DE3837226C2

DE3837226C2 - Perfusionsgerät zum Züchten und Erhalten von Hepatocyten

Info

Publication number: DE3837226C2
Application number: DE3837226A
Authority: DE
Inventors: Hugo Osvaldo Jauregui
Original assignee: Rhode Island Hospital
Current assignee: Rhode Island Hospital
Priority date: 1987-11-02
Filing date: 1988-11-02
Publication date: 1994-09-22
Anticipated expiration: 2008-11-03
Also published as: CA1305935C; FR2624022A1; FR2624022B1; JPH01198559A; GB2211857B; US5043260A; DE3837226A1; GB8825583D0; GB2211857A

Description

Die vorliegende Erfindung geht aus von einem Perfusionsgerät mit den im Oberbegriff des Patentanspruchs 1 als bekannt vorausgesetzten Merkmalen.

Eine künstliche Leber, welche bei einem Patienten verwendet werden kann, der an einem Leberschaden leidet und auf ein Transplantat wartet, ist beispielsweise aus einer Veröffent lichung von H.O. Jauregui et al. "Hybrid Artificial Liver", Szycher, M. (ed.), Biocompatible Polymers, Metals and other Composites (Lancaster, PA, Technomic Pub) 1983, S. 907 bis 928 sowie der US-PS 37 34 851 (Matsumura) bekannt.

F.W. Wolf und B.E. Munkelt beschreiben in der Veröffentlichung "Bilirubin Conjugation by an Artificial Liver Composed of Cultured Cells and Synthetic Capillaries", Band XXI Trans. Amer. Soc. Artif. Int. Organs, 1975, S. 16-23, Experimente, bei denen Rattenhepatom-(Lebertumor-)Zellen in den Bereichen zwischen hohlen semipermeablen Fasern in einer Art von Patrone oder Kassette angeordnet wurden und Blut durch die Fasern geleitet und durch die Hepatomzellen behandelt wurde. Bei solchen Einrichtungen, die mit hohlen Fasern arbeiten, haben die Fasern die Aufgabe, die Zellen gegen das Immunabwehrsystem des Patienten zu isolieren und sie weisen Poren solcher Größe auf, daß toxische Substanzen hindurchzutreten vermögen.

Hager et al. beschreiben in der Veröffentlichung "Neonatal Hepatocyte Culture on Artificial Capillaries. A Model for Drug Metabolism and the Artificical Liver", ASAIO J., 6 : 26-35 (Jan./Mar. 1983) und Jauregui, H.O, et al. in der Veröffent lichung "Adult Rat Hepatocyte Cultures as the Cellular Component of an Artificial Hybrid Liver", Paul, J. (ed.), Biomaterials in Artificial Organs, (MacMillan) 1983, S. 130-140, Experimente, bei denen Hepatozyten (gesunde Leberzellen) auf externen Flächen von und in Wänden von hohlen, semipermeablen Fasern in einer Art Kassette gezüchtet wurden. Aus der letztgenannten Veröffentlichung ist es auch bekannt, die Fasern vor der Impfung mit den Hepatozyten mit Kollagen zu behandeln, um die Haftung der Zellen zu verbessern.

Aus der oben als erstes genannten Veröffentlichung von H.O. Jauregui et al. "Hybrid Artificial Liver" ist es auch bekannt, daß Hepatozyten, bei denen es sich um verankerungsabhängige Zellen handelt, zweckmäßigerweise an einem bioverträglichen polymeren Substrat angebracht werden sollen (Seite 913) und es wird erwähnt, daß ein Haften unter Verwendung von Liganden, wie Asialoglykoprotein, Insulin, epidermen Wachstumsfaktor, Kollagen und Fibronectin (Seite 913) erreicht werden kann.

In der US-PS 46 75 002 wird ein Gerät beschrieben, das als externe künstliche Leber wirken soll und eine Blutperfusionsmembran enthält, auf der sich eine Monoschicht von transformierten Hepatozyten befindet. Die Hepatozyten werden mit Hilfe eines SV-40-Virus transformiert, wodurch die sonst auftretende Kontaktinhibierung aufgehoben wird. Über die Art der Bindung der modifizierten Hepatozyten an den die semipermeable Membran des Geräts bildenden polymeren Träger sagt diese Schrift nichts aus.

Es ist die Aufgabe der Erfindung bei einem Gerät nach dem Oberbegriff des Anspruches 1 nicht-modifizierte Leberzellen an einer künstlichen semipermeablen Membran derart zu verankern, daß sich diese nicht lösen und daß keine Kontaktinhibierung auftritt.

Diese Aufgabe wird mit den Merkmalen des kennzeichnenden Teils des Anspruches 1 gelöst.

Gemäß der Erfindung wird damit eine Oligosaccharid-Lektinerkennungsbindung zum Befestigen der Hepatozyten an einem biopolymeren Trägerelement im Hepato zyten-Abteil verwendet. Bevorzugte Ausführungsformen weisen eines, mehrere oder alle folgenden Merkmale auf: Die Hepatozyten haben Cytochrom-P450-Aktivität, was die Hauptentgiftungsaktivität der Leberzelle darstellt; die Membran wird durch hohle Fasern gebildet, die mit einem Perfusionseinlaß und einem Perfusions auslaß des Gerätes in Verbindung stehen, und die Hepatozyten sind an äußeren Oberflächenteilen der Fasern befestigt; die Lektine sind Lens culinaris Agglutinin (LCA), Phaseolus vulgaris Agglutinin (PHA) oder Weizenkeim-Agglutinin (WGA); das Gerät enthält ferner einen Abfalleinlaß und einen Abfallauslaß und es ist ein zweiter Satz von hohlen Fasern vorgesehen, die mit dem Abfalleinlaß und Abfallauslaß kommunizieren; mit den beiden Fasersätzen sind zwei Typen von Lektinen verbun den, von denen der erste Typ (LCH und PHA) Zucker erkennt, die vorwiegend an der Blutsinusoiddomäne der Hepatozyten angeordnet sind, z. B. α-D-Mannosyl und α-D-Glukosyl (für LCA), β-D-Galaktosyl-(1-3)-NAc-Galaktosyl-β-D-Galaktosyl (für PHA), während der zweite Typ (WGA) Zucker erkennt, die vorwiegend an der Gallendomäne der Hepatozyten angeordnet sind, z. B. β-NAc-Neuraminsäure.

Das Perfusionsgerät gemäß der Erfindung kann als Hepatozyten- Reaktor verwendet werden. Es kann außerdem über Venenkanülen mit einem Patienten verbunden und als künstliche Leber verwendet werden.

Im folgenden werden Ausführungsbeispiele der Erfindung unter Bezugnahme auf die Zeichnungen näher erläutert, dabei werden noch weitere Merkmale und Vorteile der Erfindung zur Sprache kommen. Es zeigen:

Fig. 1 eine schematische Seitenansicht einer Ausführungsform des Perfusionsgerätes gemäß der Erfindung;

Fig. 2 eine schematische Darstellung der Bindung einer Hepatozyten-Zelle mit der äußeren Oberfläche einer hohlen Faser des Gerätes gemäß Fig. 1;

Fig. 3 eine schematische Darstellung einer alternativen Bindung einer Hepatozytenzelle an einer äußeren Oberfläche einer hohlen Faser des Gerätes gemäß Fig. 1;

Fig. 4 eine schematische Draufsicht einer anderen Ausführungs form des Perfusionsgerätes gemäß der Erfindung;

Fig. 5 ein vereinfachter Vertikalschnitt in einer Ebene 5-5 der Fig. 4 und

Fig. 6 eine schematische Darstellung einer polarisierten Bindung von Hepatozyten an hohlen Fasern im Gerät gemäß Fig. 4.

Das in Fig. 1 dargestellte Perfusionsgerät (10) hat ein starres Außengehäuse (12) aus Kunststoff, das durch äußere Kappen (16, 18) verschlossen ist und eine Vielzahl von hohlen, semi permeablen Membran-Fasern (14) enthält. Die oberen und die unteren Enden der hohlen Fasern (14) sind in ein Vergußmaterial (15) eingegossen und durch dieses in der Nähe des oberen bzw. unteren Endes des Gehäuses (12) unter Anwendung bekannter Verfahren dicht mit der Innenfläche des Außengehäuses (12) verbunden. Die Kappe (16) weist einen Perfusionseinlaß (20) und die Kappe (18) einen Perfusionsauslaß (22) auf, die jeweils mit dem Inneren der hohlen Fasern kommunizieren. Das Gehäuse ist zwischen den von der Vergußmasse (15) eingenommenen Abschnitten mit Anschlüssen (24, 26) versehen, die einen Zugang zu dem Bereich im Gehäuse (12) schaffen, der sich außerhalb der hohlen Fasern (14) befindet. Die Fasern (14) bilden eine Barriere zwischen einem Perfusionsabteil (25) innerhalb der Fasern (Fig. 2) und einem Hepatozytenabteil (27) in dem Bereich zwischen den Außenflächen der Fasern (14) und der Innenseite des Gehäuses (12).

Fig. 2 zeigt einen Hepatozyten (28), der an der äußeren Ober fläche einer hohlen Faser (14) über eine Oligosaccharid-Lektin erkennungsbindung befestigt ist, welcher Zucker (30), die von Natur aus auf der Oberfläche des Hepatozyten (28) vorhanden sind, und Lektine (32), die mit der hohlen Faser (14) kovalent gebunden sind, enthält. Die Lektine (32) sind vorzugsweise Lens culinaris Agglutinin (LCA, das für α-D-Mannosyl und α-D-Glukosyl spezifisch ist) oder Phaseolus vulgaris Agglutinin (PHA, das für β-D-Galaktosyl-(1-3)-NAc-Galaktosyl-β-D-Galaktosyl spezifisch ist). Bei einer alternativen Befestigungsmethode, die in Fig. 3 schematisch dargestellt ist, ist der Hepatozyt (28) in ähnlicher Weise an der äußeren Oberfläche einer hohlen Faser (14) über eine Oligosaccharid-Lektinerkennungsbindung gebunden, in diesem Falle ist jedoch der Zucker (30) (Galak tose) kovalent an der Faser (14) gebunden und das Lektin (33) (Asialoglykoprotein-Rezeptor) ist ein von Natur aus auf der Oberfläche des Hepatozyten (28) vorhandenes Lektin (siehe Steer, C.J., et al. "Studies on a Mammalian Hepatic Binding Protein Specific for Asialoglycoproteins", Journal of Biological Chemistry, Band 255, No. 7, 10. April 1980, S. 3008 bis 30013). Ein Vorteil dieser Anordnung besteht darin, daß nur Leberzellen an der Membrane haften.

In den Fig. 4 bis 6 ist ein Perfusionsgerät (38) gemäß einer alternativen Ausführungsform der Erfindung dargestellt, welches hohle Fasern (14′) für einen Abfallstrom (W) und hohle Fasern (14″) für einen Nährmittelstrom (N) enthält. Die Ströme können, wie es in Fig. 4 dargestellt ist, gleich sinnig verlaufen, man kann jedoch auch mit Gegenstrom arbeiten, was gegebenenfalls vorzuziehen ist. Die hohlen Fasern (14′) sind in Abfallanschlüssen (40) vergossen, so daß ein Abfall strömungskanal innerhalb der Fasern (14′) zur Verfügung steht. Die hohlen Fasern (14″) sind in Nährstromanschlüssen (42) vergossen, so daß ein Nährstromkanal durch das Innere der Fasern (14′) gebildet wird. Ein weiteres Abteil wird durch den Bereich innerhalb des Gehäuses (12) und außerhalb der Fasern (14′, 14″) gebildet. Dieser weitere Bereich ist mit Anschlüssen (44, 46) versehen. Wie in Fig. 6 schematisch dargestellt ist, sind Hepatozyten (34) an einer hohlen Faser (14′) über Weizenkeim-Agglutinin-Lektine befestigt, die Zucker erkennen, welche sich vorwiegend an der Galledomäne der Hepato zyten (34) befinden (nämlich β-N-Acetyl-Glukosamin und NAc-Neuraminsäure). Hepatozyten (36) sind an einer hohlen Faser (14′) über LCA- oder PHA-Lektine befestigt, welche die oben aufgeführten Zucker erkennen, die vorwiegend an der Sinus-Domäne (dem Blutpol) angeordnet sind. Die Blutpole der Hepatozyten (36) sind also so ausgerichtet, daß sie Nähr stoffe vom Nährstoffstrom (N) erhalten, während die Gallepole der Hepatozyten (34) so ausgerichtet sind, daß sie Abfallstoffe in den Abfallstrom (W) abgeben.

Herstellung und Gebrauch

Die künstliche Leber (10) kann unter Verwendung eines Standard- Gehäuses (12) hergestellt werden, welches mit Fasern versehen ist, die in bekannter Weise mit dem Gehäuse vergossen sind. Die Fasern (14) bestehen zweckmäßigerweise aus Polyacryl- Polyurethan, haben Außendurchmesser zwischen 150 µm und 400 µm sowie Innendurchmesser zwischen 50 µm und 350 µm und haben Poren einer Größe, so daß sie ab einem Molekulargewicht von 40.000 bis 250.000 sperren. Die Außenflächen der Fasern (14) sind so behandelt, daß sie Karbonsäure-(carboxy) und/oder Amino-Gruppen aufweisen, die die Bindung von Lektinen erleichtern. Zum Beispiel können die Außenflächen der Fasern so behandelt werden, daß Hydroxylgruppen auftreten, die dann in bekannter Weise zur Erzeugung von Karbonsäure- und/oder Amino-Gruppen verwendet werden können (Curtis, A.S.G., et al., "Substrate Hydroxylation and Cell Adhesion", J. Cell Science, Band 86, 1986, S. 9-24, Schnabel, W. Polymer Degradation, (München 1981). Lektine (32) werden kovalent mit den Außenflächen der hohlen Fasern unter Verwendung des Carbodiimid-Verfahrens gebunden, das in der Arbeit von Hatten, M.E. und Francois, A.M. "Adhesive Specificity of Developing Cerebellar Cells on Lectin Substrata", Developmental Biology, Band 87, 1981, S. 102-113, beschrieben ist. Wenn das alternative Anbringungs verfahren gemäß Fig. 3 verwendet wird, werden Zucker und nicht Lektine kovalent an den Außenflächen der Fasern (14) gebunden.

Die Hepatozyten werden aus Human-, Ratten- oder Schweineleber hergestellt und durch eine Abwandlung des Verfahrens isoliert, welches in der Arbeit von Seglen, P.O. "Preparation of Isolated Rat Liver Cells", Kapitel 4, Methods in Cellular Biology, 13 : 29-83 (1976) beschrieben ist, wobei Chee′s modifiziertes Essential-Tissue-Culture-Medium (Scott Labs, Fiskeville, RI oder MA Bioproducts, Walkersville, MD) mit einem Zusatz von 10% fetalem Rinderserum verwendet wird. Dieses Gewebekultur medium enthält erhöhte Konzentrationen von Arginin, Asparagin, Isoleucin, Leucin, Serin, Valin und Glutamin. Durch einen Zusatz von 5 mg/l Natriumbikarbonat wird eine erhöhte Pufferungs fähigkeit gewährleistet.

Durch die Anschlüsse (24, 26) wird in das Hepatozyten-Abteil (27) ein Impfmedium, das Hepatozyten enthält, eingeführt bis der Bereich außerhalb der hohlen Fasern gefüllt ist; die Anschlüsse (24, 26) werden dann verschlossen und das Impfmedium wird in dem Hepatozyten-Abteil (27) für zwei Stunden belassen, während sich Luft innerhalb der Fasern befindet; während dieser Zeitspanne findet die Bindung der Hepatozyten statt. Über die Anschlüsse (24, 26) wird dann frisches Medium (ohne Hepatozyten) durch das Abteil (27) geleitet, um nicht gebundene Zellen (beispielsweise 10 bis 20% der eingeführten Zellen) aus dem Abteil (27) zu entfernen. Das Impfmedium enthält genügend Hepatozyten, um zu gewährleisten, daß die Anzahl der tatsächlich gebundenen Hepatozyten mindestens 87×10⁹ beträgt (diese Anzahl von Hepatozyten reicht rechnerisch aus, einen Menschen bei vollständigem Leberversagen am Leben zu erhalten). Frisches Medium (ohne Hepatozyten) wird außerdem durch das Innere der Fasern mit einem Durchsatz von 15 ml pro Minute geleitet, um die Zellen zu erhalten. Dieses Medium wird über eine endlose Schleife zurückgeführt, die hauptsächlich aus PTFE besteht, das wegen seines geringen Absorptionsvermögens gewählt wird; die Schleife enthält außerdem etwas Neopren- Schlauch in einer Schlauchpumpe (Neopren hat ein geringes Absorptionsvermögen und die für die Pumpe erforderliche hohe Flexibilität), ferner enthält die Schleife einen 1 m langen Abschnitt aus Tygon-Schlauch (wegen der hohen Sauerstoffdurch lässigkeit trotz des relativ starken Absorptionsvermögens).

Die Herstellung des Gerätes (38) gemäß Fig. 4 ist ähnlich, nur werden andere Lektine an den jeweiligen Fasern (14′, 14″) angebracht.

Die Zeit zwischen dem Befestigen der Zellen und dem Gebrauch kann beispielsweise zwischen 24 Stunden und 4 Wochen betragen. Während dieses Zeitraumes wird das Medium dauernd durch das Faserinnere perfundiert, wie oben erwähnt wurde, um die Zellen zu erhalten und sie mit Nährstoff und Sauerstoff zu versorgen.

Das Perfusionsgerät (12) kann als Hepatozyten-Reaktor zum Studium der Wirkungen verschiedener Einflüsse (z. B. verschie dener Giftstoffe und Nährstoffe) auf die Funktion von Hepatozyten verwendet werden.

Eine andere Verwendungsmöglichkeit für das Perfusionsgerät (12) ist die als künstliche Leber für einen Patienten, der auf ein Lebertransplantat wartet. In diesem Falle wird das Nährmedium zuerst aus dem Inneren der Fasern durch eine sterile Salzlösung herausgespült. Der Perfusionseinlaß (20) und der Perfusionsauslaß (22) werden dann unter Aufrechterhaltung steriler Bedingungen mit einem nicht dargestellten sterilen Schlauchsatz verbunden, der Entnahme und Rückspeisungskanülen für die Verbindung mit geeigneten Venen des Patienten enthält. Der Schlauchsatz kann außerdem Anschlüsse für eine weitere extrakorporale Blutbehandlung enthalten, z. B. Dialyse oder ein Verfahren zur Trennung von Blutbestandteilen, z. B. Plasma austausch. Der Anschluß (26) kann mit einem Strömungsweg zur Entfernung von Abfall- oder Ausscheidungsprodukten der Hepatozyten im Hepatozyten-Abteil (27) verbunden werden und zum eventuellen selektiven Rückführen bestimmter Bestandteile im Abteil (27) in die zum Patienten führenden Blutleitung z. B. unter Verwendung einer weiteren Ultrafiltrationsmembran- Einrichtung zur Begrenzung der Größe der Komponenten der Bestandteile, die dem Patientenblut wieder zugeführt werden.

Nachdem der ganze Schlauchsatz zur Vorbereitung mit steriler Salzlösung gefüllt worden ist, wird er über die Venenkanülen mit dem Patienten verbunden, so daß Blut durch das Innere der Fasern (14) fließt. Toxische Verbindungen und andere Bestandteile des Blutes, die kleiner als die Porengröße sind und im Abteil (25) eine höhere Konzentration aufweisen als in der Flüssigkeit im Hepatozyten-Abteil (27) treten durch die semipermeable Membranwand der Fasern (14) hindurch und werden durch die Hepatozyten (28) metabolisiert. Größere Komponenten des Blutes, z. B. weiße und rote Blutkörperchen sowie Immunglobuline gehen nicht durch die Poren hindurch. Das Blut in den Fasern (14) hat einen höheren Druck als er in der Hepatozytenkammer herrscht und dieser Druck an der Membrane bewirkt außerdem eine Ultrafiltration.

Das Perfusionsgerät (38) kann in entsprechender Weise verwendet werden, wobei durch die zusätzlichen Abfallfasern (14′) und Abfallanschlüsse (40) zusätzlich Möglichkeiten für die Abfall behandlung bestehen.

Die Hepatozyten (28) behalten ihre Cytochrom-P-450-Funktion bei und sind daher in der Lage, viele toxische Bestandteile zu entgiften, die für das Syndrom der hepatitischen Encephalo pathie verantwortlich sind. Die Hepatozyten (28) behalten in entsprechender Weise ihre Funktionen hinsichtlich der chemischen Produktion bei und die von ihnen erzeugten chemischen Stoffe können dem Patienten über zwei mögliche Wege zugeführt werden: Durch die Membranwand der Fasern (14) oder über eine weitere Ultrafiltrationsmembraneinrichtung, die mit dem Anschluß (26) verbunden ist, wie oben bereits erwähnt wurde.

Versuche haben gezeigt, daß Hepatozyten, die an den Außenflächen von hohlen semipermeablen Membranen über Oligosaccharid-Lektiner kennungsbindungen befestigt sind, lebensfähig sind und ihre Glukoronisationsfunktion beibehalten, wie durch den Metabolis mus von Phenolrot bestimmt wurde. Durch Versuche konnte außerdem gezeigt werden, daß Hepatozyten, die an der Außenseite von hohlen Fasern oder anderen Membranen über eine Oligosaccharid- Lektinerkennungsbindung gebunden sind, ihre Cytochrom-P-450- Aktivität beibehalten.

Die oben beschriebenen Ausführungsbeispiele lassen sich in der verschiedensten Weise abwandeln. Es können andere Lektine, die Hepatozyten an Membranen binden, verwendet werden, z. B. die Lectine, die in der Veröffentlichung von McMillan, P.N. "Light and Electron Microscope Analysis of Lectin Binding to Adult Rat Liver in Situ", Laboratory Investigation, Band 50 No. 4 (1984), S. 408-470, die hier als bekannt vorausgesetzt wird. Spezielle Lektine, die für die Oligosaccharid-Lektin erkennungsbindung gemäß der Erfindung verwendet werden können, sind Concanavalin A (Con A, für α-D-Mannose, α-D-Glukose und α-NAc-Glukosamin spezifisch), Ricinus communis Agglutinin (RCA I für β-D-Galaktose und α-D-Galaktose spezifisch) und Pisum sativum Agglutinin (PSA, spezifisch für α-D-Mannose, α-D-Glukose).

Claims

1. Perfusionsgerät zum Züchten und Erhalten von Hepatozyten mit

a) einer Kammer (12) in einem Perfusionseinlaß (20) und einem Perfusionsauslaß (22),
b) einer semipermeablen Membrane (14), die in der Kammer (12) angeordnet ist und die ein Perfusionsabteil sowie ein von diesem getrenntes Hepatozytenabteil bildet, und
c) einem biopolymeren Träger im Hepatozytenabteil und
d) erste Hepatozyten im Hepatozytenabteil, die an den biopolymeren Träger gebunden sind, dadurch gekennzeichnet,
daß der biopolymere Träger ein an die semipermeable Membran gebundenes Lektin ist, an den die ersten Hepatozyten durch ein auf der Oberfläche der Hepatozyten vorliegendes natürliches Oligosaccharid immobilisiert sind
und/oder daß der biopolymere Träger ein an die semipermeable Membran gebundenes Oligosaccharid ist, an die die ersten Hepatozyten durch ein auf ihrer Oberfläche vorliegendes natürliches Lektin immobilisiert sind.

2. Gerät nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß die Hepatozyten Cytochrom-P450-Aktivität aufweisen.

3. Gerät nach Anspruch 1 oder 2, dadurch gekennzeichnet, daß der biopolymere Träger einen Oberflächenteil der Membrane bildet, der dem Hepatozytenanteil zugewandt ist.

4. Gerät nach Anspruch 3, dadurch gekennzeichnet, daß die Membrane einen ersten Satz von hohlen Fasern umfaßt, deren Inneres mit dem Perfusionseinlaß (20) und dem Perfusionsauslaß (22) in Verbindung steht, und daß der biopolymere Träger Teile der Außenseite der Fasern umfaßt.

5. Gerät nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß das Lektin und/oder Oligosaccharid an die semipermeable Membran kovalent gebunden ist.

6. Gerät nach Anspruch 5, dadurch gekennzeichnet, daß das Lektin mindestens eines der Lektine Ricinus communis Agglutinin, Weizenkeim Agglutinin, Pisum sativum Agglutinin, Lens culinaris Agglutinin, Phaseolus vulgaris Agglutinin und Concanavalin A enthält.

7. Gerät nach Anspruch 5, dadurch gekennzeichnet, daß das Lektin Lens culinaris Agglutinin ist.

8. Gerät nach Anspruch 5, dadurch gekennzeichnet, daß das Lektin Weizenkeim Agglutinin enthält.

9. Gerät nach Anspruch 4, dadurch gekennzeichnet, daß die hohlen Fasern aus Polyacryl-Polyurethan bestehen.

10. Gerät nach einem der vorhergehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, daß die Kammer außerdem einen Abfall einlaß und einen Abfallauslaß (40) aufweist und einen zweiten Satz hohler Fasern (14′) enthält, deren Inneres mit dem Abfalleinlaß und -auslaß (40) in Verbindung steht.

11. Gerät nach Anspruch 10, dadurch gekennzeichnet, daß im Hepatozytenanteil zweite Hepatozyten (34) vorgesehen sind, die über Oligosaccarid-Lektinerkennungsbindungen mit den Außenflächen der Fasern (14′) des zweiten Satzes verbunden sind.

12. Gerät nach Anspruch 11, dadurch gekennzeichnet, daß das erste Lektin ein Typ ist, der Zucker erkennt, die über wiegend an der Blutsinusdomäne der ersten Hepatozyten angeordnet sind.

13. Gerät nach Anspruch 12, dadurch gekennzeichnet, daß das zweite Lektin ein Typ ist, der Zucker erkennt, die überwiegend an der Gallendomäne der zweiten Hepatozyten angeordnet sind.

14. Gerät nach Anspruch 13, dadurch gekennzeichnet, daß das erste Lektin Lens culinaris Agglutinin oder Phaseolus vulgaris Agglutinin enthält.

15. Gerät nach Anspruch 14, dadurch gekennzeichnet, daß das zweite Lektin Weizenkeim Agglutinin enthält.

16. Gerät nach Anspruch 4, 6, 9 oder 11, dadurch gekenn zeichnet, daß die ersten Hepatozyten Cytochrom-P450- Aktivität aufweisen.

17. Gerät nach Anspruch 1, gekennzeichnet durch Schläuche zum Anschluß an einen Patienten, die mit dem Perfusions einlaß (20) und dem Perfusionsauslaß (22) verbunden sind.

18. Gerät nach Anspruch 17, gekennzeichnet durch Mittel zum Rückführen gewisser von den Hepatozyten erzeugter Produkte zum Patienten.

19. Gerät nach Anspruch 18, gekennzeichnet durch Mittel zum Behandeln dieser Produkte vor ihrer Rückführung zum Patienten.

20. Gerät nach einem der vorherigen Ansprüche, gekennzeichnet durch Mittel zum Hindurchleiten von Nährstoffen durch das Perfusionsabteil.

21. Verfahren zum Herstellen eines Perfusionsgerätes zum Züchten und Erhalten von Hepatozyten nach Anspruch 1, dadurch gekenn zeichnet, daß erste Hepatozyten in einem Hepatozyten anteil einer Kammer, die einen Perfusionseinlaß und einen Perfusionsauslaß aufweist und eine semipermeable Membrane enthält, die das Hepatozytenabteil und ein hiervon getrenntes Perfusionsabteil bildet, an einem im Hepatozytenanteil angeordneten biopolymeren Träger über eine Oligosaccharid-Lectinerkennungsbindung befestigt werden.

22. Verfahren nach Anspruch 21, dadurch gekennzeichnet, daß Hepatozyten verwendet werden, die Cytochrom-P450-Aktivität aufweisen.

23. Verfahren nach Anspruch 21 oder 22, dadurch gekennzeichnet, daß eine Membrane verwendet wird, die einen ersten Satz von hohlen Fasern enthält, deren Inneres mit dem Perfusions einlaß und -auslaß in Verbindung steht, und daß der biopolymere Träger durch Teile der Außenseite der Fasern gebildet wird.

24. Verfahren nach Anspruch 23, dadurch gekennzeichnet, daß bei dem Befestigen der Hepatozyten das Lektin kovalent mit den äußeren Oberflächenteilen gebunden wird und daß das Oligosaccharid ein Teil der Zellenoberfläche der Hepatozyten bildet.

25. Verfahren nach Anspruch 24, dadurch gekennzeichnet, daß wenigstens eines der folgenden Lektine verwendet wird: Ricinus communis Agglutinin, Weizenkeim Agglutinin, Pisum sativum Agglutinin, Lens culinaris Agglutinin, Phaseolus vulgaris Agglutinin, Concanavalin A.

26. Verfahren nach einem der Ansprüche 21-24, dadurch gekennzeichnet, daß zum Anbringen der Hepatozyten am Träger ein Impfmedium, das Hepatozyten enthält, in das Hepatozytenabteil eingeführt wird.

27. Verfahren nach Anspruch 26, dadurch gekennzeichnet, daß im Zuge des Anbringens der Hepatozyten das Impf medium nach dem Einbringen eine gewisse Zeitspanne im Hepatozytenabteil belassen wird und daß das Impf medium dann aus dem Hepatozytenabteil herausgespült wird.

28. Verfahren nach Anspruch 27, dadurch gekennzeichnet, daß nach dem Anbringen der Zellen Nährstoffe durch das Perfusionsabteil geleitet werden, um die Zellen zu erhalten.

29. Verwendung eine Hepatozytenperfusionsgerätes, nach einem der Ansprüche 1 bis 20 zum Züchten von Hepatozyten.