DE3878982T2

DE3878982T2 - Abgeschwaechtes virus und impfstoffe davon zur verwendung gegen infektionen bei gefluegel, verursacht durch truthahn-rhinotracheitis-virus.

Info

Publication number: DE3878982T2
Application number: DE8888304359T
Authority: DE
Inventors: Matthew Mckinley Binns; Philip Box; Jane Kathleen Alexandra Cook; Christine Ann Dolby; Judith A Frazier; Albert Philip Adrian Mockett
Original assignee: KNOW HOW LICENSORS Ltd
Current assignee: KNOW HOW LICENSORS Ltd
Priority date: 1987-05-21
Filing date: 1988-05-13
Publication date: 1993-07-22
Anticipated expiration: 2008-05-14
Also published as: US5069902A; HUT50049A; IL86397A; HU203674B; DE3878982D1; ES2053732T3; EP0292210A2; EP0292210B1; EP0292210A3; IL86397A0; CA1337266C

Description

Diese Erfindung bezieht sich auf einen abgeschwächten Virus und einen Impfstoff aus diesem zur Bekämpfung von Erkrankungen bei Geflügel, die durch das Virus der Truthahnrhinotracheitis oder serologisch verwandte Strämme hervorgerufen werden.
Die kommerzielle Zucht von Geflügel, wie z.B. von Truthahn und Hühnern, ist bekannt und wird im großen Rahmen durchgeführt. Truthahn wird nicht mehr nur zu Weihnachten und nicht mehr nur in Form des gebratenen ganzen Vogels gegessen. Moderne Truthahnzuchtmethoden, moderne Geräte und umfangreiche Werbekampagnen haben bewirkt, daß Truthahn während des ganzen Jahres als gebratener ganzer Vogel, gebratene Teile des Vogels und als Truthahnfleisch in Form von Truthahnrollbraten und Truthahnburgern gegessen wird.
Mit dem Aufkommen der kommerziellen Truthahnzucht ist eine Erkrankung der Atmungsorgane bei Truthähnen aufgetreten, die mit Truthahnrhinotracheitis bezeichnet wurde. Die Truthahnrhiflotracheitis trat in Großbritannien erstmals im Juni 1985 auf, eine klinisch ähnliche Krankheit war im Ausland jedoch bereits seit einigen Jahren bekannt. Die Truthahnrhinotracheitis ist eine akute und höchst ansteckende Erkrankung der Atmungsorgane, von der Truthähne jeden Alters betroffen werden können. Es ist offensichtlich, daß Morbidität und Sterblichkeitsziffer, die 100 bzw. 50 Prozent erreichen können, eine sehr nachteilige Wirkung auf die Truthahnzuchtindustrie haben.
Die Behandlung der Truthahnrhinotracheitis ist äußerst schwierig. Das urprünglich die Infektion verursachende Virus entfernt die Ziliarkörper der Trachea der Truthähne schnell. An die erste Infektion mit dem Virus der Truthahnrhinotracheitis schließt sich häufig eine Infektion mit einer Vielzahl von Bakterien an, die normalerweise für sich allein keine Sterblichkeit verursachen. Übliche Behandlungsverfahren stellen sich oft als unwirksam heraus. Dies führt bei Truthähnen, die die Infektion mit dem ursprünglich die Infektion verursachenden Virus überleben, zu einer chronischen Infektion. Diese Truthähne sind unwirtschaftlich und zeigen schlechtes Wachstum. Die Wirkung der normalen medikamentösen Behandlung ist, wenn sich die Bakterien im Atemsystem festgesetzt haben, nur gering und darüber hinaus gibt es keine medikamentöse Behandlung für das ursprünglich die Infektion verursachende Virus.
Neben dem Befall von Truthähnen befallen das die Truthahnrhinotracheitis verursachende Virus oder serologisch verwandte Stämme offensichtlich auch andere Geflügelarten, wie z.B. Hühner, Perlhühner, Fasane und Enten. Hühner können ungeachtet der Tatsache befallen werden, ob sie kommerziell als Brathühnchen zum Verzehr oder als Legehühner zum Eierlegen gezüchtet werden. Die Krankheitssymptome bei diesen anderen Geflügelarten können, wenn sie vom Virus der Truthahnrhinotracheitis oder serologisch verwandten Stämmen befallen werden, die gleichen sein oder sich von den bei Truthähnen auftretenden Krankheitssymptomen unterscheiden. Bei angesteckten Hühnern wird oft das "Schwellkopfsyndrom" festgestellt und solche Hühner können eine Schwellung der peri- und infraorbitalen Höhlen zusammen mit Opisthotonos und Tortikollis aufweisen. Auch können die Hühner das Vermögen zu koordinierter Bewegung verlieren.
Ein Ziel der vorliegenden Erfindung ist die Verminderung der oben genannten, durch das Virus der Truthahnrhinotracheitis und serologisch verwandte Stämme verursachten Probleme.
Gegenstand dieser Erfindung ist demzufolge ein abgeschwächter Stamm des die ansteckende Truthahnrhinotracheitis verursachenden Virus, wobei dieser abgeschwächte Stamm durch abwechselnde Übertragung des die ansteckende Truthahnrhinotracheitis verursachenden Virus auf embryonale Ei- und Trachealorgankulturen erhalten wird.
Die abwechselnde Übertragung auf embryonale Ei- und Trachealorgankulturen kann zwischen 20 und 40 mal erfolgen und wird zur Zeit vorzugsweise 30 mal vorgenommen.
Bei der abwechselnden Übertragung auf embryonale Ei- und Trachealorgankulturen werden vorzugsweise Vogeleier und Trachealorgankulturen von Vögeln verwendet, wobei zur Zeit embryonalen Eiern und Trachealorgankulturen von Hühnern besonderer Vorzug gegeben wird. Die Übertragung kann in anderen Zell- oder Organkultursystemen vorgenommen werden.
Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist ebenfalls ein abgeschwächter Stamm des die ansteckende Truthahnrhinotracheitis verursachenden Virus, wobei der abgeschwächte Stamm innerhalb der hier angegebenen Sammlung von Kulturen unter der Registrierungsnr. V8705l102 eingetragen ist.
Bei der Sammlung von Kulturen handelt es sich um die Europäische Sammlung tierischer Zellkulturen (European Collection of Animal Cell Cultures) des PHLS Centre For Applied Microbiology & Research, Porton Down, Salisbury, Wiltshire, England. Der unter der Registrierungsnr. V87051102 eingetragene abgeschwächte Stamm des die ansteckende Truthahnrhinotracheitis verursachenden Virus wurde durch die oben genannte abwechselnde Übertragung auf embryonale Ei- und Trachealorgankulturen gewonnen.
Wie nachfolgend detaillierter erklärt wird, kann der abgeschwächte Stamm des die ansteckende Truthahnrhinotracheitis verursachenden Virus zur Herstellung eines Impfstoffes für die Behandlung von Geflügel verwendet werden, um die primäre Virusinfektion durch das die Truthahnrhinotracheitis verursachende Virus oder serologisch verwandte Stämme einzudämmen. Die sekundären bakteriellen Infektionen, welche die größte Sterblichkeit verursachen und die gesamte schlechte Leistung im Anschluß an die Infektion sind normale Krankheitserreger bei Geflügel und führen bei Nichtvorhandensein des die Truthahnrhinotracheitis verursachenden Virus oder von serologisch verwandten Stämmen nicht zu Problemen, die mit verfügbarer Medikamententherapie nicht leicht behandelt werden könnten. Durch Eindämmung der primären Virusinfektion lassen sich die oben genannte Morbidität und Sterblichkeitsziffern beträchtlich herabsetzen, worauf anschließend z.B. verbessertes Wachstum der Truthähne sowie Hühnerzucht und Eierlegen einsetzt, die allesamt dringend erforderlich sind.
Der innerhalb der hier angegebenen Sammlung von Kulturen unter der Registrierungsnr. V87051102 eingetragene abgeschwächte Stamm des die ansteckende Truthahnrhinotracheitis verursachenden Virus ist ein neuer abgeschwächter Stamm, der sich von anderen Stämmen des Virus unterscheidet, die durch Forscher auf diesem Gebiet entdeckt und z.B. von McDougall und Cook in Veterinary Record (1986), Ausgabe 118, auf Seite 206-207 beschrieben wurden. Der neue abgeschwächte Stamm ist in der Lage, eine spezifische Immunität zum Schutz gegen den Befall durch das Truthahnrhinotracheitis verursachende Virus einzuleiten, ohne die Symptome der Krankheit hervorzurufen. Ähnlich ist der neue abgeschwächte Stamm möglicherweise in der Lage, spezifische Immunantikörper zum Schutz gegen Befall durch Viren zu erzeugen, die serologisch mit dem die Truthahnrhinotracheitis verursachenden Virus verwandt sind. Der neue abgeschwächte Stamm ist insofern stabil, als festgestellt wurde, daß er bei mindestens zwölf Übertragungen zwischen Vögeln nicht in Virulenz zurückschlägt.
Der abgeschwächte Stamm des die ansteckende Truthahnrhinotracheitis verursachenden Virus kann ein Stamm sein, der von einem Hauptstamm des die ansteckende Truthahnrhinotracheitis verursachenden Virus erhalten wird, wobei der Hauptstamm die folgenden Eigenschaften aufweist:
(a) er ist pleomorph;
(b) viele Partikel sind sphärisch und haben einen Durchmesser von 80 - 120 nm; auch werden längliche und bizarre Formen festgestellt;
(c) die Partikel haben auf der Oberfläche dicht nebeneinanderliegende Vorsprünge einer Länge von ca. 12-14 nm, die zum distalen Ende hin breiter werden;
(d) er agglutiniert Erythrozyten von Hühnern, Truthahn, Gans, Maus, Meerschweinchen oder Kaninchen nicht bei 4ºC, bei Raumtemperatur oder bei 37ºC;
(e) er ist für eine Chloroformbehandlung empfindlich;
(f) er wird bei Erwärmung auf 56ºC innerhalb von 20 Minuten inaktiviert;
(g) er ist über einen breiten pH-Bereich stabil, wird bei pH 2,1 aber innerhalb von 30 Minuten inaktiviert;
(h) er ist ein Ribonuklearsäurevirus (RNA) mit einer Schwimmdichte in Saccharose von ca. 1,18-1, 19g/ml;
und
er enthält mindestens 7 virusspezifische Polypeptide mit einem ungefähren Molekulargewicht von 97*, 82*, 53*, 43, 40, 35 und 15* K Dalton - wobei die mit "*" markierten glykosiliert sind.
Der abgeschwächte Stamm kann die folgenden Eigenschaften haben:
(a) er wird durch gegen den Hauptstamm erzeugtes Antiserum neutralisiert;
(b) in Truthähnen gegen den abgeschwächten Stamm erzeugtes Antiserum neutralisiert den Hauptstamm;
und
(c) er hat ein ähnliches Proteinprofil wie der Hauptstamm.
Der Hauptstamm ist ein bekannter Stamm, auf den von McDougall und Cook im oben genannten Artikel in Veterinary Record Bezug genommen wird. Die Analyse der durch das die Truthahnrhinotracheitis verursachende Virus erzeugten Virus-mRNAs und Polypeptide läßt zusammen mit seinen anderen Eigenschaften (a) bis (i) oben darauf schließen, daß das Virus zur Familie der Paramyxoviriden gehört und mit dem RS-Virus, einem Angehörigen der Art der Pneumoviren, einige Merkmale gemeinsam hat.
Der abgeschwächte Stamm des die ansteckende Truthahnrhinotracheitis verursachenden Virus kann ein Stamm sein, der ein Elektronenmikroskopbild aufweist, wie in Abbildung 2 der beigefügten, nachfolgend beschriebenen Zeichnungen dargestellt ist.
Die vorliegende Erfindung bietet ferner einen Impfstoff aus Lebendvirenkulturen zum Schutz gegen durch das die Truthahnrhinotracheitis verursachende Virus oder serologisch verwandte Stämme hervorgerufene Erkrankrungen bei Geflügel, wobei dieser Impfstoff einen abgeschwächten Stamm des oben beschriebenen, die ansteckende Truthahnrhinotracheitis verursachenden Virus, enthält.
Der Impfstoff aus Lebendvirenkulturen kann zum Schutz gegen Truthahnrhinotracheitis bei Truthähnen verwendet werden. Der Impfstoff aus Lebendvirenkulturen kann auch zum Schutz gegen das Schwellkopfsyndrom bei Hühnern verwendet werden. Der Impfstoff aus Lebendvirenkulturen kann auch zum Schutz gegen Erkrankungen verwendet werden, die durch das die Truthahnrhinotracheitis verursachende Virus oder serologisch verwandte Stämme bei anderen Geflügelarten als Truthahn und Hühnern hervorgerufen werden.
Der Impfstoff aus Lebendvirenkulturen kann ein Impfstoff sein, bei dem der Impfstoff Flüssigkeit der Trachealorgankulturen oder Flüssigkeit der Allantoishöhle als flüssigen Träger für den abgeschwächten Stamm des die ansteckende Truthahnrhinotracheitis verursachenden Virus enthält.
Gegenstand dieser Erfindung ist ferner ein Verfahren zur Herstellung eines abgeschwächten Stammes des die ansteckende Truthahnrhinotracheitis verursachenden Virus, wobei dieses Verfahren die Abschwächung eines Hauptstammes des die ansteckende Truthahnrhinotracheitis verursachenden Virus durch abwechselnde Übertragung auf embryonale Ei- und Trachealorgankulturen einschließt.
Beim erfindungsgemäßen Verfahren kann die abwechselnde Übertragung auf embryonale Ei- und Trachealorgankulturen 20 bis 40 mal, vorzugsweise 30 mal erfolgen. Bei der abwechselnden Übertragung auf embryonale Ei- und Trachealorgankulturen werden vorzugsweise embryonale Eier von Hühnern und Trachealorgankulturen von Hühnern verwendet.
Das erfindungsgemäße Verfahren kann den Schritt des Gefriertrocknens des erzeugten abgeschwächten Stammes des die ansteckende Truthahnrhinotracheitis verursachenden Virus enthalten.
Gegenstand der Erfindung ist ferner ein Verfahren zur Herstellung eines Impfstoffes aus Lebendvirenkulturen, wobei dieses Verfahren die Erzeugung eines abgeschwächten Stammes des die ansteckende Truthahnrhinotracheitis verursachenden Virus durch das besagte erfindungsgemäße Verfahren enthält.
Das Verfahren zur Herstellung eines Impfstoffes aus Lebendvirenkulturen kann den Schritt der Rückbildung einer gefrorenen getrockneten Form des erzeugten abgeschwächten Stammes des die ansteckende Truthahnrhinotracheitis verursachenden Virus enthalten.
Das Verfahren zur Herstellung des Impfstoffes aus Lebendvirenkulturen kann auch den Schritt der Erzeugung des abgeschwächten Stammes des die ansteckende Truthahnrhinotracheitis verursachenden Virus durch wiederholte Überimpfung und Ernte enthalten. Die Erzeugung kann in Flüssigkeit der Trachealorgankulturen oder Flüssigkeit der Allantoishöhle erfolgen.
Bei der Herstellung des Impfstoffes kann der abgeschwächte Stamm des die ansteckende Truthahnrhinotracheitis verursachenden Virus auf jede gewünschte Weise, wie z.B. Gelfiltration, Fällung, Gradientenzentrifugieren sowie Adsorption und anschließende Elution, gereinigt werden. Der Impfstoff kann z.B. durch Verwendung von Zonenzentrifugieren, Molekularfiltration oder Adsorption und anschließende Elution konzentriert werden. Der Impfstoff kann durch Hinzufügen von Stabilisatoren stabilisiert und durch Hinzufügung von geeigneten Konservierungsmitteln wie z.B. Rinderserum, Albumin oder Gelatin lagerungsfähig gemacht werden.
Der hergestellte Impfstoff kann Prüfungen auf Sterilität, Unschädlichkeit und immunisierende Wirkung unterzogen werden.
Zum besseren Verständnis der vorliegenden Erfindung werden nachfolgend einige spezifische Beispiele gegeben. Die Beispiele dienen nur zur Illustration.

BEISPIEL 1

ABSCHWÄCHUNG DES DIE ANSTECKENDE TRUTHAHNRHINOTRACHEITIS VERURSACHENDEN VIRUS (TRT) DURCH ABWECHSELNDE ÜBERTRAGUNG AUF EMBRYONALE EI- UND TRACHEALORGANKULTUREN VON KÜKEN

Das in einer Organkultur vermehrte Virus wurde durch die Allantoishöhle 9 Tage alten Hühnerembryos eingeimpft.
Die Allantoisflüssigkeit wurde 4 Tage später abgenommen und Trachealorgankulturen eingeimpft. Die Flüssigkeit der Organkulturen wurde 3 Tage später abgenommen und 9 Tage alten Embryos durch die Allantoishöhle eingeimpft.
Nach der abwechselnden 25maligen Übertragung auf Embryos und Organkulturen wurde ein in vivo Versuch zum Nachweis der Abschwächung durchgeführt. Zwei Gruppen von 3 x 4 Wochen alten Truthähnen wurde intranasal entweder der Hauptstamm oder der abgeleitete Stamm eingeimpft. Zwanzig Tage später wurde beiden Gruppen Blut abgenommen und intranasal dem Hauptstamm ausgesetzt. Die Ergebnisse sind in Tabelle 1 unten enthalten. TABELLE 1 Nasenausfluß (Tage nach der Exposition) TRT neutralisierender Antikörpertiter 21 Tage später (reziprok) Klinische Erkrankung der Atemwege nach Hauptstammexposition Inokulum *Anzahl der Truthähne mit Nasenausfluß/Anzahl in der Gruppe Hauptstamm Abgeleiteter Stamm Durchschnitt keine

BEISPIEL 2

CHARAKTERISIERUNG DES AUS McDOUGALL UND COOK, THE VETERINARY RECORD (1986), AUSGABE 118, SEITEN 206-207, BEKANNTEN HAUPTSTAMMES DES DIE ANSTECKENDE TRUTHAHNRHINOTRACHEITIS VERURSACHENDEN VIRUS

Es wurde festgestellt, daß das Virus pleomorph ist. Viele Partikel sind sphärisch und haben einen Durchmesser von 80-120nm. Es sind jedoch viele größere Partikel sichtbar, und es werden auch längliche und bizarre Formen festgestellt. Die Viruspartikel haben auf der Oberfläche dicht nebeneinanderliegende Vorsprünge einer Länge von ca. 12nm, die zum distalen Ende hin breiter werden. Dies zeigt sich auf den vier in Abbildung 1 unter (a), (b), (c) und (d) dargestellten Elektronenmikroskopbildern.
Das Virus agglutiniert Erythrozyten von Hühnern, Truthahn, Gans, Maus, Meerschweinchen oder Kaninchen nicht bei 4ºC, bei Raumtemperatur oder bei 37ºC.
Das Virus war für eine Chloroformbehandlung empfindlich. Dieses Virus wurde bei Erwärmung auf 56ºC innerhalb von 20 Minuten inaktiviert. Das Virus war über einen breiten pH-Bereich stabil, wurde bei pH 2,1 aber innerhalb von 30 Minuten inaktiviert.
Das Virus ist ein Ribonuklearsäurevirus (RNA) bei einer Schwimmdichte in Saccharose von ca. 1,18-1,19g/ml. Das Virus enthält mindestens 7 virusspezifische Polypeptide mit einem ungefähren Molekulargewicht von 97*, 82*, 53*, 43, 40, 35 und 15* K Dalton - wobei die mit * markierten glykosiliert sind.

BEISPIEL 3

BEZIEHUNG ZWISCHEN DEM ABGESCHWÄCHTEN STAMM UND DEM HAUPTSTAMM

Der abgeschwächte Stamm wurde durch gegen den Hauptstamm erzeugtes Antiserum neutralisiert.
Das bei Truthähnen gegen den abgeschwächten Stamm erzeugte Antiserum hat das Hauptvirus neutralisiert.
Es wurde festgestellt, daß Hauptviren und abgeleitete Viren ähnliche Proteinprofile haben.
Abbildung 2 zeigt ein Elektronenmikroskopbild des abgeschwächten Stammes.

BEISPIEL 4

VIRUSVERSUCH

Stamm 3B des Truthahnrhinotracheitis verursachenden Virus wurde erhalten und in Eagle's Minimal Essential Medium (MEM) ohne Serum und mit Natriumbikarbonat (880mg/l) analysiert. Das Medium hatte einen pH-Wert von 6,8 und der Versuch wurde bei einer Temperatur von 37ºC ausgeführt. Es wurden versiegelte Röhrchen verwendet. Bei dem Versuch wurde in embryonaler Trachealorgankultur von Hühnern Ziliostase nachgewiesen.

BEISPIEL 5

NACHWEIS DER ABSCHWÄCHUNG DES IN EI-/ORGANKULTUREN ÜBERTRAGENEN STAMMES DES TRT-VIRUS

Mittels Augentropfen wurden der abgeschwächte Stamm des TRT-Virus und zwei virulente Stämme Gruppen von 15 sieben Tage alten TRT-freien Truthahnküken verabreicht, die täglich auf klinische Anzeichen einer Infektion beobachtet wurden und, wie in Tabelle 2 unten dargestellt, nach der Schwere klassifiziert wurden. Vier Tage nach der Inokulation wurde der Versuch zur Reisolierung des Virus aus Nasenabstrichen unternommen und 5 Küken jeder Gruppe wurden fünf Tage nach der Inokulation getötet, um ihre Trachea auf Ziliartätigkeit zu untersuchen. Dies beinhaltete die sorgfältige Präparation von 10 dünnen Scheiben von jeder Trachea und deren kodierte mikroskopische Untersuchung auf Ziliartätigkeit. Die Tätigkeit wurde auf einer Skala von 0 (100% Ziliartätigkeit) bis 4 (völliges Einstellen der Tätigkeit) klassifiziert. Einundzwanzig Tage nach der Inokulation wurde allen Küken Blut abgenommen und ihre Seren wurden mit einem Enzyme Linked Immuno Sorbant Assay (ELISA) auf TRT-Antikörper untersucht. Bei diesen Küken wurde zusammen mit einer vorher inokulierten Gruppe eine Exposition mit Augentropfen mit einem virulenten Virusstamm vorgenommen und die Küken wurden täglich auf klinische Anzeichen einer Infektion beobachtet. Der Versuch der Reisolierung des Virus wurde vier und sechs Tage nach der Exposition vorgenommen und allen Küken wurde vierzehn Tage nach der Exposition Blut abgenommen und die Küken wurden getötet.

ERGEBNISSE

Der abgeschwächte Stamm verursachte eine viel leichtere klinische Erkrankung als jeder der virulenten Stämme, siehe Tabelle 3, und der Grad der Von ihm verursachten trachealen Schädigung war viel leichter als die durch jeden der virulenten Stämme verursachten Schäden, siehe Tabelle 4. Das TRT-Virus wurde aus Nasenabstrichen wiedergewonnen, die vier Tage nach der Inokulation bei Küken in allen inokulierten Gruppen vorgenommen wurden. Küken, denen der abgeschwächte Stamm verabreicht wurde, zeigten eine geringere, mit ELISA gemessene, serologische Reaktion als jene, die das virulente Virus erhalten hatten, siehe Tabelle 5, waren aber nichtsdestoweniger gegen die Exposition mit dem virulenten Virus resistent, siehe Tabelle 3. Im Anschluß an die Exposition konnte das Virus aus Nasenabstrichen wiedergewonnen werden, die bei der "Expositionskontrollgruppe", nicht aber der "geimpften" Gruppe vorgenommen wurden.
Die Ergebnisse in diesem Beispiel bieten ferner den Nachweis, das der Stamm zwar abgeschwächt, aber immer noch in der Lage ist, Küken gegen die Exposition mit dem virulenten Virus zu schützen.
Der durch abwechselnde Übertragung auf Ei-/Organkulturen abgeschwächte Stamm wurde als der Stamm ausgewählt, der am besten zur Verwendung als möglicher Impfstoffstamm geeignet ist. TABELLE 2 SYSTEM ZUR KLASSIFIERUNG DER LÄSION Exsudat und/oder leichtes Einkerben beim Pressen der Nasenflügel Nasenausfluß Wässerige Augen Geschwollener Sinus und/oder schaumiges Auge Schweres Atmen oder tief sitzendes Gurgeln Küken sieht krank aus TABELLE 3 Klinische Erkrankung bei sieben Tage alten TRT-freien Truthahnküken, die mit dem abgeschwächten oder virulenten TRT-Virus inokuliert wurden und denen einundzwanzig Tage später das virulente Virus verabreicht wurde Durchschnittliche Klassifizierung der Läsion/des Vogels im Anschluß an die Inokulation mit: Tage nach Inokulation abgeschwächter Stamm Ei-/Organkultur virulenter Stamm nicht inokuliert gesamt Exposition getötet TABELLE 4 Ziliartätigkeit in Tracheae von fünf Tage nach der Inokulation nit abgeschwächten oder virulenten Stämmen des TRT-Virus getöteten Küken Gesamtziliartätigkeit in 10 Organkulturen von 5 Tracheae fünf Tage nach der Inokulation mit: Küken Nummer abgeschwächter Stamm Ei-/Organkultur virulenter Stamm nicht inokuliert gesamt TABELLE 5 Antikörperreaktion von sieben Tage alten TRT-freien, mit abgeschwächtem oder virulenten TRT-Virus inokulierten Truthahnküken und Exposition mit dem virulenten Virus einundzwanzig Tage später Durchschnittlicher TRT ELISA Antikörpertiter (log&sub2;) nach Inokulation mit: Zeitpunkt abgeschwächter Stamm Ei-/Organkultur virulenter Stamm nicht inokuliert 21 Tage nach Inokulation 14 Tage nach Exposition - nicht untersucht

BEISPIEL 6

(a) Präparation des Impfstoffes, der einen Lebendvirenstamm des Truthahnrhinotracheitis verursachenden, durch abwechselnde Übertragung auf embryonale Ei- und Trachealorgankulturen abgeschwächten Virus enthält.

Das Virus wird unter Verwendung von Trachealorgankulturen von Hühnern isoliert und durch 30malige Übertragung auf Ei- und Trachealkulturen abgeschwächt. Das Virus wurde durch drei Übertragungen mit begrenzter Verdünnung in Trachealorgankulturen gereinigt und dann in embryonalen Eiern vermehrt. Die 72 - 120 Stunden nach der Inokulation entnommene Allantoisflüssigkeit wurde als Impfstoff verwendet.
Die Virusflüssigkeit kann nach Erfordernis verdünnt und mit einem Stabilisator gemischt sowie gefriergetrocknet werden. Jede Phiole kann 100 - 10,000 Dosen enthalten. Jede Dosis enthält 10² - 10&sup4;CD&sub5;&sub0;.

(b) Immunisierung

Eine Dosis, die 10² - 10&sup4;CD&sub5;&sub0; Lebendvirenimpfstoff enthält, wurde drei Wochen alten Küken durch Aufsprühen verabreicht.
Drei Wochen nach der Impfung wurden Serumproben genommen und mit einem ELISA-Test auf Antikörper gegen das Truthahnrhinotracheitis verursachende Virus untersucht. Eine separate Gruppe von nicht geimpften Kontrolltieren wurde getrennt untergebracht.
Die durchschnittlichen ELISA-Titer betrugen 8,5 log&sub2; drei Wochen nach der Verabreichung. Die Kontrollen blieben negativ.
Diese Versuche erbringen den deutlichen Nachweis, daß die Verabreichung vom abgeschwächtem Lebendbvirenimpfstoff gegen Truthahnrhinotracheitis für Hühner, wie durch die Entwicklung von spezifischen Antikörpern gegen das Truthahnrhinotracheitis verursachende Virus gezeigt, schnell eine Immunreaktion auslöst. Es ist im höchsten Maße wahrscheinlich, daß solche geimpften Hühner gegen eine Exposition resistent sind, die sonst das Schwellkopfsyndrom zur Folge haben könnte.

Claims

1. Abgeschwächter Stamm des die ansteckende Truthahnrhinotracheitis verursachenden Virus, dadurch gekennzeichnet, dar der abgeschwächte Stamm durch abwechselnde Übertragung des die ansteckende Truthahnrhinotracheitis verursachenden Virus auf embryonale Ei - und Trachealorgankulturen hergestellt werden kann.

2. Abgeschwächter Stamm nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß die abwechselnde Übertragung auf embryonale Ei- und Trachealorgankulturen zwischen 20 und 40 mal erfolgt.

3. Abgeschwächter Stamm nach Anspruch 1 oder 2, dadurch gekennzeichnet, daß zur abwechselnden Übertragung auf embryonale Ei- und Trachealorgankulturen Hühnereier und Trachealorgankulturen von Hühnern verwendet werden.

4. Abgeschwächter Stamm des die anstreckende Truthahnrhinotracheitis verursachenden Virus, dadurch gekennzeichnet, daß der abgeschwächte Stamm innerhalb der europäischen Sammlung tierischer Zellkulturen (European Collection of Animal Cell Cultures) unter der Registrierungsnummer V87051102 eingetragen ist.

5. Impfstoff aus Lebendvirenkulturen als Schutz gegen durch den die Truthahnrhinotracheitis verursachenden Virus oder serologisch verwandte Stämme hervorgerufene Erkrankungen bei Geflügel, dadurch gekennzeichnet, daß der Impfstoff einen abgeschwächten Stamm des die ansteckende Truthahnrhinotracheitis verursachenden Virus nach irgendeinem der vorstehenden Ansprüche enthält.

6. Impfstoff aus Lebendvirenkulturen nach Anspruch 5, dadurch gekennzeichnet, daß er zur Bekämpfung der Truthahnrhinotracheitis eingesetzt wird.

7. Impfstoff aus Lebendvirenkulturen nach Anspruch 5, dadurch gekennzeichnet, daß er zur Bekämpfung des Schwellkopfsyndroms bei Hühnern eingesetzt wird.

8. Verfahren zur Erzeugung eines abgeschwächten Stamms des die ansteckende Truthahnrhinotracheitis verursachenden Virus, dadurch gekennzeichnet, daß ein Hauptstamm des die ansteckende Truthahnrhinotracheitis verursachenden Virus durch abwechselnde Übertragung auf embryonale Ei- und Trachealorgankulturen abgeschwächt wird.

9. Verfahren nach Anspruch 8, dadurch gekennzeichnet, daß die abwechselnde Übertragung auf embryonale Ei- und Trachealorgankulturen zwischen 20 und 40 mal erfolgt.

10. Verfahren nach Anspruch 8 oder Anspruch 9, dadurch gekennzeichnet, dab zur abwechselnden Übertragung auf embryonale Ei- und Trachealorgankulturen embryonale Hühnereier und Trachealorgankulturen von Hühnern verwendet werden.

11. Verfahren zur Herstellung eines Impfstoffs aus Lebendvirenkulturen, dadurch gekennzeichnet, daß ein abgeschwächter Stamm des für die ansteckende Truthahnrhinotracheitis verantwortlichen Virus nach einer Methode gemäß irgendeinem der Ansprüche 8 bis 10 produziert wird.