DE60025309T2

DE60025309T2 - Verfahren zur Herbeiführung zeitunabhängiger Konsistenz in Assays für Mittlereteilchenvolumen

Info

Publication number: DE60025309T2
Application number: DE60025309T
Authority: DE
Inventors: Berend Redlands Houwen; Kinya Kakogawa-shi Uchihashi; Yukio Akashi-shi Hamaguchi; Rolf Riverside Mast
Original assignee: Sysmex Corp
Current assignee: Sysmex Corp
Priority date: 1999-06-02
Filing date: 2000-05-30
Publication date: 2006-08-24
Anticipated expiration: 2020-05-31
Also published as: EP1058114A2; EP1058114B1; US6225124B1; DE60025309D1; ATE315226T1; JP4086452B2; EP1058114A3; CN1276526A; JP2000356636A

Description

HINTERGRUND DER ERFINDUNG
Technisches Gebiet
Die vorliegende Erfindung betrifft das Testen auf das mittlere Korpuskularvolumen (MCV) in Blutproben; genauer gesagt betrifft die vorliegende Erfindung den Einsatz eines Reagens sowie eines Verfahrens zur Anwendung in MCV-Tests unter Verwendung eines Partikelanalysengeräts.
Beschreibung des Standes der Technik
Automatisierte hämatologische Analysengeräte sind gegenwärtig auf dem Gebiet der klinischen Untersuchung weit verbreitet. Als Geräte zum Screenen von Patienten in medizinischen Diagnoseverfahren dienen diese zur raschen Analyse von Blutbestandteilen. Mit solchen Geräten können die für ein vollständiges Blutbild (CBC) erforderlichen Mehrfachtests durchgeführt werden, einschließlich der Anzahl an roten Blutkörperchen (RBC), der Anzahl an weißen Blutkörperchen (WBC), der Leukozytenklassifizierung, Hämoglobinkonzentration (Hb), Hämatokrit- (Ht-) und Blutplättchen- (PLT-) Werte.
Das MCV ist ein wesentlicher Wert, der aus diesen zytometrischen Testwerten berechnet wird. Das MCV wird erhalten, indem der Hämatokritwert durch die RBC-Anzahl dividiert wird, ist also der Wert Ht/RBC, wobei der Hämatokritwert der Prozentsatz an Erythrozyten (roten Blutkörperchen) in einem Einheitsvolumen Vollblut ist. Das MCV ist demnach das mittlere Volumen eines einzelnen roten Blutkörperchens und wird folglich in Ferntolitern (fl, d.s. 10^–15 l) angegeben.
In den oben erwähnten hämatologischen Analysengeräten kommen Durchflusszytometer zum Einsatz. In Durchflusszytometern wird eine verdünnte Blutprobe mit hoher Geschwindigkeit durch eine sehr dünne Düse in eine Durchflusszelle geleitet, und der Ausfluss aus der Düse ist vom zylindrischen Fluss einer Hüllflüssigkeit umgeben (laminate Strömung). Durch Verengen der laminaren Strömung kann der Proben fluss bis zu einem Punkt fokussiert werden, an dem der Fluss im Wesentlichen eine lineare Abfolge von Zellen darstellt. Die Zellen, deren Durchtritt im Probenfluss somit durch die laminare Strömung geregelt wird, werden anschließend optisch durch Bestrahlen des Flusses mit einem Laserstrahl sowie elektrisch durch Messung des Widerstands oder der Leitfähigkeit detektiert.
Zur Vorbereitung einer Vollblutprobe für durchflusszytomtrische Tests in einem oben beschriebenen hämatologischen Analysengerät muss die Probe im Allgemeinen mit einem gerinnungshemmenden Mittel, wie z.B. einem EDTA-Salz, behandelt und mit einer physiologisch-isotonischen Lösung verdünnt werden.
Als Verdünnungsmittel zur Verdünnung von Vollblut kommen im Allgemeinen Lösungen, wie z.B. physiologische Kochsalzlösungen, Ringerlösung, Lockelösung und Tyrodelösung, in Frage. Bei Durchführung der oben beschriebenen Tests in einem hämatologischen Analysengerät können die eben erwähnten Verdünnungsmittel eingesetzt werden. Herkömmlicherweise werden jedoch das jeweilige Analysengerät optimierte Verdünnungsmittel verwendet.
Ein Grundproblem der gegenwärtigen Technologie bei der Vorbereitung von Vollblutproben für MCV-Tests liegt darin, dass sich das tatsächliche MCV nach der Blutabnahme mit der Zeit ändert. Der für die klinische Diagnose erforderliche MCV-Wert ist jener, der unmittelbar nach Abnahme der Blutprobe erhalten werden würde, und zwar jener Wert, der dem MCV des ursprünglichen Bluts entspricht.
In der Praxis wird der MCV-Wert als Teil eines CBC nicht vor Ablauf von 72 Stunden nach erfolgter Abnahme der Blutprobe gemessen. Zu diesem Zeitpunkt liefern Blutproben an sich jedoch keine geeigneten MCV-Testwerte mehr. Nach der Blutabnahme quellen die RBCs in der Probe, so dass einige Zeit nach der Blutabnahme gemessene MCV-Werte zunehmend höher ausfallen als das ursprüngliche mittlere RBC-Volumen. Das ursprüngliche MCV ist die tatsächliche, diagnostisch erforderliche Messung.
In den japanischen Patentanmeldungen JP-A-1-102366 (1989), JP-A-1-102365 (1989) und JP-A-8-122327 (1996) sind verschiedene wässrige Lösungen offenbart, die nichtionische Tenside enthalten. Dennoch wird jede dieser Lösungen als Durchflusszytometer-Hüllflüssigkeit verwendet, und die nichtionischen Tenside werden zugesetzt, um Luftbläschen in der Durchflusskammer zu entfernen.
Zudem wird in der EP-A-115.077 ein Verdünnungsmittel offenbart, dem ein nichtionisches Tensid zugesetzt worden ist, um die Wirkung antiseptischer Mittel auf Erythrozyten zu neutralisieren, mit dem letztendlichen Ziel, Änderungen des gemessenen MCV nach der Verdünnung aufgrund der antiseptischen Mittel einzuschränken. Dennoch wird in der EP-A-115.077 kein Verfahren zur Einschränkung von Änderungen des gemessenen MCV aufgrund der nach Abnahme der Blutproben verstrichenen Zeit offenbart.
Die US-A-4.358.394 beschreibt ein Verfahren zur Anfertigung von Vollblut-Referenzkontrollen mit Langzeitstabilität. Das Verfahren umfasst das Verdünnen gepackter roter Blutkörperchen in einem vorbehandelten Verdünnungsmittel, das Lactose und ein nichtionisches Tensid umfasst und einen osmotischen Druck von 350 mOsm/kg aufweist. Dieses Verdünnungsmittel senkt das Volumen der roten Blutkörperchen und stabilisiert deren Größenverteilungsbreite.
Es wäre ein wichtiger Fortschritt auf dem Gebiet der Erfindung, wenn eine Möglichkeit gefunden werden könnte, eine Konsistenz von bis zu 72 Stunden nach erfolgter Blutabnahme durchgeführten Hämatokrit- und RBC-Anzahlsmessungen mit den ursprünglichen Werten von Blutproben zu erzielen.
ZUSAMMENFASSUNG DER ERFINDUNG
Durch vorliegende Erfindung kommt es dazu, dass eine einige Zeit nach der Probennahme untersuchte Blutprobe einen MCV-Wert liefert, der mit dem ursprünglichen MCV-Wert der Probe, d.h. dem unmittelbar nach der Abnahme erhaltenen MCV-Wert, bemerkenswert konsistent ist.
Ein Reagens zur Verwendung gemäß vorliegender Erfindung ist eine wässrige Verdünnungslösung für Blutproben, die eine geringe Menge eines vorgegebenen Tensids enthält, das in einem eingeschränkten Konzentrationsbereich zugesetzt ist. Der osmotische Druck des Reagens wird mit einer geeigneten Substanz innerhalb eines vorgegebenen Bereichs eingestellt.
Die vorliegende Erfindung stellt die Verwendung eines in Anspruch 1 dargelegten Blutproben-Verdünnungsreagens bereit.
Vorzugsweise liegt der osmotische Druck (π) des Reagens im Bereich von 230 bis 350 mOsm/kg, insbesondere im Bereich von 260 bis 320 mOsm/kg.
In einer bevorzugten Ausführungsform der vorliegenden Erfindung umfasst das nichtionische Tensid zumindest eine aus Alkylgruppen, Alkenylgruppen und Alkinylgruppen mit jeweils 12 bis 24 Kohlenstoffatomen ausgewählte Gruppe.
Das nichtionische Tensid umfasst vorzugsweise eine Polyoxyethylenkette mit einer Anzahl von Molen an addiertem Ethylenoxid in einem Bereich von 5 bis 70.
Als konkrete Beispiele können beliebige der folgenden nichtionischen Tenside in einer Ausführungsform gemäß vorliegender Erfindung verwendet werden.

a) Polysorbat-80 (Oleatester von Sorbitan + 20 Mol PEG), "Crillet 4" der Croda Company
b) Steareth-20 (Stearylalkohol + PEG 20), "Volpo S-20" der Croda Company
c) PEG-60 Mandelöl-Glyceride (Mandelölmono- und -diglycerid mit 60 Mol PEG), "Crovol A-70" der Croda Company
d) PEG-23-Oleat (Ölsäure + PEG-23-Ester), "Crodet O 23" der Croda Company

Eine weiteres bevorzugtes nichtionisches Tensid ist Oleth-20 (Polyoxyethylen-[20]-Oleylether). Dieses Tensid enthält ein Polyoxyethylen/Oleylether-Gemisch, in dem die mittlere Anzahl an Oxyethyleneinheiten pro Molekül etwa 20 beträgt.
Die Bezeichnungen der oben angeführten Substanzen sind CTFA-Namen (d.h. Bezeichnungen der "Cosmetics, Toiletry and Fragrance Association").
Es versteht sich, dass auch Gemische hierin definierter nichtionischer Tenside eingesetzt werden können und im Schutzumfang der vorliegenden Erfindung liegen. Darüber hinaus sollte klar sein, dass im Handel erhältliche nichtionische Tenside für diese Erfindung geeignet sind, sofern sie ansonsten den hierin angegebenen Parametern entsprechen. Es ist allgemein bekannt, dass diese im Handel erhältlichen nichtionischen Tenside keine chemisch reinen Materialien darstellen. Folglich liegt die begleitende Einführung verwandter nichtionischer Strukturen und von Fremdmaterialien in ein Reagens gemäß der Erfindung auch im Schutzumfang, vorausgesetzt, die obigen Parameter sind erfüllt.
Es wird besonders bevorzugt, dass die Tenside oder deren Gemische in der Salzlösung transparent sind. Die nichtionischen Tenside sind vorzugsweise wasserlöslich, um bei einer Mindestgewichtskonzentration von 0,1 % eine klare Lösung zu erhalten.
Die Konzentration der vorgegebenen nichtionischen Tenside zur Aufnahme in das Reagens kann anhand des osmotischen Drucks und der Zusammensetzung der Salzlösung als Lösungsmittel geeignet bestimmt werden. Im Allgemeinen können die nichtionischen Tenside jedoch in einer niedrigen Konzentration im Bereich von etwa 0,0005 bis 0,5 % eingesetzt werden. Eine bevorzugte Konzentration liegt im Bereich von etwa 0,001 bis 0,1 % und insbesondere im Bereich von etwa 0,005 bis 0,05 %.
Gemäß der Erfindung wird das nichtionische Tensid in der so angefertigten Salzlösung verwendet, um Blutproben für hämatologische Tests zu verdünnen und zu stabilisieren.
Das nichtionische Tensid weist vorzugsweise ein Hydrophil-Lipophil-Gleichgewicht (HLB) von 10–20 auf.
Der pH eines Reagens zur Verwendung gemäß vorliegender Erfindung beträgt vorzugsweise 6,0–8,5.
Das Reagens zur Verwendung gemäß der vorliegenden Erfindung umfasst darüber hinaus einen Puffer zur Stabilisierung seines pH, ein Additiv zum Einstellen des osmotischen Drucks der Reagenslösung, eine antiseptische Substanz oder ein Antioxidationsmittel. Geeignete Puffer unterliegen keinen speziellen Einschränkungen, wobei jedoch Phosphatpuffer, Boratpuffer, Trispuffer, Imidazolpuffer etc. bevorzugt werden.
Geeignete Substanzen zum Einstellen des pH-Werts des Reagens unterliegen keinen speziellen Einschränkungen, können aber beispielsweise Salzsäure oder Natriumhydroxid sein.
Geeignete Substanzen zum Einstellen des osmotischen Drucks unterliegen keinen speziellen Einschränkungen. Es kann beispielsweise zumindest eine aus Alkalimetallsalzen oder Erdalkalimetallsalzen ausgewählte Substanz, z.B. Natriumchlorid oder Kaliumchlorid, verwendet werden. Alternativ dazu kann ein Zucker, wie z.B. Saccharose, Glucose etc., oder ein Polyethylenglykol verwendet werden.
Das Verfahren gemäß vorliegender Erfindung ist in Anspruch 9 dargelegt.
In einem bevorzugten Aspekt der vorliegenden Erfindung wird der hämatologische Test in einem Partikelanalysengerät durchgeführt, das auf dem Prinzip des elektrischen Widerstands basiert, wobei der Hüllfluss-Widerstandsmechanismus noch bevorzugter ist.
Vor dem Test muss das Vollblut mit einem gerinnungshemmenden Mittel behandelt werden.
Als gerinnungshemmende Standardbehandlung wird einer Vollblutprobe eine geeignete Menge eines gerinnungshemmenden Mittels, wie z.B. EDTA-Salz, unmittelbar nach der Blutabnahme zugesetzt.
Die Formel eines Beispiels für ein gerinnungshemmendes Mittel ist nachstehend dargestellt:
Die Proben werden vorzugsweise erhalten, indem ein Vakuum-Blutabnahmeröhrchen eingesetzt wird, und vorzugsweise zum Zeitpunkt der Blutabnahme mit einem gerinnungshemmenden Mittel versetzt.
Die zur Verwendung gemäß vorliegender Erfindung verwendete Verdünnungslösung führt zu morphologischen Veränderungen der RBC in der Blutprobe und wirkt bei Blutproben, die bis zu zumindest 72 Stunden alt sind, was MCV-Ergebnisse liefert, die mit jenen übereinstimmen, die unmittelbar nach der Blutabnahme erhalten wurden.
Der Wirkungsmechanismus der vorliegenden Erfindung ist bisher nicht bewiesen worden. Dennoch wurde herausgefunden, dass das Verdünnen einer Blutprobe mit einer Lösung, die auf einen vorgegebenen osmotischen Druck eingestellt ist und ein vorgegebenes Tensid enthält, zu einer morphologischen Veränderung der RBC in der Blutprobe führt, was die Konsistenz beim Testen auf das MCV wiederherstellt. Die morphologische Veränderung erfolgt in einem Ausmaß, bei dem der einige Zeit nach der Abnahme gemessene MCV-Wert roter Blutkörperchen innerhalb eines diagnostisch annehmbaren Bereichs mit dem MCV-Wert direkt nach der Blutprobenabnahme übereinstimmt. Folglich liefert die vorliegende Erfindung während der diagnostischen Lebensdauer der Blutprobe konsistente MCV-Werte.
Dies wurde bestätigt, indem eine frisch abgenommene Blutprobe sowie eine 72 Stunden alte Probe in einem Verdünnungslösungsreagens gemäß vorliegender Erfindung suspendiert wurde und die jeweiligen Proben unter dem Mikroskop untersucht wurden. Bei beiden Proben wurde eine ähnliche Stomatozytenkonzentration festgestellt.
Unter Verwendung eines Reagens gemäß vorliegender Erfindung können zeitabhängige Veränderungen des MCV einer Blutprobe eingeschränkt werden. Diskrepanzen des MCV bei Messung zu verschiedenen Zeitpunkten zwischen der Probennahme und zumindest 72 Stunden danach können auf einen Bereich von etwa ± 4 (fl) geregelt werden, was innerhalb eines diagnostisch annehmbaren Bereichs liegt.
Die folgende detaillierte Beschreibung führt zu einem besseren Verständnis der obigen und anderer Ziele, Merkmale, Aspekte und Vorteile der vorliegenden Erfindung.
DETAILLIERTE BESCHREIBUNG DER AUSFÜHRUNGSFORMEN
Ausführungsform 1
Blutproben wurden mit dem gerinnungshemmenden Mittel EDTA-3K behandelt. Die Proben wurden anschließend im automatisierten hämatologischen Analysengerät SE-9500 von Sysmex Co. Ltd. unmittelbar nach der Blutabnahme und 72 Stunden danach einem MCV-Test unterzogen. Die Blutproben wurden bei 25 °C gelagert.

Reagens A (herkömmlich): 15 mM Phosphatpufferlösung
Der osmotische Druck dieses Reagens wurde mit Natriumchlorid auf ca. 250 mOsm/kg und sein pH mit Natriumhydroxid auf ca. 7,8 eingestellt.

Reagens B: 15 mM Phosphatpufferlösung

0,015 % Polyoxyethylen-(20)-oleylether
Der osmotische Druck dieses Reagens wurde mit Natriumchlorid auf ca. 320 mOsm/kg und sein pH mit Natriumhydroxid auf ca. 7,8 eingestellt.
Ausführungsform 2
Blutproben wurden mit dem gerinnungshemmenden Mittel EDTA-2K behandelt. Die Proben wurden anschließend im automatisierten hämatologischen Analysengerät SE-9500 von Sysmex Co. Ltd. 12 und 48 Stunden nach der Blutabnahme einem MCV-Test unterzogen. Die Blutproben wurden bei 25 °C gelagert.

Reagens A: 15 mM Phosphatpufferlösung
Der osmotische Druck dieses Reagens wurde mit Natriumchlorid auf ca. 250 mOsm/kg und sein pH mit Natriumhydroxid auf ca. 7,8 eingestellt.

Reagens C: 15 mM Phosphatpufferlösung
Der osmotische Druck dieses Reagens wurde mit Natriumchlorid auf ca. 285 mOsm/kg und sein pH mit Natriumhydroxid auf ca. 7,8 eingestellt.

Reagens D: 15 mM Phosphatpufferlösung

0,015 % Polyoxyethylen-(20)-oleylether
Der osmotische Druck dieses Reagens wurde mit Natriumchlorid auf ca. 285 mOsm/kg und sein pH mit Natriumhydroxid auf ca. 7,8 eingestellt.
Die Ergebnisse zeigen, dass durch Erhöhung des osmotischen Drucks des Verdünnungsmittels keine Steuerung der Schwankung des MCV der Blutproben einige Zeit nach der Abnahme gegeben war. Die Zugabe nichtionischer Tenside zum Verdünnungsmittel zeigt jedoch erkennbare Wirkung, indem die Schwankung des MCV niedrig gehalten wird.
Ausführungsform 3
sIn Ausführungsform 3 wurden Schwankungen des MCV-Werts unter Verwendung von Reagenzien gemessen, die aus Reagens D durch Variation seines osmotischen Drucks hergestellt wurden. Der osmotische Druck der Reagenzien wurde durch Änderung der Menge an zugesetztem Natriumchlorid eingestellt. Die Blutproben wurden bei 25 °C gelagert. Die Proben wurden mit einem automatisierten hämatologischen Analysengerät SE-9500 von Sysmex Co. Ltd. getestet, um das MCV zu ermitteln.

Reagens D: π = 285 mOsm/kg (pH 7,8)

Reagens E: π = 250 mOsm/kg (pH 7,8)

Reagens F: π = 268 mOsm/kg (pH 7,8)

Reagens G: π = 300 mOsm/kg (pH 7,8)

Reagens H: π = 320 mOsm/kg (pH 7,8)
Die Ergebnisse zeigen, dass Schwankungen des MCV so gesteuert werden konnten, dass sie innerhalb eines Bereichs von ± 4 (fl) lagen, indem der osmotische Druck des Reagens in einem Bereich von 260 bis 320 mOsm/kg gehalten wurde.
Innerhalb dieses Bereichs ergab ein höherer osmotischer Druck eine bessere Steuerung der Schwankung des MCV.
Ausführungsform 4
In Ausführungsform 3 wurden Schwankungen des MCV unter Verwendung von Reagenzien gemessen, die durch Zugabe des nichtionischen Tensids Polyoxyethylen-(20)-Oleylether zu Reagens A in verschiedenen Konzentrationen hergestellt wurden. Die Blutproben wurden bei 25 °C gelagert. Die Proben wurden mit dem automatisierten hämatologischen Analysengerät SE-9500 von Sysmex Co. Ltd. getestet, um das MCV zu ermitteln.

Reagens A: 0,000 % nichtionisches Tensid

Reagens E: 0,015 % nichtionisches Tensid

Reagens I: 0,150 % nichtionisches Tensid

Reagens J: 0,300 % nichtionisches Tensid
Die Ergebnisse zeigen, dass das nichtionische Tensid in einem breiten Konzentrationsbereich relativ wirksam Schwankungen des MCV bekämpfte.
Ausführungsform 5
Reagenzien in Ausführungsform 5 wurden durch Zugabe von etwa 0,015 % Polyoxyethylen-(20)-Oleylether zum Reagens E und anschließendes Einstellen des osmotischen Drucks des Verdünnungsmittels mit den nachstehenden Substanzen auf 285 mOsm/kg hergestellt.

Reagens D: Natriumchlorid

Reagens K: Saccharose

Reagens L: Glucose

Reagens M: Polyethylenglykol (MG 400)
In Ausführungsform 5 wurde die Auswirkung der obigen Substanzen zur Einstellung des osmotischen Drucks der Reagenzien auf die Schwankung des MCV gemessen. Die Blutproben wurden bei 25 °C gelagert. Die Proben wurden mit dem automatisierten hämatologischen Analysengerät SE-9500 von Sysmex Co. Ltd. getestet, um das MCV zu ermitteln.
Die allgemein zur Einstellung des osmotischen Drucks verwendeten Substanzen sind nicht auf die in Ausführungsform 5-1 und Ausführungsform 5-2 angegebenen beschränkt. Die Ergebnisse zeigen jedoch, dass Salze, Zucker und Polyethylenglykol zu bevorzugen sind.

Claims

Verwendung eines Blutproben-Verdünnungsreagens bei der Herstellung einer Blutprobe für einen MCV-Test durch Verdünnen der Probe mit dem Reagens, wobei das Reagens eine wässrige Lösung ist, die Folgendes umfasst: zumindest ein nichtionisches Tensid, ausgewählt aus

worin R für eine Alkylkette, eine Alkenylkette oder eine Alkinylkette mit jeweils 12–24 Kohlenstoffatomen steht; und n, n₁ + n₂ + n₃ und n₁ + n₂ + n₃ + n₄ + n₅ + n₆ für eine ganze Zahl von 5–70 stehen; und eine Substanz, die den osmotischen Druck der wässrigen Lösung auf einen Wert im Bereich von 150 bis 400 mOsm/kg einstellt; worin das nichtionische Tensid und die Substanz zur Einstellung des osmotischen Drucks so ausgewählt sind, dass das Verdünnungsreagens zu einer morphologischen Veränderung in Enthrozyten in der Blutprobe führt, die einige Zeit nach der Entnahme getestet wurde, sodass die Blutprobe einen einige Zeit nach der Entnahme gemessenen MCV-Wert ergibt, der innerhalb eines diagnostisch akzeptablen Bereichs mit dem MCV-Wert der Blutprobe direkt nach der Entnahme übereinstimmt.
Verwendung nach Anspruch 1, worin der osmotische Druck auf einen Wert im Bereich von 260 bis 320 mOsm/kg eingestellt wird.
Verwendung nach Anspruch 1 oder Anspruch 2, worin das zumindest eine nichtionische Tensid in einer Konzentration im Bereich von 0,001 bis 0,1 Gew.-% vorliegt.
Verwendung nach einem der Ansprüche 1 bis 3, worin das nichtionische Tensid R-O(CH₂CH₂O)_nH ist und eine Alkenylkette mit 12 bis 24 Kohlenstoffatomen umfasst.
Verwendung nach einem der vorangegangenen Ansprüche, worin das nichtionische Tensid Polyoxyethylen-(20)-oleylether ist.
Verwendung nach einem der vorangegangenen Ansprüche, worin das nichtionische Tensid ein hydrophil-lipophiles Gleichgewicht von 10–20 aufweist.
Verwendung nach einem der vorangegangenen Ansprüche, worin das nichtionische Tensid in der wässrigen Lösung in einer Konzentration im Bereich von 0,005 bis 0,05 Gew.-% vorhanden ist.
Verwendung nach einem der vorangegangenen Ansprüche, worin das Verdünnungsreagens einen pH von 6,0–8,5 aufweist.
MCV-Testverfahren für eine Blutprobe, die bis zu zumindest 72 Stunden lang aufbewahrt wurde, wobei das Verfahren Folgendes umfasst: einen Schritt des Behandelns einer entnommenen Blutprobe mit einem gerinnungshemmenden Mittel; einen Schritt des Verdünnens der mit einem gerinnungshemmenden Mittel behandelten Blutprobe mit einem Verdünnungsreagens, das zu einer morphologischen Veränderung in Erythrozyten in der Blutprobe führt, sodass die Blutprobe in einem Test einige Zeit nach der Entnahme einen MCV-Wert ergibt, der innerhalb eines diagnostisch akzeptablen Bereichs mit dem MCV-Wert der Blutprobe direkt nach der Entnahme übereinstimmt, wobei das Verdünnungsreagens eine wässrige Lösung ist, die Folgendes umfasst: zumindest ein nichtionisches Tensid, ausgewählt aus

worin R für eine Alkylkette, eine Alkenylkette oder eine Alkinylkette mit jeweils 12–24 Kohlenstoffatomen steht; und n, n₁ + n₂ + n₃ und n₁ + n₂ + n₃ + n₄ + n₅ + n₆ für eine ganze Zahl von 5–70 stehen; und eine Substanz, die den osmotischen Druck der wässrigen Lösung auf einen Wert im Bereich von 150 bis 400 mOsm/kg einstellt; und einen Schritt des Testens der Blutprobe, um ihren MCV-Wert in einem bestimmten Analysegerät einige Zeit nach der Entnahme zu erhalten.
Verfahren nach Anspruch 9, worin der osmotische Druck auf einen Wert im Bereich von 260–320 mOsm/kg eingestellt wird.
Verfahren nach Anspruch 9 oder Anspruch 10, worin das zumindest eine nichtionische Tensid in einer Konzentration im Bereich von 0,0001 bis 0,1 Gew.-% vorliegt.
Verfahren nach einem der Ansprüche 9 bis 11, worin das nichtionische Tensid R-O(CH₂CH₂O)_nH ist und eine Alkenylkette mit 12 bis 24 Kohlenstoffatomen umfasst.
MCV-Testverfahren nach einem der Ansprüche 9 bis 12, worin im Schritt des Testens der Blutprobe das Partikelanalysegerät eine elektrischen Widerstandsmechanismus verwendet.
MCV-Testverfahren nach Anspruch 13, worin das Partikelanalysegerät einen elektrischen Mantelfluss-Widerstandsmechanismus aufweist.
MCV-Testverfahren nach einem der Ansprüche 9 bis 14, worin das nichtionische Tensid Polyoxyethylen-(20)-oleylether ist.
MCV-Testverfahren nach einem der Ansprüche 9 bis 15, worin das nichtionische Tensid ein hydrophil-lipophiles Gleichgewicht von 10–20 aufweist.
MCV-Testverfahren nach einem der Ansprüche 9 bis 16, worin das nichtionische Tensid in der wässrigen Lösung in einer Konzentration im Bereich von 0,005 bis 0,05 Gew.-% vorhanden ist.
MCV-Testverfahren nach einem der Ansprüche 9 bis 17, worin das Verdünnungsreagens einen pH von 6,0–8,5 aufweist.