DE2727730C2 - - Google Patents

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DE2727730C2
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Description

Seit der Einführung automatischer hämatologischer Verfahren durch Anwendung kontinuierlicher Durchflußsysteme ist es technisch möglich geworden, die Anzahl Proben, die während einer bestimmten Zeit analysiert werden können, beträchtlich zu erhöhen. Mit dieser Verbesserung des Wirkungsgrades entstand jedoch gleichzeitig das Bedürfnis zur Stabilisierung oder Konservierung von Blutproben, um den Transport der Proben von entfernten Stellen sowie das Ansammeln von Proben für die Zuführung zu automatisierten hämatologischen Systemen zu erleichtern.
In einer Vorrichtung mit einem automatisierten, kontinuierlichen Durchflußsystem, wie beispielsweise Hemalog D (Warenzeichen der Technicon Instruments Corporation), die ein Laboratoriumstestinstrument darstellt, das die Bestimmung der weißen Blutkörperchen erleichtern soll, werden durch cytochemische Vorgänge einzelne Zellarten spezifisch identifiziert und markiert. Der Strom aus angefärbten und nicht angefärbten Zellen fließt durch eine optische Sichtkammer, wo eine fotoelektrische Messung erfolgt. Elektronische Signale werden nach ihrer Amplitude voneinander unterschieden und in Kategorien entsprechend den verschiedenen Zelltypen eingeteilt. Die Daten werden für eine Probe je Minute für die fünf Hauptarten der weißen Blutkörperchen sowie für Juvenilformen von Neutrophilen und einen unklassifizierten Rest in Form von Prozentangaben und in "Zellen/Minuten³" ausgedruckt.
Bei den konservierten Blutzusammensetzungen gemäß der Erfindung bleiben die roten Blutkörperchen auflösbar (= lysierbar). Dies ist äußerst zweckmäßig, da in den meisten automatisierten Systemen zur Zählung der weißen Blutkörperchen, wie beispielsweise bei dem Hemalog-D-System, die roten Blutkörperchen aufgelöst werden müssen, da sie die Zählung der weißen Blutkörperchen und das Verfahren zu ihrer Identifizierung stören.
Mit Hilfe des spezifischen Verfahrens zur chemischen Identifizierung werden die weißen Blutkörperchen angefärbt.
Um bei derartigen Systemen zutreffende Analysen sicherzustellen, müssen die Blutproben praktisch in demselben Zustand sein, in dem sie von einem Patienten abgenommen worden sind. Bekanntlich altert Blut, und es tritt ein Abbau auf, der zu einem falschen Analysenergebnis führen kann. Da beispielsweise bei der Apparatur "Hemalog-D" die Klassifizierung der Zellen auf deren enzymatischer Aktivität beruht, unterliegt diese Aktivität beim Stehen oder Altern des Blutes Veränderungen und führt daher zu fragwürdigen Ergebnissen. Außerdem treten beim Stehen von Blutproben auch noch andere unerwünschte Erscheinungen auf, wie beispielsweise Verklumpen und Zerbrechen der Zellen.
Da diese unerwünschten Erscheinungen immer stärker werden, je länger die Blutprobe steht, hat es sich als notwendig erwiesen, Wege zu finden, um die ursprüngliche Natur der Probe über eine ausgedehnte Zeit derart zu konservieren, daß bei einer Analyse zuverlässige Ergebnisse erhalten werden.
Aus US-PS 39 25 153 ist ein Mittel zur Konservierung von Blut bekannt, das aus Glucose und einer Citratlösung besteht. Aus US-PS 37 15 427 ist ein Verfahren zur Konservierung von Erythrocyten bekannt, bei dem eine Erythrocyten- Suspension nacheinander mit Methylglyoxal und Formaldehyd behandelt wird. Aus DE-OS 22 60 774 ist ein Konservierungsmittel für cytologische Proben bekannt, das aus Formaldehyd und Thymol besteht. Insbesondere für die Haltbarmachung der weißen Blutkörperchen sind die genannten Mittel bzw. Verfahren nicht geeignet, da die Stabilisierung der Leukocyten nicht oder nicht lange genug gelingt.
Aufgabe der Erfindung ist es, die Lebensdauer von Blutproben so zu verlängern, daß genaue Zählungen von weißen Blutkörperchen (white blood cell differential counts) mit automatisierten kontinuierlichen Durchflußsystemen an Blutproben durchgeführt werden können, die mehr als einen Tag alt sind.
Gegenstand der Erfindung ist eine konservierte lysierbare, nicht koagulierende Blutzusammensetzung in Form eines Gemisches aus einer Blutprobe und einem ein Saccharid enthaltenden Konservierungsreagenz, dadurch gekennzeichnet, daß das Konservierungsreagenz aus einem wäßrigen Gemisch aus einem Mono-, Di- oder Trisaccharid und Formaldehyd besteht und die erhaltene konservierte Blutzusammensetzung das Saccharid in einer Menge von 0,05 bis 1,0% und den Formaldehyd in einer Menge von 0,1 bis 0,8%, bezogen auf das Gewicht, enthält.
In einer bevorzugten Ausführungsform besteht das Konservierungsmittel aus Dextrose (einem Monosaccharid) und Formaldehyd.
In einer weiteren bevorzugten Ausführungsform enthält die konservierte Blutzusammensetzung Dextrose und Formaldehyd in Mengen von 1 bzw. 0,2 Gew.-%. In einer weiteren bevorzugten Ausführungsform enthält die konservierte Blutzusammensetzung Dextrose und Formaldehyd in einer Menge von 0,66 bzw. 0,13 Gew.-%.
Weiter wird vorzugsweise ein Antikoagulans in das System eingebracht, indem man die Blutprobe oder das Konservierungsmittel damit versetzt, und in den Fällen, in denen eine Blutprobe abgezapft und danach unmittelbar mit dem Konservierungsmittel versetzt wird, ist die letztgenannte Ausführungsform bevorzugt. Ein beispielsweise verwendbares Antikoagulans für die Zwecke der vorliegenden Erfindung ist das Trikaliumsalz von Ethylendiamintetraessigsäure (K₃EDTA). In der schließlich erzielten Blutzusammensetzung beträgt die Konzentration von K₃EDTA typischerweise 0,1 bis 0,2 Gew.-%.
Die konservierte lysierbare, nicht koagulierende Blutzusammensetzung gemäß der Erfindung besitzt eine analytische Lebensdauer bei 4° C bis und über 72 h und bei 25° C bis und über 48 h. Die Vorteile eines derartigen Konservierungssystems sind augenfällig: Man braucht die Probe nicht innerhalb 24 h durch die Apparatur zu schicken, was bei einer großen Anzahl von Proben unter Umständen Schwierigkeiten bereiten würde.
Beispiele für zu Zwecken der Erfindung verwendbare Monosaccharide sind Dextrose, Fructose und Galactose, wobei Dextrose am meisten bevorzugt ist. Beispielhafte Disaccharide sind Saccharose und Maltose. Ein beispielsweise verwendbares Trisaccharid ist Raffinose.
Die Saccharidkomponente und der Formaldehyd werden in wäßriger Form unter Verwendung von destilliertem oder entionisiertem Wasser miteinander vereinigt und vorzugsweise, beispielsweise durch ein 0,8-µ-Filter, filtriert.
Nach dem Filtrieren wird das Konservierungsreagenz mit einer frischen Blutprobe kombiniert.
Die konservierte lysierbare, nicht koagulierende Blutzusammensetzung, die auf diese Weise hergestellt wird, wird vorsichtig vermischt, beispielsweise durch Umdrehen des Gefäßes, und anschließend bei Temperaturen von 1 bis 25° C aufbewahrt, bis sie untersucht wird.
Beispiel 1
Eine konservierte, lysierbare, nicht koagulierende Blutzusammensetzung, die bei 4° C mindestens 72 h aufbewahrt werden kann und ein Gemisch aus einer Blutprobe und einem Konservierungsmittel enthält, wobei das letztere aus einem wäßrigen Gemisch aus Dextrose und Formaldehyd derart zusammengesetzt ist, daß die erhaltene, konservierte Blutzusammensetzung Dextrose und Formaldehyd in Mengen von 1 bzw. 0,2 Gew.-% enthält, wird wie folgt hergestellt:
Ein Gemisch mit einem Gehalt von 10 Gew.-% Dextrose und 2 Gew.-% Formaldehyd in destilliertem oder entionisiertem Wasser wird durch ein 0,8-µ-Filter filtriert und mit einer nicht koagulierenden Blutprobe vereinigt. Das Volumenverhältnis von Blutprobe zu Konservierungsreagenz beträgt 10 : 1.
Die erhaltene lysierbare, konservierte Blutzusammensetzung wird durch Umdrehen des Gefäßes vorsichtig vermischt und bei 4° C aufbewahrt.
Beispiel 2
Es werden konservierte, lysierbare, nicht koagulierende Blutzusammensetzungen hergestellt, die denen gemäß Beispiel 1 ähnlich sind, wobei anstatt von Dextrose die folgenden Saccharide verwendet werden:
Monosaccharide: Fructose, Galactose
Disaccharide: Saccharose, Maltose
Trisaccharide: Raffinose
Beispiel 3
Eine konservierte, lysierbare, nicht koagulierende Blutzusammensetzung, die bei 25° C mindestens 48 h aufbewahrt werden kann und aus einem Gemisch aus einer Blutprobe und Konservierungsreagenz besteht, wobei das letztgenannte aus einem wäßrigen Gemisch aus Dextrose, Formaldehyd und dem Trikaliumsalz von Ethylendiamintetraessigsäure (K₃EDTA) derart zusammengesetzt ist, daß die erhaltene konservierte Blutzusammensetzung Dextrose, Formaldehyd und K₃EDTA in Mengen von 0,66 Gew.-%, 0,13 Gew.-% bzw. 0,15 Gew.-% enthält, wird wie folgt hergestellt:
Ein Gemisch mit einem Gehalt von 20 Gew.-% Dextrose, 4 Gew.-% Formaldehyd und 4,5 Gew.-% K₃EDTA in destilliertem oder entionisiertem Wasser wird durch ein 0,8-µ-Filter filtriert und in einen Behälter verbracht, der unter Vakuum steht. Danach wird eine frisch abgezogene Blutprobe unmittelbar in den Vakuumbehälter eingeführt. Das Volumenverhältnis von Blutprobe zu Konservierungsreagenz beträgt 30 : 1.
Die erhaltene lysierbare, konservierte, nicht koagulierende Blutzusammensetzung wird vorsichtig durch Umkehren des Gefäßes vermischt und bei 25° C aufbewahrt.
Beispiel 4
Konservierte, lysierbare, nicht koagulierende Blutzusammensetzungen, die der in Beispiel 3 beschriebenen ähneln, werden hergestellt, indem man anstatt Dextrose die folgenden Saccharide verwendet:
Monosaccharide: Fructose, Galactose
Disaccharide: Saccharose, Maltose
Trisaccharide: Raffinose
Beispiel 5
Eine konservierte, lysierbare, nicht koagulierende Blutzusammensetzung, die bei 25° C mindestens 48 h aufbewahrt werden kann und aus einem Gemisch aus einer Blutprobe und einem Konservierungsreagenz besteht, das aus einem wäßrigen Gemisch aus Dextrose, Formaldehyd, K₃EDTA und Natriumchlorid in der Weise zusammengesetzt ist, daß die erhaltene konservierte Blutzusammensetzung Dextrose, Formaldehyd, K₃EDTA und Natriumchlorid in Mengen von 0,09 Gew.-%, 0,6 Gew.-%, 0,15 Gew.-% bzw. 0,4 Gew.-% enthält, wird wie folgt hergestellt:
Ein Gemisch mit einem Gehalt von 0,1 Gew.-% Dextrose, 0,66 Gew.-% Formaldehyd, 0,17 Gew.-% K₃EDTA und 0,45 Gew.-% Natriumchlorid in destilliertem oder entionisiertem Wasser wird durch ein 0,8-µ-Filter filtriert und mit einer Blutprobe im Volumenverhältnis von Blutprobe zu Konservierungsreagenz von 1 : 9 vereinigt.
Die erhaltene lysierbare, konservierte, nicht koagulierende Blutzusammensetzung wird durch Umkehren des Gefäßes vorsichtig vermischt und bei 25° C aufbewahrt.

Claims (3)

1. Konservierte, lysierbare, nicht koagulierende Blutzusammensetzung in Form eines Gemisches aus einer Blutprobe und einem ein Saccharid enthaltenden Konservierungsreagenz,
dadurch gekennzeichnet,
daß das Konservierungsreagenz aus einem wäßrigen Gemisch aus einem Mono-, Di- oder Trisaccharid und Formaldehyd besteht und die erhaltene konservierte Blutzusammensetzung das Saccharid in einer Menge von 0,05 bis 1,0 Gew.-% und den Formaldehyd in einer Menge von 0,1 bis 0,8 Gew.-% enthält.
2. Blutzusammensetzung gemäß Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß als Monosaccharid Dextrose verwendet wird, und die erhaltene konservierte Blutzusammensetzung Dextrose und Formaldehyd in einer Menge von 1 bzw. 0,2 Gew.-% oder 0,66 bzw. 0,13 Gew.-% enthält.
3. Blutzusammensetzung gemäß Anspruch 1 oder 2, dadurch gekennzeichnet, daß im Konservierungsreagenz oder in der Blutprobe ein Antikoagulans enthalten ist, wobei die Konzentration im Falle von Trikalium-EDTA in der konservierten Blutprobe 0,1 bis 0,2 Gew.-% beträgt.
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