DE69104257T2

DE69104257T2 - Aus Labiatae gewonnene Antioxidant-Zusammensetzung.

Info

Publication number: DE69104257T2
Application number: DE69104257T
Authority: DE
Inventors: David A Evans; Grigory Frakman; Nguyen Uy Nguyen Uy
Original assignee: Norac Technologies Inc
Current assignee: Norac Technologies Inc
Priority date: 1990-04-25
Filing date: 1991-04-24
Publication date: 1995-05-24
Anticipated expiration: 2011-04-25
Also published as: DE69104257D1; ES2064798T3; EP0454097B1; EP0454097A1; JP3194984B2; ATE112141T1; JPH04227680A; DK0454097T3

Description

Diese Erfindung betrifft Zusammensetzungen aus natürlichen Labiatae Kräuterextrakten, welche, wenn sie mit vorher bekannten Extraktzusammensetzungen verglichen werden, eine erhöhte antioxidierende Aktivität zeigen.
Tierische und pflanzliche Feüte und Öle (zusammen mit Nahrungsmitteln, kosmetischen und Gesundheits-Vorsorgeprodukten, welche diese enthalten) unterliegen bei der Lagerung einer oxidativen Ranzigkeit. Eine solche oxidative Verschlechterung wird beim Kochen beschleunigt und führt zu einer unangenehmen schalen, ranzigen oder "wiederaufgewärmten" Geschmacksentwicklung. Der oxidative Prozeß schreitet, wenn er einmal gestartet wurde, mit einer Geschwindigkeit fort, welche proportional zu der Menge an anwesenden oxidativen Nebenprodukten ist, d.h. er schreitet exponentiell fort. Dieselben Prozesse können bei natürlichen Nahrungsmittel- und kosmetischen Farbstoffen, wie z.B. den Carotinoidpigmenten vorkommen, was zu unangenehmem Aroma und Geschmack und zu einem Verlust an Farbintensität führt. Da Geschmack, Geruch und Farbe die Hauptfaktoren sind, nach denen die Nahrungsmittelqualität beurteilt wird, werden Antioxidanzien, welche für die Beigabe zu Nahrungsmittelprodukten geeignet sind, nach ihrer Fähigkeit bewertet, den zerstörenden oxidativen Prozeß zu vermindern, um für eine längere Haltbarkeit zu sorgen.
Eine Anzahl von synthetischen chemischen Verbindungen werden als Antioxidanzien in der Nahrungsmittel- und kosmetischen Industrie verwendet. Diese Verbindungen bestehen hauptsächlich aus einer Gruppe von phenolischen Derivaten, welche BHA (butyliertes Hydroxyanisol), EHT (butyliertes Hydroxytoluol), Propylgallat und TBHQ (tertiäres Butylhydrochinon) umfassen. Da diese Antioxidanzien durch synthetische chemische Prozesse hergestellt werden, ist ihre Einbeziehung in Nahrungsmittelprodukte, in Bezug auf sowohl Verwendungsmenge und Anwendung auf Nahrungsmittelprodukte, durch Vorschriften stark beschränkt. Bei vielen Anwendungen sind sie vollständig verboten. Andere Probleme mit dieser Klasse von Verbindungen umfassen Wärinesensibilität, Entfärbung und Anfälligkeit für einen Verlust durch Dampfdestillation. Erst vor kurzem haben Forscher in Japan bei Laborexperimenten mit Ratten Verbindungen zwischen BHA und Krebs gefunden.
Einer der wichtigsten Verbrauchertrends in der Nahrungsmittelindustrie heute ist die Nachfrage nach "ganz natiirlichen" Nahrungsmittelprodukten, die frei von chemischen Zusätzen sind. Diese Nachfrage hat bestimmte natürliche Antioxidanzienmaterialien, welche aus Pflanzenquellen erhalten werden, in den Mittelpunkt des Interesses gerückt. Die meiste Arbeit auf diesem Gebiet hat sich auf die antioxidierende Aktivität von natürlichen Kräutern und Gewürzen, wie z.B. Gewürznelken, Ingwer, Muskatblüte, Muskatnuß und die Labiatae-Kräuter Rosmarin, Salbei, Thymian und Oregano konzentriert. Unglücklicherweise zeigen bestehende natürliche Antioxidanzien-Extrakte nicht einen Grad von antioxidierender Aktivität, welcher ausreicht, daß diese dem der synthetischen chemischen Antioxidanzien gleichkommen, zu deren Ersatz sie entworfen wurden. Ebenfalls führt der Ersatz von synthetischen chemischen Antioxidanzien durch natürliche Antioxidanzien-Extrakte gewöhnlich zu einer höheren Verwendungsmenge, und damit zu eineui höheren Kostenniveau. Beispielsweise haben mehrere der gegenwärtig zur Verfügung stehenden kommerziellen natürlichen Nahrungsmittel-Antioxidanzien-Extrakte empfohlene Verwendungsmengen zur Gleichwertigkeit mit BHA/BHT (1:1) bei 0,02% in Fett oder Öl wie folgt:
Rosemary Deodorised (CAL/Pfizer) 0,10%
Spice Extract AR (Nestle) 0,05%
Flavor Guard I (OM Ingredients Co.) 0,02%-0,06% Herbalox Typ "O" (Kalsec Inc.) 0,05%-0,10%
Weiterhin sind solche Produkte gewöhnlich mit unerwünschten Chemikalien, wie z.B. den organischen Lösungsmitteln Hexan, Methanol, Aceton und Methylethylketon in Kontakt gebracht worden, was mit dem bevorzugten Konzept eines ganz natürlichen Produktes in Konflikt steht.
Es besteht zweifellos eine Notwendigkeit für natürliche Antioxidanzien-Extrakte, welche nicht mit organischen Lösungsmitteln oder anderen unerwünschten Chemikalien in Kontakt gebracht worden sind, und in ihrer antioxidierenden Aktivität genügend konzentriert sind, um die synthetischen chemischen Antioxidanzien BHA und BHT auf einer 1:1-Basis vollständig zu ersetzen.
Verschiedene Verfahren zum Erhalten von Antioxidanzien- Extrakten aus beispielsweise Rosmarin sind offenbart worden. Die Hauptprobleme, welche gelöst werden müssen, sind, den Extrakt mit einer ausreichenden antioxidierenden Aktivität zu erhalten, um eine Verwendung mit den synthetischen Antioxidanzien entsprechenden Mengen (0,01 - 0,05% von Fett/Öl) zu erlauben, und Geschmack, Geruch und Farbbestandteile zu entfernen, welche in dem behandelten Nahrungsmittelprodukt bei den benötigten Verwendungsmengen nachweisbar sein könnten. Ein Überblick über den Stand der Technik zeigt, daß im allgemeinen die folgenden Methoden gelehrt werden, um Antioxidanzien-Extrakte aus den Kräutern der Familie Labiatae zu erhalten: Lösungsmittelextraktion (polar und unpolar), wäßrige alkalische Extraktion, Extraktion mit Pflanzenölen oder Mono- und Diglyceriden oder beiden, Dampfdestillation und molekulare Destillation. Diese Verfahren leiden an einer Anzahl von Nachteilen. Die verwendeten Lösungsmittel sind nicht wirklich selektiv für die aktiven Antioxidanzien-Verbindungen, und als Folge davon sind die resultierenden Extrakte nicht so stark, wie die synthetischen chemischen Antioxidanzien. Die verwendeten Lösungsmittel umfassen Verbindungen wie z.B. Hexan, Aceton und Methylchlorid, welche unerwünschte Rückstände in den Nahrungsmittelprodukten zurücklassen können und welche in manchen Fällen von der Verwendung in Nahrungsmitteln durch Verordnung ausgeschlossen sind. Verfahren, welche eine molekulare Destillation verwenden, um die aktive Fraktion zu konzentrieren und. um Farb-, Aroma- und Geschmacksbestandteile zu entfernen, führen aufgrund der Gegenwart des Destillationsträgers zu einem unterschiedlichen Typ von Verdünnungseffekt, was einen nachteiligen Einfluß auf die Löslichkeit des Extrakts in Fetten und Ölen hat.
Die Anwendung von überkritischem Kohlendioxid-Fluid auf die Extraktion und Fraktionierung von lipophilen Materialien ist von Stahl et al. in "Dense Gases for Extraction and Refining" (1987) besprochen worden. Tateo und Fellin, Perfumer and Flavorist, 13:48 (1988) beschreiben ein Verfahren, in welchem gemahlene Rosmarinblätter bei einem Druck von 300 bar und 35ºC einer Extraktion mit überkritischem Kohlendioxid unterworfen werden, um das Rosmarin- Oleoresin, welches das ätherische Öl enthält, zu entfernen. Der Rückstand der gemahlenen Blätter, welcher nach der Extraktion zurückbleibt, wird dann mit Ethylalkohol erneut extrahiert, filtriert, verdampft und getrocknet, um eine Antioxidanzien-Fraktion zu erhalten. Die antioxidierende Aktivität der Fraktion (Peroxidwert (mEq/kg) von Schweineschmalz (prime steam lard) bei 100ºC, 18 Stunden lang) war gleich mit einem ähnlichen Ethanolextrakt von einem Rückstand von gemahlenen Blättern, welcher nach Dampfdestillation, um das ätherische Öl zu entfernen, zurückblieb, und gleich mit einem kommerziellen Antioxidanzien-Extrakt (Rosemary Extract AR) , welcher durch eine kompliziertere Lösungsmitteltechnologie hergestellt wurde, aber weniger als BHA, welches in der gleichen Menge (0,03% Fett/Öl) verwendet wurde. Die Pfizer Corporation (ca. 1988) produziert ein kommerzielles Produkt (Rosemary Deodorised) , bei welchem die Oleoresinfraktion, welche durch Extrahieren des Rosmarins mit überkritischem Kohlendioxid erhalten wird, dann einer molekularen Destillation unterworfen wird, um Farbe und Geschmack zu verbessern. Das resultierende Produkt enthält ca. 80% Caprin- und Capryltriglyceride (der Destillationsträger), hat eine geringe Öllöslichkeit und eine relativ schwache antioxidierende Aktivität.
Der gegenwärtige internationale Handelsstandard ist Herbalox Seasoning Type "O" und abgeleitete Modifikationen, welche nach den US-Patenten Nr. 3,950,266, 4,283,429, 4,285,981, 4,315,947, 4,343,823 und 4,877,635 hergestellt werden. Bei den höheren Verwendungsmengen führt dieses Produkt zu einem ausgeprägten Rosmaringeschmack.
Die vorliegende Erfindung betrifft die Herstellung von verbesserten natürlichen Antioxidanzien-Extrakten aus domestizierten Kräutern der Familie Labiatae mittels einer überkritischen Extraktion und Fraktionierung mit Kohlendioxid unter bestimmten Arbeitsbedingungen. Ein neuer und unerwarteter Aspekt der Erfindung ist, daß die Antioxidanzien-Extrakte, die so erhalten werden, eine größere antioxidierende Aktivität zeigen, als Extrakte aus denselben Rohmaterialien, welche durch Verfahren nach dem Stand der Technik hergestellt wurden. Die optimale Verwendungsmenge für Extrakte aus Rosmarin und Salbei ist 0,02% in Fett/Öl, was einen Antioxidationsschutz ergibt, der wenigstens den synthetischen Antioxidanzien BHA/BHT (1:1) entspricht. Die Extrakte zeigen eine zufriedenstellende Fett/Öl-Löslichkeit, steuern wenig Farbe, Aroma und Geschmack bei, wenn sie mit den empfohlenen Mengen verwendet werden, und sind wegen ihrer geringen Verwendungsmengen kosteneffizienter als derzeit erhältliche Produkte, welche durch frühere Verfahren hergestellt wurden. Die Extrakte werden ohne die Verwendung von organischen Lösungsmitteln erhalten. Wenn es in der bevorzugten Form ausgeführt wird, liefert das Verfahren gleichzeitig ein wertvolles ätherisches Öl-Nebenprodukt, wodurch die Ökonomie des Verfahrens erhöht wird.

Stand der Technik

Chipault et al., Food Research 17:46 (1952), und Food Technology 10(5):209 (1956) zeigten, daß viele gemahlene Gewürze und ihre organischen Lösungsmittelextrakte eine antioxidierende Aktivität zeigten, wobei die Labiatae-Mitglieder Rosmarin und Salbei am stärksten waren.
Brieskorn et al., J. Org. Chem. 29:2293 (1964) isolierten ein phenolisches Diterpenlacton aus dem Ferruginoltyp von Blättern von Rosmarinus officinalis und Salvia officinalis, von dem gezeigt wurde, daß es Carnosol ist. Später jedoch zeigten Wenkert et al., J. Org. Chem. 30:2931 (1965), daß der Hauptterpenbestandteil von Rosmarinblättern Carnosinsäure (carnosic acid) war, und daß Carnosol ein künstlich produziertes Derivat war, welches aus der leichten oxidativen Umwandlung von Carnosinsäure resultierte. In 1969 zeigten Brieskorn und Domling, Zeitschrift für Lebensmitteluntersuchung und -forschung 141(1):10 (1969), daß Carnosinsäure und Carnosol ausgezeichnete Antioxidanzien waren, und daß die Antioxidationseigenschaft von Rosmarin und Salbei durch die Anwesenheit von Carnosinsäure in den Blättern dieser Pflanzen verursacht wurde. Von der antioxidierenden Aktivität von Carnosinsäure und Carnosol wurde gezeigt, daß sie der des synthetischen Antioxidans BHT entspricht.
Zwei weitere kleinere aber strukturell verwandte Antioxidanzien sind aus Rosmarinblättern isoliert und identifiziert worden. Diese sind Rosmanol (Nakatani und Inatani, Agric. Biol. Chem. 45(10):2385 (1981); Inatani et al., Agric. Biol. Chem. 46(6) 1661 (1982); Inatani et al., Agric. Biol. Chem. 47(3):521 (1983)) und Rosmaridiphenol (Houlihan et al., JOACS 61(6):1036 (1984)). Während Rosmaridiphenol eine den synthetischen Antioxidanzien BHA und BHT entsprechende antioxidierende Aktivität zeigte, zeigte Rosmanol viermal diese Aktivität.
Die chemischen Strukturen von Carnosinsäure, Carnosol, Rosmanol, Rosmaridiphenol und einer weiteren Verbindung, Carnosinsäuremethylester (Methylcarnosat) sind wie folgt: Carnosinsäure Carnosol Rosmanol Rosmaridiphenol Methylcarnosat
Ein natürlicher Labiatae-Kräuterextrakt mit bevorzugten Antioxidationseigenschaften würde ein solcher sein, welcher die höchste Konzentration der natürlichen Antioxidanzien- Verbindung Carnosinsäure enthielte. Weiterhin ist es wünschenswert, daß ein solcher Extrakt, welcher für eine Verwendung in der Nahrungsmittel- und kosmetischen Industrie entworfen ist, frei von einer früheren Reaktion mit schädlichen synthetischen Chemikalien,. wie z.B. den organischen Lösungsmitteln Hexan, Methanol und Aceton, ist. Zur Erleichterung bei der Anwendung sollte der bevorzugte Extrakt öl- und fettlöslich sein und in manchen Fällen in nahrungsmittelgeeignetem Getreidealkohol löslich sein. Es ist sehr wichtig, daß der bevorzugte Extrakt wenig ätherische Öl-Bestandteile enthält, welche unerwünschte Geschmacks- und Aromaeigenschaften von dem Kraut zu dem Endprodukt übertragen könnten.
Ein Überblick über den Stand der Technik zeigt, daß die bestehenden Extrakte aus Labiatae-Kräutern mit Antioxidationseigenschaften an einer Anzahl von Nachteilen leiden. Diese umfassen: Kontakt mit unerwünschten organischen Lösungsmitteln, die nicht-selektive Extraktion der Labiatae- Kräuter, welche zu einer geringen Konzentration an Antioxidanzienverbindungen in dem Extrakt führt, die Anwesenheit von unerwünschten ätherischen Öl-Bestandteilen, welche durch einen zusätzlichen Verfahrens schritt entfernt werden müssen, die Bildung des oxidativen Derivates Carnosol aus Carnosinsäure, als Folge von chemischen Herstellungsmethoden, und die weitere Verdünnung der Antioxidanskonzentration in dem Extrakt, welche aus der Zugabe von Mono-, Di- und Triglyceriden während der Extraktion, um die Löslichkeit zu erhöhen oder um als Träger für die Destillation oder molekulare Destillation zu dienen, resultiert. Diese letztere Verdünnung hemmt weiter die Löslichkeit in nahrungsmittel- und kosmetikgeeignetem Getreidealkohol.
Chang offenbart im US-Patent Nr. 3,950,266 die Verwendung von organischen Lösungsmitteln, wie z.B. Ethylether und Methanol, um Rosmarin- und Salbeiblätter zu extrahieren. Der Extrakt benötigt dann vor einer Vakuum- oder molekularen Destillation weitere Verdünnung in Pflanzenöl, um Geschmacks- und Aromabestandteile von ätherischem Öl zu entfernen. Wu et al., JAOCS.59(8):339 (1982), welcher einer modifizierten Methode von Chang folgen, zeigten, daß die Hauptantioxidansverbindung in dem Extrakt Carnosol war, welches verglichen mit der bekannten Bitterkeit von Rosmarin- und Salbei-Antioxidanzien-Extrakten geschmacklos war. Offensichtlich wurde die natürliche Carnosinsäure als ein Ergebnis des Verfahrens zu dem Derivat Carnosol oxidiert.
Kimura offenbart in US-Patent Nr. 4,380,586 die Verwendung von Ethanol/Hexan-Mischungen, während Aesbach und Philippossian im Schweizer Patent Nr. 672,048,A5 die Verwendung von Hexan, gefolgt von Ethanolextraktion des Rückstands, beschreiben. Inatani et al. (ibid 1983) fanden bei der Verwendung eines ähnlichen Verfahrens (Hexan/Ethanol) heraus, daß der aktivste Antioxidanzien-Bestandteil das oxidative Derivat Carnosol ist.
Todd offenbart im US-Patent Nr. 4,877,635 die Verwendung von Aceton oder anderen organischen Lösungsmitteln, gefolgt von Aceton in einem Ausfällungsschritt, um in Aceton unlösliche oxidationsfördernde Substanzen zu entfernen. In einer bevorzugten Ausführungsform wird der Extrakt 50% mit Mono-, Di- und Triglyceriden während der Verarbeitung verdünnt. Eine Dampfdestillation wird immer noch vorgeschlagen, um die ätherischen Öl-Bestandteile zu entfernen.
Kimura extrahiert in US-Patent Nr. 4,363,823 frische oder vorher dampfdestillierte Kräuter mit Alkohol und verdampft dann den Alkohol, um ein breiförmiges Produkt zu bilden. Eine weitere Behandlung mit kochendem Wasser kann fölgen, um den wasserunlöslichen Niederschlag zu sammeln, welcher dann getrocknet werden kann. Das resultierende Produkt hat wegen der wenig selektiven Natur des Alkohollösungsmittels eine geringe antioxidierende Aktivität.
Berner extrahiert im US-Patent Nr. 3,732,111 das gemahlene trockene Gewürz mit heißem Speiseöl und entfernt das ätherische Öl mit Dampf unter Vakuum, was zu einem verdünnten Extrakt der Antioxidanzien-Verbindungen führt, welcher nicht konzentriert werden kann. Das Produkt ist nicht ethanollöslich.
Tateo und Fellin, Perfumer and Flavorist 13:48 (1988) beschreiben die Verwendung von überkritischem Kohlendioxid, um das ätherische Öl aus Rosmarinblättern zu entfernen, wonach der Rückstand mit Ethanol extrahiert wird. Die Wirksamkeit des Extrakts entsprach einem kommerziellen Extrakt, welcher unter Verwendung von organischen Lösungsmitteln hergestellt wurde, war aber geringer als BHA bei derselben Verwendungsmenge (0,03%).
CAL/Pfizer (ca. 1988) werben für ein kommerzielles Produkt (Rosemary Deodorised) , bei welchem die Oleoresinfraktion, die durch Extrahieren von Rosmarin mit überkritischem Kohlendioxid erhalten wurde, dann einer molekularen Destillation unterworfen wird, um ätherisches Öl zu entfernen und Farbe und Geschmack zu verbessern. Das resultierende Produkt enthält ca. 80% Caprin- und Capryltriglyceride (der Destillationsträger) und hat eine geringe Öllöslichkeit und eine relative schwache antioxidierende Aktivität.

Kurze Zusammenfassung der Erfindung

Gemäß einem Aspekt der Erfindung werden die getrockneten Blätter von domestizierten Kräutern der Familie Labiatae (Rosmarinus spp. oder Salvia spp. oder Oreganum spp. oder Thymus spp.) den folgenden Schritten unterworfen:
1. Die Blätter werden zu einer Feinheit von weniger als 20 mesh, vorzugsweise 75% weniger als 45 mesh, zermahlen.
2. Die gemahlenen Blätter werden dann mit überkritischem Kohlendioxid-Fluid extrahiert, unter den Bedingungen:
Druck: 350 bis 1000 bar (vorzugsweise 500 - 1000 bar)
Temperatur: 31 bis 120ºC (vörzugsweise 90 - 110ºC)
Fluiddichte: 0,60 bis 1,00 kg/l (vorzugsweise 0,80 - 1,00 kg/l)
3. Ungefähr 70% bis 75% des Extraktes wird aus dem überkritischen Fluid ausgefällt (Antioxidanzien-Fraktion), unter den Bedingungen:
Druck: 100 bis 150 bar (vorzugsweise 110 - 125 bar)
Temperatur: 40 bis 100ºC (vorzugsweise 75 - 85ºC)
Fluiddichte: 0,20 bis 0,40 kg/l (vorzugsweise 0,25- 0,35 kg/l)
4. Der zurückbleibende Extrakt wird unter nicht überkritischen Bedingungen ausgefällt (Fraktion der ätherischen Öle) von:
Druck: 20 bis 50 bar (vorzugsweise 30 - 35 bar)
Temperatur: -10 bis 25ºC (vorzugsweise 5 - 20ºC)
Gasdichte: < 0,15 kg/l (vorzugsweise 0,05 - 0,10 kg/l)
Das Verfahren kann bequem in kommerziell erhältlichen überkritischen Fluidextraktionsgeräten mit wenigstens einem Extraktorgefäß und wenigstens zwei Separatorgefäßen durchgeführt werden, wie z.B. jenen, die durch die Udhe GmbH und die Nova Werke AG hergestellt werden; vorausgesetzt, der Extraktor wurde so gebaut, daß er bei einem Druck von 350 bar oder darüber arbeiten kann.
Die Erfindung liefert eine verbesserte natürliche Antioxidanzien-Zusammensetzung, welche von domestizierten Kräutern der Labiatae-Familie abgeleitet ist, wenn diese durch das vorstehende Verfahren hergestellt wird. Die Zusammensetzung ist nicht mit organischen Lösungsmitteln in Kontakt gebracht worden und enthält weniger als 5 ml von wasserdestillierbarem ätherischen Öl pro 100 Gramm. Die Zusammensetzung zeigt im Vergleich init. bestehenden Labiatae-Extrakten eine erhöhte antioxidierende Aktivität und umf aßt nicht weniger als 30 Gew.% der natürlich vorkommenden Verbindung Carnosinsäure. Die Zusammensetzung ist löslich für die beabsichtigte Verwendurig in nahrungsmittelgeeigneten Fetten und Ölen und löslich für die beabsichtigte Verwendung in nahrungsmittelgeeignetem Getreidealkohol.
Die Zusammensetzung ist für eine Verwendung in Nahrungsmittel-, kosmetischen und pharmazeutischen Produkten bei Einarbeitungsmengen von 0,02 - 0,03 % von Fett oder Öl geeignet, um den oxidativen Prozeß zu verlangsamen, wodurch Geschmacks-, Aroma- und Farbhaltbarkeit solcher Produkte verlängert werden.
Die Zusammensetzung kann direkt verwendet werden oder in Fetten, Ölen oder Getreidealkohol von akzeptabler Qualität vorgelöst werden, oder sie kann in eßbaren Nahrungsmittel-Lösungsmitteln gelöst oder dispergiert werden. Die Zusammensetzung kann in einer teilweise entfärbten Form verwendet werden.
Wenn die Zusammensetzung in einer Menge von 0,02% in Schweineschmalz gelöst und in lose verschlossenen Behältern 18 Stunden lang bei 100ºC inkubiert wird, wird der resultierende Peroxidwert des Schmalzes typischerweise nicht größer sein als der einer identisch behandelten Probe, welche 0,02% BHA/BHT (1:1) anstelle der Zusammensetzung der Erfindung enthält.
Die Zusammensetzung kann aus verschiedenen Labiatae- Extrakten gebildet werden und kann, was den natürlichen Antioxidanziengehalt betrifft standardisiert werden, um eine vorgeschriebene antioxidierende Aktivität zu ergeben.

Kurze Beschreibung der Zeichnungen

Figur 1 ist ein Diagramm, welches die optimale Konzentration an Antioxidans, welches durch die Erfindung erhalten wurde, gegenüber kommerziell erhältlichen Antioxidanzien zeigt, wenn in Schmalz getestet wurde.
Figur 2 zeigt die relative Antioxidationsstärke von Extrakten, welche durch die Erfindung erhalten wurden, gegenüber kommerziell erhältlichen Antioxidanzien, wenn in Schmalz getestet wurde.
Figur 3 zeigt die Antioxidationskraft eines Extraktes, der durch die Erfindung erhalten wurde, der zu dem Bindemittel für Hähnchenschnitzel zugesetzt wurde, gegenüber Hähnchenschnitzeln mit einem Standardbindemittel.
Figur 4 zeigt die Antioxidationskraft, um vor einem Farbverlust von Carotinoidpigmenten zu schützen, gegenüber unbehandelten Material.

Beschreibung der besten Methode

Die Erfindung ist ein Verfahren zum Extrahieren von Antioxidanzien-Substanzen aus Kräutern unter Bedingungen, welche die Antioxidationskraft der Substanzen bewahren, ohne die Substanzen mit möglicherweise schädlichen Lösungsmitteln, Destillationsträgern oder anderen Zusätzen zu kontaminieren. Die Antioxidanzien, die durch das erfindungsgemäße Verfahren erhalten werden, sind bei den 0,01 - 0,05% Mengen, welche benötigt werden um einen akzeptablen Antioxidationseffekt zu erzielen, leicht in Fetten und Ölen löslich und das Verfahren ergibt eine Substanz, welche keinen Geschmack, Geruch oder Farbe zu dem behandelten Fett oder Öl hinzufügt.
Es wurde gefunden, daß kommerziell nützliche Antioxidanzien-Extrakte aus domestizierten Kräutern der Familie Labiatae erhältlich sind. Diese Kräuter umfassen Rosmarin (Rosmarinus spp.), Salbei (Salvia.spp.), Oregano (Oreganum spp.) und Thymian (Thymus spp.). Gemäß der Erfindung werden getrocknete Blätter von Labiatae-Kräutern zermahlen und unter hohem Druck von wenigstens ca. 350 bar mit überkritischem Kohlendioxid-Fluid bei einer Temperatur von 31ºC bis 120ºC extrahiert. Die Extraktion läuft vorzugsweise mit einer solchen Geschwindigkeit ab, daß die optimale Menge von Antioxidans innerhalb ca. einer Stunde extrahiert wird.
Jedes Gas hat einen kritischen Druck (Pc) und eine kritische Temperatur (Tc), wobei oberhalb jeder von diesen ein überkritischer Fluidzustand erreicht wird. Es wurde gefunden, daß Lösungsmitteleigenschaften von solchen überkritischen Fluids eine komplizierte Funktion der Fluiddichte sind, welche dann wieder eine komplizierte Funktion von Temperatur und Druck ist. Somit können durch Ändern der Temperatur und des Drucks eines überkritischen Fluids Extraktionen und Fällungen durchgeführt werden. Kohlendioxid hat sich als ein besonders vorteilhaftes Gas für die Verwendung in überkritischen Fluidextraktionen erwiesen, da es gute Lösungsmitteleigenschaften besitzt, eine geringe chemische Reaktivität hat, eine geringe Toxizität, es nicht entf1ammbar ist, es billig ist und leicht wiederverwertet werden kann, und keine unerwünschten Rückstände in den Niederschlägen zurückläßt. Kohlendioxid hat einen Pc von 73.8 bar, eine Tc von 31,1ºC und eine Dichte bei Pc und Tc von 0,468 g/cm³.
Das überkritische Kohlendioxid-Fluid, welches extrahierte Antioxidanzien und andere Substanzen enthält, wird einem ersten Fällungsschritt unterworfen, in welchem die Antioxidans-Substanzen gesammelt werden. Die erste Fällung geschieht, verglichen mit dem Extraktionsschritt, unter Bedingungen von vermindertem Druck, z.B. 100 - 150 bar, wobei aber das Kohlendioxid in seinem überkritischen Fluidzustand gehalten wird.
Zusätzliche kommerziell wertvolle Substanzen, wie z.B. ätherische Öle, werden in einem zweiten Fällungsschritt gesammelt, worin der Druck und die Temperatur des Kohlendioxids zu nicht überkritischen Bedingungen vermindert werden. Das gasförmige Kohlendioxid aus der zweiten Fällung wird vorzugsweise wiederverwertet, zu dem Extraktionsschritt des Verfahrens der Erfindung.
Vorzugsweise wird das Verfahren der Erfindung in einem kommerziell erhältlichen Druckextraktionsgerät durchgeführt. Die grundlegende Technologie einer Extraktion mit überkritischem Fluid ist gut bekannt. Tatsächlich zeigt die Lehre dieser Technik, daß Kosolvenzien oder Schlepper, wie z.B. Propan oder Ethanol gewöhnlich benötigt werden, um die gewünschte Extraktionseffizienz zu erreichen, da überkritisches Kohlendioxid in seinem reinen Zustand kein ausreichend gutes Lösungsmittel ist.
Während das bevorzugte Ausgangsmaterial gemahlene getrocknete Labiatae-Blätter sind, kann das Rohmaterial Rückstände von gemahlenen Labiatae-Blättern aus einer früheren Extraktion des ätherischen Öls, durch Dampfdestillation, unterkritisches Kohlendioxid oder überkritisches Kohlendioxid unter Druckbedingungen von weniger als 350 bar, enthalten. Die Ausbeute und Geschwindigkeit der Extraktion des Antioxidans mit überkritischem Kohlendioxid-Fluid wächst mit höherem Extraktionsdruck von 350 bar bis hoch zu 1000 bar, ohne die antioxidierende Aktivität des Extrakts zu vermindern. Die Ausbeuten und Geschwindigkeiten der Extraktion bei 350 bar oder darunter werden bis zu dem Punkt vermindert, wo das Verfahren nicht ökonomisch ist. Der bevorzugte Bereich des Extraktionsdruckes ist 500 - 1000 bar, was zu optimalen Ausbeuten und Geschwindigkeiten der Extraktion führt.
Die Ausbeute und Geschwindigkeit der Extraktion des Antioxidans gemäß der Erfindung wächst mit einer höheren Extraktionstemperatur in dem Bereich von 31ºC bis zu 120ºC, ohne die antioxidierende Aktivität zu vermindern. Bei Extraktionstemperaturen deutlich über 110ºC kann jedoch eine Hitzeschädigung auftreten, sowohl bei den extrahierten Bestandteilen als auch bei dem Extraktionsrückstand. Der bevorzugte Extraktionstemperaturbereich ist 90-110ºC, von dem gefunden wurde, daß er zu optimalen Ausbeuten und Geschwindigkeiten der Extraktion führt.
Es ist bevorzugt, daß das überkritische Fluid, welches in dem Verfahren der Erfindung verwendet wird, Kohlendioxid ist, ohne den Zusatz von Kosolvenzien, wie z.B. Ethanol oder Propan. Solche Kosolvenzien steigern die Ausbeuten der Antioxidanzien-Extrakte, machen dieses aber nicht-selektiv, so daß die resultierende antioxidierende Aktivität der Extrakte, verglichen mit Antioxidans, welches mit reinem Kohlendioxid extrahiert wurde, vermindert ist.
Es war das überraschende Ergebnis dieser Erfindung, daß die Verwendung von reinem Kohlendioxid unter den Bedingungen dieses Verfahrens, zu der Extraktion von Antioxidans-Substanzen führt, welche eine mit den synthetischen Antioxidanzien BHA und BHT vergleichbare antioxidierende Aktivität haben. Da reines Kohlendioxid in dem Verfahren verwendet wird, ist der resultierende Antioxidanzien-Extrakt frei von unerwünschten Verunreinigungen.
Zusätzlich führen die Fällungsbedingungen für das Antioxidans zu einer wesentlichen Trennung von Antioxidanzien-Bestandteilen von ätherischen Ölen. Somit können die durch die Erfindung erhaltenen Antioxidanzien zu Nahrungsmitteln oder Kosmetika zugesetzt werden, ohne unerwünschten Geschmack oder Geruch auf diese zu übertragen.
Die Antioxidanzien-Extrakte, welche gemäß der Erfindung erhalten wurden, welche bei Raumtemperatur einen Harzcharakter zeigen, können bei Temperaturen von -18ºC oder weniger zu einem feinen Pulver gemahlen werden, und entweder in nahrungsmittelgeeigneten tierischen oder pflanzlichen Ölen und Fetten, zur Einarbeitung in Nahrungsmittel-, kosmetische und Gesundheitspflegeprodukte gelöst oder dispergiert werden. Wahlweise kann ein solches Pulver direkt in die Produkte eingearbeitet werden.
Eine Nicht-Öl-Lösung der Antioxidanzien-Extrakte, welche durch das Verfahren der Erfindung erhalten wurde, kann hergestellt werden, indem der Extrakt in Ethanol, z.B. 95% Ethylalkohol, gelöst wird, und jeder unlösliche Rückstand abfiltriert wird. Diese Ethanoltinktur kann für einige Anwendungen einem Öl- oder Fett-Träger vorgezogen werden.
Die Antioxidanzien-Extrakte, welche aus Rosmarinus officinalis und Salvia officinalis durch das Verfahren der Erfindung erhalten wurden, zeigen eine antioxidierende Aktivität, welche wenigstens der der synthetischen Antioxidanzien BHA/BHT (1:1) wenn bei 0,02% in Fett/Öl verwendet entspricht, und sind in der Antioxidationsstärke anderen kommerziell erhältlichen natürlichen Antioxidanzien überlegen.
Die Erfindung wird genauer mit Bezug auf die folgenden Beispiele genauer verstanden werden. Jedoch sind diese Beispiele nur dazu beabsichtigt, Ausführungsformen der Erfindung darzustellen, und sind nicht als den Rahmen der Erfindung beschränkend aufzufassen.

Beispiel 1

Die Rohmaterialien, welche in den Beispielen verwendet wurden, umfaßten kommerzielle Proben der folgenden domestizierten Kräuter:
Rosmarin (spanisch) R. officinalis
Salbei (albanisch) S. officinalis
Salbei (griechisch) S. triloba
Oregano (griechisch) O. vulgare
Thymian (französisch) T. vulgaris
Diese Materialien wurden über normale Gewürzvertriebswege in der "ganzblättrigen" Form in Mengen von 25 kg bis 100 kg Einheiten gekauft. Vor der Extraktion wurden die Blätter einem einmaligen Durchgang durch eine Hammermühle (Fitzmill Modell D-6) mit einem #0030 Sieb unterzogen. Flüssiger Stickstoff wurde während des Mahlens, mit einer Geschwindigkeit die ausreichend war, um die Temperatur der herauskommenden gemahlenen Blätter bei weniger als -20ºC zu halten, in die Mahlkammer eingebracht. Die gemahlenen Blätter kamen in der Form eines sehr feinen Pulvers mit den in Tabelle 1 angegebenen Tei lchengrößenverteilungseigenschaften aus der Mühle heraus. Tabelle 1 Siebanalyse von aemahlenen Materialien % zurückgehalten (Mittel aus 3 Proben) mesh
Die Zahlen in Tabelle 1 zeigen, daß das Mahlverfahren zufriedenstellend ist, um ein feines Pulver herzustellen, wobei ungefähr 75% der Teilchen in der Lage sind ein 45 mesh Sieb zu durchqueren, wodurch die Effizienz der Extraktion mit überkritischem Fluidlösungsmittel vergrößert wird. Proben des gemahlenen Blattmaterials wurden dann Laboranalysen auf Gesamtetherextrakt (AOCs offizielles Verfahren Bc 3-49), ätherisches Öl (ASTA offizielles Verfahren 5.0) und Feuchtigkeit (AOCS offizielles Verfahren F 1a-44) unterzogen. Ergebnisse der Analysen sind in Tabelle 2 gezeigt. Die Zahlen zeigen, daß alle Rohmaterialien Zusammensetzungseigenschaften haben, welche mit einer durchschnittlichen Qualität kommerzieller Kräuter übereinstimmen. Insbesondere die Mengen an ätherischem Öl zeigen, daß Mahlen unter flüssigem Stickstoff zu keinem bedeutenden Verlust an flüchtigen Stoffen durch Wärme geführt hat, welche während des Mahlverfahrens erzeugt wurde. Tabelle 2 Zusammensetzung von Rohmaterialien (Mittel aus 3 Proben) Kraut Feuchtigkeit Etherextrakt ätherisches Öl R. officinalis S. officinalis S. triloba O. vulgare T. vulgaris

Beispiel 2

Ungefähr 1,25 kg Proben von jedem der fünf Rohmaterialien, welche nach dem Verfahren von Beispiel 1 gemahlen wurden, wurden in einem überkritischen Pilotgerät, welches durch die Udhe GmbH hergestellt wurde, extrahiert. Dieses Gerät umfaßt zwei Extraktorgefäße und ein Separatorgefäß, jedes mit 4 Litern Kapazität, mit der Möglichkeit das System als eines mit einem Extraktor und zwei Separatoren zu gestalten. Die Proben wurden zuerst bei 300-350 bar und 35-40ºC gemäß Tateo et al., Perfumer and Flavorist, 13:48 (1988), mit einer Kohlendioxid-Flußrate von 45 kg/h und eine ausreichende Zeit lang (gewöhnlich 30-60 min) extrahiert, um ein CO&sub2; : Ausgangsmaterial-Verhältnis von 24 : 1 (Rosmarin und Salbei) oder 12 : 1 (Oregano und Thymian) zu ergeben. Die Extrakte wurden ausgefällt und in dem Separatorgefäß bei 30 bar und 5ºC als eine Reihe grünbraunen flüssigen Extrakten mit Gehalten an ätherischem Öl im Überschuß von 50 ml/100 g an Extrakt zurückgewonnen. Diese Extrakte sind die "300 bar-Extrakte". Die gemahlenen Kräuterrückstände, die nach der 300 bar-Extraktion zurückblieben, wurden dann erneut bei 500 bar und 40ºC mit einer CO&sub2;- Flußrate von 45 kg/h für eine ausreichende Zeit (30-60 min) extrahiert, um ein CO&sub2; : Ausgangsmaterial-Verhältnis von 32 : 1 (Rosmarin und Salbei) oder 12 : 1 (oregano und Thymian) zu ergeben. Die Extrakte wurden ausgefällt und in dem Separatorgefäß bei 50 bar und 35ºC als eine Reihe von leicht grünlich-braunen festen bis halbfesten harzförmigen Materialien, welche bei 80ºC zu viskosen Flüssigkeiten schmolzen, gewonnen. Diese Extrakte sind die "500 bar-Extrakte". Proben der Rückstände, die nach sowohl 300 barals auch 500 bar-Extraktionen zurückblieben, wurden dann im Labor (Soxhlet) mit 95% Ethylalkohol extrahiert. Antioxidierende Aktivitäten von allen Extrakten wurden dann mittels eines beschleunigten Lagerversuchs gemessen, bei welchem die Extrakte in Schweineschmalz in der Menge von 0,03% gelöst wurden und in lose verschlossenen Flaschen in einem Laborofen bei 100ºC 18 Stunden lang inkubiert wurden. Zwei Kontrollproben wurden ebenfalls inkubiert, welche aus Schmalz ohne Antioxidanzien (Kontrolle) und Schmalz mit 0,03% BHA/BHT (1:1) bestanden. Nach Beendigung der Inkubationsperiode wurden die Peroxidwerte (mEq/kg) der Proben gemessen (AOAC Verfahren 28.025/28.026). Die Ergebnisse der Antioxidanzienaktivitätstests sind in Tabelle 3 gezeigt. Tabelle 3 Peroxidwerte (mEg/kg) für Schweineschmalz bei 100ºC für 18 Stunden (Mittel von 3 Wiederholungsversuchen) Kraut R. officinalis S. officinalis S. triloba O. vulgare T. vulgaris Kontrollen Schmalz Vorbehandlung Kontroll-Schmalz BHA/BHT (1:1)
Die Ethanolextrakte der 300 bar-Rückstände (EE 300 RES) haben mäßig gute Antioxidationseigenschaften, wie durch Tateo et al., (1988) für Rosmarin gezeigt, aber sie reichen an die Stärke der synthetischen Antioxidanzien BHA/BHT nicht heran, wenn sie in derselben Menge verwendet werden. Die Überlegenheit der überkritischen Extrakte bei 500 bar (500 EXT.) über die Ethanolextrakte ist ein neues und unerwartetes Ergebnis. Die 500 bar-Extrakte zeigen eine antioxidierende Aktivität, die in dem Fall von sowohl R. officinalis als auch S. officinalis wenigstens der von BHA/BHT (1:1) entspricht und die geringfügig weniger ist in den Fällen von S. triloba, O. vulgare und T. vulgaris. Ethanolextrakte der 500 bar-Rückstände (EE 500 RES.) zeigen eine verminderte antioxidierende Aktivität, was zeigt, daß die 500 bar-Extrakte die Mehrheit der aktiven Antioxidanzien-Verbindungen entfernt haben. Die höchsten Grade an antioxidierender Aktivität finden sich nur bei den Extrakten, die mit überkritischem Kohlendioxid zwischen 350 und 500 bar erhalten wurden. Die relative Anordnung der Antioxidationsstärke für die 500 bar-Extrakte ist Salbei > Rosmarin > Thymian > Oregano, was die bekannte relative Antioxidationsstärke der gemahlenen Kräuter widerspiegelt (Chipault et al., 1956).

Beispiel 3

Ungefähr 1,25 kg Proben von jedem der fünf Rohmaterialien wurden gemäß dem Verfahren von Beispiel 1 gemahlen und in dem Gerät, welches in Beispiel 2 beschrieben ist, mit der Anordnung ein Extraktor/zwei Separatoren, extrahiert. Druck und Temperaturparameter für die drei Gefäße sind in Tabelle 4 gezeigt. Tabelle 4 Extraktions- und Fraktionierungsparameter Kraut Extraktor Separator R. officinalis S. officinalis S. triloba O. vulgare T. vulgaris
Die Kohlendioxid-Flußrate betrug 45 kg/h und die CO&sub2; : Ausgangsmaterial-Verhältnisse waren 32 : 1 (Rosmarin und Salbei) und 12 : 1 (Oregano und Thymian). Die Antioxidanzien-Extrakte wurden aus dem ersten Separatorgefäß als leicht grünlich-braune feste bis halbfeste harzförmige Materialien gewonnen. Die ätherischen Öl-Extrakte wurden aus dem zweiten Separator als eine Mischung von grünlichbraunen aromatischen flüssigen Ölen und Wasser gewonnen. Diese Mischungen wurden dann zentrifugiert, um die Öle von dem Wasser zu trennen, wonach die Öle abdekantiert wurden. Die Gehalte an ätherischem Öl der Fraktionen wurden durch das Verfahren von Beispiel 1 gemessen und die Aktivität der Antioxidanzien-Extrakte bei einer Verwendung mit 0,03% durch das Verfahren von Beispiel 2. Die Ergebnisse sind in Tabelle 5 gezeigt und sie veranschaulichen die Kapazität des bevorzugten Verfahrens, gleichzeitig sowohl eine hohe Qualität an ätherischen Ölen mit Gehalten an flüchtigem Öl über 80 ml/100 g als auch natürlichen Antioxidanzien- Extrakten, welche (in den Fällen von Rosmarin und Salbei) in ihrer antioxidierenden Aktivität vergleichbar mit den synthetischen Antioxidanzien BHA und BHT sind, aber mit weniger als 5 ml/100 g an flüchtigen aromatischen und Geschmacks-Bestandteilen. Die bevorzugten Arbeitsparameter, welche in Tabelle 4 angegeben sind, haben zu ökonomisch annehmbaren Ausbeuten beider Produkte geführt. Tabelle 5 Zusammensetzung und Aktivitäten Kraut Fraktion ätherischer Öle Antioxldanzien-Fraktion Ausbeute ätherisches Öl R. officinalis S. officinalis S. triloba O. vulgare T. vulgaris Kontrollen Schmalz Vorbehandlung Kontroll-Schrnalz BHA/BHT (1:1)

Beispiel 4

Jeweils fünf Gramm an Rosmarin- und Salbeiantioxidanzien-Extrakten, welche durch das Verfahren von Beispiel 3 hergestellt wurden, wurden in 90 Gramm an gereinigtem Canola-Öl gelöst, welches auf 85ºC erwärmt worden war, um die Löslichkeit zu fördern. Die Extrakte lösten sich ohne Schwierigkeiten in dem Öl, um eine 10%ige Labiatae Antioxidanzien-Öllösung ("Labex") zu ergeben. Die Labex -Lösung wurde dann mit drei kommerziell erhältlichen natürlichen Antioxidanzien (Herbalox Typ "O" , Spice Extract AR , Flavor Guard I ) und der synthetischen Antioxidanzienmischung BHA/BHT (1:1) durch Vergleich der antioxidierenden Aktivität getestet. Das Testverfahren war das aus Beispiel 2 bei Verwendungsmengen von 0,01, 0,02, 0,03 und 0,05%, wobei die Verwendungsmenge auf dem aktiven Bestandteil basierte (Labex , BHA/BHT (1:1)) oder "als solches" (kommerzielle Antioxidanzien). Die Ergebnisse sind in Figur 1 gezeigt. Aus Fig. 1 wird klar, daß die 1:1-Mischung von Rosmarin- und Salbeiextrakten eine optimale Aktivität bei der 0,02% Verwendungsrate zeigte (0,20% von 10% Öllösung), welche BHA/BHT (1:1) entsprach und den kommerziellen Antioxidanzien in allen Mengen überlegen war.

Beispiel 5

Die in Beispiel 4 hergestellte Labex-Lösung wurde auf ihre relative Antioxidationsstärke im Vergleich mit dem natürlichen Antioxidans-Handelsstandard (Herbalox Typ"O") und dem synthetischen Antioxidans-Handelsstandard (Tenox 4) durch eine Modifizierung des Verfahrens in Beispiel 2 getestet. Die Ofenbehandlungsperiode wurde ausgedehnt bis alle Proben einen Peroxidwert von 20 mEq/kg erreicht hatten, welcher als der organoleptisch nachweisbare Ranziditätswert für Schmalz akzeptiert wird. Peroxidwerte wurden einmal an jedem Tag gemessen, bis der 20 mEq/kg Wert überschritten war. Verwendungsmengen waren 0,05% (Tenox 4) , 0,03, 0,05 und 0,10% (Herbalox) und 0,30, 0,50 und 1,00% (Labex , entsprechend zu 0,03, 0,05 und 0,10% an aktivem Bestandteil). Die Ergebnisse sind in Figur 2 gezeigt, welche deutlich die Überlegenheit der natürlichen Rosmarin/Salbei Antioxidanzien-Extrakte veranschaulicht. Die Labex -Öllösung bei 0,30% (0,03% aktiver Bestandteil) erzeugt eine, längere Inkubationszeit bis zu einem Peroxidwert von 20 mEq/kg im Vergleich mit Herbalox 10 bei 0,03%. Labex bei 0,50% und 1.00% (0,05 und 0,10% aktiver Bestandteil) führen zu einem deutlich längeren Schutz als sowohl Herbalox bei 0,05 und 0,10% als auch Tenox 4 bei 0,05%.

Beispiel 6

Drei 22,65 kg (50 lb) Chargen an Rindfleisch/Schweinefleisch-Würstchen wurden in einem Handelsbetrieb hergestellt. Die Bindemittelzusätze für jede Charge wurden so formuliert, daß sie enthielten:
Charge 1: Kontrolle - kommerzielles Standardbindemittel (keine Antioxidanzien).
Charge 2: Erythorbat - Standardbindemittel einschließlich Natriumerythorbat mit 0,03% des fertigen Produktes.
Charge 3: Behandlung - Standardbindemittel einschließlich des Rosmarin-Antioxidans, welches durch das Verfahren von Beispiel 2 hergestellt wurde, mit 0,03% des fertigen Produktes.
Der Rosmarin Antioxidanzien-Extrakt wurde leicht auf den Salzanteil des Bindemittels aufgebracht und mit den anderen Bindemittelbestandteilen gemischt. Die Würstchen wurden bei 4ºC 7 Tage lang gelagert, wonach Fett der Probenwürstchen mit Dichlormethan extrahiert wurde und einer beschleunigten Lagerung bei 100ºC 18 Stunden lang gemäß dem Verfahren von Beispiel 2 unterworfen wurde. Die resultierenden Peroxidwerte sind in Tabelle 6 gezeigt, welche deutlich die Kapazität des Antioxidanzien-Extrakts veranschaulicht, sich in ein Nahrungsmittelprodukt einzufügen und während der Lagerung aktiv zu bleiben. Tabelle 6 Antioxidans in Rindfleisch/Schweinefleisch-Würstchen Charge Peroxidwert Kontrolle Erythorbat Behandlung

Beispiel 7

Rosmarin Antioxidanzien-Extrakt, welcher durch das Verfahren von Beispiel 2 hergestellt wurde, wurde bei einer Temperatur von 85ºC und in Mengen von 0,03 und 0,10% in kommerzielles gereinigtes Canola-Pflanzenöl und kommerzielle Margarine (Canbra "West" Handelsmarken) gemischt. Kontrollproben, welche kein Antioxidans enthielten und Proben, welche BHA/BHT (1:1) mit 0,03 und 0,10% enthielten, wurden ebenfalls hergestellt. Die Proben wurden 18 Stunden lang bei 100ºC gemäß dem Verfahren von Beispiel 2 inkubiert. Die resultierenden Peroxidwerte sind in Tabelle 7 gezeigt, welche veranschaulicht, daß der Rosmarin Antioxidanzien-Extrakt beim Schützen der Produkte vor Oxidation effektiver war als BHA/BHT (1:1) in beiden Mengen. Tabelle 7 Antioxidans in Canola-Öl und Margarine Peroxidwerte (mEg/kg) Antioxidans Canola-Öl Margarine R. officinalis BHA/BHT (1:1) Kontrolle Vorbehandlung

Beispiel 8

40 Gramm Salbei (S. officinalis) Antioxidanzien- Extrakt, welcher durch das Verfahren von Beispiel 3 hergestellt wurde, plus 15 Gramm Rosmarin Antioxidanzien- Extrakt, welcher durch das Verfahren von Beispiel 3 hergestellt wurde, wurden in 100 Gramm gereinigtem Canola-Öl, welches auf eine Temperatur von 85ºC erwärmt worden war um die Löslichkeit des Antioxidanzien-Extraktes zu erleichtern, dispergiert. Die Öllösung wurde dann zu einem kommerziellen gewürzten Fleischbindemittel (UFL Foods Product Nr. EE820) zugegeben, welches bei der Herstellung von zubereiteten und dann eingefrorenen Hähnchenschnitzeln verwendet wird. Zwei Chargen von Schnitzeln wurden hergestellt, jede unter Verwendung von 550 kg von mechanisch von den Knochen befreiten Hähnchen und einem Fettgehalt von 20%. Eine Charge enthielt das Standardbindemittel (Kontrolle) und die andere Charge (Behandlung) enthielt das Standardbindemittel, zu welchem die Antioxidanzien-Öllösung hinzugegeben worden war, indem sie auf den Salzbestandteil des Bindemittels aufgebracht wurde. Somit wurde der Rosmarin/Salbei Antioxidanzien-Extrakt mit einer Menge von 0,01% des Fleisches oder 0,05% des Fettes zu dem Produkt zugegeben. Die resultierenden vorher zubereiteten Schnitzel wurden luftdicht verpackt und bei 4ºC gelagert. Zwei Zufallsproben wurden von jeder Charge auf einer wöchentlichen Basis entnommen und Doppelmessungen der oxidativen Ranzigkeit wurden an jeder Probe mittels des TBA-Verfahrens von Kakuda et al., JAOCS Juli:773 (1981) durchgeführt. Die Ergebnisse sind in Figur 3 gezeigt. Am 14. Tag war der mittlere Unterschied von TBA-Werten zwischen den zwei Gruppen signifikant um 5% und danach um 1%. Nach 4 Wochen Lagerung zeigten die behandelten Schnitzel TBA-Werte von weniger als 2 (akzeptabel) während die Kontrollwerte über 6 lagen (inakzeptabel). Einschluß von Antioxidanzien-Fraktionen bei 0,01% des Fleisches führten zu einer Haltbarkeit dieser Produkte, welche ausreichend lang war, um ein Vermarkten im frischen, eher als im gefrorenen Zustand, zu erlauben.

Beispiel 9

Rosmarin Antioxidanzien-Extrakt, welcher durch das Verfahren von Beispiel 3 hergestellt wurde, wurde in einer Menge von 0,03% unter Rühren in Paprika-Oleoresin gelöst. Proben des Oleoresins mit und ohne Rosmarin Antioxidanzien- Extrakt wurden 54 Stunden lang bei 100ºC gemäß dem Verfahren von Beispiel 2 inkubiert. In 18 Stunden-Intervallen wurden die Oleoresinproben unter Verwendung eines Spektrophotometers auf ihren Farbwert hin gemessen (ASTA offizielles Verfahren 20.1). Die Ergebnisse sind in Fig. 4 gezeigt, welche die Effektivität der Rosmarin Antioxidanzien-Fraktion beim Schützen gegen oxidativen Farbverlust der Carotinoidpigmente veranschaulicht. Nach 18 Stunden beschleunigter Lagerung gab es keinen Farbverlust in dem behandelten Oleoresin, aber einen 12%igen Verlust in dem unbehandelten. Aus dem Vorstehenden ist es klar, daß eine bevorzugte Zusammensetzung der Erfindung erhalten werden kann, indem Rosmarin und Salbei gemäß dem Verfahren von Beispiel 3 extrahiert werden. Diese Rosmarin- und Salbeiextrakte wurden unter Verwendung von GC, GC/MS und Hochauflösungs- GC/MS gemäß der folgenden Verfahren analysiert.

a) Ein-Schritt Derivatisierung

0,1 g der Probe wurde in 1 ml Pyridin gelöst. Die erhaltene Lösung wurde mit 0,03 g Natriumsulfat als Trockenmittel gemischt. 0,5 ml der getrockneten Lösung wurden in ein 5 ml Reacti-Vial übertragen und mit 0,5 ml Sylon BFT , geliefert von Supelco (enthaltend 99% BSTFA¹ und 1% TMCS²), gemischt. Die erhaltende Mischung wurde 20 min lang bei 60ºC erwärmt und dann vor der Injektion 20 min lang bei Raumtemperatur abgekühlt. Sylon BFT ist ein starker Trimethylsilizium(TMS)donor. TMS ist wirksam beim Ersetzen von Wasserstoff (H) in allen OH-Gruppen.

b) Zwei-Schritt Derivatisierung

0.05 g der Probe wurde zuerst in 2 ml Benzol gelöst und mit 2 ml 12%igem Bortriflourid in Methanol³ gemischt, dann 15 min lang bei 80ºC erwärmt und auf Raumtemperatur abgekühlt. Nach Zugabe von 1 ml Wasser und Erlauben einer Phasentrennung, wurde die in Benzol gelöste methylierte Probe aus der oberen (lipophilen) Schicht gesammelt. Dieses Verfahren ist nur beim Ersetzen von Wasserstoff (H) mit einer Methylgruppe (CH&sub3;) in Carbonsäure(COOH)-Strukturen wirksam.
Die gesammelten 1,2 ml an methylierter Probe wurden mit 1 ml Sylon BFT gemischt, 20 min lang bei 60ºC erwärmt, und dann vor der Injektion 20 min lang bei Raumtemperatur abgekühlt, wodurch TMS-Ersatz von H in allen zurückbleibenden OH-Gruppen erzielt wurde. ¹BSTFA = Bis(trimethylsilyl)-trifluoroacetamid ²TMCS = Trimethylchlorosilan ³Gemäß dem Mikroveresterungsverfahren mit BF&sub3;-Methanol (12% w/w) beschrieben in dem Supelco GC Bulletin Nr. GC 721 I.

c) Ausrüstung

GC-Analysen wurden auf einem Hewlett Packard Gaschromatograph (Modell HP5890 mit HP3396 Integrator) unter Verwendung einer 60 m X 0,2 mm SP-2100 Säule über einen Temperaturbereich von 60ºC bis 280ºC ausgeführt.
GC/MS-Analysen wurden dpppelt unter Verwendung von zwei verschiedenen Systemen durchgeführt. Das erste umfaßte dieselbe Säule und denselben Temperaturbereich wie für GC (oben), aber auf einem Varian-Vista Gaschromatograph mit einem VG ANALYTICAL doppel-fokussierenden magnetischen Massenspektrometer, gekoppelt mit einem VG Datensystem 11-250. Das zweite umfaßte eine 30 m x 0,25 mm SP-1 Säule über einen Temperaturbereich von 90ºC bis 320ºC auf einem CARLO- ERBA Hochauflösungs-Gaschromatograph Modell 5160 mit einem FINNIGAN MAT Quadropol-Massenspektrometer mit einen SUPER- INCOS Datensystem.
Hochauflösende MS wurde auf einem KRATOS MS-50 doppelfokussierenden magnetischen Hochauflösungs-Massenspektrometer mit einem KRATOS DS-55 Datensystem durchgeführte sowohl mit derivatisierten als auch nicht-derivatisierten Proben.

d) Standard

Ein Antioxidanzien-Extrakt von Salbei, welcher gemäß dem Verfahren von Beispiel 3 hergestellt wurde, wurde bei 60ºC in Methanol gelöst. Die Lösung wurde gekühlt und in einen Haushaltskühlschrank kaltgestellt, um den weniger löslichen Anteil des Extraktes auszufällen. Die zurückbleibende Lösung wurde mit Wasser verdünnt (10 x), um eine weitere Ausfällung von unlöslichem Material zu induzieren. Die zurückbleibende Lösung wurde dann mit Hexan extrahiert und das Lösungsmittel wurde durch Vakuumdestillation entfernt. Der Rückstand wurde einer GC-Analyse durch das Verfahren von a) und c) oben unterworfen und als ein Standard verwendet. GC-Analyse (nach GC/MS-Identifizierung) zeigte eine Zusammensetzung von 80,32% Carnosinsäure, 9,82% Carnosol und 0,39% Methylcarnosat.

e) Ergebnisse

Daten von allen drei MS-Analysen, welche auf ein- Schritt-, zwei-Schritt- und underivatisierten Proben basierten, ermöglichten- die qualitative Indentifizierung von Carnosinsäure, Carnosol, Rosmaridiphenol und Rosmanol in den Extrakten von sowohl Rosmarin als auch Salbei, womit bestätigt wurde, daß die bekannten Hauptantioxidanzien-Bestandteile tatsächlich vorhanden waren. Zusätzlich wurde eine nichterwähnte Verbindung, welche als der Methylester von Carnosinsäure (Methylcarnosat) identifiziert wurde, ebenfalls in beiden Extrakten gefunden. Die diphenolische Struktur dieser Verbindung weist auf eine Antioxidationskapazität hin.
Vergleich von GC- und GC/MS-Daten ermöglichte eine quantitative Identifizierung von Carnosinsäure, Methylcarnosat und Carnosol in den Extrakten von sowohl Rosmarin als auch Salbei. Diese Ergebnisse sind in Tabelle 8 gezeigt. Rosmaridiphenol und Rosmanol konnten nur vorläufig auf weniger als 1,5% quantifiziert werden.
Tabelle 8 zeigt, daß beide Extrakte unerwartet hohe Mengen der Antioxidanzienverbindungen enthalten, was ihre neue Antioxidationsstärke, die in Beispielen 3 und 4 festgestellt wurde, bestärkt. Man kann aus Tabelle 8 sehen, daß sowohl der Rosmarin- als auch der Salbeiextrakt mehr als 30 Gew.% der Antioxidanzienverbindungen Carnosinsäure und Methylcarnosat umfassen, aber weniger als 5% an Carnosol. Die Hauptantioxidanzienverbindung, Carnosinsäure, ist in beiden Extrakten mit mehr als 25 Gew.% anwesend.
Da Carnosinsäure sowohl ein gutes Reduktionsmittel als auch ein Antioxidans ist, wird die Zusammensetzung der vorliegenden Erfindung sowohl gute Reduktions- als auch gute Antioxidationseigenschaften haben und wird besonders wirkungsvoll bei Anwendungen in Getränken sein. Tabelle 8 GC-Analyse (Gew.% nichtderivatisierte Basis) von Rosmarin- und Salbeiextrakten nach Beispiel 3 Extrakt Carnosinsäure Methylcarnosat Carnosol Gesamt Rosmarin Salbei
Die Identifizierung von Carnosinsäure kann durch ihre leichte Oxidation zu Carnosol in einer Methanol lösung, welche 7-10 Tage lang an Luft ausgesetzt ist, bestätigt werden (Brieskorn, pers. Mitt. 1990). Eine Probe des Rosmarinextraktes aus Beispiel 3 wurde in Methanol gelöst und 10 Tage lang bei Raumtemperatur an der Luft stehen gelassen. Auf eine Verdampfung des Methanols folgend wurde der Rückstand einer GC-Analyse durch das Verfahren, wie oben beschrieben, unterworfen. Als ein Ergebnis der Behandlung verminderte sich der Anteil an Carnosinsäure von 26.5% (Tabelle 8) auf 4,1%, während Carnosol erwartungsgemäß von 1,8% (Tabelle 8) auf 6,9% vergrößert wurde.
Labiatae-Extrakte von Rosmarin und Salbei, welche unter Verwendung von überkritischem Kohlendioxid durch das Verfahren von Beispiel 3 hergestellt wurden, wurden zusammen mit Proben von drei kommerziell erhältlichen natürlichen Rosmarinantioxidanzien nach einer ein-Schritt-Derivatisierung gemäß dem oben beschriebenen Verfahren einer GC-Analyse unterworfen. Tabelle 9 GC-Analyse der Zusammensetzung (Gew.%. underivatisierte Basis) von Labiatae-Antioxidanzien-Extrakten nach Beispiel 3 Extrakt Carnosinsäure Methylcarnosat Carnosol Gesamt Rosmarin Salbei Flavor Guard II Spice Extract AR Herbalox Typ "O"
Tabelle 9 zeigt die signifikant höhere Konzentration an Carnosinsäure und Methylcarnosat in den Proben der vorliegenden Erfindung, verglichen mit den kommerziellen Produkten, und den relativ niedrigen Anteil an Carnosol. Während die Gesamtmenge an Carnosinsäure und Methylcarnosat in den Proben der vorliegenden Erfindung 30% überschreitet, sind die kommerziellen Proben nahe bei nur 5%. Der Carnosinsäuregehalt liegt sowohl bei den Rosmarin- als auch den Salbeiproben über 25%. Weiterhin ist der Gesamtgehalt an gemessenen Antioxidanzien in den Proben der vorliegenden Erfindung, verglichen mit den kommerziellen Proben, ungefähr viermal höher. Dieses selbe Verhältnis liegt nahe bei der vergrößerten Verwendungsmenge, welche für die kommerziellen Produkte als nötig festgestellt wurde, um den selben Grad an Antioxidationsschutz zu erzeugen, wie 0,02% der Labiatae-Extrakte der vorliegenden Erfindung, wie in Beispiel 4 gezeigt.
Ein Labiatae-Extrakt von Thymian (T. vulgaris) wurde unter Verwendung von überkritischem Kohlendioxid durch das Verfahren von Beispiel 3 hergestellt und nach einer ein-Schritt-Derivatisierung, wie oben beschrieben, einer GC- Analyse unterworfen. Die Ergebnisse der Zusammensetzung sind in Tabelle 10 gezeigt. Tabelle 10 GC-Analyse der Zusammensetzung (Gew.%. underivatisierte Basis) von Thymianextrakt nach Beispiel 3 Extrakt Carnosinsäure Methylcarnosat Carnosol Gesamt Thymian
Die Thymianzusammensetzung, wie sie in Tabelle 10 gezeigt ist, enthält deutlich weniger der antioxidierenden Bestandteile, verglichen mit den Rosmarin- und Salbeizusammensetzungen. Jedoch kann eine gewünschte Zusammensetzung, welche ein Minimum von 25% Carnosinsäure enthält, durch Mischen von 80% der Salbeizusammensetzung mit 20% der Thymianzusammensetzung formuliert werden. Es wird den Fachleuten klar sein, daß es durch solches Mischen von Labiatae-Extrakten der Erfindung möglich ist, den bevorzugten Gehalt an Antioxidationsstärke für Zusammensetzungen der vorliegenden Erfindung zu erreichen und ebenfalls möglich ist, eine Zusammensetzung von bekannter Antioxidationsstärke zu standardisieren.

Beispiel 10

Je 2.5 g der Rosmarin- und Salbeiextrakte, welche gemäß dem Verfahren von Beispiel 3 hergestellt wurden, wurden vereinigt und in 95% Getreidealkohol gelöst, zu welchem 5 g Aktivkohle zugegeben wurden. Nach Mischen über Nacht wurde die Mischung filtriert und die Lösung wiedergewonnen. Ethanol wurde aus der Lösung durch Verdampfen unter Vakuum entfernt, um die Rückgewinnung von 3.85 Gramm an leichtbraunen Kristallen zu erlauben.
Eine Probe sowohl des Ausgangsmaterials als auch der resultierenden Kristalle wurde einer Messung der antioxidierenden Aktivität in Schweineschmalz unterworfen, bei einer Verwendung von 0.02% gemäß dem Verfahren von Beispiel 2. Die Ergebnisse sind in Tabelle 11 gezeigt. Von dem teilweise entfärbten Produkt wird gezeigt, daß es in der antioxidierenden Aktivität, verglichen mit dem Ausgangsprodukt, nicht vermindert ist, während. die Farbe von leicht grünlichbraun zu leichtbraun bei 77%iger Rückgewinnung verbessert wurde. Tabelle 11 Antioxidierende Aktivität vor und nach teilweiser Entfärbung Behandlung Peroxidwert (mEq/kg) Rosmarin/Salbei (vor Entfärbung) Rosmarin/Salbei (nach Entfärbung) Kontrolle Basis
Die Zusammensetzung dieser Erfindung ist ein neuer und verbesserter Labiatae-Extrakt für die Verwendung als ein Nahrungsmittel-, kosmetisches und pharmazeutisches Antioxidans. Die Zusammensetzung wird unter Verwendung von überkritischem Kohlendioxid hergestellt und ist frei von Kontakten mit organischen Lösungsmitteln und enthält weniger als 5 ml ätherisches Öl pro 100 Gramm. Die Zusammensetzung ist für den beabsichtigten Zweck sowohl öl- als auch ethanollöslich und kann leicht in Endprodukte eingearbeitet werden, wo sie Haltbarkeit und Qualität fördert. Die antioxidierende Aktivität der Zusammensetzung ist typischerweise nicht geringer als die synthetischen Antioxidanzien BHA/BHT (1:1) bei einer Verwendungsmenge von 0.02% und ist mehreren kommerziell erhältlichen Labiatae-Antioxidanzien- Extrakten, welche durch Verfahren nach dem Stand der Technik hergestellt wurden, überlegen. Einzig die Zusammensetzung dieser Erfindung ist dadurch charakterisiert, daß sie über 25 Gew.% der natürlichen Labiatae-Antioxidansverbindung Carnosinsäure enthält.

Claims

1. Verfahren zur Extraktion von Antioxidanzien aus domestizierten Kräutern aus der Familie der Labiatae, das umfaßt:

Zermahlen der getrockneten Blätter der Kräuter zu einem feinen Pulver von weniger als 20 mesh;

Extraktion der pulverisierten Blätter mit überkritischem Kohlendioxid-Fluid ohne organische Kosolvenzien bei einem Druck von 350 bar bis 1000 bar, einer Temperatur von 31 ºC bis 120 ºC und mit einer Fluiddichte von 0,6 kg/l bis 1,0 kg/l; und

Ausfällen des Antioxidans aus dem überkritischen Fluid in einer ersten Ausfällung unter einem Druck von 100 bar bis 150 bar, bei einer Temperatur von 40 ºC bis 100 ºC und mit einer Fluiddichte von 0,2 kg/l bis 0,4 kg/l.

2. Verfahren nach Anspruch 1, wobei die Blätter bei einer Temperatur zermahlen werden, die -20 ºC nicht übersteigt.

3. Verfahren nach Anspruch 1, wobei die pulverisierten Blätter mit überkritischem Kohlendioxid-Fluid bei einem Druck von 500 bar bis 1000 bar, einer Temperatur von 90 ºC bis 110 ºC und mit einer Fluiddichte von 0,8 kg/l bis 1,0 kg/l extrahiert werden.

4, Verfahren nach Anspruch 1, wobei das Antioxidans aus dem überkritischen Fluid unter einem Druck von 110 bar bis 125 bar, einer Temperatur von von 65 ºC bis 85 ºC und mit einer Fluiddichte von 0,25 kg/l bis 0,35 kg/l ausgefällt wird.

5. Verfahren nach Anspruch 1, das außerdem Ausfällen der ätherischen Öle aus dem Kohlendioxid in einer zweiten Ausfällung unter den nicht überkritischen Bedingungen von Druck im Bereich von 20 bar bis 50 bar und Temperatur von -10 ºC bis 25 ºC umfaßt, wobei die Gasdichte weniger als 0,15 kg/l beträgt.

6. Verfahren nach Anspruch 5, wobei 70 % bis 75 % des in dem überkritischen Rohlendioxid-Fluid gelösten Extraktes in der ersten Ausfällung ausgefällt werden und der Rest des Materials in der zweiten Ausfällung ausgefällt wird.

7. Verfahren nach Anspruch 1, wobei die Kräuter Rosmarin, Salbei oder beides sind.

8. Verfahren nach Anspruch 1, wobei die Kräuter irgendwelche aus Rosmarin, Salbei, Oregano oder Thymian sind.

9. Antioxidanzien-Zusammensetzung, erhältlich nach irgendeinem der Ansprüche 1 bis 8 aus der Extraktion eines Krautes aus der Familie der Labiatae mit überkritischem Kohlendioxid-Fluid, wobei

die Antioxidanzien-Zusammensetzung zu einer Peroxidzahl von 4 mEq/kg oder weniger führt, wenn sie in einer Konzentration von 0,03 % durch Dampf erhaltenem Schweineschmalz (prime steam lard) zugesetzt und in einem lose verschlossenen Behälter bei 100 ºC 18 Stunden lang inkubiert wird,

und die Antioxidanzien-Zusammensetzung wenigstens 25 Gewichtsprozent Carnosinsäure (carnosic acid) und weniger als 5 ml wasserdestillierbare ätherische Öle pro 100 Gramm aufweist und im wesentlichen frei von einem organischen C&sub1;-C&sub6;-Lösungsmittel ist.

10. Antioxidanzien-Zusammensetzung nach Anspruch 9, die in einem nahrungsmittelgeeigneten tierischen oder pflanzlichen Öl oder Fett gelöst oder dispergiert ist.

11. Antioxidanzien-Zusainmensetzung nach Anspruch 9, die in nahrungsmittelgeeignetem Getreidealkohol gelöst ist.

12. Antioxidanzien-Zusammensetzung nach Anspruch 9, wobei das Kraut Rosmarin, Salbei oder ein Gemisch davon einschließt.

13. Antioxidanzien-Zusammensetzung zur Anwendung in Lebensmitteln, Medikamenten und Kosmetika, die umfaßt:

25 - 40 Gewichtsprozent Carnosinsäure (carnosic acid), 1 - 10 Gewichtsprozent eines C&sub1;-C&sub3;-Esters von Carnosinsäure und 0 - 5 Gewichtsprozent Carnosol, wobei die Zusammensetzung weniger als 5 ml wasserdestillierbare ätherische Öle pro 100 Gramm enthält und im wesentlichen frei von organischen C&sub1;-C&sub6;-Lösungsmitteln ist.

14. Antioxidanzien-Zusammensetzung nach Anspruch 13, wobei die Gesamtsumme von Carnosinsäure und ihres Esters im Bereich von 25 - 40 Gewichtsprozent liegt.

15. Antioxidanzien-Zusammensetzung, erhältlich nach irgendeinem der Ansprüche 1 bis 8 aus der Extraktion eines Krautes aus der Familie der Labiatae mit überkritischem Kohlendioxid-Fluid,

und die mindestens eines von Rosmarin und Salbei einschließt und umfaßt:

25 - 45 Gewichtsprozent Carnosinsäure (carnosic acid) und 0 - 10 Gewichtsprozent eines C&sub1;-C&sub3;-Esters von Carnosinsäure, wobei die Zusammensetzung weniger als 5 ml wasserdestillierbare ätherische Öle pro 100 Gramm aufweist, und die Zusammensetzung zu einer Peroxidzahl nicht über 4 mEq/kg führt, wenn sie in einer Konzentration von 0,02 Gewichtsprozent durch Dampf erhaltenem Schweineschmalz (prime steam lard) zugesetzt und in einem lose verschlossenen Behälter 18 Stunden lang bei 100 ºC inkubiert wird.

16. Antioxidanzien-Zusaininensetzung nach Anspruch 15, welche durch Lösen in nahrungsmittelgeeignetem Getreidealkohol und Behandlung mit Aktivkohle bei Raumtemperatur wenigstens teilweise entfärbt wurde.

17. Antioxidanzien-Zusammensetzung nach Anspruch 16, die abgesehen von Ethanol im wesentlichen frei von organischen Lösungsmitteln ist.

18. Antioxidanzien-Zusammensetzung nach Anspruch 17, die in einem nahrungsmittelgeeigneten tierischen oder pflanzlichen Öl oder Fett gelöst oder dispergiert ist.

19. Antioxidanzien-Zusammensetzung nach Anspruch 17, die in einem für ein medizinisches oder kosmetisches Produkt zur Anwendung beim Menschen verwendbaren Öl, Schmalz, Wachs oder Fett gelöst oder dispergiert ist.