ikke alltid å bli beskyttet.

Beskyttende grupper for indolringen til tryptofan omfatter formyl, 2,4,6-trimetylbenzensulfonyl, 2,4,6-trimetoksybenzen-sulfonyl, 2,2,2-trikloretyloksykarbonyl og difenylfosfinotioyl. Indolringen behøver derimot ikke alltid å bli beskyttet.

Eksempler på aktiverte karbonylgrupper til utgangsmaterialene omfatter tilsvarende syreanhydrider, azider og aktive estere (estere av alkoholer såsom pentaklor-fenol, 2,4,5-triklor-fenol, 2,4-dinitrofenol, cyano-metyl alkohol, p-nitrofenol, N-hydroksy-5-norbornen-2,3-dikarboksyimid , N-hydroksysuccin-imid, N-hydroksyftalimid og N-hydroksybenzotriazol. Eksempler på de aktiverte aminosyregruppene til råmaterialene omfatter de tilsvarende fosforsyreamidene.

Kondensasjonsreaksjonen kan bli utført i nærvær av oppløs-ningsmiddel(er ). Oppløsningsmidlet(ene) kan bli hensiktsmessig valgt fra oppløsningsmidlene som vanligvis blir anvendt i peptidkondensasjonsreaksjonene. Eksempler på oppløsningsmid-ler omfatter vannfri eller vannholdig dimetylformamid, dimetylsulfoksid, pyridin, kloroform, dioksan, diklormetan, tetrahydrofuran, acetonitril, etylacetat, N-metyl-pyrroiidon og hensiktsmessige blandinger derav.

Reaksjonstemperaturen blir hensiktsmessig valgt fra tempera-turområdet som vanligvis blir anvendt i peptidbånd-dannelses-reaksjoner, vanligvis fra området på omtrent -20 til omtrent 30°C.

Intramolekylære sykliseringsreaksjoner kan bli utført ved en hvilken som helst posisjon av peptidet ved fremgangsmåter som er kjent innenfor området. F.eks. blir den beskyttende gruppen til den C-terminale a-karboksylgruppen til det beskyttede peptidet først eliminert ved kjente fremgangsmåter og deretter blir karboksylgruppen aktivert ved en fremgangsmåte som er kjent innenfor dette området, etterfulgt av eliminering av den beskyttende gruppen til den N-terminale a-aminogruppen ved en fremgangsmåte som er kjent innenfor dette området og intramolekylær syklisering. De beskyttende gruppene til den C-terminale a-karboksylgruppen og den N-terminale a-aminogruppen til det beskyttende peptidet kan deretter bli eliminert, etterfulgt av intramolekylær syklisering ifølge kjente kondensasjonsreaksjoner. I noen tilfeller blir den intramolekylære sykliseringsreaksjonen fortrinnsvis utført i en meget fortynnet tilstand.

Eksempler på fremgangsmåter for eliminering av de beskyttende gruppene omfatter katalytisk reduksjon i nærvær av en katalysator såsom palladium svart eller Pd-karbon i en hydrogenstrøm, syrebehandling med vannfri hydrogen fluorid, metansulfonsyre, trifluormetansulfonsyre, trifluoreddiksyre eller blandinger derav, og reduksjon med natrium i flytende ammoniakk. Elimineringsreaksjonen ved ovennevnte syrebehandling blir vanligvis utført ved en temperatur mellom -20 og 40°C. Ved syrebehandlingen er det effektivt å tilsette et kationoppfangende middel såsom anisol, fenol, tioanisol, m-kresol, p-kresol, dimetylsulfid, 1,4-butanditiol eller 1,2-etanditiol. 2,4-dinitrofenylgruppen anvendt som beskyttende gruppe for imidazolringen til histidin blir eliminert ved tiofenol-behandling. Formylgruppen anvendt som beskyttende gruppe for indolringen av tryptofan kan bli eliminert ved enten (i) alkalibehandling ved anvendelse av fortynnet natrium-hydroksid, fortynnet ammoniakk eller lignende, eller (ii) ovennevnte eliminering ved syrebehandling i nærvær av 1,2-etanditiol, 1,4-butanditiol eller lignende.

Etter fullføring av reaksjonen blir det sykliske peptidet [I] oppnådd på denne måten samlet ved konvensjonelle separerings-og rensningsmetoder til peptider såsom ekstrahering, dis-tribusjon, represipitering, rekrystallisering, kolonnekro-matografi og høy ytelse væskekromatografi.

De sykliske peptidene [I] ifølge foreliggende oppfinnelse kan bli oppnådd ved kjente fremgangsmåter som metallsalter, salter av baser eller basiske forbindelser, uorganiske syreaddisjonssalter, organiske syresalter og lignende, og spesielt som farmasøytisk akseptable syreaddisjonssalter såsom salter av uorganiske syrer, (f.eks. saltsyre, svovel-syre og fosforsyre) eller organiske syrer (f.eks. eddiksyre, propionsyre, sitronsyre, tartarsyre, maleinsyre, oksalsyre og metansulfonsyre).

I foreliggende beskrivelse blir aminosyrene og peptidene indikert ved forkortelsene som vanligvis blir anvendt innenfor dette området eller anvendt i IUPAC-IUB Commission on Biochemical Nomenclature. For eksempel blir følgende forkortelser anvendt:

Beskyttende grupper og reagenser som vanligvis blir anvendt i beskrivelsen er angitt nedenfor med følgende forkortelser:

De sykliske peptidene ifølge foreliggende oppfinnelse har følgende farmakologiske aktivitet. De nye sykliske peptidene [I] ifølge foreliggende oppfinnelse eller farmasøytiske akseptable salter derav har antagonistisk aktivitet på endotelinreseptorer som vist i de eksperimentelle eksemplene beskrevet nedenfor. Visse grupper av sykliske peptider [I] eller farmasøytisk akseptable salter derav har også antagonistisk aktivitet på NK2 reseptorene. De sykliske peptidene [I] eller farmasøytisk akseptable salter derav kan bli anvendt som profylaktiske og terapeutiske medikamenter for hypertensjonen, hjerte eller cerebral sirkulatoriske sykdommer, nyresykdommer, astma og lignende på grunn av at de har den antagonistiske aktiviteten på endotelinreseptorene. De sykliske peptidene [I] eller farmasøytisk akseptabelt salt derav som har antagonistisk aktivitet på NK2 reseptorene kan i tillegg også bli anvendt som anti-inflammatoriske medikamenter og antartritiske midler.

Forskning som nylig er utført på endotelin reseptorer viste at endotelin reseptorene har to subtyper (ET^ og ETg) [f.eks. the Twelfth Medical Chemistry Symposium-First Annual Meeting of the Medical Chemistry Section, Okayama, 4.-6. desember 1991, Summaries of Lectures, s. 82 (Lecture No. P-20); the Third Endothelin Symposium, Tsukuba, 13. og 14. desember, 1991, Summaries of Lectures, (Lecture No. P-05); og Nature, 348, 730-735 (1990)]. Foretrukne nye sykliske peptider [I] ifølge foreliggende oppfinnelse binder seg sterkt ikke bare til ET^, men også til ETg for å virke som antagonister på endotelin reseptorer, som vist i de eksperimentelle eksemplene beskrevet nedenfor. Den bestemte gruppen til de nye sykliske peptidene [I] ifølge foreliggende oppfinnelse har antagonistisk aktivitet på NK2 reseptorer, i tillegg en av tachykinin peptid reseptorene. På grunn av at tachykinin familien, forbindelse P, neurokinin A og neurokinin B er kjent [Y. Yokoto et al., J.Biol.Chem., 264, 17649 (1989); A.D. Hershey et al., Science, 247, 958 (1990 ); Y. Sasai et al., Biochem. Biophys. Res. Commun., 165, 695 (1989); R. Shigemoto et al., J. Biol. Chem., 265, 623 (1990 ); og A. Graham et al., Biochem. Biophys.Res.Commun., 177, 8 (1991)] og NK1, NK2 og NK3 henholdsvis er kjent, som reseptorer korresponderende til ligander derav. Antagonister på NK reseptorer er beskrevet i japansk patent "Unexamined" publikasjonsnr. 2197/1991, 17098/1991 og 141295/1991. Forbindelsene beskrevet deri er forskjellige fra de sykliske heksapeptidene [I] ifølge foreliggende oppfinnelse i struktur .

De nye sykliske peptidene [I] ifølge foreliggende oppfinnelse har den fantastiske virkningen av å undertrykke vasopressor-aktiviteten til endotelin som antagonister på endotelin reseptorer, og noen har også den sterke aktiviteten som antagonister på NH2 reseptorene. På grunn av dette kan de nye sykliske peptidene ifølge foreliggende oppfinnelse eller saltene derav bli anvendt som profylaktiske terapeutiske medikamenter for hypertensjon, hjerte eller cerebral sirkulatoriske sykdommer (f.eks. hjerteinfarkt), nyresykdommer f.eks. akutt nyre-insuffisiens, astma og lignende. De sykliske peptidene med antagonistisk aktivitet på NK2 reseptorene kan i tillegg også bli anvendt som anti-inflammatoriske medikamenter og antartritiske midler.

De sykliske peptidene ifølge foreliggende oppfinnelse når anvendt som ovennevnte profylaktiske og terapeutiske midler kan trykt bli administrert oralt eller parenteralt i form av pulvere, granuler, tabletter, kapsler, injeksjoner, supposi-torer, salver eller preparater med forsinket frigjøring, alene eller i kombinasjoner med farmasøytiske akseptable bærere, eksipienter eller f ortynningsmidler. Peptidene ifølge foreliggende oppfinnelse blir vanligvis administrert parenteralt, f.eks. ved intravenøs eller subkutan injeksjon, intraventrikulær eller intraspinal administrasjon, naso-tracheal administrasjon eller intrarektal administrasjon. I noen tilfeller blir de derimot administrert oralt.

De sykliske peptidene ifølge foreliggende oppfinnelse er generelt stabile forbindelser og kan derfor bli lagret som fysiologiske saltvannsoppløsninger. Det er også mulig å lyofilisere peptidene, lagre dem i ampuller med mannitol eller sorbitol og oppløse dem i en egnet bærer når de skal bli anvendt. De sykliske peptidene ifølge foreliggende oppfinnelse kan bli gitt i deres frie former, eller i form av basesalter eller syreaddisjonssalter derav. Alle de frie sykliske peptidene, basesaltene og sure addisjonssalter derav blir generelt gitt i en riktig dose innenfor området i 1 jig til 100 mg fritt peptid pr. kg vekt. Til tross for at dosen varierer avhengig av sykdomstypen som skal bli behandlet, sykdomssymptomet, objektet som mottar medikamentene og administrasjonsvei, er det fordelaktig når gitt ved injeksjon til voksne pasienter med hypertensjon at de aktive ingredien-sene (peptidene [I] eller farmasøytiske akseptable salter derav) normalt gis i en dose på omtrent 1 pg til 100 mg/kg vekt, mer foretrukket er omtrent 100 jjg til 20 mg/kg vekt, mest foretrukket er 1 mg til 20 mg/kg vekt omtrent 1 til 3 ganger pr. dag. I injeksjon blir peptidene [I] vanligvis gitt intravenøst. Dryppinfusjon er også effektivt. I dette tilfellet er den totale doseringen den samme som med injeksjon.

Når de sykliske peptidene ifølge foreliggende oppfinnelse eller farmasøytiske akseptable salter derav blir anvendt som profylaktiske eller terapeutiske medikamenter, må de forsiktig bli renset slik at de ikke inneholder bakterier og ingen pyrogener.

Foreliggende oppfinnelse vil bli beskrevet i detalj i følgende eksempler og eksperimentelle eksempler, der alle aminosyre-residiene innehar L-formen dersom ikke annet er angitt, når de har D- og L-formene.

I følgende eksempler, SILICAGEL 60F-254 (Merck) ble anvendt som plater som tynnsjiktskromatografi, og kloroform-metanol (19:1) og kloroform-metanol-eddiksyre (9:1:0.5) ble anvendt som utviklingsmidler for henhv. Rf^ og Rf2-

Eksempel 1

Fremstilling av cyklo[-D-Asp-Ala-Asp-D-Leu-Leu-D-Trp-]

(1) Fremstilling av Boc-D-Leu-Leu-OBzl

H-Leu-OBzl-pTos (21.6 g) ble løst opp i DMF (100 ml) og oppløsningen ble avkjølt med is. TEA (7.7 ml) og Boc-D-Leu-ONB [fremstilt fra Boc-D-Leu-OH-H20 (12.5 g), HONB (9.86 g) og DCC (11.4 g) ble tilsatt, etterfulgt av omrøring over natt. Resulterende DCU ble separert ved filtrering og filtratet ble konsentrert for å oppnå en rest. Resten ble løst opp i AcOEt og den resulterende oppløsningen ble vasket med 4$ vandig NaHC03 og 10$ vandig sitronsyre. Etter vasking med vann ble oppløsningen tørket med NagSC^ og konsentrert. Eter ble tilsatt til den resulterende resten for å separere ut et presipitat som ble samlet ved filtrering.

Utbytte: 19.8 g ( 91. 3%), Smeltepunkt: 94-95°C, Rf2: 0.76 [a]D<25> + 3.6° (c = 1.06, i DMF)

Elementanalyse: 024^3^05

Beregnet: C, 66.33; H, 8.81; N, 6.45; Funnet: C, 66,38; H, 8.87; N, 6.53.

(2) Fremstilling av Boc-D-Leu-Leu-OPac

Boc-D-Leu-Leu-OBzl (6.0 g) ble løst opp i metanol (20 ml) og katalytisk redusert i en hydrogendamp ved anvendelse av en 10$ Pd-karbon som en katalysator. Etter at katalysatoren var separert ved filtrering, ble oppløsningen konsentrert for å oppnå en rest. Resten og CS2CO3 (2.1 g) ble løst opp i 90% vandig metanol og oppløsningen ble konsentrert. Den resulterende resten ble løst opp i DMF (60 ml) og fenacylbromid (2.8 g) ble tilsatt, etterfulgt av omrøring over natt. Resulterende TEA og hydroklorid ble separert ved filtrering, og filtratet ble konsentrert for å oppnå en rest. Resten ble løst opp i AcOEt, og den resulterende oppløsningen ble vasket med 4# vandig NaHCC^ og 10$ vandig sitronsyre. Etter vasking med vann ble oppløsningen tørket med Na2S04 og konsentrert. Eter ble tilsatt til den resulterende resten for å separere ut et presipitat som ble samlet ved filtrering.

Utbytte: 5.48 (85.8$), Smeltepunkt: 98-99°C, Rf2: 0.66

[cx]D2<5> - 3.9° (c = 1.09, i DMF)

Elementanalyse: C25H3gN20fj

Beregnet: C, 64.91; H, 8.28; N, 6.06; Funnet: C, 65.21; H, 8.54; N, 6.24.

(3) Fremstilling av Boc-Asp(OBzl)-D-Leu-Leu-OPac

TFA (20 ml) ble tilsatt til Boc-D-Leu-Leu-OPac (1.85 g) for å oppløse dette, etterfulgt av konsentrering. 4% vandig NaHC03 ble tilsatt for å justere pH til 9 - 10, og deretter ble ekstraheringen utført ved anvendelse av AcOEt. Ekstraktet ble tørket med Na2S04, konsentrert og tørket. Det resulterende produktet ble løst opp i DMF (15 ml) og avkjølt med is. Deretter ble TEA (0.56 ml) tilsatt. Boc-Asp(OBzl)-0NB [fremstilt fra Boc-Asp(OBzl)-0H (1.42 g), HONB (0.86 g) og DCC (0.99 g)] ble tilsatt, etterfulgt av omrøring over natt. Det resulterende uoppløselige materialet ble separert ved filtrering, etterfulgt av konsentrering. Resten ble løst opp i AcOEt og oppløsningen ble vasket med vann, 10% vandig sitronsyre og 4% vandig NaHCOs- Etter vasking med vann ble oppløsningen tørket med Na2S04 og konsentrert. Eter ble tilsatt den resulterende resten for å separere ut et presipitat som ble samlet ved filtrering.

Utbytte: 2.31 g (86.5*), Smeltepunkt: 119-121°C, Rf1: 0.57, Rf2: 0.79

[a]D<28> -40.8° (c = 0.93, i DMF)

Elementanalyse: C3(,H4gN30g

Beregnet: C, 64.75; H, 7.40; N, 6.29; Funnet: C, 64.73; H, 7.41; N, 6.45.

(4) Fremstilling av Boc-Ala-Asp(OBzl)-D-Leu-Leu-OPac

TFA (20 ml) ble tilsatt til Boc-Asp(OBzl)-D-Leu-Leu-OPac (2.14 g) for å oppløse dette, etterfulgt av konsentrering. 8-N HCl/dioksan (1.00 ml) ble tilsatt, eter ble tilsatt for å presipitere krystaller. Krystallene ble separert ved filtrering og tørket. Det resulterende produktet ble løst opp i DMF (15 ml) og avkjølt med is. Deretter ble TEA (0.90 ml) tilsatt. Boc-Ala-ONB [fremstilt fra Boc-Ala-OH (0.61 g), HONB (0.63 g) og DCC (0.73 g)] ble tilsatt, etterfulgt av omrøring over natt. Det resulterende uoppløselige materialet ble separert ved filtrering, etterfulgt av konsentrering. Resten ble løst opp i AcOEt og oppløsningen ble vasket med vann, 10% vandig sitronsyre og 4% vandig NaHC03. Etter vasking med vann ble oppløsningen tørket med Na2S04 og konsentrert. Eter ble tilsatt til den resulterende resten for å separere ut et presipitat som ble samlet ved filtrering .

Utbytte: 2.28 g (96.4*), Smeltepunkt: 132-133°C, Rf 1: 0.34, Rf2: 0.66

[a]D<28> - 46.6° (c = 0.76, i DMF)

Elementanalyse: C39H54N4O-L0

Beregnet: C, 64.40; H, 7.37; N, 7.58;

Funnet: C, 63.15; H, 7.44; N, 7.66.

(5) Fremstilling av Boc-D-Asp(OBzl)-Ala-Asp(OBzl)-D-Leu-Leu-OPac

TFA (20 ml) ble tilsatt til Boc-Ala-Asp(OBzl)-D-Leu-Leu-OPac (1.77 g) for å oppløse dette, etterfulgt av konsentrering. 8-N HCl/dioksan (0.75 ml) ble tilsatt og eter ble tilsatt for å presipitere krystallene. Krystallene ble separert ved filtrering og tørket. Det resulterende produktet ble løst opp i DMF (15 ml) og avkjølt med is. Deretter ble TEA (0.67 ml) tilsatt. Boc-D-Asp(OBzl)-0NB [fremstilt fra Boc-D-Asp(0Bzl)-0H (0.85 g), HONB (0.51 g) og DCC (0.60 g)] ble tilsatt, etterfulgt av omrøring over natt. Det resulterende uoppløselige materialet ble separert ved filtrering, etterfulgt av konsentrering. Resten ble løst opp i AcOEt og oppløsningen ble vasket med vann, 10* vandig sitronsyre og 4* vandig NaHC03. Etter vasking med vann ble oppløsningen tørket med Na2S04 og konsentrert. Eter ble tilsatt til den resulterende resten for å separere ut et presipitat som ble samlet ved filtrering.

Utbytte: 2.08 g (91.8*), Smeltepunkt: 92 - 94°C, Rf ±: 0.38, Rf2: 0.70

[a]D2<8> - 21.0° (c = 0.64, i DMF)

Elementanalyse: C50H65<N>5<O>13

Beregnet: C, 63.61; H, 6.94; N, 7.42; Funnet: C, 63.33; H, 6.98; N, 7.52.

(6) Fremstilling av Boc-D-Trp-D-Asp(OBzl)-Ala-Asp(OBzl )-D-Leu-Leu-OPac

TFA (20 ml) ble tilsatt til Boc-D-Asp(OBzl)-Ala-Asp(OBzl)-D-Leu-Leu-OPac (1.60 g) for å oppløse dette, etterfulgt av konsentrering. 8-N HCl/dioksan (0.53 ml) ble tilsatt og eter ble tilsatt for å presipitere krystallene. Krystallene ble separert ved filtrering og tørket. Det resulterende produktet ble løst opp i DMF (15 ml) og avkjølt med is. Deretter ble TEA (0.48 ml) tilsatt. Boc-D-Trp-ONB [fremstilt fra Boc-D-Trp-OH (0.57 g), HONB (0.37 g) og DCC (0.42 g)] ble tilsatt, etterfulgt av omrøring over natt. Det resulterende uoppløselige materialet ble separert ved filtrering, etterfulgt av konsentrering. Resten ble løst opp i AcOEt og oppløsningen ble vasket med vann, 10* vandig sitronsyre og 4* vandig NaHC03. Etter vasking med vann ble oppløsningen tørket med Na2S04 og konsentrert. Eter ble tilsatt til den resulterende resten for å separere ut et presipitat som ble samlet ved filtrering.

Utbytte: 1.61 g (83.8*), Smeltepunkt: 160 - 162°C, Rf 1: 0.35, Rf2: 0.68

[cx]D28 + 17.5° (c = 0.71, i DMF)

Elementanalyse: C61H75N7<O>14

Beregnet: C, 64.82; H, 6.69; N, 8.67; Funnet: C, 64.70; H, 6.72; N, 8.81.

(7) Fremstilling av Boc-D-Trp-D-Asp(OBzl)-Ala-Asp(B0zl)-D-Leu-Leu-OH

Boc-D-Trp-D-Asp(0Bzl)-Ala-Asp(OBzl)-D-Leu-Leu-OPac (1.47 g) ble løst opp i 90* vandig AcOH (20 ml) og Zn pulver (4.26 g) ble tilsatt, etterfulgt av omrøring i 3 timer. Zn pulveret ble separert ved filtrering og filtratet konsentrert. AcOEt ble tilsatt til resten for å oppløse denne og oppløsningen ble vasket med 10* vandig sitronsyre. Etter vasking med vann ble oppløsningen tørket med Na2S04 og konsentrert. Eter ble tilsatt til den resulterende resten for å separere ut et presipitat som ble samlet ved filtrering.

Utbytte: 1.23 g (93.5*), Smeltepunkt: 195 - 196°C, Rf 1: 0.14, Rf2: 0.67

[cx]D2<8> +27.1C (c = 0.65, i DMF)

Elementanalyse: 053^0^7013

Beregnet: C, 62.89; H, 6.87; N, 9.69; Funnet: C, 63.02; H, 6.57; N, 9.68.

(8) Fremstilling av cyklo[-D-Asp-Ala-Asp-D-Leu-Leu-D-Trp-]

Boc-D-Trp-D-Asp(OBzl)-Ala-Asp(OBzl)-D-Leu-Leu-OH (0.51 g) ble løst opp i DCM (20 ml) og oppløsningen ble avkjølt med is. HONB (0.18 g) og DCC (0.21 g) ble tilsatt etterfulgt av omrøring i 3 timer. Deretter ble resulterende DCU separert ved filtrering, etterfulgt av konsentrering og eter ble tilsatt til resten for å separere ut et presipitat som ble samlet ved filtrering. Etanditiol (0.09 ml) og 8-N HC1/- dioksan (20 ml) ble tilsatt under isavkjøling for å oppløse presipitåtet. Den resulterende oppløsningen ble omrørt i 10 minutter og konsentrert. Deretter ble eter tilsatt til resten for å separere ut et presipitat som ble samlet ved filtrering og tørket. Presipitatet ble løst opp i DMF (10 ml) og den resulterende oppløsningen ble dråpevis tilsatt til DMF (90 ml) inneholdende TEA (0.7 ml) i 30 minutter, etterfulgt av omrøring over natt og konsentrering. Acetonitril ble tilsatt til den resulterende resten for å separere ut et presipitat som ble samlet ved filtrering og tørket. Av dette presipitatet ble 89 mg løst opp i DMF (15 ml) og katalytisk redusert i en hydrogendamp ved anvendelse av palladium svart som en katalysator. Katalysatoren ble separert ved filtrering og filtratet ble konsentrert. Den resulterende resten ble løst opp i en liten mengde AcOH og deretter ble vann tilsatt for å utføre lyofiliseringen. Deretter ble det lyof iliserte produktet renset ved vaeskekromatograf i ved anvendelse av en YMC-D-ODS-5 kolonne (2 cm x 25 cm) (Y.M.C.) for å oppnå et ønsket materiale. Utbyttet var 13.6 mg (18.2*).

Anal. for aminosyrer [6-N HC1, 110°C, hydrolyse i 24 timer; figurene i parenteser viser teoretiske verdier.]: Asp 2.00(2); Ala 1.06(1); Leu 2.11(2)

LSIMS (M + H<+>) = 714, (teoretisk verdi) = 714.

Eksempel 2

Fremstilling av cyklo[-D-Asp-Ala-D-Asp-D-Leu-Leu-D-Trp-]

(1) Fremstilling av Boc-D-Asp(OBzl)-D-Leu-Leu-OPac

TFA (20 ml) ble tilsatt til Boc-D-Leu-Leu-OPac (1.85 g) fremstilt i Eksempel 1 (2) for å oppløse dette, etterfulgt av konsentrering. 4* vandig NaHCOs ble tilsatt for å justere pH til 9 - 10 og deretter ble ekstraheringen utført ved anvendelse av AcOEt. Ekstraktet ble tørket med Na2S04 og konsentrert. Det resulterende produktet ble løst opp i DMF (15 ml) og avkjølt med is. Deretter ble TEA (0.56 ml) tilsatt. Boc-D-Asp(0Bzl)-0NB [fremstilt fra Boc-D-Asp(OBzl)-0H (1.42 g), HONB (0.86 g) og DCC (0.99 g)] ble tilsatt, etterfulgt av omrøring over natt. Det resulterende uoppløselige materialet ble separert ved filtrering, etterfulgt av konsentrering. Resten ble løst opp i AcOEt og oppløsningen ble vasket med vann, 10* vandig sitronsyre og 4* vandig NaHC03. Etter vasking med vann ble oppløsningen tørket med Na2S04 og konsentrert. Eter ble tilsatt til den resulterende resten for å separere ut et presipitat som ble samlet ved filtrering.

Utbytte: 2.58 g (96.4*), Smeltepunkt: 113-114°C, Rf : 0.51, Rf2: 0.75

[a]D2<8> + 14.2° (c = 1.23, i DMF)

Elementanalyse: C36H49N3O0,

Beregnet: C, 64.75; H, 7.40; N, 6.29; Funnet: C, 64.78; H, 7.50; N, 6.47.

(2) Fremstilling av Boc-Ala-D-Asp(OBzl)-D-Leu-Leu-OPac

TFA (20 ml) ble tilsatt til Boc-D-Asp(OBzl)-D-Leu-Leu-OPac (2.14 g) for å oppløse dette, etterfulgt av konsentrering. 8N-HCl/dioksan (1.00 ml) ble tilsatt og eter ble tilsatt for å presipitere krystallene. Krystallene ble separert ved filtrering og tørket. Det resulterende produktet ble løst opp i DMF (15 ml) og avkjølt med is. Deretter ble TEA (0.90 ml) tilsatt. Boc-Ala-ONB [fremstilt fra Boc-Ala-OH (0.61 g), HONB (0.63 g) og DCC (0.73 g)] ble tilsatt, etterfulgt av omrøring over natt. Det resulterende uoppløselige materialet ble separert ved filtrering, etterfulgt av konsentrering. Resten ble løst opp i AcOEt, og oppløsningen ble vasket med vann, 10* vandig sitronsyre og 4* vandig NaHC03. Etter vasking med vann ble oppløsningen tørket med Na2S04 og konsentrert. Eter ble tilsatt til den resulterende resten for å separere ut et presipitat som ble samlet ved filtrering.

Utbytte: 2.08 g (88.0*), Smeltepunkt: 167 - 168'C, Rf 1: 0.36, Rf2: 0.67

[oi]D<28> + 5.99° (c = 0.94, i DMF)

Elementanalyse: C39H54N4O-LQ

Beregnet: C, 63.40; H, 7.37; N, 7.58; Funnet: C, 63.32; H, 7.47; N, 7.74.

(3) Fremstilling av Boc-D-Asp(OBzl)-Ala-D-Asp(BOzl)-D-Leu-Leu-OPac

TFA (20 ml) ble tilsatt til Boc-Ala-D-Asp(OBzl)-D-Leu-Leu-OPac (1.77 g) for å oppløse dette, etterfulgt av konsentrering. 8N-HC1/dioksan (0.75 ml) ble tilsatt og eter ble tilsatt for å presipitere krystallene. Krystallene ble separert ved filtrering og tørket. Det resulterende produktet ble løst opp i DMF (15 ml) og avkjølt med is. Deretter ble TEA (0.67 ml) tilsatt. Boc-D-Asp(OBzl )-ONB [fremstilt fra Boc-D-Asp(OBzl )-0H (0.85 g), HONB (0.51 g) og DCC (0.60 g)] ble tilsatt, etterfulgt av omrøring over natt. Det resulterende uoppløselige materialet ble separert ved filtrering, etterfulgt av konsentrering. Resten ble løst opp i AcOEt og oppløsningen ble vasket med vann, 10* vandig sitronsyre og 4* vandig NaHC03. Etter vasking med vann ble oppløsningen tørket med Na2S04 og konsentrert. Eter ble tilsatt til den resulterende resten for å separere ut et presipitat som ble samlet ved filtrering.

Utbytte: 1.719 g (79.0*), Smeltepunkt: 120 - 121°C, Rf ±: 0.37, Rf2: 0.70

[a]D2<8> + 34.2° (c = 0.85, i DMF)

Elementanalyse: C5QH55<N>5<O>13

Beregnet: C, 63.61; H, 6.94; N, 7.42 Funnet: C, 63.70; H, 6.89; N, 7.63.

(4) Fremstilling av Boc-D-Trp-D-Asp(OBzl)-Ala-D-Asp(BOzl)-D-Leu-Leu-OPac

TFA (20 ml) ble tilsatt til Boc-A-Asp(OBzl)-Ala-D-Asp(OBzl)-D-Leu-Leu-OPac (1.60 g) for å oppløse dette, etterfulgt av konsentrering. 8N-HC1/dioksan (0.53 ml) ble tilsatt og eter ble tilsatt for å presipitere krystallene. Krystallene ble separert ved filtrering og tørket. Det resulterende produktet ble løst opp i DMF (15 ml) og avkjølt med is. Deretter ble TEA (0.48 ml) tilsatt. Boc-D-Trp-ONB [fremstilt fra Boc-D-Trp-OH (0.57 g), HONB (0.37 g) og DCC (0.42 g)] ble tilsatt, etterfulgt av omrøring over natt. Det resulterende uoppløselige materialet ble separert ved filtrering og etterfulgt av konsentrering. Resten ble løst opp i AcOEt og oppløsningen ble vasket med vann, 10* vandig sitronsyre og 4* vandig NaHC03- Etter vasking med vann ble oppløsningen tørket med Na2S04 og konsentrert. Eter ble satt til den resulterende resten for å separere ut et presipitat som ble samlet ved filtrering.

Utbytte: 1.62 g (84.3*), Smeltepunkt: 178 - 179°C, Rf ±: 0.37, Rf2: 0.69

[a]D<28> + 41.1° (c = 0.84, i DMF)

Elementanalyse: C51H75<N>7<O>14

Beregnet: C, 64.82; H, 6.69; N, 8.67; Funnet: C, 64.69; H, 6.74; N, 8.88.

(5) Fremstilling av Boc-D-Trp-D-Asp(OBzl)-Ala-D-Asp(BOzl)-D-Leu-Leu-OH

Boc-D-Trp-D-Asp(OBzl)-Ala-D-Asp(BOzl)-D-Leu-Leu-OPac (1.47 g) ble løst opp i 90* vandig AcOH (20 ml) og Zn pulver (4.26 g) ble tilsatt, etterfulgt av omrøring i 3 timer. Zn pulveret ble separert ved filtrering og filtratet ble konsentrert. AcOEt ble tilsatt til resten for å oppløse denne og oppløs-ningen ble vasket med 10* vandig sitronsyre. Etter vasking med vann ble oppløsningen tørket med Na2S04 og konsentrert. Eter ble tilsatt til den resulterende resten for å separere ut et presipitat som ble samlet ved filtrering.

Utbytte: 1.23 g (93.5*), Smeltepunkt: 165 - 166°C, Rf ±: 0.17, Rf2: 0.67

[cx]D<28> + 54.5° (c = 1.05, i DMF)

Elementanalyse: C53H69<N>7<O>13

Beregnet: C, 62.89; H, 6.87; N, 9.69; Funnet: C, 62.59; H, 7.05; N, 9.63.

(6) Fremstilling av cyklo[-D-Asp-Ala-D-Asp-D-Leu-Leu-D-Trp]

Boc-D-Trp-D-Asp(OBzl )-Ala-D-Asp(BOzl)-D-Leu-Leu-OH (0.51 g) ble løst opp i DCM (20 ml), og oppløsningen ble avkjølt med is. HONB (0.18 g) og DCC (0.21 g) ble tilsatt etterfulgt av omrøring i 3 timer. Deretter ble det resulterende DCU separert ved filtrering, etterfulgt av konsentrering og eter ble tilsatt til resten for å separere ut bunnfall som ble samlet ved filtrering. Etanditiol (0.09 ml) og 8N-HCl/dioksan (20 ml) ble tilsatt under isavkjøling for å oppløse bunnfallet. Den resulterende oppløsningen ble omrørt i 10 minutter og konsentrert. Deretter ble eter tilsatt til resten for å separere ut et bunnfall som ble samlet ved filtrering og tørket. Bunnfallet ble løst opp i DMF (10 ml) og den resulterende oppløsningen ble dråpevis tilsatt til DMF (90 ml) inneholdende TEA (0.7 ml) i 30 minutter, etterfulgt av omrøring over natt og konsentrering. Acetonitril ble tilsatt til den resulterende resten for å separere ut et presipitat som ble samlet ved filtrering og tørket. Av dette bunnfallet ble 89 mg løst opp i DMF (15 ml) og katalytisk redusert i en hydrogenstrøm ved anvendelse av palladium svart som en katalysator. Katalysatoren ble separert ved filtrering og filtratet ble konsentrert. Den resulterende resten ble løst opp i en liten mengde av AcOH og deretter ble vann tilsatt for å utføre lyofIliseringen. Tilslutt ble det lyofiliserte produktet renset ved væskekromatografi ved anvendelse av en YMC-D-ODS-5 kolonne (2 cm x 25 cm) (Y.M.C.) for å oppnå et ønsket materiale. Utbyttet var 23.4 mg (15.3*).

Anal. for aminosyrene [6N-HC1, 110°C, hydrolyse i 24 timer; figurene i parentesene viser teoretiske verdier]: Asp 2.00(2); Ala 1.04(1); Leu 2.07(2)

LSIMS (M + H<+>) = 714, (teoretisk verdi) = 714.

Eksempel 3

Fremstilling av cyklo[-D-Asp-Ala-Glu-D-Leu-Leu-D-Trp-]

(1) Fremstilling av Boc-Glu(OBzl)-D-Leu-Leu-OPac

TFA (20 ml) ble tilsatt til Boc-D-Leu-Leu-OPac (1.85 g) fremstilt i Eksempel 1 (2) for å oppløse dette, etterfulgt av konsentrering. 4* vandig NaHC03 ble tilsatt for å justere pH til 9 - 10 og deretter ble ekstraheringen utført ved anvendelse av AcOEt. Ekstraktet ble tørket med Na2S04 og konsentrert. Det resulterende produktet ble løst opp i DMF (15 ml) og avkjølt med is. Deretter ble TEA (0.56 ml) tilsatt. Boc-Glu(0Bzl)-0NB [fremstilt fra Boc-Glu(OBzl)-0H (1.48 g), HONB (0.86 g) og DCC (0.99 g)] ble tilsatt, etterfulgt av omrøring over natt. Det resulterende uoppløselige materialet ble separert ved filtrering og etterfulgt av konsentrering. Resten ble løst opp i AcOEt og oppløsningen ble vasket med vann, 10* vandig sitronsyre og 4* vandig NaHCOs- Etter vasking med vann, ble oppløsningen tørket med Na2S04 og konsentrert. Eter ble tilsatt til den resulterende resten for å separere ut et presipitat som ble samlet ved filtrering.

Utbytte: 2.04 g (74.5*), Smeltepunkt: 118 - 120°C; Rf 1: 0.41, Rf2: 0.71

[a]D2<8> - 23.8° (c = 0.84, i DMF)

Elementanalyse: C37H51N3O0,

Beregnet: C, 65.18; H, 7.54; N, 6.16; Funnet: C, 65.20; H, 7.73; N, 6.34.

(2) Fremstilling av Boc-Ala-Glu(OBzl)-D-Leu-Leu-OPac

TFA (20 ml) ble tilsatt til Boc-Glu(OBzl)-D-Leu-Leu-OPac (1.91 g) for å oppløse dette og etterfulgt av konsentrering.

8N-HC1/dioksan ble tilsatt og eter ble tilsatt for å presipitere krystallene. Krystallene ble separert ved filtrering og tørket. Det resulterende produktet ble løst opp i DMF (15 ml) og avkjølt med is. Deretter ble TEA (0.90 ml) tilsatt. Boc-Ala-ONB [fremstilt fra Boc-Ala-OH (0.53 g), HONB (0.55 g) og DCC (0.64 g)] ble tilsatt, etterfulgt av omrøring over natt. Det resulterende oppløselige materialet ble separert ved filtrering og etterfulgt av konsentrering. Resten ble løst opp i AcOEt og oppløsningen ble vasket med vann, 10* vandig sitronsyre og 4* vandig NaHC03. Etter vasking med vann ble oppløsningen tørket med Na2S04 og konsentrert. Eter ble tilsatt til den resulterende resten for å separere ut et presipitat som ble samlet ved filtrering.

Utbytte: 2.00 g (94.9*), Smeltepunkt: 129 - 130°C, Rf 1: 0.36, Rf2: 0.67

[a]D2<8> -32.9° (c = 1.03, i DMF)

Elementanalyse: C4qH55<N>4<0>10

Beregnet: C, 63.81; H, 7.50; N, 7.44; Funnet: C, 63.70; H, 7.55; N, 7.62.

(3) Fremstilling av Boc-D-Asp(OBzl)-Ala-Glu(BOzl)-D-Leu-Leu-OPac

TEA (20 ml) ble tilsatt til Boc-Ala-Glu(B0zl)-D-Leu-Leu-OPac (1.81 g) for å oppløse dette og etterfulgt av konsentrering. 8N-HCl/dioksan (0.75 ml) ble tilsatt og eter ble tilsatt for å presipitere krystallene. Krystallene ble separert ved filtrering og tørket. Det resulterende produktet ble løst opp i DMF (15 ml) og avkjølt med is. Deretter ble TEA (0.67 ml) tilsatt. Boc-D-Asp(0Bzl)-0NB [fremstilt fra Boc-D-Asp(0Bzl)-0H (0.85 g), HONB (0.51 g) og DCC (0.60 g)] ble tilsatt og etterfulgt av omrøring over natt. Det resulterende uoppløselige materialet ble separert ved filtrering og etterfulgt av konsentrering. Resten ble løst opp i AcOEt og oppløsningen ble vasket med vann, 10* vandig sitronsyre og 4* vandig NaHCC^. Etter vasking med vann ble oppløsningen tørket med Na2S04 og konsentrert. Eter ble tilsatt til den resulterende resten for å separere ut et presipitat som ble samlet ved filtrering.

Utbytte: 2.07 g (90.0*), Smeltepunkt: 149 - 151°C, Rf ±: 0.34, Rf2: 0.69

[a]D<28> + 3.00° (c = 1.14, i DMF)

Elementanalyse: C51H67N5<O>13

Beregnet: C, 63.93; H, 7.05; N, 7.31; Funnet: C, 64.01; H, 7.11; N, 7.48.

(4) Fremstilling av Boc-D-Trp-D-Asp(OBzl)-Ala-Glu(BOzl)-D-Leu-Leu-OPac

TFA (20 ml) ble tilsatt til Boc-D-Asp(OBzl)-Ala-Glu(OBzl)-D-Leu-Leu-OPac (1.63 g) for å oppløse dette og etterfulgt av konsentrering. 8N-HC1/dioksan (0.53 ml) ble tilsatt og eter ble tilsatt for å presipitere krystallene. Krystallene ble separert ved filtrering og tørket. Det resulterende produktet ble løst opp i DMF (15 ml) og avkjølt med is. Deretter ble TEA (0.48 ml) tilsatt. Boc-D-Trp-ONB [fremstilt fra Boc-D-Trp-OH (0.57 g), HONB (0.37 g) og DCC (0.42 g)] ble tilsatt og etterfulgt av omrøring over natt. Det resulterende uoppløselige materialet ble separert ved filtrering og etterfulgt av konsentrering. Resten ble løst opp i AcOEt, og oppløsningen ble vasket med vann, 10* vandig sitronsyre og 4* vandig NaHCOs. Etter vasking med vann ble oppløsningen tørket med Na2S04 og konsentrert. Eter ble tilsatt til den resulterende resten for å separere ut et presipitat som ble samlet ved filtrering.

Utbytte: 1.91 g (98.2*), Smeltepunkt: 172 - 174°C, Rf1: 0.37, Rf2: 0.69

[a]D2<8> + 28.2° (c = 0.68, 1 DMF)

Elementanalyse: C62H77N7O-L4

Beregnet: C, 65.08; H, 6.78; N, 8.57; Funnet: C, 64.84; H, 6.83; N, 8.80.

(5) Fremstilling av Boc-D-Trp-D-Asp(OBzl)-Åla-Glu(BOzl)-D-Leu-Leu-OH

Boc-D-Trp-D-Asp(OBzl)-Ala-Glu(BOzl)-D-Leu-Leu-OPac (1.49 g) ble løst opp i 90* vandig AcOH (20 ml) og Zn pulver (4.26 g) tilsatt og etterfulgt av omrøring i 3 timer. Zn pulveret ble separert ved filtrering og filtratet ble konsentrert. AcOEt ble tilsatt til resten for å oppløse denne og oppløsningen ble vasket med 10* vandig sitronsyre. Etter vasking med vann ble oppløsningen tørket med Na2S04 og konsentrert. Eter ble tilsatt til den resulterende resten for å separere ut et presipitat som ble samlet ved filtrering.

Utbytte: 1.30 g (97.5*), Smeltepunkt: 192-194°C, Rf ±: 0.12, Rf2: 0.66

[a]D2<8> + 37.7 (c = 0.92, i DMF)

Elementanalyse: C54H71<N>7<O>13

Beregnet: C, 63.20; H, 6.97; N, 9.55; Funnet: C, 63.02; H, 6.96; N, 9.63.

(6) Fremstilling av cyklo[-D-Asp-Ala-Glu-D-Leu-Leu-D-Trp-]

Boc-D-Trp-D-Asp(OBzl)-Ala-Glu(BOzl)-D-Leu-Leu-OH (0.51 g) ble løst opp i DCM (20 ml), og oppløsningen ble avkjølt med is. HONB (0.18 g) og DCC (0.21 g) ble tilsatt og etterfulgt av omrøring i 3 timer. Deretter ble det resulterende DCU separert ved filtrering, etterfulgt av konsentrering og eter ble tilsatt til resten for å separere ut et presipitat som ble samlet ved filtrering. Etanditiol (0.09 ml) og 8N-HCl/dioksan (20 ml) ble tilsatt under isavkjøling for å oppløse presipitatet. Den resulterende oppløsningen ble omrørt i 10 minutter og konsentrert. Deretter ble eter tilsatt til resten for å separere ut et bunnfall som ble samlet ved filtrering og tørket. Bunnfallet ble løst opp i DMF (10 ml) og den resulterende oppløsningen ble dråpevis tilsatt til DMF (90 ml) inneholdende TEA (0.7 ml) i 30 minutter og etterfulgt av omrøring over natt og konsentrering. Acetonitril ble tilsatt til den resulterende resten for å separere ut et bunnfall som ble samlet ved filtrering og tørket. Av dette bunnfallet ble 91 mg løst opp i DMF (15 ml) og katalytisk redusert i en hydrogenstrøm ved anvendelse av palladium svart som en katalysator. Katalysatoren ble separert ved filtrering og filtratet ble konsentrert. Den resulterende resten ble løst opp i en liten mengde AcOH og deretter ble vann tilsatt for å utføre lyofilisering. Til slutt ble det lyofiliserte produktet renset ved vaeskekromatografi ved anvendelse av en YMC-D-ODS-5 kolonne (2 cm x 25 cm) (Y.M.C.) for å oppnå et ønsket materiale. Utbyttet var 17.7 mg (24.1*).

Anal. for aminosyrene [6N-HC1, 110°C, hydrolyse i 24 timer; figurene i parentesene viser teoretiske verdier.]: Asp 1.00(1); Glu 1.04(1); Ala 1.05 (1); Leu 2.07(2)

LSIMS (M + H<+>) = 728, (teoretisk verdi = 728.

Eksempel 4

Fremstilling av cyklo[-D-Asp-Ala-D-Glu-D-Leu-Leu-D-Trp-]

(1) Fremstilling av Boc-D-Glu(OBzl)-D-Leu-Leu-OPac

TFA (20 ml) ble tilsatt til Boc-D-Leu-Leu-OPac (1.85 g) fremstilt i Eksempel 1 (2) for å oppløse dette og etterfulgt av konsentrering. 4* vandig NaHC03 ble tilsatt for å justere pH til 9 - 10 og deretter ble ekstraheringen utført ved anvendelse av AcOEt. Ekstraktet ble tørket med NagS04 og konsentrert. Det resulterende produktet ble løst opp i DMF (15 ml) og avkjølt med is. Deretter ble TEA (0.56 ml) tilsatt. Boc-D-Glu(OBzl)-0NB [fremstilt fra Boc-D-Glu(OBzl)-OH (1.48 g), HONB (0.86 g) og DCC (0.99 g)] ble tilsatt og etterfulgt av omrøring over natt. Det resulterende uoppløse-lige materialet ble separert ved filtrering og etterfulgt av konsentrering. Resten ble løst opp i AcOEt og oppløsningen ble vasket med vann, 10* vandig sitronsyre og 4* vandig NaHC03. Etter vasking med vann ble oppløsningen tørket med Na2S04 og konsentrert. Eter ble tilsatt til den resulterende resten for å separere ut et bunnfall som ble samlet ved filtrering.

Utbytte: 2.21 g (81.0*), Smeltepunkt: 136 - 137°C, Rf 1: 0.40, Rf2: 0.68

[a]D<28> - 3.33° (c = 1.02, i DMF)

Elementanalyse: C37H51N3OC)

Beregnet: C, 65.18; H, 7.54; N, 6.16; Funnet: C, 65.23; H, 7.65; N, 6.10.

(2) Fremstilling av Boc-Ala-D-Glu(OBzl)-D-Leu-Leu-OPac

TFA (20 ml) ble tilsatt til Boc-D-Glu(OBzl)-D-Leu-Leu-OPac (1.91 g) for å oppløse dette og etterfulgt av konsentrering. 8N-HC1/dioksan (0.88 ml) ble tilsatt og eter ble tilsatt for å presipitere krystallene. Krystallene ble separert ved filtrering og tørket. Det resulterende produktet ble løst opp i DMF (15 ml) og avkjølt med is. Deretter ble TEA (0.90 ml) tilsatt. Boc-Ala-ONB [fremstilt fra Boc-Ala-OH (0.53 g), HONB (0.55 g) og DCC (0.64 g)] ble tilsatt og etterfulgt av omrøring over natt. Det resulterende uoppløselige materialet ble separert ved filtrering og etterfulgt av konsentrering. Resten ble løst opp i AcOEt og oppløsningen ble vasket med vann, 10* vandig sitronsyre og 4* vandig NaHC03. Etter vasking med vann ble oppløsningen tørket med Na2S04 og konsentrert. Eter ble tilsatt til den resulterende resten for å separere ut et presipitat som ble samlet ved filtrering.

Utbytte: 1.92 g (91.1*), Smeltepunkt: 187 - 188°C, Rf1: 0.36, Rf2: 0.68

[a]D2<8> -15.2° (c = 0.94, i DMF)

Elementanalyse: 04(^5^40^0

Beregnet: C, 63.81; H, 7.50; N, 7.44; Funnet: C, 63.91; H, 7.59; N, 7.74.

(3) Fremstilling av Boc-D-Asp(OBzl)-Ala-D-Glu(BOzl)-D-Leu-Leu- OPac

TFA (20 ml) ble tilsatt til Boc-Ala-D-Glu(OBzl)-D-Leu-Leu-OPac (1.81 g) for å oppløse dette og etterfulgt av konsentrering. 8N-HCl/dioksan (0.75 ml) ble tilsatt og eter ble tilsatt for å presipitere krystallene. Krystallene ble separert ved filtrering og tørket. Det resulterende produktet ble løst opp i DMF (15 ml) og avkjølt med is. Deretter ble TEA (0.67 ml) tilsatt. Boc-D-Asp(OBzl)-0NB [fremstilt fra Boc-D-Asp(0Bzl )-0H (0.85 g), HONB (0.51 g) og DCC (0.60

g)] ble tilsatt og etterfulgt av omrøring over natt. Det resulterende uoppløselige materialet ble separert ved

filtrering og etterfulgt av konsentrering. Resten ble løst opp i AcOEt og oppløsningen ble vasket med vann, 10* vandig sitronsyre og 4* vandig NaHC03- Etter vasking med vann ble oppløsningen tørket med Na2S04 og konsentrert. Eter ble tilsatt til den resulterende resten for å separere ut et presipitat som ble samlet ved filtrering.

Utbytte: 1.83 g (79.6*), Smeltepunkt: 116 - 117°C, Rf 1: 0.35, Rf2: 0.69

[a]D<28> +17.4° (c = 0.80, i DMF)

Elementanalyse: £51^67^013

Beregnet: C, 63.93; H, 7.05; N, 7.31; Funnet: C, 63.77; H, 7.01; N, 7.44.

(4) Fremstilling av Boc-D-Trp-D-Asp(OBzl)-Ala-D-Glu(OBzl)-D-Leu-Leu-OPac

TFA (20 ml) ble tilsatt til Boc-D-Asp(OBzl)-Ala-D-Glu(OBzl)-D-Leu-Leu-OPac (1.63 g) for å oppløse dette og etterfulgt av konsentrering. 8N-HC1/dioksan (0.53 ml) ble tilsatt og eter ble tilsatt for å felle ut krystallene. Krystallene ble separert ved filtrering og tørket. Det resulterende produktet ble løst opp i DMF (15 ml) og avkjølt med is. Deretter ble TEA (0.48 ml) tilsatt. Boc-D-Trp-ONB [fremstilt fra Boc-D-Trp-OH (0.57 g), HONB (0.37 g) og DCC (0.42 g)] ble tilsatt og etterfulgt av omrøring over natt. Det resulterende uoppløselige materialet ble separert ved filtrering og etterfulgt av konsentrering. Resten ble løst opp i AcOEt og oppløsningen ble vasket med vann, 10* vandig sitronsyre og 4* vandig NaHC03. Etter vasking med vann ble oppløsningen tørket med Na2S04 og konsentrert. Eter ble tilsatt til den resulterende resten for å separere ut et bunnfall som ble samlet ved filtrering.

Utbytte: 1.64 g (84.3*), Smeltepunkt: 149 - 150°C, Rf ±: 0.38, Rf2: 0.70

[a]D2<8> +24.2° (c = 0.66, i DMF)

Elementanalyse: C^HyyNyO-^

Beregnet: C, 65.08; H, 6.78; N, 8.57; Funnet: C, 64.91; H, 6.86; N, 8.67.

(5) Fremstilling av Boc-D-TrpD-Asp(OBzl)-Ala-D-Glu(BOzl )-D-Leu-Leu-OH

Boc-D-Trp-D-Asp(OBzl)-Ala-D-Glu(BOzl)-D-Leu-Leu-OPac (1.49 g) ble løst opp i 90* vandig AcOH (20 ml) og Zn pulver (4.26 g) ble tilsatt og etterfulgt av omrøring i 3 timer. Zn pulveret ble separert ved filtrering og filtratet ble konsentrert. AcOEt ble tilsatt til resten for å oppløse denne og oppløs-ningen ble vasket med 10* vandig sitronsyre. Etter vasking med vann ble oppløsningen tørket med Na2S04 og konsentrert. Eter ble tilsatt til den resulterende resten for å separere ut et bunnfall som ble samlet ved filtrering.

Utbytte: 1.24 g (93.0*), Smeltepunkt: 147 - 149°C, Rf 1: 0.18, Rf2: 0.67

[a]D2<8> +44.1° (c = 0.86, i DMF)

Elementanalyse: C54H71<N>7<O>13

Beregnet: C, 63.20; H, 6.97; N, 9.55; Funnet: C, 62.90; H, 7.10; N, 9.48.

(6) Fremstilling av cyklo[-D-Asp-Ala-D-Glu-D-Leu-Leu-D-Trp-]

Boc-D-Trp-D-Asp(OBzl)-Ala-D-Glu(BOzl)-D-Leu-Leu-OH (0.51 g) ble løst opp i DCM (20 ml), og oppløsningen ble avkjølt med is. HONB (0.18 g) og DCC (0.21 g) ble tilsatt og etterfulgt av omrøring i 3 timer. Deretter ble det resulterende DCU separert ved filtrering og etterfulgt av konsentrering og eter ble tilsatt til resten for å separere ut et bunnfall som ble samlet ved filtrering. Etanditiol (0.09 ml) og 8-N HCl/dioksan (20 ml) ble tilsatt under isavkjøling for å oppløse bunnfallet. Den resulterende oppløsningen ble omrørt i 10 minutter og konsentrert. Deretter ble eter tilsatt til resten for å separere ut et bunnfall som ble samlet ved filtrering og tørket. Bunnfallet ble løst opp i DMF (10 ml) og den resulterende oppløsningen ble dråpevis tilsatt til DMF (90 ml) inneholdende TEA (0.7 ml) i 30 minutter, etterfulgt av omrøring over natt og konsentrering. Acetonitril ble tilsatt til den resulterende resten for å separere et bunnfall som ble samlet ved filtrering og tørket. Av dette bunnfallet ble 91 mg løst opp i DMF (15 ml) og katalytisk redusert i en hydrogendamp ved anvendelse av palladium svart som en katalysator. Katalysatoren ble separert ved filtrering og filtratet ble konsentrert. Den resulterende resten ble løst opp i en liten mengde av AcOH og deretter ble vann tilsatt for å utføre lyofiliseringen. Til slutt ble det lyofiliserte produktet renset ved væskekromatografi ved anvendelse av en YMC-ODS-5-kolonne (2 cm x 25 cm) (Y.M.C.) for å oppnå et ønsket materiale. Utbyttet var 14.3 mg (10.8*).

Anal. for aminosyrene [6N-HC1, 110°C, hydrolyse i 24 timer; figurene i parentesene viser teoretiske verdier.]: Asp 1.00(1); Glu 1.04(1); Ala 1.05(1); Leu 2.09(2)

LSIMS (M + H) = 728, (teoretisk verdi) = 728.

Eksempel 5

Fremstilling av cyklo[-D-Asp-Gly-Ala-D-Leu-Leu-D-Trp-]

(1) Fremstilling av Boc-Ala-D-Leu-Leu-OPac

TFA (20 ml) ble tilsatt til Boc-D-Leu-Leu-OPac (6.50 g) fremstilt i Eksempel 1 (2) for å oppløse dette og etterfulgt av konsentrering. 4* vandig NaHCC^ ble tilsatt for å justere pH til 9 - 10 og deretter ble ekstraheringen utført ved anvendelse av AcOEt. Ekstraktet ble tørket med Na2S04 og konsentrert. Det resulterende produktet ble løst opp i DMF (15 ml) og avkjølt med is. Deretter ble TEA (2.07 ml) tilsatt. Boc-Ala-ONB [fremstilt fra Boc-Ala-OH (2.67 g), HONB (2.65 g) og DCC (3.05 g)] ble tilsatt og etterfulgt av omrøring over natt. Det resulterende uoppløselige materialet ble separert ved filtrering og etterfulgt av konsentrering. Resten ble løst opp i AcOEt og oppløsningen ble vasket med vann, 10* vandig sitronsyre og 4* vandig NaHC03- Etter vasking med vann ble oppløsningen tørket med NagS04 og konsentrert. Eter ble tilsatt til den resulterende resten for å separere ut et presipitat som ble samlet ved filtrering .

Utbytte: 6.70 g (90.0*), Smeltepunkt: 121.0 - 122.0°C, Rf 1: 0.56, Rf2: 0.71

[a]D2<5> -12.0° (c = 1.01, i DMF)

Elementanalyse: C28H43N3<O>7

Beregnet: C, 63.02; H, 8.12; N, 7.87; Funnet: C, 63.07; H, 7.90; N, 7.92.

(2) Fremstilling av Boc-Gly-Ala-D-Leu-Leu-OPac

TFA (20 ml) ble tilsatt til Boc-Ala-D-Leu-Leu-OPac (2.20 g) for å oppløse dette og etterfulgt av konsentrering. 8N-HCl/dioksan (1.00 ml) ble tilsatt og eter ble tilsatt for å felle ut krystallene. Krystallene ble separert ved filtrering og tørking. Det resulterende produktet ble løst opp i DMF (15 ml) og avkjølt med is. Deretter ble TEA (0.61 ml) tilsatt. Boc-Gly-ONB [fremstilt fra Boc-Gly-OH (0.72 g), HONB (0.78 g) og DCC (0.89 g)] ble tilsatt og etterfulgt av omrøring over natt. Det resulterende uoppløselige materialet ble separert ved filtrering og etterfulgt av konsentrering. Resten ble løst opp i AcOEt og oppløsningen ble vasket med vann, 10* vandig sitronsyre og 4* vandig NaHCOs- Etter vasking med vann ble oppløsningen tørket med Na2S04 og konsentrert. Eter ble tilsatt til den resulterende resten for å separere ut et bunnfall som ble samlet ved filtrering.

Utbytte: 2.26 g (93.2*), Smeltepunkt: 158.5 - 160.0°C, Rf 1: 0.,30, Rf2: 0.54

[a]D<25> -4.8° (c = 1.02, i DMF)

Elementanalyse: 03(^4^403

Beregnet: C, 61.00; H, 7.85; N, 9.48; Funnet: C, 60.92; H, 7.91; N, 9.66.

(3) Fremstilling av Boc-D-Asp(OBzl)-Gly-Ala-D-Leu-Leu-OPac

TFA (20 ml) ble tilsatt til Boc-D-Asp(OBzl)-Gly-Ala-D-Leu-Leu-OPac (2.23 g) for å oppløse dette og etterfulgt av konsentrering. 8-N HCl/dioksan ble tilsatt og eter ble tilsatt for å felle ut krystallene. Krystallene ble separert ved filtrering og tørket. Det resulterende produktet ble løst opp i DMF (15 ml) og avkjølt med is. Deretter ble TEA (0.55 ml) tilsatt. Boc-D-Asp(OBzl)-0NB [fremstilt fra Boc-D-Asp(0Bzl)-0H (1.22 g), HONB (0.71 g) og DCC (0.82 g)] ble tilsatt og etterfulgt av omrøring over natt. Det resulterende uoppløselige materialet ble separert ved filtrering og etterfulgt av konsentrering. Resten ble løst opp i AcOEt og oppløsningen ble vasket med vann, 10* vandig sitronsyre og 4* vandig NaHC03. Etter vasking med vann ble oppløsningen tørket med Na2S04 og konsentrert. Eter ble tilsatt til den resulterende resten for å separere ut et bunnfall som ble samlet ved filtrering.

Utbytte: 2.62 g (87.3*), Smeltepunkt: 68.0 - 69.5°C,

Rf±: 0.25, Rf2: 0.53

[a]D2<5> +5.4° (c = 1.03, i DMF)

Elementanalyse: £41^<5>7^0^

Beregnet: C, 61.87; H, 7.22; N, 8.80, Funnet: C, 61.78; H, 7.34; N, 8.62.

(4) Fremstilling av Boc-D-Trp-D-asp(OBzl)-Gly-Ala-D-Leu-Leu-Opac

TFA (20 ml) ble tilsatt til Boc-D-Asp(OBzl)-Gly-Ala-D-Leu-Leu-OPac (2.51 g) for å oppløse dette og etterfulgt av konsentrering. 8N-HCl/dioksan (1.00 ml) ble tilsatt og eter ble tilsatt for å presipitere krystallene. Krystallene ble separert ved filtrering og tørket. Det resulterende produktet ble løst opp i DMF (15 ml) og avkjølt med is. Deretter ble TEA (0.46 ml) tilsatt. Boc-D-Trp-ONB [fremstilt fra Boc-D-Trp-OH (0.96 g), HONB (0.59 g) og DCC (0.68 g)] ble tilsatt og etterfulgt av omrøring over natt. Det resulterende uoppløselige materialet ble separert ved filtrering og etterfulgt av konsentrering. Resten ble løst opp i AcOEt og oppløsningen ble vasket med vann, 10* vandig sitronsyre og 4* vandig NaHC03. Etter vasking med vann ble oppløsningen tørket med Na2S04 og konsentrert. Eter ble tilsatt til den resulterende resten for å separere ut et bunnfall som ble samlet ved filtrering.

Utbytte: 1.52 g (49.1*), Smeltepunkt: 109.5 - 110.0°C,

Rf1: 0.27; Rf2: 0.54

[a]D2<5> +9.0° (c = 1.04, i DMF)

Elementanalyse: c52^67^7^12

Beregnet: C, 63.59; H, 6.88; N, 9.98; Funnet: C, 63.72; H, 6.96; N, 10.17.

(5) Fremstilling av Boc-D-Trp-D-Asp(OBzl)-Gly-Ala-D-Leu-Leu-OH

Boc-D-Trp-D-Asp(OBzl)-Gly-Ala-D-Leu-Leu-OPac (0.50 g) ble løst opp i 90* vandig AcOH (20 ml) og Zn pulver (1.66 g) ble tilsatt og etterfulgt av omrøring i 3 timer. Zn pulveret ble separert ved filtrering og filtratet ble konsentrert. AcOEt ble tilsatt til resten for å oppløse denne og oppløsningen ble vasket med 10* vandig sitronsyre. Etter vasking med vann ble oppløsningen tørket med Na2S04 og konsentrert. Eter ble tilsatt til den resulterende resten for å separere ut et bunnfall som ble samlet ved filtrering.

Utbytte: 385 mg (87.5*), Smeltepunkt: 120.0 - 122.CC,

Uf1: 0.02, Rf2: 0.40

[a]D2<5> + 23.0° (c = 1.01, i DMF)

Elementanalyse: ^ 4i^ bl^ 7°ll

Beregnet: C, 61.17; H, 7.12; N, 11.35; Funnet: C, 61.28; H, 7.08; N, 11.11.

(6) Fremstilling av cyklo[D-Asp-Gly-Ala-D-Leu-Leu-D-Trp-]

Boc-D-Trp-D-Asp(OBzl)-Gly-Ala-D-Leu-Leu-OH (0.51 g) ble løst opp i acetonitril (20 ml), og oppløsningen ble avkjølt med is. HONB (0.18 g) og DCC (0.21 g) ble tilsatt og etterfulgt av omrøring i 3 timer. Deretter ble resulterende DCU separert ved filtrering, etterfulgt av konsentrering og eter ble tilsatt til resten for å separere ut et bunnfall som ble samlet ved filtrering. Etanditiol (0.09 ml) og 8N-HCl/dioksan (20 ml) ble tilsatt under isavkjøling for å oppløse bunnfallet. Den resulterende oppløsningen ble omrørt i 10 minutter og konsentrert. Deretter ble eter tilsatt til resten for å separere ut et bunnfall som ble samlet ved filtrering og tørket. Bunnfallet ble løst opp i DMF (10 ml) og den resulterende oppløsningen ble dråpevis tilsatt til DMF (90 ml) inneholdende TEA (0.7 ml) i 30 minutter og etterfulgt av omrøring over natt og konsentrering. Acetonitril ble tilsatt til den resulterende resten for å separere ut et bunnfall som ble samlet ved filtrering og tørket. Av dette bunnfallet ble 51 mg løst opp i DMF (15 ml) og katalytisk redusert i en hydrogendamp ved anvendelse av palladium svart som en katalysator. Katalysatoren ble separert ved filtrering og filtratet ble konsentrert. Den resulterende resten ble løst opp i en liten mengde AcOH og deretter ble vann tilsatt for å utføre lyofiliseringen. Til slutt ble det lyofiliserte produktet renset ved væskekromatografi ved anvendelse av en YMC-D-0DS-5 kolonne (2 cm x 25 cm) (Y.M.C.) for å oppnå et ønsket materiale. Utbyttet var 28.5 mg (19.2*).

Anal. for aminosyrene [6-N HC1, 110°C, hydrolyse i 24 timer; figurene i parentesene viser teoretiske verdier.]: Asp 1.00(1); Gly 1.03(1); Ala 1.04(1); Leu 2.09(2)

LSIMS (M + H<+>) = 656, (teoretisk verdi) = 656

Eksempel 6

Fremstilling av cyklo[-D-Asp-Asp-Ala-D-Leu-Leu-D-Trp-]

(1) Fremstilling av Boc-Asp(OBzl)-Ala-D-Leu-Leu-OPac

TFA (20 ml) ble tilsatt til Boc-Ala-D-Leu-Leu-OPac (2.20 g) fremstilt i Eksempel 5 (1) for oppløse dette og eter ble tilsatt for å felle ut krystallene. Krystallene ble separert ved filtrering og tørket. Det resulterende produktet ble løst opp i DMF (15 ml) og avkjølt med is. Deretter ble TEA (0.61 ml) tilsatt. Boc-Asp(0Bzl)-0NB [fremstilt fra Boc-Asp(0Bzl)-0H (1.33 g), HONB (0.78 g) og DCC (0.89 g)] ble tilsatt og etterfulgt av omrøring over natt. Det resulterende uoppløselige materialet ble separert ved filtrering og etterfulgt av konsentrering. Resten ble løst opp i AcOEt og oppløsningen ble vasket med vann, 10* vandig sitronsyre og 4* vandig NaHC03- Etter vasking med vann ble oppløsningen tørket med Na2S04 og konsentrert. Eter ble satt til den resulterende resten for å separere ut et bunnfall som ble samlet ved filtrering.

Utbytte: 2.87 g (94.2*), Smeltepunkt: 149.5 - 150.5°C,

Rfj: 0.58, Rf2: 0.68

[a]D2<5> - 15.2° (c = 1.02, i DMF)

Elementanalyse: C39H54N4O-L0

Beregnet: C, 63.40; H, 7.37; N, 7.58; Funnet: C, 63.55; H, 7.42; N, 7.68.

(2) Fremstilling av Boc-D-Asp(OBzl)-Asp(0Bzl)-Ala-D-Leu-Leu-OPac

TFA (20 ml) ble tilsatt til Boc-Asp(OBzl)-Ala-D-Leu-Leu-OPac (2.77 g) for å oppløse dette etterfulgt av konsentrasjon. 8N-HCl/dioksan (1.00 ml) ble tilsatt og eter ble tilsatt for å felle ut krystallene. Krystallene ble separert ved filtrering og tørket. Det resulterende produktet ble løst opp i DMF (15 ml) og avkjølt med is. Deretter ble TEA (0.55 ml) tilsatt. Boc-D-Asp(OBzl)-0NB [fremstilt fra Boc-D-Asp(0Bzl)-0H (1.21 g), HONB (0.71 g) og DCC (0.81 g)] ble tilsatt og etterfulgt av omrøring over natt. Det resulterende uoppløselige materialet ble separert ved filtrering og etterfulgt av konsentrering. Resten ble løst opp i AcOEt og oppløsningen ble vasket med vann, 10* vandig sitronsyre og 4* vandig NaHC03- Etter vasking med vann ble oppløsningen tørket med NagS04 og konsentrert. Eter ble tilsatt til den resulterende resten for å separere ut et bunnfall som ble samlet ved filtrering.

Utbytte: 3.08 (87.0*), Smeltepunkt: 72.0 - 74.CC,

Rfx: 0.56; Rf2: 0.64

[oGd<25> -7.0° (c = 1.02, i DMF)

Elementanalyse: C50<H>65<N>5°13

Beregnet: C, 63.61; H, 6.94; N, 7.42; Funnet: C, 63.38; H, 6.88; N, 7.42.

(3) Fremstilling av Boc-D-Trp-D-Asp(OBzl)-Ala-D-Leu-Leu-OPac

TFA (20 ml) ble tilsatt til Boc-D-Asp(OBzl)-Asp(OBzl)-Ala-D-Leu-Leu-OPac (2.94 g) for å oppløse dette og etterfulgt av konsentrering. 8N-HCl/dioksan (1.00 ml) ble tilsatt og eter ble tilsatt for å felle ut krystallene. Krystallene ble felt ut ved filtrering og tørket. Det resulterende produktet ble løst opp i DMF (15 ml) og avkjølt med is. Deretter ble TEA (0.46 ml) tilsatt. Boc-D-Trp-ONB [fremstilt fra Boc-D-Trp-OH (0.96 g), HONB (0.59 g) og DCC (0.68 g)] ble tilsatt og etterfulgt av omrøring over natt. Det resulterende uoppløse-lige materiale ble separert ved filtrering og etterfulgt av konsentrering. Resten ble løst opp i AcOEt og oppløsningen ble vasket med vann, 10* vandig sitronsyre og 4* vandig NaHCC^. Etter vasking med vann ble oppløsningen tørket med NagSC^ og konsentrert. Eter ble tilsatt til den resulterende resten for å separere ut et bunnfall som ble samlet ved filtrering.

Utbytte: 2.61 (77.0*), Smeltepunkt: 190.0 - 192.5°C,

Rf1: 0.49, Rf2: 0.60

[a]D<25> + 4.9° (c = 1.03, i DMF)

Elementanalyse: C61<H>75<N>7°14

Beregnet: C, 64.82; H, 6.69; N, 8.67; Funnet: C, 65.01; H, 6.78; N, 8.87.

(4) Fremstilling av Boc-D-Trp-D-Asp(OBzl)-Asp(OBzl)-Ala-D-Leu-Leu-OH

Boc-D-Trp-D-Asp(OBzl)-Asp(0Bzl)-Ala-D-Leu-Leu-OPac (0.50 g) ble løst opp i 90* vandig AcOH (20 ml) og Zn pulver (1.66 g) ble tilsatt og etterfulgt av omrøring i 3 timer. Zn pulveret ble separert ved filtrering og filtratet ble konsentrert. AcOEt ble tilsatt til resten for å oppløse denne og oppløs-ningen ble vasket med 10* vandig sitronsyre. Etter vasking med vann ble oppløsningen tørket med Na2S04 og konsentrert. Eter ble tilsatt til den resulterende resten for å separere ut et bunnfall som ble samlet ved filtrering.

Utbytte: 363 mg (81.0*), Smeltepunkt: 174.0 - 175.0°C,

Rf1: 0.04, Rf2: 0.50

[a]D25 +12.1° (c = 1.03, i DMF)

Elementanalyse: C53<H>69<N>7°13

Beregnet: C, 62.89; H, 6.87; N, 9.69; Funnet: C, 62.92; H, 6.89; N, 9.78.

(5) Fremstilling av cyklo[-D-Asp-Asp-Ala-D-Leu-Leu-D-Trp-]

Boc-D-Trp-D-Asp(OBzl)-Asp(OBzl)-Ala-D-Leu-Leu-OH (0.51 g) ble løst opp i acetonitril (20 ml) og oppløsningen ble avkjølt med is. HONB (0.16 g) og DCC (0.18 g) ble tilsatt og etterfulgt av omrøring i 3 timer. Deretter ble det resulterende DCU separert ved filtrering og etterfulgt av konsentrering og eter ble tilsatt til resten for å separere ut et bunnfall som ble samlet ved filtrering. Etanditiol (0.09 ml) og 8N-HC1/dioksan (20 ml) ble tilsatt under isavkjøling for å oppløse bunnfallet. Den resulterende oppløsningen ble omrørt i 10 minutter og konsentrert. Deretter ble eter tilsatt til resten for å separere ut et bunnfall som ble samlet ved filtrering og tørket. Bunnfallet ble løst opp i DMF (10 ml) og den resulterende oppløsningen ble dråpevis tilsatt til DMF (90 ml) inneholdende TEA (0.62 ml) i 30 minutter, etterfulgt av omrøring over natt og konsentrering. Acetonitril ble tilsatt til den resulterende resten for å separere ut et bunnfall som ble samlet ved filtrering og tørket. Av dette bunnfallet ble 51 mg løst opp i DMF (15 ml) og katalytisk redusert i en hydrogenstrøm ved anvendelse av palladium svart som en katalysator. Katalysatoren ble separert ved filtrering og filtratet ble konsentrert. Den resulterende resten ble løst opp i en liten mengde AcOH og deretter ble vann tilsatt for å utføre lyofiliseringen. Til slutt ble det lyofiliserte produktet renset ved væskekromatografi ved anvendelse av en YMC-D-ODS-5 kolonne (2 cm x 25 cm) (Y.M.C.) for å oppnå et ønsket materiale. Utbytte var 28.5 mg (17.8*).

Anal. for aminosyrene [6N-HC1, 110°C, hydrolyse i 24 timer; figurene i parenteser viser teoretiske verdier.]: Asp 2.00(2); Ala 1.04(1); Leu 2.10(2)

LSIMS (M + H<+>) = 714, (teoretisk verdi) = 714

Eksempel 7

Fremstilling av cyklo[-D-Asp-Glu-Ala-D-Leu-Leu-D-Trp-]

(1) Fremstilling av Boc-Glu(OBzl)-Ala-D-Leu-Leu-OPac

TFA (20 ml) ble tilsatt til Boc-Ala-D-Leu-Leu-OPac (2.20 g) fremstilt i Eksempel 5(1) for å oppløse dette og etterfulgt av konsentrering. 8N-HC1/dioksan (1.00 ml) ble tilsatt og eter ble tilsatt for å presipitere krystallene. Krystallene ble separert ved filtrering og tørket. Det resulterende produktet ble løst opp i DMF (15 ml) og avkjølt med is. Deretter ble TEA (0.61 ml) tilsatt. Boc-Glu(OBzl)-0NB [fremstilt fra Boc-Glu(OBzl)-0H (1.39 g), HONB (0.78 g) og DCC (0.89 g)] ble tilsatt og etterfulgt av omrøring over natt. Det resulterende uoppløselige materialet ble separert ved filtrering og etterfulgt av konsentrering. Resten ble løst opp i AcOEt og oppløsningen ble vasket med vann, 10* vandig sitronsyre og 4* vandig NaHC03- Etter vasking med vann ble oppløsningen tørket med Na2S04 og konsentrert. Eter ble tilsatt til denne resulterende resten for å separere ut et bunnfall som ble samlet ved filtrering.

Utbytte: 2.86 g (92.4*), Smeltepunkt: 152.5 - 153.5°C,

Rf1: 0.36, Rf2: 0.67

[a]D2<5> + 0.8° (c = 1.04, i DMF)

Elementanalyse: c4oH56<N>4°10

Beregnet: C, 63.81; H, 7.50; N, 7.44; Funnet: C, 63.86; H, 7.53; N, 7.65.

(2) Fremstilling av Boc-D-Asp(OBzl)-Glu(0Bzl)-Ala-D-Leu-Leu-OPac

TFA (20 ml) ble tilsatt til Boc-Glu(OBzl)-Ala-D-Leu-Leu-OPac (2.76 g) for å oppløse dette og etterfulgt av konsentrering. 8N-HCl/dioksan (1.00 ml) ble tilsatt og eter ble tilsatt for å presipitere krystallene. Krystallene ble separert ved filtrering og tørket. Det resulterende produktet ble løst opp i DMF (15 ml) og avkjølt med is. Deretter ble TEA (0.54 ml) tilsatt. Boc-D-Asp(OBzl)-0NB [fremstilt fra Boc-D-Asp(0Bzl)-0H (1.19 g), HONB (0.69 g) og DCC (0.80 g)] ble tilsatt og etterfulgt av omrøring over natt. Det resulterende uoppløselige materialet ble separert ved filtrering og etterfulgt av konsentrering. Resten ble løst opp i AcOEt og oppløsningen ble vasket med vann, 10* vandig sitronsyre og 4* vandig NaHC03- Etter vasking med vann ble oppløsningen tørket med Na2S04 og konsentrert. Eter ble tilsatt til den resulterende resten for å separere ut et bunnfall som ble samlet ved filtrering.

Utbytte: 3.08 g (87.6*), Smeltepunkt: 127.0 - 127.5°C,

Rf]_: 0.51, Rf2: 0.60

[a]D2<5> + 4.5° (c = 1.01, i DMF)

Elementanalyse: C51H67<N>5<O>13

Beregnet: C, 63.93; H, 7.05; N, 7.31; Funnet: C, 64.05; H, 7.08; N, 7.42.

(3) Fremstilling av Boc-D-Trp-D-Asp(OBzl)-Glu(OBzl)-Ala-D-Leu-Leu-OPac

TFA (20 ml) ble tilsatt til Boc-D-Asp(OBzl )-Glu(OBzl)-Ala-D-Leu-Leu-OPac (2.95 g) for å oppløse dette og etterfulgt av konsentrering. 8N-HC1/dioksan (1.00 ml) ble tilsatt og eter ble tilsatt for å felle ut krystallene. Krystallene ble separert ved filtrering og tørket. Det resulterende produktet ble løst opp i DMF (15 ml) og avkjølt med is. Deretter ble TEA (0.46 ml) tilsatt. Boc-D-Trp-ONB [fremstilt fra Boc-D-Trp-OH (0.94 g), HONB (0.58 g) og DCC (0.67 g)] ble tilsatt og etterfulgt av omrøring over natt. Det resulterende uoppløselige materialet ble separert ved filtrering og etterfulgt av konsentrering. Resten ble løst opp i AcOEt og oppløsningen ble vasket med vann, 10* vandig sitronsyre og 4* vandig NaHC03. Etter vasking med vann ble oppløsningen tørket med Na2S04 og konsentrert. Eter ble tilsatt til den resulterende resten for å separere ut et presipitat som ble samlet ved filtrering.

"Utbytte: 2.59 g (75.4*), Smeltepunkt: 182.0 - 183.5°C,

Rf^: 0.51, Rf2: 0.62

[a]D<25> + 12.1° (c = 1.03, i DMF)

Elementanalyse: C62^77<N>7°14

Beregnet: C, 65.08; H, 6.78; N, 8.57; Funnet: C, 65.11; H, 6.76; N, 8.76.

(4) Fremstilling av Boc-D-Trp-D-Asp(OBzl)-Glu(OBzl)-Ala-D-Leu-Leu-OH

Boc-D-Trp-D-Asp(OBzl)-Glu(OBzl)-Ala-D-Leu-Leu-OPac (0.50 g) ble løst opp i 90* vandig AcOH (20 ml) og Zn pulver (1.66 g) ble tilsatt og etterfulgt av omrøring i 3 timer. Zn pulver ble separert ved filtrering og filtratet ble konsentrert. AcOEt ble tilsatt til resten for å oppløse denne og oppløs-ningen ble vasket med 10* vandig sitronsyre. Etter vasking med vann ble oppløsningen tørket med Na2S04 og konsentrert. Eter ble tilsatt til den resulterende resten for å separere ut et bunnfall som ble samlet ved filtrering.

Utbytte: 410 mg (91.4*), Smeltepunkt: 179.5 - 180.5"C,

Rf ±: 0.03, Rf2: 0.53

[cx]D2<5> + 16.1°C (c = 1.02, i DMF)

Elementanalyse: c54<H>7l<N>7°l3

Beregnet: C, 63.20; H, 6.97; N, 9.55; Funnet: C, 63.45; H, 7.00; N, 9.67.

(5) Fremstilling av cyklo[-D-Asp-Glu-Ala-D-Leu-Leu-D-Trp-]

Boc-D-Trp-D-Asp(OBzl)-Glu(0Bzl)-Ala-D-Leu-Leu-OH (0.51 g) ble løst opp i acetonitril (20 ml) og oppløsningen ble avkjølt med is. HONB (0.16 g) og DCC (0.18 g) ble tilsatt og etterfulgt av omrøring i 3 timer. Deretter ble det resulterende DCU separert ved filtrering, etterfulgt av konsentrering og eter ble tilsatt til resten for å separere ut et bunnfall som ble samlet ved filtrering. Etanditiol (0.09 ml) og 8N-HCl/dioksan (20 ml) ble tilsatt under isavkjøling for å løse opp bunnfallet. Den resulterende oppløsningen ble omrørt i 10 minutter og konsentrert. Deretter ble eter tilsatt til resten for å separere ut et bunnfall som ble samlet ved filtrering og tørket. Bunnfallet ble løst opp i DMF (10 ml) og den resulterende oppløsningen ble dråpevis tilsatt til DMF (90 ml) inneholdende TEA (0.62 ml) i 30 minutter og etterfulgt av omrøring over natt og konsentrering. Acetonitril ble tilsatt til den resulterende resten for å separere ut et bunnfall som ble samlet ved filtrering og tørket. Av dette bunnfallet ble 51 mg løst opp i DMF (15 ml) og katalytisk redusert i en hydrogenstrøm ved anvendelse av palladium svart som en katalysator. Katalysatoren ble separert ved filtrering og filtratet ble konsentrert. Den resulterende resten ble løst opp i en liten mengde AcOH og deretter ble vann tilsatt for å utføre lyofiliseringen. Til slutt ble det lyofiliserte produktet renset ved væskekromatografi ved anvendelse av en YMC-D-ODS-5 kolonne (2 cm x 25 cm) (Y.M.C.) for å oppnå et ønsket materiale. Utbyttet var 28.5 mg (20.6*).

Anal. for aminosyrene [6N-HC1, 110°C, hydrolyse i 24 timer; figurene i parentesene viser teoretiske verdier.]: Asp 1.00(1); Glu 1.02(1); Ala 1.05(1); Leu 2.06(2)

LSIMS (M + H<+>) = 728, (teoretisk verdi) = 728

Eksempel 8

Fremstilling av cyklo[-D-Asp-Trp-Asp-D-Leu-Leu-D-Trp-]

(1) Fremstilling av Boc-Trp-Asp(OBzl)-D-Leu-Leu-D-Trp-]

Boc-Asp(OBzl )-D-Leu-Leu-0Pac (2.14 g) fremstilt i Eksempel 1 (3) ble løst opp i 8-N HCl/dioksan (10 ml) og oppløsningen ble omrørt under isavkjøling i 10 minutter og etterfulgt av konsentrering. Eter ble tilsatt for å felle ut krystellene. Krystallene ble separert ved filtrering og tørket. Det resulterende produktet ble løst opp i DMF (15 ml) og avkjølt med is. Deretter ble TEA (0.90 ml) tilsatt. Boc-Trp-ONB [fremstilt fra Boc-Trp-OH (1.17 g), HONB (0.69 g) og DCC (0.79 g)] ble tilsatt og etterfulgt av omrøring over natt. Det resulterende uoppløselige materialet ble separert ved filtrering og etterfulgt av konsentrering. Resten ble løst opp i AcOEt og oppløsningen ble vasket med vann, 10* vandig sitronsyre og 4* vandig NaHC03. Etter vasking med vann, ble oppløsningen tørket med Na2S04 og konsentrert. Eter ble tilsatt til den resulterende resten for å separere ut et bunnfall som ble samlet ved filtrering.

Utbytte: 2.48 g (90.7*), Smeltepunkt: 143 - 144°C;

Rfj: 0.43, Rf2: 0.74

[a]D<28> - 25.8° (c = 0.98, i DMF)

Elementanalyse: 047^9^0^0

Beregnet: C, 66.10; H, 6.96; N, 8.20; Funnet: C, 66.22; H, 7.01; N, 8.49.

(2) Fremstilling av Boc-D-Asp(OBzl)-Trp-Asp(OBzl)-D-Leu-Leu-OPac

Boc-Trp-Asp(OBzl)-D-Leu-Leu-OPac (2.31 g) ble løst opp i 8N-HC1/dioksan (10 ml) og oppløsningen ble omrørt under isav-kjøling i 10 minutter og etterfulgt av konsentrering. Deretter ble eter tilsatt for å felle ut krystallene. Krystallene ble separert ved filtrering og tørket. Det resulterende produktet ble løst opp i DMF (15 ml) og avkjølt med is. Deretter ble TEA (0.75 ml) tilsatt. Boc-D-Asp(0Bzl)-0NB [fremstilt fra Boc-D-Asp(OBzl )-0H (0.96 g), HONB (0.58 g) og DCC (0.67 g)] ble tilsatt og etterfulgt av omrøring over natt. Det resulterende uoppløselige materialet ble separert ved filtrering og etterfulgt av konsentrering. Resten ble løst opp i AcOEt og oppløsningen ble vasket med vann, 10* vandig sitronsyre og 4* vandig NaHCC^. Etter vasking med vann ble oppløsningen tørket med Na2S04 og konsentrert. Eter ble tilsatt til den resulterende resten for å separere ut et bunnfall som ble samlet ved filtrering.

Utbytte: 2.48 g (86.7*), Smeltepunkt: 171 - 172°C,

Rf]_: 0.41, Rf2: 0.72

[a]D2<8> - 16.0° (c = 1.31, i DMF)

Elementanalyse: C58<H>70^6°13

Beregnet: C, 65.77; H, 6.66; N, 7.93; Funnet: C, 65.82; H, 6.91; N, 8.10. (3) Fremstilling av Boc-D-Trp-Asp(OBzl)-D-Leu-Leu-OPac (2.12 g) ble løst opp i 8N-HC1/dioksan (10 ml) og oppløs-ningen ble omrørt under isavkjøling i 10 minutter og etterfulgt av konsentrering. Deretter ble eter tilsatt for å felle ut krystallene. Krystallene ble separert ved filtrering og tørket. Det resulterende produktet ble løst opp i DMF (15 ml) og avkjølt med is. Deretter ble TEA (0.56 ml) tilsatt. Boc-D-Trp-ONB [fremstilt fra Boc-D-Trp-OH (0.67 g), HONB (0.43 g) og DCC (0.49 g)] ble tilsatt og etterfulgt av omrøring over natt. Det resulterende uoppløselige materialet ble separert ved filtrering og etterfulgt av konsentrering. Resten ble løst opp i AcOEt og oppløsningen ble vasket med vann, 10* vandig sitronsyre og 4* vandig NaHC03. Etter vasking med vann ble oppløsningen tørket med Na2S04 og konsentrert. Eter ble tilsatt til den resulterende resten for å separere ut et bunnfall som ble samlet ved filtrering.

Utbytte: 2.10 g (93.1*), Smeltepunkt: 180 - 181°C,

Rfj: 0.33, Rf2: 0.69.

[a]D<28> -4.4° (c = 1.11, i DMF)

Elementanalyse; ^69^80^8<0>14

Beregnet: C, 66.54; H, 6.47; N, 9.00;

Funnet: C, 66.45; H, 6.76; N, 9.10.

(4) Fremstilling av Boc-D-Trp-D-Asp(OBzl)-Trp-Asp(0Bzl)-D-Leu-Leu-OH

Boc-D-Trp-D-Asp(OBzl)-Trp-Asp(OBzl)-D-Leu-Leu-OPac (1.49 g) ble løst opp i 90* vandig AcOH (20 ml) og Zn pulver (3.92 g) ble tilsatt og etterfulgt av omrøring i 3 timer. Zn pulver ble separert ved filtrering og filtratet ble konsentrert. AcOEt ble tilsatt til resten for å oppløse denne og oppløs-ningen ble vasket med 10* vandig sitronsyre. Etter vasking med vann ble oppløsningen tørket med NagS04 og konsentrert. Eter ble tilsatt til den resulterende resten for å separere ut et bunnfall som ble samlet ved filtrering.

Utbytte: 1.30 g (96.1*), Smeltepunkt: 114 - 115°C,

Rf]/. 0.10; Ef2: 0.65

[a]D<28> +1.6° (c = 0.87, i DMF)

Elementanalyse: c61^74-^8^13

Beregnet: C, 64.99; H, 6.62; N, 9.94; Funnet: C, 65.01; H, 6.88; N, 10.02.

(5) Fremstilling av cyklo[-D-Asp-Trp-Asp-D-Leu-Leu-D-Trp-]

Boc-D-Trp-D-Asp(OBzl)-Trp-Asp(OBzl)-D-Leu-Leu-0H (0.56 g) ble løst opp i DCM (20 ml) og oppløsningen ble avkjølt med is. HONB (0.18 g) og DCC (0.21 g) ble tilsatt etterfulgt av omrøring i 3 timer. Deretter ble det resulterende DCU separert ved filtrering og etterfulgt av konsentrering og eter ble tilsatt til resten for å separere ut et bunnfall som ble samlet ved filtrering. 8N-HC1/dioksan (20 ml) ble tilsatt under isavkjøling for å oppløse bunnfallet. Den resulterende oppløsningen ble omrørt i 10 minutter og konsentrert. Deretter ble eter tilsatt til resten for å separere ut et bunnfall som ble samlet ved filtrering og tørket. Bunnfallet ble løst opp i DMF (10 ml) og den resulterende oppløsningen ble dråpevis tilsatt til DMF (90 ml) inneholdende TEA (0.7 ml) i 30 minutter og etterfulgt av omrøring over natt og konsentrering. Acetonitril-eter ble tilsatt til den resulterende resten for å separere ut et bunnfall som ble samlet ved filtrering og tørket. Av dette bunnfallet ble 101 mg løst opp i DMF (15 ml) og katalytisk redusert i en hydrogenstrøm ved anvendelse av palladium svart som en katalysator. Katalysatoren ble separert ved filtrering og filtratet ble konsentrert. Den resulterende resten ble løst opp i en liten mengde AcOH og deretter ble vann tilsatt for å utføre lyofiliseringen. Til slutt ble det lyofiliserte produktet renset ved væskekromatografi ved anvendelse av en YMC-D-ODS-5 kolonne (2 cm x 25 cm) (Y.M.C.) for å oppnå et ønsket materiale. Utbytte var 12.4 mg (52.9*).

Anal. for aminosyrene [6N-HC1, 110°C, hydrolyse i 24 timer;

figurene i parenteser viser teoretiske verdier.]:

Asp 2.00(2); Leu 2.15(2)

LSIMS (M + H<+>) = 829, (teoretisk verdi) = 829.

Eksempel 9

Fremstilling av cyklo[-D-Asp-Pro-Asp-D-Leu-Leu-D-Trp-]

(1) Fremstilling av Boc-Pro-Asp(0Bzl)-D-Leu-Leu-OPac

Boc-Asp(OBzl)-D-Leu-Leu-OPac (2.14 g) fremstilt i Eksempel 1

(3) ble løst opp i 8N-HC1/dioksan (10 ml) og oppløsningen ble

omrørt under isavkjøling i 10 minutter og etterfulgt av konsentrering. Deretter ble eter tilsatt for å felle ut krystallene. Krystallene ble separert ved filtrering og tørket. Det resulterende produktet ble løst opp i DMF (15 ml) og avkjølt med is. Deretter ble TEA (0.90 ml) tilsatt. Boc-Pro-ONB [fremstilt fra Boc-Pro-0H (0.76 g), HONB (0.69 g) og DCC (0.79 g)] ble tilsatt og etterfulgt av omrøring over natt. Det resulterende uoppløselige materialet ble separert ved filtrering og etterfulgt av konsentrering. Resten ble løst opp i AcOEt og oppløsningen ble vasket med vann, 10* vandig sitronsyre og 4* vandig NaHC03. Etter vasking med

vann ble oppløsningen tørket med Na2S04 og konsentrert. Eter ble satt til den resulterende resten for å separere ut et bunnfall som ble samlet ved filtrering.

Utbytte: 2.19 g (89.5*), Smeltepunkt: 135 - 136"C;

Rf1: 0.44, Rf2: 0.74

[a]D2<8> -40.0° (c = 1.02, i DMF)

Elementanalyse: C41H56<N>4<O>10

Beregnet: C, 64.38; H, 7.38; N, 7.32; Funnet: C, 64.40; H, 7.53; N, 7.37.

(2) Fremstilling av Boc-D-Asp(OBzl)-Pro-Asp(OBzl)-D-Leu-Leu-OPac

Boc-Pro-Asp(OBzl )-D-Leu-Leu-OPac (2.07 g) ble løst opp i 8N-HCl/dioksan (10 ml), og oppløsningen ble omrørt under isavkjøling i 10 minutter og etterfulgt av konsentrering. Deretter ble eter tilsatt for å felle ut krystallene. Krystallene ble separert ved filtrering og tørket. Det resulterende produktet ble løst opp i DMF (15 ml) og avkjølt med is. Deretter ble TEA (0.75 ml) tilsatt. Boc-D-Asp(0Bzl)-0NB [fremstilt fra Boc-D-Asp(OBzl )-0H (0.96 g), HONB (0.58 g) og DCC (0.67 g)] ble tilsatt og etterfulgt av omrøring over natt. Det resulterende uoppløselige materialet ble separert ved filtrering og etterfulgt av konsentrering. Resten ble løst opp i AcOEt og oppløsningen ble vasket med vann, 10* vandig sitronsyre og 4* vandig NaHC03. Etter vasking med vann ble oppløsningen tørket med Na2S04 og konsentrert. Eter ble tilsatt til den resulterende resten for å separere ut et bunnfall som ble samlet ved filtrering.

Utbytte: 2.39 g (91.2*), Smeltepunkt: 59 - 61°C,

Rfx: 0.48, Rf2: 0.74

[a]D<28> -14.3° (c= 1.07, i DMF)

Elementanalyse: C52H67<N>6°13

Beregnet: C, 64.38; H, 6.96; N, 7.22; Funnet: C, 64.17; H, 7.18; N, 7.39.

(3) Fremstilling av Boc-D-Trp-D-Asp(OBzl)-Pro-Asp(OBzl )-D-Leu-Leu-OPac

Boc-D-Asp(OBzl )-Pro-Asp(OBzl )-D-Leu-Leu-OPac (1.94 g) ble løst opp i 8-N HCl/dioksan (10 ml) og oppløsningen ble omrørt under isavkjøling i 10 minutter etterfulgt av konsentrering. Deretter ble eter tilsatt for å felle ut krystallene. Krystallene ble separert ved filtrering og tørket. Det resulterende produktet ble løst opp i DMF (15 ml) og avkjølt med is. Deretter ble TEA (0.56 ml) tilsatt. Boc-D-Trp-ONB [fremstilt fra Boc-D-Trp-OH (0.67 g), HONB (0.43 g) og DCC (0.49 g) ble tilsatt og etterfulgt av omrøring over natt. Det resulterende uoppløselige materialet ble separert ved filtrering og etterfulgt av konsentrering. Resten ble løst opp i AcOEt og oppløsningen ble vasket med vann, 10* vandig sitronsyre og 4* vandig NaHC03. Etter vasking med vann ble oppløsningen tørket med Na2S04 og konsentrert. Eter ble tilsatt til den resulterende resten for å separere ut et bunnfall som ble samlet ved filtrering.

Utbytte: 1.82 g (78.7*), Smeltepunkt: 102 - 104°C,

Rf1: 0.34, Rf2: 0.70

[a]D<2>8 +8.3° (c = 1.22, i DMF)

Elementanalyse: C63H77<N>7<O>14

Beregnet: C, 65.44; H, 6.71; N, 8.48; Funnet: C, 65.32; H, 6.86; N, 8.53.

(4) Fremstilling av Boc-D-Trp-D-Asp(OBzl)-Pro-Asp(OBzl)-D-Leu-Leu-OH

Boc-D-Trp-D-Asp(OBzl)-Pro-Asp(OBzl)-D-Leu-Leu-OPac (1.39 g) ble løst opp i 90* vandig AcOH (20 ml) og Zn pulver (3.92 g) ble tilsatt og etterfulgt av omrøring i 3 timer. Zn pulver ble separert ved filtrering og filtratet ble konsentrert. AcOEt ble tilsatt til resten for å oppløse denne og oppløs-ningen ble vasket med 10* vandig sitronsyre. Etter vasking med vann ble oppløsningen tørket med Na2S04 og konsentrert. Eter ble tilsatt til den resulterende resten for å separere ut et bunnfall som ble samlet ved filtrering.

Utbytte: 1.22 g (97.9*); Smeltepunkt: 110 - 112°C,

Rf-p 0.13; Rf2: 0.65

[a]D<28> +14,6° (c = 1.07, i DMF)

Elementanalyse: C55H71N7<O>13

Beregnet: C, 63.63; H, 6.89; N, 9.44; Funnet: C, 63.62; H, 7.17; N, 9.25.

(5) Fremstilling av cyklo[-D-Asp-Pro-Asp-D-Leu-Leu-D-Trp-]

Boc-D-Trp-D-Asp(OBzl)-Pro-Asp(OBzl)-D-Leu-Leu-OH (0.53 g) ble løst opp i DCM (20 ml) og oppløsningen ble avkjølt med is. HONB (0.18 g) og DCC (0.21 g) ble tilsatt og etterfulgt av omrøring i 3 timer. Deretter ble det resterende DCU separert ved filtrering, etterfulgt av konsentrering og eter ble tilsatt til resten for å separere ut et bunnfall som ble samlet ved filtrering. 8N-HC1/dioksan (20 ml) ble tilsatt under isavkjøling for å løse opp bunnfallet. Den resulterende oppløsningen ble omrørt i 10 minutter og konsentrert. Deretter ble eter tilsatt til resten for å separere ut et bunnfall som ble samlet ved filtrering og tørket. Bunnfallet ble løst opp i DMF (10 ml) og den resulterende oppløsningen ble dråpevis tilsatt til DMF (90 ml) inneholdende TEA (0.7 ml ) i 30 minutter og etterfulgt av omrøring over natt og konsentrering. Acetonitril-eter ble tilsatt til den resulterende resten for å separere ut et bunnfall som ble samlet ved filtrering og tørket. Av dette bunnfallet ble 92 mg løst opp i DMF (15 ml) og katalytisk redusert i en hydrogendamp ved anvendelse av palladium svart som en katalysator. Katalysatoren ble separert ved filtrering og filtratet ble konsentrert. Den resulterende resten ble løst opp i en liten mengde AcOH og deretter ble vann tilsatt for å utføre lyofiliseringen. Til slutt ble det lyofiliserte produktet renset ved væskekromatografi ved anvendelse av en YMC-D-ODS-5 kolonne (2 cm x 25 cm) (Y.M.C.) for å oppnå et ønsket materiale. Utbyttet var 15.2 mg (47.4*).

Anal. for aminosyrene [6N-HC1, 110°C, hydrolyse i 24 timer; figurene i parentesene viser teoretiske verdier.]: Asp 2.00(2); Pro 1.03(1); Leu 2.11(2)

LSIMS (M + H<+>) = 740, (teoretisk verdi) = 740.

Eksempel 10

Fremstilling av cyklo[-D-Asp-Asn(CH2Ph)-Asp-D-Leu-Leu-D-Trp-]

(1) Fremstilling av Boc-Asn(CH2Ph )-0Bzl

Boc-Asp-OBzl (1.61 g) oppnådd fra Watanabe Kagaku) ble løst opp i actonitril (50 ml), og HONB (0.98 g) og DCC (1.13 g) ble tilsatt etterfulgt av omrøring i 2 timer under isavkjøl-ing. Det resulterende uoppløselige materialet ble separert ved filtrering og benzylamin (1.09 ml) ble tilsatt, etterfulgt av omrøring over natt. Etter konsentrering av reak-sjonsoppløsningen ble resten løst opp i AcOEt og oppløsningen ble vasket med vann, 10* vandig sitronsyre og 4* vandig NaHC03. Etter vasking med vann ble oppløsningen tørket med Na2S04 og konsentrert. Eter ble tilsatt til den resulterende resten for å separere ut et bunnfall som ble samlet ved filtrering.

Utbytte: 1.90 g (92.5*), Smeltepunkt: 116.5 - 117.0°C,

Rf-!/ 0.56; Rf2: 0.69

[a]D2<5> -11.3° (c = 1.05, i DMF)

Elementanalyse: C23H28N2°5

Beregnet: C, 66.97; H, 6.84; N, 6.79; Funnet: C, 67.25; H, 6.95; N, 7.07.

(2) Fremstilling av Boc-Asn(CH2Ph)-Asp(OBzl)-D-Leu-Leu-OPac

Boc-Asp(OBzl)-D-Leu-Leu-0Pac (2.00 g) ble løst opp i 8N-HCl/dioksan (10 ml) og oppløsningen ble omrørt under isav-kjøling i 10 minutter etterfulgt av konsentrering. Deretter ble eter tilsatt for å felle ut krystallene. Krystallene ble separert ved filtrering og tørket. Det resulterende produktet ble løst opp i DMF (15 ml) og avkjølt med is. Deretter ble TEA (0.44 ml) tilsatt. Boc-Asn(CH2Ph)-0NB [fremstilt ved katalytisk redusering av Boc-Asn(CB^Ph )-0Bzl (1.23 g) fremstilt i (1), i metanol (20 ml) i nærvær av 10* Pd-karbon (20 mg) i en hydrogendamp ved vanlig temperatur og trykk, separering av katalysatoren ved filtrering, etterfulgt av konsentrering, oppløsning av resten i acetonitril og deretter tilsetning av HONB (0.56 g) og DCC (0.65 g) dertil under isavkjøling] ble tilsatt, etterfulgt av omrøring over natt. Det resulterende uoppløselige materialet ble separert ved filtrering og etterfulgt av konsentrering. Resten ble løst opp i AcOEt og oppløsningen ble vasket med vann, 10* vandig sitronsyre og 4* vandig NaHC03- Etter vasking med vann ble oppløsningen tørket med Na2S04 og konsentrert. Eter ble tilsatt til den resulterende resten for å separere ut et presipitat som ble samlet ved filtrering.

Utbytte: 2.26 g (86.7*), Smeltepunkt: 155.0 - 157.0°C,

Rf]_: 0.49; Rf 2: 0.70

[a]D25 -37.1° (c = 1.05, i DMF)

Elementanalyse: C47<H>61<N>5°11

Beregnet: C, 64.74; H, 7.05; N, 8.03; Funnet: C, 64.80; H, 7.19; N, 8.25.

(3) Fremstilling av Boc-D-Asp(OBzl)-Asn(CH2Ph)-Asp(OBzl)-D-Leu-Leu-OPac

Boc-Asn(CH2Ph)-Asp(0Bzl)-D-Leu-Leu-OPac (1.92 g) ble løst opp i 8N-HC1/dioksan (10 ml) og oppløsningen ble omrørt under isavkjøling i 10 minutter etterfulgt av konsentrering. Deretter ble eter tilsatt for å presipitere ut krystallene. Krystallene ble separert ved filtrering og tørket. Det resulterende produktet ble løst opp 1 DMF (15 ml) og avkjølt med is. Deretter ble TEA (0.32 ml) tilsatt. Boc-D-Asp(0Bzl)-0NB [fremstilt fra Boc-D-Asp(OBzl )-0H (0.71 g), HONB (0.41 g) og DCC (0.46 g)] ble tilsatt og etterfulgt av omrøring over natt. Det resulterende uoppløselige materialet ble separert ved filtrering og etterfulgt av konsentrering. Resten ble løst opp i AcOEt og oppløsningen ble vasket med vann, 10* vandig sitronsyre og 4* vandig NaHC03. Etter vasking med vann ble oppløsningen tørket med Na2S04 og konsentrert. Eter ble tilsatt til den resulterende resten for å separere ut et presipitat som ble samlet ved filtrering.

Utbytte: 2.22 g (93.9*), Smeltepunkt: 141.5 - 143.0°C,

Rf1: 0.57; Rf2: 0.75

Md25 -22.7° (c = 1.01, i DMF)

Elementanalyse: c58^72^6^14

Beregnet: C, 64.67; H, 6.74; N, 7.80; Funnet: C, 64.46; H, 6.86; N, 7.91.

(4) Fremstilling av Boc-D-Trp-D-Asp(0Bzl)-Asn(CH2Ph)-Asp(0Bzl)-D-Leu-Leu-0Pac

Boc-D-Asp(0Bzl)-Asn(CH2Ph)-Asp(0Bzl)-D-Leu-Leu-OPac (1.93 g) ble løst opp i 8-N HCl/dioksan (10 ml) og oppløsningen ble omrørt under isavkjøling i 10 minutter og etterfulgt av konsentrering. Deretter ble eter tilsatt for å felle ut krystallene. Krystallene ble separert ved filtrering og tørket. Det resulterende produktet ble løst opp i DMF (15 ml) og avkjølt med is. Deretter ble TEA (0.27 ml) tilsatt. Boc-D-Trp-ONB [fremstilt fra Boc-D-Trp-OH (0.55 g), HONB (0.34 g) og DCC (0.39 g)] ble tilsatt og etterfulgt av omrøring over natt. Det resulterende uoppløselige materialet ble separert ved filtrering og etterfulgt av konsentrering. Resten ble løst opp i AcOEt og oppløsningen ble vasket med vann, 10* vandig sitronsyre og 4* vandig NaHCOs- Etter vasking med vann ble oppløsningen tørket med Na2S04 og konsentrert. Eter ble tilsatt til den resulterende resten for å separere ut et bunnfall som ble samlet ved filtrering.

Utbytte: 1.85 g (81.6*), Smeltepunkt: 149.0 - 151.CC,

Rf]_: 0.47, Rf2: 0.71

[a]D<25> -9.8° (c= 1.03, i DMF)

Elementanalyse: <£>69^82^8^15

Beregnet: C, 65.59; H, 6.54; N, 8.87; Funnet: C, 65.36; H, 6.70; N, 8.89.

(5) Fremstilling av Boc-D-Trp-D-Asp(OBzl)-Asn(CH2Ph)-Asp(0Bzl)-D-Leu-Leu-OH

Boc-D-Trp-D-Asp(OBzl)-Asn(CH2Ph)-Asp(OBzl)-D-Leu-Leu-Opac (500 mg) ble løst opp i 90* vandig AcOH (20 ml), og Zn pulver (1.30 g) ble tilsatt etterfulgt av omrøring i 3 timer. Zn pulveret ble separert ved filtrering og filtratet ble konsentrert. AcOEt ble tilsatt til resten for å oppløse denne og oppløsningen ble vasket med 10* vandig sitronsyre. Etter vasking med vann ble oppløsningen tørket med Na2S04 og konsentrert. Eter ble tilsatt til den resulterende resten for å separere ut et bunnfall som ble samlet ved filtrering.

Utbytte: 436 mg (96.1*), Smeltepunkt: 153.0 - 155.CC,

Rf 1: 0.02; Rf2: 0.67.

[a]D<25> -3.2° (c = 1.02, i DMF)

Elementanalyse: ^ bl^- 7b^ 8^ 14

Beregnet: C, 63.97; H, 6.69; N, 9.78; Funnet: C, 63.85; H, 6.74; N, 9.51

(6) Fremstilling av cyklo[-D-Asp-Asn(CHgPh)-Asp-D-Leu-Leu-D-Trp-]

Boc-D-Trp-D-Asp(OBzl)-Asn(CH2Ph)-Asp(OBzl)-D-Leu-Leu-OH (396 mg) ble løst opp i DCM (20 ml), og oppløsningen ble avkjølt med is. HONB (0.14 g) og DCC (0.16 g) ble tilsatt etterfulgt av omrøring i 3 timer. Deretter ble det resulterende DCU separert ved filtrering og etterfulgt av konsentrering, og eter ble tilsatt til resten for å separere ut et bunnfall som ble samlet ved filtrering. 8N-HC1/dioksan (20 ml) ble tilsatt under isavkjøling for å oppløse bunnfallet. Den resulterende oppløsningen ble omrørt 10 minutter og konsentrert. Deretter ble eter tilsatt til resten for å separere ut et bunnfall som ble samlet ved filtrering og tørket. Bunnfallet ble løst opp i DMF (10 ml) og den resulterende oppløsningen ble dråpevis tilsatt til DMF (90 ml) inneholdende TEA (0.55 ml) i 30 minutter og etterfulgt av omrøring over natt og konsentrering. Acetonitril-eter ble tilsatt til den resulterende resten for å separere ut et bunnfall som ble samlet ved filtrering og tørket. Av dette bunnfallet ble 50 mg løst opp i DMF (15 ml) og katalytisk redusert i en hydrogendamp ved anvendelse av palladium svart som en katalysator. Katalysatoren ble separert ved filtrering og filtratet ble konsentrert. Den resulterende resten ble løst opp i en liten mengde AcOH og deretter ble vann tilsatt for å utføre lyofiliseringen. Til slutt ble de lyofiliserte produkter renset ved væskekromatografi ved anvendelse av YMC-D-ODS-5 kolonne (2 cm x 25 cm) (Y.M.C.) for å oppnå et ønsket materiale. Utbytte var 19.5 mg (23.8*).

Anal. for aminosyrene [6N-HC1, 110°C, hydrolyse i 24 timer; figurene i parentesene viser teoretiske verdier.]: Asp 3.00(3); Leu 2.00(2)

LSIMS (M + H<+>) = 847, (teoretisk verdi) = 847

Eksempel 11

Fremstilling av cyklo[-D-Asp-Asn(CH2CH2Ph)-Asp-D-Leu-Leu-D-Trp-]

(1) Fremstilling av Boc-Asn(CH2CH2Ph)-0Bzl

Boc-Asp-OBzl (1.61 g, oppnådd fra Watanabe Kagaku) ble oppløst i acetonitril (50 ml), og HONB (0.98 g) og DCC (1.13

g) ble tilsatt etterfulgt av omrøring i 2 timer under isavkjøling. Det resulterende uoppløselige materialet ble

separert ved filtrering og 3-fenetylamin (0.79 ml) ble tilsatt og etterfulgt av omrøring over natt. Etter konsentrering av reaksjonsoppløsningen ble resten løst opp i AcOEt og oppløsningen ble vasket med vann, 10* vandig sitronsyre og 4* vandig NaHCOs- Etter vasking med vann ble oppløsningen tørket med Ha2S04 og konsentrert. Eter ble tilsatt til den resulterende resten for å separere ut et bunnfall som ble samlet ved filtrering.

Utbytte: 1.96 g (92.3*), Smeltepunkt: 117.0 - 118.0°C,

Rf1: 0.53, Rf2: 0.68

[a]D2<5> -7.3° (c = 1.00, i DMF)

Elementanalyse: C24H3qN2<0>5

Beregnet: C, 67.59; H, 7.09; N, 6.57; Funnet: C, 67.68; H, 7.15; N, 6.75.

(2) Fremstilling av Boc-Asn(CH2CH2Ph)-Asp(OBzl)-D-Leu-Leu-OPac

Boc-Asp(OBzl )-D-Leu-Leu-OPac (2.00 g) ble løst opp i 8N-HCl/dioksan (10 ml) og oppløsningen ble omrørt under isavkjø-ling i 10 minutter etterfulgt av konsentrasjon. Deretter ble eter tilsatt for å felle ut krystallene. Krystallene ble separert ved filtrering og tørket. Det resulterende produktet ble løst opp i DMF (15 ml) og avkjølt med is. Deretter ble TEA (0.44 ml) tilsatt. Boc-Asn(CH2CH2Ph)-0NB [fremstilt ved katalytisk redusering av Boc-Asn(CH2CH2Ph)-0Bzl (1.28 g) syntetisert i (1), i metanol (20 ml) i nærvær av 10* Pd-karbon (20 mg) i en hydrogenstrøm ved ordinær temperatur og trykk, separering av katalysatoren ved filtrering, etterfulgt av konsentrering, oppløsning av resten i acetonitril og deretter tilsetning av HONB (0.56 g) og DCC (0.65 g) under isavkjøling] ble tilsatt, etterfulgt av omrøring over natt. Det resulterende uoppløselige materialet ble separert ved filtrering og etterfulgt av konsentrering. Resten ble løst opp i AcOEt og oppløsningen ble vasket med vann, 10* vandig sitronsyre og 4* vandig NaHC03- Etter vasking med vann ble oppløsningen tørket med Na2S04 og konsentrert. Eter ble tilsatt til den resulterende resten for å separere ut et bunnfall som ble samlet ved filtrering.

Utbytte. 2.35 g (88.7*), Smeltepunkt: 162.0 - 164.0°C,

Rf1: 0.59, Rf2: 0.65

[a]D2<5> -36.7° (c = 1.03, i DMF)

Elementanalyse: ^gH^NgO;!.].

Beregnet: C, 65.07; H, 7.17; N, 7.90; Funnet: C, 65.15; H, 7.20; N, 8.08.

(3) Fremstilling av Boc-D-Asp(OBzl)-Asn(CH2CH2Ph)-Asp(0Bzl )-D-Leu-Leu-OPac

Boc-Asn(CH2CH2Ph)-Asp(OBzl)-D-Leu-Leu-OPac (1.95 g) ble løst opp i 8-N HCl/dioksan (10 ml) og oppløsningen ble omrørt under isavkjøling i 10 minutter og etterfulgt av konsentrering. Deretter ble eter tilsatt for å presipitere krystallene. Krystallene ble separert ved filtrering og deretter tørket. Det resulterende produktet ble løst opp i DMF (15 ml) og avkjølt med is. Deretter ble TEA (0.32 ml) tilsatt. Boc-D-Asp(OBzl)-0NB [fremstilt fra Boc-D-Asp(OBzl )-OH (0.71 g), HONB (0.41 g) og DCC (0.46 g)] ble tilsatt og etterfulgt av omrøring over natt. Det resulterende uoppløse-lige materialet ble separert ved filtrering og etterfulgt av konsentrering. Resten ble løst opp i AcOEt og oppløsningen ble vasket med vann, 10* vandig sitronsyre og 4* vandig NaHC03. Etter vasking med vann ble oppløsningen tørket med Na2S04 og konsentrert. Eter ble tilsatt til den resulterende resten for å separere ut et bunnfall som ble samlet ved filtrering.

Utbytte: 2.24 g (93.5*), Smeltepunkt: 173.0 - 175.0°C,

Rf1: 0.39, Rf2: 0.66

[a]D2<5> -21.6° (c = 1.02, i DMF)

Elementanalyse: C^^ Ejil^^ Oi^

Beregnet: C, 64.94; H, 6.83; N, 7.70; Funnet: C, 64.82; H, 6.93; N, 7.85

(4) Fremstilling av Boc-D-Trp-D-Asp(OBzl)-Asn(CH2CH2Ph)-Asp(0Bzl)-D-Leu-Leu-OPac

Boc-D-Asp(OBzl )-Asn(CH2CH2Ph)-Asp(OBzl)-D-Leu-Leu-OPac (1.95

g) ble løst opp i 8-N HCl/dioksan (10 ml) og oppløsningen ble omrørt under isavkjøling i 10 minutter etterfulgt av konsentrering. Deretter ble eter tilsatt for å felle ut krystallene. Krystallene ble separert ved filtrering og deretter tørket. Det resulterende produktet ble løst opp i DMF (15 ml) og avkjølt med is. Deretter ble TEA (0.27 ml) tilsatt. Boc-D-Trp-ONB [fremstilt fra Boc-D-Trp-0H (0.55 g), HONB (0.34 g) og DCC (0.39 g) ble tilsatt og etterfulgt av omrøring over natt. Det resulterende uoppløselige materialet ble separert ved filtrering og etterfulgt av konsentrering. Resten ble løst opp i AcOEt og oppløsningen ble vasket med vann, 10* vandig sitronsyre og 4* vandig NaHC03. Etter vasking med vann ble oppløsningen tørket med Na2S04 og konsentrert. Eter ble tilsatt til den resulterende resten for å separere ut et presipitat som ble samlet ved filtrering .

Utbytte: 2.07 g (90.5*), Smeltepunkt: 139.5 - 141.0°C,

Rfx: 0.24, Rf2: 0.65

[cx]D<25> -7.6° (c = 1.00, i DMF)

Elementanalyse: C70H34<N>8<O>15

Beregnet: C, 65.81; H, 6.63; N, 8.77; Funnet: C, 65.58; H, 6.71; N, 8.94

(5) Fremstilling av Boc-D-Trp-D-Asp(OBzl)-Asn(CH2CH2Ph)-Asp(0Bzl)-D-Leu-Leu-OH

Boc-D-Trp-D-Asp(OBzl)-Asn(CH2CH2Ph)-Asp(OBzl)-D-Leu-Leu-OPac (500 mg) ble løst opp i 90* vandig AcOH (20 ml) og Zn pulver (1.28 g) ble tilsatt etterfulgt av omrøring i 3 timer. Zn pulveret ble separert ved filtrering og filtratet ble konsentrert. AcOEt ble tilsatt til resten for å oppløse denne og oppløsningen ble vasket med 10* vandig sitronsyre. Etter vasking med vann ble oppløsningen tørket med Na2S04 og konsentrert. Eter ble tilsatt til den resulterende resten for å separere ut et bunnfall som ble samlet ved filtrering.

Utbytte: 441 mg (97.3*), Smeltepunkt: 170.0 - 172.CC,

Rfj: 0.03, Rf2: 0.67

[a]D2<5> -1.8° (c = 1.03, i DMF)

Elementanalyse: C^HygNgO-^

Beregnet: C, 64.23; H, 6.78; N, 9.67; Funnet: C, 64.08; H, 6.86; N, 9.55.

(6) Fremstilling av cyklo[-D-Asp-Asn(CH2CH2Ph)-Asp-D-Leu-Leu-D-Trp-]

Boc-D-Trp-D-Asp( OBzl ) -Asn ( CH2CH2Ph ) -Asp( OBzl )-D-Leu-Leu-OH (401 mg) ble løst opp i DCM (20 ml) og oppløsningen ble avkjølt med is. HONB (0.14 g) og DCC (0.16 g) ble tilsatt etterfulgt av omrøring i 3 timer. Deretter ble det resulterende DCU separert ved filtrering, etterfulgt av konsentrering og eter ble tilsatt til resten for å separere ut et bunnfall som ble samlet ved filtrering. 8N-HC1/dioksan (20 ml) ble tilsatt under isavkjøling for å løse opp bunnfallet. Den resulterende oppløsningen ble omrørt i 10 minutter og konsentrert. Deretter ble eter tilsatt til resten for å separere ut et bunnfall som ble samlet ved filtrering og tørket. Bunnfallet ble løst opp i DMF (10 ml) og den resulterende oppløsningen ble dråpevis tilsatt til DMF (90 ml) inneholdende TEA (0.55 ml) i 30 minutter og etterfulgt av omrøring over natt og konsentrering. Acetonitril-eter ble tilsatt til den resulterende resten for å separere ut et bunnfall som ble samlet ved filtrering og tørket. Av dette bunnfallet ble 50 mg løst opp i DMF (15 ml) og katalytisk redusert i en hydrogenstrøm ved anvendelse av palladium svart som en katalysator. Katalysatoren ble separert ved filtrering og filtratet ble konsentrert. Den resulterende resten ble løst opp i en liten mengde AcOH og deretter ble vann tilsatt for å utføre lyofiliseringen. Til slutt ble det lyofiliserte produktet renset ved væskekromatografi ved anvendelse av en YMC-D-ODS-5 kolonne (2 cm x 25 cm) (Y.M.C.) for å oppnå et ønsket materiale. Utbyttet var 20.5 mg (24.1*).

Anal. for aminosyrene [6N-HC1, 110°C, hydrolyse i 24 timer; figurene i parentesene viser teoretiske verdier.]: Asp 3.00(3); Leu 2.04(2)

LSIMS (M + H<+>) = 861, (teoretisk verdi) = 861.

Eksempel 12

Fremstilling av cyklo[-D-Asp-Asn(CH2CH2-Ind)-Asp-D-Leu-Leu-D-Trp-]

(1) Fremstilling av Boc-Asn(CH2CH2-Ind)-0Bzl

Boc-Asp-OBzl (1.61 g, oppnådd fra Watanabe Kagaku) ble løst opp i acetonitril (50 ml), og HONB (0.98 g) og DCC (1.13 g) ble tilsatt, etterfulgt av omrøring i 2 timer under isav-kjøling. Det resulterende uoppløselige materialet ble separert ved filtrering og DMF (20 ml) inneholdende tryptamin hydroklorid (0.98 ml) og TEA (1.04 ml) ble tilsatt etterfulgt av omrøring over natt. Etter konsentrering av reaksjonsopp-løsningen ble resten løst opp i AcOEt og oppløsningen ble vasket med vann, 10* vandig sitronsyre og 4* vandig NaHC03. Etter vasking med vann ble oppløsningen tørket med Na2S04 og konsentrert. Eter ble tilsatt til den resulterende resten for å oppnå et ønsket produkt som et lysegult glassaktig materiale.

Utbytte: 1.95 g (84.1*), Rf1: 0.42, Rf2: 0.67

LSIMS (M + H<+>) = 466, (teoretisk verdi) = 466

(2) Fremstilling av Boc-Asn(CH2CH2-Ind)-Asp(OBzl)-D-Leu-Leu-OPac

Boc-Asp(OBzl)-D-Leu-Leu-OPac (2.00 g) ble løst opp i 8N-HCl/dioksan (10 ml), og oppløsningen ble omrørt under iskjøling i 10 minutter og etterfulgt av konsentrering. Deretter ble eter tilsatt for å felle ut krystallene. Krystallene ble separert ved filtrering og deretter tørket. Det resulterende produktet ble løst opp i DMF (15 ml) og avkjølt med is. Deretter ble TEA (0.44 ml) tilsatt. Boc-Asn(CH2CH2-Ind )-0NB [fremstilt ved katalytisk redusering av Boc-Asn(CH2CH2-Ind)-0Bzl (1.35 g) syntetisert i (1) i metanol (20 ml) i nærvær av 10* Pd-karbon (20 mg) i en hydrogenstrøm ved vanlig temperatur og trykk, separering av katalysatoren ved filtrering, etterfulgt av konsentrering, oppløsning av resten i acetonitril og deretter tilsetning av HONB (0.56 g) og DCC (0.65 g) under isavkjøling] ble tilsatt, etterfulgt av omrøring over natt. Det resulterende uoppløselige materialet ble separert ved filtrering og etterfulgt av konsentrering. Resten ble løst opp i AcOEt og oppløsningen ble vasket med vann, 10* vandig sitronsyre og 4* vandig NaHCOQ. Etter vasking med vann ble oppløsningen tørket med NagSC^ og konsentrert. Eter ble tilsatt til den resulterende resten for å separere ut bunnfall som ble samlet ved filtrering.

Utbytte: 2.16 g (78.1*), Smeltepunkt: 141.0 - 143.0°C,

Rf1: 0.46, Rf2: 0.73

[a]D2<5> -35.8° (c = 1.06, i DMF)

Elementanalyse: <£>50^64^6^11

Beregnet: C, 64.92; H, 6.97; N, 9.08; Funnet: C, 64.63; H, 7.11; N, 8.96.

(3) Fremstilling av Boc-D-Asp(OBzl)-Asn(CH2CH2-Ind)-Asp(0Bzl )-D-Leu-Leu-Opac

Boc-Asn(CH2CH2-Ind)-Asp(0Bzl)-D-Leu-Leu-OPac (2.00 g) ble løst opp i 8N-HCl/dioksan (10 ml) og oppløsningen ble omrørt under isavkjøling i 10 minutter og etterfulgt av konsentrering. Deretter ble eter tilsatt for å felle ut krystallene. Krystallene ble separert ved filtrering og deretter tørket. Det resulterende produktet ble løst opp i DMF (15 ml) og avkjølt med is. Deretter ble TEA (0.32 ml) tilsatt. Boc-D-Asp(0Bzl)-0NB [fremstilt fra Boc-D-Asp(OBzl)-0H (0.71 g), HONB (0.41 g) og DCC (0.46 g)] ble tilsatt og etterfulgt av omrøring over natt. Det resulterende uoppløselige materialet ble separert ved filtrering og etterfulgt av konsentrering. Resten ble løst opp i AcOEt og oppløsningen ble vasket med vann, 10* vandig sitronsyre og 4* vandig NaHC03. Etter vasking med vann ble oppløsningen tørket med Na2S04 og konsentrert. Eter ble tilsatt til den resulterende resten for å separere ut et bunnfall som ble samlet ved filtrering.

Utbytte: 2.12 g (85.4*), Smeltepunkt: 112.5 - 114.0°C,

Rf1: 0.50, Rf2: 0.70

[<q>]d25 -22.0° (c = 1.02, 1 DMF)

Elementanalyse: C61^75-^7^14

Beregnet: C, 64.82; H, 6.69; N, 8.67; Funnet: C, 64.66; H, 6.86; N, 8.55.

(4) Fremstilling av Boc-D-Trp-D-Asp(OBzl)-Asn(CH2CH2-Ind)-Asp(OBzl)-D-Leu-Leu-OPac

Boc-D-Asp(OBzl )-Asn(CH2CH2-Ind)-Asp(OBzl)-D-Leu-Leu-OPac (2.00 g) ble løst opp i 8-N HCl/dioksan (10 ml) og oppløs-ningen ble omrørt under isavkjøling i 10 minutter etterfulgt av konsentrering. Deretter ble eter tilsatt for å felle ut krystallene. Krystallene ble separert ved filtrering og deretter tørket. Det resulterende produktet ble løst opp i DMF (15 ml) og avkjølt med is. Deretter ble TEA (0.27 ml) tilsatt. Boc-D-Trp-ONB [fremstilt fra Boc-D-Trp-OH (0.55 g), HONB (0.34 g) og DCC (0.39 g)] ble tilsatt og etterfulgt av omrøring over natt. Det resulterende uoppløselige materialet ble separert ved filtrering og etterfulgt av konsentrering. Resten ble løst opp i AcOEt og oppløsningen ble vasket med vann, 10* vandig sitronsyre og 4* vandig NaHC03. Etter vasking med vann ble oppløsningen tørket med Na2S04 og konsentrert. Eter ble tilsatt til den resulterende resten for å separere ut et bunnfall som ble samlet ved filtrering.

Utbytte: 2.11 g (89.5*), Smeltepunkt: 113.0 - 115.CC,

Rf]_: 0.42, Rf2: 0.68

[a]D<25> -9.2° (c = 1.04, i DMF)

Elementanalyse: <C>72<H>85^9°15

Beregnet: C, 65.69; H, 6.51; N, 9.58; Funnet: C, 65.60; H, 6.60; N, 9.49.

(5) Fremstilling av Boc-D-Trp-D-Asp(OBzl)-Asn(CH2CH2-Ind)-Asp(0Bzl)-D-Leu-Leu-0H

Boc-D-Trp-D-Asp( OBzl ) -Asn( CH2CH2-Ind )-Asp(OBzl )-D-Leu-Leu-OPac (500 mg) ble løst opp i 90* vandig AcOH (20 ml) og Zn pulver (1.26 g) ble tilsatt og etterfulgt av omrøring i 3 timer. Zn pulveret ble separert ved filtrering og filtratet ble konsentrert. AcOEt ble tilsatt til resten for å oppløse denne og oppløsningen ble vasket med 10* vandig sitronsyre. Etter vasking med vann ble oppløsningen tørket med Na2S04 og konsentrert. Eter ble tilsatt til den resulterende resten for å separere ut et bunnfall som ble samlet ved filtrering.

Utbytte: 426 mg (92.5*), Smeltepunkt: 115.0 - 117.5"C,

Ef<2>: 0.01, Rf2: 0.65

[a]D2<5> -1.4° (c = 1.06, i DMF)

Elementanalyse: C^HygNgO^

Beregnet: C, 64.15; H, 6.64; N, 10.52 Funnet: C, 64.07; H, 6.74; N, 10.38

(6) Fremstilling av cyklo[-D-Asp-Asn(CH2CH2-Ind)-Asp-D-Leu-Leu-D-Trp-]

Boc-D-Trp-D-Asp(OBzl)-Asn(CH2CH2-Ind)-Asp(0Bzl)-D-Leu-Leu-OH (386 mg) ble løst opp i DCM (20 ml) og oppløsningen ble avkjølt med is. HONB (0.14 g) og DCC (0.16 g) ble tilsatt og etterfulgt av omrøring i 3 timer. Deretter ble det resulterende DCU separert ved filtrering og etterfulgt av konsentrering, og eter ble tilsatt til resten for å separere ut et bunnfall som ble samlet ved filtrering. 8N-HC1/dioksan (20 ml) ble tilsatt under isavkjøling for å oppløse bunnfallet. Den resulterende oppløsningen ble omrørt i 10 minutter og konsentrert. Deretter ble eter tilsatt til resten for å separere ut et bunnfall som ble samlet ved filtrering og tørket. Bunnfallet ble løst opp i DMF (10 ml) og den resulterende oppløsningen ble dråpevis tilsatt til DMF (90 ml) inneholdende TEA (0.54 ml) i 30 minutter og etterfulgt av omrøring over natt og konsentrering. Acetonitril-eter ble tilsatt til den resulterende resten for å separere ut et bunnfall som ble samlet ved filtrering og tørket. Av dette bunnfallet ble 40 mg løst opp i DMF (15 ml) og katalytisk redusert i en hydrogenstrøm ved anvendelse av palladium svart som en katalysator. Katalysatoren ble separert ved filtrering og deretter ble filtratet konsentrert. Den resulterende resten ble løst opp i en liten mengde AcOH og deretter ble vann tilsatt for å utføre lyofiliseringen. Det lyofiliserte produktet ble til slutt renset ved væskekromatografi ved anvendelse av en YMC-D-ODS-5 kolonne (2 cm x 25 cm) (Y.M.C.) for å oppnå et ønsket materiale. Utbytte var 19.6 mg (19.4*).

Anal. for aminosyrene [6N-HC1, 110°C, hydrolyse i 24 timer; figurene i parentesene viser teoretiske verdier.]: Asp 3.00(3); Leu 2.35(2)

LSIMS (M + H<+>) = 900, (teoretisk verdi) = 900.

Eksempel 13

Fremstilling av cyklo[-D-Asp-Hyp(Bzl)-Asp-D-Leu-Leu-D-Trp-]

(1) Fremstilling av Boc-Hyp(Bzl)-Asp(OBzl)-D-Leu-Leu-OPac

Boc-Asp(OBzl )-D-Leu-Leu-OPac (2.34 g) ble løst opp i dioksan (1.0 ml) og oppløsningen ble avkjølt med is. 10N-HC1/dioksan (5.0 ml) ble tilsatt og etterfulgt av omrøring i 30 minutter. Oppløsningsmidlet ble fjernet ved destillering ved romtemperatur og eter ble tilsatt til resten for å separere ut et bunnfall som ble samlet ved filtrering og tørket under redusert trykk. Det resulterende produktet ble løst opp i DMF (15 ml) og nøytralisert med TEA med omrøring under isavkjøling. Boc-Hys(Bzl)-0NB fremstilt fra Boc-Hyp(Bzl)-0H (1.57 g), HONB (1.16 g) og DCC (1.55 g) ble tilsatt og omrørt over natt ved romtemperatur. Det resulterende uoppløselige materialet ble fjernet ved filtrering og filtratet ble konsentrert. Resten ble løst opp i AcOEt og oppløsningen ble vasket med 10* vandig sitronsyre, 4* vandig NaHC03 og en mettet vandig oppløsning av natriumklorid. Etter tørking med Na2S04 ble oppløsningsmidlet fjernet ved destillering og eter ble tilsatt til resten for å separere ut et bunnfall som ble samlet ved filtrering. Bunnfallet ble omkrystallisert fra AcOEt-petroleum.

Utbytte: 4.01 g (92.0*), Smeltepunkt: 73.0 - 74.0°C,

Rfj: 0.44, Rf2: 0.72

[a]D2<5> -33.3° (c = 1.00, i DMF)

Elementanalyse: C48<E>62<N>4°11

Beregnet: C, 66.19; H, 7.17; N, 6.43; Funnet: C, 66.19; H, 7.33; N, 6.68.

(2) Fremstilling av Boc-D-Asp(OBzl)-Hyp(Bzl)-Asp(0Bzl)-D-Leu-Leu-OPac

Boc-Hyp(Bzl )-Asp(0Bzl)-D-Leu-Leu-OPac (3.49 g) ble løst opp i dioksan (1.0 ml) og oppløsningen ble avkjølt med is. 10-N HCl/dioksan (5.0 ml) ble tilsatt og etterfulgt av omrøring i 30 minutter. Oppløsningsmidlet ble fjernet ved destillering ved romtemperatur, og eter ble tilsatt til resten for å separere ut et bunnfall som ble samlet ved filtrering og tørket under redusert trykk. Det resulterende produktet ble løst opp i DMF (15 ml) og nøytralisert med TEA med omrøring under isavkjøling. Boc-D-Asp(OBzl)-0NB fremstilt fra Boc-D-Asp(0Bzl)-0H (1.55 g), HONB (1.08 g) og DCC (1.44 g) ble tilsatt og omrørt over natt ved romtemperatur. Det resulterende uoppløselige materialet ble fjernet ved filtrering og filtratet ble konsentrert. Resten ble løst opp i AcOEt og oppløsningen ble vasket med 10* vandig sitronsyre, 4* vandig NaHC03 og en mettet vandig oppløsning av natriumklorid. Etter tørking med Na2S04 ble oppløsningsmidlet fjernet ved destillering og resten ble renset ved silikagel kromatografi (Merck Kiesel Gel 60. 2* metanol/kloroform) for å oppnå et oljeaktig produkt.

Utbytte: 3.63 g (84.3*), Rf 1: 0.42, Rf2: 0.74

LSIMS (M + H<+>) = 1077, (teoretisk verdi) = 1077

(3) Fremstilling av Boc-D-Trp-D-Asp(OBzl)-Hyp(Bzl)-Asp(OBzl)-D-Leu-Leu-OPac

Boc-D-Asp(OBzl)-Hyp(Bzl)-Asp(0Bzl)-D-Leu-Leu-OPac (3.77 g) ble løst opp i dioksan (1.0 ml) og oppløsningen ble avkjølt med is. 10-N HCl/dioksan (5.0 ml) ble tilsatt og etterfulgt av omrøring i 30 minutter. Oppløsningsmidlet ble fjernet ved destillering ved romtemperatur, og eter ble tilsatt til resten for å separere ut et bunnfall som ble samlet ved filtrering og tørket under redusert trykk. Det resulterende produktet ble løst opp i DMF (15 ml) og nøytralisert med TEA med omrøring under isavkjøling. Boc-D-Trp-ONB fremstilt fra Boc-D-Trp-OH (1.17 g), HONB (752) og DCC (939 mg) ble tilsatt og omrørt over natt ved romtemperatur. Det resulterende uoppløselige materialet ble fjernet ved filtrering og filtratet ble konsentrert. Resten ble løst opp i AcOEt og oppløsningen ble vasket med 10* vandig sitronsyre, 4* vandig NaHC03 og en mettet vandig oppløsning av natriumklorid. Etter tørking med Na2S04 ble oppløsningsmidlet fjernet ved destillering og resten ble renset ved silikagel kromatografi (Merck Kiesel Gel 60. 2* metanol/kloroform). Deretter ble eter-petroleumeter tilsatt for å separere ut et bunnfall som ble samlet ved filtrering.

Utbytte: 3.44 g (91.4*), Smeltepunkt: 84.0 - 85.0°C,

Rfj: 0.37, Rf2: 0.72

[a]D<25> 12.8° (c = 1.00, i DMF)

Elementanalyse: C70<H>83^7°15

Beregnet: C, 66.60; H, 6.63; N, 7.77;

Funnet: C, 66.65; H, 6.68; N, 7.76.

(4) Fremstilling av Boc-D-Trp-D-Asp(OBzl)-Hyp(Bzl)-Asp(OBzl)-D-Leu-Leu-OH

Boc-D-Trp-D-Asp(OBzl)-Hyp(Bzl)-Asp(OBzl)-D-Leu-Leu-OPac (2.52 g) ble løst opp i 190* vandig AcOH (50 ml) og Zn pulver (6.54 g) ble tilsatt med omrøring under isavkjøling og ytterligere

etterfulgt av omrøring ved romtemperatur. Zn pulveret ble

fjernet ved filtrering og filtratet ble konsentrert. Resten ble løst opp i AcOEt og oppløsningen ble fortløpende vasket med 10* vandig sitronsyre og en mettet vandig oppløsning av natriumklorid. Etter tørking med NagS04 ble oppløsningsmid-let fjernet ved destillering og eter-petroleumeter ble tilsatt til resten for å separere ut et bunnfall som ble samlet ved filtrering og tørket under redusert trykk.

Utbytte: 2.29 g (kvantitativt), Smeltepunkt 94.0 -96.0"C, Rfj: 0.17, Rf2: 0.70

[a]D2<5> 19.2° (c = 1.00, i DMF)

Elementanalyse: C52H77N7<O>14

Beregnet: C, 65.07; H, 6.78; N, 8.57; Funnet: C, 65.05; H, 6.86; N, 8.39.

(5) Fremstilling av cyklo[-D-Asp(OBzl)-Hyp(Bzl)-Asp(0Bzl)-D-Leu-Leu-D-Trp-]

Boc-D-Trp-D-Asp(OBzl)-Hyp(Bzl)-Asp(0Bzl)-D-Leu-Leu-0H (1.14

g) ble løst opp i diklormetan (10 ml) og HONB (358 mg) og DCC (413 mg) ble tilsatt med omrøring under isavkjøling og

ytterligere etterfulgt av omrøring under isavkjøling i 3 timer. Det resulterende uoppløselige materialet ble fjernet ved filtrering og oppløsningsmidlet ble fjernet ved destillering. Resten ble løst opp i acetonitril (20 ml) og det uoppløselige materialet ble fjernet ved filtrering. Oppløs-ningsmidlet ble fjernet ved destillering og eter-petroleumeter ble tilsatt til resten for å separere ut et bunnfall som ble samlet ved filtrering og tørket under redusert trykk.

Det resulterende produktet ble løst opp i dioksan (2 ml), og 10N-HCl/dioksan (10 ml) ble tilsatt med omrøring under isavkjøling og ytterligere etterfulgt av omrøring i 10 minutter. Oppløsningsmidlet ble fjernet ved desillering ved romtemperatur, og eter ble tilsatt resten for å separere ut et bunnfall som ble samlet ved filtrering og tørket under redusert trykk. Dette ble løst opp i DMF (5 ml) og den resulterende oppløsningen ble tilsatt dråpevis til DMF (100 ml) inneholdende TEA (6.96 ml) og etterfulgt av omrøring over natt. Oppløsningsmidlet ble fjernet ved destillering og resten ble løst opp i AcOEt. Oppløsningen ble deretter vasket med 10* vandig sitronsyre, 5* vandig NaHC03 og en mettet vandig oppløsning av natriumklorid. Etter tørking med Na2S04 ble oppløsningsmidlet fjernet ved destillering og resten ble renset ved silikagelkromatografi (Merck Kiesel Gel 60. 1* metanol/kloroform). Deretter ble eter-petroleumeter tilsatt for å separere ut et bunnfall som ble samlet ved filtrering og tørket under redusert trykk.

Utbytte: 847 mg (82.6*), Rf 1: 0.40, Rf2: 0.74

(6) Fremstilling av cyklo[-D-Asp-Hyp(Bzl)-Asp-D-Leu-Leu-D-Trp-]

Cyklo[-D-Asp(0Bzl )-Hyp(Bzl )-Asp(0Bzl)-D-Leu-Leu-D-Trp-] (103 mg) ble løst opp i DMF (10 ml), og palladium svart (100 mg) ble tilsatt. Blandingen ble omfattende omrørt i en hydrogen-strøm ved romtemperatur i 1 time. Katalysatoren ble fjernet ved filtrering og filtratet ble konsentrert. Deretter ble eter tilsatt til resten for å separere ut et bunnfall som ble samlet ved filtrering og tørket under redusert trykk. Utbytte var 64 mg (82.6*). Av dette bunnfallet ble 30.0 mg renset ved revers fase væskekromatografi [kolonne: YMC-D-ODS-5 (2 cm x 25 cm)]. Utbytte var 23.7 mg (79.0*).

Anal. for aminosyrene [6N-HC1, 110°C, hydrolyse i 24 timer; figurene i parentesene viser teoretiske verdier.]: Asp 2.00(2); Leu 1.97(2); Hyp 0.84(1)

LSIMS (M + H<+>) = 846, (teoretisk verdi) = 846

Eksempel 14

Fremstilling av cyklo[-D-Asp-Hyp-Asp-D-Leu-Leu-D-Trp-]

Cyklo[-D-Asp(OBzl)-Hyp(Bzl)-Asp(0Bzl)-D-Leu-Leu-D-Trp-] (103

g) ble løst opp i DMF (10 ml) og palladium svart (100 mg) ble tilsatt. Blandingen ble omfattende omrørt i en hydrogenstrøm

ved romtemperatur i 1 time. Katalysatoren ble fjernet ved filtrering og filtratet ble konsentrert. Deretter ble eter tilsatt til resten for å separere ut et bunnfall som ble samlet ved filtrering og tørket under redusert trykk. Det resulterende produktet ble løst opp i metanol (10 ml) og palladium svart (100 mg) ble tilsatt. Blandingen ble omfattende omrørt over natt i en hydrogenstrøm ved romtemperatur. Katalysatoren ble fjernet ved filtrering og filtratet ble konsentrert. Deretter ble dette tilsatt til resten for å separere ut et bunnfall som ble samlet ved filtrering og tørket under redusert trykk. Utbyttet var 65 mg (85.7*). Av dette bunnfallet ble 25.0 mg renset ved revers fase væskekromatografi [kolonne: YMC-D-ODS-5 (2 cm x 25 cm)]. Utbytte var 19.7 mg (78.8*).

Anal. for aminosyrene [6N-HC1, 110°C, hydrolyse i 24 timer; figurer i parentesene viser teoretiske verdier.]: Asp 2.00(2); Leu 2.00(2); Hyp 0.97(1)

LSIMS (M + H<+>) = 756, (teoretisk verdi) = 756

Eksempel 53

Fremstilling av cyklo[-D-Asp-Trp-Asp-D-tLeu-Leu-D-Trp-]

(1) Fremstilling av Boc-Asp(OBzl)-0Pac

Boc-Asp(OBzl )-0H (32.3 g) og Cs2C03 (16.3 g) ble løst opp i 90* vandig metanol og oppløsningen ble konsentrert. Resten ble løst opp i DMF (300 ml) og fenacyl bromid (21.9 g) ble tilsatt etterfulgt av omrøring over natt. Resulterende CsBr ble separert ved filtrering og filtratet ble konsentrert. Resten ble løst opp i AcOEt og oppløsningen ble vasket med 4* vandig NaHC03 og 10* vandig sitronsyre. Etter vasking med vann ble oppløsningen tørket med Na2S04 og konsentrert. Deretter ble resten omkrystallisert fra etylacetat-petroleum eter.

Utbytte: 42.9 g (97.1*), Smeltepunkt: 73 - 74 °C, Rf 1: 0.69, Rf2: 0.82

[a]D<28> -21.8° (c = 0.99, i DMF)

Elementanalyse: C24<H>27NO7

Beregnet: C, 65.29; H, 6.16; N, 3.17 Funnet: C, 65.42; H, 6.25; N, 3.32

(2) Fremstilling av Boc-Trp-Asp(OBzl)-0Pac

Boc-Trp-OH (12.2 g) ble løst opp i THF og oppløsningen ble avkjølt til -15°C med omrøring. Deretter ble N-metylmorfolin (4.4 ml) tilsatt og deretter ble IBCF (5.4 ml) tilsatt. Etter 2 minutter ble en DMF oppløsning bestående av HC1'H-Asp(0Bzl)-0pac og N-metylmorfolin tilsatt. HC1-H-Asp(OBzl)-OPac ble oppnådd ved oppløsning av Boc-Asp(0Bzl)-0Pac (17.7

g) i 8N-HC1/dioksan (100 ml) og oppløsningen ble omrørt under isavkjøling i 30 minutter og etterfulgt av konsentrering, og

eter ble tilsatt for å felle ut krystallene som ble samlet ved filtrering og tørket. Etter omrøring ved -15°C i 30 minutter ble oppløsningen bragt til romtemperatur. Etter 30 minutter ble det resulterende uoppløselige materialet separert ved filtrering og etterfulgt av konsentrering. Resten ble løst opp i AcOEt og oppløsningen ble vasket med vann, 10* vandig sitronsyre og 4* vandig NaHC03. Etter vasking med vann ble oppløsningen tørket med Na2S04 og konsentrert. Eter ble tilsatt til den resulterende resten for å separere ut et bunnfall som ble samlet ved filtrering.

Utbytte: 23.9 g (95.2*), Smeltepunkt: 73 - 74°C, Rf 1: 0.40, Rf2: 0.69

[a]D<28> -20.6° (c = 1.05, 1 DMF)

Elementanalyse: C35<H>37<N>3<O>8

Beregnet: C, 66.97; H, 5.94; N, 6.69; Funnet: C, 67.21; H, 6.13; N, 6.71

(3) Fremstilling av Boc-D-Asp(OBzl)-Trp-Asp(OBzl)-OPac

8N-HC1/dioksan ble tilsatt Boc-TrpAsp(OBzl)-0Pac (50.2 g) for å oppløse dette og oppløsningen ble omrørt under isavkjøling i 30 minutter, etterfulgt av konsentrering. Deretter ble eter tilsatt for å presipitere krystallene som ble samlet ved filtrering og tørket. Krystallene ble løst opp i DMF (80 ml) og oppløsningen ble avkjølt med is og etterfulgt av tilsetning av TEA (22.3 ml). Boc-D-Asp(OBzl)-0NB [fremstilt fra Boc-D-Asp(OBzl )-0H (28.5 g), HONB (17.2 g) og DCC (19.8 g)] ble tilsatt og blandingen ble omrørt over natt. Det resulterende uoppløselige materialet ble separert ved filtrering og etterfulgt av konsentrering. Resten ble løst opp i AcOEt og oppløsningen ble vasket med vann, 10* vandig sitronsyre og 4* vandig NaHCOs- Etter vasking med vann ble oppløsningen tørket med Na2S04 og konsentrert. Eter ble tilsatt til den resulterende resten for å separere ut et presipitat som ble samlet ved filtrering.

Utbytte: 60.3 g (90.5*), Smeltepunkt: 95 - 97 °C, Rf1: 0.40, Rf2: 0.70

[a]D<28> -5.2° (c = 1.14, i DMF)

Elementanalyse: C46^48N4°11

Beregnet: C, 66.33; H, 5.81; N, 6.73 Funnet: C, 66.40; H, 5.93; N, 6.84.

(4) Fremstilling av Boc-D-Trp-Asp(OBzl)-Trp-Asp(OBzl )-0Pac 8N-HC1/dioksan ble tilsatt til Boc-D-Asp(OBzl)-Trp-Asp(OBzl)-OPac (59.1 g) for å oppløse dette og oppløsningen ble omrørt under isavkjøling i 40 minutter etterfulgt av konsentrering. Deretter ble eter tilsatt for å felle ut krystallene som ble samlet ved filtrering og tørket. Krystallene ble løst opp i DMF (70 ml) og oppløsningen ble avkjølt med is og etterfulgt av tilsetning av TEA (19.8 ml). Boc-D-Trp-ONB [fremstilt fra Boc-D-Trp-OH (23.8 g), HONB (15.3 g) og DCC (17.6 g)] ble tilsatt og blandingen ble omrørt over natt. Det resulterende uoppløselige materialet ble separert ved filtrering og etterfulgt av konsentrering. Resten ble løst opp i AcOEt og oppløsningen ble vasket med vann, 10* vandig sitronsyre og 4* vandig NaHC03. Etter vasking med vann ble oppløsningen tørket med Na2S04 og konsentrert. Eter ble tilsatt til den resulterende resten for å separere ut et bunnfall som ble samlet ved filtrering.

Utbytte: 58.1 g (80.3*), Smeltepunkt: 139 - 140°C, Rf ±: 0.38, Rf2: 0.70

[a]D<28> -3.0° (c = 1.29, i DMF)

Elementanalyse: ^57^58^6^12

Beregnet: C, 67.18; H, 5.74; N, 8.25; Funnet: C, 67.28; H, 5.87; N, 8.34

(5) Fremstilling av Boc-Leu-D-Trp-D-Asp(OBzl )-Trp-Asp(0Bzl)-0Pac

8N-HCl/dioksan ble tilsatt til Boc-D-Trp-D-Asp(OBzl )-Trp-Asp(OBzl)-0Pac (20.4 g) for å oppløse dette og oppløsningen ble omrørt under isavkjøling i 30 minutter og etterfulgt av konsentrering. Deretter ble eter tilsatt for å felle ut krystallene som ble samlet ved filtrering og tørket. Krystallene ble løst opp i DMF (20 ml) og oppløsningen ble avkjølt med is og etterfulgt av tilsetning av TEA (5.6 ml). Boc-Leu-ONB [fremstilt fra Boc-Leu-OH-H20 (5.48 g), HONB (4.30 g) og DCC (4.95 g)] ble tilsatt og blandingen ble omrørt over natt. Det resulterende uoppløselige materialet

ble separert ved filtrering og etterfulgt av konsentrering. Resten ble løst opp i AcOEt og oppløsningen ble vasket med vann, 10* vandig sitronsyre og 4* vandig NaHC03. Etter vasking med vann ble oppløsningen tørket med Na2S04 og konsentrert. Den resulterende resten ble omkrystallisert fra etylacetat-petroleumeter.

Utbytte: 18.6 g (82.2*), Smeltepunkt: 119 - 120°C, Rf 1: 0.39, Rf2: 0.70

[a]D2<8> - 9.1° (c = 0.98, i DMF)

Elementanalyse: c63^69^7°13

Beregnet: C, 66.83; H, 6.14; N, 8.66; Funnet: C, 66.80; H, 6.38; N, 8.75

(6) Fremstilling av Boc-D-tLeu-Leu-D-Trp-D-Asp(OBzl )-Trp-Asp(0Bzl)-0Pac

8N-HCl/dioksan ble tilsatt til Boc-Leu-D-Trp-D-Asp(OBzl)-Trp-Asp(0Bzl)-0Pac (1.02 g) for å oppløse dette og oppløsningen ble omrørt under isavkjøling i 15 minutter og etterfulgt av konsentrering. Deretter ble eter tilsatt til å presipitere krystallene som ble samlet ved filtrering og tørket. Krystallene ble løst opp i DMF (5 ml) og oppløsningen ble avkjølt med is og etterfulgt av tilsetning av TEA (0.25 ml). Boc-D-tLeu-OH (0.23 g), HONB (0.15 g) og DCC (0.22 g)] ble tilsatt og blandingen ble omrørt over natt. Det resulterende uoppløselige materialet ble separert ved filtrering og etterfulgt av konsentrering. Resten ble løst opp i AcOEt og oppløsningen ble vasket med vann, 10* vandig sitronsyre og 4* vandig NaHC03. Etter vasking med vann ble oppløsningen tørket med Na2S04 og konsentrert. Eter ble tilsatt til den resulterende resten for å separere ut et bunnfall som ble samlet ved filtrering.

Utbytte: 1.08 g (96.4*), Smeltepunkt: 124 - 126°C, Rf ±: 0.34, Rf2: 0.71

[a]D<28> -6.1° (c = 1.27, i DMF)

Elementanalyse: c69^80^8°14

Beregnet: C, 66.54; H, 6.47; N, 9.00; Funnet: C, 66.67; H, 6.60; N, 9.21.

(7) Fremstilling av Boc-D-tLeu-Leu-D-Trp-D-Asp(OBzl)-Trp-Asp(OBzl)-0H

Boc-D-tLeu-Leu-D-Trp-D-Asp(OBzl)-Trp-Asp(OBzl)-OPac (0.75 g) ble løst opp i 90* vandig AcOH (10 ml), og Zn pulver (1.96 g) ble tilsatt og etterfulgt av omrøring i 3 timer. Zn pulveret ble fjernet ved filtrering og filtratet ble konsentrert. AcOEt ble tilsatt til resten for å oppløse denne og oppløs-ningen ble vasket med 10* vandig sitronsyre. Etter vasking med vann ble oppløsningen tørket med Na2S04 og konsentrert. Deretter ble petroleumeter tilsatt til resten for å separere ut et bunnfall som ble samlet ved filtrering.

Utbytte: 0.66 g (97.6*), Smeltepunkt: 125 - 127°C, Rf ±: 0.03; Rf2: 0.67

[a]D<25> -5.5° (c = 1.19, i DMF)

Elementanalyse: C6lH74<N>8°13

Beregnet: C, 64.99; H, 6.62; N, 9.94; Funnet: C, 65.11; H, 6.78; N, 10.01.

(8) Fremstilling av cyklo[-D-Asp-Trp-Asp-D-tLeu-Leu-D-Trp-]

Boc-D-tLeu-Leu-Trp-D-Asp(OBzl)-Trp-Asp(OBzl)-0H (0.34 g) ble løst opp i DCM (10 ml), og oppløsningen ble avkjølt med is. HONB (0.11 g) og DCC (0.12 g) ble tilsatt etterfulgt av omrøring i 3 timer. Deretter ble det resulterende DCU separert ved filtrering og etterfulgt av konsentrering, og eter ble tilsatt til resten for å separere ut et bunnfall som ble samlet ved filtrering. 8N-HC1/dioksan (10 ml) ble tilsatt under isavkjøling for å oppløse bunnfallet. Den resulterende oppløsningen ble omrørt i 15 minutter og konsentrert. Deretter ble eter tilsatt til resten for å separere ut et bunnfall som ble samlet ved filtrering og tørket. Bunnfallet ble løst opp i DMF (6 ml) og den resulterende oppløsningen ble dråpevis tilsatt til DMF (54 ml) inneholdende TEA (0.42 ml) i 30 minutter og etterfulgt av omrøring over natt og konsentrering. Resten ble løst opp i AcOEt og oppløsningen ble vasket med 4* vandig NaHC03. Etter vasking med vann ble oppløsningen tørket med Na2S04 og konsentrert. Deretter ble eter-petroleumeter tilsatt til resten for å separere ut et bunnfall som ble samlet ved filtrering og tørket. Av dette bunnfallet ble 101 mg løst opp i DMF (15 ml) og katalytisk redusert i en hydrogenstrøm ved anvendelse av palladium svart som an katalysator. Katalysatoren ble separert ved filtrering og deretter ble filtratatet konsentrert. Den resulterende resten ble løst opp i en liten mengde AcOH og deretter ble vann tilsatt for å utføre lyofil iseringen. Til slutt ble en del av det lyofiliserte produktet renset ved væskekromatografi ved anvendelse av en YMC-D-ODS-5 kolonne (2 cm x 25 cm) (Y.M.C.) for å oppnå et ønsket materiale. Utbytte var 12.4 mg (42.8*).

Anal. for aminosyrene [110°C, hydrolyse i 24 timer; figurene i parentesene viser teoretiske verdier.]: Asp 2.00(2); Leu 1.29(1)

LSIMS (M + H<+>) = 829, (teoretisk verdi) = 829

Eksempel 54

Fremstilling av cyklo[-D-Asp-Trp-Asp-D-"yMeLeu-Leu-D-Trp-D-Asp(0Bzl)-Trp-Asp(OBzl)-0Pac

8N-HC1/dioksan ble tilsatt til Boc-Leu-D-Trp-D-Asp(OBzl)-Trp-Asp(0Bzl)-0Pac (1.02 g) for å oppløse dette og oppløsningen ble omrørt under isavkjøling i 15 minutter og etterfulgt av konsentrering. Deretter ble eter tilsatt for å felle ut

krystallene som ble samlet ved filtrering og tørket. Krystallene ble løst opp i DMF (5 ml) og oppløsningen ble avkjølt med is og etterfulgt av tilsetning av TEA (0.25 ml). Boc-D-^MeLeu-OH (0.24 g), HONB (0.15 g) og DCC (0.22 g)] ble tilsatt og blandingen ble omrørt over natt. Det resulterende uoppløselige materialet ble separert ved filtrering og etterfulgt av konsentrering. Resten ble løst opp i AcOEt og oppløsningen ble vasket med vann, 10* vandig sitronsyre og 4* vandig NaHC03. Etter vasking med vann ble oppløsningen tørket med Na2S04 og konsentrert. Eter ble tilsatt til den resulterende resten for å separere ut et bunnfall som ble samlet ved filtrering.

Utbytte: 1.11 g (98.0*), Smeltepunkt: 171 - 172°C, Rf 1: 0.32, Rf2: 0.70

[a]D<28> +5.4 (c = 1.12, i DMF)

Elementanalyse: C720Hg2NgOi4

Beregnet: C, 66.76; H, 6.56; N, 8.90;

Funnet: C, 66.88; H, 6,69; N, 9.09.

(2) Fremstilling av Boc-D-"YMeLeu-Leu-D-Trp-D-Asp(OBzl )-Trp-Asp(0Bzl)-0H

Boc-D--YMeLeu-Leu-D-Trp-D-Asp(OBzl )-Trp-Asp(OBzl )-0Pac (0.76 g) ble løst opp i 90* vandig AcOH (10 ml), og Zn pulver (1.96 g) ble tilsatt, etterfulgt av omrøring i 3 timer. Zn pulveret ble fjernet ved filtrering og filtratet ble konsentrert. AcOEt ble tilsatt til resten for å oppløse denne og oppløsningen ble vasket med 10* vandig sitronsyre. Etter vasking med vann ble oppløsningen tørket med Na2S04 og konsentrert. Deretter ble petroleumeter tilsatt til resten for å separere ut et bunnfall som ble samlet ved filtrering.

Utbytte: 0.67 g (97.8*), Smeltepunkt: 115 - 117°C, Rf!:0.03; Rf2: 0.67

[a]D<28> +6.3° (c = 1.24, i DMF)

Elementanalyse: c62^76-^8^13

Beregnet: C, 65.25; H, 6.71; N, 9.82; Funnet: C, 65.18; H, 6.87; N, 9.85.

(3) Fremstilling av cyklo[-D-Asp-Trp-Asp-D-"YMeLeu-Leu-D-Trp-]

Boc-D-"YMeLeu-Leu-D-Trp-D-Asp(OBzl )-Trp-Asp(OBzl )-OH (0.34 g) ble løst opp i DCM (10 ml) og oppløsningen ble avkjølt med is. HONB (0.11 g) og DCC (0.12 g) ble tilsatt etterfulgt av omrøring i 3 timer. Deretter ble det resulterende DCTJ separert ved filtrering, etterfulgt av konsentrering og eter ble tilsatt til resten for å separere ut et bunnfall som ble samlet ved filtrering. 8N-HC1/dioksan (10 ml) ble tilsatt under isavkjøling for å oppløse bunnfallet. Den resulterende oppløsningen ble omrørt i 15 minutter og konsentrert. Deretter ble eter tilsatt til resten for å separere ut et bunnfall som ble samlet ved filtrering og tørket. Bunnfallet ble løst opp i DMF (6 ml) og den resulterende oppløsningen ble dråpevis tilsatt til DMF (54 ml) inneholdende TEA (0.42 ml) i 30 minutter og etterfulgt av omrøring over natt og konsentrering. Resten ble løst opp i AcOEt og oppløsningen ble vasket med 4* vandig NaHC03. Etter vasking med vann ble oppløsningen tørket med Na2S04 og konsentrert. Deretter ble eter tilsatt til resten for å separere ut et bunnfall som ble samlet ved filtrering og tørket. Av dette bunnfallet ble 102 mg løst opp i DMF (15 ml) og katalytisk redusert i en hydrogenstrøm ved anvendelse av palladium svart som en katalysator. Katalysatoren ble separert ved filtrering og deretter ble filtratet konsentrert. Den resulterende resten ble løst opp i en liten mengde AcOH og deretter ble vann tilsatt for å utføre lyofiliseringen. Til slutt ble en del av det lyofiliserte produktet renset ved væskekromatografi ved anvendelse av en YMC-D-ODS-5 kolonne (2 cm x 25 cm)

(Y.M.C.) for å oppnå et ønsket materiale. Utbyttet var 16.1 mg (51.5*).

Anal. for aminosyrene [110°C, hydrolyse i 24 timer; figurene i parentesene viser teoretiske verdier.]: Asp 2.00(2 ); Leu 1.25(1).

LSIMS (M + H<+>) = 843, (teoretisk verdi) = 843.

Eksempel 55

Fremstilling av cyklo[-D-Asp-Trp-Asp-D-Thg(2)-Leu-D-Trp-]

(1) Fremstilling av Boc-D-Thg(2)-Leu-D-Trp-D-Asp(OBzl)-Trp-Asp(0Bzl)-0Pac

8N-HCl/dioksan ble tilsatt til Boc-Leu-D-Trp-D-Asp(OBzl)-Trp-Asp(0Bzl)-0Pac (1.02 g) for å oppløse dette og oppløsningen ble omrørt under isavkjøling i 15 minutter og etterfulgt av konsentrering. Deretter ble eter tilsatt for å felle ut krystallene som ble samlet ved filtrering og tørket. Krystallene ble løst opp i DMF (5 ml) og oppløsningen ble avkjølt med is og etterfulgt av tilsetning av TEA (0.25 ml). Boc-D-Thg(2)-0H (0.19 g), HONB (0.15 g) og DCC (0.22 g)] ble tilsatt og blandingen ble omrørt over natt. Det resulterende uoppløselige materialet ble separert ved filtrering og etterfulgt av konsentrering. Resten ble løst opp i AcOEt og oppløsningen ble vasket med vann, 10* vandig sitronsyre og 4* vandig NaHC03. Etter vasking med vann ble oppløsningen tørket med Na2S04 og konsentrert. Eter ble tilsatt til den resulterende resten for å separere ut et bunnfall som ble samlet ved filtrering.

Utbytte: 1.04 g (90.9*), Smeltepunkt: 130 - 132°C, Rf 1: 0.32, Rf2: 0.68

[a]D<28> -5.9° (c = 0.95, i DMF)

Elementanalyse: C5gH74<N>g<0>^4<S>

Beregnet: C, 65.18; H, 5.87; N, 8.81; S, 2.52; Funnet: C, 65.39; H, 5.99; N, 8.94; S, 2.46.

(2) Fremstilling av Boc-D-Thg(2)-Leu-D-Trp-D-Asp(OBzl)-Trp-Asp(OBzl)-0H

Boc-D-Thg(2 )-Leu-D-Trp-D-Asp(OBzl)-Trp-Asp(OBzl)-OPac (0.76 g) ble løst opp i 90* vandig AcOH (10 ml) og Zn pulver (1.96 g) ble tilsatt og etterfulgt av omrøring i 3 timer. Zn pulveret ble fjernet ved filtrering og filtratet ble konsentrert. AcOEt ble tilsatt til resten for å oppløse denne og oppløsningen ble vasket med 10* vandig sitronsyre. Etter vasking med vann ble oppløsningen tørket med Na2S04 og konsentrert. Deretter ble petroleumeter tilsatt til resten for å separere ut et bunnfall som ble samlet ved filtrering.

Utbytte: 0.68 g (98.3*), Smeltepunkt: 167 - 169°C, Rf 1: 0.03; Rf2: 0.68

[a]D<28> -5.3° (c = 0.99, i DMF)

Elementanalyse: C^-LHkgNgO-^S

Beregnet: C, 63.53; H, 5.94; N, 9.72; S, 2.78 Funnet: C, 63.42; H, 6.04; N, 9.90; S, 2.82.

(3) Fremstilling av cyklo[-D-Asp-Trp-Asp-D-Thg(2)-Leu-D-Trp]

Boc-D-Thg(2)-Leu-D-Trp-D-Asp(OBzl)-Trp-Asp(OBzl )-0H (0.35 g) ble løst opp i DCM (10 ml) og oppløsningen ble avkjølt med is. HONB (0.11 g) og DCC (0.12 g) ble tilsatt og etterfulgt av omrøring i 3 timer. Deretter ble det resulterende DCU separert ved filtrering og etterfulgt av konsentrering, og petroleumeter ble tilsatt til resten for å separere ut et bunnfall som ble samlet ved filtrering. 8N-HC1/dioksan (10 ml) ble tilsatt under isavkjøling for å oppløse bunnfallet. Den resulterende oppløsningen ble omrørt i 15 minutter og konsentrert. Deretter ble eter tilsatt til resten for å separere ut et bunnfall som ble samlet ved filtrering og tørket. Bunnfallet ble løst opp i DMF (6 ml) og den resulterende oppløsningen ble dråpevis tilsatt til DMF (54 ml) inneholdende TEA (0.42 ml) i 30 minutter og etterfulgt av omrøring over natt og konsentrering. Resten ble løst opp i AcOEt og oppløsningen ble vasket med 4* vandig NaHC03. Etter vasking med vann ble oppløsningen tørket med NagS04 og konsentrert. Resten ble renset ved anvendelse av silikagelkromatografi (1.5* metanol/DCM) og deretter ble eter tilsatt for å separere ut et bunnfall som ble samlet ved filtrering og tørket. Av dette bunnfallet ble 104 mg løst opp i DMF (15 ml) og katalytisk redusert i en hydrogenstrøm ved anvendelse av palladium svart som en katalysator. Katalysatoren ble fjernet ved filtrering og deretter ble filtratet konsentrert. Den resulterende resten ble løst opp i en liten mengde AcOH og deretter ble vann tilsatt for å utføre lyofiliseringen. Til slutt ble en del av det lyofiliserte produktet renset ved væskekromatografi ved anvendelse av en YMC-D-0DS-5 kolonne (2 cm x 25 cm) for å oppnå et ønsket materiale. Utbytte var 11-7 mg (4.6*).

Anal. for aminosyrene [110°C, hydrolyse i 24 timer; figurene

i parentesene viser teoretiske verdier.]:

Asp 2.00(2); Leu 1.30(1).

LSIMS (M + H<+>) = 855, (teoretisk verdi) = 855

Eksempel 56

Fremstilling av cyklo[-D-Asp-Trp-Asp-Acbu-Leu-D-Trp-]

(1) Fremstilling av Boc-Acbu-Leu-D-Trp-D-Asp(OBzl)-Trp-Asp(0Bzl)-0Pac

8N-HCl/dioksan ble tilsatt til Boc-Leu-D-Trp-D-Asp(OBzl)-Trp-Asp(0Bzl)-0Pac (1.02 g) for å oppløse dette og oppløsningen ble omrørt under isavkjøling i 15 minutter og etterfulgt av konsentrering. Deretter ble eter tilsatt for å felle ut krystallene som ble samlet ved filtrering og tørket. Krystallene ble løst opp i DMF (5 ml) og oppløsningen ble avkjølt med is og etterfulgt av tilsetning av TEA (0.25 ml). Boc-Acbu-OH (0.20 g), HONB (0.15 g) og DCC (0.22 g) ble tilsatt og blandingen ble omrørt over natt. Det resulterende

uoppløselige materialet ble separert ved filtrering og etterfulgt av konsentrering. Resten ble løst opp i AcOEt og oppløsningen ble vasket med vann, 10* vandig sitronsyre og 4* vandig NaHC03. Etter vasking med vann ble oppløsningen tørket med Na2S04 og konsentrert. Eter ble tilsatt til den resulterende resten for å separere ut et bunnfall som ble samlet ved filtrering.

Utbytte: 1.06 g (94.0*), Smeltepunkt: 141 - 143°C, Rf ±: 0.27; Rf2: 0.67

[a]D2<8> -10.6° (c = 1.27, i DMF)

Elementanalyse: C68-H76^8(-)14

Beregnet: C, 66.43; H, 6.23; N, 9.11; Funnet: C, 66.42; H, 6.33; N, 9.30.

(2) Fremstilling av Boc-Acbu-Leu-D-Trp-D-Asp(OBzl)-Trp-Asp(0Bzl)-0H

Boc-Acbu-Leu-D-Trp-D-Asp(OBzl )-Trp-Asp(OBzl)-0Pac (0.74 g) ble løst opp i 90* vandig AcOH (10 ml) og Zn pulver (1.96 g) ble tilsatt og etterfulgt av omrøring i 3 timer. Zn pulveret ble fjernet ved filtrering og filtratet ble konsentrert. AcOEt ble tilsatt til resten for å oppløse denne og oppløs-ningen ble vasket med 10* vandig sitronsyre. Etter vasking med vann ble oppløsningen tørket med Na2S04 og konsentrert. Deretter ble petroleumeter tilsatt til resten for å separere ut et bunnfall som ble samlet ved filtrering.

Utbytte: 0.65 g (97.5*), Smeltepunkt: 114 - 116°C, Rf ±: 0.03, Rf2: 0.67

[a]D2<8> -12.5° (c = 1.02, i DMF)

Elementanalyse: C60<H>70<N>8°13

Beregnet: C, 64.85; H, 6.35; N, 10.08 Funnet: C, 64.92; H, 6.42; N, 10.01.

(3) Fremstilling av cyklo[-D-Asp-Trp-Asp-acbu-Leu-D-Trp-]

Boc-Acbu-Leu-D-Trp-D-Asp(OBzl)-Trp-Asp(Obzl)-OH (0.33 g) ble løst opp i DCM (10 ml), og oppløsningen ble avkjølt med is. HONB (0.11 g) og DCC (0.12 g) ble tilsatt og etterfulgt av omrøring i 3 timer. Deretter ble det resulterende DCU separert ved filtrering og etterfulgt av konsentrering, og petroleumeter ble tilsatt til resten for å separere ut et bunnfall som ble samlet ved filtrering. 8N-HCl/dioksan (10 ml) ble tilsatt under isavkjøling for å oppløse bunnfallet. Den resulterende oppløsningen ble omrørt i 15 minutter og konsentrert. Deretter ble eter tilsatt til resten for å separere ut et bunnfall som ble samlet ved filtrering og tørket. Bunnfallet ble løst opp i DMF (6 ml) og den resulterende oppløsningen ble dråpevis tilsatt til DMF (54 ml) inneholdende TEA (0.42 ml) i 30 minutter og etterfulgt av omrøring over natt og konsentrering. Resten ble løst opp i AcOEt og oppløsningen ble vasket med 4* vandig NaHC03. Etter vasking med vann ble oppløsningen tørket med Na2S04 og konsentrert. Deretter ble eter tilsatt til resten for å separere ut et bunnfall som ble samlet ved filtrering og tørket. Av dette bunnfallet ble 99 mg løst opp i DMF (15 ml) og katalytisk redusert i en hydrogenstrøm ved anvendelse av palladium svart som en katalysator. Katalysatoren ble fjernet ved filtrering og deretter ble filtratet konsentrert. Den resulterende resten ble løst opp i en liten mengde AcOH og deretter ble vann tilsatt for å utføre lyofiliseringen. Til slutt ble en del av det lyofiliserte produktet renset ved væskekromatografi ved anvendelse av en YMC-D-ODS-5 kolonne

(2 cm x 25 cm) for å oppnå et ønsket materiale. Utbyttet var 2.2 mg (10.4*).

Anal. for aminosyrene [110°C, hydrolyse i 24 timer; figurene i parentesene viser teoretiske verdier.]: Asp 2.00(2); Leu 1.23(1)

LSIMS (M + H<+>) = 813, (teoretisk verdi) = 813.

Eksempel 79

Fremstilling av cyklo[-D-Asp-Orn(COPh)-Asp-D-Leu-Leu-D-Trp-]

(1) Fremstilling av Boc-D-Asp(OBzl)-OPac

Boc-D-Asp(OBzl)-0H (25.0 g) ble løst opp i metanol (50 ml) og Cs2C03 (12.6 g) ble tilsatt litt om gangen ved omrøring ved romtemperatur. Etter at Cs2C03 ble løst opp ble oppløsnings-midlet fjernet ved destillering og resten ble løst opp i DMF (500 ml). En DMF oppløsning (50 ml) fenacyl bromid (15.4 g) ble tilsatt dråpevis med omrøring under isavkjøling og ytterligere etterfulgt av omrøring ved romtemperatur i 1 time. Utfelt CsBr ble fjernet ved filtrering og oppløsnings-midlet ble fjernet ved destillering. Resten ble løst opp i AcOEt og oppløsningen ble deretter vasket med 5* vandig NaHC03, 10* vandig sitronsyre og en mettet vandig oppløsning av natriumklorid. Etter tørking med Na2S04 ble oppløsnings-midlet fjernet ved destillering og resten ble omkrystallisert fra etylacetat-petroleumeter.

Utbytte: 31.8 g (93.2*), Smeltepunkt: 74.0 - 75.0°C,

Rfj: 0.73, Rf2: 0.86

[cx]D25 21.9° (c = 1.00, i DMF)

Elementanalyse: C24H2yN07

Beregnet: C, 65.29; H, 6.16; N, 3.17; Funnet: C, 65.03; H, 6.19; N, 3.14.

(2) Fremstilling av Boc-D-Trp-D-Asp(OBzl)-0Pac

Boc-D-Asp(OBzl)-0Pac (26.5 g) ble løst opp i dioksan (50 ml) og 10N-HCl/dioksan (28.6 ml) ble tilsatt under isavkjøling og etterfulgt av omrøring under isavkjøling i 30 minutter. Oppløsningsmidlet ble fjernet ved destillering i romtemperatur og eter ble tilsatt til resten for å danne et bunnfall som ble samlet ved filtrering og dannet der med H-D-Asp(OBzl)-OPac hydroklorid.

Boc-D-Trp-OH (18.3 g) ble løst opp i destillert THF (150 ml) og N-metylmorfolin ble tilsatt med omrøring ved romtemperatur. Etter at atmosfæren ble erstattet med nitrogen, ble isobutyl klorformat (7.88 ml) sakte dråpevis tilsatt med omrøring ved -15°C og omrøringen ble fortsatt ved -15°C i 15 minutter for derved å tilveiebringe blandede syreanhydrider. En aminkomponent [fremstilt ved oppløsning av H-D-Asp(OBzl)-OPac hydroklorid i DMF (100 ml) og tilsetning av N-metylmorfolin (6.62 ml) med omrøring ved -15°C for nøytralisering] ble tilsatt litt av gangen med omrøring ved -15"C, og blandingen ble ytteligere omrørt ved romtemperatur i 1 time. Oppløsningsmiddel ble fjernet ved destillering og resten ble løst opp i AcOEt. Oppløsningen ble deretter vasket med 5* vandig NaHC03, 10* vandig sitronsyre og en mettet vandig oppløsning av natriumklorid. Etter tørking med Na2S04 ble oppløsningsmidlet fjernet ved destillering og resten ble omkrystallisert fra etylacetat-petroleumeter.

Utbytte: 36.1 g (96.0*), Smeltepunkt: 75.0 - 76.0°C,

Rf1: 0.34, Rf2: 0.73

[a]D2<5> 19.1° (c = 1.00, i DMF)

Elementanalyse: C35H37N3<O>8

Beregnet: C, 66.97; H, 5.94; N, 6.69; Funnet: C, 67.19; H, 6.20; N, 6.44.

(3) Fremstilling av Boc-Leu-D-Trp-D-Asp(OBzl)-0Pac

Boc-D-Trp-D-Asp(OBzl)-0Pac (34.5 g) ble løst opp i dioksan (50 ml) og 10N-HCl/dioksan (100 ml) ble tilsatt under isavkjøling etterfulgt av omrøring under isavkjøling i 30 minutter. Oppløsningsmidlet ble fjernet ved destillering ved romtemperatur og eter ble tilsatt til resten for å separere ut et bunnfall som ble samlet ved filtrering. Det resulterende bunnfallet ble løst opp i DMF (350 ml) og TEA ble tilsatt ved omrøring under isavkjøling for å nøytralisere dette. En DMF oppløsning (50 ml) av Boc-Leu-ONB fremstilt fra Boc-Leu-OH (15.3 g), HONB (13.8 g) og DCC (17.0 g) ble ytterligere tilsatt og etterfulgt av omrøring over natt ved romtemperatur. Oppløsningsmidlet ble fjernet ved destillering og resten ble løst opp i AcOEt. N,N-dimetylpropan-diamin (2.5 ml) ble tilsatt og etterfulgt av omrøring ved romtemperatur i 30 minutter. Blandingen ble deretter vasket med 5* vandig NaHC03, 10* vandig sitronsyre og en mettet vandig oppløsning av natriumklorid. Etter tørking med Na2S04 ble oppløsningsmidlet fjernet ved destillering og deretter ble eter-petroleumeter tilsatt til resten for å separere ut et bunnfall som ble samlet ved filtrering.

Utbytte: 37.49 g (92.0*), Smeltepunkt: 72 - 74"C, Ef 1: 0.28, Ef2: 0.71

[cx]D<25> 28.3 (c = 1.00, i DMF)

Elementanalyse: C4^H4g<N>4<0>g

Beregnet: C, 66.47; H, 6.53; N, 7.56; Funnet: C, 66.25; H, 6.68; N, 7.56.

(4) Fremstilling av Boc-D-Leu-Leu-D-Trp-D-Asp(OBzl)-0Pac

Boc-Leu-D-Trp-D-Asp(OBzl)-0Pac (29.6 g) ble løst opp i dioksan (40 ml) og 10N-HC1/dioksan (100 ml) ble tilsatt under isavkjøling etterfulgt av omrøring under isavkjøling i 30 minutter. Oppløsningsmidlet ble fjernet ved destillering i romtemperatur, og eter ble tilsatt til resten for å separere ut et bunnfall som ble samlet ved filtrering. Det resulterende bunnfallet ble løst opp i DMF (300 ml) og TEA ble tilsatt med omrøring under isavkjøling for å nøytralisere dette. En DMF oppløsning (40 ml) Boc-D-Leu-ONB fremstilt fra Boc-D-Leu-0H-H20 (11.0 g), HONB (8.60 g) og DCC (10.7 g) ble videre tilsatt og etterfulgt av omrøring over natt ved romtemperatur. Oppløsningsmidlet ble fjernet ved destillering og resten ble løst opp i AcOEt. N,N-dimetylpropan-diamin (1.26 ml) ble tilsatt og etterfulgt av omrøring ved romtemperatur i 30 minutter. Blandingen ble deretter vasket med 5* vandig NaHCC^, 10* vandig sitronsyre og en mettet vandig oppløsning av natriumklorid. Etter tørking med NagSC^ ble oppløsningsmidlet fjernet ved destillering og deretter ble eter-petroleumeter tilsatt til resten for å separere ut et bunnfall som ble samlet ved filtrering.

Utbytte: 30.9 g (90.5*), Smeltepunkt: 79 - 80°C, Ef 1: 0.26, Ef2: 0.73

[a]D2<5> 27.4° (c = 1.00, i DMF)

Elementanalyse: 047^9^0-^0

Beregnet: C, 66.10; H, 6.96; N, 8.20;

Funnet: C, 66.11; H, 7.05; N, 8.05.

(5) Fremstilling av Boc-Asp(OBzl)-D-Leu-Leu-D-Trp-D-Asp(0Bzl)-0Pac

Boc-D-Leu-Leu-D-Trp-D-Asp(OBzl)-0Pac (17.1 g) ble løst opp i dioksan (10 ml) og 10-N HCl/dioksan (50 ml) ble tilsatt under isavkjøling og etterfulgt av omrøring under isavkjøling i 30 minutter. Oppløsningsmidlet ble fjernet ved destillering ved romtemperatur, og eter ble tilsatt til resten for å separere ut et bunnfall som ble samlet ved filtrering. Det resulterende bunnfallet ble løst opp i DMF (100 ml) og TEA ble tilsatt med omrøring under isavkjøling for å nøytralisere dette. En DMF oppløsning (20 ml) Boc-Asp(OBzl)-0NB fremstilt fra Boc-Asp(OBzl)-0H (7.76 g), HONB (5.02 g) og DCC (6.19 g) ble ytterligere tilsatt og etterfulgt av omrøring over natt ved romtemperatur. Oppløsningsmidlet ble fjernet ved destillering og resten ble løst opp i AcOEt. N,N-dimetyl-propandiamin (0.63 ml) ble tilsatt etterfulgt av omrøring ved romtemperatur i 30 minutter. Blandingen ble deretter vasket med 5* vandig NaHC03, 10* vandig sitronsyre og en mettet vandig oppløsning av natriumklorid. Etter tørking med Na2S04 ble oppløsningsmidlet fjernet ved destillering og deretter ble eter-petroleumeter tilsatt til resten for å separere ut et bunnfall som ble samlet ved filtrering. Bunnfallet ble omkrystallisert fra etylacetat-petroleumeter.

Utbytte: 16.5 g (82.5*), Smeltepunkt: 178 - 179°C, Rf 1: 0.28, Rf2: 0.76

[a]D2<5>13.0° (c = 1.00, i DMF)

Elementanalyse: C58H70<N>6°13

Beregnet: C, 65.77; H, 6.66; N, 7.93; Funnet: C, 65.49; H, 6.69; N, 8.02

(6) Fremstilling av Boc-0rn(C0Ph)-0H-DCHA

Boc-0rn-0H (0.51 g) [oppnådd ved katalytisk redusering av Boc-0rn(Z)-0H i metanol i en hydrogenstrøm ved anvendelse av 105 Pd-karbon som en katalysator] ble løst opp i DMF, og oppløsningen ble avkjølt med is. TEA (0.61 ml) og PhCOONB [fremstilt fra PhCOOH (0.30 g), HONB (0.47 g) og DCC (0.54

g)] ble tilsatt og etterfulgt av omrøring over natt. Reaksjonsoppløsningen ble konsentrert og resten ble løst opp

i AcOEt. Den resulterende oppløsningen ble vasket med 10* vandig sitronsyre. Etter vasking med vann ble oppløsningen tørket med Na2S04 og konsentrert. Deretter ble eter og dicykloheksylamin (438 jjI ) tilsatt til resten for å separere ut et bunnfall som ble samlet ved filtrering.

Utbytte: 1.01 g (97.6*), Smeltepunkt: 148 - 150°C

[a]D2<8> +9.6° (c = 0.90, i metanol)

Elementanalyse: C2gH47<N>3<0>5

Beregnet: C, 67.28; H, 9.15; N, 8.12; Funnet: C, 67.35; H, 8.99; N, 8.03.

(7) Fremstilling av Boc-Orn(COPh)-Asp(OBzl)-D-Leu-Leu-D-Trp-D-Asp(0Bzl)-OPac

Boc-Asp(OBzl )-D-Leu-Leu-D-Trp-D-Asp(OBzl)-OPac (0.85 g) oppnådd i (5) ovenfor ble løst opp i 8N-HC1/dioksan (15 ml) og oppløsningen ble omrørt under isavkjøling i 10 minutter og etterfulgt av konsentrering. Deretter ble eter tilsatt for å presipitere krystallene som ble samlet ved filtrering og tørket. Krystallene ble løst opp i DMF (15 ml) og oppløs-ningen ble avkjølt med is og etterfulgt av tilsetning av TEA (0.22 ml). Boc-0rn(C0Ph)-0NB [fremstilt fra Boc-0rn(COPh)-0H (0.30 g), HONB (0.18 g) og DCC (0.21 g)] ble tilsatt og blandingen ble omrørt over natt. Det resulterende uoppløse-lige materialet ble separert ved filtrering og etterfulgt av konsentrering. Resten ble løst opp i AcOEt og oppløsningen ble vasket med vann, 10* vandig sitronsyre og 4* vandig NaHC03- Etter vasking med vann ble oppløsningen tørket med Na2S04 og konsentrert. Eter ble tilsatt til den resulterende resten for å separere ut et bunnfall som ble samlet ved filtrering.

Utbytte: 0.97 g (94.9*), Smeltepunkt; 107 - 109°C, Rf1: 0.28; Rf2: 0.64.

[a]D2<8> +8.2° (c = 1.23, i DMF)

Elementanalyse; C70Hg4NgO-L5

Beregnet: C, 65.81; H, 6.63; N, 8.77; Funnet: C, 65.76; H, 6.76; N, 8.93.

(8) Fremstilling av Boe-Orn(COPh)-Asp(OBzl)-D-Leu-Leu-D-Trp-D-Asp(OBzl)-0H

Boc-0rn(C0Ph )-Asp(0Bzl)-0Pac (0.77 g) ble løst opp i 90* vandig AcOH (20 ml), og Zn pulver (1.96 g) ble tilsatt og etterfulgt av omrøring i 3 timer. Zn pulveret ble fjernet ved filtrering og filtratet ble konsentrert. AcOEt ble tilsatt til resten for å oppløse denne og oppløsningen ble vasket med 10* vandig sitronsyre. Etter vasking med vann ble oppløsningen tørket med Na2S04 og konsentrert. Deretter ble petroleumeter tilsatt til resten for å separere ut et bunnfall som ble samlet ved filtrering.

Utbytte: 0.68 g (97.8*), Smeltepunkt: 113 - 115"C, Rf ±: 0.02, Rf2: 0.63

[a]D2<8> +9.8° (c = 1.10, i DMF)

Elementanalyse: C^2H78<N>8°14

Beregnet: C, 64.23; H, 6.78; N, 9.67; Funnet: C, 64.11; H, 6.90; N, 9.52.

(9) Fremstilling av cyklo[-D-Asp-Orn(COPh)-Asp-D-Leu-Leu-D-Trp-]

Boc-0rn(C0Ph)-Asp(0Bzl)-D-Leu-Leu-D-Trp-D-Asp(OBzl)-0H (0.35

g) ble løst opp i DCM (20 ml) og oppløsningen ble avkjølt med is. HONB (0.11 g) og DCC (0.12 g) ble tilsatt og etterfulgt

av omrøring i 3 timer. Deretter ble det resulterende DCU separert ved filtrering og etterfulgt av konsentrering, og eter ble tilsatt til resten for å separere ut et bunnfall som ble samlet ved filtrering. 8N-HC1/dioksan (20 ml) ble tilsatt under isavkjøling for å oppløse bunnfallet. Den resulterende oppløsningen ble omrørt i 10 minutter og konsentrert. Deretter ble eter tilsatt til resten for å separere ut et bunnfall som ble samlet ved filtrering og tørket. Bunnfallet ble løst opp i DMF (6 ml) og den resulterende oppløsningen ble dråpevis tilsatt til DMF (54 ml) inneholdende TEA (0.42 ml) i 30 minutter og etterfulgt av omrøring over natt og konsentrering. Resten ble løst opp i AcOEt og oppløsningen ble vasket med 4* vandig NaHC03. Etter vasking med vann ble oppløsningen tørket med Na2S04 og konsentrert. Deretter ble eter-petroleumeter tilsatt til resten for å separere ut et bunnfall som ble samlet ved filtrering og tørket. Av dette bunnfallet ble 104 mg løst opp i DMF (15 ml) og katalytisk redusert i en hydrogenstrøm

ved anvendelse av palladium svart som en katalysator. Katalysatoren ble fjernet ved filtrering og deretter ble filtratet konsentrert. Den resulterende resten ble løst opp i en liten mengde AcOH og deretter ble vann tilsatt for å utføre lyofiliseringen. Til slutt ble en del av det lyofiliserte produktet renset ved væskekromatografi ved anvendelse av en YMC-D-ODS-5 kolonne (2 cm x 25 cm) (Y.M.C.) for å oppnå et ønsket materiale. Utbyttet var 11.1 mg (48.1*).

Anal. for aminosyrene [6N-HC1, 110°C, hydrolyse i 24 timer; figurene i parentesene viser teoretiske verdier.]: Asp 2.00(2); Leu 2.19(2); Orn 1.09(1)

LSIMS (M + H<+>) = 861.

Eksempel 80

Fremstilling av cyklo[-D-Asp-0rn(C0CH2Ph)-Asp-D-Leu-Leu-D-Trp-]

(1) Fremstilling av Boc-0rn(C0CH2Ph)-0H_CHA

Boc-0rn-0H (0.51 g) ble løst opp i DMF og oppløsningen ble avkjølt med is. TEA (1.53 ml) og PhCH2C0Cl (367 pl) ble tilsatt og omrørt i 2 timer. Reaksjonsoppløsningen ble konsentrert og resten ble løst opp i AcOEt. Den resulterende oppløsningen ble vasket med 10* vandig sitronsyre. Etter vasking med vann ble oppløsningen tørket med Na2S04 og konsentrert. Deretter ble eter og cykloheksylamin (254 pl) tilsatt til resten for å separere ut et bunnfall som ble samlet ved filtrering.

Utbytte: 0.52 g (57.9*), Smeltepunkt: 137 - 139°C

[a]D2<8> +2.4° (c = 0.50, i metanol)

Elementanalyse: C^B^g^Og

Beregnet: C, 64.12; H, 8.74; N, 9.35; Funnet: C, 64.05; H, 8.92; N, 9.39.

(2) Fremstilling av Boc-Orn(COCH2Ph)-Asp(OBzl)-D-Leu-Leu-D-Trp-D-Asp(OBzl)-OPac

Boc-Asp(OBzl )-D-Leu-Leu-D-Trp-D-Asp(OBzl)-OPac (0.85 g) fremstilt i Eksempel 79 (5) ble løst opp i 8N-HC1/dioksan (15 ml) og oppløsningen ble omrørt under isavkjøling i 10 minutter og etterfulgt av konsentrering. Deretter ble eter tilsatt for å felle ut krystallene som ble samlet ved filtrering og tørket. Krystallene ble løst opp i DMF (15 ml) og oppløsningen ble avkjølt med is og etterfulgt av tilsetning av TEA (0.22 ml). Boc-0rn(C0CH2Ph)-0NB [fremstilt fra Boc-0rn(C0CH2Ph)-0H (0.32 g), HONB (0.18 g) og DCC (0.21 g)] ble tilsatt og blandingen ble omrørt over natt. Det resulterende uoppløselige materialet ble separert ved filtrering og etterfulgt av konsentrering. Resten ble løst opp i AcOEt og oppløsningen ble vasket med vann, 10* vandig sitronsyre og 4* vandig NaHC03. Etter vasking med vann ble oppløsningen tørket med Na2S04 og konsentrert. Eter ble tilsatt til den resulterende resten for å separere ut et bunnfall som ble samlet ved filtrering.

Utbytte: 0.81 g (78.4*), Smeltepunkt: 148 - 150°C, Rf 1: 0.34, Rf2: 0.65

[a]D2<8> +14.1° (c = 1.13, i DMF)

Elementanalyse: <C>y^<Hg>^<NgO>^<g>

Beregnet: C, 66.03; H, 6.71; N, 8.68; Funnet: C, 66.14; H, 6.67; N, 8.51.

(3) Fremstilling av Boc-0rn(C0CH2Ph)-Asp(OBzl)-D-Leu-Leu-D-Trp-D-Asp(OBzl )-0H

Boc-0rn( C0CH2Ph )-Asp( OBzl )-D-Leu-Leu-D-Trp-D-Asp( OBzl )-0Pac (0.65 g) ble løst opp i 90* vandig AcOH (20 ml) og Zn pulver (1.63 g) ble tilsatt og etterfulgt av omrøring i 3 timer. Zn pulveret ble fjernet ved filtrering og filtratet ble konsentrert. AcOEt ble tilsatt til resten for å oppløse denne og oppløsningen ble vasket med 10* vandig sitronsyre. Etter vasking med vann ble oppløsningen tørket med Na2S04 og konsentrert. Deretter ble petroleumeter tilsatt til resten for å separere ut et bunnfall som ble samlet ved filtrering.

Utbytte: 0.57 g (97.2*), Smeltepunkt: 120 - 122°C, Rf 1: 0.03, Rf2: 0.64

[a]D2<8> +16.9° (c = 0.91, i DMF)

Elementanalyse: C^HgONgO-]^

Beregnet: C, 64.49; H, 6.87; N, 9.55; Funnet: C, 64.60; H, 6.79; N, 9.36.

(4) Fremstilling av cyklo[-D-Asp-Orn(C0CH2Ph)-Asp-D-Leu-Leu-D-Trp-]

Boe-Orn(C0CH2Ph)-Asp(OBzl )-D-Leu-Leu-D-Trp-D-Asp(OBzl)-0H (0.35 g) ble løst opp i DCM (20 ml) og oppløsningen ble avkjølt med is. HONB (0.11 g) og DCC (0.12 g) ble tilsatt og etterfulgt av omrøring i 3 timer. Deretter ble det resulterende DCU separert ved filtrering, etterfulgt av konsentrering og eter ble tilsatt til resten for å separere ut et bunnfall som ble samlet ved filtrering. 8N HCl/dioksan (20 ml) ble tilsatt under isavkjøling for å oppløse bunnfallet. Den resulterende oppløsningen ble omrørt i 10 minutter og konsentrert. Deretter ble eter tilsatt til resten for å separere ut et bunnfall som ble samlet ved filtrering og tørket. Bunnfallet ble løst opp i DMF (10 ml) og den resulterende oppløsningen ble dråpevis tilsatt til DMF (54 ml) inneholdende TEA (0.42 ml) i 30 minutter og etterfulgt av omrøring over natt og konsentrering. Resten ble løst opp i AcOEt og oppløsningen ble vasket med 4* vandig NaHC03. Etter vasking med vann ble oppløsningen tørket med Na2S04 og konsentrert. Deretter ble eter-petroleumeter tilsatt resten for å separere ut et bunnfall som ble samlet ved filtrering og tørket. Av dette bunnfallet ble 106 mg løst opp i DMF (15 ml) og redusert katalytisk i en hydrogenstrøm ved anvendelse av palladium svart som en katalysator. Katalysatoren ble fjernet ved filtrering og deretter ble filtratet konsentrert. Den resulterende resten ble løst opp i en liten mengde AcOH og deretter ble vann tilsatt for å utføre lyofil iseringen. Til slutt ble en del av det lyofiliserte produktet renset ved væskekromatografi ved anvendelse av en YMC-D-ODS-5 kolonne

(2 cm x 25 cm) (Y.M.C.) for å oppnå et ønsket materiale. Utbyttet var 2.3 mg (2.9*).

Anal. for aminosyrene [6N-HC1, 110°C, hydrolyse i 24 timer; figurene i parentesene viser teoretiske verdier.]: Asp 2.00(2); Leu 2.29(2); Orn 1.10(1)

LSIMS (M + H<+>) = 876, (teoretisk verdi) = 876.

Eksempel 81

Fremstilling av cyklo[-D-Asp-Orn(C0CH2CH2Ph)-Asp-D-Leu-Leu-D-Trp-] (1) Fremstilling av Boc-0rn(C0CH2CH2Ph)-0H-DCHA. Boc-0rn-0H (0.51 g) ble løst opp i DMF og oppløsningen ble avkjølt med is. TEA (0.61 ml) og PhCH2CH2C00NB [fremstilt fra PhCH2CH2C00H (0.36 g), HONB (0.47 g) og DCC (0.54 g)] ble tilsatt og omrørt over natt. Reaksjonsoppløsningen ble konsentrert og resten ble løst opp i AcOEt. Den resulterende oppløsningen ble vasket med 10* vandig sitronsyre. Etter vasking med vann ble oppløsningen tørket med Na2S04 og konsentrert. Deretter ble eter og dicykloheksylamin (438 pl) tilsatt til resten for å separere ut et bunnfall som ble samlet ved filtrering.

Utbytte: 0.72 g (66.1*), Smeltepunkt: 131 - 133°C,,

[a]D2<8> +6.9° (c = 0.86, i metanol).

Elementanalyse: <£>31^5:1^3<0>5

Beregnet: C, 68.22; H, 9.42; N, 7.70;

Funnet: C, 68.29; H, 9.22; N, 7.62.

(2) Fremstilling av Boc-0rn(C0CH2CH2Ph)-Asp(0Bzl)-D-Leu-Leu-D-Trp-D-Asp(OBzl)-OPac

Boc-Asp(OBzl )-D-Leu-Leu-D-Trp-D-Asp(OBzl)-OPac (0.85 g) fremstilt i Eksempel 79 (5) ble løst opp i 8N-HCl/dioksan (15 ml) og oppløsningen ble omrørt under isavkjøling i 10 minutter etterfulgt av konsentrering. Deretter ble eter tilsatt for å felle ut krystallene som ble samlet ved filtrering og tørket. Krystallene ble løst opp i DMF (15 ml) og oppløsningen ble avkjølt med is og etterfulgt av tilsetning av TEA (0.22 ml). Boc-0rn(C0CH2CH2Ph)-0NB [fremstilt fra Boc-0rn(C0CH2CH2Ph)-0H (0.33 g), HONB (0.18 g) og DCC (0.21 g)] ble tilsatt og blandingen ble omrørt over natt. Det resulterende uoppløselige materialet ble separert ved filtrering og etterfulgt av konsentrering. Resten ble løst opp i AcOEt og oppløsningen ble vasket med vann, 10* vandig sitronsyre og 4* vandig NaHC03- Etter vasking med vann ble oppløsningen tørket med Na2S04 og konsentrert. Eter ble tilsatt til den resulterende resten for å separere ut et bunnfall som ble samlet ved filtrering.

Utbytte: 0.95 g (91.0*), Smeltepunkt: 110 - 112°C, Rf 1: 0.23, Rf2: 0.65

[cx]D<28> +9.0° (c = 0.98, i DMF)

Elementanalyse: <£>72^88^8^15

Beregnet: C, 66.24; H, 6.79; N, 8.58; Funnet: C, 66.07; H, 6.90; N, 8.75.

(3) Fremstilling av Boc-Orn(COCH2CH2Ph)-Asp(OBzl)-D-Leu-Leu-D-Trp-D-Asp(OBzl)-0H

Boc-0rn( C0CH2CH2Ph )-Asp(OBzl )-D-Leu-Leu-D-Trp-D-Asp(OBzl )-OPac (0.78 g) ble løst opp i 90* vandig AcOH (20 ml) og Zn pulver (1.96 g) ble tilsatt og etterfulgt av omrøring i 3 timer. Zn pulveret ble fjernet ved filtrering og filtratet ble konsentrert. AcOEt ble tilsatt til resten for å oppløse denne og oppløsningen ble vasket med 10* vandig sitronsyre. Etter vasking med vann ble oppløsningen tørket med Na2S04 og konsentrert. Deretter ble petroleumeter tilsatt til resten for å separere ut et bunnfall som ble samlet ved filtrering.

Utbytte: 0.70 g (98.3*), Smeltepunkt: 105 - 108°C, Rf ±: 0.02, Rf2: 0.64

[cx]D<28> +10.4° (c = 1.20, i DMF)

Elementanalyse: C^HggNgO^

Beregnet: C, 64.74; H, 6.96; N, 9.44; Funnet: C, 64.60; H, 7.07; N, 9.64.

(4) Fremstilling av cyklo[-D-Asp-0rn(C0CH2CH2Ph)-Asp-D-Leu-Leu-D-Trp-]

Boc-0rn( C0CH2CH2Ph)-Asp(OBzl)-D-Leu-Leu-D-Trp-D-Asp(OBzl )-OH (0.36 g) ble løst opp i DCM (20 ml) og oppløsningen ble avkjølt med is. HONB (0.11 g) og DCC (0.12 g) ble tilsatt etterfulgt av omrøring i 3 timer. Deretter ble det resulterende DCU separert ved filtrering, etterfulgt av konsentrering og eter ble tilsatt til resten for å separere ut et bunnfall som ble samlet ved filtrering. 8N-HC1/dioksan (20 ml) ble tilsatt under isavkjøling for å oppløse bunnfallet. Den resulterende oppløsningen ble omrørt i 10 minutter og konsentrert. Deretter ble eter tilsatt til resten for å separere ut et bunnfall som ble samlet ved filtrering og tørket. Bunnfallet ble løst opp i DMF (6 ml) og den resulterende oppløsningen ble dråpevis tilsatt til DMF (54 ml) inneholdende TEA (0.42 ml) i 30 minutter og etterfulgt av omrøring over natt og konsentrering. Resten ble løst opp i AcOEt og oppløsningen ble vasket med 4* vandig NaHC03. Etter vasking med vann ble oppløsningen tørket med Na2S04 og konsentrert. Deretter ble eter-petroleumeter tilsatt til resten for å separere ut et bunnfall som ble samlet ved filtrering og tørket. Av dette bunnfallet ble 107 mg løst opp i DMF (15 ml) og katalytisk redusert i en hydrogenstrøm ved anvendelse av palladium svart som en katalysator. Katalysatoren ble fjernet ved filtrering og deretter ble filtratet konsentrert. Den resulterende resten ble løst opp i en liten mengde AcOH og deretter ble vann tilsatt for å utføre lyofiliseringen. Til slutt ble en del av det lyofiliserte produktet renset ved vaeskekromatografi ved anvendelse av en YMC-D-ODS-5 kolonne (2 cm x 25 cm) (Y.M.C.) for å oppnå det ønskede materialet. Utbyttet var 9.1 mg (40.9*).

Anal. for aminosyrene [6N-HC1, 110°C, hydrolyse i 24 timer;

figurene i parentesene viser teoretiske verdier.]:

Asp 2.00(2); Leu 2.22(2); Orn 1.10(1)

LSIMS (M + H<+>) = 889, (teoretisk verdi) = 889

Eksempel 82

Fremstilling av cyklo[-D-Asp-Orn(C0CH2-Ind)-Asp-D-Leu-Leu-D-Trp-]

(1) Fremstilling av Boc-0rn(C0CH2-Ind)-0H•DCHA

Boc-0rn-0H (0.51 g) ble løst opp i DMF og oppløsningen ble avkjølt med is. TEA (0.61 ml) og Ind-CH2C00NB [fremstilt fra Ind-CH2C00H (0.42 g), HONB (0.47 g) og DCC (0.54 g)] ble tilsatt og omrørt over natt. Reaksjonsoppløsningen ble konsentrert og resten ble løst opp i AcOEt. Den resulterende oppløsningen ble vasket med 10* vandig sitronsyre. Etter vasking med vann ble oppløsningen tørket med Na2S04 og konsentrert. Deretter ble eter og cykloheksylamin (254 pl) tilsatt til resten for å separere ut et bunnfall som ble samlet ved filtrering.

Utbytte: 1.10 g (96.5*), Smeltepunkt: 95-98°C

[a]D28 +5.3° (c = 0.92, i metanol)

Elementanalyse: C32<H>50<N>4^5

Beregnet: C, 67.34; H, 8.83; N, 9.82;

Funnet: C, 67.25; H, 9.00; N, 9.93.

(2) Fremstilling av Boc-Orn(C0CH2-Ind)-Asp(OBzl)-D-Leu-Leu-D-Trp-D-Asp(OBzl)-0Pac

Boc-Asp(OBzl )-D-Leu-Leu-D-Trp-D-Asp(OBzl)-0Pac (0.85 g) fremstilt i Eksempel 79 (5) ble løst opp i 8N-HCl/dioksan (15 ml) og oppløsningen ble omrørt under isavkjøling i 10 minutter og etterfulgt av konsentrering. Deretter ble eter tilsatt for å felle ut krystallene som ble samlet ved filtrering og tørket. Krystallene ble løst opp i DMF (15 ml) og oppløsningen ble avkjølt med is og etterfulgt av tilsetning av TEA (0.22 ml). Boc-0rn(C0CH2-Ind)-0NB [fremstilt fra Boc-0rn(C0CH2-Ind)-0H (0.35 g), HONB (0.18 g) og DCC (0.21

g)] ble tilsatt og blandingen ble omrørt over natt. Det resulterende uoppløselige materialet ble separert ved

filtrering og etterfulgt av konsentrering. Resten ble løst opp i AcOEt og oppløsningen ble vasket med vann, 10* vandig sitronsyre og 4* vandig NaHC03. Etter vasking med vann ble oppløsningen tørket med Na2S04 og konsentrert. Eter ble tilsatt til den resulterende resten for å separere ut et bunnfall som ble samlet ved filtrering.

Utbytte: 0.93 g (87.4*), Smeltepunkt: 109 - 111<0>C, Rf ±: 0.16, Rf2: 0.64

[a]D2<8> +9.7° (c = 1.01, i DMF)

Elementanalyse: 073^7^0-^5

Beregnet: C, 65.90; H, 6.59; N, 9.47; Funnet: C, 65.69; H, 6.89; N, 9.47.

(3) Fremstilling av Boc-0rn(C0CH2-Ind)-Asp(OBzl)-D-Leu-Leu-D-Trp-D-Asp(OBzl)-0H

Boc-0rn(C0CH2-Ind )-Asp(0Bzl)-D-Leu-Leu-D-Trp-D-Asp(OBzl )-0Pac (0.80 g) ble løst opp i 90* vandig AcOH (20 ml) og Zn pulver (1.96 g) ble tilsatt og etterfulgt av omrøring i 3 timer. Zn pulveret ble fjernet ved filtrering og filtratet ble konsentrert. AcOEt ble tilsatt til resten for å oppløse denne og oppløsningen ble vasket med 10* vandig sitronsyre. Etter vasking med vann ble oppløsningen tørket med Na2S04 og konsentrert. Deretter ble petroleumeter tilsatt til resten for å separere ut et bunnfall som ble samlet ved filtrering.

Utbytte: 0.71 g (97.6*), Smeltepunkt: 96 - 98°C, Rf 1: 0.02, Rf2: 0.62,

[a]D2<8> +9.4° (c = 1.1, i DMF)

Elementanalyse: C65^-81N9°14

Beregnet: C, 64.39; H, 6.73; N, 10.40; Funnet: C, 64.51; H, 6.86; N, 10.36.

(4) Fremstilling av cyklo[-D-Asp-0rn(C0CH2-Ind)-Asp-D-Leu-Leu-D-Trp-]

Boc-0rn(C0CH2-Ind )-Asp(0Bzl)-D-Leu-Leu-D-Trp-D-Asp(OBzl)-0H (0.36 g) ble løst opp i DCM (20 ml) og oppløsningen ble avkjølt med is. HONB (0.11 g) og DCC (0.12 g) ble tilsatt og etterfulgt av omrøring i 3 timer. Deretter ble det resulterende DCU separert ved filtrering, etterfulgt av konsentrering og eter ble tilsatt til resten for å separere ut et bunnfall som ble samlet ved filtrering. 8N-HC1/dioksan (20 ml) ble tilsatt under isavkjøling for å oppløse bunnfallet. Den resulterende oppløsningen ble omrørt i 10 minutter og konsentrert. Deretter ble eter tilsatt til resten for å separere ut et bunnfall som ble samlet ved filtrering og tørket. Bunnfallet ble løst opp i DMF (6 ml) og den resulterende oppløsningen ble dråpevis tilsatt til DMF (54 ml) inneholdende TEA (0.42 ml) i 30 minutter og etterfulgt av omrøring over natt og konsentrering. Resten ble løst opp i AcOEt og oppløsningen ble vasket med 4* vandig NaHC03. Etter vasking med vann ble oppløsningen tørket med Na2S04 og konsentrert. Deretter ble eter-petroleumeter tilsatt til resten for å separere ut et bunnfall som ble samlet ved filtrering og tørket. Av dette bunnfallet ble 109 mg løst opp i DMF (15 ml) og katalytisk redusert i en hydrogenstrøm ved anvendelse av palladium svart som en katalysator. Katalysatoren ble fjernet ved filtrering og deretter ble filtratet konsentrert. Den resulterende resten ble løst opp i en liten mengde AcOH og deretter ble vann tilsatt for å utføre lyofiliseringen. Til slutt ble en del av det lyofiliserte produktet renset ved væskekromatografi ved anvendelse av en YMC-D-0DS-5 kolonne (2 cm x 25 cm) for å oppnå det ønskede materialet. Utbyttet var 4.1 mg (12.5*).

Anal. for aminosyrene [6N-EC1, 110°C, hydrolyse i 24 timer; figurene i parentesene viser teoretiske verdier.]: Asp 2.00(2); Leu 2.25(2); Orn 1.08(1)

LSIMS (M + H<+>) = 915 (teoretisk verdi) = 915

Eksempel 88

Fremstilling av cyklo[-D-Asp-Hyp(Bzl)-Asp-D-Thg(2)-Leu-D-Trp]

(1) Fremstilling av Boc-D-Asp(OBzl)-Hyp(Bzl)-Asp(0Bzl )-0Pac 8N-HCl/dioksan ble tilsatt til Boc-Hyp(Bzl)-Asp(0Bzl)-0Pac (3.77 g) fremstilt ifølge fremgangsmåtene beskrevet i Eksempel 53 (1) og (2) for å oppløse dette og oppløsningen ble omrørt under isavkjøling i 30 minutter etterfulgt av konsentrering. 4* vandig NaHC03 ble tilsatt og å justere pH til 9 - 10 og deretter ble ekstraheringen utført ved anvendelse av AcOEt. Ekstraktet ble tørket med Na2S04, konsentrert og tørket. Det resulterende produktet ble løst opp i DMF (40 ml) og avkjølt med is. Deretter ble TEA (0.84 ml) tilsatt. Boc-D-Asp(0Bzl)-0NB [fremstilt fra Boc-D-Asp(OBzl)-0H (2.16

g), HONB (1.31 g) og DCC (1.51 g)] ble tilsatt og etterfulgt av omrøring over natt. Det resulterende uoppløselige

materialet ble separert ved filtrering og etterfulgt av konsentrering. Resten ble løst opp i AcOEt og oppløsningen blir vasket med vann, 10* vandig sitronsyre og 4* vandig NaHC03- Etter vasking med vann blir oppløsningen tørket med Na2S04 og konsentrert. Resten ble renset ved anvendelse av

silikagelkromatografi (1* metanol/DCM) og deretter konsentrert. Utbyttet var 2.22 g (57.4*).

(2) Fremstilling av Boc-D-Trp-D-Asp(OBzl)-Hyp(Bzl)-Asp(OBzl)-OPac

8N-HCl/dloksan ble tilsatt til Boc-D-Asp(OBzl)-Hyp(Bzl)-Asp(OBzl)-OPac (1.67 g) for å oppløse dette og oppløsningen ble omrørt under isavkjøling i 10 minutter og etterfulgt av konsentrering. 4* vandig NaHC03 ble tilsatt for å justere pH til 9 - 10 og deretter ble ekstraheringen utført ved anvendelse av AcOEt. Ekstraktet ble tørket med Na2S04, konsentrert og tørket. Det resulterende produktet ble løst opp i DMF (20 ml) og avkjølt med is. Deretter ble TEA (0.28 ml) tilsatt. Boc-D-Trp-ONB [fremstilt fra Boc-D-Trp-OH (0.67 g), HONB (0.43 g) og DCC (0.50 g)] ble tilsatt og etterfulgt av omrøring over natt. Det resulterende uoppløselige materialet ble separert ved filtrering og etterfulgt av konsentrering. Resten ble løst opp i AcOEt og oppløsningen ble vasket med vann, 10* vandig sitronsyre og 4* vandig NaHC03. Etter vasking med vann ble oppløsningen tørket med Na2S04 og konsentrert. Deretter ble eter-petroleumeter tilsatt til resten for å separere ut et bunnfall som ble samlet ved filtrering.

Utbytte: 2.05 g (98.9*), Smeltepunkt: 76 - 78°C, Rf ±:0.48, Rf2: 0.72

[a]D<28> +9.2° (c = 1.13, i DMF)

Elementanalyse: C58H61<N>5°13

Beregnet: C, 67.23; H, 5.93; N, 6.76; Funnet: C, 67.04; H, 6.14; N, 6.79.

(3) Fremstilling av Boc-Leu-D-Trp-D-Asp(OBzl)-Hyp(Bzl)-Asp(0Bzl)-0Pac

8-N HCl/dioksan ble tilsatt til Boc-D-Trp-D-Asp(OBzl)-Hyp(Bzl)-Asp(OBzl)-OPac (1.04 g) for å oppløse dette og oppløsningen ble omrørt under isavkjøling i 10 minutter og etterfulgt av konsentrering. Deretter ble eter tilsatt til resten for å separere ut et bunnfall som ble samlet ved filtrering og tørket. Det resulterende produktet ble løst opp i DMF (15 ml) og avkjølt med is. Deretter ble TEA (0.28 ml) tilsatt. Boc-Leu-ONB [fremstilt fra Boc-Leu-0H-H20 (0.27

g), HONB (0.22 g) og DCC (0.25 g)] ble tilsatt og etterfulgt av omrøring i 3 timer. Det resulterende uoppløselige

materialet ble separert ved filtrering og etterfulgt av konsentrering. Resten ble løst opp i AcOEt og oppløsningen ble vasket med vann, 10* vandig sitronsyre og 4* vandig NaHCOs- Etter vasking med vann ble oppløsningen tørket med Na2S04 og konsentrert. Deretter ble eter-petroleumeter tilsatt til resten for å separere ut et bunnfall som ble samlet ved filtrering.

Utbytte: 1.09 g (94.8*), Smeltepunkt: 88 - 90°C, Rf 1: 0.50, Rf2: 0.71

[a]D2<8> +0.6° (c = 0.88, i DMF)

Elementanalyse: C6'4^72^6°14

Beregnet: C, 66.88; H, 6.31; N, 7.31;

Funnet: C, 66.91; H, 6.61; N, 7.51.

(4) Fremstilling av Boc-D-Thg(2)-Leu-D-Trp-D-Asp(OBzl )-Hyp(Bzl)-Asp(0Bzl)-0Pac

8N-HCl/dioksan ble tilsatt til Boc-Leu-D-Trp-D-Asp(OBzl )-Hyp(Bzl)-Asp(0Bzl )-0Pac (0.92 g) for å oppløse dette og oppløsningen ble omrørt under isavkjøling i 15 minutter og etterfulgt av konsentrering. Deretter ble eter tilsatt til resten for å separere ut et bunnfall som ble samlet ved filtrering og tørket. Det resulterende produktet ble løst opp i DMF (10 ml) og avkjølt med is. Deretter ble TEA

(0.22 ml) tilsatt. Boc-D-Thg(2)-0H (0.23 g), HONB (0.13 g)

og DCC (0.20 g) ble tilsatt og etterfulgt av omrøring i 3 timer. Det resulterende uoppløselige materialet ble separert ved filtrering og etterfulgt av konsentrering. Resten ble løst opp i AcOEt og oppløsningen ble vasket med vann, 10* vandig sitronsyre og 4* vandig NaHC03. Etter vasking med vann ble oppløsningen tørket med Na2S04 og konsentrert. Deretter ble eter-petroleum eter tilsatt til resten for å separere ut et bunnfall som ble samlet ved filtrering.

Utbytte: 1.01 g (98.0*), Smeltepunkt: 94 - 97°C, Rf ]_: 0.41, Rf2: 0.70.

[oGd<28> -0-1° (c = 0.78, i DMF)

Elementanalyse: C70H77N7O15<S>

Beregnet: C, 65.25; H, 6.02; N, 7.61; S, 2.49;

Funnet: C, 65.40; H, 6.13; N, 7.75; S, 2.30.

(5) Fremstilling av Boc-D-Thg(2)-Leu-D-Trp-D-Asp(OBzl)-Hyp(Bzl)-Asp(0Bzl)-0H

Boc-D-Thg( 2 )-Leu-D-Trp-D-Asp(0Bzl )-Hyp(Bzl )-Asp(0Bzl )-0Pa<f (0.77 g) ble løst opp i 90* vandig AcOH (20 ml) og Zn pulver (1.96 g) ble tilsatt og etterfulgt av omrøring i 3 timer. Zn pulveret ble fjernet ved filtrering og filtratet ble konsentrert. AcOEt ble tilsatt til resten for å oppløse denne og oppløsningen ble vasket med 10* vandig sitronsyre. Etter vasking med vann ble oppløsningen tørket med Na2S04 og konsentrert. Deretter ble petroleumeter tilsatt til resten for å separere ut et bunnfall som ble samlet ved filtrering.

Utbytte: 0.70 g (99.7*), Smeltepunkt: 108 - 110°C, Rf1: 0.33, Rf2: 0.65

[a]D<28> +4.6° (c = 1.15, i DMF)

Elementanalyse: C^,2H71N7°14S

Beregnet: C, 63.63; H, 6.11; N, 8.38; S, 2.74

Funnet: C, 63.83; H, 6.23; N, 8.49; S, 2.45

(6) Fremstilling av cyklo[-D-Asp-Hyp(Bzl)-Asp-D-Thg(2)-Leu-D-Trp-]

Boc-D-Thg(2 )-Leu-D-Trp-D-Asp(OBzl)-Hyp(Bzl)-Asp(OBzl)-0H (0.35 g) ble løst opp i DCM (10 ml) og oppløsningen ble avkjølt med is. HONB (0.11 g) og DCC (0.12 g) ble tilsatt og etterfulgt av omrøring i 3 timer. Deretter ble det resulterende DCU separert ved filtrering, etterfulgt av konsentrering og eter ble tilsatt til resten for å separere ut et bunnfall som ble samlet ved filtrering. 8N-HCl/dioksan (10 ml) ble tilsatt under isavkjøling for å oppløse bunnfallet. Den resulterende oppløsningen ble omrørt i 10 minutter og konsentrert. Deretter ble eter tilsatt resten for å separere ut et bunnfall som ble samlet ved filtrering og tørket. Bunnfallet ble løst opp i DMF (6 ml) og den resulterende oppløsningen ble dråpevis tilsatt til DMF (54 ml) inneholdende TEA (0.42 ml) i 30 minutter og etterfulgt av omrøring over natt og konsentrering. Resten ble løst opp i AcOEt og oppløsningen ble vasket med 4* vandig NaHC03- Etter vasking med vann ble oppløsningen tørket med Na2S04 og konsentrert. Deretter ble eter-petroleumeter tilsatt til resten for å separere ut et bunnfall som ble samlet ved filtrering og tørket. Av dette bunnfallet ble 74 mg løst opp i DF (15 ml) og katalytisk redusert i en hydrogenstrøm ved anvendelse av palladium svart som en katalysator. Katalysatoren ble fjernet ved filtrering og deretter ble filtratet konsentrert. Den resulterende resten ble løst opp i en liten mengde AcOH og deretter ble vann tilsatt for å utføre lyofiliseringen. Til slutt ble en del av det lyofiliserte produktet renset ved væskekromatografi ved anvendelse av en YMC-D-ODS-5 kolonne.

(2 cm x 25 cm) (Y.M.C.) for å oppnå et ønsket materiale. Utbyttet var 4.7 mg (5.7*).

Anal. for aminosyrene [110°C, hydrolyse i 24 timer; figurene i parentesene viser teoretiske verdier.]: Asp 2.00(2); Leu 1.18(1).

LSIMS (M + H<+>) = 872, (teoretisk verdi) = 872.

Eksempel 89

Fremstilling av cyklo[-D-Asp-Glu(Bzl)-Asp-D-Thg(2)-Leu-D-Trp]

(1) Fremstilling av Boc-Glu(Bzl)-0Bzl

Boc-Glu-OBzl (1.17 g, oppnådd fra Watanabe Kagaku) ble løst opp i acetonitril (50 ml), og HONB (0.68 g) og DCC (0.79 g) ble tilsatt og etterfulgt av omrøring i 2 timer under isavkjøling. Det resulterende uoppløselige materialet ble separert ved filtrering og benzylamin (0.76 ml) ble tilsatt og etterfulgt av omrøring over natt. Etter konsentrering av reaksjonsoppløsningen ble resten løst opp i AcOEt og oppløs-ningen ble vasket med vann, 10* vandig sitronsyre og 4* vandig NaHC03. Etter vasking med vann ble oppløsningen tørket med Na2S04 og konsentrert. Deretter ble eter tilsatt til resten for å separere ut et bunnfall som ble samlet ved filtrering.

Utbytte: 1.37 g (92.6*), Smeltepunkt: 91.5 - 92-5°C, Rf 1: 0.36; Rf2: 0.69.

[a]D2<5> -16.5° (c = 1.02, i DMF)

Elementanalyse: C24<H>30<N>2°5

Beregnet: C, 67.59; H, 7.09; N, 6.57; Funnet: C, 67.44; N, 7.20; N, 6.68.

(2) Fremstilling av Boc-Gln(Bzl)-Asp(0Bzl)-0Pac

Boc-Gln(Bzl)-0H (3.36 g) [fremstilt ved katalytisk redusering av Boc-Gln(Bzl )-0Bzl (4.26 g) i metanol (20 ml) i en hydro-genstrøm ved ordinær temperatur og trykk i nærvær av 10* Pd-karbon (20 mg)] ble løst opp i THF og oppløsningen ble avkjølt til -15°C med omrøring. Deretter ble N-metylmorfolin (1.1 ml) tilsatt og deretter ble IBCF (1.3 ml) tilsatt. Etter 2 minutter ble en DMF oppløsning bestående av HC1-Asp(OBzl)-OPac og N-metylmorfolin (1.1 ml) tilsatt. HC1•Asp(OBzl)-OPac ble oppnådd ved oppløsning av Boc-Asp(OBzl)-OPac (4.41 g) i 8-N HCl/dioksan (50 ml), omrøring av oppløsningen under isavkjøling i 30 minutter, etterfulgt av konsentrering og tilsetning av eter for å felle ut krystallene som ble samlet ved filtrering og tørket. Etter omrøring ved -15°C i 30 minutter ble oppløsningen bragt til romtemperatur. Etter 30 minutter ble det resulterende uoppløselige materialet separert ved filtrering og etterfulgt av konsentrering. Resten ble løst opp i AcOEt og oppløs-ningen, ble vasket med vann, 10* vandig sitronsyre og 4* vandig NaHC03. Etter vasking med vann ble oppløsningen tørket med Na2S04 og konsentrert. Eter ble tilsatt til den resulterende resten for å separere ut et bunnfall som ble samlet ved filtrering.

Utbytte: 5.11 g (77.5*), Smeltepunkt: 148.5 - 150.0°C, Rf1: 0.41, Rf2: 0.64

[a]D2<8> -13.4° (c = 1.00, i DMF)

Elementanalyse: 03^4-^309

Beregnet: C, 65.54; H, 6.26; N, 6.37;

Funnet: C, 65.38; H, 6.25; N, 6.34.

(3) Fremstilling av Boc-D-Asp(OBzl)-Gln(Bzl)-Asp(0Bzl)-0Pac

8N-HCl/dioksan ble tilsatt til Boc-Gln(Bzl)-Asp(0Bzl)-0Pac (3.96 g) for å oppløse dette og oppløsningen ble omrørt under isavkjøling i 10 minutter etterfulgt av konsentrering. Deretter ble eter tilsatt til resten for å utfelle krystallene som ble samlet ved filtrering og tørket. Krystallene ble løst opp i DMF (40 ml) og avkjølt med is. Deretter ble TEA (0.56 ml) tilsatt. Boc-D-Trp-ONB [fremstilt fra Boc-D-Trp-OH (0.67 g), HONB (0.43 g) og DCC (0.50 g)] ble tilsatt

og etterfulgt av omrøring over natt. Det resulterende uoppløselige materialet ble separert ved filtrering og etterfulgt av konsentrering. Resten ble løst opp i AcOEt og oppløsningen ble vasket med vann, 10* vandig sitronsyre og 4* vandig NaHC03- Etter vasking med vann ble oppløsningen tørket med Na2S04 og konsentrert. Deretter ble eter tilsatt til resten for å separere ut et bunnfall som ble samlet ved filtrering.

Utbytte: 4.56 g (87.9*), Smeltepunkt: 140 - 141"C; Rf 1: 0.42, Rf2:0.69

[a]D<28> -2.0° (c = 1.02, i DMF)

Elementanalyse: C47H52N4<O>12

Beregnet: C, 65.27; H, 6.06; N, 6.48; Funnet: C, 65.05; H, 6.13; N, 6.67.

(4) Fremstilling av Boc-D-Trp-D-Asp(OBzl)-Gln(Bzl)-Asp(0Bzl)-0Pac

8N-HC1/dioksan ble tilsatt til Boc-D-Asp(OBzl)-Asp(0Bzl)-0Pac (1.73 g) for å oppløse dette og oppløsningen ble omrørt under isavkjøling i 10 minutter, etterfulgt av konsentrering. Deretter ble eter tilsatt resten for å felle ut krystallene som ble samlet ved filtrering og tørket. Krystallene ble løst opp i DMF (20 ml) og avkjølt med is. Deretter ble TEA (0.56 ml) tilsatt. Boc-D-Trp-ONB [fremstilt fra Boc-D-Trp-OH (0.67 g), HONB (0.43 g) og DCC (0.50)] ble tilsatt og etterfulgt av omrøring over natt. Det resulterende uoppløse-lige materialet ble separert ved filtrering og etterfulgt av konsentrering. Resten ble løst opp i AcOEt og oppløsningen ble vasket med vann, 10* vandig sitronsyre og 4* vandig NaHC03. Etter vasking med vann ble oppløsningen tørket med Na2S04 og konsentrert. Deretter ble etylacetat tilsatt til

resten for å separere ut et bunnfall som ble samlet ved filtrering.

Utbytte: 1.98 g (94.2*), Smeltepunkt: 194 - 196°C, Ef 1: 0.36, Ef2: 0.67.

[a]D2<8> +1.6° (c = 0.93, i DMF)

Elementanalyse: CggH^N^Ø^

Beregnet: C, 66.27; H, 5.95; N, 7.99;

Funnet: C, 66.14; H, 6.03; N, 8.07.

(5) Fremstilling av Boc-Leu-D-Trp-D-Asp(OBzl)-Gln(Bzl)-Asp(0Bzl)-0Pac

8N-HC1/dioksan ble tilsatt til Boc-D-Trp-D-Asp(OBzl)-Gln(Bzl)-Asp(0Bzl)-0Pac (1.05 g) for å oppløse dette og oppløsningen ble omrørt under isavkjøling i 10 minutter og etterfulgt av konsentrering. Deretter ble eter tilsatt til resten for å presipitere krystallene som ble samlet ved filtrering og tørket. Krystallene ble løst opp i DMF (15 ml) og avkjølt med is. Deretter ble TEA (0.28 ml) tilsatt. Boc-Leu-ONB [fremstilt fra Boc-Leu-0H-H20 (0.27 g), HONB (0.22 g) og DCC (0.25 g)] ble tilsatt etterfulgt av omrøring i 3 timer. Det resulterende uoppløselige materialet ble separert ved filtrering og etterfulgt av konsentrering. Eesten ble løst opp i AcOEt og oppløsningen ble vasket med vann, 10* vandig sitronsyre og 4* vandig NaHC03. Etter vasking med vann ble oppløsningen tørket med Na2S04 og konsentrert. Deretter ble eter tilsatt til resten for å separere ut et bunnfall som ble samlet ved filtrering.

Utbytte: 1.04 g (89.3*), Smeltepunkt: 175 - 177°C, Ef ±: 0.38; Ef2: 0.68

[a]D2<8> +0.35° (c = 0.85, i DMF)

Elementanalyse: 0^4^3^<0>24

Beregnet: C, 66.02; H, 6.32; N, 8.42

Funnet: C, 65.94; H, 6.43; N, 8.48.

(6) Fremstilling av Boc-D-Thg(2)-Leu-D-Trp-D-Asp(OBzl )-Gln(Bzl)-Asp(OBzl)-OPac

8N-HC1/dioksan ble tilsatt til Boc-Leu-D-Trp-D-Asp(OBzl )-Gln(Bzl)-Asp(OBzl )-OPac (0.93 g) for å oppløse dette og oppløsningen ble omrørt under isavkjøling i 15 minutter, etterfulgt av konsentrering. Deretter ble eter tilsatt til resten for å felle ut krystallene som ble samlet ved filtrering og tørket. Krystallene ble løst opp i DMF (5 ml) og avkjølt med is. Deretter ble TEA (0.22 ml) tilsatt. Boc-D-Thg(2)-0H (0.23 g), HONB (0.13 g) og DCC (0.20 g) ble tilsatt og etterfulgt av omrøring i 3 timer. Det resulterende uoppløselige materialet ble separert ved filtrering og etterfulgt av konsentrering. Resten ble løst opp i AcOEt og oppløsningen ble vasket med vann, 10* vandig sitronsyre og 4* vandig NaHC03. Etter vasking med vann ble oppløsningen tørket med NagS04 og konsentrert. Deretter ble eter tilsatt til resten for å separere ut et bunnfall som ble samlet ved filtrering.

Utbytte: 1.02 g (97.9*), Smeltepunkt: 170 - 172°C, Rf 1: 0.30, Rf2: 0.69

[a]D2<8> +3.6° (c = 0.83, i DMF)

Elementanalyse: CygHygNgO-^S

Beregnet: C, 64.50; H, 6.03; N, 8.60; S, 2.46; Funnet: C, 64.52; H, 6.15; N, 8.77; S, 2.41.

(7) Fremstilling av Boc-D-Thg(2)-Leu-D-Trp-D-Asp(OBzl )-Gln(Bzl)-Asp(0Bzl )-0H

Boc-D-Thg( 2 )-Leu-D-Trp-D-Asp(0Bzl )-Gln(Bzl )-Asp(0Bzl )-0Pac (0.78 g) ble løst opp i 90* vandig AcOH (15 ml) og Zn pulver (1.96 g) ble tilsatt og etterfulgt av omrøring i 3 timer. Zn pulveret ble fjernet ved filtrering og filtratet ble konsentrert. AcOEt ble tilsatt til resten for å oppløse denne og oppløsningen ble vasket med 10* vandig sitronsyre. Etter vasking med vann ble oppløsningen tørket med Na2S04 og konsentrert. Deretter ble petroleumeter tilsatt til resten for å separere ut et bunnfall som ble samlet ved filtrering.

Utbytte: 0.67 g (94.2*), Smeltepunkt: 145 - 147°C, Rfj: 0.22, Rf2: 0.66

[a]D28 +6.6° (c = 1.00, i DMF)

Elementanalyse: C^gHygNg<O->^S

Beregnet: C, 62.82; H, 6.12; N, 9.45; S, 2.71; Funnet: C, 62.93; H, 6.24; N, 9.62; S, 2.44.

(8) Fremstilling av cyklo[-D-Asp-Gln(Bzl)-Asp-D-Thg(2)-Leu-D-Trp-]

Boc-D-Thg(2 )-Leu-D-Trp-D-Asp(0Bzl)-Gln(Bzl)-Asp(OBzl)-0H (0.36 g) ble løst opp i DCM (10 ml) og oppløsningen ble avkjølt med is. HONB (0.11 g) og DCC (0.12 g) ble tilsatt og etterfulgt av omrøring i 3 timer. Deretter ble det resulterende DCU separert ved filtrering, etterfulgt av konsentrering og eter ble tilsatt til resten for å separere ut et bunnfall som ble samlet ved filtrering. 8N-HC1/dioksan (10 ml) ble tilsatt under isavkjøling for å oppløse bunnfallet. Den resulterende oppløsningen ble omrørt i 10 minutter og konsentrert. Deretter ble eter tilsatt til resten for å separere ut et bunnfall som ble samlet ved filtrering og tørket. Bunnfallet ble løst opp i DMF (6 ml) og den resulterende oppløsningen ble dråpevis tilsatt til DMF (54 ml) inneholdende TEA (0.42 ml) i 30 minutter og etterfulgt av omrøring over natt og konsentrering. Resten ble løst opp i AcOEt og oppløsningen ble vasket med 4* vandig NaHC03. Etter vasking med vann ble oppløsningen tørket med Na2S04 og konsentrert. Deretter ble eter-petroleumeter tilsatt til resten for å separere ut et bunnfall som ble samlet ved filtrering og tørket. Av dette bunnfallet ble 75 mg løst opp i DMF (15 ml) og katalytisk redusert i en hydrogenstrøm ved anvendelse av palladium svart som en katalysator. Katalysatoren ble fjernet ved filtrering og deretter ble filtratet konsentrert. Den resulterende resten ble løst opp i en liten mengde AcOH og deretter ble vann tilsatt for å utføre lyofiliseringen. En del av det lyofiliserte produktet ble til slutt renset ved væskekromatografi ved anvendelse av en YMC-D-ODS-5 kolonne (2 cm x 25 cm) (Y.M.C.) for å oppnå et ønsket materiale. Utbyttet var 5.0 mg (8.8*).

Anal. for aminosyrene [110°C, hydrolyse i 24 timer; figurene i parentesene viser teoretiske verdier.]: Asp 2.00(2); Glu 1.08(1); Leu 1.09(1)

LSIMS (M + H<+>) = 887, (teoretisk verdi) = 887

Eksempel 90

[A] Fremstilling av cyklo[-D-Asp-Asn(CH2CH2-Ind)-Asp-D-Thg(2)-Leu-D-Trp-]

(1) Fremstilling av Boc-Asn(CH2CH2-Ind)-0Bzl

Boc-Asp(0NB )-0Bzl [fremstilt fra Boc-Asp-OBzl (14.23 g), HONB (8.68 g) og DCC (9.99 g)] ble tilsatt til tryptamin hydroklorid (7.87 g) sammen med TEA (8.4 ml) i DMF (150 ml) under isavkjøling og blandingen ble omrørt over natt. Reaksjons-oppløsningen ble konsentrert og resten ble løst opp i AcOEt. Den resulterende oppløsningen ble vasket med vann, 10* vandig sitronsyre og 4* vandig NaHC03- Etter vasking med vann ble oppløsningen tørket med Na2S04 og konsentrert. Deretter ble eter tilsatt til resten for å tilveiebringe krystaller som ble samlet ved filtrering.

Utbytte: 17.1 g (92.0*), Smeltepunkt: 96 - 97"C, RfA: 0.41, Rf2: 0.70

[a]D2<8> -9.8° (c = 1.24, i DMF)

Elementanalyse: C26H30N3<O>5

Beregnet: C, 67.22; H, 6.51; N, 9.05; Funnet: C, 67.31; H, 6.44; N, 8.97.

(2) Fremstilling av Boc-Asn(CH2CH2-Ind)-OH-CHA

Boc-Asn(CH2CH2-Ind)-0Bzl (4.6 g) ble løst opp i metanol (100 ml) og katalytisk redusert i en hydrogenstrøm ved anvendelse av palladium svart som en katalysator. Katalysatoren ble fjernet ved filtrering og deretter ble filtratet konsentrert. Den resulterende resten ble løst opp i eter-AcOEt (1:1) og CHA (1.1 ml) og ble tilsatt for å felle ut krystallene som ble samlet ved filtrering. Krystallene ble omkrystallisert fra metanol-eter for å oppnå et ønsket materiale.

Utbytte: 4.1 g (88.9*), Smeltepunkt: 178 - 179°C, Rf2: 0.37 [a]D<28> +7.5° (c = 1.17, i metanol)

Elementanalyse: ^5^7^05

Beregnet: C, 63.13; H, 8.26; N, 11.78; Funnet: C, 63.11; H, 8.22; N, 11.78.

(3) Fremstilling v Boc-Asn(CH2CH2-Ind)-Asp(0Bzl)-0Pac

Boc-Asn(CH2CH2-Ind)-0H [fremstilt fra Boc-Asn(CH2CH2-Ind )-OH-CHA (3.7 g)] ble løst opp i THF og oppløsningen ble avkjølt til -15°C med omrøring. Deretter ble N-metylmorfolin (0.9 ml) tilsatt og deretter ble IBCF (1.1 ml) tilsatt. Etter 2 minutter ble en DMF oppløsning av HC1•Asp(0Bzl)-0Pac og N-metylmorfolin tilsatt. HC1•Asp(OBzl )-0Pac ble oppnådd ved oppløsning av Boc-Asp(0Bzl)-0Pac (3.5 g) i 8-N HCl/dioksan (20 ml), omrøring av oppløsningen under isavkjøling i 30 minutter og etterfulgt av konsentrering og tilsetning av eter for å felle ut krystallene som ble samlet ved filtrering og tørket. Etter omrøring ved -15°C i 30 minutter ble oppløsningen bragt til romtemperatur. Etter 30 minutter ble det resulterende uoppløselige materialet separert ved filtrering og etterfulgt av konsentrering. Resten ble løst opp i AcOEt og oppløsningen ble vasket med vann, 10* vandig sitronsyre og 4* vandig NaHC03. Etter vasking med vann ble oppløsningen tørket med NagSO^ og konsentrert. Eter ble tilsatt til den resulterende resten for å separere ut et bunnfall som ble samlet ved filtrering.

Utbytte: 4.3 g (79.2*), Smeltepunkt: 142 - 143°C, Rf 1: 0.38, Rf2: 0.69

[a]D<28> -8.0° (c = 0.97, i DMF)

Elementanalyse: 033^-^409

Beregnet: C, 65.41; H, 5.92; N, 8.03; Funnet: C, 65.46; H, 5.95; N, 7.89.

(4) Fremstilling av Boc-Asp(OBzl)-Asn(CH2CH2-Ind)-Asp(0Bzl)-0Pac

8N-HCl/dioksan ble tilsatt til Boc-Asn(CH2CH2-Ind)-Asp(OBzl)-OPac (4.09 g) for å oppløse dette og oppløsningen ble omrørt under isavkjøling i 10 minutter og etterfulgt av konsentrering. Deretter ble eter tilsatt til resten for å felle ut krystallene som ble samlet ved filtrering og tørket. Krystallene ble løst opp i DMF (40 ml) og avkjølt med is. Deretter ble TEA (1.67 ml) tilsatt. Boc-D-Asp(OBzl)-0NB [fremstilt fra Boc-D-Asp(OBzl)-0H (2.16 g), HONB (1.31 g) og DCC (1.51 g)] ble tilsatt og etterfulgt av omrøring over natt. Det resulterende uoppløselige materialet ble separert ved filtrering og etterfulgt av konsentrering. Resten ble løst opp i AcOEt og oppløsningen ble vasket med vann, 10* vandig sitronsyre og 4* vandig NaHC03. Etter vasking med vann ble oppløsningen tørket med Na2S04 og konsentrert.

Deretter ble eter tilsatt til resten for å separere ut et bunnfall som ble samlet ved filtrering.

Utbytte: 4.84 g (89.2*), Smeltepunkt: 92 - 94°C, Rf 1: 0.41, Rf2: 0.67

[a]D2<8> -7.4° (c = 1.11, i DMF)

Elementanalyse: 049^3^0-^

Beregnet: C, 65.10; H, 5.91; N, 7.75; Funnet: C, 64.85; H, 5.97; N, 7.93.

(5) Fremstilling av Boc-D-Trp-D-Asp(OBzl)-Asn(CH2CH2-Ind)-Asp(0Bzl)-0Pac

8N-HCl/dioksan ble tilsatt til Boc-D-Asp(OBzl)-Asn(CH2CH2-Ind)-Asp(OBzl)-OPac (1.77 g) for å oppløse dette og oppløs-ningen ble omrørt under isavkjøling i 10 minutter og etterfulgt av konsentrering. Deretter ble eter tilsatt til resten for å felle ut krystallene som ble samlet ved filtrering og tørket. Krystallene ble løst opp i DMF (20 ml) og avkjølt med is. Deretter ble TEA (0.56 ml) tilsatt. Boc-D-Trp-ONB [fremstilt fra Boc-D-Trp-OH (0.67 g), HONB (0.43 g) og DCC (0.50 g)] ble tilsatt og etterfulgt av omrøring over natt. Det resulterende uoppløselige materialet ble separert ved filtrering og etterfulgt av konsentrering. Resten ble løst opp i AcOEt og oppløsningen ble vasket med vann, 10* vandig sitronsyre og 4* vandig NaHC03. Etter vasking med vann ble oppløsningen tørket med Na2S04 og konsentrert. Deretter ble resten renset ved anvendelse av silika gelkromatografi (2* metanol/DCM). Deretter ble petroleumeter tilsatt for å separere ut et bunnfall som ble samlet ved filtrering.

Utbytte: 1.24 g (56.9*), Smeltepunkt: 139 - 140°C, Rf 1: 0.34, Rf2: 0.67

[a]D2<8> -0.1° (c = 0.92, i DMF)

Elementanalyse: C60<H>63^7°13

Beregnet: C, 66.10; H, 5.82; N, 8.99; Funnet: C, 65.98; H, 5.83; N, 8.95.

(6) Fremstilling av Boc-Leu-D-Trp-D-Asp(OBzl)-Asn(CH2CH2-Ind)-Asp(OBzl)-0Pac

8-N HCl/dioksan ble tilsatt til Boc-D-Trp-D-Asp(OBzl )-Asn(CH2CH2-Ind)-Asp(0Bzl)-0Pac (1.09 g) for å oppløse dette og oppløsningen ble omrørt under isavkjøling i 30 minutter og etterfulgt av konsentrering. Deretter ble eter tilsatt til resten for å felle ut krystallene som ble samlet ved filtrering og tørket. Krystallene ble løst opp i DMF (15 ml) og avkjølt med is. Deretter ble TEA (0.28 ml) tilsatt. Boc-Leu-ONB [fremstilt fra Boc-Leu-0H-H20 (0.27 g), HONB (0.22 g) og DCC (0.25 g)] ble tilsatt og etterfulgt av omrøring i 3 timer. Det resulterende uoppløselige materialet ble separert ved filtrering og etterfulgt av konsentrering. Resten ble løst opp i AcOEt og oppløsningen ble vasket med vann, 10* vandig sitronsyre og 4* vandig NaHC03. Etter vasking med vann ble oppløsningen tørket med Na2S04 og konsentrert. Deretter ble eter tilsatt til resten for å separere ut et bunnfall som ble samlet ved filtrering.

Utbytte: 1.10 g (91.4*), Smeltepunkt: 140 - 142°C, Rf 1: 0.34, Rf2: 0.67

[a]D<28> -0.5° (c = 0.84, i DMF)

Elementanalyse: C66<H>74<N>8°14

Beregnet: C, 65.88; H, 6.20; N, 9.31; Funnet: C, 66.00; H, 6.23; N, 9.20.

(7) Fremstilling av Boc-D-Thg(2)-Leu-D-Trp-D-Asp(OBzl)-Asn(CH2CH2-Ind)-Asp(OBzl)-0Pac

8N-HCl/dioksan ble tilsatt til Boc-Leu-D-Trp-D-Asp(OBzl )-Asn(CH2CH2-Ind )-Asp(0Bzl)-0Pac (0.96 g) for å oppløse dette og oppløsningen ble omrørt under isavkjøling i 10 minutter og

etterfulgt av konsentrering. Deretter ble eter tilsatt til resten for å felle ut krystallene som ble samlet ved filtrering og tørket. Krystallene ble løst opp i DMF (10 ml) og avkjølt med is. Deretter ble TEA (0.22 ml) tilsatt. Boc-D-Thg(2)-0H (0.23 g), HONB (0.13 g) og DCC (0.20 g) ble tilsatt og etterfulgt av omrøring i 3 timer. Det resulterende uoppløselige materialet ble separert ved filtrering og etterfulgt av konsentrering. Resten ble løst opp i AcOEt og oppløsningen ble vasket med vann, 10* vandig sitronsyre og 4* vandig NaHC03. Etter vasking med vann ble oppløsningen tørket med Na2S04 og konsentrert. Deretter ble eter tilsatt til resten for å separere ut et bunnfall som ble samlet ved filtrering.

Utbytte: 1.06 g (98.7*), Smeltepunkt: 162 - 164°C, Rf ±: 0.30, Rf2: 0.69

[a]D<28> +4.4° (c = 0.75, i DMF)

Elementanalyse: C72H79N9O-L5<S>

Beregnet: C, 64.41; H, 5.93; N, 9.39; S, 2.39; Funnet: C, 64.36; H, 6.04; N, 9.49; S, 2.16.

(8) Fremstilling av Boc-D-Thg(2)-Leu-D-Trp-D-Asp(OBzl )-Asn(CH2CH2-Ind)-Asp(0Bzl)-0H

Boc-D-Thg(2)-Leu-D-Trp-D-Asp(0Bzl)-Asn(CH2CH2-Ind)-Asp(OBzl)-OPac (0.81 g) ble løst opp i 90* vandig AcOH (20 ml), og Zn pulver (1.96 g) ble tilsatt etterfulgt av omrøring i 3 timer. Zn pulveret ble fjernet ved filtrering og filtratet ble konsentrert. AcOEt ble tilsatt til resten for å oppløse denne og oppløsningen ble vasket med 10* vandig sitronsyre. Etter vasking med vann ble oppløsningen tørket med Na2S04 og konsentrert. Deretter ble petroleumeter tilsatt til resten for å separere ut et bunnfall som ble samlet ved filtrering.

Utbytte: 0.72 g (98.0*); Smeltepunkt: 140 - 143°C, Rf1: 0.22, Rf2: 0.66

[a]D<28> +5.8° (c = 0.93, i DMF)

Elementanalyse: C^B^NgO-j^S

Beregnet: C, 62.78; H, 6.01; N, 10.30; S, 2.62; Funnet: C, 62.75; H, 6.14; N, 10.27; S, 2.49.

(9) Fremstilling av cyklo[-D-Asp-Asn( CH2CH2-Inci )-Asp-D-Thg(2)-Leu-D-Trp-]

Boc-D-Thg(2 )-Leu-D-Trp-D-Asp(OBzl)-Asn(CH2CH2-Ind)-Asp(OBzl)-OH (0.37 g) ble løst opp i DCM (10 ml) og oppløsningen ble avkjølt med is. HONB (0.11 g) og DCC (0.12 g) ble tilsatt og etterfulgt av omrøring i 3 timer. Deretter ble det resulterende DCU separert ved filtrering, etterfulgt av konsentrering og eter ble tilsatt til resten for å separere ut et bunnfall som ble samlet ved filtrering. 8-N HCl/dioksan (10 ml) ble tilsatt under isavkjøling for å oppløse bunnfallet. Den resulterende oppløsningen ble omrørt i 10 minutter og konsentrert. Deretter ble eter tilsatt til resten for å separere ut et bunnfall som ble samlet ved filtrering og tørket. Bunnfallet ble løst opp i DMF (6 ml) og den resulterende oppløsningen ble dråpevis tilsatt til DMF (54 ml) inneholdende TEA (0.4 ml) i 30 minutter og etterfulgt av omrøring over natt og konsentrering. Resten ble løst opp i AcOEt og oppløsningen ble vasket med 4* vandig NaHC03< Etter vasking med vann ble oppløsningen tørket med Na2S04 og konsentrert. Deretter ble eter-petroleumeter tilsatt til resten for å separere ut et bunnfall som ble samlet ved filtrering og tørket. Av dette bunnfallet ble 111 mg løst opp i DMF (15 ml) og katalytisk redusert i en hydrogenstrøm ved anvendelse av palladium svart som en katalysator. Katalysatoren ble fjernet ved filtrering og deretter ble filtratet konsentrert. Den resulterende resten ble løst opp i en liten mengde AcOH og deretter ble vann tilsatt for å utføre lyofiliseringen. Til slutt ble en del av det lyofiliserte produktet renset ved væskekromatografi ved anvendelse av en YMC-D-ODS-5 kolonne (2 cm x 25 cm) (Y.M.C.) for å oppnå et ønsket materiale. Utbyttet var 5.4 mg (9.5*).

Anal. for aminosyrene [110°C, hydrolyse i 24 timer; figurene i parentesene viser teoretiske verdier.]: Asp 3.00(3); Leu 1.39(1)

LSIMS (M + H<+>) = 926, (teoretisk verdi) = 926

[B]

Eksempel

Fremstilling av cyklo[-D-Asp-Asn(CH2CH2Ind)-Asp-D-Thg(2)-Leu-D-Trp-]

(1) Fremstilling av Boc-D-Thg(2)-Leu-0Bzl

Boc-Thg(2)-0H-CHA (17.8 g, 50 mmol) ble suspendert i et blandet oppløsningsmiddel av etylacetat (250 ml) og vann (250 ml), etterfulgt av omfattende omrøring. Deretter ble IN vandig H2S04 (50 ml) tilsatt for å oppløse dette. Etylacetat-laget ble separert og tørket med Na2S04. Oppløsnings-midlet ble deretter fjernet ved avdampning under redusert trykk. DMF (90 ml) ble tilsatt til resten for å fremstille oppløsningen (I).

Tos-H-Leu-OBzl (39.4 g, 100 mmol) ble tilsatt til et blandet oppløsningsmiddel av etylacetat (250 ml) og 10* vandig NaHC03 (250 ml), etterfulgt av omfattende omrøring for å oppløse dette fullstendig. Etylacetatlaget ble separert og tørket med Na2S04. Oppløsningsmidlet ble deretter fjernet ved avdampning under redusert trykk. DMF (90 ml) ble tilsatt til resten for å fremstille oppløsning (II).

Oppløsningene (I) og (II) ble kombinert med hverandre og HOBT (13.5 g, 100 mmol) ble tilsatt for å oppløse dette. Deretter ble 30 ml av en oppløsning av DCC (20.6 g, 100 mmol) i DMF dråpevis tilsatt under isavkjøling i 10 minutter og etterfulgt av omrøring 1 1 time. Den resulterende oppløsningen ble deretter omrørt over natt ved 4°C. Det uoppløselige materialet ble fjernet ved filtrering og oppløsningsmidlet ble fjernet ved avdampning. Etylacetat og vann ble tilsatt til resten og 1 N vandig H2SO4 (50 ml) ble tilsatt og etterfulgt av ekstrahering med etylacetat. Etylacetatlaget ble separert og deretter vasket med den mettede vandige oppløsningen av NaCl, 4* vandig NaHC03 og mettet vandig oppløsning av NaCl. Etter tørking med NagSC^ ble oppløs-ningsmidlet fjernet ved avdampning. Resten ble renset ved silika gelkolonne kromatografi (6 cm x 30 cm, heksan : etylacetat = 10:1 3:1). Fargeløse krystaller ble oppnådd ved krystallisering fra en petroleumeter-oppløsning.

Utbytte: 14.9 g (87.2*)

Smeltepunkt: 71.0 - 72.5°C, Rf1: 0.80, Rf2: 0.88

[a]D2<5> -46.3° (c = 1.02, i DMF)

Elementanalyse: C24H32<N>2O5S

Beregnet: C, 62.59; H, 7.00; N, 6.08; Funnet: C, 62.35; H, 7.00; N, 6.10.

(2) Fremstilling av Boc-D-Thg(2)-Leu-0Pac

I 500 ml metanol ble det oppløst 16.1 g (35.0 mmol) Boc-D-Thg(2)-Leu-0Bzl fremstilt i (1) og 5 g trekull ble tilsatt og etterfulgt av omrøring. Trekullet ble fjernet ved filtrering og 1 g palladium svart ble tilsatt til filtratet. Blandingen ble omrørt i en hydrogenstrøm ved romtemperatur i 5 timer. Katalysatoren ble fjernet ved filtrering og filtratet ble konsentrert til omtrent 100 ml under redusert trykk. Deretter ble 50 ml av en vandig oppløsning av Cs2C03 (5.70 g, 17.5 mmol) tilsatt dråpevis i 10 minutter og etterfulgt av omrøring i 30 minutter. Oppløsningsmidlet ble deretter fjernet ved avdampning. DMF (100 ml) ble tilsatt til resten og oppløsningsmidlet ble fjernet ved avdampning under redusert trykk. Denne operasjonen ble gjentatt to ganger. DMF (100 ml) ble tilsatt til resten for å oppløse denne og 50 ml av en oppløsning av fenacylbromid (7.18 g, 35.0 mmol) i DMF ble dråpevis tilsatt under isavkjøling i 10 minutter. Denne resulterende blandingen ble omrørt ved romtemperatur og deretter omrørt over natt. Oppløsningsmidlet ble fjernet ved destillering og etylacetat ble tilsatt til resten, etterfulgt av ekstrahering med etylacetat. Etylacetatlaget ble separert og deretter vasket med 10* vandig sitronsyre, mettet vandig oppløsning av NaCl, mettet vandig oppløsning av NaHCOs og mettet vandig oppløsning av NaCl. Etter tørking med Na2S04 ble oppløsningsmidlet fjernet. Fargeløse krystaller ble oppnådd ved krystallisering fra eter-petroleumeter.

Utbytte: 14.9 (87.2*)

Smeltepunkt: 119.0 - 120.0°C, Rf1: 0.79; Rf2: 0.91

[a]D2<5> -50.2° (c = 1.05, i DMF)

Elementanalyse: CgsB^gNgO^<S>

Beregnet: C, 61.46; H, 6.60; N, 5.73; Funnet: C, 61.43; H, 6.63; N, 5.85

(3) Fremstilling av Boc-Asp(OBzl)-D-Thg(2)-Leu-0Pac

I 30 ml dioksan ble det oppløst 14.7 g (30.0 mmol) Boc-D-Thg(2)-Leu-0Pac fremstilt i (2) og 10 N-HC1/dioksan (50 ml) ble dråpevis tilsatt under isavkjøling og etterfulgt av omrøring i 15 minutter. Oppløsningsmidlet ble fjernet ved avdampning under redusert trykk og eter ble tilsatt til resten. Det resulterende bunnfallet ble samlet ved filtrering og tørket. Bunnfallet ble løst opp i DMF (160 ml) og oppløsningen ble avkjølt med is. Deretter ble diisopropyletylamin (5.30 ml, 30.36 mmol) tilsatt. Boc-Asp(OBzl)-0NB [fremstilt fra Boc-Asp(OBzl)-0H (9.68 g, 30 mmol), HONB (5.91 g, 33.0 mmol) og DCC (6.81 g, 33.0 mmol)] ble ytterligere tilsatt og etterfulgt av omrøring over natt. Det resulterende uoppløselige materialet ble separert ved filtrering og etterfulgt av konsentrering. Resten ble løst opp i etylacetat og oppløsningen ble vasket med vann, 10* vandig sitronsyre, mettet vandig oppløsning av NaCl, mettet vandig oppløsning av NaHCOs og mettet vandig oppløsning av NaCl. Etter tørking med NagSC^ ble oppløsningsmidlet fjernet ved avdampning. Eter-petroleumeter ble tilsatt resten for å oppnå et bunnfall.

Utbytte: 20.31 g (97.6*)

Smeltepunkt: 67.0 - 68.5°C, Rf1: 0.61, Rf2: 0.83

[a]D<25> -52.0° (c = 1.03, i DMF)

Elementanalyse: Cs^B^^OgS

Beregnet: C, 62.32; H, 6.25; N, 6.06; Funnet: C, 62.34; H, 6.36; N, 6.20.

(4) Fremstilling av Boc-Asn(NHCH2CH2Ind)-Asp(0Bzl)-D-Thg(2)-Leu-0Pac

I 30 ml dioksan ble det løst opp 20.1 g (29.0 mmol) Boc-Asp(0Bzl)-D-Thg(2)-Leu-OPac fremstilt i (3) og 10 N-HCl/dioksan (150 ml) ble tilsatt under isavkjøling etterfulgt av omrøring i 15 minutter. Oppløsningsmidlet ble fjernet ved avdampning under redusert trykk og eter ble tilsatt til resten. Det resulterende bunnfallet ble samlet ved filtrering og tørket. Bunnfallet ble løst opp i DMF (240 ml) og oppløsningen ble avkjølt med is. Deretter ble diisopropyletylamin (5.05 ml, 29.0 mmol) tilsatt. Boc-Asn(CH2CH2-Ind)-ONB [fremstilt fra Boc-Asn(NHCH2CH2Ind )-0H (fremstilt fra Boc-Asn(NHCH2CHInd)-0H-CHA (14.5 g, 30.45 mmol)), HONB (5.72 g, 31.9 mmol) og DCC (6.58 g, 31.9 mmol)] ble videre tilsatt og dette ble etterfulgt av omrøring over natt. Det resulterende uoppløselige materialet ble separert ved filtrering og etterfulgt av konsentrering av filtratet for å oppnå resten. Etylacetat-eter (1:1) ble tilsatt til resten for å oppnå et bunnfall.

Utbytte: 26.68 g (96.7*)

Smeltepunkt: 178.0 - 180.5°C, Rf1: 0.38, Rf2: 0.77

[a]D2<5> -44.8° (c = 1.03, i DMF)

Elementanalyse: C50H53N5O11<S>

Beregnet: C, 63.14; H, 6.15; N, 8.84; Funnet: C, 62.85; H, 6.11; N, 8.80.

(5) Fremstilling av Boc-D-Asp(OBzl)-Asn(NHCH2CH2Ind)-Asp(0Bzl )-D-Thg(2)-Leu-0Pac

I 25 ml dioksan ble det løst opp 24.7 g (26.0 mmol) Boc-Asn(CH2CH2-Ind)-Asp(0Bzl)-D-Thg(2)-Leu-0Pac fremstilt i (4) og 10 N-HC1/dioksan (130 ml) ble tilsatt under isavkjøling og etterfulgt av omrøring i 15 minutter. Oppløsningsmidlet ble fjernet ved avdampning under redusert trykk og eter ble tilsatt til resten. Det resulterende bunnfallet ble samlet ved filtrering og tørket. Bunnfallet ble løst opp i DMF (200 ml) og diisopropyletylamin (4.53 ml, 26.0 mmol) ble tilsatt under isavkjøling. Boc-D-Asp(OBzl)-0NB [fremstilt fra Boc-D-Asp(0Bzl)-0H (8.82 g, 27.3 mmol), HONB (5.12 g, 28.6 mmol) og DCC (5.90 g, 28.6 mmol)] ble videre tilsatt og etterfulgt av omrøring over natt. Det resulterende uoppløselige materialet ble separert ved filtrering og etterfulgt av konsentrering av filtratet for å oppnå resten. Resten ble oppløst i etylacetat og oppløsningen ble vasket med vann, 10* vandig sitronsyre, mettet vandig oppløsning av NaCl, mettet vandig oppløsning av NaHC03 og mettet vandig oppløsning av NaCl. Etter tørking med Na2S04 ble oppløsningsmidlet fjernet ved avdampning. Etylacetat-eter ble tilsatt til restén for å oppnå et bunnfall.

Utbytte: 25.82 g (85.9*)

Smeltepunkt: 148.0 - 150.0°C, Rf1: 0.54, Rf2: 0.78

[a]D2<5> -38.9° (c = 1.04, i DMF)

Elementanalyse: C^iH^gNyO-i^S

Beregnet: C, 63.36; H, 6.01; N, 8.48; Funnet: C, 63.15; H, 6.00; N, 8.45;

(6) Fremstilling av Boc-D-Trp-D-Asp(OBzl)-Asn(NHCH2CH2Ind )-Asp(0Bzl)-D-Thg(2)-Leu-0Pac

I 22 ml dioksan ble det tilsatt 25.44 g (22.0 mmol) Boc-D-Asp(0Bzl )-Asn ( NHCH2CH2 Ind )-Asp ( OBzl )-D-Thg( 2 )-Leu-OPac fremstilt i (5) og 10 N-HCl/dioksan (110 ml) ble tilsatt under isavkjøling og etterfulgt av omrøring i 15 minutter. Oppløsningsmidlet ble fjernet ved avdampning under redusert trykk og eter ble tilsatt til resten. Det resulterende bunnfallet ble samlet ved filtrering og tørket. Bunnfallet ble løst opp i DMF (200 ml) og oppløsningen ble avkjølt med is. Deretter ble diisopropyletylamin (3.83 ml, 22.0 mmol) tilsatt. Boc-D-Trp-0NB [fremstilt fra Boc-D-Trp-OH (6.70 g, 22.0 mmol), HONB (4.34 g, 24.2 mmol) og DCC (5.00 g, 24.2 mmol)] ble ytterligere tilsatt og etterfulgt av omrøring over natt. Det resulterende uoppløselige materialet ble separert ved filtrering og etterfulgt av konsentrering av filtratet for å oppnå resten. Resten ble løst opp i kloroform og oppløsningen ble vasket med vann, 10* vandig sitronsyre, mettet vandig oppløsning av NaCl, mettet vandig oppløsning av NaHC03 og mettet vandig oppløsning av NaCl. Etter tørking med Na2S04 ble oppløsningsmidlet fjernet ved avdampning. Resten ble renset ved silika gelkolonne-kromatografi (9.5 cm x 50 cm, 0.5* metanol-kloroform). Eter-petroleumeter ble tilsatt til det rensete produktet for å oppnå et bunnfall.

Utbytte: 20.10 g (68.0*)

Smeltepunkt: 172.0 - 173.5°C, Rf1: 0.52, Rf2 : 0.77

[a]D2<5> -24.1° (c = 1.05, i DMF)

Elementanalyse: CygHygNg<O>ig<S>

Beregnet: C, 64.41; E, 5.93; N, 9.39; Funnet: C, 64,35; H, 5.99; N, 9.22.

(7) Fremstilling av Boc-D-Trp-D-Asp(OBzl)-Asn(NHCH2CH2Ind )-Asp(OBzl)-D-Thg(2)-Leu-OH

I 500 ml av en 90* vandig oppløsning av eddiksyre ble det løst opp 6.71 g (5.00 mmol) Boc-D-Trp-D-Asp(OBzl )-Asn(NHCH2CH2Ind)-Asp(OBzl)-D-Thg(2)-Leu-0Pac fremstilt i (6) og 16.33 g (250.0 mmol) sinkpulver ble tilsatt og etterfulgt av omrøring i 1 time. Sinkpulveret ble separert ved filtrering og filtratet ble konsentrert. Resten ble løst opp i etylacetat og oppløsningen ble vasket med 10* vandig sitronsyre og en mettet vandig oppløsning av NaCl. Etter tørking med Na2S04 ble oppløsningsmidlet fjernet ved avdampning. Eter ble tilsatt til resten for å oppnå et bunnfall.

Utbytte: 6.00 g (98.0*)

Smeltepunkt: 120.0 - 122.0°C, Rf1: 0.00, Rf2: 0.67

[a]D2<5> -18.8° (c = 1.03, i DMF)

Elementanalyse: C^B^NgO-j^S

Beregnet: C, 62.78; H, 6.01; N, 10.30; Funnet: C, 62.66; H, 5.96; N, 10.06.

(8) Fremstilling av cyklo[-D-Asp(OBzl)-Asn(NHCH2CH2Ind )-Asp(0Bzl)-D-Thg(2)-Leu-D-Trp-]

I 80 ml DMF ble det løst opp 5.82 g (4.75 mmol) Boc-D-Trp-D-Asp(0Bzl)-Asn(NHCH2CH2Ind)-Asp(OBzl)-D-Thg(2)-Leu-0H fremstilt i (7) og oppløsningen ble avkjølt med is. Deretter ble HONB (1.70 g, 9.50 mmol) og DCC (1.96 g, 9.50 mmol) tilsatt og etterfulgt av omrøring over natt. Det resulterende uoppløselige materialet ble separert ved filtrering og etterfulgt av konsentrering av filtratet for å oppnå resten. Deretter ble eter-petroleumeter tilsatt til resten for å separere ut et bunnfall som ble samlet ved filtrering. Bunnfallet ble løst opp i dioksan (5 ml) og 10 N-HC1/dioksan (50 ml) ble tilsatt under isavkjøling og etterfulgt av omrøring i 5 minutter. Etter konsentrering av filtratet for å oppnå resten ble eter tilsatt til resten. Det resulterende bunnfallet ble samlet ved filtrering og tørket. Bunnfallet ble løst opp i DMF (100 ml). Oppløsningen ble dråpevis tilsatt til 900 ml DMF inneholdende diisopropyletylamin (8.27 ml, 47.5 mol) i 30 minutter og etterfulgt av omrøring over natt. Oppløsningsmidlet ble fjernet ved avdampning og destillert vann ble tilsatt til resten. Det resulterende bunnfallet ble samlet ved filtrering. Bunnfallet ble løst opp i DMF og etterfulgt av konsentrering av filtratet for å oppnå resten. Deretter ble eter tilsatt til resten for å separere ut et bunnfall som ble samlet ved filtrering, vasket med acetonitril og tørket.

Utbytte: 4.75 g (90.4*)

(9) Fremstilling av cyklo[-D-Asp-Asn(NHCH2CH2Ind)-Asp-D-Thg(2)-Leu-D-Trp-]

I 100 ml DMF ble det løst opp 2.00 g (1.81 mmol) cyklo[-D-Asp(0Bzl)-Asn(NHCH2CH2Ind)-Asp(OBzl)-D-Thg(2 )-Leu-D-Trp-] fremstilt i (8) og 1 g trekull ble tilsatt og etterfulgt av omrøring. Trekullet ble fjernet ved filtrering og 1 g palladium svart ble tilsatt til filtratet. Blandingen ble omrørt i en hydrogenstrøm ved romtemperatur i 6 timer. I tillegg ble det tilsatt 1 g palladium svart og blandingen ble omrørt i en hydrogenstrøm ved romtemperatur i 6 timer. Katalysatoren ble fjernet ved filtrering og oppløsningsmidlet ble fjernet ved avdampning under redusert trykk. Deretter ble eter tilsatt for å oppnå et bunnfall.

Utbytte: 1.68 g (kvant.).

Av dette bunnfallet ble 1.50 g renset ved revers fase væskekromatografi [kolonne: YMC-Pack R & D D-0DS-5B (3 cm x 25 cm), oppløsningsmiddel: 30* - 40* acetonitril (30 minutter)/- H20 (0.1* TFA)].

Utbytte: 1.11 g

LSIMS (M + H<+>) = 926, (teoretisk verdi) = 926

(10) Fremstilling av cyklo[-D-Asp-Asn(NHCH2CH2Ind)-Asp-D-Thg(2)-Leu-D-Trp-]•2Na

I 60 ml acetonitril ble det suspendert 3.00 g (3.24 mmol) cyklo[-D-Asp-Asn(NHCH2CH2Ind) -Asp-D-Thg( 2 ) -Leu-D-Trp-] fremstilt i (9) og suspensjonen ble dråpevis tilsatt til 240 ml av en vandig oppløsning av natrium karbonat (343.4 mg, 3.24 mmol). Etter omrøring ved romtemperatur i 15 minutter ble pH justert til 7.0 med en 0.1 M vandig oppløsning av natriumkarbonat og etterfulgt av konsentrering under redusert trykk. Det resulterende produktet ble løst opp i 100 ml destillert vann og utsatt for lyofilisering.

Utbytte: 2.80 g

Eksemplene 15- 52. 57- 78. 83 - 87 og 91 - 96.

I henhold til fremgangsmåtene i Eksemplene 1-14 (A), fremgangsmåtene ifølge Eksemplene 53 - 56 og 88 - 90 (B) eller fremgangsmåtene ifølge Eksemplene 79 - 82 (C) ble følgende forbindelser fremstilt:

Eksempel

Eksemplene 97 - 203

I henhold til en hvilken som helst av fremgangsmåtene (A),

(B) og (C) nevnt ovenfor kan følgende forbindelser bli fremstilt: Eksempel

I ovennevnte formler representerer RI og R16 følgende grupper:

Eksperimentelt Eksempel 1

Analyse av affinitet for Reseptor (1)... Bindingsaktivitet på ET^ Reseptor.

En membranfraksjon fremstilt fra grisehjerte ble fortynnet til 0.15 mg/ml ved anvendelse av en bufferoppløsning for analysen, og 100 pl av den resulterende suspensjonen av membranfraksjonen ble heilt inn i hvert analyserør for å anvende i analysen. Til denne suspensjonen av membranfraksjonen ble det tilsatt 2 pl 5 nM <125>I-merket endotelin-1 oppløsning. Videre ble det tilsatt 3 pl av en test peptid-oppløsning og etterfulgt av inkubasjon ved en temperatur på 25<0>C i 1 time. Deretter ble den resulterende suspensjonen fortynnet med 900 pl bufferoppløsning for analysen avkjølt med is og deretter separert inn i en supernatant og et presipitat ved sentrifugering ved 12.000 x g i 10 minutter. Cellemembraner og en endotelin-reseptor A (ET^) innbefattet deri ble innbefattet i bunnfallet, og radioaktivt jod-merket endotelin kombinert med reseptoren ble også isolert i bunnfallet. Mengden radioaktiv jod-merket endotelin kombinert med endotelinreseptor A (ET^) ble dermed bestemt ved måling av mengden av radioaktivt jod innbefattet i bunnfallet med en gamma-stråleteller. Resultatene er som vist i Tabell 1 angitt nedenfor. Det sykliske pentapeptidet beskrevet i japansk patentsøknad nr. 2-413328/1990, cyklo[-D-Glu-Ala-D-alle-Leu-D-Trp-], ble anvendt som en kontrollforbindelse. Den numeriske verdien til ET^ vist i Tabell 1 er verdien for spesifikk aktivitet og bindingsaktiviteten til dette sykliske pentapeptidet på reseptoren A ble angitt som 1.0. Bindingsaktiviteten (IC50) til dette sykliske pentapeptidet på ET^ reseptoren er 2 x 10~<6> M.

Eksperimentelt Eksempel 2

Analyse av affinitet for Reseptor (2) Bindingsaktivitet på ETB Reseptor <«>1.

En membranfraksjon fremstilt fra bovin hjerne ble fortynnet til 0.15 mg/ml ved anvendelse av en bufferoppløsning for analysen, og 100 pl av den resulterende suspensjonen av membran-fraksjonen ble heilt inn i hvert analyserør for bruk i analysen. Til denne suspensjonen av membranfraksjonen ble det tilsatt 2 pl 5 nM <125>j merket endotelin-1 oppløsning. Videre ble 3 pl av testpeptid-oppløsningen tilsatt og etterfulgt av inkubasjon ved en temperatur på 25°C i 1 time. Deretter ble den resulterende suspensjonen fortynnet med 900 pl bufferoppløsning for analyse avkjølt med is, og deretter separert i en supernatant og et bunnfall ved sentrifugering ved 12.000 x g i 10 minutter. Cellemembranene og en endotelinreseptor B (ETg) innbefattet deri var innbefattet i bunnfallet, og radioaktiv jod-merket endotelin bundet til reseptoren ble også isolert i bunnfallet. Mengden av radioaktiv jod-merket endotelin bundet til endotelin reseptor B (ETg) ble bestemt ved måling av mengden av radioaktivt jod innbefattet i bunnfallet med en gamma-stråle teller. Resultatene er som vist i Tabell 1 angitt nedenfor. Den numeriske verdien av ETg vist i Tabell 1 er verdien for spesifikk aktivitet, idet bindingsaktiviteten til forbindelsen i Eksempel 8 for reseptoren B er angitt til 100. Bindingsaktiviteten (IC50) til forbindelsen ifølge Eksempel 8 på ETg reseptoren er 3 x IO"<6> M. Ifølge samme analyse var verdien av den spesifikke aktiviteten til pentapeptidet beskrevet i europeisk patent publikasjon nr. 436.189, cyklo[-D-Asp-Pro-D-val-Lau-D-Trp-], og det til ovennevnte sykliske pentapeptidet beskrevet i japansk patentsøknad nr. 2-413328/1990, cyklo[-D-Glu-Ala-D-aIle-Leu-D-Trp-], var mindre enn 1.

Eksperimentelt Eksempel 2 '

ETg Radio Reseptor Analyse «2

I endotelin radioreseptor analysen ble nyrer fra marsvin anvendt. Marsvinene (Std. Hartrey, hann 250 g, Japan SLC Ltd.) ble gitt en hjernerystelse og ofret ved blodtapping fra karotid arteriene for å ta ut nyrene og fjerne fettet derifra for å preparere nyrene. De oppnådde nyrene ble kuttet opp og homogenisert i politron homogenisator i 20 ml 50 mM Tris-HCl buffer [pH 7.4; 20 mM NaHC03, 0.1 mM PMSF (fenylmetylsulfonyl fluorid), 1 mM EDTA (etylendiamintetra eddiksyre)] pr. nyre. Den homogeniserte nyren ble utsatt for sentrifugering ved 1000 x g i 15 minutter og supernatanten ble ytterligere utsatt for en sentrifugering i 20 minutter ved 30.000 x g. Det resulterende bunnfallet ble vasket to ganger med 50 mM Tris-HCl buffer (pH 7.4) inneholdende 0.1 mM PMSF, 1 mM EDTA. Resten ble lagret ved -80°C som en rå reseptormembran-fraksjon og ble anvendt som suspensjonen i følgende buffer når nødvendig.

740 Bq av <125>I-endotelin-l (81.4 TBq/mmol, Du Pont, USA) som en radioligand, den rå membranfraksjonen (2.1 ug protein) og prøvene ble tilsatt til følgende buffer. Reaksjonen ble utført ved 37°C i 90 minutter i 0.2 ml buffer [50 mM Tris-HCl buffer (pH 7.4) inneholdende 0.1 mM PMSF, 1 mM EDTA, 0.2* bovint serum albumin].

Reaksjonen ble stoppet ved hurtigfiltrering på et glassfilter (GF/B, Wattman, USA) på Cell Harvestor (290 PHD, Cambridge-Technology, Great Britain), og filteret ble vasket tre ganger med 50 mM Tris-HCl buffer (pH 7.4). Radioaktiviteten forble på filteret og ble analysert i en gammateller.

Resultatene er vist i Tabell 1.

Eksperimentelt Eksempel 3

Analyse av Affinitet for Reseptor (3) .... Bindingsinhibiter-ende aktivitet på NK2 reseptor.

Fremgangsmåten til Paul L.M. Van Giersgbergen et al. [Proe. Nati. Acad.Sci., U.S.A., 88, 1661 (1991) ble modifisert i denne analysen. Membranfraksjonen inneholdende reseptorer ble preparert fra den indre veggen av den tredje okseraagen (oppnådd fra Kyoto Chuo Chikusan Fukuseibutsu Oroshi Kyoukai).

Den indre veggen til den tredje oksemagen ble lagret ved-80°C og ble kuttet til 1 cm x 1 cm eller mindre, og nedbrudt i 3 liter/kg 50 mM Tris-HCl buffer (pH 7.4) supplementert med 120 mM natriumklorid, 5 mM kal iumklor id, 0.02* BSA og 5* sukrose ved anvendelse av en polytron homogenisator (Kinematika, Tyskland). Deretter ble det nedbrudte produktet sentrifugert ved 1.000 x g i 10 minutter. Supernatanten ble videre sentrifugert ved 45.000 x g i 20 minutter. Bunnfallet ble suspendert i 200 ml 50 mM Tris-HCl buffer (pH 7.4) supplementert med 300 mM kaliumklorid, 10 mM etylendiamin-tetraeddiksyre, 0.1 mM fenylmetylsulfoniumfluorid og 0.02* BSA og forsiktig omrørt under isavkjøling i 60 minutter. Suspensjonen ble sentrifugert ved 45.000 x g i 20 minutter. Bunnfallet ble vasket med 200 ml 50 mM Tris-HCl buffer (pH 7.4) og lagret i frossen tilstand ved -40°C som en reseptor-prøve.

Denne prøven ble suspendert i en reaksjonsbuffer-oppløsning [50 mM Tris-HCl buffer (pH 7.4), 0.02* bovint serum albumin og 4 mM manganklorid] for å tilveiebringe en proteinkonsen-trasjon på 0.7 mg/ml og 100 pl derav ble anvendt i reaksjonen. En testprøve og 12<5>I-NKA (0.61 KBq, 125I-neurokinin A, 81.4 TBq/mmol, Du Pont/NEN Research Products, U.S.A.) ble også tilsatt og omsatt i 0.2 ml av reaksjonsbuffer-oppløs-ningen ved 25°C i 3 timer. Reaksjonsblandingen ble hurtig filtrert gjennom et glassfilter (GF/B, Whatman, U.S.A.) ved anvendelse av en cellehøster (Type 290PHD, Cambridge Technology Inc.) for å bestemme reaksjonen, og vasket tre ganger med 250 pl 50 mM Tris-HCl buffer (pH 7.4) supplementert med 0.02* bovint serum albumin. Radioaktiviteten som var igjen på filteret ble målt med en gamma-stråle teller. Resultatene er vist i Tabell 1 som bindingsinhiberende aktivitet (IC50, enhet: pM) på NK2 reseptoren.

Claims

1. Kjemisk forbindelse, karakterisert ved at den omfatter et syklisk peptid representert ved formel [I] eller et salt derav: hvori X og Y hver betyr a-aminosyre-residier, A betyr et D-acidisk-a-aminosyre residie, B betyr et nøytralt-a-aminosyre-residie, C betyr et L-a-aminosyre-residie og D betyr et D-a-aminosyre-residie som har en aromatisk ring-gruppe; hvori hydroksy, tiol, amino, imino og karboksylgruppene kan bli substituert eller være usubstituerte.

2. Forbindelse ifølge krav 1, karakterisert ved at X har L-konfigurasjon.

3. Forbindelse ifølge krav 1, karakterisert ved at Y har L-konfigurasjon.

4 . Forbindelse ifølge krav 1, karakterisert ved at A velges fra gruppen bestående av D-glutaminsyre, D-asparaginsyre, D-cysteinsyre og D-p-(5-tetrazolyl)alanin.

5 . Forbindelse ifølge krav 1, karakterisert ved at B har D-konfigurasjon.

6. Forbindelse ifølge krav 1, karakterisert ved at B blir valgt fra gruppen bestående av 1-aminocyklopropan-1-karboksylsyre, 1-aminocyklobutan-l-karboksylsyre, 1-aminocyklopentan-l-karboksylsyre, 1-aminocykloheksan-l-karboksylsyre og 1-aminocykloheptan-l-karboksylsyre.

7. Forbindelse ifølge krav 1, karakterisert ved at B velges fra gruppen bestående av D-leucin, D-alloisoleucin, D-tertiarleucin, D-gammametylleucin, D-fenylglycin, D-2-tienyhlglycin, D-3-tienylglycin, D-cyklopentylglycin, D-fenylalanin, D-2-tienylalanin, D-valin, D-2-furylglycin og D-3-furylglycin.

8. Forbindelse ifølge krav 1, karakterisert ved at C velges fra gruppen bestående av L-leucin, L-isoleucin, L-valin, L-norleucin og L-a-aminosyre-residie med aromatisk del.

9. Forbindelse ifølge krav 8, karakterisert ved at C velges fra gruppen bestående av L-leucin, L-fenylalanin og L-tryptofan.

10. Forbindelse ifølge krav 1, karakterisert ved at D er D-tryptofan, eller et derivat derav, D-l-naftylalanin, D-2-naftylalanin, D-benzotienylalanin, D-4-bisfenyl-alanin og D-pentametylfenylalanin.

11. Forbindelse ifølge krav 10, karakterisert ved at tryptofanderivatet blir valgt fra gruppen bestående av D-Nin-metyltryptofan, D-Nin-formyltryptofan og D-Nin-formyltryptofan og D-Nin<->acetyltryptofan.

12. Forbindelse ifølge krav 1, karakterisert ved at A er D-asparaginsyre; X er tryptofan, L-(p<->4-fenyl- piperazinamid )asparaginsyre, L-(N^-fenylacetyl)ornitin, L-(N<4->[indol-3-yl]etyl)ornitin, L-(4-benzyloksy)prolin, L-(N<5->benzyl)glutamin eller L-(N^-[indol-3-yl]acetyl)asparagin residie; Y er L-leucin, L-asparaginsyre, L-O-benzylserin, tryptofan, serin eller prolin; B er D-leucin, D-2-tienylglycin eller D-3-tienylglycin; C er L-leucin; og D er D-tryptofan.

13. Forbindelse ifølge krav 1, karakterisert ved i at den er cyklo[-D-Asp-Trp-Asp-D-Leu-Leu-D-Trp-] , cyklo[-D-Asp-Asn(CH2CH2-Ind)-Asp-D-Leu-Leu-D-Trp-], cyklo[-D-Asp-Trp-Leu-D-Leu-Leu-D-Trp-], cyklo[-D-Asp-Trp-Ser(Bzl)-D-Leu-Leu-D-Trp-], cyklo[-D-Asp-Trp-Asp-D-Leu-Leu-D-Trp(Ac)-], cyklo[-D-Asp-Trp-Asp-D-Thi-Leu-D-Trp-], cyklo[-D-Asp-Trp-Asp-D- -yMeLeu-Leu-D-Trp-] , cyklo[-D-Asp-Trp-Asp-D-Thg(2 )-Leu-D-Trp-], cyklo[-D-Asp-Trp-Asp-D-Phe-Leu-D-Trp-], cyklo[-D-Asp-Asp(Rl)-Asp-D-Leu-Leu-D-Trp-], cyklo[-D-Asp-Orn(C0CH2Ph)-Asp-D-Leu-Leu-D-Trp-], cyklo[-D-Asp-Orn(C0CH2-Ind)-Asp-D-Leu-Leu-D-Trp-], cyklo[-D-Asp-Hyp(Bzl)-Asp-D-Thg(2)-Leu-D-Trp-], cyklo[-D-Asp-Glu(Bzl)-Asp-D-Thg(2)-Leu-D-Trp-], cyklo[-D-Asp-Asn(CH2CH2Ind )-Asp-D-Thg(2)-Leu-D-Trp-] eller cyklo[-D-Asp-Asp(Rl)-Asp-D-Thg(2)-Leu-D-Trp-] .

14 . Farmasøytisk preparat, karakterisert ved at det inneholder peptidet ifølge krav 1 eller et farmasøy-tisk akseptabelt salt derav.

15 . Anvendelse av forbindelsen ifølge krav 1 eller det farmasøy-tisk akseptable saltet derav for fremstilling av et farmasøy-tisk preparat som har antagonistisk aktivitet på endotelin reseptorer og NK2 reseptorene.