DE4209064C2

DE4209064C2 - Verfahren zum Zuführen von Waschflüssigkeit zu kleinen, transparenten, mit Zellkulturen beschichteten Testfeldern und zum Absaugen der Waschflüssigkeit von den Testfeldern

Info

Publication number: DE4209064C2
Application number: DE19924209064
Authority: DE
Inventors: Gerhard Dr Noss
Original assignee: Individual
Current assignee: NOSS, GERHARD, DR., 66773 SCHWALBACH, DE
Priority date: 1992-03-20
Filing date: 1992-03-20
Publication date: 1995-07-27
Anticipated expiration: 2012-03-21
Also published as: DE4209064A1

Description

Die Erfindung betrifft ein Verfahren zum Zuführen von Waschflüssigkeit zu kleinen, transparenten, mit Zellkulturen beschichteten Testfeldern und zum Absaugen der Waschflüssigkeit von den Testfeldern.

Aus der US 45 65 100 ist eine Pipettiervorrichtung bekannt, mit der flüssigen Proben Bohrungen einer Platte zugeführ und aus diesen Bohrungen abgeführt werden können. Die Pipettiervorrichtung umfaßt ein hohles, flaches, rechteckförmiges Gehäuse mit an der Unterseite ausgebildeten, in das Gehäuseinnere ragenden Röhrchen, deren Innendurchmesser sich von innen nach außen erweitert und auf die Pipettenspitzen aufgesteckt sind. Um ein zu tiefes Eintauchen der Pipettenspitzen in die Bohrungen zu verhindern und damit die Gefahr des Aufsetzens der Spitzen auf den Bohrungsboden zu vermeiden, sind um die Pipettenspitzen Ringe angeordnet, die sich auf die Bohrungsplatte auflegen. Ein schonendes Zuführen von Waschflüssigkeit zu in den Bohrungen befindlichen Zellkulturen ist mit dieser Vorrichtung nicht möglich, da die Waschflüssigkeit direkt auf die Zellkulturen fällt, wodurch die Gefahr einer Beschädigung dieser Zellkulturen besteht.

Aus der DE 34 07 849 A1 ist ein Verfahren zum gleichzeitigen Aufbringen einer Vielzahl von Flüssigkeitsproben auf auf einem Objektträger angeordneten Zellkulturen unter Verwendung einer Vielfachpipette bekann. Flexible Austrittsspitzen der Vielfachpipette werden auf dem Boden trichterförmiger Behältnisse eines Halters für den Objektträger aufgesetzt. Die trichterförmigen Behältnisse befinden sich mit Abstand oberhalb der Zellkuturen des Objektträgers und weisen jeweils eine Auslauföffnung auf. Die Übetragung von Flüssigkeiten auf den Objektträger erfolgt durch sich um die Auslaßöffnungen herum bildende Flüssigkeitstropfen, die in Kontakt mit dem Objektträger gebracht werden. Diese bekannte Vorrichtung ist zum schonenden Zuführen und Absaugen von Waschflüssigkeit zu bzw. von den Zellkulturen nicht geeignet.

Die Aufgabe der vorliegenden Erfindung besteht darin, ein Verfahren der eingangs genannten Art auszubilden, daß Waschflüssigkeit so zugeführt und abgesaugt wird, daß die Flüssigkeit schonend auf die Testfelder mit Zellen gelangt und schonend von den Testfeldern abgesaugt wird.

Diese Aufgabe wird durch ein Verfahren mit den Merkmalen des Patentanspruchs gelöst.

Dabei wird die Düseneinrichtung zur Flüssigkeitszuführung und -absaugung so abgesenkt, daß die Düsen in Auflage auf den konischen Wandungen der Bohrungen der Trichterplatte bewegt werden, wodurch die Waschflüssigkeit schonend auf die mit Zellkulturen beschichteten Testfelder gelangen kann und die Gefahr einer Beshädigung der Zellkulturen sicher vemieden ist.

Das Verfahren soll nachfolgend anhand einer in der beigefügten Zeichnung schematsch dargestellten Vorrichtung zum Zuführen und Absaugen von Waschflüssigkeit zu kleinen, transparenten, mit Zellkulturen beschichteten Testfeldern näher, erläutert werden. Die Vorrichtung ist in auseinander gezogener Darstellung gezeigt.

Die Zeichnung zeigt eine dünne transparente Glasplatte 2, beispielsweise einen Objektträger, mit einer Beschichtung 4, insbesondere aus hydrophrobem Material, beispielsweise Teflon. In der hydrophoben Beschichtung 4 ist ein rechteckförmiges Raster von einzelnen Aussparungen 6 ausgebildet. Die Aussparungen 6 bilden einzelne kleine Testfelder, die mit fixierten Zellen beladen sind.

Oberhalb der transparenten Glasplatte ist eine Trichterplatte 8 angeordnet, in der ein rechteckförmiges Raster von einzelnen trichterförmigen Bohrungen 10 ausgebildet ist. Das Bohrungsraster ist deckungsgleich zum Aussparungsraster ausgebildet, so daß die Bohrungen 10 mit den Aussparungen 6 ausgerichtet werden können.

Oberhalb der Trichterplatte 8 ist eine Einrichtung 12 mit einer Reihe 14 von Düsen 16 oder einem Feld 18 von Düsen 16 angeordnet. Die Anordnung der Düse 16 einer Düsenreihe 14 ist an die Anordnung einer Reihe der trichterförmigen Bohrung 10 angepaßt.

Die Einrichtung 12 kann über die Trichterplatte 8 gesteuert hinwegbewegt werden und dient zum kontinuierlichen Zuführen von kleinen Flüssigkeitsvolumina gleichzeitig zu mehreren Testfeldern 6 über die Trichterplatte 8 oder zum gleichzeitigen Absaugen mehrerer Flüssigkeitsvolumina aus den Testfeldern. In diesem Falle beträgt der Abstand zwischen den Düsenreihen 14 wenigstens das Doppelte des Abstandes zwischen den Reihen aus trichterförmigen Bohrungen der Trichterplatte 8, falls ein Feld 18 aus mehreren Düsenreihen 14 verwendet wird.

Bei der Zustellung der Einrichtung 12 setzen die Düsen auf die konische Wandung der Bohrungen 10 auf, so daß Testfelder nicht mechanisch beschädigt werden können.

Die Ausbildung der Testfelder kann beispielsweise so gewählt werden, daß die Testfelder 6 bei hydrophober Beschichtung 4 mit Flüssigkeitsvolumina von ca. 50 µl unter Druck beschickt werden können, ohne daß benachbarte Flüssigkeitsvolumina zusammenfließen. Die Trichterplatte wirkt hier unterstützend. Wird auf die hydrophobe Beschichtung verzichtet, dürfen die Flüssigkeitsvolumina 20 µl pro Testfeld nicht überschreiten, wenn ein Zusammenlaufen benachbarter Flüssigkeitsvolumina sicher verhindert werden soll.

Eine Waschwirkung ergibt sich bei diesem Beisspiel, wenn wenigstens 40 µl an Waschflüssigkeit zugegeben werden.

Claims

Verfahren zum Zuführen von Waschflüssigkeit zu kleinen, transparenten, mit Zellkulturen beschichteten Testfeldern und zum Absaugen der Waschflüssigkeit von den Testfeldern, wobei die Testfelder durch Aussparungen (6) in einer hydrophoben Beschichtung (4) einer ersten, transparent ausgebildeten Platte (2) gebildet sind, wobei über der ersten Platte (2) eine Trichterplatte (8) mit konischen, trichterförmigen Bohrungen (10) angeordnet und mit den Testfeldern (6) ausgerichtet wird, wobei über der Trichterplatte (8) eine senkrecht und parallel zur Trichterplatte (8) bewegbare Düseneinrichtung (12) angeordnet wird, die unterseitig eine Reihe (14) oder ein Feld (18) von Düsen (16) aufweist, und wobei die Düseneinrichtung (12) zur Flüssigkeitszuführung und Flüssigkeitsabsaugung derart abgesenkt wird, daß die Düsen (16) der Düseneinrichtung (12) in Auflage auf den konischen Wandungen der Bohrungen (10) der Trichterplatte (8) bewegt werden.