DE3784397T2 - Lebendvaccine fuer ansteckungskrankheiten von kueken. - Google Patents

Lebendvaccine fuer ansteckungskrankheiten von kueken.

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DE3784397T2 DE8787110291T DE3784397T DE3784397T2 DE 3784397 T2 DE3784397 T2 DE 3784397T2 DE 8787110291 T DE8787110291 T DE 8787110291T DE 3784397 T DE3784397 T DE 3784397T DE 3784397 T2 DE3784397 T2 DE 3784397T2
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Description

  • Die Erfindung betrifft die Verhütung von Krankheiten bei Geflügel, insbesondere bei Hühnern. Genauer betrifft sie einen Lebendimpfstoff gegen infektiöse Laryngotracheitis, bei dem Zellen aus Zellkulturen verwendet werden, und einen kombinierten Lebendimpfstoff gegen die infektiöse Laryngotracheitis und die Marek-Krankheit.
  • Die infektiöse Laryngotracheitis und die Marek-Krankheit sind ansteckende, virale Krankheiten bei Hühnern. Diese Krankheiten werden zu einem Hauptproblem in vielen Teilen der Welt, einschließlich Japan, Nordamerika, Europa und Australien, wo die Hühnerzucht in großem Maßstab sehr entwickelt ist. In solchen Regionen wurden diese Krankheiten zu einem Hauptfaktor, der die Produktivität der Geflügelindustrie verringerte.
  • Infektiöse Laryngotracheitis ist eine Krankheit der Atmungsorgane. Mit dem die infektiöse Laryngotracheitis verursachenden Virus infizierte Hühner beginnen zwei oder drei Tage nach der Infektion Symptome zu zeigen und die Symptome halten etwa zwei Wochen an. Die Sterblichkeitsrate liegt zwischen 10% und 70%, je nachdem, wie aktiv das Virus ist, und wie die Züchtungsbedingungen sind. Sie beträgt im allgemeinen etwa 20%. Ferner wird die Empfindlichkeit der Hühner gegenüber dem Virus durch die Zuchtlinie, das Geschlecht oder das Alter nicht beeinflußt. Jedoch sind bei jüngeren Hühnern die Symptome eher ausgeprägter und die Sterblichkeitsrate ist höher.
  • Die Symptome der mit dieser Krankheit angesteckten Hühner sind Niesen und Husten, was durch eine Entzündung der Luftröhre verursacht wird. In ernsten Fällen kommt es zu einem Keuchen und zum Tod durch Ersticken, hervorgerufen durch Verlegen der Luftröhre mit dem Exsudat. Als Ergebnis verursacht diese Krankheit eine hohe Sterblichkeit, eine niedrige Zuchteffizienz, niedrige Gewichtszunahmen und eine verringerte Legehäufigkeit. In Ländern, in denen in großem Umfang Hühner gezüchtet werden, wurde infektiöse Laryngotracheitis als Ursache für verringerte Produktivität der Geflügelindustrie festgestellt, und zwar als Folge der großen Verluste für die Hühnerzüchter bei Auftreten der infektiösen Laryngotracheitis bei den Hühnern auf dem Hof.
  • Andererseits ist die Marek-Krankheit eine maligne lymphproliferative Erkrankung bei Hühnern, und ihre Symptome treten vielfältig auf, in den Nerven, den Geschlechtsorganen, den inneren Organen, den Augen, der Haut usw. Ferner sind die Hühner gegenüber diesem Virus ohne Einfluß der Zuchtlinie oder des Geschlechts empfindlich. Jedoch wurde berichtet, daß jüngere Hühner empfindlicher sind und einen größeren Schaden durch das Virus nehmen. Die Symptome der Marek-Krankheit umfassen motorische Störungen, hervorgerufen durch Nervenparalyse bei Nervenbefall, und funktionelle Störungen der inneren Organe durch einen Tumor, und chronische, schwindsüchtige Unterernährung bei Befall innerer Organe. Üblicherweise sterben die Hühner. Es gibt keine wirksamen therapeutischen Mittel zur Behandlung der infektiösen Laryngotracheitis oder der Marek-Krankheit. Mögliche Gegenmaßnahmen sind die Verringerung der Hühnerzahl durch Aussondern der befallenen und verbesserte Lüftung. Diese Maßnahmen zeigen jedoch keine wesentliche Wirkung. Die einzige realistische Behandlung der Krankheiten ist die Verwendung eines wirksamen Impfstoffes, der die Hühner vor der Ansteckung mit den Viren schützen kann.
  • Verschiedene Impfstoffe gegen jede der Krankheiten wurden entwickelt und verwendet. Jedoch ist gegenwärtig kein kombinierter Impfstoff für beide Krankheiten verfügbar. Daher werden zwei Impfungen verabreicht (eine für jede Krankheit).
  • Der vorhandene Impfstoff gegen die infektiöse Laryngotracheitis ist immer noch unzureichend hinsichtlich seiner Sicherheit, Wirksamkeit und dem Injektionsverfahren. Der gegenwärtig für die infektiöse Laryngotracheitis verfügbare Impfstoff ist ein attenuierter Lebendimpfstoff aus einer Viruslösung, die in einem Kulturmedium durch Züchten von mit dein die infektiöse Laryngotracheitis verursachenden Virus infizierten Zellen aus Zellkulturen gewonnen wurde (US-Patent 3,331,736). Die Hühner werden durch Eintropfen einer den Impfstoff enthaltenden Lotion in die Augen geimpft, die einer der Infektionswege des Virus sind. Der Impfstoff ist hinsichtlich der Erzeugung der Immunität und dem Zeitpunkt der Immunisierung problematisch. Der Impfstoff zeigt nämlich fast keine Wirkung bei Hühner, die jünger als 14 Tage sind. Somit gibt es keinen Weg, mit dem Virus infizierte Hühner vor dem vierzehnten Lebenstag zu schützen. Zusätzlich erfahren Hühner, die älter als 14 Tage sind, einen zusätzlichen Streß, wenn sie zur Impfung gefangen werden. Ferner können sie sich in diesem Alter ziemlich schnell bewegen. Somit ist zu ihrem Einfangen viel Arbeit nötig. Die Arbeit des Impfens wird somit zu einer Hauptbelastung für Züchter, die eine große Anzahl von Hühnern aufziehen. Ferner bleibt noch die Möglichkeit, daß der in das Auge eingebrachte Impfstoff Nebenwirkungen haben kann, obwohl dieses Risiko nun geringer ist als in der Vergangenheit.
  • Andererseits enthält der vorhandene Impfstoff gegen die Marek-Krankheit infizierte Zellen aus Zellkulturen, die ein gezüchtetes, attenuiertes, die Marek-Krankheit verursachendes Virus oder das Truthahn-Herpesvirus als wirksamen Bestandteil enthalten, und wird üblicherweise bei frisch geschlüpften Hühnern kurz nach dem Schlüpfen eingesetzt (AT-B-346 476). Infizierte Kulturzellen werden wegen der Instabilität des Virus als wirksamer Bestandteil des Impfstoffes verwendet (Davis et al. Amer. J. Vet. Res. M (1973), 873-880; Churchill et al., Nature 221 (1969), 744-747). Wenn das Virus während der Züchtung außerhalb der Kulturzellen erscheint, verändert es sich rasch und verliert seine Antigenität als Impfstoff. Somit wurde bisher kein zufriedenstellender Impfstoff weder gegen die infektiöse Laryngotracheitis noch ein kombinierter Impfstoff gegen die infektiöse Laryngotracheitis und die Marek-Krankheit entwickelt.
  • Es ist eine Aufgabe der Erfindung, einen verbesserten Impfstoff gegen die infektiöse Laryngotracheitis bereitzustellen, der bei einem Tag alten Hühnern einsetzbar ist.
  • Es ist eine weitere Aufgabe der Erfindung, einen Impfstoff gegen die infektiöse Laryngotracheitis bereitzustellen, der wie der vorhandene Impfstoff gegen die Marek-Krankheit durch Injektion unter die Haut verwendet werden kann. Es ist eine weitere Aufgabe der Erfindung, einen kombinierten Impfstoff gegen die infektiöse Laryngotracheitis und die Marek-Krankheit bereitzustellen.
  • Diese Aufgaben der Erfindung werden durch die Bereitstellung eines neuen Lebendimpfstoffs gegen das die infektiöse Laryngotracheitis verursachende Virus gelöst, der mit dem Virus infizierte Zellen aus Zellkulturen als einen wirksamen Bestandteil umfaßt, erhalten durch Züchten von mit attenuiertem, infektiöse Laryngotracheitis verursachendem Virus infizierten Zellen aus Zellkulturen.
  • Während das die Marek-Krankheit verursachende Virus durch den Besitz der vorstehend beschriebenen, speziellen Eigenschaften eine Ausnahme ist, umfassen die meisten, das übliche Virus verwendenden Impfstoffe nur das als wirksame Komponente benötigte gereinigte Virus und enthalten keine anderen Komponenten, wie Zellen aus Zellkulturen, die als nicht notwendig gelten. Die Erfinder injizierten jedoch Hühnern mit dem die infektiöse Laryngotracheitis verursachenden Virus infizierte Zellen und fanden überraschenderweise, daß die Zellen einen sehr wirksamen Impfstoff darstellten, der subkutan injiziert werden kann. Die vorliegende Erfindung beruht auf dieser Entdeckung. In weiteren Untersuchungen bestätigten die Erfinder, daß der erfindungsgemäße Impfstoff extrem sicher bei der Anwendung bei Hühnern ist.
  • Mit anderen Worten, die Erfinder fanden einen Impfstoff gegen die infektiöse Laryngotracheitis bei Hühnern, der wirksam ist, keine Nebenwirkungen besitzt und nicht nach dem üblichen Verfahren der Einträufelung in das Auge bei Hühnern, die älter als 14 Tage sind, angewandt zu werden braucht, sondern durch Injektion unter die Haut oder in die Muskeln bei frisch geschlüpften Hühnern verabreicht werden kann. Dies ist ein leichtes Verfahren für die Züchter von Hühnern.
  • Erfindungsgemäß wird ein attenuierter Lebendimpfstoff gegen die infektiöse Laryngotracheitis bereitgestellt, der eine lebenslange Immunität durch eine einzige Injektion unter die Haut oder in die Muskeln von einen Tag alten Hühnern verleiht. Ferner wird ein attenuierter kombinierter Lebendimpfstoff gegen die infektiöse Laryngotracheitis und die Marek-Krankheit bereitgestellt, der mit attenuiertem, infektiöse Laryngotracheitis verursachendem Virus infizierte Zellen aus Zellkulturen und mit attenuiertem Marek-Virus oder Truthahn-Herpesvirus infizierte Zellen aus Zellkulturen umfaßt, und eine fortdauernde Immunität, wie vorstehend beschrieben, verleiht.
  • Für die vorliegende Erfindung können übliche Zellen für Zellkulturen, die zur Züchtung von Viren verwendet werden. als Zellkulturzellen zur Züchtung des die infektiöse Laryngotracheitis verursachenden Virus oder des die Marek-Krankheit verursachenden Virus verwendet werden. Beispielsweise können Nierenzellen, vom Huhn stammende Hühnerembryozellen oder von der Ente stammende Embryozellen als Kulturzellen verwendet werden.
  • Als Viren zu Züchtung gemäß vorliegender Erfindung können für den Impfstoff gegen die infektiöse Laryngotracheitis ein attenuiertes, die infektiöse Laryngotracheitis verursachendes Virus verwendet werden, z.B. der CE-Stamm des Virus für infektiöse Laryngotracheitis bei Hühnern, und für den Impfstoff gegen die Marek-Krankheit können ein attenuiertes, die Marek-Krankheit verursachendes Virus oder das Truthahn-Herpesvirus verwendet werden.
  • Nach Infizieren der Zellen der Zellkulturen mit einer geeigneten Menge des attenuierten Virus, wird die Züchtung des Virus unter üblichen Bedingungen durchgeführt, beispielsweise durch vier- bis fünftägiges Züchten bei 37ºC in einer Kulturflasche oder einem Kulturtank. In der Züchtungsperiode der maximalen Virusvermehrung werden die infizierten Kulturzellen trypsiniert und durch Zentrifugation geerntet. Die Zellkulturlösung wird beispielsweise mit Rinderserumalbumin versetzt, um eine Impfstoffsuspension mit den flotierenden Kulturzellen zu erhalten. Die Impfstoffsuspension wird in Glasgefäße überführt und konserviert, nachdem sie solchen für einen Impfstoff unverzichtbaren Tests wie dem Sterilitätstest unterworfen worden ist.
  • Der Impfstoff kann entweder gefroren oder gefriergetrocknet aufbewahrt werden. Ein gefrorener Impfstoff wird durch Einfrieren in flüssigem Stickstoff nach Suspendieren der Kulturzellen mit einem gefrorenen Kälteschutzmittel, wie Dimethylsulfoxid oder Glycerin, erhalten. Ein gefriergetrockneter Impfstoff wird durch Trocknen und Gefrieren nach Suspendieren der Kulturzellen mit einem geeigneten gefrorenen Kälteschutzmittel erhalten.
  • Der Virustiter des erfindungsgemäßen Impfstoffs gegen die infektiöse Laryngotracheitis beträgt etwa 10³ bis 10&sup5; TCID&sub5;&sub0;.
  • Die Impfstofflösung der kombinierten Impfstoffs gegen infektiöse Laryngotracheitis und die Marek-Krankheit kann durch Vermischen geeigneter Mengen der jeweiligen Arten der mit dem Virus infizierten Zellen aus Zellkulturen hergestellt werden. Diese Zellen aus Zellkulturen können durch Züchten der jeweiligen attenuierten Viren in Kulturzellen erhalten werden. Die Impfstofflösung kann auch durch gleichzeitiges Züchten der beiden Virusarten hergestellt werden.
  • In einem solchen kombinierten Lebendimpfstoff wird die Wirksamkeit der Immunisierung oft durch eine Wechselwirkung zwischen den beiden verschiedenen Viren oder Impfstoffkomponenten verringert. Es wurde jedoch bestätigt, daß der erfindungsgemäße kombinierte Impfstoff keine Wechselwirkung der beiden Viren zeigt und ganz nützlich ist.
  • Ein Hauptvorteil der vorliegenden Erfindung ist die Tatsache, daß sie die Impfung gegen infektiöse Laryngotracheitis bei frisch geschlüpften Hühnern unter die Haut oder in die Muskeln ermöglicht. Der vorhandene Impfstoff gegen die infektiöse Laryngotracheitis kann nämlich nur bei Hühnern über 14 Tagen angewandt werden. In der Tat ist er geeigneter für Hühner über 21 Tagen, weil er völlig wirksam nur bei Hühnern über diesem Alter ist.
  • Andererseits wird erfindungsgemäß ein neuer Impfstoff bereitgestellt, der eine Infektion durch das die infektiöse Laryngotracheitis verursachende Virus verhindern kann, wenn er bei frisch geschlüpften Hühnern angewandt wird. Dieser neue Impfstoff zeigt einen hohen Immunisierungseffekt und eine große Sicherheit und kann so zum großen Vorteil der Hühnerzüchter eingesetzt werden.
  • Im allgemeinen ist eine unzureichende Wirksamkeit wegen der von der Mutter übertragenen Antikörper ein Problem bei der Impfung frisch geschlüpfter Hühner. Jedoch zeigt der erfindungsgemäße Impfstoff eine adäquate Immunwirksamkeit, selbst in Anwesenheit mütterlicher Antikörper bei mit dem Impfstoff behandelten Hühnern. Es wird angenommen, daß die Kulturzellen, die das die infektiöse Laryngotracheitis verursachende Virus tragen, ungünstige Wirkungen durch die mütterlichen Antikörper verhindern.
  • Zusätzlich zu der stark erhöhten Wirksamkeit verringert der erfindungsgemäße Impfstoff die Arbeit des Hühnerzüchters, weil der erfindungsgemäße Impfstoff nicht nur bei Hühnern über 14 Tagen, sondern auch bei frisch geschlüpften Hühnern eingesetzt werden kann, die sich noch recht wenig bewegen. Da die vorhandenen Impfstoffe gegen die Marek-Krankheit Hühnern im Alter von null Tagen verabreicht werden, verursacht die Verabreichung der erfindungsgemäßen Impfung gegen Laryngotracheitis zu diesem Zeitpunkt nur wenig Extraarbeit für den Hühnerzüchter.
  • Wenn ferner die beiden Immunisierungen durch Verwendung des erfindungsgemäßen kombinierten Impfstoffes verabreicht werden, kommt es zu einer noch größeren Arbeitsersparnis
  • Die vorliegende Erfindung wird nun ausführlich in den nachstehenden, nicht beschränkenden Beispielen beschrieben.
    • Beispiel 1
  • Hühnerembryo-Kulturzellen von spezifischen, pathogenfreien, 9 bis 11 Tage alten Hühnern (SPF) wurden geerntet und in einer 0,25%igen Trypsinlösung trypsiniert, wodurch eine Suspension der Zellen aus Zellkulturen von 2 x 10&sup6; Zellen/ml erhalten wurde. Das die infektiöse Laryngotracheitis verursachende Virus vom Stamm CE wurde der Kulturzellensuspension in einem Verhältnis von 10³ TCID&sub5;&sub0;-Viruszellen pro 100 ml Kulturzellösung zugesetzt, wodurch mit dem Virus infizierte Kulturzellen erzeugt wurden. Die Lösung der infizierten Kulturzellen wurde in Aliquots von 100-150 ml geteilt, in Kulturflaschen gegeben und vier bis fünf Tage bei 37ºC bebrütet. Zu dieser Zeit hatten mehr als 80% der Kulturzellen ein Stadium mit einem cytopathogenen Effekt (CPE) erreicht; die Kulturzellen wurden dann trypsiniert und durch Zentrifugation (1500 UpM; 5 min) geerntet. Die geernteten Kulturzellen wurden vereinigt und in einem MEM-Medium, das fötales Rinderserumalbumin enthielt, suspendiert, um eine Impfstofflösung mit einer Konzentration von 10&sup7; Zellen/ml zu ergeben. Die erhaltene Impfstoffsuspension wurde durch Sterilitätstests und dergleichen als sicher bestätigt. Die Impfstofflösung wurde mit Dimethylsulfoxid in einer Endkonzentration von 10 Vol./Vol.%, Kalium-Benzylpenicillin in einer Endkonzentration von 100 Einheiten/ml und Streptomycinsulfat in einer Endkonzentration von 100 ug/ml versetzt und dann in Ampullen gefüllt. Die Impfstoffe in den Ampullen wurden in gefrorenem Zustand bei -100ºC in flüssigem Stickstoff aufbewahrt. 990 ml steriles Wasser wurden zu 4,0 g Caseinhydrat, 7,965 g Natriumchlorid, 0,18 g Dinatriumhydrogenphosphat, 1,53 g Natriumdihydrogenphosphat und 0,025 g Phenolrot gegeben, dann unter Erhalt einer Verdünnung (Verdünnungslösung) für den Impfstoff sterilisiert. Der Impfstoff in jeder Ampulle wurde mit diesem Verdünner vor Injektion in die Hühner verdünnt.
  • Der Impfstoff wurde an gesunde, null Tage alte Hühner und an 21 Tage alte Hühner verabreicht, um die Nebenwirkungen des Impfstoffes zu überprüfen. Die Verabreichung des Impfstoffs erfolgte durch subkutane Injektion in den Nacken und Injektion in die Muskeln. Die Ergebnisse sind in den Tabellen 1 und 2 gezeigt. Tabelle 1 Klinische Beobachtungen Gruppe Hühner Impfstoffinjektion Durchschnittsgewicht Alter Anzahl Weg Menge *1 Aussehen subkutan intramuskulär Kontrolle (keine Impfung) normal *1 Menge in ml (TCID&sub5;&sub0;) *2 Wochen nach der Injektion Tabelle 2 Klinische Beobachtungen Gruppe Hühner Impfstoffinjektion Durchschnittsgewicht Alter Anzahl Weg Menge *1 Aussehen subkutan intramuskulär Kontrolle (keine Impfung) normal *1 Menge in ml (TCID&sub5;&sub0;) *2 Wochen nach der Injektion
  • Wie aus den obigen Ergebnissen hervorgeht, wurden weder bei den null Tage alten Hühnern noch bei den 21 Tage alten Hühnern irgendwelche Nebenwirkungen festgestellt. Diese Ergebnisse zeigen positiv die Sicherheit des Impfstoffes.
  • Als nächstes wurde ein Expositionstest mit dem Virus an den Hühnern durchgeführt, die den Impfstoff im Alter von null Tagen erhalten hatten, um die Wirksamkeit des Impfstoffs zu bestätigen. Der erfindungsgemäße Impfstoff wurde subkutan oder intramuskulär verabreicht. Zur Kontrolle wurde ein üblicher Impfstoff gegen die infektiöse Laryngotracheitis in die Augen oder unter die Haut der Hühner eingebracht. Diese Hühner wurden einer intratrachealen Exposition mit dem virulenten, die infektiöse Laryngotracheitis verursachenden Virus des Stammes NS-175 zwei bis zehn Wochen nach der Impfung ausgesetzt. Als weitere Kontrolle wurde die gleiche Virusexposition mit einer Kontrollgruppe von Hühnern vorgenommen, die nicht geimpft worden waren.
  • Alle Gruppen von Hühnern wurden auf das Auftreten von klinischen Symptomen zehn Wochen lang beobachtet. Die Ergebnisse sind in Tabelle 3 gezeigt. Tabelle 3 Impfstoffinjektion Auftreten von Symptomen(%)*2 Gruppe Weg Menge*1 erf. Impfstoff herk. Impfstoff Kontrolle (keine Impfung) subkutan intramuskulär intraokulär *1 Menge an TCID&sub5;&sub0; *2 Auftreten von Symptomen nach Virusexposition Die Ziffern in den Klammern zeigen die Todesfälle oder das Auftreten schwerer Symptome.
  • Auftreten = Anzahl der Hühner mit Symptomen / Anzahl der getesteten Hühner x 100 (%)
  • Wie aus den obigen Ergebnissen hervorgeht, waren die mit dem erfindungsgemäßen Impfstoff behandelten Hühnern ausreichend immun, um gegen die Virusinfektion geschützt zu sein. Im Gegensatz dazu zeigte jedes Huhn, das den Impfstoff nicht erhalten hatte, die charakteristischen Symptome der infektiösen Laryngotracheitis. Eine große Anzahl von Hühnern, denen der herkömmliche Impfstoff in die Augen oder unter die Haut eingebracht worden war, zeigte auch die gleichen Symptome. Aus den vorstehenden Ergebnissen geht also klar hervor, daß die Hühner, denen der erfindungsgemäße Impfstoff verabreicht worden war, im Vergleich zu mit dem herkömmlichen Impfstoff geimpften Hühnern, die nur geringe Symptome entwickelten. Wenn ferner bei den mit dem erfindungsgemäßen Impfstoff geimpften Hühnern Symptome auftraten, waren sie relativ leicht. Sehr wenige Hühner litten an den Symptomen. Aus diesen Ergebnissen wurde bestätigt, daß der erfindungsgemäße Impfstoff sehr wirksam eine Infektion durch das Virus für die infektiöse Laryngotracheitis verhindert.
    • Beispiel 2
  • Wie in Beispiel 1 beschrieben, wurden Kulturzellen von Hühnerembryonen mit dem die infektiöse Laryngotracheitis verursachenden Virus, Stamm CE, versetzt. Diese wurden dann unter Herstellung von mit dem Virus für die infektiöse Laryngotracheitis infizierten Zellen gezüchtet. Dann wurden andere Kulturzellen von Hühnerembryonen mit dem Truthahn-Herpesvirus, Stamm YT-7, infiziert und unter Herstellung von mit dem Virus infizierten Kulturzellen gezüchtet. Diese zwei Arten von Kulturzellen wurden dann vermischt und in einem Eagle MEM-Medium, das fötales Rinderserumalbumin enthielt, suspendiert. Die suspendierten Kulturzellen wurden dann mit Dimethylsulfoxid etc. versetzt, wodurch ein kombinierter Impfstoff, wie in Beispiel 1 beschrieben, erhalten wurde. Der kombinierte Impfstoff wurde in Ampullen abgefüllt und dann in flüssigem Stickstoff konserviert.
  • Der so erhaltene kombinierte Impfstoff wurde null Tage alten Hühnern und auch 21 Tage alten Hühnern verabreicht, um die Sicherheit des Impfstoffs zu testen. Der Impfstoff wurde durch subkutane Injektion in den Nacken und durch intramuskuläre Injektion verabreicht. Die Ergebnisse sind in den Tabellen 4 und 5 gezeigt. Tabelle 4 Klinische Beobachtungen Gruppe Hühner Impfstoffinjektion Durchschnittsgewicht Alter An-Zahl Weg Menge *1 (Gehalt) Aussehen subkutan intramuskulär Kontrolle (keine Impfung) normal *1 Menge in ml (L:TCID&sub5;&sub0;, M:PFU) L: Menge des attenuierten, die infektiöse Laryngotracheitis verursachenden Virus, Stamm CE M: Menge des attenuierten Truthahn-Herpesvirus, Stamm YT-7 *2 Wochen nach der Injektion Tabelle 5 Klinische Beobachtungen Gruppe Hühner Impfstoffinjektion Durchschnittsgewicht Alter An-Zahl Weg Menge *1 (Gehalt) Aussehen subkutan intramuskulär Kontrolle (keine Impfung) normal *1 Menge in ml (L:TCID&sub5;&sub0;, M:PFU)L: Menge des attenuierten, die infektiöse Laryngotracheitis verursachenden Virus, Stamm CE M: Menge des attenuierten Truthahn-Herpesvirus, Stamm YT-7 *2 Wochen nach der Injektion
  • Wie aus den obigen Ergebnissen hervorgeht, wurden keine Nebenwirkungen, weder bei den null Tage alten Hühnern, noch bei den 21 Tage alten Hühnern festgestellt. Die Ergebnisse zeigen positiv die Sicherheit des Impfstoffs.
  • Als nächstes wurde der kombinierte Impfstoff null Tage alten Hühnern durch subkutane Injektion in den Nacken oder durch Injektion in die Muskeln verabreicht. Um die Wirksamkeit des Impfstoffs zu bestätigen, wurden diese Hühner zwei bis zehn Wochen nach der Impfung einer intratrachealen Exposition mit dem virulenten, die infektiöse Laryngotracheitis verursachenden Virus, Stamm NS-175, unterworfen. Als Kontrolle wurden Hühner, die einen herkömmlichen Impfstoff gegen die infektiöse Laryngotracheitis erhalten hatten, und überhaupt nicht geimpfte Hühner ebenfalls exponiert. Alle Hühnergruppen wurden 10 Wochen lang auf klinische Symptome beobachtet. Die Ergebnisse sind in Tabelle 6 gezeigt. Ferner wurden die Hühner, die mit dem erfindungsgemäßen kombinierten Impfstoff behandelt worden waren, intraperitoneal dem virulenten, die Marek-Krankheit verursachenden Virus, Stamm Alabama, zwei Wochen nach der Impfung exponiert. Als Kontrolle wurden Hühner, die den herkömmlichen Impfstoff gegen die Marek-Krankheit im Alter von null Tagen erhalten hatten, und ungeimpfte Hühnern exponiert. Alle Hühnergruppen wurden zehn Wochen lang auf klinische Symptome beobachtet. Die Ergebnisse sind in Tabelle 7 gezeigt. Tabelle 6 Impfstoffinjektion Auftreten von Symptomen(%)*3 Gruppe 10W. Weg L:(TCID&sub5;&sub0;) subkutan intramuskulär intraokulär Kontrolle (keine Impfung) *1 L: Menge des attenuierten, die infektiöse Laryngotracheitis verursachenden Virus, Stamm CE M: Menge des attenuierten Truthahn-Herpesvirus, Stamm YT-7 *2 Wochen nach der Injektion *3 Auftreten von Symptomen nach Virusexposition
  • Auftreten = Anzahl der Hühner mit Symptomen / Anzahl der getesteten Hühner x 100 (%) Tabelle 7 Impfstoffinjektion Auftreten von Symptomen(%)*2 Gruppe Weg L:(TCID&sub5;&sub0;) subkutan intramuskulär Kontrolle (keine Impfung) *1 L: Menge des attenuierten, die infektiöse Laryngotracheitis verursachenden Virus, Stamm CE M: Menge des attenuierten Truthahn-Herpesvirus, Stamm YT-7 *2 Auftreten von Symptomen nach Virusexposition
  • Auftreten = Anzahl der Hühner mit Symptomen / Anzahl der getesteten Hühner x 100 (%)
  • Wie aus den obigen Ergebnissen hervorgeht, waren die Hühner, die mit dem erfindungsgemäßen kombinierten Impfstoff behandelt worden waren, ausreichend immun, um vor einer Infektion durch das die infektiöse Laryngotracheitis und/oder die Marek-Krankheit verursachende Virus geschützt zu sein. Es wurde kein Wirkungsverlust in der Immunisierung gegen die zwei Virusinfektionen als Ergebnis der Kombination der beiden Arten der unterschiedlichen Kulturzellen, die die wirksamen Komponenten des kombinierten Impfstoffs sind, beobachtet.

Claims (4)

1. Lebendimpfstoff gegen infektiöse Laryngotracheitis verursachendes Virus, der Zellen aus Zellkulturen als einen wirksamen Bestandteil umfaßt, die mit attenuiertem, infektiöse Laryngotracheitis verursachendem Virus infiziert sind.
2. Kombinierter Lebendimpfstoff gegen infektiöse Laryngotracheitis und Marek-Krankheit, der ein Gemisch aus mit attenuiertem, infektiöse Laryngotracheitis verursachendem Virus infizierten Zellen aus Zellkulturen und mit attenuiertem Marek-Virus oder Truthahn-Herpesvirus infizierten Zellen aus Zellkulturen umfaßt.
3. Lebendimpfstoff nach Anspruch 1 oder 2, wobei die Zellen der Zellkulturen Hühnerembryozellen, vom Huhn stammende Nierenzellen oder von der Ente stammende Embryozellen sind.
4. Lebendimpfstoff nach einem der Ansprüche 1 bis 3 zur Verwendung bei der Impfung durch subkutane oder intramuskuläre Injektion.
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