WO2007023711A1 - 微生物の培養装置及び培養器並びに培養方法 - Google Patents

微生物の培養装置及び培養器並びに培養方法 Download PDF

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membrane
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microorganisms
target microorganism
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Satoshi Tsuneda
Yoshiteru Aoi
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Waseda University
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    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
    • C12M23/00—Constructional details, e.g. recesses, hinges
    • C12M23/44—Multiple separable units; Modules
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
    • C12M25/00—Means for supporting, enclosing or fixing the microorganisms, e.g. immunocoatings
    • C12M25/02—Membranes; Filters

Definitions

  • the present invention relates to a microorganism culturing apparatus, an incubator, and a culturing method. More specifically, the present invention relates to a microorganism culturing apparatus, an incubator, and a culturing method suitable for isolating and culturing more types of microorganisms. .
  • microorganisms The ability of a wide variety of microorganisms to exist in the natural environment. These microorganisms form a complex microorganism system, and more microorganisms are isolated from this complex microorganism system. By culturing microorganisms, it is possible to find useful microorganisms and use them as unused gene resources.
  • Patent Document 1 As a conventional microorganism isolation and culture method, there is a plate culture method introduced in Patent Document 1.
  • the number of cells per unit of the target microorganism is reduced by diluting the sample that contains the target microorganism, and then the diluted sample is placed on the agar medium in the container for a predetermined period. This is a method for culturing and proliferating the target microorganisms over a period of time.
  • a liquid limiting dilution culture method is known as a technique for culturing microorganisms (see, for example, Patent Document 2), and this method is also used as a general technique for isolating and culturing microorganisms.
  • a container such as a large number of test tubes is used, a predetermined liquid medium is added to each container, and the target microorganism is 0 or 1 cell in a predetermined solution. Disperse the cells diluted to the extent that they are contained in each container and culture. As a result, a single type of microorganism can be separated and cultured.
  • Patent Document 3 As another isolation culture method, as disclosed in Patent Document 3, a method using a hermetic container having a membrane that allows only water to pass through without passing microorganisms is known. ing. In this method, an agar medium inoculated with a bacterial source containing a microorganism to be separated is sealed in the hermetic container, and then the hermetic container is placed in an external environment according to the bacterial source. At this time, the low environmental concentration organic substance is supplied to the agar medium through the membrane. Then, various microorganisms in the agar medium are grown to form colonies of the various microorganisms. Then, a colony of microorganisms to be separated is extracted from them.
  • the electroculturing apparatus here is an apparatus for culturing microorganisms while applying a voltage to a medium.
  • the electric culture apparatus includes a first electrode, a plurality of culture tanks penetrating the first electrode, a counter electrode tank connected to the culture tank, a second electrode disposed in the counter electrode tank, An ion exchange membrane and a filter for partitioning between the culture tank and the counter electrode tank, and a gas supply means for supplying a gas containing an element necessary for cultivation of microorganisms to the counter electrode tank.
  • the culture tank is filled with microorganisms suspended in a medium containing iron oxide
  • the counter electrode tank is filled with a solution containing medium components not containing iron.
  • the filter prevents movement of microorganisms between the culture tank and the counter electrode tank.
  • Patent Document 1 JP-A-6-277095
  • Patent Document 2 Japanese Patent Application Laid-Open No. 11-253153
  • Patent Document 3 Japanese Patent Laid-Open No. 1-265882
  • Patent Document 4 Japanese Unexamined Patent Application Publication No. 2004-16023
  • microorganisms that are not affected by the substrate concentration, the presence of metabolites, etc. can be isolated and cultured, but such microorganisms are few.
  • the conventional technology cannot discharge excessive substrates and microbial products. Since the culture is performed in a closed environment, if the concentration of the substrate increases over time or the metabolites and signal factors produced by the microorganisms to be cultured accumulate, the microorganisms that are inhibited by them will grow. Can not.
  • the microorganism to be cultured is cultivated alone, so that it receives interaction with surrounding symbiotic microorganisms. It is not suitable for culturing growing microorganisms.
  • the pH and residual oxygen concentration of the culture environment cannot be adjusted during the culture, and microorganisms sensitive to these pH and residual oxygen concentration grow. Can not.
  • Patent Document 4 In the method disclosed in Patent Document 4 for electroculturing microorganisms, microorganisms that can be cultured by electroculture are limited to only a few types in the environment, such as iron-reducing bacteria, and are applicable to many environmental microorganisms in general. I can't let you. In other words, the device of Patent Document 4 is suitable for electroculture. As described above, the components of the medium placed in the culture tank and the counter electrode tank are artificially different from each other, and artificial culture is performed in a state far from the natural state where the microorganisms grow. Therefore, only limited microorganisms are isolated and cultured. I can't.
  • the present invention has been devised by paying attention to the above problems, and the purpose of the present invention is that microorganisms can be isolated and cultured in an environment close to the actual environment where microorganisms inhabit.
  • An object of the present invention is to provide a culture apparatus and a culture apparatus and a culture method for microorganisms that enable the isolation and culture of various types of microorganisms.
  • an isolation culture apparatus of the present invention comprises a culture solution tank in which a culture solution is placed, and a target microorganism that is submerged in the culture solution in the culture solution vessel.
  • a culture section to be cultured
  • the culture unit is configured by a membrane body surrounding the target microorganism, and the membrane body is formed so as to allow passage of various chemical substances while preventing passage of various microorganisms, and in the culture solution tank.
  • the culture environment of the target microorganism is made substantially the same as the culture environment outside the membrane.
  • the isolation culture apparatus of the present invention includes a culture solution tank in which a culture solution is placed, and a culture unit in which the target microorganism is cultured by being immersed in the culture solution in the culture solution vessel.
  • the culture unit is configured by a membrane body surrounding the target microorganism, and the membrane body has a hole with an inner diameter of 1 ⁇ m or less, and the culture medium in the culture medium tank is taken into the membrane body.
  • the culture environment of the target microorganism can be made substantially the same as the culture environment outside the membrane body.
  • the force S is preferable to constitute the membrane body with a porous hollow fiber membrane having an inner diameter of 5 mm or less.
  • the incubator of the present invention includes a culture unit in which a target microorganism is cultured by being immersed in a predetermined culture solution, and an injection unit that injects the target microorganism into the culture unit,
  • the culture section is configured by a membrane body surrounding the target microorganism, and the membrane body is formed to allow passage of various chemical substances while preventing passage of various microorganisms, and the culture solution is passed through the membrane.
  • the culture environment of the target microorganism is made substantially the same as the culture environment outside the membrane body.
  • the isolation culture method of the present invention while blocking the passage of various microorganisms, encloses the target microorganism by a membrane body that allows passage of various chemical substances, the membrane body Is immersed in a predetermined culture solution, and the culture solution is taken into the membrane, whereby the target microorganism is cultured in a culture environment almost identical to the culture environment outside the membrane. .
  • a sample containing at least one target microorganism is diluted with the membrane body after diluting the sample that contains the target microorganism, the membrane body is soaked in a predetermined culture solution, and the culture solution is immersed in the membrane.
  • the target microorganism is cultured in a culture environment almost identical to the culture environment outside the membrane body.
  • the target microorganism is present outside the target microorganism surrounded by a membrane that passes the chemical substance without passing through the microorganism, such as seawater or wastewater in the wastewater treatment apparatus.
  • a culture solution that contains a large number of microorganisms to be isolated, and the culture solution is taken into the membrane, so that the microorganism is isolated in the membrane in a state close to the actual environment where the target microorganisms live. It is possible to isolate and culture more types of microorganisms.
  • the target microorganism is cultured in the culture medium in a state surrounded by the aforementioned membrane body, the metabolite and signal factor produced by itself are naturally discharged into the culture medium outside the membrane. The effects of the metabolites and signal factors on the growth of the target microorganism can be reduced.
  • the signal factors of other microorganisms existing in the culture solution outside the membrane can be taken into the membrane, the other microorganisms do not enter the membrane, so that the target microorganism can be propagated. While taking in signal factors of other useful microorganisms, Complexation can be avoided, and the types of target microorganisms that can grow can be increased.
  • the culture solution can be adjusted as an open system outside the membrane body, the concentration of the substrate in the culture solution and the pH and dissolved oxygen concentration in the solution can be easily adjusted according to the state of the actual environment. It is possible to isolate and culture microorganisms sensitive to them.
  • the culture medium is taken into the membrane, the culture environment of the target microorganism becomes a liquid state that is almost the same as the culture environment outside the membrane body. Therefore, a conventional fixed medium such as an agar medium is used. Can significantly increase the diffusion rate of substances between the inside and outside of the membrane, and make the inside of the membrane sensitively and quickly respond to changes in the external environment, enabling culture in a state close to the natural state. It becomes.
  • a sample containing the target microorganism is diluted and a sample containing one target microorganism is placed in the membrane and isolated and cultured. Therefore, there is no need to extract colonies of target microorganisms from various microorganisms, microorganisms can be isolated and cultured by simple operations, and microorganisms and microcolonies that do not form colonies can be isolated. Isolation culture is also possible for the microorganisms that form.
  • the configuration (3) it is possible to further improve the diffusion rate of the substance between the inside and outside of the membrane.
  • a sample containing the target microorganism is diluted and a sample containing one target microorganism is placed in the membrane and isolated and cultured, an enormous number of culture units are required. Even so, the culture part can be integrated to make the whole compact.
  • FIG. 1 shows a schematic cross-sectional front view of a microorganism culturing apparatus according to the present embodiment.
  • the culture apparatus 10 includes a culture solution tank 11 into which a culture solution F is placed, A partition plate 12 that is detachably attached to the upper end side of the liquid tank 11 and closes the culture liquid tank 11 from above, and is supported by the partition plate 12 and is erected on both the upper and lower sides across the partition plate 12. A number of incubators 14, a sealed case 15 detachably disposed above the partition plate 12, and a gas supply means 17 disposed inside the culture solution tank 11.
  • the culture solution F to be placed in the culture solution tank 11 is various solutions in the environment where microorganisms are present.
  • water in a natural environment such as seawater, lake water, river water, wastewater treatment, etc.
  • solutions in engineering environments such as wastewater and treated water in the environmental purification process.
  • the incubator 14 is not particularly limited, and is provided with about 50 to about 100 sets. As shown in FIGS. 1 and 2, each of these incubators 14 includes a culture unit 19 that is located below the partition plate 12 and is immersed in the culture solution F in the culture solution tank 11, and the partition plate 12. It is comprised by the injection
  • the culture part 19 has a tube shape in which both ends in the extending direction are open. Specifically, the culture part 19 includes a porous hollow fiber membrane (membrane body) having hydrophilicity. Microorganisms to be cultured (hereinafter referred to as “target microorganisms”) are placed in the internal space.
  • the culture section 19 is not particularly limited, but is formed of a polysulfone film or a PVDF (polyvinylidene fluoride) film, and has an inner diameter of 0.7 mm, a length of 20 cm to 30 cm, and a pore diameter of 0.1 ⁇ m. There is.
  • the inner diameter of the culture part 19 is preferably 5 mm or less, more preferably 1 mm or less, considering the space saving of the apparatus and the diffusion rate of substances between the inside and outside of the membrane.
  • the culture unit 19 may be constituted by another film body that can surround and confine the target microorganism, and as this film body, as schematically shown in FIG.
  • Various other microorganisms are used as long as they have pores H that allow passage of chemical substances including various substrates, metabolites, ions, and signal factors while blocking the passage of various microorganisms B
  • the pore diameter is preferably not more than m, more preferably about 0.1xm.
  • the injection part 20 is connected to one end side of each culture part 19 in the right side in FIG. 2 and in the same figure connected to the other end side of each culture part 19. With syringe 23 on the left It is configured.
  • the upper and lower ends of the injection container 22 are open, and the open portion on the upper end side serves as the injection port 22A for the sampnore solution containing the target microorganism, while the open portion on the lower end side is the culture section 19.
  • One end side is a connection port 22B connected without a gap.
  • the syringe 23 includes a cylindrical main body 25 and a piston 26 that slides in the main body 25 in the vertical direction.
  • An opening 25A is provided on the lower end side of the main body 25, and the other end side of the culture part 19 is connected to the opening 25A without any gap. For this reason, the inner space of the injection container 22 and the syringe 23 is communicated via the inner space of the culture unit 19.
  • the sealing case 15 is disposed so as to cover and seal all the injection portions 20 that are erected on the partition plate 12, and is injected from the outside of the sealing case 15. It is provided so that the invasion of fungus into part 20 can be regulated.
  • the gas supply means 17 uses an apparatus having a known structure that can supply a gas such as air or nitrogen gas to the culture solution F in the culture solution tank 11 at a predetermined timing. Since these are not the essence of the invention, the description thereof is omitted here.
  • dispersion and dilution are performed on sample solution collected from seawater or wastewater of a phosphorus removal reactor as a wastewater treatment apparatus. Specifically, after dispersing cells (aggregates) aggregated in the Sampnore solution one by one using an ultrasonic dispersing device, several types of filters with different eye roughness (for example, pore size 25 ⁇ m) And 2 ⁇ m of 3 ⁇ m) to remove dust, aggregates and aggregates that are completely dispersed in the sample.
  • filters with different eye roughness (for example, pore size 25 ⁇ m) And 2 ⁇ m of 3 ⁇ m) to remove dust, aggregates and aggregates that are completely dispersed in the sample.
  • the number of cells in the sample solution (cellZml) can be obtained by measuring the total number of cells in the sample solution treated in this way by the DAPI staining direct counting method.
  • the sample solution is diluted with a predetermined dilution solution. That is, here, when the sample solution is injected into the culture unit 19, it is diluted to a concentration of 0.1 to lcel 1 / container so that one or more cells do not enter.
  • the diluted solution is an environment close to the collected sample solution. The one inside is used.
  • the sample solution is seawater
  • the seawater is filtered and sterilized without using seawater as it is, and then a solution that has been autoclaved and sterilized is used. Good.
  • a solution having the same composition as the wastewater (substrate) flowing into the phosphorus removal reactor may be used.
  • the following set is performed in the clean bench.
  • the diluted sample solution is injected into each incubator 14.
  • the diluted sample solution is injected into each of the incubators 14 from the inlet 22A of the injection container 22, and the piston 26 of the corresponding syringe 23 is pulled upward, so that the sample solution in the injection container 22 is recovered. It is sucked in the direction of the culture unit 19 and introduced into each culture unit 19 in each culture device 14.
  • the surface of the partition plate 12 and the entire inner surface of the sealed case 15 are sterilized with ethanol, and the entire injection part 20 is covered with the sealed case 15.
  • the sample solution is seawater
  • microorganisms are cultured as follows. That is, the seawater and sea mud constituting the culture solution F are put into the culture solution tank 11, and the culture unit 19 of the incubator 14 is immersed in the culture solution F by the gas supply means 17. Supply air into culture medium F.
  • the culture period is not particularly limited and can be arbitrarily set. For example, a culture period of about 1 month can be exemplified.
  • the seawater in the culture medium tank 11 should be replaced with a cycle of about once a week.
  • the Sampnore solution is waste water of a phosphorus removal reactor
  • microorganisms are cultured as follows. That is, first, waste water as the culture medium F flows into the culture medium tank 11, and the culture unit 19 is immersed in the culture medium F, and in this state, the culture medium tank 11 is stored in the culture medium tank 11 every predetermined time. Culture microorganisms while exchanging about half of culture medium F with new wastewater (substrate). Specifically, first, in a state where the culture unit 19 is immersed in the wastewater in the culture solution tank 11, nitrogen gas is supplied from the gas supply means 17 to the wastewater, and the culture is performed for several hours under anaerobic conditions by aeration.
  • the culture medium F outside the culture section 19 is taken into each culture section 19 due to the nature of the membrane body constituting the culture section 19, and the culture medium F contains the culture medium F.
  • Signal factors of other microorganisms present are taken into each culture unit 19.
  • metabolites and signal factors produced by the target microorganism T itself are naturally discharged into the culture medium F outside the culture unit 19. At this time, other microorganisms existing outside the culture unit 19 do not enter the culture unit 19.
  • the sample solution in which the microorganisms are cultured in each culture unit 19 is extracted.
  • the piston 26 of the syringe 23 of each incubator 14 upward, the sample solution force after culturing in the culture unit 19 is sucked out into the body 25 of the syringe 23, and the piston 26 is removed from the body 25.
  • the present inventors conducted an experiment for isolation and culture of microorganisms using seawater and wastewater from the phosphorus removal reactor as the culture solution F. That is, DAPI staining was performed for each sample 14 in each incubator 14 obtained by the above procedure, and whether or not the cells were growing under a fluorescence microscope. Whether or not it was in a pure bacterium state was judged visually. Then, extract all DNA from the cells determined to be in a pure state, perform DNA sequencing, determine the base sequence of 16S rDNA, and finally read the base sequence that can be read. The pure bacteria state.
  • the culture unit 19 is composed of the above-described membrane body, the metabolite produced by the target microorganism T can be discharged to the outside of the culture unit 19, and growth is inhibited by the metabolite produced by itself. It is possible to culture microorganisms.
  • the culture solution F exists inside and outside the culture unit 19, it can be brought into a state close to the actual environment where the target microorganism T inhabits, and it can be obtained from symbiotic bacteria necessary for the growth of the target microorganism T. Substances can be easily supplied to the target microorganism T through the membrane, and microorganisms that grow under the influence of commensal bacteria can be cultured.
  • the invasion of other microorganisms into the membrane body is prevented, so that complexation with other microorganisms can be avoided, and the microorganisms can be isolated and cultured. Furthermore, since the target microorganism T is cultured in the same culture medium F as the outside of the culture unit 19 without using a solid medium such as an agar medium, the diffusion rate of the substance between the inside and outside of the culture unit 19 is made higher than before. And can respond quickly to changes in the external environment, such as changes in the natural environment.
  • the pH and residual oxygen concentration of the culture medium F can be easily changed in the middle, and microorganisms that are sensitive to changes in the pH and residual oxygen concentration of the surrounding environment can be grown.
  • the culture apparatus 10 is used to isolate and culture microorganisms.
  • the present invention is not limited to this, and the culture apparatus 10 can also be used for other cultures of microorganisms. That is, for example, it is of course possible to simultaneously culture various microorganisms by using the culture apparatus 10 and putting a plurality of types of microorganisms in each culture section 19.
  • FIG. 1 is a schematic sectional front view of an isolation culture apparatus according to the present embodiment.
  • FIG. 2 is an enlarged front view of the incubator.
  • FIG. 3 is a conceptual cross-sectional view showing a state in a culture part.

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Abstract

　培養液Ｆが入れられる培養液槽１１と、この培養液槽１１の上端側に配置された仕切り板１２と、当該仕切り板１２を挟んだ上下両側に多数起立配置される培養器１４と、培養液槽１１の内部に配置された気体供給手段１７とを備えて単離培養装置１０が構成されている。各培養器１４は、仕切り板１２の下側に位置して培養液槽１１内の培養液Ｆに浸漬される培養部１９と、仕切り板１２の上側に位置する注入部２０とにより構成されている。培養部１９は、対象微生物を囲む膜体により構成され、この膜体は、各種微生物の通過を阻止する一方、種々の化学物質の通過を許容可能に形成され、培養液１１槽中の培養液Ｆを前記膜体内に取り込むことで、対象微生物の培養環境を当該膜体の外側の培養環境とほぼ同一にする。

Description

明 細 書
微生物の培養装置及び培養器並びに培養方法
技術分野
[0001] 本発明は、微生物の培養装置及び培養器並びに培養方法に係り、更に詳しくは、 より多くの種類の微生物を単離培養することに適した微生物の培養装置及び培養器 並びに培養方法に関する。
背景技術
[0002] 自然環境中には、多種多様な微生物が存在している力 これら微生物は、複合微 生物系を形成しており、この複合微生物系からより多くの微生物を単離し、単離後の 微生物を培養することで、有用な微生物の発掘や未利用遺伝子資源としての活用等 が可能となる。
[0003] ところで、従来における微生物の単離培養方法としては、特許文献 1で紹介されて いる平板培養法がある。この平板培養法は、対象微生物が含まれたサンプノレを希釈 することにより、対象微生物の所定単位当たりの細胞数を少なくした上で、当該希釈 後のサンプノレを容器内の寒天培地に載せ、所定期間に亘つて対象微生物を培養し 、増殖させる方法である。
[0004] 更に、微生物を培養する手法として、液体限界希釈培養方法が知られており（例え ば、特許文献 2参照）、この方法も微生物を単離培養する際の一般的な手法として用 レ、られている。この液体限界希釈方法で行う微生物の単離培養は、多数の試験管等 の容器を用い、当該各容器に所定の液体培地を加えた上で、所定溶液で対象微生 物が 0若しくは 1細胞含まれる程度に希釈したものを各容器内に分注して培養する。 その結果、単一種類の微生物の分離培養が可能となる。
[0005] また、他の単離培養方法としては、特許文献 3に開示されているように、微生物を通 過させず水溶物のみを通過させる膜を有する密閉性容器を使った方法が知られてい る。この方法は、分離対象となる微生物を含む菌源を接種した寒天培地を前記密閉 性容器内に封入した上で、当該密閉性容器を菌源に応じた外部環境内に配置する 。この際、当該外部環境力 低濃度の有機物が前記膜を通して寒天培地に供給され 、寒天培地中の各種微生物を生育させて当該各種微生物のコロニーを形成する。そ して、その中から、分離対象となる微生物のコロニーが抽出される。
[0006] 更に、特許文献 4に開示されているように、電気培養装置を使った微生物の単離培 養方法もある。ここでの電気培養装置は、培地に電圧を印加しながら微生物を培養 する装置である。この電気培養装置は、第 1の電極と、当該第 1の電極を貫通する複 数の培養槽と、培養槽に連なる対極槽と、当該対極槽内に配置された第 2の電極と、 前記培養槽と前記対極槽の間を仕切るイオン交換膜及びフィルターと、微生物の培 養に必要な元素を含むガスを前記対極槽に供給するガス供給手段とを備えている。 前記培養槽には、酸化鉄を含む培地に懸濁させた微生物が充填され、前記対極槽 には、鉄を含まない培地成分を含んだ溶液が充填されている。また、前記フィルター は、前記培養槽と前記対極槽との間での微生物の移動を阻止するようになっている。 以上の構成により、第 1、第 2の電極に電圧が印加されると、ガス供給手段で対極槽 内に供給された水素及び炭素は、対極槽中の培地からフィルターを通って培養槽内 の培地に移動し、当該培地中の鉄成分とイオン反応をすることで、その中の微生物 が電気的に単離培養される。この際、鉄イオンはイオン交換膜によって対極槽に流 出するのを阻止され、培養槽内で繰り返し利用される。
特許文献 1 :特開平 6— 277095号公報
特許文献 2 :特開平 11一 253153号公報
特許文献 3：特開平 1― 265882号公報
特許文献 4：特開 2004— 16023号公報
発明の開示
発明が解決しょうとする課題
[0007] し力しながら、前述した従来の各培養方法では、地球上の殆どの微生物の単離培 養を行うことができない。これは、従来の各培養方法が、微生物の生息する実環境と は程遠い環境で行われているのが理由であると考えられる。以下に詳述する。
[0008] 前記平板培養法及び液体限界希釈培養方法では、基質の濃度や代謝産物の存 在等に影響を受けない微生物が単離培養可能であるが、このような微生物は少ない
。つまり、当該従来技術では、過剰になった基質や微生物の生成物質を排出できな レ、閉鎖的な環境で培養が行われるため、基質が経時的に高濃度になったり、培養対 象の微生物が出す代謝産物やシグナル因子が蓄積した場合、それらにより阻害を受 ける微生物は増殖できない。
[0009] 加えて、前記平板培養法及び液体限界希釈培養方法では、実際の環境下と異なり 、培養対象の微生物を単独で培養することになるため、周囲の共生微生物との相互 作用を受けて増殖する微生物の培養には不向きである。ここで、対象微生物に共生 微生物を加えて培養することも考えられるが、単離培養操作において、対象微生物 の生理生態は未知であり、共生微生物の有無や種類も未知である以上、前記相互 作用に適した共生微生物が偶然的に混入する以外は不可能である。
[0010] また、前記平板培養法及び液体限界希釈培養方法では、培養中に培養環境の p Hや残存酸素濃度を調整することができず、これら pHや残存酸素濃度に敏感な微 生物は増殖できない。
[0011] 特許文献 3に開示された方法にあっては、膜内が菌源を接種した寒天培地等から なる固体培地に封入された状態である一方、膜外が菌源に応じた外部環境となって いるため、当該膜内外間で培養環境が異なる。その結果、当該膜内外間における有 機物等の物質の拡散速度が、微生物細胞が実際に培養される環境よりも確実に遅く なり、外部環境の変化に対して膜内の環境を鋭敏に短時間で応答させることができ ない。このことが培養に影響を与える微生物もあることから、この方法でも、より多くの 種類の微生物の単離培養を行うには限界がある。
[0012] また、特許文献 3の方法では、寒天培地にコロニーを形成して、公知の寒天重層法 等によってコロニーを抽出する作業を行わなければならず、これには熟練した技術が 必要となり、単離培養作業に手間や時間力かかるという問題もある。また、性質的に コロニーを形成しない微生物や、肉眼で観察できないほど小さいマイクロコロニーし か形成しない微生物は環境中に多く存在することが知られており、特許文献 3の方法 では、これらの微生物の単離培養を行うことが困難である。
[0013] 微生物を電気培養する特許文献 4に開示された方法では、電気培養で培養可能な 微生物は鉄還元細菌など環境中のごく一部の種類に限られ、多くの環境微生物全 般に適用させることはできない。つまり、特許文献 4の装置では、電気培養に適する ように、前記培養槽及び前記対極槽に入れられる培地の成分を人工的に相違させ、 微生物の生育する自然状態とかけ離れた状態で人工的に培養するため、限られた 微生物しか単離培養することができなレ、。
[0014] 本発明は、以上の問題に着目して案出されたものであり、その目的は、微生物の生 息する実環境に近い環境で微生物の単離培養を行うことができ、より多くの種類の微 生物の単離培養を可能にする微生物の培養装置及び培養器並びに培養方法を提 供することにある。
課題を解決するための手段
[0015] (1)前記目的を達成するため、本発明の単離培養装置は、培養液が入れられる培 養液槽と、当該培養液槽内の培養液中に浸潰されて対象微生物が培養される培養 部とを備え、
前記培養部は、前記対象微生物を囲む膜体により構成され、この膜体は、各種微 生物の通過を阻止する一方、種々の化学物質の通過を許容可能に形成され、前記 培養液槽中の培養液を前記膜体内に取り込むことで、前記対象微生物の培養環境 を前記膜体の外側の培養環境とほぼ同一にする、という構成を採っている。
[0016] (2)また、本発明の単離培養装置は、培養液が入れられる培養液槽と、当該培養 液槽内の培養液中に浸漬されて対象微生物が培養される培養部とを備え、 前記培養部は、前記対象微生物を囲む膜体により構成され、この膜体は、内径 1 μ m以下の孔が形成され、前記培養液槽中の培養液を前記膜体内に取り込むことで、 前記対象微生物の培養環境を前記膜体の外側の培養環境とほぼ同一にする、とい う構成を採ることもできる。
[0017] (3)以上において、前記膜体を内径が 5mm以下の多孔性中空糸膜により構成す ること力 S好ましレ、。
[0018] (4)また、前記培養液槽内には、所定の気体を前記培養液中に供給する気体供給 手段が設けられる、という構成も併せて採用することができる。
[0019] (5)更に、前記対象微生物を前記培養部に注入する注入手段を備えるとよい。
[0020] (6)また、本発明の培養器は、所定の培養液中に浸漬されて対象微生物が培養さ れる培養部と、この培養部内に前記対象微生物を注入する注入手段とを備え、 前記培養部は、前記対象微生物を囲む膜体により構成され、この膜体は、各種微 生物の通過を阻止する一方、種々の化学物質の通過を許容可能に形成され、前記 培養液を前記膜体内に取り込むことで、前記対象微生物の培養環境を前記膜体の 外側の培養環境とほぼ同一にする、とレ、う構成を採ってレ、る。
[0021] (7)更に、本発明の単離培養方法は、各種微生物の通過を阻止する一方、種々の 化学物質の通過を許容する膜体により、対象微生物を囲んだ上で、前記膜体を所定 の培養液に浸漬させ、当該培養液を前記膜体内に取り込むことで、前記膜体の外側 の培養環境とほぼ同一の培養環境で前記対象微生物を培養する、という手法を採つ ている。
[0022] (8)また、各種微生物の通過を阻止する一方、種々の化学物質の通過を許容する 膜体を使った微生物の培養方法であって、
対象微生物が含まれたサンプノレを希釈した上で、前記対象微生物が少なくとも一 個含まれるサンプルを前記膜体で囲み、当該膜体を所定の培養液に浸潰させ、当 該培養液を前記膜体内に取り込むことで、前記膜体の外側の培養環境とほぼ同一 の培養環境で前記対象微生物を培養する、という手法を採ることができる。
発明の効果
[0023] 本発明によれば、微生物を通さずに化学物質を通す膜体で囲まれた対象微生物 の外側に、海水や廃水処理装置内の廃水等、対象微生物の実際の生育環境に存 在する微生物群が雑多に含まれた培養液があり、当該培養液が膜体内に取り込まれ るため、対象微生物が生息する実環境に近い状態で、前記膜体内にて微生物の単 離培養を行うことができ、より多くの種類の微生物の単離培養が可能となる。
[0024] すなわち、培養液中では、対象微生物が前述の膜体に囲まれた状態で培養される ため、 自身が出した代謝産物やシグナル因子を膜外の培養液中に自然に排出させ ること力 Sでき、対象微生物の増殖に際し、前記代謝産物やシグナル因子が与える影 響を少なくできる。
[0025] 更に、膜外の培養液中に存在する他の微生物のシグナル因子を膜体内に取り込 むことができる一方で、当該他の微生物は膜体内に侵入しないため、対象微生物の 増殖に有用な他の微生物のシグナル因子の取り込みを行いつつも、他の微生物との 複合化を回避することができ、増殖可能な対象微生物の種類を増大させることができ る。
[0026] また、培養液を膜体の外側で開放系として調整できるため、培養液中の基質の濃 度、液中の pHゃ溶存酸素濃度を実環境の状態に合わせて容易に調整することがで き、それらに敏感な微生物の単離培養が可能となる。
[0027] 更に、膜内に培養液が取り込まれることで、対象微生物の培養環境が膜体の外側 の培養環境とほぼ同一となる液体状態となるため、従来の寒天培地等の固定培地を 使った方法に対し、膜体内外間の物質の拡散速度を大幅に向上させ、外部環境の 変化に対して膜体内を鋭敏に短時間で応答させることができ、 自然状態に近い状態 での培養が可能となる。
[0028] また、本発明では、寒天培地等の固定培地を使わずに、対象微生物が含まれたサ ンプルを希釈して対象微生物が 1個含まれたサンプルを膜体内に入れて単離培養 可能なため、種々の微生物の中から対象微生物のコロニーを抽出する必要がなくな り、簡単な作業で微生物の単離培養を行うことができ、また、コロニーを形成しない微 生物やマイクロコロニーを形成する微生物に対しても単離培養可能になる。
[0029] 特に、前記（3)の構成によれば、膜体内外間の物質の拡散速度を更に向上させる こと力 Sできる。カロえて、対象微生物が含まれたサンプルを希釈して対象微生物が 1個 含まれたサンプノレを膜体内に入れて単離培養する際に、膨大な数の培養部が必要 になるが、この場合であっても、培養部を集積化して全体をコンパクトィ匕することがで きる。
[0030] また、前記 (4)のように構成することで、培養液中の気体供給状態を、より実環境中 に近似させて制御することが容易となる。
[0031] 更に、前記（5)の構成によれば、膜体中への微生物の注入を容易に行うことができ
、培養部を多数用意する場合に有用である。
発明を実施するための最良の形態
[0032] 以下、本発明の実施形態について図面を参照しながら説明する。
[0033] 図 1には、本実施形態に係る微生物の培養装置の概略断面正面図が示されている
。この図において、培養装置 10は、培養液 Fが入れられる培養液槽 11と、この培養 液槽 11の上端側に着脱自在に取り付けられ、培養液槽 11を上方から閉塞する仕切 り板 12と、この仕切り板 12に支持され、当該仕切り板 12を挟んだ上下両側に起立配 置される多数の培養器 14と、仕切り板 12の上方に着脱自在に配置された密閉ケー ス 15と、培養液槽 11の内部に配置された気体供給手段 17とを備えて構成されてい る。
[0034] 前記培養液槽 11に入れる培養液 Fは、微生物が存在してレ、る環境中の各種溶液 であり、例えば、海水、湖水、河川水等の自然環境における水や、廃水処理等の環 境浄化工程における廃水、処理水等の工学的な環境における溶液が挙げられる。
[0035] 前記培養器 14は、特に限定されるものではなレ、が、 50〜： 100セット程度設けられ ている。これら各培養器 14は、図 1及び図 2に示されるように、仕切り板 12の下側に 位置して培養液槽 11内の培養液 Fに浸漬される培養部 19と、仕切り板 12の上側に 位置する注入手段としての注入部 20とにより構成されている。
[0036] 前記培養部 19は、延出方向両端側が開放するチューブ状をなしており、具体的に は、親水性を有する多孔性中空糸膜 (膜体）により構成され、当該培養部 19の内部 空間に、培養対象となる微生物（以下、「対象微生物」と称する。）が入れられる。培 養部 19は、特に限定されるものではなレ、が、ポリスルフォン膜又は PVDF (ポリフッ化 ビニリデン）膜により形成され、内径 0. 7mm、長さ 20cm〜30cm、孔径 0· 1 μ mとな つている。なお、培養部 19の内径としては、装置の省スペース化や膜体の内外間の 物質の拡散速度を考慮すると、 5mm以下が好まし 更に好ましくは lmm以下が良 レ、。
[0037] なお、培養部 19は、対象微生物を囲んで閉じ込め可能な他の膜体によって構成し てもよく、この膜体としては、図 3に模式的に示されるように、対象微生物 T及び他の 各種微生物 Bの通過を阻止する一方、種々の基質、代謝産物、イオン及びシグナル 因子を含む化学物質の通過を許容する孔 Hが形成されたものである限り、種々のも のを採用することができ、具体的に、その孔径としては、： m以下が好ましぐ更に 好ましくは、 0. l x m程度が良い。
[0038] 前記注入部 20は、図 2に示されるように、各培養部 19の一端側に繋がる同図中右 側の注入容器 22と、各培養部 19の他端側に繋がる同図中左側のシリンジ 23とによ り構成されている。
[0039] 前記注入容器 22は、上下両端側が開放しており、上端側の開放部分は、対象微 生物を含むサンプノレ溶液の注入口 22Aとなる一方、下端側の開放部分は、培養部 1 9の一端側が隙間無く連結される連結口 22Bとなる。
[0040] 前記シリンジ 23は、筒状の本体 25と、この本体 25内を上下方向に摺動するピスト ン 26とを備えている。前記本体 25の下端側には、開口部 25Aが設けられ、この開口 部 25Aには、培養部 19の他端側が隙間無く連結されている。このため、注入容器 22 とシリンジ 23とは、それぞれの内部空間が培養部 19の内部空間を介して通じること になる。
[0041] 前記密閉ケース 15は、図 1に示されるように、仕切り板 12に起立配置された全ての 注入部 20の周囲を覆って、密閉するように配置され、密閉ケース 15の外側から注入 部 20への菌体の侵入を規制可能に設けられている。
[0042] 前記気体供給手段 17は、培養液槽 11内の培養液 Fに、所定のタイミングで、空気 や窒素ガス等の気体を供給可能とする公知構造の装置が用いられており、その構造 等は、発明の本質ではないため、ここでは説明を省略する。
[0043] 次に、以上の単離培養装置 10を用いた微生物の単離培養方法について説明する
[0044] 先ず、海水、若しくは、廃水処理装置としてのリン除去リアクターの廃水等から採取 されたサンプル溶液に対し、分散及び希釈を行う。具体的には、超音波分散装置に より、サンプノレ溶液内で凝集している細胞（凝集体）を一個一個に分散させた後、 目 の粗さが異なる数種類のフィルタ（例えば、孔径 25 μ mと 3 μ mの二種類）を用いて、 サンプル中に存在するゴミゃ分散し切れてレ、なレ、凝集体を除去する。
[0045] このように処理されたサンプル溶液に対し、その中の全菌体数を DAPI染色 Direct counting法により計測することで、そのサンプル溶液中の細胞数（cellZml)が求 められる。
[0046] そして、このサンプル溶液を所定の希釈溶液で希釈する。すなわち、ここでは、サン プル溶液を培養部 19に注入したときに、 1個以上の細胞が入らないよう、 0. 1〜： lcel 1/容器の濃度に希釈する。希釈溶液としては、採取したサンプル溶液に近い環境 中のものが用いられる。例えば、サンプル溶液が海水である場合、浸透圧変化等に 対する菌体へのダメージを減らすために、海水をそのまま用いずに、海水を濾過滅 菌した後、オートクレープ滅菌処理をした溶液を用いるとよい。一方、サンプル溶液 カ^ン除去リアクターの廃水である場合には、当該リン除去リアクターに流入する廃水 (基質）と同一の組成の溶液を用いるとよい。
[0047] そして、クリーンベンチ内で以下のセットを行う。先ず、希釈後のサンプル溶液を各 培養器 14に注入する。この際、各培養器 14それぞれに対し、注入容器 22の注入口 22Aから希釈後のサンプル溶液を注入し、対応するシリンジ 23のピストン 26を上方 に引くことで、注入容器 22内のサンプル溶液が培養部 19方向に吸引されて、各培 養器 14における各培養部 19内に導入される。全ての培養器 14にサンプル溶液を注 入し終えたら、仕切り板 12の表面及び密閉ケース 15の内面全体に対し、エタノール で滅菌して密閉ケース 15で注入部 20の全体を覆う。
[0048] 更に、サンプル溶液が海水である場合は、次のようにして微生物の培養が行われる 。すなわち、培養液槽 11内に、培養液 Fを構成する海水及び海泥を投入し、当該培 養液 F中に、培養器 14の培養部 19を浸漬させた状態で、気体供給手段 17により、 空気を培養液 F内に供給する。この培養期間としては、特に限定されるものではなく 、任意に設定可能であり、例えば、 1ヶ月程度の培養期間が例示できる。また、培養 液槽 11内の海水は、週 1回程度のサイクルで交換するとよい。
[0049] 一方、サンプノレ溶液がリン除去リアクターの廃水である場合には、次のようにして微 生物の培養が行われる。すなわち、先ず、培養液槽 11内に、培養液 Fとしての廃水 を流入し、当該培養液 F中に培養部 19を浸漬させ、その状態で、所定時間毎に、培 養液槽 11内の培養液 Fのうち約半分程度を新たな廃水（基質）に交換しながら、微 生物の培養を行う。具体的に、先ず、培養部 19が培養液槽 11内の廃水に浸漬した 状態で、気体供給手段 17から廃水中に窒素ガスを供給し、曝気による嫌気条件下 での培養を数時間行う。その後、気体供給手段 17から廃水中に空気を供給し、好気 条件下での培養を数時間行う。次に、気体供給手段 17からの気体の供給を停止し て、培養液槽 11内に汚泥を沈降させ、培養液槽 11内の溶液の上澄み部分を約半 分抜き取り、その分、新たな廃水を培養液 11内に供給し、前述した工程を繰り返し行 う。例えば、これら工程を 1日当たり 3サイクル行いながら 1ヶ月程度培養する。
[0050] 以上の培養中は、培養部 19を構成する膜体の性質により、当該培養部 19の外側 の培養液 Fが各培養部 19内に取り込まれることになり、当該培養液 F中に存在する 他の微生物のシグナル因子が各培養部 19内に取り込まれる。一方、対象微生物 T 自身が出した代謝産物やシグナル因子は、各培養部 19の外側の培養液 F中に自然 に排出されることになる。この際、培養部 19の外側に存在する他の微生物は、各培 養部 19内に侵入しなレ、ことになる。
[0051] 以上の培養期間が終了した後、各培養部 19内で微生物が培養されたサンプル溶 液を抜き取る。この際、各培養器 14のシリンジ 23のピストン 26を上方に引くことで、 培養部 19内の培養後のサンプル溶液力 シリンジ 23の本体 25内に向かって吸い出 され、ピストン 26を本体 25から抜き取ることで、本体 25内に移動した微生物培養後 のサンプノレ溶液を取り出すことが可能になる。
[0052] 本発明者らは、以上の手順により、海水及びリン除去リアクターの廃水を培養液 Fと して微生物の単離培養の実験を行った。すなわち、前述の手順によって得られた各 培養器 14のサンプノレ溶液にそれぞれ対し、 DAPI染色を行い、蛍光顕微鏡下で、菌 体が増殖しているか否力、更に、増殖したものが形態学的に純菌状態か否かについ て、 目視により判断した。そして、純菌状態であると判断された菌体に対し、全 DNA を抽出し、 DNAシーケンス反応を行レ、、 16SrDNAの塩基配列を決定し、この際、 塩基配列が読めたものを最終的な純菌状態とした。
[0053] その結果、従来法に比べて高い単離培養効果が得られた他、従来、単離培養する ことができないとされた微生物の単離培養も可能となった。これは、本発明に基づく 以下の理由によると考えられる。
[0054] 第 1に、培養液槽 11内の培養液 Fの状態を容易に変えることができるため、基質の 高濃度化を抑制することができ、基質の高濃度が増殖の阻害要因となる微生物に対 する培養が可能となる。
[0055] 第 2に、培養部 19を前述した膜体で構成したため、対象微生物 Tが出す代謝産物 を培養部 19の外側に排出することが可能であり、 自身が出す代謝産物によって増殖 が阻害される微生物の培養が可能となる。 [0056] 第 3に、培養部 19の内部及び外部に培養液 Fが存在するため、対象微生物 Tが生 息する実環境に近い状態にでき、対象微生物 Tの増殖に必要な共生細菌からの物 質が膜体を通して対象微生物 Tに容易に供給され、共生細菌の影響を受けて増殖 する微生物の培養も可能となる。また、膜体の内部への他の微生物の侵入が阻止さ れ、当該他の微生物との複合化を回避でき、微生物の単離培養が可能となる。更に 、寒天培地等の固体培地を使わずに、培養部 19の外側と同じ培養液 F中で対象微 生物 Tが培養されるため、培養部 19の内外間の物質の拡散速度を従来よりも上げる ことができ、 自然環境の変化等の外部環境の変化に対して迅速な対応が可能となる
[0057] 第 4に、培養液 Fの pHや残存酸素濃度を途中で容易に変えることができ、周囲の 環境の pHや残存酸素濃度の変化に過敏な微生物の増殖も可能となる。
[0058] その他、コロニーの抽出を必要としないため、コロニーを形成しない微生物やマイク 口コロニーを形成する微生物に対しても単離培養が可能となる。
[0059] なお、前記実施形態では、微生物の単離培養を行うために培養装置 10を用いたが 、これに限らず、当該培養装置 10を微生物の他の培養に用いることも可能である。す なわち、例えば、培養装置 10を使って、各培養部 19内に複数の種類の微生物を入 れることで、各種微生物を同時に培養することも勿論可能である。
[0060] なお、本発明における装置各部の構成は図示構成例に限定されるものではなぐ 実質的に同様の作用を奏する限りにおいて、種々の変更が可能である。
図面の簡単な説明
[0061] [図 1]本実施形態に係る単離培養装置の概略断面正面図。
[図 2]培養器の拡大正面図。
[図 3]培養部内の状態を示した概念断面図。

Claims

請求の範囲
[1] 培養液が入れられる培養液槽と、当該培養液槽内の培養液中に浸潰されて対象 微生物が培養される培養部とを備え、
前記培養部は、前記対象微生物を囲む膜体により構成され、この膜体は、各種微 生物の通過を阻止する一方、種々の化学物質の通過を許容可能に形成され、前記 培養液槽中の培養液を前記膜体内に取り込むことで、前記対象微生物の培養環境 を前記膜体の外側の培養環境とほぼ同一にすることを特徴とする微生物の培養装置
[2] 培養液が入れられる培養液槽と、当該培養液槽内の培養液中に浸潰されて対象 微生物が培養される培養部とを備え、
前記培養部は、前記対象微生物を囲む膜体により構成され、この膜体は、内径 1 μ m以下の孔が形成され、前記培養液槽中の培養液を前記膜体内に取り込むことで、 前記対象微生物の培養環境を前記膜体の外側の培養環境とほぼ同一にすることを 特徴とする微生物の培養装置。
[3] 前記膜体は、内径が 5mm以下の多孔性中空糸膜により構成されていることを特徴 とする請求項 1又は 2記載の微生物の培養装置。
[4] 前記培養液槽内には、所定の気体を前記培養液中に供給する気体供給手段が設 けられていることを特徴とする請求項 1、 2又は 3記載の微生物の培養装置。
[5] 前記対象微生物を前記培養部に注入する注入手段を更に備えたことを特徴とする 請求項:!〜 4の何れかに記載の微生物の培養装置。
[6] 所定の培養液中に浸漬されて対象微生物が培養される培養部と、この培養部内に 前記対象微生物を注入する注入手段とを備え、
前記培養部は、前記対象微生物を囲む膜体により構成され、この膜体は、各種微 生物の通過を阻止する一方、種々の化学物質の通過を許容可能に形成され、前記 培養液を前記膜体内に取り込むことで、前記対象微生物の培養環境を前記膜体の 外側の培養環境とほぼ同一にすることを特徴とする培養器。
[7] 各種微生物の通過を阻止する一方、種々の化学物質の通過を許容する膜体により
、対象微生物を囲んだ上で、前記膜体を所定の培養液に浸潰させ、当該培養液を 前記膜体内に取り込むことで、前記膜体の外側の培養環境とほぼ同一の培養環境 で前記対象微生物を培養することを特徴とする微生物の培養方法。
各種微生物の通過を阻止する一方、種々の化学物質の通過を許容する膜体を使 つた微生物の培養方法であって、
対象微生物が含まれたサンプノレを希釈した上で、前記対象微生物が少なくとも一 個含まれるサンプルを前記膜体で囲み、当該膜体を所定の培養液に浸漬させ、当 該培養液を前記膜体内に取り込むことで、前記膜体の外側の培養環境とほぼ同一 の培養環境で前記対象微生物を培養することを特徴とする微生物の培養方法。
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Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2009273399A (ja) * 2008-05-14 2009-11-26 Asahikawa Poultry Kk 培養装置および培養方法
JP2019505240A (ja) * 2016-02-23 2019-02-28 コーニング インコーポレイテッド 灌流バイオリアクタおよび連続細胞培養を実施するためのその使用方法
CN110777070A (zh) * 2019-11-19 2020-02-11 宝鸡文理学院 一种在线微生物自动培养系统及其管理方法

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH01198559A (ja) * 1987-11-02 1989-08-10 Rhode Island Hospital 肝臓細胞を有する潅流装置
JPH01265882A (ja) * 1988-04-15 1989-10-23 Agency Of Ind Science & Technol 微生物の分離方法及びそれに用いる容器
JP2002112763A (ja) * 2000-10-10 2002-04-16 Nipro Corp 細胞培養容器
JP2002153260A (ja) * 2000-11-22 2002-05-28 Japan Science & Technology Corp 一細胞長期培養顕微観察装置

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH01198559A (ja) * 1987-11-02 1989-08-10 Rhode Island Hospital 肝臓細胞を有する潅流装置
JPH01265882A (ja) * 1988-04-15 1989-10-23 Agency Of Ind Science & Technol 微生物の分離方法及びそれに用いる容器
JP2002112763A (ja) * 2000-10-10 2002-04-16 Nipro Corp 細胞培養容器
JP2002153260A (ja) * 2000-11-22 2002-05-28 Japan Science & Technology Corp 一細胞長期培養顕微観察装置

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
AOI Y. ET AL.: "Biseibutsukan Sogo Sayo ni Chakumoku shita Shinki Tanri Baiyo Shuho", THE SOCIETY FOR BIOTECHNOLOGY, JAPAN TAIKAI KOEN YOSHISHU, September 2005 (2005-09-01), pages 49, XP003008680 *

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2009273399A (ja) * 2008-05-14 2009-11-26 Asahikawa Poultry Kk 培養装置および培養方法
JP2019505240A (ja) * 2016-02-23 2019-02-28 コーニング インコーポレイテッド 灌流バイオリアクタおよび連続細胞培養を実施するためのその使用方法
US11136542B2 (en) 2016-02-23 2021-10-05 Corning Incorporated Perfusion bioreactor and method for using same to perform a continuous cell culture
CN110777070A (zh) * 2019-11-19 2020-02-11 宝鸡文理学院 一种在线微生物自动培养系统及其管理方法

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