DE60125218T2 - Verfahren zur herstellung von humanen serumalbumin unter einbeziehen eines erwärmungsschrittes - Google Patents

Verfahren zur herstellung von humanen serumalbumin unter einbeziehen eines erwärmungsschrittes Download PDF

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Description

  • Technisches Gebiet
  • Die vorliegende Erfindung bezieht sich auf ein Verfahren zur Herstellung von humanem Serumalbumin. Insbesondere bezieht sich die vorliegende Erfindung auf ein Verfahren zur Herstellung eines rekombinanten humanen Serumalbumins (nachstehend auch als „rHSA" bezeichnet) gemäß der Genrekombinationstechnik, welche den Schritt einer Wärmebehandlung nahe des isoelektrischen Punktes der Verunreinigungen (hauptsächlich Proteine umfassend), die aus Wirtszellen stammen, umfaßt.
  • Stand der Technik
  • Humanes Serumalbumin (hierin nachstehend auch als „HSA" bezeichnet) ist eine Hauptproteinkomponente, die im Plasma vorhanden ist, besteht aus einem einkettigen Polypeptid, umfassend 585 Aminosäurereste, und weist ein Molekulargewicht gleich etwa 66.000 Dalton auf (siehe Minghetti, P.P. et al. (1986), Molecular structure of the human albumin gene is revealed by nucleotide sequence within 11–22 of chromosome 4. J. Biol. Chem. 261, S. 6747 bis 6757). Es ist bekannt, daß es nicht nur die Hauptrolle des HSA ist, den normalen osmotischen Druck des Blutes aufrechtzuerhalten, sondern ebenso mit einer Vielzahl von Substanzen, wie Kalziumionen, Fettsäuren, Bilirubin, Tryptophan und Arzneimitteln, die möglicherweise im Blut vorliegen, zu binden, wodurch es eine Rolle als Träger für den Transport dieser Substanzen spielt. Gereinigtes HSA ist beispielsweise bei der postoperativen Behandlung nach chirurgischen Operationen und der Behandlung von Hypoalbuminämie, verursacht durch den Verlust von Albumin, wie bei hämorrhagischem Schock, Verbrennungen und nephrotischen Syndromen, verwendet worden.
  • Gewöhnlich ist HSA hergestellt worden, indem das humane Plasma dem Niedertemperatur-Ethanol-Fraktionierungsverfahren von Cone oder einem dazu ähnlichen Verfahren unterzogen wurde, um HSA-haltige Fraktionen (HSA ist in der Fraktion V fraktioniert) zu erhalten, und dann die Fraktion durch die Verwendung einer Vielzahl von Reinigungstechniken gereinigt wurde. Außerdem wurde kürzlich ein Verfahren entwickelt, in welchem das humane Plasma nicht als ein Rohmaterial verwendet wird, zum Beispiel ein Verfahren zur Herstellung von humanem Serumalbumin unter Verwendung von Hefe, Escherichia coli- oder Bacillus subtilis-Zellen, während vom Genrekombinationsverfahren Gebrauch gemacht wird.
  • Diese Genrekombinationsverfahren werden in (1) Production of recombinant Human Serum Albumin from Saccharomyces cerevisiae; Quirk, R. et al. Biotechnology and Applied Biochemistry, 1989, 11: 273–287, (2) Secretory Expression of the Human Serum Albumin Gene in the Yeast, Saccharomyces cerevisiae; Ken Okabayashi et al. J. Biochemistry, 1991, 110: 103–110, (3) Yeast Systems for the Commercal Production of Heterologous Proteins; Richard G. Buckholz and Martin A. G. Gleeson, Bio/Technology, 1991, 9: 1067–1072 für Hefe, (4) Construktion of DNA sequences and their use for microbial production of proteins, in particular human serum albumin; Lawn, R. M. Europäische Patentveröffentlichung Nr. 0073646A (1983), (5) Synthesis and Purification of mature human serum albumin from E. coli; Latta, L. et al. Biotechnique, 1897, 5: 1309–1314 für Escherichia coli (E. coli), (6) Secretion of human serum albumin from Bacillus subtilis, Saunders, C. W. et al. J. Bacteriol. 1987, 169: 2917–2925 für Bacillus subtilis ausführlich beschrieben.
  • Die Verfahren zur Reinigung des humanen Serumalbumins, die hierin anwendbar sind, umfassen im allgemeinen die, die bisher bei der Proteinchemie verwendet werden, wie ein Aussalzungsverfahren, ein Ultrafiltrationsverfahren, ein isoelektrisches Fällungsverfahren, ein Elektrophoreseverfahren, ein Ionenaustauschchromatograpieverfahren, ein Gelfiltrationschromatographieverfahren und/oder ein Affinitätschromatographieverfahren. Tatsächlich umfaßt die humanes Serumalbumin enthaltene Fraktion verschiedene Arten von Verunreinigungen, die beispielsweise aus biologischen Geweben, Zellen und Blut stammen, und folglich wurde das humane Serumalbumin durch eine komplizierte Kombination der vorstehenden Verfahren gereinigt.
  • Beispielsweise offenbart die japanische ungeprüfte Patentveröffentlichung Nr. Hei 5-317079 ein solches Verfahren zur Herstellung von humanem Serumalbumin, umfassend die Schritte des Unterziehens des Überstandes von humanes Serumalbumin produzierenden rekombinanten Hefezellen einer Ultrafiltrationsbehandlung, einer Wärmebehandlung, einer Behandlung mit einer Säure und einer Ultrafiltrationsbehandlung in dieser Reihenfolge und dann Unterziehen einer Behandlung mit einem Kationenaustauscher, einer hydrophoben Chromatographiebehandlung, einer Behandlung mit einem Anionaustauscher und einer Aussalzungsbehandlung.
  • Dieses Herstellungsverfahren wurde entwickelt, um jede Färbung des resultierenden humanen Serumalbumins durch Wärmebehandlung des Überstandes in Gegenwart eines Reduktionsmittels zu verhindern. Es wurde ebenso von einigen Verfahren zur Herstellung von humanem Serumalbumin, einschließlich eines Wärmebehandlungsschrittes, berichtet und es wurde erkannt, daß aufgrund der Wärmebehandlung eine Vielzahl von Wirkungen zu erwarten ist.
  • Zum Beispiel offenbaren die japanische geprüfte Patentveröffentlichung Nr. Hei 6-71434 und die japanische ungeprüfte Patentveröffentlichung Nr. Hei 8-116985, daß eine Protease durch Erwärmung eines humanes Serumalbumin enthaltenden Überstandes, hergestellt gemäß der Genrekombination bei einer Temperatur im Bereich von 50 °C bis 70 °C für 1 bis 5 Stunden in Gegenwart von Acetyltryptophan oder einer organischen Carbonsäure, inaktiviert wird.
  • Außerdem offenbart die japanische ungeprüfte Patentveröffentlichung Nr. Hei 7-126182, daß Mikroorganismen als Verunreinigungen durch Erwärmen eines rekombinantes humanes Serumalbumin enthaltenden pharmazeutischen Präparats bei einer Temperatur im Bereich von 50 bis 70 °C für nicht weniger als 30 Minuten inaktiviert werden.
  • Offenbarung der Erfindung
  • Alle der vorstehenden Wärmebehandlungen, die in die Verfahren zur Herstellung von humanem Serumalbumin eingeführt werden, beziehen sich jedoch nicht auf ein Verfahren zur Entfernung von Proteinen, die in den rekombinanten menschlichen Serumalbuminprodukten als Verunreinigungen eingeschlossen sind.
  • Demgemäß ist es ein Ziel der vorliegenden Erfindung, ein Verfahren zur wirkungsvollen Entfernung von Verunreinigungen bereitzustellen, die in einem humanen Serumalbuminpräparat vorliegen.
  • Ein weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist es, humanes Serumalbumin mit einer hohen Sicherheit als ein Medikament bereitzustellen.
  • Die Erfinder dieser Erfindung haben verschiedene Studien durchgeführt, wobei die vorstehenden technischen Umstände berücksichtigt wurden, haben herausgefunden, daß proteinhaltige Verunreinigungen, welche aus humanes Serumalbumin produzierenden rekombinanten Hefezellen stammen, als Wirtszellen wirksam entfernt werden können, indem eine Kulturlösung der Wirtszelle verdünnt, die verdünnte Kulturlösung der Reihe nach einer Behandlung mit einem Kationenaustauscher, der Umwandlung von Multimeren des humanen Serumalbumins zu Monomeren davon durch eine Alkalibehandlung und eine Ultrafiltrationsbehandlung unterzogen und dann die resultierende rHSA-enthaltende Lösung einer Wärmebehandlung bei einem ph-Wert nahe des isoelektrischen Punktes der proteinhaltigen Verunreinigungen, die aus den Wirtszellen stammen, unterzogen wird, und haben daher die vorliegende Erfindung vervollständigt.
  • Die vorliegende Erfindung bezieht sich auf ein Verfahren zur Herstellung eines rekombinanten humanen Serumalbumins, umfassend einen Schritt des Wärmebehandelns einer rekombinanten humanen Serumalbumin-Lösung, enthaltend Verunreinigungen, welche von Hefezellen stammende Proteine sind, bei einem ph-Wert im Bereich von 5,0 bis 6,5, einer Temperatur im Beriech von 50 bis 70 °C, für eine Dauer im Bereich von 0,5 bis 5 Stunden. Die vorliegende Erfindung umfaßt ferner rHSA hoher Reinheit, das frei von irgendwelchen proteinhaltigen Verunreinigungen ist und gemäß dem vorstehenden Verfahren hergestellt wird. Die vorliegende Erfindung wird nachstehend ausführlicher beschrieben.
  • Kurze Beschreibung der Zeichnung
  • 1 ist ein Diagramm, welches die Ergebnisse der Gelfiltrations-HPLC-Analyse der humanes Serumalbumin enthaltenden Überstände zeigt.
  • Beste Weise zur Durchführung der Erfindung
  • Das Verfahren der vorliegenden Erfindung bezieht sich auf ein Verfahren zur Herstellung eines rekombinanten humanen Serumalbumins, umfassend einen Schritt des Wärmebehandelns einer rekombinanten humanen Serumalbumin-Lösung, enthaltend Verunreinigungen, welche von Hefezellen stammende Proteine sind, bei einem ph-Wert im Bereich von 5,0 bis 6,5, einer Temperatur im Bereich von 50 bis 70 °C, für eine Dauer im Bereich von 0,5 bis 5 Stunden. Die Praxis dieses Verfahrens würde die einfache Entfernung von Verunreinigungen, die beispielsweise aus Hefezellen stammen, und die Herstellung von humanem Serumalbumin mit hoher Reinheit gestatten.
  • Die Versuchsobjekte, auf die die Wärmebehandlung der vorliegenden Erfindung angewandt werden kann, können beispielsweise rHSA-enthaltende Lösungen sein, enthaltend proteinhaltige Verunreinigungen, welche aus rHSA-erzeugenden Wirtszellen stammen und gemäß dem Genrekombinationsverfahren hergestellt werden.
  • Bevorzugt werden hierin Hefezellen verwendet, wie die, die zu der Gattung Saccharomyces und Pichia gehören, wobei der Stamm Saccharomyces cerevisiae AH22 oder Mutanten davon hierin stärker bevorzugt verwendet werden. Das Verfahren der vorliegenden Erfindung kann nicht nur auf die rHSA-enthaltende Lösung, umfassend proteinhaltige Verunreinigungen, welche aus den rHSA-erzeugenden rekombinanten Wirtszellen stammen, sondern ebenso auf eine humane Serumalbumin-Lösung, die proteinhaltige Bestandteile enthält, welche aus Plasma stammen, angewandt werden.
  • Die Wärmebehandlung der vorliegenden Erfindung kann zu jedem Schritt des rHSA-Herstellungsverfahrens (oder des Herstellungsverfahrens des aus dem Plasma abgeleiteten humanen Serumalbumins) durchgeführt werden. Beispielsweise wird das Verfahren der vorliegenden Erfindung wünschenswerterweise auf den Überstand humaner Serumalbumin-erzeugender rekombinanter Hefezellen, zerstoßene Hefezellen-enthaltende Flüssigkeiten, rHSA-enthaltende Lösung, die durch entsprechende Vorbehandlung dieser Überstände oder Flüssigkeiten erhalten wurden, oder die durch weitere Reinigung der vorstehenden zu einem gewissen Grad durch Behandlungen, wie Ionenaustausch, Adsorptionschromatograpie, Gelfiltration und/oder Aussalzungsbehandlung, erhaltenen angewandt. Vorzugsweise wird das Verfahren der vorliegenden Erfindung auf den Überstand rHSA-erzeugender Hefezellen angewandt, nachdem der Überstand 2- bis 3mal mit gereinigtem Wasser verdünnt und dann einer Behandlung mit einem Kationenaustauscher, einer Alkalibehandlung und einer Ultrafiltrationsbehandlung unterzogen wurde.
  • Die Behandlung mit einem Kationenaustauscher wird gemäß dem üblichen Verfahren durchgeführt. Beispiele hierin verwendbarer Kationenaustauscher sind Sulfoagarose, Sulfocellulose, Sulfopropylagarose, Sulfopropyldextran, Sulfopropylpolyvinyl, Carboxymethylagarose, Carboxymethyldextran und Carboxymethylcellulose. Irgendeiner dieser Trägerstoffe kann in der vorliegenden Erfindung verwendet werden. Beispielsweise kann ein Verfahren übernommen werden, umfassend die Schritte des Ladens auf eine Kationenaustauschersäule, äquilibriert mit einem 50 mM-Acetatpuffer (pH 4,5), enthaltend 50 mM Natriumchlorid, einer humanen Serumalbumin-Lösung, deren ph-Wert auf dieses Niveau eingestellt ist, des Waschens und dann Eluierens der Säule mit einem 50 mM-Phosphatpuffer (pH 9,0), ergänzt mit 300 mM Natriumchlorid, wodurch HSA-enthaltende Fraktionen erhalten werden.
  • Anschließend werden die resultierenden HSA-enthaltenden Fraktionen einer Alkalibehandlung unterzogen, um Multimere von humanem Serumalbumin, die während der Kultivierung von Wirtszellen oder Herstellungsverfahren von humanem Serumalbumin erzeugt wurden, in Monomere davon umzuwandeln. Eine alkalische Lösung mit einen ph-Wert im Bereich von 8 bis 11 und vorzugsweise 8,5 bis 9,5 wird bei der Umwandlung des Multimers zu dem Monomer verwendet.
  • Die Temperatur der Alkalibehandlung ist nicht notwendigerweise Raumtemperatur und kann eine sein, welche nie HSA und rHSA denaturiert oder modifiziert. Beispielsweise kann die Alkalibehandlung bei einer Temperatur im Bereich von 0 bis 65 °C durchgeführt werden, aber es wird bevorzugt ein Verfahren verwendet, in welchem eine Multimer-enthaltende humane Serumalbumin-Lösung bei Raumtemperatur (etwa 25 °C) stehen gelassen wird.
  • Die Multimere des humanen Serumalbumins werden zu deren Monomeren umgewandelt, indem eine Multimer-enthaltende Lösung mit einer alkalischen Lösung gemischt wird und dann das resultierende Gemisch für mindestens 15 Minuten und vorzugsweise nicht weniger als 3 Stunden stehen gelassen wird. Es gibt keine bestimmte Obergrenze in bezug auf die Dauer, die das Gemisch stehen gelassen werden muß.
  • Die chemischen Substanzen, die für die Alkalisierung des ph-Werts der Flüssigkeit, die für die Alkalibehandlung verwendet wurde, verwendet wurden, sind nicht auf spezifische begrenzt. Beispiele dafür umfassen ein oder mindestens zwei Mitglieder, ausgewählt aus der Gruppe, bestehend aus alkalischen organischen Verbindungen und alkalischen anorganischen Verbindungen. Spezielle Beispiele davon sind Ammoniak, Ammoniumsalze, basische Metallhydroxide (wie Natriumhydroxid und Kaliumhydroxid), Borate, Phosphate, Acetate, Oxalate, Citrate, Tris-hydroxyaminomethan und Gemische aus mindestens zwei dieser Substanzen.
  • Solche chemischen Substanzen werden in einer Konzentration verwendet, die nie irgendwelche Modifikationen oder Denaturierungen von humanem Serumalbumin verursacht.
  • Wenn eine SH-Gruppen-enthaltende Verbindung zu der alkalischen Lösung, die bei der Alkalibehandlung verwendet wird, zugegeben wird, kann irgendwelches nicht geändertes Binden, das in einem HSA-Molekül und/oder zwischen HSA-Molekülen oder ferner zwischen einem HSA-Molekül und Verunreinigungen (sie würden hauptsächlich Proteine umfassen) beobachtet wird, verhindert werden und dies gestattet die wirksamere Umwandlung der Multimere zu Monomeren.
  • Die bei dieser Behandlung verwendeten SH-Gruppen-enthaltenden Verbindungen sind nicht auf besondere begrenzt, insofern als daß sie Verbindungen sind, die je weils eine SH-Gruppe haben, aber bevorzugt sind niedermolekulare Verbindungen, die jeweils eine SH-Gruppe besitzen. Spezielle Beispiele davon umfassen Cystein, Cysteamin, Cystamin und Methionin, wobei Cystein hierin bevorzugt verwendet wird.
  • Die Menge der SH-Gruppen-enthaltenden Verbindung, die zu der alkalischen Lösung zugegeben werden soll, liegt im Bereich von 0,1 bis 50 mM, bevorzugt 0,2 bis 15 mM und stärker bevorzugt 0,5 bis 5 mM, wobei die Konzentration von rHSA in den Bereich von 1 bis 100 mg/ml fällt.
  • Dann wird die HSA-enthaltende Lösung unter Verwendung einer Ultrafiltrationsmembran (deren zu fraktionierendes Molekulargewicht auf 10.000 eingestellt wird) konzentriert und dann wird der ph-Wert der Lösung auf ein Niveau nahe des isoelektrischen Punktes der Verunreinigungen der Lösung vor der Wärmebehandlung eingestellt.
  • Die Wärmebehandlung wird bei einer Temperatur im Bereich von 50 bis 70 °C, vorzugsweise 55 bis 60 °C und stärker bevorzugt 60 °C, durchgeführt. Die für die Wärmebehandlung erforderliche Dauer liegt im Bereich von 30 Minuten bis 5 Stunden und beträgt vorzugsweise eine Stunde.
  • Der ph-Wert während der Wärmebehandlung ist bevorzugt einer nahe des isoelektrischen Punktes der Verunreinigungen. Beispielsweise liegt er im Bereich von 5 bis 6,5, stärker bevorzugt 5 bis 6 und am stärksten bevorzugt 5,5, wenn Hefezellen, wie Zellen vom Stamm Saccharomyces cerevisiae AH22 oder Mutanten davon als die humanes Serumalbumin erzeugenden Wirtszellen verwendet werden.
  • Außerdem ist die Konzentration der humanen Serumalbumin-Lösung, die bei der Wärmebehandlung verwendet wird, nicht auf eine bestimmte begrenzt, insofern als daß das humane Serumalbumin vollständig in der Lösung gelöst wird. Sie liegt vorzugsweise im Bereich von 10 bis 250 mg/ml und stärker bevorzugt 80 bis 120 mg/ml.
  • Die Reinheit des humanen Serumalbumins, die nach der Wärmebehandlung erzielt wird, kann durch Gelfiltrations-HPLC-Analyse bestimmt werden. Beispielsweise kann diese Analyse durchgeführt werden, indem eine Probenlösung auf eine Säule, TSKgel G3000SW (erhältlich von Tosoh Corporation) geladen, dies mit 0,1 M KH2PO4/0,3 M NaCl-Puffer eluiert und dann die Absorbanz der resultierenden Fraktionen, die bei 280 nm beobachtet wurden, bestimmt wird. Die humane Serumalbumin-Lösung, hergestellt durch die gleichen Verfahren und frei von jeglicher Wärmebehandlung, wird als Kontrolle verwendet.
  • Alternativ wird eine Kulturlösung aus Hefezellen, die kein humanes Serumalbumin erzeugen kann, durch das gleiche Verfahren, wie das in der vorliegenden Erfindung verwendete, grob gereinigt, Kaninchen werden gegen das resultierende Produkt immunisiert, um ein Antiserum zu erhalten und jede Komponente, die aus Hefezellen stammt, die in dem gereinigten rHSA vorliegt, kann dann gemäß dem Enzym-Immunoassay-Verfahren (EIA-Verfahren) unter Verwendung des resultierenden Antiserums bestimmt werden.
  • Beispiele:
  • Herstellungsbeispiel 1: Herstellung einer Lösung aus Multimer-enthaltendem humanem Serumalbumin
  • Gemäß dem in TOKUHYO Hei 11-509525 offenbarten Verfahren wurde rHSA unter Verwendung von Hefezellen (Saccharomyces cerevisiae) erzeugt. Diese rHSA-enthaltende Kulturlösung wurde mit gereinigtem Wasser auf ein Gesamtvolumen von etwa dem doppelten der Ausgangslösung verdünnt und dann wurde der ph-Wert der verdünnten Lösung unter Verwendung einer wässerigen Essigsäurelösung auf 4,5 eingestellt. Dann wurde die Lösung auf eine STREAMLINE SP-Säule (erhältlich von Amersham Pharmacia Biotech Company; Durchmesser 60 cm × 16 cm) geladen, die mit einer 50 mM Natriumacetatpufferlösung (pH 4,5), enthaltend 50 mM Natriumchlorid, äquilibriert worden war. Danach wurde die Säule mit einer Pufferlösung, die identisch zu der für die Äquilibrierung der Säule verwendeten war, gewaschen, gefolgt von Führen einer 50 mM-Phosphatpufferlösung (pH 9,0), enthaltend 300 mM Natriumchlorid, durch die Säule, wodurch rHSA-enthaltende Fraktionen erhalten wurden.
  • Herstellungsbeispiel 2: Alkali-Behandlung von Cystein-enthaltender Albuminlösung
  • Zu der resultierenden rHSA-enthaltenden Fraktion (10 ml) wurden 1 mM Cystein und eine 5%ige (G/V) Dikaliumtetraboratlösung (15 ml) zu einer Endkonzentration von 3 % (pH etwa 9,0) zugegeben, gefolgt vom Stehenlassen des resultierenden Gemisches bei Raumtemperatur für 5 Stunden. Dann wurde eine wässerige Essigsäurelösung zu der resultierenden Lösung zugegeben, um den ph-Wert der Lösung auf 7,0 einzustellen und folglich die Alkalibehandlung zu beenden.
  • Beispiel 1: Wärmebehandlung
  • Dann wurde die rHSA-enthaltende wässerige Lösung unter Verwendung einer Ultrafiltrationsmembran (erhältlich von Zartrius Company) mit einem fraktionierten Molekulargewicht von 10.000 auf eine rHSA-Konzentration von etwa 100 mg/ml konzentriert und gleichzeitig wurde das Medium der wässerigen Lösung durch einen 50 mM-Phosphatpuffer (pH 5,5), enthaltend 5 mM Natriumcaprylat, ersetzt. Die resultierende rHSA-Lösung wurde dann bei 60 °C für eine Stunde wärmebehandelt. Anschließend wurde die Lösung auf Raumtemperatur abgekühlt und gebildeter Niederschlag wurde durch Zentrifugation entfernt, wodurch der Überstand wiedergewonnen wurde.
  • Testbeispiel 1: Gelfiltrations-HPLC-Analyse
  • Der vorstehende Überstand (0,2 ml) wurde auf eine TSKgel G3000SW-Säule (erhältlich von Tosoh Corporation) (Durchmesser 0,75 cm × 30 cm) geladen, mit 0,1 M KH2PO4/0,3 M NaCl-Puffer äquilibriert, die Säule wurde mit demselben Puffer eluiert und die Absorbanz der resultierenden Fraktion wurde bei einer Wellenlänge von 280 nm bestimmt. Die humane Serumalbumin-Lösung, hergestellt durch dieselben Verfahren und ohne jegliche Wärmebehandlung, wurde als Kontrolle verwendet. Die Ergebnisse der Analyse sind in 1 dargestellt.
  • Testbeispiel 2: Analyse von Komponenten, die aus Hefezellen stammen
  • Eine Kulturlösung aus Hefezellen, ohne humanes Serumalbumin erzeugen zu können, wurde durch das gleiche Verfahren, wie das in der vorliegenden Erfindung verwendete, grob gereinigt, Kaninchen wurden gegen das resultierende Produkt immunisiert, wodurch ein Antiserum erhalten wurde und ein ELISA-Meßsystem wurde gemäß dem gewöhnlichen Verfahren unter Verwendung des resultierenden Antise rums konstruiert, um folglich jegliche Komponente, die aus Hefezellen stammt, die in der HSA-enthaltenden Lösung, die durch das Verfahren der vorliegenden Erfindung erhalten wurde, vorliegt, zu bestimmen. Die so erhaltenen Ergebnisse werden in der folgenden Tabelle 1 zusammengefaßt. Tabelle 1
    Figure 00110001
  • Industrielle Anwendbarkeit
  • Gemäß der vorliegenden Erfindung wird eine humane Serumalbumin-Lösung, enthaltend proteinhaltige Verunreinigungen, welche aus Wirtszellen stammt, bei einem ph-Wert nahe des isoelektrischen Punktes der proteinhaltigen Verunreinigungen wärmebehandelt, um einfach und effektiv die proteinhaltigen Verunreinigungen aus der humanen Serumalbumin-Lösung zu entfernen.
  • Außerdem gestattet die vorliegende Erfindung die Herstellung von hochreinem humanem Serumalbumin mit einem niedrigen Gehalt an Substanzen, die aus Wirtszellen stammen, die eine Ursache für Nebenwirkungen wie Allergie sein können, die zu beobachten sind, wenn das humane Serumalbumin einem Menschen verabreicht wird. Die vorliegende Erfindung kann in Kombination mit anderen Reinigungsverfahren verwendet werden, um die Reinheit des humanen Serumalbumins weiter zu verbessern.

Claims (4)

  1. Verfahren zur Herstellung eines rekombinanten humanen Serumalbumins, umfassend einen Schritt des Wärmebehandelns einer rekombinanten humanen Serumalbumin-Lösung, enthaltend Verunreinigungen, welche von Hefezellen stammende Proteine sind, bei einem pH-Wert im Bereich von 5,0 bis 6,5, einer Temperatur im Bereich von 50 bis 70°C, für eine Dauer im Bereich von 0,5 bis 5 Stunden.
  2. Verfahren nach Anspruch 1, wobei die Wärmebehandlung bei einer Temperatur im Bereich von 55 bis 60°C durchgeführt wird.
  3. Verfahren nach Anspruch 1, wobei die Wärmebehandlung für eine Stunde durchgeführt wird.
  4. Verfahren nach Anspruch 1, wobei die Wärmebehandlung bei einem pH-Wert im Bereich von 5,5 bis 6,0 durchgeführt wird.
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