DE629416C - Verfahren zur Herstellung pflanzlicher Amylasepraeparate - Google Patents

Description

• Verfahren zur Herstellung pflanzlicher Amylasepräparate Zur Herstellung pflanzlicher Amylasepräparate werden im allgemeinen amylasehaltige wäßrige Malzauszüge der Dialyse unterworfen. Die Dialysate werden dann fraktioniert durch Alkohol gefällt. Die auf diese Weise erreichbaren Reinheiten liegen bei Sf-Werten (Saccharifikations-Werten) von I, bei mehrfachen Fällungen bei 2,6. Diese Verfahren sind technisch, wenig brauchbar, weil man große Flüssigkeitsmengen bis zu einer Woche dialysieren muß und sehr-große Alkoholmengen benötigt. Außerdem ist bei diesen Verfahren die Schädigung der enzymatischen Substanz so groß, daß nur bescheidene Ausbeuten an aktivem Material erhalten werden. In der österreichischen Patentschrift 84287 sowie in der amerikanischen Patentschrift I 479I33 sind Verfahren beschrieben worden, nach denen die wäßrigen Malzauszüge mit Tannin oder anderen Gerbsäuren gefällt werden. Hierbei wird die enzymatische Substanz mit niedergerissen. Die Ablösung der Amylase vom Tanninei-#veißniederschlag erfolgt dann durch Digestion mit Lösungen von Gelatine, Hautpulver oder anderen mit Tannin reagierenden Stickstoffverbindungen. In eigenen Versuchen wurde festgestellt, daß die Elutionsausbeute hier nur etwa 25% 'beträgt. Außerdem ist der Reinigungseffekt sehr unbedeutend, da man die Elutionsmittel nicht mehr vorn Enzym trennen kann. Daher wird auch in der amerikanischen Patentschrift I 479I33 empfohlen, die gelatinehaltige Lösung direkt im Vakuum zur Trockne einzudampfen.
• Demgegenüber wurde nun gefunden, daß man zu hochwirksamen .Amylasepräparaten von erheblicher Reinheit gelangt, wenn man die mit Tannin erzielte Fällung, gegebenenfalls nach Auswaschen mit Wasser, in Aceton einrührt. Hierbei geht überraschenderweise der größte Teil des Niederschlags in Lösung, während ein kleiner Teil, der die Amylase in quantitativer Ausbeute enthält, ungelöst bleibt. Nach Zentrifugieren kann man den enzymhaltigen Niederschlag direkt in Wasser aufnehmen, wobei wiederum das Enzym in Lösung geht, während weitere Verunreinigungen ungelöst bleiben, die durch einfache Filtration entfernt werden können. Die Ausbeuten betragen 8o und mehr Prozent. Die Reinheitssteigerung ist bei Malzauszügen etwa 6ofach, bei Auszügen aus ungekeimtem Getreide, auf die sich das Verfahren ebenfalls amvenden läßt, etwa I ofach. Man kann das Enzym aus diesen Lösungen durch einfache Fällung mit Aceton im Verhältnis I:I bis 1,5 in fester Form ge@vinnen. Die Reinheit dieser Präparate entspricht Sf-Werten von etwa 2o, während die Reinheit der besten wissenschaftlichen Präparate, die unter sehr großen Enzymverlusten gewonnen werden, Sf-Werten von 4o bis 8o entspricht. Die Reinheit. der nach dem beanspruchten Verfahren gewonnenen Präparate, die sich technisch in größtem Üaßstabe herstellen lassen, ist demnach bereits sehr hoch.
• Beispiele i. D a r r m a 1 z : 200 g Malz wurden mit iooo ccm Toluolwasser 48 Stunden stehengelassen, dann genutscht: 740 ccm. Diese enthielten 90,3 Amylaseeinheiten (A-E) vom Amylasewert (A-W) 0,017, entsprechend einem Sf von 0,32. Die Fällung erfolgte mit 2 i ccm 5 %iger Tanninlösung. Der zentrifugierte Niederschlag wurde nach Waschen mit Wasser in Aceton eingerührt, zentrifugiert und wieder in Wasser aufgenommen. Die Lösung enthielt 72 A-E vom A-W o,98, entsprechend einem Sf von 18,4- Bei einer Ausbeute von 8o% ist demnach eine 58fache Reinheitssteigerung eingetreten. Das durch Acetonfällung gewonnene feste Präparat war von der gleichen Reinheit. .
• 2. Weizen: 5oo g geschroteter Weizen wurden mit i 5oo ccm Toluolwasser 2i2 Stunden bei 12' gerührt und genutscht. In 500 ccm des Filtrats waren 133 A-E vom A-W 0,15, entsprechend einem Sf von 2,8. Diese wurden mit 25 ccm 5 %iger Tanninlösung gefällt, der Niederschlag in Aceton eingerührt, zentrifugiert, danach in ioo ccm Wasser aufgenommen und filtriert. In diesen ioo ccm Zearen i io A-E vom A-W i,2o, entsprechend einem-Sf von 22,5. Das entspricht einer achtfachen Reinheitssteigerung bei einer Ausbeute von 82,7%. Das durch Acetonfällung gewonnene feste Präparat war von der gleichen Reinheit.

Claims (1)

1. PATENTANSPRUCH: Verfahren zur Herstellung pflanzlicher Amylasepräparate,-dadurch gekennzeichnet daß man wäßriige Auszüge aus gekeimten@ oder ungekeimten Getreidearten in bekannter Weise mit Tannin fällt und dann zwecks Gewinnung reiner Amylaselösungen den Tanninniederschlag, gegebenenfalls nach Auswaschen mit Wasser, in Aceton einrührt, von der Acetonlösung abtrennt, in Wasser aufnimmt und filtriert.